一种羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系及其制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系及其制备方法和应用，属于功能药物领域。本发明首先在碱性条件下，促使羽毛角蛋白与海藻酸钠之间充分形成静电作用和氢键作用等相互作用，形成离子交联结构的微凝胶，并通过控制二者的用量控制微凝胶的粒径和交联程度，从而有利于促进微凝胶进入细胞中，同时有利于后续牢固地负载抗癌药物，再使微凝胶负载尽可能多的抗癌药物阿霉素，经氧化反应形成二硫键，进一步防止药物渗漏，最终获得药物负载量高、药物渗漏率低的双交联海藻酸钠微凝胶抗癌药物载药体系，且本发明制备的载药体系具有pH敏感性和还原敏感性，载药量为65％，在133小时的模拟体外释放实验中的药物渗漏率仅为15％。

说明书

技术领域

本发明涉及功能药物领域，尤其涉及一种羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系及其制备方法和应用。

背景技术

据统计，我国每年家禽养殖业以及羽绒制品生产企业产生的羽毛副产物在百万吨以上，其中角蛋白含量高达90％。这些角蛋白废弃物未得到有效的处理和利用，造成了大量的固体废弃物污染。所以，开发羽毛角蛋白并进行综合利用具有非常重要的科学价值和现实意义。

羽毛角蛋白含有大量的半胱氨酸残基，约占所有氨基酸的7～20mol％，残基之间形成-S-S-。同时，羽毛角蛋白结构中含有丰富的侧基，包括羧基、氨基或巯基，使其可以通过各种方法进行功能化，以实现特异性功能。此外，角蛋白可以促进细胞内一氧化氮(NO)的产生，使肿瘤细胞敏感，从而提高化疗药物的抗癌功效。同时，羽毛角蛋白富含的半胱氨酸和巯基的结构使其能够被酶有效的降解，从而减少在人体内的聚集。羽毛角蛋白这些优异的特性使其在药物递送体系中的应用得到科研人员的热切关注。但是，现有技术中基于羽毛角蛋白的抗癌药物递送体系仍存在载药量低和药物渗漏率高的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系及其制备方法和应用，利用本发明提供的制备方法制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系载药量高，药物渗漏率低。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的制备方法，包括以下步骤：

(1)将羽毛角蛋白碱性溶液与海藻酸钠混合进行交联处理，得到微凝胶；所述羽毛角蛋白碱性溶液中的羽毛角蛋白与海藻酸钠的质量比为1：(0.3～12)；

(2)将所述步骤(1)得到的微凝胶和抗癌药物溶液混合进行负载处理，然后与过氧化氢溶液混合进行氧化反应，得到羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系。

优选地，所述步骤(1)中羽毛角蛋白碱性溶液中羽毛角蛋白的数均分子量为20～40kDa。

优选地，所述步骤(1)中羽毛角蛋白碱性溶液的制备方法包括：将羽毛角蛋白原液和去离子水混合，得到羽毛角蛋白溶液；将所述羽毛角蛋白溶液与碱性缓冲溶液和尿素混合，得到羽毛角蛋白碱性溶液。

优选地，所述步骤(1)中羽毛角蛋白碱性溶液中的羽毛角蛋白与海藻酸钠的质量比为1：(0.3～12)。

优选地，所述步骤(1)中交联处理包括：将羽毛角蛋白碱性溶液与海藻酸钠的混合物依次进行第一搅拌、超声、第二搅拌和透析。

优选地，所述透析所用的透析袋的截留分子量为2～5kDa。

优选地，所述步骤(1)中羽毛角蛋白碱性溶液中羽毛角蛋白与所述步骤(2)中抗癌药物溶液中的抗癌药物的质量比为(0.5～4)：1。

优选地，所述步骤(2)中的负载处理在搅拌条件下进行；所述搅拌的温度为0～6℃，所述搅拌的时间为5～12h。

本发明还提供了上述技术方案所述制备方法制备得到的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系，包括羽毛角蛋白与海藻酸钠交联形成的微凝胶以及负载于所述微凝胶上的抗癌药物。

本发明还提供了上述技术方案所述羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系在制备抗癌药物中的应用。

本发明提供了一种羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的制备方法，首先在碱性条件下，促使羽毛角蛋白与海藻酸钠之间充分形成静电作用和氢键作用等相互作用，经交联处理而凝胶化形成微凝胶，通过控制羽毛角蛋白与海藻酸钠的用量控制获得的微凝胶的粒径和交联程度，从而有利于促进微凝胶进入细胞中，提高其利用率，同时有利于后续微凝胶牢固地负载抗癌药物，避免药物渗漏，然后再利用氢键作用和疏水相互作用促使微凝胶负载尽可能多的抗癌药物，再经氧化反应，使微凝胶中的羽毛角蛋白链之间形成二硫键，进一步防止微凝胶中已负载的抗癌药物渗漏，最终获得药物负载量高、药物渗漏率低的双交联海藻酸钠微凝胶抗癌药物载药体系；且本发明制备的双交联海藻酸钠微凝胶抗癌药物载药体系具有pH敏感性和还原敏感性，在pH为5.0的酸性环境中，微凝胶中角蛋白上的氨基质子化，海藻酸钠上的羧基质子化，二者之间的静电作用发生改变，从而使微凝胶释放出抗癌药物，同时由于抗癌药物在酸性条件下溶解性较好，进一步有利于其从微凝胶中释放出来，因此，羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系具有pH敏感。此外，由于肿瘤细胞中的高谷胱甘肽(GSH，一种还原剂，可以将二硫键还原成巯基)浓度，可以打开羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系中羽毛角蛋白链之间的二硫键，从而使所述药物载药体系进一步解交联而释放出抗癌药物，表现出还原敏感性。实施例的结果显示，本发明提供的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系载药量为65％，在133小时的模拟体外释放实验中的药物渗漏率仅为15％。

本发明提供的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的制备方法操作简单，反应条件温和，适宜规模化生产。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的粒径分布图；

图2为本发明实施例1制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的TEM图；

图3为本发明实施例1制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的在模拟人体体液及肿瘤细胞环境中对DOX的释放情况图。

具体实施方式

本发明提供了一种羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的制备方法，包括以下步骤：

(1)将羽毛角蛋白碱性溶液与海藻酸钠混合进行交联处理，得到微凝胶；所述羽毛角蛋白碱性溶液中的羽毛角蛋白与海藻酸钠的质量比为1：(0.3～12)；

(2)将所述步骤(1)得到的微凝胶和抗癌药物溶液混合进行负载处理，然后与过氧化氢溶液混合进行氧化反应，得到羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系。

在本发明中，若无特殊说明，所采用的原料均为本领域常规市售产品。

在本发明中，若无特殊说明，所进行的操作均为室温条件。

本发明将羽毛角蛋白碱性溶液与海藻酸钠混合进行交联处理，得到微凝胶。在本发明中，所述羽毛角蛋白碱性溶液中羽毛角蛋白的数均分子量优选为20～40kDa，更优选为25～35kDa进一步优选为29kDa。本发明将所述羽毛角蛋白碱性溶液中羽毛角蛋白的数均分子量控制在上述范围内，有利于其蛋白链更充分地与海藻酸钠形成较稳定的相互作用，并控制制备的微凝胶的交联程度，进而有利于后续微凝胶牢固地负载抗癌药物，避免药物渗漏。

在本发明中，所述羽毛角蛋白碱性溶液的制备方法优选为包括：将羽毛角蛋白原液和去离子水混合，得到羽毛角蛋白溶液；将所述羽毛角蛋白溶液与碱性缓冲溶液和尿素混合，得到羽毛角蛋白碱性溶液。

在本发明中，所述羽毛角蛋白原液的提取方法优选为利用还原法从羽毛中提取羽毛角蛋白。

在本发明中，所述羽毛角蛋白原液的提取优选包括：

(a)将羽毛进行预处理，然后依次进行过滤、洗涤和干燥，得到处理后的羽毛；

(b)将所述步骤(a)得到的处理后的羽毛、去离子水、三羟甲基氨基甲烷、十二烷基硫酸钠、尿素、2-巯基乙醇混合，在N

本发明优选将羽毛进行预处理，然后依次进行过滤、洗涤和干燥，得到处理后的羽毛。在本发明中，所述羽毛优选为鸡、鸭、鹅和鸽子的羽毛。在本发明中，所述预处理过程优选包括：将羽毛依次进行水洗、烘干和剪碎，得到碎羽毛，然后依次在无水乙醇和盐酸溶液中搅拌处理。本发明对所述水洗的方式没有特殊的限定，将羽毛清洗干净即可。本发明对所述烘干的方式没有特殊的限定，能将羽毛中水分除去即可。本发明对所述剪碎的方式没有特殊的限定，将羽毛碎化即可。在本发明中，所述无水乙醇和盐酸溶液中搅拌处理的时间优选独立地为60-180min，更优选为120min。本发明对于所述搅拌的速率没有特殊的限定，常规搅拌速率即可。在本发明中，所述无水乙醇的温度优选为30～50℃，更优选为40℃。在本发明中，所述盐酸溶液的温度优选为30～50℃，更优选为40℃。本发明对所述碎羽毛的质量与无水乙醇、盐酸的体积比没有特殊的限定，能实现充分浸没碎羽毛即可。在本发明中，所述盐酸的浓度优选为0.15mol/L。在本发明中，所述预处理能够洗去羽毛上残留的油脂，同时使羽毛中羽毛角蛋白发生一定的溶胀，有利于后续提取。

本发明对所述过滤的方式没有特殊的限定，实现固液分离即可。在本发明中，所述洗涤优选为用去离子水洗至洗涤液呈中性。本发明对所述干燥的方式没有特殊的限定，能将水分除去即可。

得到处理后的羽毛后，本发明优选将所述处理后的羽毛、去离子水、三羟甲基氨基甲烷、十二烷基硫酸钠、尿素、2-巯基乙醇混合，N

在本发明中，所述处理后的羽毛的质量、尿素的质量、十二烷基硫酸钠的质量、三羟甲基氨基甲烷的质量和2-巯基乙醇的体积比优选为(0.5～1.5)g：(0.5～1.5)g：(0.30-1.50)g：(0.05-0.20)g：(0.10-0.80)mL，更优选为(0.8～1.2)g：(0.8～1.2)g：(0.50-1.20)g：(0.08-0.15)g：(0.20-0.50)mL，进一步优选为1g：1g：0.8g：0.1g：0.33mL。本发明将所述处理后的羽毛的质量、尿素的质量、十二烷基硫酸钠的质量、三羟甲基氨基甲烷的质量和2-巯基乙醇的体积比控制在上述范围内，有利于在反应的过程中始终形成微碱性的溶液，尿素充分起到变性作用，可以增加角蛋白在水中的溶解度和十二烷基硫酸钠充分起到稳定蛋白的作用，避免用量过多而造成后续不易分离，2-巯基乙醇充分起到还原的作用，与角蛋白上的二硫键发生双硫键的交换反应，避免过量，增加原料成本，同时避免后续分离时产生较大的巯基臭味。

在本发明中，所述搅拌反应的时间优选为5～18h，更优选为8～12h，进一步优选为10h。本发明对于所述搅拌反应的搅拌速率没有特殊的限定，常规搅拌速率即可。在本发明中，所述搅拌反应过程中，2-巯基乙醇与角蛋白上的二硫键发生双硫键的交换反应，发生了两个连续的亲核取代反应，形成的不对称双硫化物中间产物，同时由于巯基的性质很活泼，易发生氧化反应，所以使用表面活性剂十二烷基硫酸钠对其进行保护，而尿素作为蛋白质变性剂，可以增加角蛋白在水中的溶解度，有利于更好的发生上述交换反应。

本发明限定N

在本发明中，所述过滤优选为抽滤。在本发明中，所述透析所用的溶剂优选为去离子水。在本发明中，所述透析所用的透析袋的截留分子量优选为1～6

本发明限定上述羽毛角蛋白原液的提取过程，有利于获得数均分子量在20～40kDa的羽毛角蛋白，而且不会对羽毛角蛋白的分子链、氨基酸链及本生的生物性能产生破坏，同时有效的保留了羽毛角蛋白上的巯基，有助于后续巯基的重新连接，从而赋予最终制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的还原敏感性。

得到羽毛角蛋白原液后，本发明优选将所述羽毛角蛋白原液和去离子水混合，得到羽毛角蛋白溶液。本发明对所述羽毛角蛋白原液和去离子水的混合的操作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的制备混合溶液的技术方案即可。在本发明中，所述羽毛角蛋白溶液的浓度优选为0.05～30mg/mL，更优选为0.1～20mg/mL。

得到羽毛角蛋白溶液后，本发明优选将所述羽毛角蛋白溶液与碱性缓冲溶液和尿素混合，得到羽毛角蛋白碱性溶液。在本发明中，所述碱性缓冲溶液优选为三羟甲基氨基甲烷-盐酸；所述三羟甲基氨基甲烷-盐酸的浓度优选为1mol/L。本发明对所述羽毛角蛋白溶液与碱性缓冲溶液和尿素混合的操作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的制备混合溶液的技术方案即可。

在本发明中，所述羽毛角蛋白溶液与碱性缓冲溶液和尿素的混合优选为搅拌至固体完全溶解。本发明对所述搅拌的转速和时间没有特殊的限定，实现溶液中固体完全溶解即可。

在本发明中，所述羽毛角蛋白溶液中羽毛角蛋白的质量、碱性缓冲溶液的体积和尿素的质量比优选为(0.5～120)g:(3～40)mL:(1～60)g，更优选为(1～100)g:(5～20)mL:(2～40)g。本发明将所述羽毛角蛋白溶液中羽毛角蛋白的质量、碱性缓冲溶液的体积和尿素的质量比控制在上述范围内，有利于为后续交联处理提供碱性稳定的环境，同时利用尿素可以使羽毛角蛋白充分溶胀，从而有助于后续羽毛角蛋白充分地与海藻酸钠形成相互作用。

得到羽毛角蛋白碱性溶液后，本发明将所述羽毛角蛋白碱性溶液与海藻酸钠混合进行交联处理，得到微凝胶。

本发明对所述羽毛角蛋白碱性溶液与海藻酸钠混合的操作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的制备混合溶液的技术方案即可。在本发明中，所述羽毛角蛋白碱性溶液中的羽毛角蛋白与海藻酸钠的质量比为1：(0.3～12)，更优选为1：(0.5～6)，进一步优选为1:1。本发明将所述羽毛角蛋白碱性溶液中的羽毛角蛋白与海藻酸钠的质量比控制在上述范围内，有利于控制获得的微凝胶的粒径和交联程度，从而有利于促进微凝胶进入细胞中，提高其利用率，同时有利于后续微凝胶牢固地负载抗癌药物，避免药物渗漏。

在本发明中，所述交联处理优选包括：将羽毛角蛋白碱性溶液与海藻酸钠的混合物依次进行第一搅拌、超声、第二搅拌和透析。

在本发明中，所述第一搅拌的时间优选为10～80min，更优选为20～40min。本发明对于所述第一搅拌的速率没有特殊的限定，常规搅拌速率即可。在本发明中，所述超声的时间优选为0.3～4h，更优选为0.5～2h；所述超声的温度优选为0～50℃，更优选为10～40℃。本发明将超声的时间和温度控制在上述范围内有利于快速均匀地分散羽毛角蛋白和海藻酸钠，使二者能够更充分的接触，有利于后续充分形成相互作用。

在本发明中，所述第二搅拌优选在N

在本发明中，所述透析所用的溶剂优选为去离子水。在本发明中，所述透析所用的透析袋的截留分子量优选为1～6kDa，更优选为2～5kDa，进一步优选为3.5kDa。在本发明中，所述透析的时间优选为8～48h，更优选为12～36h，进一步优选为24h。在本发明中，所述透析过程中，溶液中的三羟甲基氨基甲烷和尿素等小分子被透出除去，实现溶液纯化，有利于羽毛角蛋白和海藻酸钠的更充分的形成相互作用，同时羽毛角蛋白的疏水性变强，海藻酸钠的溶解性也会轻微降低。在本发明中，所述交联处理过程中，溶液中的羽毛角蛋白与海藻酸钠之间充分形成静电作用和氢键作用等相互作用，从而凝胶化形成微凝胶。

得到微凝胶后，本发明将所述微凝胶和抗癌药物溶液混合进行负载处理，然后与过氧化氢溶液混合进行氧化反应，得到羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系。

在本发明中，所述羽毛角蛋白碱性溶液中羽毛角蛋白与所述抗癌药物溶液中的抗癌药物的质量比优选为(0.5～4)：1，更优选为(1～3)：1。在本发明中，所述抗癌药物溶液中的抗癌药物优选为紫杉醇、柔红霉素和阿霉素。在本发明中，所述抗癌药物溶液的溶剂优选为去离子水。在本发明中，所述抗癌药物溶液的浓度优选为0.10～6.0mg/mL。

本发明对所述微凝胶和抗癌药物溶液混合的操作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的制备混合溶液的技术方案即可。在本发明中，所述负载处理优选在N

在本发明中，所述过氧化氢溶液的质量浓度优选为30％。在本发明中，所述氧化反应的温度优选为室温。在本发明中，所述氧化反应的时间优选为8～48h，更优选为12～36h，进一步优选为24h。在本发明中，所述氧化反应过程中，微凝胶中的羽毛角蛋白链上的巯基被氧化，羽毛角蛋白链之间形成二硫键，以防止微凝胶中已负载的抗癌药物渗漏。

氧化反应完成后，本发明优选将所述氧化反应的产物依次进行离心和洗涤，得到羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系。

在本发明中，所述离心的速度优先为8000～15000RPM，更优选为10000～13000RPM。在本发明中所述离心的时间优选为3～30min，更优选为5～20min。在本发明中，所述洗涤所用溶剂优选为去离子水。在本发明中，所述洗涤的上清液优选为无色。

利用本发明提供的方法制备的双交联海藻酸钠微凝胶抗癌药物载药体系，药物负载量高、药物渗漏率低，并具有pH敏感性和还原敏感性，制备方法操作简单，反应条件温和，适宜规模化生产。

本发明还提供了上述技术方案所述制备方法制备得到的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系，包括羽毛角蛋白与海藻酸钠交联形成的微凝胶以及负载于所述微凝胶上的抗癌药物。

本发明还提供了上述技术方案所述羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系在制备抗癌药物中的应用。

下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一、羽毛角蛋白碱性溶液的制备方法：

(1)羽毛角蛋白原液的提取过程：

(a)将2g鸡的羽毛依次进行水洗、烘干和剪碎，得到碎羽毛，然后依次在40℃400mL无水乙醇和40℃200mL0.15mol/L的盐酸溶液中分别搅拌处理120min和120min，然后依次进行抽滤、用去离子水洗涤至洗涤液呈中性，干燥后得到预处理羽毛；

(b)将所述步骤(a)得到的预处理羽毛、去离子水、三羟甲基氨基甲烷、十二烷基硫酸钠、尿素、2-巯基乙醇混合，N

(2)将所述步骤(1)提取的羽毛角蛋白原液和去离子水混合，得到300mL浓度为3.7mg/mL的羽毛角蛋白溶液；将所述羽毛角蛋白溶液与1mol/L的三羟甲基氨基甲烷-盐酸碱性缓冲溶液和尿素混合，搅拌至固体完全溶解，得到羽毛角蛋白碱性溶液；其中，所述羽毛角蛋白溶液中羽毛角蛋白的质量、1mol/L的碱性缓冲溶液的体积和尿素的质量比为1.1g:10mL:4g；所述羽毛角蛋白碱性溶液中羽毛角蛋白的数均分子量为2.9kDa；

二、羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的制备方法：

(1)将305mL上述制备方法制备的羽毛角蛋白碱性溶液与1.1g海藻酸钠混合后，搅拌30min，然后再超声30min，然后在N

(2)将所述步骤(1)得到的微凝胶和74mL浓度5mg/mL的抗癌药物阿霉素溶液混合，然后在4℃的N

图1为通过动态光散射仪(DLS)测试本发明实施例1制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的粒径分布图，由图1可知，实施例1制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的粒径为432nm；

图2为本发明实施例1制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的TEM图，由图2可知，本申请制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系为较为规则的球形(由于图2是在干态下测试的，所以粒径比DLS测试结果小)；

三、利用TU-1901型紫外-可见分光光度计测试羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系对抗癌药物阿霉素的释放，测试步骤如下：

首先将5mg的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系分散于10mL相应缓冲溶液中，然后装入截留分子量为3.5kDa的透析袋中，随后将透析袋放入装有110mL盛有相应缓冲溶液的玻璃烧杯中，并迅速将上述烧杯放入温度为37℃，转速为120转/分钟的恒温摇床中，此时就认为羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系对阿霉素的缓释已经开始并计时。然后每到特定的时间间隔就开始取样，每次取出5mL透析袋外的透析液作为后续的不同时间下释放出的阿霉素的量的计算。同时，在取了透析液的烧杯中补加5mL相应的缓冲液以保证透析液总体积的恒定。通过UV-vis光谱测量释放液在480nm处的吸收光谱(480nm为阿霉素的特定吸收)。通过使用先前在相应条件下制作的阿霉素的标准校准曲线计算取出的阿霉素的累计释放量。计算公式如下：

公式(2):

上述公式中，M

用pH值为5.0的10mM/L的谷胱甘肽(GSH)的醋酸缓冲溶液(pH值为5.0+10mM GSH)模拟肿瘤细胞内的溶酶体环境，用pH值为7.4的10μM/L的GSH的磷酸缓冲溶液(pH值为7.4+10μM GSH)模拟人体正常体液循环的微环境进行模拟体外药物释放实验。并用对应的pH值为5.0和pH值为7.4不加GSH的缓冲溶液中的药物释放做对比；

图3为本发明实施例1制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的在模拟人体体液及肿瘤细胞环境中对阿霉素的释放情况图，由图3可知，在133小时内，羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系在pH5.0+10mM GSH的酸性释放液中阿霉素的释放率为57％，在pH为7.4+10μM GSH的释放液中阿霉素的释放率(或渗漏率)仅为15％，在pH为5.0的酸性释放液中阿霉素的释放率为37％，在pH值为7.4的释放液中阿霉素的释放率(或渗漏率)仅为14％，可见，实施例1制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系具有pH敏感性和还原敏感性，且药物渗漏率较低。

实施例2

按照实施例1的方法，制备羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系，其中，所述羽毛角蛋白碱性溶液中的羽毛角蛋白与海藻酸钠的质量比为1:3；所述羽毛角蛋白碱性溶液中羽毛角蛋白与所述抗癌药物溶液中的抗癌药物阿霉素的质量比为3：1，并采用与实施例1同样的方法检测实施例2制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的粒径、载药量和药物渗漏率(即在pH为7.4+10μM GSH的释放液中阿霉素的释放率)，具体结果见表1。

实施例3

按照实施例1的方法，制备羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系，其中，所述羽毛角蛋白碱性溶液中的羽毛角蛋白与海藻酸钠的质量比为1:6；所述羽毛角蛋白碱性溶液中羽毛角蛋白与所述抗癌药物溶液中的抗癌药物阿霉素的质量比为3：1，并采用与实施例1同样的方法检测实施例3制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的粒径、载药量和药物渗漏率(即在pH为7.4+10μM GSH的释放液中阿霉素的释放率)，具体结果见表1。

表1实施例1～3制备的羽毛角蛋白/海藻酸钠微凝胶载药体系的性能

由实施例和表1可知，利用本申请提供的方法制备的载药量为65％，具有pH敏感性和还原敏感性，且药物渗漏率较低，在133小时的模拟体外释放实验中的药物渗漏率仅为15％，且本发明提供的双交联海藻酸钠微凝胶抗癌药物载药体系的制备方法操作简单，反应条件温和，适宜规模化生产。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。