一种外泌体递送CasRx基因沉默的AAV载体及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种外泌体递送CasRx基因沉默的AAV载体：AAV载体中包含CasRx蛋白表达、U6启动子驱动sgRNA表达。一种外泌体递送CasRx基因沉默的AAV载体的构建方法：当从生产细胞的条件培养基中分离AAV载体时，AAV可以与外泌体exoAAV结合，利用外泌体包裹AAV载体可以实现基因载体的高效递送。与现有技术相比，本发明的有益效果是：1.基因敲出效率更高(＞90％)；2.与RNA干扰(shRNA)相比，消除了脱靶效应；3.具有靶向核RNA(包括非编码RNA)的能力；4.操纵拼接，包括纠正错接缺陷和有针对性的外显子跳跃；5.体积小，可实现单载体AAV‑CasRx并在体内引导RNA。