一种米拉贝隆的杂质对照品的HPLC分析方法

摘要

本发明公开了一种米拉贝隆的杂质对照品的HPLC分析方法。本发明首次报道该杂质，所提供的HPLC分析方法，能有效的洗脱、分离米拉贝隆和该杂质，使杂质的峰与米拉贝隆的峰完全分离，从而对米拉贝隆产品进行快速、可靠的杂质控制。

说明书

技术领域

本发明涉及一种米拉贝隆的杂质对照品及其制备方法和HPLC分析方法，属于医药技术领域。

背景技术

米拉贝隆(mirabegron，CAS登记号223673-61-8)，化学名为(R)-2-(2-氨基噻唑-4-基)-N-(4-{2-[(2-羟基-2-苯基乙基)氨基]乙基}苯基)乙酰胺，是由日本安斯泰来(Astellas)制药公司开发的选择性β

专利WO2003037881报道了米拉贝隆的合成方法，该路线以D-扁桃酸和4-硝基苯乙胺为起始原料，经酰胺缩合、硼烷还原、催化氢化还原，最后与2-氨基噻唑-4-乙酸缩合制得米拉贝隆。合成路线如下：

虽然现有文献和资料报道了一些米拉贝隆杂质但是对米拉贝隆合成工艺过程中或后续制备过程、储存过程中产生的其它的杂质进一步研究可应用于米拉贝隆的质量控制，具有重大的意义。

发明内容

首先，本发明提供一种式I化合物，其具有如下式所示的化学结构：

其次，本发明还提供式I化合物的制备方法，其包括如下步骤：

式II化合物(R-2-羟基-N-[2-(4-氨基苯基)乙基]-2-苯乙胺)与式III化合物或其盐在适当溶剂和碱的存在下反应，，得到式I化合物；

在本发明的一些实施方案中，所述式III化合物或其盐为式III化合物或其盐酸盐，优选式III化合物的盐酸盐。

在本发明的一些实施方案中，所述溶剂为甲酰胺。

在本发明的一些实施方案中，所述碱为三乙胺。

在本发明的一些实施方案中，所述反应的反应温度30～50℃，优选35～45℃，进一步优选40℃。

在本发明的一些实施方案中，所述反应的反应时间为4～6h，优选为5h。

另一方面，本发明还进一步提供了后处理方法，其包括如下步骤：

(1)向反应液中加入水，搅拌；

(2)将步骤(1)搅拌后的反应液抽滤，滤饼用水淋洗；

(3)对步骤(2)淋洗后的滤饼进行干燥。

在一些典型的实施方案中，所述后处理方法步骤(1)中，向反应液中加入水，搅拌30min；在一些典型的实施方案中，所述后处理方法步骤(3)中，对步骤(2)淋洗后的滤饼进行40℃鼓风干燥。

另一方面，本发明还提供了一种米拉贝隆中的杂质检测的HPLC分析方法，其特征在于，

(I)取米拉贝隆供试品适量，精密称定，加适量甲醇溶解，再用流动相A稀释制成1mg/mL的溶液，作为供试品溶液；

(II)取米拉贝隆纯品适量，精密称定，加适量甲醇溶解，再用流动相A定量稀释制成1mg/mL的溶液，作为对照品溶液1；

(III)取式I化合物对照品适量，精密称定，加适量甲醇溶解，再用流动相A定量稀释制成1mg/mL的溶液，作为对照品溶液2；

(IV)在色谱柱上，以流动相A和/或流动相B进行梯度洗脱；

所述流动相A为水-乙腈-四氢呋喃所述流动相B为乙腈；

(V)采用面积归一化法计算米拉贝隆供试品中的式I化合物的含量。

在一些实施方案中，所述HPLC分析方法使用的色谱柱是十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱。

在一些实施方案中，所述HPLC分析方法使用的色谱柱的填料粒度为2.7～4.0μm，优选填料粒度为3.5μm。

在一些实施方案中，所述HPLC分析方法使用的色谱柱的内径为4.5～4.7mm，优选色谱柱的内径为4.6mm。

在一些实施方案中，所述HPLC分析方法使用的色谱柱的柱长为90～110mm，优选色谱柱的柱长为100mm。

在一些实施方案中，所述HPLC分析方法使用的色谱柱的填料粒径3.5μm，色谱柱的内径为4.6mm，色谱柱的柱长为100mm。以上型号参数可以简写为4.6mm×100mm,3.5um,或简写为4.6mm×100mm×3.5μm，或其它类似简写方式。

在一些实施方案中，所述HPLC分析方法分离分析时色谱柱的柱箱温度是20～40℃，优选为25℃。

在一些实施方案中，所述HPLC分析方法流动相A中的水-乙腈-四氢呋喃的体积比为830～870：90～110：40～60，优选为850:100:50。

在一些实施方案中，所述HPLC分析方法中流动相的流速为0.9-1.1mL/min，优选为1.0mL/min。

在一些实施方案中，所述HPLC分析方法中检测器为紫外检测器。

在一些实施方案中，所述紫外检测器所用的检测波长是200～220nm，优选的检测波长为210nm。

在一些实施方案中，所述HPLC分析方法以流动相A和流动相B按一定比例进行梯度洗脱，所述梯度比例为：

0min，流动相A和流动相B的体积比为100：0；

33min，流动相A和流动相B的体积比为65：35；

38min，流动相A和流动相B的体积比为50：50；

40min，流动相A和流动相B的体积比为50：50；

40.1min，流动相A和流动相B的体积比为100：0；

45min，流动相A和流动相B的体积比为100：0。

再一方面，本发明提供了用于米拉贝隆的杂质检测的方法中的式I化合物。

再一方面，本发明提供了式I化合物在用作米拉贝隆的杂质检测的方法中的标准对照品的用途。

本发明中，R-2-羟基-N-[2-(4-氨基苯基)乙基]-2-苯乙胺可通过市售途径获得，包括但不限于上海毕得医药科技有限公司；也可以参照专利WO2003037881的制备方法制备得到。

本发明中，“HPLC”是指高效液相色谱法；

本发明中，“mL”是指毫升；“μL”是指微升；本发明中，“mg”是指毫克；

本发明中，“h”是指小时，“min”是指分钟；

本发明中，“适量”是指本领域技术人员容易理解地，足以实现充分溶解溶质的溶液的量。

本发明的有益效果是：

本发明发现了式I化合物，该化合物首次报道，是一个全新的化合物。本发明还提供了该化合物的制备方法。同时，本发明提供了一种高效液相色谱梯度法，能有效的洗脱、分离米拉贝隆和其杂质式I化合物，使式I化合物的峰与米拉贝隆的峰完全分离，从而对米拉贝隆产品进行快速、简单、可靠的杂质控制。

附图说明

图1本发明实施例1所述式I化合物的LC-MS图谱。

图2本发明实施例1所述式I化合物的氢谱图谱。

图3本发明实施例1所述式I化合物的碳谱图谱。

图4本发明米拉贝隆供试品HPLC图谱。

图5本发明对照品溶液1的HPLC图谱。

图6本发明对照品溶液2的HPLC图谱。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步阐述，但不对本发明构成任何限制。本发明实施例中所采用的试剂和原料均为市售。

实施例1：式I化合物的制备方法

50mL反应瓶中加入2.5g R-2-羟基-N-[2-(4-氨基苯基)乙基]-2-苯乙胺、3.7g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和20mL甲酰胺以及3g三乙胺，加热至40℃，搅拌反应5h；向反应液中加入100mL水，搅拌30min，抽滤，滤饼用20mL水淋洗，40℃鼓风干燥，得到标题化合物，收率54.8％。

MS(ESI+):412.4(M+H)；如图1所示；

实施例2：HPLC分析方法

液相检测方法按照中国药典2015年版四部通则0512测定。

1.色谱条件如下：

色谱柱：Waters Xbbridg C18(4.6mm×150mm,3.5μm)；

流动相A：水-乙腈-四氢呋喃(体积比为850:100:50)；

流动相B：乙腈；

柱温：25℃；

检测波长：210nm；

流速：1.0mL/min；

进样量：20.00μL；

流动相梯度：

2.溶液配制

供试品溶液的配置：取米拉贝隆供试品适量，精密称定，加适量甲醇溶解，用流动相A稀释制成1mg/mL的溶液，作为供试品溶液。

对照品溶液1的配置：取米拉贝隆纯品适量，精密称定，加适量甲醇溶解，再加流动相A定量稀释制成1mg/mL的溶液。

对照品溶液2的配置：取实施例1制备得到的式I化合物适量，精密称定，加少量甲醇溶解，再加流动相A定量稀释制成1mg/mL的溶液。

3.测定

精密量取供试品溶液、对照品溶液1和对照品溶液2各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

表1表示的为米拉贝隆供试品溶液的HPLC图谱的保留时间、峰高、峰面积和相对面积等信息。

表1供试品HPLC相关信息

从表1数据和图4可知，保留时间16.475min处有一主峰，保留时间21.092处有一杂质峰，二者之间分离良好。

表2表示对照品溶液1的HPLC图谱的保留时间、峰高、峰面积和相对面积等信息。

表2对照品溶液1的HPLC相关信息

从表2数据和图5可知，保留时间16.479min处出现主峰，对应图4的保留时间16.475min的主峰位置，从而确认图4保留时间16.475min处出峰的物质为米拉贝隆。

表3表示对照品溶液2的HPLC图谱的保留时间、峰高、峰面积和相对面积等信息。

表3对照品溶液2的HPLC的相关信息

从表3数据和图6可知，保留时间21.093min处出现主峰，对应图4的保留时间21.092min的峰位置，从而确认图4保留时间21.092min处出峰的物质为式I化合物。结果显示，供试品中的式I化合物的含量为4.96％。