一种含nCas3单链核酸内切酶的工程菌、制备方法及应用

摘要

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种含nCas3单链核酸内切酶的工程菌、制备方法及应用。本申请通过比对ZM4菌株与其他同样携带内源I型CRISPR‑Cas系统的菌株，内源CRISPR相关蛋白的编码基因序列差异，找到了其Cas3蛋白的功能结构划分。并且通过探究I‑F型CRISPR‑Cas系统的工作原理，设计并替换了ZM4菌株内Cas3蛋白解旋酶结构域中的一个氨基酸。将原本ZM4菌株上编码Cas3蛋白的ZMO0681基因内的676,661号的腺嘌呤核苷酸原位替换为胞嘧啶核苷酸，使Cas3蛋白丧失解旋酶活性，转变为只携带单链DNA核酸内切酶活性的nCas3蛋白，从而得到改造后菌株DRM2。