体外高效扩增NK和转染NKG2D活化NK细胞的方法

摘要

本发明属于生物医药领域，细胞治疗技术范畴，具体是体外高效扩增NK和转染NKG2D活化NK细胞的方法。包括具体方法为：NK细胞体外高效扩增技术优化及NK免疫生物学特性检测；应用RT‑PCR方法检测肿瘤细胞及肿瘤组织中NKG2D配体MICA，ULBP 1,2,3的mRNA表达；NKG2D克隆载体的构建；NKG2D真核表达载体的构建；真核表达载体在CHO细胞中的表达及鉴定；真核表达载体转染NK细胞及对NK细胞生物学功能影响。本发明提供一种利用基因工程技术构建pEGFP‑N1/NKG2D真核荧光表达载体，将构建好的pEGFP‑N1/NKG2D质粒转染NK细胞，应用MTT方法检测NKG2D转染前后NK细胞增殖情况和对肿瘤细胞系的杀伤效应，RT‑PCR方法检测相关杀伤分子IL‑2、TNF‑a、Perforin、TWEAK的mRNA表达水平，为肿瘤治疗提供新思路的体外高效扩增NK和转染NKG2D活化NK细胞的方法。