一种含有肉牛DKK3基因3’UTR序列和双荧光素酶报告基因的质粒及其应用

摘要

本发明提供了一种含有肉牛DKK3基因3’UTR序列和双荧光素酶报告基因的质粒及其应用，所述质粒包含bta‑miR‑25与牛DKK3结合的靶点，其构建包括设计DKK3基因3’UTR区扩增引物并加入酶切位点Pme I和Xho I，以牛肾细胞(MDBK)cDNA为模板进行扩增，将PCR产物及pmirGLO Vector分别用限制性内切酶Pme I和Xho I进行双酶切，将酶切后纯化的载体pmirGLO Vector和DKK3基因3’UTR片段连接，转化，培养，PCR检测，测序，将测序正确的菌液重新扩大培养，质粒提取等步骤，本发明为筛选调控DKK3表达的miRNAs、评估miRNAs对DKK3表达的调控作用提供了简单易行的工具，具有灵敏度高、速度快和费用低等优点；本发明还为DKK3的表达调控带来了更深层次的认知，能运用于家畜肉质遗传改良分子调控机制的研究，具有较好的应用前景。