一种测定罗红霉素对小麦发芽影响的方法

摘要

一种测定罗红霉素对小麦发芽影响的方法，属于生态毒理学技术领域，包括配制营养液、配制不同浓度梯度的罗红霉素、测定小麦种子萌发状况、测定小麦幼苗生物量这几个步骤。通过观察不同罗红霉素浓度下三种小麦萌发的状况，可以较为系统地观察逆境胁迫对种子萌发的影响。为评价抗生素污染的生态影响提供科学依据，同时为选育不同基因型小麦以及含抗生素沼液的合理使用提供了理论支持，保证了农产品安全。

说明书

技术领域

本发明属于生态毒理学技术领域，涉及一种测定罗红霉素对小麦发芽影响的方法，具体的说谁涉及一种可用于测定抗生素残留对小麦种子萌发的影响，为生产应用提供科学依据的测定方法。

背景技术

小麦是中国主要粮食作物之一，种植面积广泛，在种植过程中常常使用有机肥促进其生长发育，同时也是土壤污染生态毒理诊断重要的模式生物，更有研究发现高等植物中小麦早期生长对土壤有机污染的响应非常敏感。已有的研究发现，抗生素对植物发芽期影响不大，但对植物萌发过程有一定影响，表现为低浓度时促进和高浓度时抑制。种子萌发和幼苗的形态建成是作物生长的关键时期，也是植物对外界环境因子最敏感的重要阶段之一。目前，研究的抗生素主要集中在四环素类、磺胺类和喹诺酮类，大环内酯类抗生素对植物种子萌发的影响研究较少。

发明内容

本发明的目的是目前对抗生素影响植物种子萌发方面的研究较少，不利于作物生长等不足，提出一种测定罗红霉素对小麦发芽影响的方法，通过测定在不同浓度下三种小麦种子发芽率以及根长芽长抑制率和小麦幼苗生物量，明确不同浓度罗红霉素对不同种小麦生长发育的影响，为评估抗生素对小麦等作物的生态影响提供了新的方法。

本发明的技术方案：一种测定罗红霉素对小麦发芽影响的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)配制营养液：Ca(NO

(2)配制罗红霉素溶液：设置大环内酯类抗生素罗红霉素，浓度梯度为0、0.1、0.5、1、5、10 mg·L

(3)小麦种子消毒后，一部分添加罗红霉素溶液用于测定发芽率，其余使用去离子水对小麦种子进行催芽；

(4)选取一部分催芽1天后露白的小麦种子放入培养皿，添加罗红霉素溶液进行培养，4天后测定罗红霉素对小麦种子的根长以及芽长的影响，其余小麦种子继续使用去离子水培养；

(5)将配制罗红霉素溶液倒入水培盒中，将去离子水培养3天后发芽出根的小麦种子根系插进水培盒中并固定小麦种子，水培盒放入光照培养箱中连续培养8天；

(6)测定小麦幼苗的生长发育情况：培养小麦8天后测定小麦幼苗的鲜重、干重、地上部长度、地下部长度，确定小麦幼苗生物量大小。

步骤(3)中所述消毒、催芽的具体方法如下：选取颗粒饱满、大小相同的小麦种子，以20%的次氯酸钠溶液浸泡小麦种子进行消毒20min再用去离子水反复冲洗小麦种子数次后，在9cm直径的玻璃培养皿中放三层滤纸，加入罗红霉素浓度梯度为0、0.1、0.5、1、5、10mg·L

步骤(4)中所述培养的具体方法如下：在9cm直径的玻璃培养皿中放三层滤纸，加入罗红霉素浓度梯度为0、0.1、0.5、1、5、10 mg·L

步骤(5)中所述将水培盒放入光照培养箱中连续培养8天，培养期间每两天更换水培盒中的营养液，光照培养箱中培养条件为24-26℃温度、6000lx光照强度下培养13小时，19-21℃温度无光照下培养11小时。

步骤(6)中所述测定方法是用直尺测得小麦幼苗根长以及根上部分长度；用天平分别称量小麦幼苗鲜重，并做好标记将称量完鲜重的小麦幼苗放入75℃烘箱中烘至恒重后称量其干重。

本发明的有益效果为：本发明提出的一种测定罗红霉素对小麦发芽影响的方法，方法主要包括配制营养液、配制不同浓度梯度的罗红霉素、测定小麦种子萌发状况、测定小麦幼苗生物量这几个步骤。通过观察不同罗红霉素浓度下三种小麦萌发的状况，可以较为系统地观察逆境胁迫对种子萌发的影响。为评价抗生素污染的生态影响提供科学依据，同时为选育不同基因型小麦以及含抗生素沼液的合理使用提供了理论支持，保证了农产品安全。

附图说明

图1 为不同罗红霉素浓度对三种小麦根长影响。

图2 为不同罗红霉素浓度对三种小麦芽长影响。

图3 为不同罗红霉素浓度下三种小麦培养8天后，对小麦的地上部长度的影响。

图4 为不同罗红霉素浓度下三种小麦培养8天后，对小麦的地下部长度的影响。

图5 为不同罗红霉素浓度下三种小麦培养8天后，对小麦的鲜重的影响。

图6 为不同罗红霉素浓度下三种小麦培养8天后，对小麦的干重的影响。

图7 为不同罗红霉素浓度下三种小麦培养8天后，对小麦发芽率的影响。

图8 为本发明测定不同浓度罗红霉素对不同种小麦发育影响的方法流程图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明：

本发明中涉及的小麦为徐麦33品种小麦(

(1)选取颗粒饱满、大小相同的小麦种子，以20%的次氯酸钠溶液浸泡小麦种子进行消毒20min再用去离子水反复冲洗小麦种子数次后，在9cm直径的玻璃培养皿中放三层滤纸，加入罗红霉素浓度梯度为0、0.1、0.5、1、5、10 mg·L

用20cm直尺测定小麦种子根长芽长。

根长抑制率(％)=(对照组-处理组)/对照组×100％

芽长抑制率(％)=(对照组-处理组)/对照组×100％

通过根长和芽长抑制率求出抗生素对小麦种子萌发的半数抑制浓度(IC

(2)将配制营养液倒入水培盒中，将发芽出根的小麦根系插进孔中并固定种子。将水培盒放入光照培养箱中连续培养8天，培养期间每两天更换水培盒中的营养液，光照培养箱中培养条件为24-26℃温度6000lx光照强度下培养13h，19-21℃温度无光照下培养11h。

(3)用直尺测得小麦幼苗根长以及根上部分长度；用天平分别称量小麦幼苗鲜重，并做好标记将称量完鲜重的小麦幼苗放入75℃烘箱中烘至恒重后称量其干重。

实施例1

设置大环内酯类抗生素罗红霉素(Roxithromycin，ROX)浓度梯度为0、0.1、0.5、1、5、10 mg·L

实施例2

设置大环内酯类抗生素罗红霉素(Roxithromycin，ROX)浓度梯度为0、0.1、0.5、1、5、10 mg·L

实施例3

设置大环内酯类抗生素罗红霉素(Roxithromycin，ROX)浓度梯度为0、0.1、0.5、1、5、10 mg·L

图1～图2为不同罗红霉素浓度下三种小麦的芽长，根长趋势；图3～图6为不同罗红霉素浓度下三种小麦培养8d后，地上和地下部长度，鲜重以及干重变化趋势；图7为不同罗红霉素浓度下三种小麦的发芽率趋势。