一种规模化获得成对样品中高可信度磷酸化位点占有率的新方法

摘要

本发明涉及一种综合基于高载量分析柱，高上样量，短梯度分离，高质谱采集速度的LC‑MS方法的蛋白质组及磷酸化蛋白质组深度覆盖技术和基于离群分数控制绝对占有率可信度的集成方法。在以通过蛋白质强度之比，磷酸肽强度之比，对应的非磷酸肽强度之比这三个比值进行占有率计算的方法为基础，通过优化分级条件增加馏分间正交性，通过使用高载量分析柱提高样品上样量进而增加检测灵敏度，通过优化分析梯度及质谱采集参数在进一步提高样品覆盖深度的同时控制总质谱采集时间。对所得结果引入离群分数评价成对样品绝对占有率之比与相对占有率之间的偏差，进一步由此控制绝对占有率的置信区间以获得高可信位点占有率数值。