一种绒促性素加工系统及加工工艺

摘要

本发明公开了一种绒促性素加工系统及加工工艺，包括通过管路依次连通管的提取罐、第一分离组件、沉淀罐和第二分离组件，所述第一分离组件包括相互连通的第一离心机和第一层析柱，所述第一离心机与提取罐连通，所述第一层析柱与沉淀罐连通，所述第二分离组件包括相互连通的第二离心机和第二层析柱，所述第二离心机与沉淀罐连通，所述第二层析柱与真空干燥机连通。本发明通过对加工系统的改进，使得绒促性素的加工更加简便，其次大大提高了绒促性素的加工效率。

说明书

技术领域

本发明属于中间体加工领域，具体涉及一种绒促性素加工系统及加工工艺。

背景技术

绒促性素与垂体分泌的黄体生成素作用极相似，对女性能促进和维持黄体功能，使黄体合成孕激素；与具有卵泡成熟素(FSH)成分的尿促性素合用，可促进卵泡生成和成熟，并可模以生理性的促黄体生成素的高峰而触发排卵。对男性能使垂体功能不足者的睾丸产生雄激素，促使睾丸下降和男性第二性征的发育。现有方法中装置容量小、操作复杂、收率低，不利于推广利用。

因此，发明一种绒促性素加工装置来解决上述问题很有必要。

发明内容

本发明目的在于提供一种绒促性素加工系统，以解决上述背景技术中提出的现有的加工装置操作复杂、效率低的问题。

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明所采用的技术方案为：

绒促性素加工系统，包括通过管路依次连通管的提取罐、第一分离组件、沉淀罐、第二分离组件、第三分离组件、超滤膜系统和真空干燥箱。

所述第一分离组件包括相互连通的第一离心机和层析A柱，所述第一离心机与提取罐连通，所述层析A柱与沉淀罐连通。

所述第二分离组件包括相互连通的第二离心机和层析B柱，所述第二离心机与沉淀罐连通，所述层析B柱通过超滤膜系统与真空干燥箱连通。

所述第三分离组件包括相互连通的第三离心机和层析C柱，所述第三离心机与层析B 柱连通，所述层析C柱通过第四离心机与超滤膜系统连通。

进一步的，所述第一离心机、第二离心机和第三离心机均为冷冻离心机。

进一步的，所述超滤膜中设有有机高分子卷式膜。

进一步的，所述卷式膜元件内设有原料通道和透过液通道。

进一步的，所述原料液通道的进出口在膜元件两端，原料液沿轴向流动，通道截面为螺旋形。

进一步的，所述超滤膜系统中透过液流道为螺旋形，并汇总至中心管流出。

进一步的，所述超滤膜系统通过第五离心机与真空干燥机相连通。

一种绒促性素加工工艺，包括以下步骤：

步骤A，提取、离心。

步骤B，一次层析。

步骤C：醇沉、离心。

步骤D，溶液配制。

步骤E，二次层析。

步骤F，醇沉、离心。

步骤G，去内毒素。

步骤H：病毒去除。

步骤I：真空干燥、混合。

进一步的，所述步骤A具体包括：

步骤A1，Tris-HCL平衡溶液配制。

步骤A11，将Tris：纯化水＝1:150(重量比)混合，搅拌溶解，得到溶液a1。

步骤A12，向溶液a1中加入HCL，调节pH为7～9、电导为3ms/cm～5ms/cm，得到溶液a2。

步骤A13，取HCG中间体，投入提取罐中，加入10倍量溶液a2(重量比)搅拌溶解，得到溶液a3。

步骤A2，提取、离心。

步骤A21，将溶液a3投入第一离心机内，调节离心转速:100～300rpm/min，时间：10-20min，静置、沉淀1～3h。

步骤A22，调节第一离心机转速2000～5000rpm/min，温度：0～10℃，时间：10～50min。

步骤A23，将步骤A22的上清液收集，得到溶液a4。

步骤A24，将步骤A22的沉淀收集，加入10～30倍量(重量比)溶液a3，重复步骤A21-步骤A24，获得溶液a5。

步骤A25，将溶液a4和溶液a5合并，得到溶液a6。

进一步的，所述步骤B包括：

步骤B1，溶液配制。

步骤B11，氢氧化钠溶液配制：按重量取氢氧化钠：纯化水＝1:65搅拌溶解，得到氢氧化钠溶液。

步骤B12：再生液配制；按重量取氯化钠：纯化水＝1:23搅拌溶解，得到再生液。

步骤B13：一次洗脱液配制；按重量份取Tris：氯化钠：纯化水＝7:17:1200搅拌溶解，加入HCL，调节pH为7～9，得到一次洗脱液。

层析柱运行前检查并满足以下正常工作条件：环境温度：0～10℃。周围无强电磁场干扰，无腐蚀性气体。安置场所应稳固，不得有强烈振动。检查填料已清洁干净，层析柱安装完好，层析柱进口阀、出口阀及其管路连接正确，并密封完好。控制系统，各管理连接正确，密封完好。

工作压力：≤0.3MPa，流速0～150L/h，检查终流出液pH、电导与平衡溶液相同。

步骤B2，层析。

步骤B21，将溶液a6流穿层析A柱，流速0～100L/h，进口压力≤0～0.3MPa，出口压力≤0.2～0.3MPa，上样完毕，获得溶液b1。

步骤B22，用缓冲液洗涤溶液b1至紫外检测器在280nm的吸收值小于1，分别收集流出液b及淋洗液b，将流出液b及淋洗液b混合，投入沉淀罐中醇沉备用，得到溶液 b2。

步骤B23，用一次洗脱液、再生液洗涤溶液a6至紫外检测器在280nm的吸收值＜1(＜1)，分别收集洗脱液b和再生液b，分别检测洗脱液b和再生液b中溶液a6的含量。

步骤B24，当溶液a6的含量≥100IU/ml，重复步骤B22和步骤B23，继续层析。

当溶液a6的含量≤100IU/ml，排放洗脱液b和再生液b。

进一步的，所述步骤C包括：

步骤C1，将浓度≥85％乙醇(酒精计常温测定)，用不锈钢桶存放于沉淀间内预冷至室温。

步骤C2，按溶液b2：乙醇＝2：9加入冷乙醇(温度2～8℃，冷藏时间≥8h)，搅拌50分钟，混合均匀，密封，静置放置在冷库内，静置过夜，获得溶液c1。

步骤C3，将溶液c1投入第二离心机，转速2000～5000rpm/min，温度0～10℃，时间10min。收集沉淀物c2。

进一步的，所述步骤D包括：

步骤D1，二次洗脱液配制：按重量取醋酸钠：氯化钠：纯化水＝7:12：1000，搅拌溶解，加入醋酸调节pH为5.5～8.5，得到溶液d1。

步骤D2，醋酸-醋酸钠平衡溶液配制：按重量取醋酸钠：纯化水＝1：150准确称取数量，搅拌溶解，加入醋酸调节pH为5.5～8.5，电导为4ms/cm～8ms/cm，得到溶液d2。

步骤D3，按沉淀物c2：缓冲液＝1:130混合，完全溶解，获得溶液d3。

进一步的，所述步骤E包括：

步骤E1，将溶液d3流穿已处理的层析B柱，流速0～100L/h，进口压力≤0～0.3MPa，出口压力≤0.2～0.3MPa，上样完毕。

步骤E2，用缓冲液洗涤溶液d3至紫外检测器在280nm的吸收小于1，分别收集流出液e、淋洗液e，分别检测流出液e和淋洗液e中溶液d3的含量。

步骤E3，当溶液d3的含量≥100IU/ml，重复步骤E2，继续层析。

当溶液d3的含量≤100IU/ml，排放。

步骤E4，用二次洗脱液洗涤溶液d3至紫外检测器在280nm的吸收值＜1，收集二次洗脱液e1。

步骤E5，用再生液洗涤至紫外检测器在280nm的吸收值＜1，收集再生液e，检测再生液e1中溶液d3的含量。

步骤E6，当溶液d3的含量≥100IU/ml，重复步骤E5，继续层析；

当溶液d3的含量≤100IU/ml，排放。

进一步的，所述步骤F包括：

步骤F1，将浓度≥90％乙醇(酒精计常温测定)，用不锈钢桶存放于沉淀间内预冷至室温。

步骤F2，按二次洗脱液e1：乙醇＝2：9加入冷乙醇(温度2～8℃，冷藏时间≥8h)，搅拌50分钟，混合均匀，密封，静置放置在冷库内，静置过夜，获得溶液f1。

步骤F3，将溶液f1投入第三离心机，转速2000～5000rpm/min，温度0～10℃，时间10min。收集沉淀物f2。

进一步的，所述步骤G包括：

步骤G1，超滤膜准备，开机前检查电器、仪表等处于完好状态，各阀门开关正常。然后进行完整性检测，确认合格，工作压力0.2MPa～0.3MPa、流速为60～120L/h，检验合格后，超滤水作为内毒素水使用。调节柱层析系统工作压力：≤0.3MPa，流速0～ 120L/h，检查终流出液pH、电导与平衡溶液相同。

步骤G2，将沉淀物f2流穿已处理的层析C柱，流速0～120L/h，进口压力≤0.2～0.3MPa，出口压力≤0.2～0.3MPa，上样完毕，用缓冲液洗涤沉淀物f2至紫外检测器在280nm的吸收值＜1，分别收集流出液g及淋洗液g，将流出液g及淋洗液g混合，醇沉备用，得到溶液g1。

步骤G3，分别用配制的洗脱液、再生液洗涤沉淀物f2至紫外检测器在280nm的吸收值＜1，分别收集洗脱液g和再生液g，分别检测洗脱液g和再生液g中内毒素水的含量。

当内毒素水的含量≥100IU/ml，重复上述过程继续层析；

当内毒素水的含量≤100IU/ml，排放。

经检测，内毒素合格；若内毒素不合格，重复上述过程，继续层析法去除内毒素，直至产品合格。

按溶液g1：乙醇＝2：9加入冷乙醇(温度0～10℃，冷藏时间≥8h)，搅拌50分钟，混合均匀后，获得溶液g2，密封，静置放置在沉淀间，静置过夜。

将溶液g2投入第四离心机，转速2000～5000rpm/min，温度0～10℃，时间50min。得到沉淀物g3。

进一步的，所述步骤H包括：

超滤膜准备：开机前检查电器、仪表等处于完好状态，各阀门开关正常。然后进行完整性检测，确认合格，按照《超滤膜堆清洁消毒、去除内毒素SOP》进行超滤膜去除内毒素处理操作，工作压力0.2MPa～0.3MPa、流速为60～120L/h，检验合格后，超滤水作为去内毒素水使用。用气泡点法检测膜的完整性，测试合格后使用。膜使用前，用去内毒素水循环30min预处理。

步骤H1：将调节加压阀至所需工作压为0.06MPa～0.20MPa。使沉淀物g3膜过滤至尽，然后使用去内毒素水冲洗膜芯体积的2个柱体积，使膜芯冲洗至尽，收集透过液h1。

步骤H2：醇沉离心：离心罐准备：离心罐在使用前，用去内毒素水配制的氢氧化钠溶液浸泡8小时，然后用去内毒素水冲洗干净，备用。

步骤H3：按透过液h1：乙醇＝2：9加入冷乙醇(温度0～10℃，冷藏时间≥8h)，搅拌50分钟，混合均匀后，得到溶液h2。

步骤H4：将溶液h2投入第五离心机中，调节第五离心机转速2000～5000rpm/min，温度0～10℃，时间50min。得到沉淀物h3。

进一步的，所述步骤I为将沉淀物h3迅速放置于真空干燥箱内，关闭干燥箱，设置干燥时间为15h，真空度≥-0.06MPa，干燥温度0～10℃，进行干燥，确保物料充分干燥后，缓慢打开进气阀进气，关闭设备，取出物料，研磨混合40分钟，称量，密封，暂存于病毒去除间，低温保存。

本发明的有益效果为通过对加工系统的改进，使得绒促性素的加工更加简便，其次大大提高了绒促性素的加工效率。

附图说明

图1为本发明的设备结构示意图。

1-提取罐；2-第一离心机；3-层析A柱；4-沉淀罐；5-第二离心机；6-层析B柱； 7-第三离心机；8-层析C柱；9-第四离心机；10-超滤膜系统；11-第五离心机；12-真空干燥箱。

具体实施方式

下面结合附图及附图标记对本发明作进一步阐述。

为了能够更清楚地理解本发明的上述目的、特征和优点，下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细描述。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

术语“第一”、“第二”、“第三”等仅用于区分描述，而不能理解为指示或暗示相对重要性。

在本发明的描述中，还需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“设置”、“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

以下结合附图对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

实施例1：

如图1所示，绒促性素加工系统，包括通过管路依次连通管的提取罐1、第一分离组件、沉淀罐4、第二分离组件、第三分离组件、超滤膜系统10和真空干燥箱12。

所述第一分离组件包括相互连通的第一离心机2和层析A柱3，所述第一离心机2与提取罐1连通，所述层析A柱3与沉淀罐4连通。

所述第二分离组件包括相互连通的第二离心机5和层析B柱6，所述第二离心机5与沉淀罐4连通，所述层析B柱6通过超滤膜系统10与真空干燥箱12连通。

所述第三分离组件包括相互连通的第三离心机7和层析C柱8，所述第三离心机7与层析B柱6连通，所述层析C柱8通过第四离心机9与超滤膜系统10连通。

实施例2，在实施例1的基础上，所述第一离心机2、第二离心机5和第三离心机7 均为冷冻离心机，所述超滤膜中设有有机高分子卷式膜，所述卷式膜元件内设有原料通道和透过液通道，所述原料液通道的进出口在膜元件两端，原料液沿轴向流动，通道截面为螺旋形，所述超滤膜系统10中透过液流道为螺旋形，并汇总至中心管流出，所述超滤膜系统10通过第五离心机11与真空干燥机相连通。

实施例3：绒促性素加工工艺，在实施例2的基础上，包括以下步骤：步骤A，提取、离心；步骤B，一次层析；步骤C，醇沉、离心；步骤D，溶液配制；步骤E，二次层析；步骤F，醇沉、离心；步骤G，去内毒素；步骤H：病毒去除；步骤I：真空干燥、混合。

实施例4：在实施例3的基础上，所述步骤A具体包括：

步骤A1，Tris-HCL平衡溶液配制。

步骤A11，将Tris：纯化水＝1:150(重量比)混合，搅拌溶解，得到溶液a1。

步骤A12，向溶液a1中加入HCL，调节pH为7～9、电导为3ms/cm～5ms/cm，得到溶液a2。

步骤A13，取HCG中间体，投入提取罐1中，加入10倍量溶液a2(重量比)搅拌溶解，得到溶液a3。

步骤A2，提取、离心。

步骤A21，将溶液a3投入第一离心机2内，调节离心转速:100～300rpm/min，时间：10-20min，静置、沉淀1～3h。

步骤A22，调节第一离心机2转速2000～5000rpm/min，温度：0～10℃，时间：10～50min。

步骤A23，将步骤A22的上清液收集，得到溶液a4。

步骤A24，将步骤A22的沉淀收集，加入10～30倍量(重量比)溶液a3，重复步骤A21-步骤A24，获得溶液a5。

步骤A25，将溶液a4和溶液a5合并，得到溶液a6。

实施例5，在实施例4的基础上，所述步骤B包括：

步骤B1，溶液配制。

步骤B11，氢氧化钠溶液配制：按重量取氢氧化钠：纯化水＝1:65搅拌溶解，得到氢氧化钠溶液。

步骤B12：再生液配制；按重量取氯化钠：纯化水＝1:23搅拌溶解，得到再生液。

步骤B13：一次洗脱液配制；按重量份取Tris：氯化钠：纯化水＝7:17:1200搅拌溶解，加入HCL，调节pH为7～9，得到一次洗脱液。

层析柱运行前检查并满足以下正常工作条件：环境温度：0～10℃。周围无强电磁场干扰，无腐蚀性气体。安置场所应稳固，不得有强烈振动。检查填料已清洁干净，层析柱安装完好，层析柱进口阀、出口阀及其管路连接正确，并密封完好。控制系统，各管理连接正确，密封完好。

工作压力：≤0.3MPa，流速0～150L/h，检查终流出液pH、电导与平衡溶液相同。

步骤B2，层析。

步骤B21，将溶液a6流穿层析A柱3，流速0～100L/h，进口压力≤0～0.3MPa，出口压力≤0.2～0.3MPa，上样完毕，获得溶液b1。

步骤B22，用缓冲液洗涤溶液b1至紫外检测器在280nm的吸收值小于1，分别收集流出液b及淋洗液b，将流出液b及淋洗液b混合，投入沉淀罐4中醇沉备用，得到溶液 b2。

步骤B23，用一次洗脱液、再生液洗涤溶液a6至紫外检测器在280nm的吸收值＜1(＜1)，分别收集洗脱液b和再生液b，分别检测洗脱液b和再生液b中溶液a6的含量。

步骤B24，当溶液a6的含量≥100IU/ml，重复步骤B22和步骤B23，继续层析。

当溶液a6的含量≤100IU/ml，排放洗脱液b和再生液b。

实施例6，在实施例5的基础上，所述步骤C包括：

步骤C1，将浓度≥85％乙醇(酒精计常温测定)，用不锈钢桶存放于沉淀间内预冷至室温。

步骤C2，按溶液b2：乙醇＝2：9加入冷乙醇(温度2～8℃，冷藏时间≥8h)，搅拌 50分钟，混合均匀，密封，静置放置在冷库内，静置过夜，获得溶液c1。

步骤C3，将溶液c1投入第二离心机5，转速2000～5000rpm/min，温度0～10℃，时间10min。收集沉淀物c2。

实施例7，在实施例6的基础上，所述步骤D包括：

步骤D1，二次洗脱液配制：按重量取醋酸钠：氯化钠：纯化水＝7:12：1000，搅拌溶解，加入醋酸调节pH为5.5～8.5，得到溶液d1。

步骤D2，醋酸-醋酸钠平衡溶液配制：按重量取醋酸钠：纯化水＝1：150准确称取数量，搅拌溶解，加入醋酸调节pH为5.5～8.5，电导为4ms/cm～8ms/cm，得到溶液d2。

步骤D3，按沉淀物c2：缓冲液＝1:130混合，完全溶解，获得溶液d3。

实施例8，在实施例7的基础上，所述步骤E包括：

步骤E1，将溶液d3流穿已处理的层析B柱6，流速0～100L/h，进口压力≤0～0.3MPa，出口压力≤0.2～0.3MPa，上样完毕。

步骤E2，用缓冲液洗涤溶液d3至紫外检测器在280nm的吸收小于1，分别收集流出液e、淋洗液e，分别检测流出液e和淋洗液e中溶液d3的含量。

步骤E3，当溶液d3的含量≥100IU/ml，重复步骤E2，继续层析。

当溶液d3的含量≤100IU/ml，排放。

步骤E4，用二次洗脱液洗涤溶液d3至紫外检测器在280nm的吸收值＜1，收集二次洗脱液e1。

步骤E5，用再生液洗涤至紫外检测器在280nm的吸收值＜1，收集再生液e，检测再生液e1中溶液d3的含量。

步骤E6，当溶液d3的含量≥100IU/ml，重复步骤E5，继续层析；

当溶液d3的含量≤100IU/ml，排放。

实施例9，在实施例8的基础上，所述步骤F包括：

步骤F1，将浓度≥90％乙醇(酒精计常温测定)，用不锈钢桶存放于沉淀间内预冷至室温。

步骤F2，按二次洗脱液e1：乙醇＝2：9加入冷乙醇(温度2～8℃，冷藏时间≥8h)，搅拌50分钟，混合均匀，密封，静置放置在冷库内，静置过夜，获得溶液f1。

步骤F3，将溶液f1投入第三离心机7，转速2000～5000rpm/min，温度0～10℃，时间10min。收集沉淀物f2。

实施例10，在实施例9的基础上，所述步骤G包括：

步骤G1，超滤膜准备，开机前检查电器、仪表等处于完好状态，各阀门开关正常。然后进行完整性检测，确认合格，工作压力0.2MPa～0.3MPa、流速为60～120L/h，检验合格后，超滤水作为内毒素水使用。调节柱层析系统工作压力：≤0.3MPa，流速0～ 120L/h，检查终流出液pH、电导与平衡溶液相同。

步骤G2，将沉淀物f2流穿已处理的层析C柱8，流速0～120L/h，进口压力≤0.2～0.3MPa，出口压力≤0.2～0.3MPa，上样完毕，用缓冲液洗涤沉淀物f2至紫外检测器在280nm的吸收值＜1，分别收集流出液g及淋洗液g，将流出液g及淋洗液g混合，醇沉备用，得到溶液g1。

步骤G3，分别用配制的洗脱液、再生液洗涤沉淀物f2至紫外检测器在280nm的吸收值＜1，分别收集洗脱液g和再生液g，分别检测洗脱液g和再生液g中内毒素水的含量。

当内毒素水的含量≥100IU/ml，重复上述过程继续层析；

当内毒素水的含量≤100IU/ml，排放。

经检测，内毒素合格；若内毒素不合格，重复上述过程，继续层析法去除内毒素，直至产品合格。

按溶液g1：乙醇＝2：9加入冷乙醇(温度0～10℃，冷藏时间≥8h)，搅拌50分钟，混合均匀后，获得溶液g2，密封，静置放置在沉淀间，静置过夜。

将溶液g2投入第四离心机9，转速2000～5000rpm/min，温度0～10℃，时间50min。得到沉淀物g3。

实施例11，在实施例10的基础上，所述步骤H包括：

超滤膜准备：开机前检查电器、仪表等处于完好状态，各阀门开关正常。然后进行完整性检测，确认合格，按照《超滤膜堆清洁消毒、去除内毒素SOP》进行超滤膜去除内毒素处理操作，工作压力0.2MPa～0.3MPa、流速为60～120L/h，检验合格后，超滤水作为去内毒素水使用。用气泡点法检测膜的完整性，测试合格后使用。膜使用前，用去内毒素水循环30min预处理。

步骤H1：将调节加压阀至所需工作压为0.06MPa～0.20MPa。使沉淀物g3膜过滤至尽，然后使用去内毒素水冲洗膜芯体积的2个柱体积，使膜芯冲洗至尽，收集透过液h1。

步骤H2：醇沉离心：离心罐准备：离心罐在使用前，用去内毒素水配制的氢氧化钠溶液浸泡8小时，然后用去内毒素水冲洗干净，备用。

步骤H3：按透过液h1：乙醇＝2：9加入冷乙醇(温度0～10℃，冷藏时间≥8h)，搅拌50分钟，混合均匀后，得到溶液h2。

步骤H4：将溶液h2投入第五离心机11中，调节第五离心机11转速2000～ 5000rpm/min，温度0～10℃，时间50min。得到沉淀物h3。

实施例12，在实施例11的基础上，所述步骤I为将沉淀物h3迅速放置于真空干燥箱内，关闭干燥箱，设置干燥时间为15h，真空度≥-0.06MPa，干燥温度0～10℃，进行干燥，确保物料充分干燥后，缓慢打开进气阀进气，关闭设备，取出物料，研磨混合40 分钟，称量，密封，暂存于病毒去除间，低温保存。

本发明不局限于上述可选实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是落入本发明权利要求界定范围内的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。