护骨胶囊作为用于治疗创伤性骨折药物的应用

摘要

本发明提供了护骨胶囊作为用于治疗创伤性骨折药物的应用，涉及中药应用技术领域。本发明将中药组方为制何首乌、淫羊藿、熟地黄、龟甲、巴戟天、杜仲、续断、骨碎补、当归、山药的护骨胶囊作为治疗创伤性骨折药物的应用。本发明通过构建大鼠骨折模型充分验证了护骨胶囊能促进骨形成，加快骨折部位骨性骨痂的生成，提高骨折愈合总效率，为该药用于创伤性骨折的治疗提供实验依据。

说明书

技术领域

本发明涉及中药应用技术领域，尤其涉及护骨胶囊作为用于治疗创伤性骨折药物的应用。

背景技术

骨折破坏了骨的连续性及完整性。解决骨折愈合的迟缓是本发明重点解决的问题，西医多采用手术植骨、消炎及促骨形成的西药治疗，而西药副作用大，手术费用昂贵。而中药通过改善骨折部位的血液供应，提升骨痂质量及加速愈合。

中医对骨折的认识与治疗历史悠久，具有西医西药难以比拟的优势。西医治疗严重骨折时多采用手术固定，术后仅予消炎镇痛药，并无接骨药物。而手法整复骨折、小夹板配合接骨中药内服或者外用，是中医骨伤科独特的治疗方案，在骨折的治疗中得到广泛的应用。但由于缺乏系统深入的研究与开发，目前临床使用的多为土法炮制的膏药，市售接骨类中成药，如伤科接骨片、虎力散等，因服用方便，患者易于接受，使用较多，但其药效不明，这使得人们非常希望找到更有效、更安全的新型接骨类中成药。

随着研究的不断深入，目前国际上对骨折愈合的病理研究已经深入到细胞、分子水平。骨折愈合的核心事件就是骨重建：钙化骨痂的吸收和新骨的形成相续进行。可见在骨折愈合期间除新骨生成外，骨吸收同时存在且两者保持动态平衡，然而两者的效应细胞：成骨细胞(Ob)与破骨细胞(Oc)如何维持骨形成与骨吸收的耦联平衡以及分子的调节还不清楚，特别是中药复方对骨折治疗作用的机理研究不多，因而对骨折机理的研究也是目前的一大热点。

中药护骨胶囊是广东安诺药业股份有限公司独家生产的国家专利新药，具有防治原发性骨质疏松症的作用。护骨胶囊由制何首乌、熟地黄、龟甲、巴戟天、杜仲、续断、骨碎补、当归、山药10味中药组成，运用中医理论，按补肾益精、健脾益气、活血化瘀、止痛的原则组方，本品能强筋壮骨、健脾养血、活血祛瘀，临床用于原发性骨质疏松症，疗效显著。中药护骨胶囊能否作为创伤性骨折药物目前尚无相关研究。

前期关于护骨胶囊对去卵巢大鼠骨骼结构和骨重建状态的影响进行研究，结果提示，护骨胶囊能增加去卵巢骨质疏松大鼠模型骨量，明显促进骨形成，是通过促进成骨细胞增殖、分化，加快钙磷吸收，使血清中ALP含量上升。而骨折愈合主要与骨形成相关，因此，本发明应用大鼠骨折模型通过骨折端的影像学变化、骨组织形态计量学等方法，研究护骨胶囊在骨折愈合中的作用，开发护骨胶囊在治疗创伤性骨折的新用途提供实验依据。

发明内容

有鉴于此，本发明建立了一种大鼠骨折模型，通过骨折端的影像学变化、骨组织形态计量学等方法，研究了护骨胶囊在骨折愈合中的作用，开发护骨胶囊在治疗创伤性骨折的新用途提供实验依据。

本发明的一个目的是提供了护骨胶囊作为用于治疗创伤性骨折药物的应用，即将中药组方为制何首乌、淫羊藿、熟地黄、龟甲、巴戟天、杜仲、续断、骨碎补、当归、山药的护骨胶囊作为治疗创伤性骨折药物的应用。

优选地，所述护骨胶囊能促进骨形成，加快骨折部位骨性骨痂的生成，提高骨折愈合总效率。

本发明的另一目的是提供了一种大鼠骨折模型的构建方法，包括以下步骤：

大鼠适应性饲养5天后，无菌条件下造模，在股骨中段行锐性、环形剥离1cm骨膜，用骨刀造成横断骨折，在膝关节髌韧带处顺行穿入8号针头，剪断埋于骨髓腔，然后逐层缝合，即获得大鼠骨折模型。

优选地，本发明，将所述护骨胶囊以灌胃方式对所述大鼠骨折模型进行给药，每天给药1次，持续5周；给药结束后，采用X光检查骨折愈合情况，骨形态计量学分析骨痂部位骨形成情况，甲苯胺蓝染色观察骨折部位骨细微结构变化来研究所述护骨胶囊在创伤性骨折愈合中的作用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明通过构建大鼠骨折模型充分验证了护骨胶囊能促进骨形成，加快骨折部位骨性骨痂的生成，提高骨折愈合总效率，为该药用于创伤性骨折的治疗提供实验依据。

附图说明

图1为给药期间Ctrl组及HG组的大鼠体重变化图；

图2为给药结束后Ctrl组及HG组的大鼠X光及大体检查结果图；

图3为给药结束后Ctrl组及HG组的大鼠股骨中段(骨痂)横切面进行甲苯胺蓝染色的效果图；

图4为给药结束后Ctrl组股骨中段(骨痂)横切面甲苯胺蓝染色高倍效果图；

图5为给药结束后Ctrl组及HG组的大鼠股骨中段(骨痂)横切面采用钙黄绿素进行染色的荧光效果图。

具体实施方式

下面结合具体实验对本发明作进一步说明。

1实验材料

1.1实验动物

SPF级雌雄SD大鼠，3月龄，购自广东省医学实验动物中心，许可证号：SCXK(粤)2013-0002，实验于广东药科大学实验动物中心。

1.2药物及制备方法

护骨胶囊(国药准字：Z20040124，生产批号：20170207，规格：0.45g/粒)，由广东安诺药业股份有限公司提供；按人体等效剂量换算，将护骨胶囊配制成浓度为0.12g/ml的溶液。

1.3主要试剂与仪器

钙黄绿素(Sigma，批号为SLBRO830V)，甲苯胺蓝(Sigma，批号为92-31-9)；LeicaRM2500型切片机、Leica SP1600型锯片机；Bioquant-Osteo骨形态学图像分析系统。

2实验方法

2.1大鼠骨折模型

大鼠适应性饲养5天后，无菌条件下造模，在股骨中段行锐性、环形剥离1cm骨膜，用骨刀造成横断骨折，在膝关节髌韧带处顺行穿入8号针头，剪断埋于骨髓腔，然后逐层缝合。

2.2试验分组及给药

按照体重，大鼠被随机分为对照组(Ctrl)及给药组(HG)，各6只。造模2天后，Ctrl和HG分别灌胃生理盐水和HG，Qd，4mL/kg/d，持续5周。HG给药剂量采用标准动物等效剂量折算系数法，折算大鼠给药剂量为(0.486g/kg/d)，给药体积为0.12g/ml，每周根据大鼠体重变化调整。

2.3动物体重

给药期每周对大鼠称重1次，如图1所示。

2.4骨折部位X线检查及评分

给药结束后，所有大鼠腹腔麻醉后进行X线摄片，采用《伤科论文汇编》制定的骨折愈合评分标准进行X线检查的评分，如表1所示。

表1给药5周后X线影像学评分表(均数±s)

*表示与Ctrl组比较，P<0.05

2.5骨折部位骨微结构

给药结束后，于髋关节处分离取下右股骨于4％多聚甲醛中固定24～48h。对固定后的大鼠股骨进行不脱钙硬组织包埋并在骨痂处进行横切面切片5μm，甲苯胺蓝染色观察骨折部位骨微结构。

2.6骨形态计量学分析

采用活体动物双荧光标记法。全部大鼠在药物干预结束时，用心脏抽血处死。于髋关节处分离取下右股骨于4％多聚甲醛中固定24～48h。对固定后的大鼠股骨进行不脱钙硬组织包埋并在骨痂处进行横切面切片10μm，骨形态计量学分析观察骨形成情况。

2.7统计学方法

采用GraphPad Prism 6.0进行统计学分析。数据采用单因素方差分析，用±s表示，P<0.05表示差异有统计学意义。

从图2中可以看出，Ctrl组骨折线清晰且骨折两侧未见骨性骨痂，仍可见断端边缘；而HG组骨折线已基本消失，骨折基本愈合，部分可见骨性骨痂连接骨折端。

从图3和图4中可以看出，Ctrl组骨痂处双荧光较少，说明成骨细胞活性不高，骨形成低。HG组骨痂处存在大量双荧光，说明成骨细胞活性增加，骨形成增加，故HG组大鼠的骨折线已基本消失，骨折端出现骨小梁分布规律的板层骨，骨质连接更加坚固。同时Ctrl组骨痂有少量深染色区域为体积较大的软骨细胞，而HG组的骨痂中未发现软骨细胞；此外骨折端骨痂处横切面的染色结果中，Ctrl组的骨痂骨基质内多为粗大的胶原纤维，骨小梁不成熟，排列紊乱、疏松，即多为编织骨，而HG组的原骨折处已基本为骨性骨痂，出现骨重建后规律排列的骨小梁。

钙黄绿素使大鼠骨质表面出现绿色荧光，从图5中可以看出Ctrl组的股骨骨痂处绿色荧光较少，多为单荧光；而HG组的股骨骨痂处绿色荧光较多且呈现出较多双荧光。

综上所述，HG能促进骨形成，加快骨折部位骨性骨痂的生成，提高骨折愈合总效率，为该药用于创伤性骨折的治疗提供实验依据。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。