超临界CO2流体萃取法提取紫杉醇及其伴生物的方法

摘要

本发明属于溶剂萃取技术领域，公开了一种超临界CO2流体萃取法提取紫杉醇及其伴生物的方法，将一定粒度的欧洲短叶红豆杉枝叶加入超临界流体萃取设备的萃取单元内；将CO2和修饰剂混合后流入萃取单元中的集流腔；在达到萃取设定的温度和压力后，萃取单元开始萃取；流体带出的萃取所得物则溶于收集液中；用反相高效液相色谱法测定萃取物中的紫杉醇及其伴生物含量，用液质联用(LC/MS/MS)进行产物鉴定。本发明用反相高效液相色谱法测定萃取物中的紫杉醇及其伴生物含量，并用液质联用(LC/MS/MS)进行产物鉴定，本发明流程简单，步骤少，耗时短，废渣无溶剂残留，是一种环境友好的提取方法。

说明书

技术领域

本发明属于溶剂萃取技术领域，尤其涉及一种超临界CO

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：环境问题是当今全球广泛关注的重点问题之一。从源头控制污染排放，利用近代先进的技术方法建立和发展无污染的清洁生产技术成为当代工业发展的趋势。在环境教学实验中适当引入一些重要的高档次仪器，建立一些清洁生产技术样板实验，对培养学生了解环境学科的发展很有必要。在复旦大学“三年行动计划”中，对我系“基础教学实验室工程”进行了重点资助建设，选择了“超临界CO

综上所述，现有技术存在的问题是：传统紫杉醇提取方法繁琐，耗时长。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种超临界CO

本发明是这样实现的，一种超临界CO

步骤一，选取一定数量的欧洲短叶红豆杉枝叶，通过干燥、粉碎至一定粒度，将粉碎后的红豆杉枝叶颗粒加入超临界流体萃取设备的萃取单元内；

步骤二，将CO

步骤三，在达到萃取设定的温度和压力后，萃取单元开始萃取；

步骤四，动态萃取时，超临界CO

步骤五，用反相高效液相色谱法(HPLC)测定萃取物中的紫杉醇及其伴生物含量，用液质联用(LC/MS/MS)进行产物鉴定。

进一步，所述欧洲短叶红豆杉枝叶在进行干燥时，利用20～30℃温度的热风进行吹干或进行晒干。

进一步，所述欧洲短叶红豆杉枝叶粉碎至10～20目，选取的欧洲短叶红豆杉枝叶的重量为80g～150g。

进一步，所述萃取设定的温度和压力为萃取温度30～45℃，萃取压力30～50MPa。

进一步，所述萃取单元萃取过程的CO

进一步，所述动态萃取时间为1～1.5h。

进一步，所述CO

进一步，所述超临界流体萃取设备包括：

CO

所述CO

进一步，所述萃取单元包括集流腔和萃取池，所述集流腔分别与流体混合器、萃取池和排气阀连通。

进一步，所述流体混合器与CO

进一步，所述HPLC测定条件：柱温为35℃；流动相：甲醇：乙腈：水＝30：30：40(体积比)，流速为1.0mL/min；紫外检测波长227nm；每次进样体积为10uL；用W(紫杉醇)＝99.5％绘制外标工作曲线，对样品进行定量分析；

质谱分析条件：电喷雾化学解离(ESI)：全范围扫描为150--2000，壳气为70单位，辅助气为15单位，源电压为6kV，加热毛细管温度为250℃，蒸发器温度为465℃，质谱流动相为ACN：H

进一步，所述超临界流体萃取设备萃取流程为：CO

综上所述，本发明的优点及积极效果为：本发明利用超临界CO

附图说明

图1是本发明实施例提供的超临界CO

图2是本发明实施例提供的超临界流体萃取设备原理图。

图3是本发明实施提供的超临界流体萃取设备图。

图中：1、CO

图4是本发明实施提供的SFE(al—a4)法和传统萃取法(b)提取产物色谱图。

图5是本发明实施提供的三种主要提取物的分子结构图。

图6是本发明实施提供的主要提取产物的提取状况图。

图7是本发明实施提供的正离子全范围扫描质谱图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。

如图1所示，本发明实施例提供的一种超临界CO

S101，选取一定数量的欧洲短叶红豆杉枝叶，通过干燥、粉碎至一定粒度，将粉碎后的红豆杉枝叶颗粒加入超临界流体萃取设备的萃取单元内；

S102，将CO

S103，在达到萃取设定的温度和压力后，萃取单元开始萃取；

S104，动态萃取时，超临界CO

S105，用反相高效液相色谱法(HPLC)测定萃取物中的紫杉醇及其伴生物含量，用液质联用(LC/MS/MS)进行产物鉴定。

下面结合实验对本发明的应用原理作进一步的描述。

本发明提供的仪器与试剂为：

美国ISCO公司SFX220型SFE装置，Φ(CO

美国惠普公司Agi1ent1100系列高效液相色谱仪(HPLC)，日本SHISEIDO公司CAPCELLPAKC18分析色谱柱(4.6mmI.D.×250mm，5um)；

ThermoFinnigan公司的LCQADVANTAGEMSSYSTERM，包括TSP高效液相色谱系统和LCQADVANTAGE质谱检测仪，MetaChem公司的Taxsil.3柱(250mm×4.6mm)；

色谱用甲醇、乙腈为HPLC级，水用法国Millipore公司的Milli.Q水纯化系统制备，其他溶剂为分析纯；红豆杉枝叶产地为荷兰，品种为Taxusbaccata.将摘取的植物枝叶放人真空烘箱，在50℃下干燥72h，待其烘干后，研磨，得到红豆杉枝叶样品I；W(紫杉醇)＝99.5％.

本发明提供的HPLC测定条件：柱温为35℃；流动相：甲醇：乙腈：水＝30：30：40(体积比)，流速为1.0mL/min；紫外检测波长227nm；每次进样体积为10uL；用W(紫杉醇)＝99.5％绘制外标工作曲线，对样品进行定量分析；

质谱分析条件：电喷雾化学解离(ESI)：全范围扫描为150--2000，壳气为70单位，辅助气为15单位，源电压为6kV，加热毛细管温度为250℃，蒸发器温度为465℃，质谱流动相为ACN：H

如图2所示，本发明提供的超临界流体萃取设备萃取流程为：CO

1、结果与讨论

1.1超临界CO

取3g枝叶样品在27.6MPa，40C进行超临界CO

表1不同修饰剂条件下的萃取率

1.2传统有机溶剂萃取法

从红豆杉枝叶树皮中提取紫杉醇有机溶剂萃取法有多种，本实验采用的叫w(C

1.3SFE与传统提取法提取产物的分析对比

实验提取产物色谱图如图4所示。a1一a4分别为SFE法20—40、40—60、140—160、160—180rain时收集液的色谱图，b为传统有机溶剂萃取物的色谱图，①号峰为紫杉醇。从图中可以看出，在SFE法和乙醇(95)浸提法中，紫杉醇都被明显提取。

1.4主要提取产物的得率

传统提取法和SFE法除了提取出紫杉醇(taxo1)外，还有两种主要的提取产物：10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DAB111)和紫杉碱B(taxineB)，即图4中的②、③号峰。它们的分子结构如图5所示。

这三种提取物的提取率如图6所示。由图可以看出三种主要提取物在SFE法的不同馏分中含量不同，相比传统提取法，实验材料用量小的情况下，SFE法可以实现对三者的粗步分离。且SFE提取法对10-DABⅢ和taxineB的提取效果比传统提取法高得多。各提取产物的回收率对比见表2。

表2三种主要提取产物的回收率

1.5主要提取产物的质谱分析

对①号峰进行分析得到质谱图7(a)。可以看到在实验条件下，主要是m/Z＝876.2的[M+Na]

SFE法与传统有机溶剂浸提法相比较，萃取效果好，能实现产物的粗步分离，而且SFE法流程简单、步骤少、耗时短，省去了一些分离精制步骤，提取周期短，效率高；废渣无溶剂残留，能最大程度保持各组分的原有特性；只对溶质起作用，不改变溶质之外的任何成分，不产生新的三废物质，对环保有利。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。