人参皂苷compound K在制备用于治疗糖尿病肾脏病的药物中的应用

摘要

本发明涉及人参皂苷compound K或其药学上可接受的盐在制备用于治疗糖尿病肾脏病的药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体而言，涉及人参皂苷compound K在制备用于治疗糖尿病肾脏病的药物中的应用。

背景技术

糖尿病肾脏病(diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病最严重的慢性并发症之一。临床上，1型糖尿病和2型糖尿病患者若出现微量白蛋白尿(尿白蛋白肌酐比30～<300mg/g)或大量白蛋白尿(尿白蛋白肌酐比≥300mg/g)和/或估算肾小球透过率(eGFR)<60ml·min

目前DKD的治疗主要包括生活方式改变，加强血压、血糖控制，减少蛋白尿，预防心脑血管并发症以及终末期的肾脏替代治疗等。糖尿病肾脏疾病仍存在患病率高、缺乏有效延缓肾脏病进展手段等问题。近年来，随着对DKD发病机制研究的深入，新型降糖药物、肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)抑制剂以及针对糖尿病肾脏疾病发病机制的药物为DKD的药物治疗提供了新的选择。但是，总体来说，目前临床上仍然缺少针对性治疗DKD的有效药物。

DKD按其临床表现属于中医“消渴病”合并“肾消”、“水肿”、“虚劳”等范畴。中医普遍认为DKD是消渴久病引发的变症之一，在气阴两虚的基础上，因消渴日久耗气伤阴，气虚则推动血液、津液运行乏力，阴虚血亏则血行不畅，日久累聚成瘀，与痰浊胶结，久蕴还可生燥热，阻滞肾络，致肾不藏精，精微下泄而出现蛋白尿，精微流失久则气阴两虚，阴损及阳，导致阴阳俱虚。因此，围绕中医治则，临床上治疗DKD的有效组方中补虚药用药占比最高，进一步对补虚药的用药频次进行分析可以发现，治疗DKD中补气药的用药占比60％以上。

在治疗DKD的有效组方中，最常用的补气药之一是人参(Panax ginseng)。人参在中医临床治疗DKD疗效显著，其中多种皂苷成分 (如Rb1、Rb2、Rg1、Re、Rd)对肾脏具有抗氧化应激、抗炎、抗纤维化、拮抗Ca

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够有效地治疗糖尿病肾脏病的药物。本发明人经过深入研究后发现，人参二醇型皂苷的主要体内代谢产物—人参皂苷compound K(CK)可改善高血糖引起的肾脏损伤，为DKD临床治疗提供科学依据。

具体而言，本发明提供：

1.人参皂苷compound K或其药学上可接受的盐在制备用于治疗糖尿病肾脏病的药物中的应用。

2.根据上述第1项所述的应用，其中，所述药学上可接受的盐为下述盐中的任意一者：1)人参皂苷compound K与钠、钾、镁、或钙阳离子形成的盐，2)人参皂苷compound K与有机碱形成的盐，3) 人参皂苷compound K与氨基酸形成的盐，4)铵盐。

3.根据上述第1或2项所述的应用，其中，所述人参皂苷 compound K或其药学上可接受的盐与药学上可接受的添加剂组合而以药物组合物的形式使用。

发明效果

根据本发明，人参皂苷compound K能够改善高血糖引起的肾脏损伤，因而预期可以成为用于治疗糖尿病肾脏病的候选药物。

附图说明

图1示出的是对小鼠肾脏组织进行H&E、PAS和Masson染色后的肾脏病理学形态。该图1中，放大倍数为400倍，比例尺为20μm。

图2示出的是对各组小鼠肾脏组织系膜基质指数进行统计而得的柱形图，用以评价compound K对肾脏组织系膜基质增生的影响。

图3示出的是对各组小鼠肾脏组织肾小球系膜扩张进行统计而得的柱形图，用以评价compound K对肾小球系膜增生的影响。

图4示出的是对各组小鼠肾脏组织肾小球中胶原沉积进行统计而得的柱形图，用以评价compound K对胶原沉积的影响。

需要说明的是，在图2至图4中，

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明进行详细说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

人参皂苷Compound K是二醇型人参皂苷在人体肠道内的主要代谢产物和最终吸收形式。化学名称为20-O-β-D-吡喃葡萄糖基 -20(S)-原人参二醇，分子式为C

[化学式1]

人参皂苷Compound K是非天然的人参皂苷，可由其它二醇型人参皂苷转化而来。目前，生物转化方法通常包括酶转化法和微生物发酵法。可以参考现有的技术文献(例如，CN101921304A、 CN105255970A、CN101139562A、CN1570133A等)来制备人参皂苷 CompoundK。也可以使用市售产品，例如，可购自宁波金艾农生物科技有限公司(产品名称：人参皂苷Compound K，包装规格 80％HPLC)。

本发明中，也可以使用人参皂苷Compound K的盐类。所述盐类可以为药学上可接受的盐。具体而言，可以举出：与盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，或者与甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、扁桃酸、酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二甲苯酰酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、天冬氨酸、谷氨酸等有机酸形成的酸加成盐；与钠、钾、镁、钙、铝等金属阳离子形成的盐，与甲胺、乙胺、乙醇胺等有机碱形成的盐，与乙酰亮氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等各种氨基酸及氨基酸衍生物形成的盐，或者铵盐等。

本发明中，人参皂苷compound K或其药学上可接受的盐可以与药学上可接受的添加剂组合而以药物组合物的形式使用。

上述药物组合物中，人参皂苷compound K或其药学上可接受的盐与药学上可接受的添加剂混合，以得到可以口服或肠胃外给药的药物组合物。药物组合物可以由常规方法来配制。

可以采用经口给药的剂型(例如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液体制剂等)，或者采用非经口给药的剂型(例如注射剂等)来进行给药。

作为用于经口给药的固体组合物，可以采用片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等。在这样的固体组合物中，将人参皂苷compound K 或其药学上可接受的盐与至少一种添加剂混合。上述添加剂包括赋形剂、崩解剂、润滑剂等。

赋形剂例如包括乳糖、甘露醇、葡萄糖、羟丙基纤维素、微晶纤维素、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和/或硅酸铝镁等。

崩解剂包括纤维素(例如羧甲基纤维素钙、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、交联羧甲基纤维素钠或结晶纤维素)，淀粉(例如玉米淀粉、预胶化淀粉或羧甲基淀粉钠)，交联聚乙烯吡咯烷酮等。

润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、蔗糖脂肪酸酯、滑石、聚乙二醇等。

根据目的，本发明的固体制剂可任选地包含适量的其它添加剂。这些添加剂包括粘合剂、增塑剂、包衣剂、抗絮凝剂、增溶剂、甜味剂、酸化剂、调味剂、pH调节剂、助溶剂、着色剂和增香剂等。粘合剂包括藻酸钠、明胶、糊精、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮等。增塑剂包括柠檬酸三乙酯、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇等。包衣剂包括乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等。抗絮凝剂包括滑石、硬脂酸钙等。增溶剂包括蔗糖脂肪酸酯、脱水山梨醇单硬脂酸酯、十二烷基硫酸钠等。甜味剂包括糖精、甘草酸二钾、甜叶菊等。酸化剂包括柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、富马酸等。调味剂包括1-薄荷醇、氯化钠、蔗糖等。pH调节剂包括柠檬酸盐、磷酸盐、碳酸盐、醋酸盐等。助溶剂包括环糊精、精氨酸、赖氨酸、三氨基甲烷等。着色剂包括三氧化二铁黄、三氧化二铁、叶绿酸铜钠等。增香剂包括橙油、柠檬油、薄荷油、桉树油等。

本发明的片剂可依照片剂生产中的常规方法来制备，例如，可通过以下步骤来制备：i)制备包含人参皂苷compound K或其药学上可接受的盐、以及选自由赋形剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂、增塑剂、包衣剂、抗絮凝剂、增溶剂、甜味剂、酸化剂、调味剂、pH调节剂、助溶剂、着色剂和增香剂组成的组中的一种或多种添加剂的混合物，然后ii)对在上述i)中所得的混合物进行压制成型。

用于非经口给药的注射剂包括无菌的水性或非水性的溶液剂、混悬剂或乳剂。作为水性的溶剂，例如包括注射用蒸馏水或生理盐水。作为非水性的溶剂，例如有丙二醇、聚乙二醇或橄榄油等植物油、乙醇等醇类、或吐温80等。该制剂中还可以含有等渗剂、防腐剂、润湿剂、乳化剂、分散剂、稳定剂、或溶解助剂。例如可以通过可截留细菌的过滤器进行过滤、加入杀菌剂、或者进行照射而被灭菌。此外，也可以制成无菌的固体物，在使用之前用无菌水或无菌的注射用溶剂进行溶解或混悬后使用。

在经口给药时，合适的1天的给药量按体重约为1～1000mg/kg，优选为10～500mg/kg，并将该剂量一次服用或者分2～4次服用。考虑症状、年龄、性别等，根据不同的情况，来适当地选择给药量。

实施例

以下通过例子进一步解释或说明本发明的内容，但是这些例子不应被理解为对本发明保护范围的限制。

需要说明的是，以下实施例中所用的各种试剂等是本领域已知的，可通过商购得到。

实验动物分组及给药

db/db糖尿病模型小鼠已经证实表现出许多类似于DKD患者的症状，10周龄血糖明显升高，10到16周龄时出现肾小球肥大，16 周龄系膜扩张严重，蛋白尿从8周龄到25周龄有所增加，可以作为 DKD研究的动物模型(参见下述参考文献1和2)。

参考文献1：Breyer MD,

参考文献2：Brosius F,Alpers C,Bottinger E,Breyer M,Coffman T,Gurley S,Harris R,Kakoki M,Kretzler M,Leiter E,Levi M,McIndoe R,Sharma K,Smithies O,Susztak K,Takahashi N,Takahashi T.Mouse models of diabetic nephropathy.J AmSoc Nephrol 2009；20(12):2503-2512。

本研究选取SPF级雄性BKS-Lepr

野型对照组(正常组)及模型组喂食常规饲料，阳性对照组按照200mg/kg剂量进行给药，喂食含有0.2％的二甲双胍(>98.0％， HPLC，上海梯希爱化成工业发展有限公司)的饲料，CK给药组按照40mg/kg剂量进行给药，喂食含有0.03％的CK(>98.0％，HPLC，上海源叶生物科技有限公司)的饲料。

肾功能及组织学检测

连续喂食16周后，将各组小鼠放入代谢笼中禁食不禁水，收集 24小时尿液，记录体积。然后，在3500g，4℃下离心10min，取上层澄清尿液，-20℃保存。按照生化试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司)说明书的测定方法，检测小鼠尿液样本中的白蛋白(MALB)、肌酐(Cre)含量，计算尿蛋白肌酐的比值(UACR，μg/mg)。异氟烷呼吸麻醉并解剖，从小鼠体内完整取出肾脏组织进行H&E、 PAS和Masson染色，从而综合评价CK对小鼠肾功能的作用。这些操作是本领域技术人员熟知的常规技术(参见下述参考文献3和4)。

参考文献3：Zhang YY,Tang PMK,Tang PCT,Xiao J,Huang XR,Yu C,Ma RCW,LanHY.LRNA9884,a novel smad3-dependent lncrna,promotes diabetic kidney injury indb/db mice via enhancing mcp-1-dependent renal inflammation.Diabetes 2019；68(7):1485-1498。

参考文献4：Liang G,Song LT,Chen ZL,Qian YY,Xie JJ,Zhao LW,Lin Q,ZhuGH,Tan Y,Li XK,Mohammadi M,Huang ZF.Fibroblast growth factor 1amelioratesdiabetic nephropathy by an anti-inflammatory mechanism.Kidney Int 2018；93(1),95-109。

统计学处理

实验结果采用SPSS 26.0统计学软件分析，计量资料以均数±标准差(

实验结果

表1.喂食后各组小鼠主要代谢参数的变化

注：n＝7，与正常组比较，

表1结果显示，db/m小鼠和db/db小鼠的体重均随周龄的增加而增长，模型组体重明显高于正常组。与正常组相比，db/db小鼠的肾脏重量、24h尿量、尿MALB、UACR水平，均显著升高。给药 CK后，能够明显下调24h尿量、尿MALB与UACR水平，显示CK 能够改善db/db小鼠肾功能。

另外，图1示出了对小鼠肾脏组织进行H&E、PAS和Masson 染色后的肾脏病理学形态。如图1所示，基于镜下病理学形态观察可见，与正常组db/m小鼠相比，模型组db/db小鼠肾脏组织中肾小球系膜区明显扩增，H&E染色和PAS染色可见局部有炎性浸润，特异性标记糖原沉积的PAS染色阳性物质(紫色)明显增加，特异性标记胶原沉积的Masson染色呈现较重的蓝色胶原沉积。持续给药4个月后，如图2、图3所示，对各组小鼠肾脏组织系膜基质指数及肾小球系膜扩张进行统计，可以看到，CK给药组中，db/db小鼠系膜基质指数及肾小球系膜扩张明显下降，同时可见炎性浸润缓解；并且如图1所示，PAS染色阳性物质(紫色)有所减少；同时如图4所示，对各组小鼠肾脏组织肾小球中胶原沉积进行统计，可以看到，CK给药组中，胶原沉积(蓝色)明显减轻。进一步显示了CK可以改善db/db小鼠的肾脏损伤，缓解DKD的发病进程。

以上结果表明，CK能够改善DKD肾脏损伤，因而预期可以成为用于治疗糖尿病肾脏病的候选药物。