新枞酸类化合物在制备抗菌消炎药物中的应用

摘要

本发明涉及新枞酸类化合物的制备方法及其在制备抗菌消炎药物中的应用，属于天然药物化学领域。新枞酸类化合物在制备抗菌消炎药物中的应用，所述新枞酸类化合物具有如下化学结构式：本发明通过活性导向分离，从云杉属(Picea)植物红皮云杉(P.koraiensis)的枝叶和虫瘿组织的石油醚和乙酸乙酯部位鉴定了一种新枞酸类化合物，经活性筛选具有很强的抗革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌活性，还能抑制白色念珠真菌生长，同时能够抑制T细胞增殖和抑制炎症因子IFN‑γ的产生，从而达到抑制炎症的作用。

说明书

技术领域

本发明涉及新枞酸类化合物的制备方法及其在制备抗菌消炎药物中的应用，属于天然药物化学领域。

背景技术

炎症在人类各种疾病中伴随发生，尤其是细菌和真菌致病导致的炎症对人类健康危害较大。目前已有的抗菌消炎药物主要来源于微生物，如：β-内酰胺类、大环内酯类、多肽类和氨基糖苷类抗生素。这些抗生素虽然活性较好，但对部分人群容易引起过敏反应，同时对人体正常细胞也有一定影响，还会引起耐药性增加等诸多安全问题。植物源活性天然产物更容易被人体降解，对人体正常生命系统危害更小，几乎不会引起人体过敏反应。比如，穿心莲内酯类抗生素穿琥宁(炎琥宁)起源于植物，作为抗菌消炎的重要注射剂，其可靠的安全性使其成为可以与微生物源抗生素媲美的重要药物。我国植物资源非常丰富，且很多植物资源并未深入研究，因此从植物中发现天然药物活性分子是目前的研究热点。

红皮云杉(Picea koraiensis)是松科云杉属常绿乔木，植株树干可高达数十米，分布广泛，易于栽培，因此该植物资源丰富。据《中华本草》描述，红皮云杉枝叶和树皮具有治疗风湿痹病的功效。野外观察发现，该植物的茎易被球蚜属的造瘿昆虫寄生从而形成膨大的虫瘿。虫瘿组织中易富集植物抵抗入侵的活性成分，从中发现的活性物质有利于植物资源的开发与利用。

发明内容

本发明的目的是提供一种新枞酸类化合物及其提取方法，并同时提供这种新枞酸类化合物在制备抗菌消炎药物中的应用。

新枞酸类化合物在制备抗菌消炎药物中的应用，其特征在于：新枞酸类化合物具有如下化学结构式：

上述新枞酸类化合物在抗菌消炎使用过程中可以单独使用，亦可与其他辅料混用。本发明所述含有新枞酸类化合物的制剂以新枞酸类化合物为活性组分，还包括辅料。

本发明所述“抗菌”中所述菌为革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌或真菌白色念珠菌。

进一步地，所述革兰氏阳性细菌为炭疽芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌。

进一步地，所述革兰氏阴性细菌为大肠杆菌。

优选地，所述新枞酸类化合物提取自云杉属植物红皮云杉枝条、叶、虫瘿中的至少一种。

进一步地，所述新枞酸类化合物按下述方法制得：将红皮云杉的枝叶或虫瘿用甲醇提取浓缩后，用乙酸乙酯萃取得到浸膏，或将红皮云杉的枝叶或虫瘿用石油醚提取得到浸膏；将所得浸膏进行若干次分离纯化后，得新枞酸类化合物。

更进一步地，所述分离纯化为：取红皮云杉的石油醚或乙酸乙酯浸膏，以抗菌活性为导向，依次通过硅胶柱色谱、MCI柱色谱及凝胶柱色谱进行分离纯化，得到新枞酸类化合物。

本发明的有益效果为：本发明通过活性导向分离，从云杉属(Picea)植物红皮云杉(P.koraiensis)的枝叶和虫瘿组织的石油醚和乙酸乙酯部位鉴定了一种新枞酸类化合物，经活性筛选具有很强的抗革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌活性，还能抑制白色念珠真菌生长，同时能够抑制T细胞增殖和抑制炎症因子IFN-γ的产生，从而达到抑制炎症的作用。

具体实施方式

下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

下述实施例中所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

下述实施例中所用化合物新枞酸化合物的分离、鉴定和活性筛选

1、红皮云杉虫瘿组织中新枞酸类化合物的分离纯化和鉴定

将红皮云杉虫瘿新鲜样品(20Kg)粉碎，室温下利用甲醇进行浸提24h，提取3次，提取液合并用旋转蒸发仪浓缩，浓缩后得到甲醇浸膏，将甲醇浸膏用乙酸乙酯萃取3次，浓缩得到乙酸乙酯浸膏358g。用300mL丙酮将其溶解后用硅胶(200-300目)拌样，装柱进行粗分离，用氯仿/丙酮(v/v＝1:0、4:1、3:2、1:1、0:1)进行梯度洗脱，用TLC检测，合并相同馏分，得到5个主要部分(fractions)(Fr.1～5)。其中氯仿/丙酮1:0(v/v)部分(Fr.1)(200 g)加入100 mL丙酮溶剂中重结晶，得到白色结晶(115g)。取1g结晶MCI-gel(85-95％甲醇/水)处理后得4个亚部分；90％甲醇/水(0.7 g)通过反复硅胶柱层析，Sephadex LH-20(丙酮)柱层析得到化合物1(112 mg)。

化合物1具有如下化学结构式：

化合物1新枞酸化合物的

2、新枞酸类化合物的抗细菌活性

采用二倍稀释法测试新枞酸对革兰氏阳性细菌(炭疽芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌)和革兰氏阴性细菌(大肠杆菌)的抑制活性。新枞酸对炭疽芽孢杆菌的抑制活性(IC

3、新枞酸类化合物的抗真菌活性

采用二倍稀释法测试新枞酸对白色念珠菌的抗菌活性。测试结果表明，本发明所述新枞酸化合物对供试菌均具有很强的抑菌活性，抑制中浓度IC

4、新枞酸的抗炎活性

采用酶联免疫的方法检测化合物对CD28单抗刺激T细胞产生IFN-γ的抑制活性。发现新枞酸能够抑制T细胞的增值，IC

5、抗炎药物的制备

新枞酸或以其为基本活性组分的药物组合物可以与药学上合适的辅料或者载体相结合，采取公知的方法制备成为注射剂、胶囊剂、片剂、缓释剂等抗菌消炎药物。

实施例-1新枞酸片剂的制备：

取40mg新枞酸化合物与35mg淀粉，25mg糊精混合，用0.5mL30％乙醇润湿，常规制粒，加入1％的硬脂酸镁混合，压片即得。

实施例-2新枞酸胶囊剂的制备：

取60mg新枞酸化合物与50mg淀粉，10mg糊精，以及10mg葡萄糖粉混合，用0.5mL30％乙醇润湿，常规制粒，装入胶囊中即得。

实施例-3新枞酸钠注射剂的制备：

取100mg新枞酸化合物加入2mL氯仿溶解，加入50μL2moL/L的NaOH，蒸馏去除氯仿等溶剂，得到新枞酸钠粉针，装入安瓿瓶。使用时加入到500mL生理盐水注射液滴流使用。

实施例-4新枞酸甘氨酸钠注射剂的制备：

取100mg新枞酸化合物加入2mL氯仿溶解，加入50mg甘氨酸钠，蒸馏去除氯仿等溶剂，得到新枞酸甘氨酸钠粉针，装入安瓿瓶。使用时加入到500mL生理盐水注射液滴流使用。

以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。