用于治疗斑秃的侧柏叶凝胶吸收剂及其制备方法和一种治疗斑秃的外用贴剂

摘要

本发明公开一种用于治疗斑秃的侧柏叶凝胶吸收剂及其制备方法和一种治疗斑秃的外用贴剂，属于中药制剂技术领域。侧柏叶凝胶吸收剂由侧柏叶提取物纳米粒和凝胶按质量比1:1～100组成，其中，侧柏叶提取物纳米粒是将侧柏叶提取物与药用高分子脂质材料制备成纳米粒分散液，然后再经过冷冻干燥所得；温敏水凝胶按质量分数由以下组分组成：羧甲基纤维素钠5～10％、泊洛沙姆‑188 1～5％、泊洛沙姆‑407 5～10％、单月桂基磷酸酯3～10％、甘油1～10％、余量水。本发明的侧柏叶凝胶吸收剂具有安全性高、疗效好、副作用低及显著促进毛发生长的优势，能够显著提高生物利用度，增加患者顺从性，降低患者副作用，从而提高治疗效果。

说明书

技术领域

本发明属于中药制剂技术领域，具体涉及一种用于治疗斑秃的侧柏叶凝胶吸收剂及其制备方法和一种治疗斑秃的外用贴剂。

背景技术

随着现代社会生活节奏的日益加快，因用脑过度、精神压力过大、头皮紧张造成局部血液循环障碍，导致突发非瘢痕性脱发的斑秃现象日益增多。目前西医治疗斑秃的外用制剂主要有米诺地尔洗剂，米诺地尔的治疗脱发原理在于其可通过刺激真皮乳头细胞表达血管内皮生长因子，扩张头皮血管，改善微循环，从而促进毛发生长。但其涂抹头皮存在有效成分停留时间短、明显的剂量依赖性、接触性皮炎及面部多毛症等缺点。在治疗斑秃方面晋·葛洪《肘后方》生发方中发现侧柏叶具有治疗脱发的作用，资料显示用于治疗斑秃的侧柏叶主要有效成分是其中的槲皮素、芦丁，可激活人体毛母细胞和促进血液循环，使毛发生长能力衰退的毛囊复活和促进血液循环后补充营养成分而发挥其生发的功效。目前侧柏叶已被应用于洗发护发产品、中药酊剂以及口服制剂中，但因其洗护发用品一般存在停留时间短，有效成分槲皮素、芦丁等具有水溶性差、药物分散性差的缺点，不能定时定量进入毛囊、汗腺等部位进行有效的吸收。

发明内容

为了克服现有技术中口服以及外用制剂在治疗斑秃过程中存在的生物利用度低、副作用严重等缺点，本发明提供一种无刺激性、有效性吸收的侧柏叶凝胶吸收剂，能够针对斑秃部位皮肤的吸收特点充分缓释药效成分，达到治疗斑秃的目的。

本发明的技术方案如下：

一种用于治疗斑秃的侧柏叶凝胶吸收剂，由侧柏叶提取物纳米粒和凝胶按质量比1:1～100组成。

上述用于治疗斑秃的侧柏叶凝胶吸收剂的制备方法，如下：将侧柏叶提取物纳米粒以等量递加法分散到凝胶中制备而成。

在上述方案的基础上，侧柏叶提取物纳米粒和凝胶按质量比为1:10。

本发明中，侧柏叶提取物购于西安凌丰生物科技有限公司，侧柏叶总黄酮含量≥90％，其中，以侧柏叶黄酮为有效成分测定指标。

在上述方案的基础上，所述侧柏叶提取物纳米粒的制备，是将侧柏叶提取物与药用高分子脂质材料制备成纳米粒分散液，然后再经过冷冻干燥所得。

在上述方案的基础上，纳米粒分散液采用乳液蒸发-低温固化法制备，具体地，方法如下：将侧柏叶提取物和单硬脂酸甘油酯溶于有机溶剂形成有机相，将泊洛沙姆-188和卵磷脂溶于水中形成水相，在水浴条件下，将有机相快速注入水相中，匀速搅拌，除去有机溶剂，形成半透明纳米乳液后，将其倒入冰水中，匀速搅拌，制得侧柏叶提取物纳米粒分散液。

在上述方案的基础上，有机溶剂为无水乙醇。

在上述方案的基础上，水为去离子水。

在上述方案的基础上，侧柏叶提取物与单硬脂酸甘油酯的质量比为1:8～12，优选为1:10。

在上述方案的基础上，卵磷脂与泊洛沙姆-188的质量比为1:1～5，优选为1:1。

在上述方案的基础上，水浴温度为60-90℃，优选为70℃。

在上述方案的基础上，搅拌为磁力搅拌，转速为500-1000rpm，优选为1000rpm。

在上述方案的基础上，纳米粒分散液的冷冻干燥过程为：将侧柏叶提取物纳米粒分散液加入适量冻干保护剂甘露醇，进行预冻，进行冷冻干燥。

在上述方案的基础上，预冻的温度为-60℃～-100℃，优选为-80℃。

在上述方案的基础上，预冻的时间为16-20h，优选为18h。

在上述方案的基础上，甘露醇浓度为2.5％～10％，优选为5％。

在上述方案的基础上，凝胶优选为温敏水凝胶，温敏水凝胶按质量分数由以下组分组成：羧甲基纤维素钠5～10％、泊洛沙姆-188 1～5％、泊洛沙姆-407 5～10％、单月桂基磷酸酯3～10％、甘油1～10％、余量水。

在一个技术方案中，温敏水凝胶按质量分数由以下组分组成：羧甲基纤维素钠6％、泊洛沙姆-188 5％、泊洛沙姆-407 8％、单月桂基磷酸酯5％、甘油4％、余量水。

在上述方案的基础上，温敏水凝胶的制备方法如下：

将羧甲基纤维素钠与甘油混匀，另取泊洛沙姆-188，泊洛沙姆-407，单月桂基磷酸酯置于热去离子水中溶解，然后加入羧甲基纤维素钠浆中，搅拌成凝胶，加入磷酸二氢钠调节凝胶pH为5～7，加入适量氯化钠调节渗透压至280～310mOsm/L，放冷即得温敏水凝胶。

本发明还提供一种治疗斑秃的外用贴剂，有效成分为上述技术方案中所述的侧柏叶凝胶吸收剂。

具体的，所述贴剂从外到内依次包括背衬层、黏胶层和药物层；

在上方案的基础上，所述贴剂还包括防溢装置和保护层，所述防溢装置包覆于贴剂的四周，所述保护层敷设于所述药物层和防溢装置的外侧；所述防溢装置为醋酸纤维素膜等高分子材料膜。

外用贴剂的制备方法为，将黏胶层(硅酮压敏胶)以0.05mm的厚度均匀涂布在医用无纺布背衬材料的背衬层上，然后将药物层以1～1.5mm厚度均匀涂抹在含有黏胶层的背衬材料上，使用醋酸纤维素膜作为防溢装置包覆于贴剂的四周；最后将保护层(硅化纸)覆盖在药物层上并压住防溢装置的边。灭菌后按规格进行冲裁、筛选、质检、包装。

本发明所述的侧柏叶凝胶吸收剂及其外用贴剂用于治疗斑秃或者与斑秃相关的其它病症，如毛囊衰退等。

侧柏叶凝胶吸收剂中各组分的功能如下：

单硬脂酸甘油酯为脂质纳米粒的主要结构材料，侧柏叶提取物在其中的溶解度最大，其可用于制备包封率较大的含药脂质纳米粒。

甘露醇为冻干保护剂，可以保护纳米粒在冻干过程中不被破坏。

羧甲基纤维素钠是主要的凝胶形成剂，其稳定性好，黏度高、安全无毒，适合于本发明的凝胶基质的形成。

泊洛沙姆是由聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚得到的共聚物，是一种比较理想的温敏材料，在相变温度以下表现为流动液体，到达相变温度后，形成凝胶结构。在本发明中可溶于羧甲基纤维素钠凝胶基质的水中，在头部皮肤温度下(35℃)，可发生溶胀，凝胶黏度下降，使贴剂更加贴合头部皮肤，有利于药物释放。

单月桂基磷酸酯作为油脂吸附剂，具有优良的乳化性，对油脂有良好的乳化能力，无毒、无刺激，类似天然磷脂，与皮肤亲和力好，且易清除。其可吸附因斑秃溢出的油脂，提高治疗效果，增加患者舒适度。

甘油为保湿剂。

本发明的有益效果为：

本发明的用于治疗斑秃的侧柏叶凝胶吸收剂具有安全性高、疗效好、副作用低及显著促进毛发生长的优势，能够显著提高生物利用度，增加患者顺从性，降低患者副作用，从而提高治疗效果。此外，本发明制备的侧柏叶凝胶吸收剂，其药物有效成分持续时间为6-8h，可覆盖睡眠时间，使用过程中，本发明的贴剂可以防止凝胶膨胀溢出。

附图说明

图1为三批次侧柏叶提取物凝胶吸收剂中侧柏叶黄酮的释放曲线图；

图2为侧柏叶提取物在不同脂质材料中的溶解度；

图3为不同冻干保护剂冻干的侧柏叶提取物纳米粒在复溶后的粒径；

图4为侧柏叶提取物凝胶贴剂结构示意图；

图5为贴剂使用时的膨胀效果示意图。

具体实施方式

在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。

下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。

实施例1用于治疗斑秃的侧柏叶凝胶吸收剂的制备

(1)将10mg侧柏叶提取物和100mg单硬脂酸甘油酯溶于4mL无水乙醇中，水浴70℃，制备成有机相；将100mg泊洛沙姆-188和100mg卵磷脂溶于20mL去离子水中，水浴70℃，制备成水相。将有机相快速注入水相中，保持水浴温度为70℃，1000rpm，磁力搅拌50min，除去有机溶剂形成半透明纳米乳液，之后将制备的纳米乳液倒入到10mL、4℃的水中，磁力搅拌2h，制得侧柏叶提取物纳米粒分散液。

(2)将侧柏叶提取物纳米粒分散液加入1g甘露醇作为冻干保护剂后，放入-80℃冰箱中预冻18h，置于冷冻干燥机上进行冷冻干燥，得侧柏叶提取物纳米粒冻干粉末。

(3)称取羧甲基纤维素钠6g与甘油4g混匀，另取泊洛沙姆-188 5g，泊洛沙姆-4078g，单月桂基磷酸酯5g置于100mL去离子水中溶解，然后加入羧甲基纤维素钠浆中，搅拌均匀成凝胶，加入磷酸二氢钠调节凝胶pH为7.0，加入适量氯化钠调节渗透压280～310mOsm/L，放冷即得温敏水凝胶。

(4)将1g侧柏叶提取物纳米粒冻干粉末按照等量递加法分散到步骤(3)所制备的10g温敏水凝胶中，得到侧柏叶提取物凝胶吸收剂。

实施例2利用不同批次的侧柏叶提取物制备侧柏叶提取物凝胶吸收剂

不同批次的侧柏叶提取物含量稍有差别，利用不同批次的侧柏叶提取物制备侧柏叶提取物凝胶制剂，可研究其制备工艺的可重复性，并探讨其体外释放情况。制备步骤具体同实施例1，各成分如表1所示：

表1

侧柏叶提取物纳米粒粒径均为240±36nm，三批包封率分别为73.6％、72.5％、73.24％，温敏凝胶的相变温度为33±2℃。

三批次侧柏叶提取物凝胶吸收剂在不同时间段的释药量通过以下方法测得：

精确称取所制得的侧柏叶提取物凝胶吸收剂10g，置于透析袋内，扎紧后置于50mL磷酸盐缓冲液(pH＝5.8)中，保持恒温(35±2)℃，转速100r/min，并开始计时，分别于0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、10、12、24、36、48h取透析液2mL，同时补充2mL新鲜磷酸盐缓冲液(pH＝5.8)维持释放介质体积不变，采用紫外分光光度法，以芦丁为标准品，于400nm处测定样品中侧柏叶黄酮的含量，按公式

以药物累计释放百分比对时间作图，拟和释放模型，绘制累积药物释放曲线图。该三批侧柏叶提取物凝胶吸收剂均符合一级释放模型，如图1所示，侧柏叶提取物凝胶吸收剂在磷酸盐缓冲液(pH＝5.8)中1h后即可达到有效剂量(参考古方：鲜侧柏叶100g浸泡于350mL95％乙醇中)，持续作用6-8小时，可在睡眠时间进行治疗，不影响患者的正常工作和生活。不同批次侧柏叶提取物凝胶吸收剂在磷酸盐缓冲液中的释放模拟方程拟合，如表2所示：

表2

实施例3脂质材料的筛选

分别称取单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、蜂蜡、肉豆蔻酸、聚氧乙烯单硬脂酸酯各100mg，置于10mL烧杯中，在高于每种脂质熔点5℃时将脂质熔化。在每种脂质中，缓慢加入侧柏叶提取物粉末直至达到饱和，计算侧柏叶提取物在不同脂质中的溶解度。

如图2所示，在100mg脂质材料中，单硬脂酸甘油酯溶解侧柏叶提取物量为10.38mg，高于其他四种脂质材料。药物在脂质中的溶解度决定了药物包封率，因此选择单硬脂酸甘油酯作为制备侧柏叶提取物固体脂质纳米粒的材料。

实施例4冻干保护剂的筛选

选取海藻糖、甘露醇、乳糖、蔗糖各1g，分别加入到实施例1制备的侧柏叶提取物纳米粒分散液中，放入-80℃冰箱中预冻18h，置于冷冻干燥机上进行冷冻干燥。实验结果如表3所示。

甘露醇作为冻干保护剂制备的冻干样品，表面光洁，没有塌陷。使用乳糖、蔗糖和海藻糖作为冻干保护剂冻干时，表面有孔，塌陷。

甘露醇、乳糖及蔗糖作为冻干保护剂对侧柏叶提取物的粒径影响相差不大，而海藻糖作为保护冻干剂时，冻干后复溶测得的粒径较甘露醇、乳糖及蔗糖的较大，如图3所示。

表3

在纳米粒冻干的过程中，甘露醇会提供支撑结构，避免纳米粒的聚集，同时不会与药物发生反应。所以综合考虑，选冻干后粒径增加最小的，表面光洁，无塌陷的甘露醇作为冻干过程中的保护剂。

实施例5温敏水凝胶与普通凝胶的铺展分析

温敏水凝胶的制备如实施例1。普通凝胶的制备除了不加入温敏材料泊洛沙姆-188和泊洛沙姆-407外，其他步骤同温敏水凝胶的制备。

分别在室温下量取5mL温敏水凝胶和普通凝胶于离心管中，记录刻度；在35℃水浴条件下观察其体积变化，记录刻度。设置平行实验3组。实验结果如表4所示。

表4

由此可见，温敏水凝胶在头皮温度下，体积可发生膨胀，可更好的贴合头皮，能够使药物最大程度的铺展，增加药物与细胞接触的比表面积，有利于药物与头皮接触。

实施例6

一种治疗斑秃的外用贴剂，有效成分为上述技术方案中所述的侧柏叶凝胶吸收剂。

具体的，如图4所述，所述贴剂从外到内依次包括背衬层2、黏胶层3和药物层4；

优选的，所述贴剂还包括防溢装置5和保护层1，所述防溢装置5包覆于贴剂的四周，所述保护层1敷设于所述药物层4和防溢装置5的外侧；

优选的，所述防溢装置5为醋酸纤维素膜等高分子材料膜。

外用贴剂的制备方法为，将黏胶层3(可以选用硅酮压敏胶)以0.05mm的厚度均匀涂布在医用无纺布背衬材料的背衬层2上，然后将药物以1～1.5mm厚度均匀涂抹在含有黏胶层3的背衬材料上形成药物层4，使用醋酸纤维素膜包覆于贴剂的四周作为防溢装置5；最后将保护层1(选用硅化纸)覆盖在药物层4上并压住防溢装置5的边。灭菌后按规格进行冲裁、筛选、质检、包装。

如图5所示，本发明的外用贴剂在使用时，揭掉保护层1，将贴剂敷于患处，使用过程中，药物凝胶体积会发生膨胀，在本发明的贴剂周围包覆的防溢装置5可以在凝胶膨胀时对药物有一个包覆保护，防止溢出。

实施例7侧柏叶提取物凝胶贴剂对环磷酰胺诱导斑秃模型小鼠毛囊的影响实验

(1)侧柏叶提取物凝胶贴剂的制备

取实施例1中制备的侧柏叶提取物凝胶吸收剂，以实施例6的方法制成贴剂。

(2)动物模型制备

取C57BL/6小鼠60只(8周龄，雄性，体质量20±2g，青岛科技大学实验动物中心提供)，按随机数字表法随机分为3组，每组20只，即正常对照组、空白对照组、实验组。将小鼠用乙醚轻度麻醉后，用石蜡将其背部毛拔掉，面积约为3cm×4cm。

(3)给药治疗

从拔毛第2天开始，正常对照组不做任何处理，空白对照组外贴不含侧柏叶提取物的空白贴剂，实验组外贴含有侧柏叶提取物的贴剂，每日外贴8h，定时观察小鼠毛发脱落及生长情况。于拔毛后第9天，除正常对照组给等量生理盐水外，其他各组均腹腔注射环磷酰胺(环磷酰胺可诱导小鼠脱发)150mg/kg，诱导生长期毛囊改变。于第30天取小鼠脱毛处皮肤，10％福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片，HE染色，观察5个不重叠的视野，计算每视野平均毛囊个数。

(4)实验结果

C57BL/6小鼠拔毛后第1～4天内，各组小鼠皮肤颜色呈粉红色，没有毛发生长。第5～6天，各组小鼠皮肤颜色逐渐变为灰色，有细小绒毛长出，第10～11天，各组小鼠背部毛区皮肤呈现正常颜色并可见新长出的毛发；注射环磷酰胺后4～5天后，空白对照组和实验组小鼠头部和背部毛发开始出现脱落。拔毛后第17～18天，正常对照组小鼠新长出的毛发已经覆盖整个脱毛区。

第30天，镜检背部毛囊数如表5所示：

表5

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。