一种用于检测小麦成株期抗白粉病基因PmBMYD的KASP引物及其应用

摘要

本发明涉及一种用于检测小麦成株期抗白粉病基因PmBMYD的KASP引物及其应用。抗白粉病基因PmBMYD的核苷酸序列如SEQ.ID.NO:1所示KASP引物组成：F1如SEQ.ID.NO:3所示；F2如SEQ.ID.NO:4所示；R如SEQ.ID.NO:5所示；特异荧光序列FAM如SEQ.ID.NO:6所示；特异荧光序列HEX如SEQ.ID.NO:7所示。上述KASP引物使用方法如下：以待测小麦的基因组DNA为模板，用所述的KASP引物进行PCR扩增，然后根据检测到的荧光颜色判断样品基因型类型，红色表示基因型为CC，蓝色表示基因型为TT。携有基因型TT的材料抗性显著优于携带基因型CC的材料。上述的KASP引物可在小麦抗白粉病分子辅助育种中进行应用，以缩短抗白粉病材料的育种周期。

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测小麦成株期抗白粉病基因PmBMYD的KASP引物及其应用。

背景技术

小麦白粉病是由禾谷类白粉菌Blumeria graminis f.sp.tritici(Bgt)引起的一种世界性叶部病害，主要发生在气候湿润和凉爽的地区，比如中国、欧洲和南美洲的南锥地区。受到白粉病侵害的麦田可减产5％～62％，此外还严重影响了面粉质量。

第一次绿色革命后，随着小麦植株高度矮化，种植密度加大及水肥条件的改善，为小麦白粉病的发生和传播创造了更为有利的条件，使得发病面积逐步扩大。我国小麦白粉病主要发生地由云南、贵州、四川等湿润的西南地区及山东沿海地区向北方日趋蔓延。1991年小麦白粉病在全国25个省、市和自治区大范围流行，感病面积达1227万公顷，直接造成小麦减产7.7亿公斤。2009至2018近十年小麦白粉病发病面积平均每年约10000万亩。喷洒农药虽是目前防御病害的主要方法，但同时也加速了病原菌生理小种的变异，使问题变的更加复杂。抗病品种的培育和利用一直被认为是最经济、绿色有效的防治方式。

小麦白粉病抗性基因可以分为质量抗病基因(也称苗期抗病基因)和数量抗病基因(也称成株期抗病基因)，质量抗性是针对一个或几个生理小种表现出较高水平且全生育期的抗性，对其他的白粉菌生理小种没有抗性，符合Flor提出的“基因对基因”假说；数量抗性则是对所有白粉菌生理小种表现一定的抗性，抗性水平较低，且只在小麦成株期表现。研究表明培育携有成株期抗病基因或QTL的品种具有更好的抗病性，聚合三个部分抗性基因的小麦品系能达到对白粉病免疫的水平，在实际育种中具有更大的价值。但成株期小麦抗白粉病基因报道很少，目前发表被正式命名的68个小麦抗白粉病(Pm1～Pm68)中只有Pm38、Pm39和Pm46属于成株期抗病基因。因此进一步挖掘成株期白粉病抗性位点及开发其连锁分子标记对于小麦抗白粉病育种实践具有重大意义。

发明内容

本发明提出了一种用于检测小麦成株期抗白粉病基因PmBMYD的KASP引物，所述的KASP引物在小麦抗白粉病分子辅助育种中是可用的。

本发明的技术方案为：

本发明提供的一种用于检测小麦成株期抗白粉病基因PmBMYD的KASP引物，所述抗白粉病基因PmBMYD为核苷酸序列SEQ.ID.NO:1所示的DNA序列，该基因位于小麦染色体小麦3BL上；

所述KASP引物由以下序列组成：F1如SEQ.ID.NO:3所示，F2如SEQ.ID.NO:4所示，R如SEQ.ID.NO:5所示。具体的：

F1：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTTGGAGGGGCTCCGACAAT-3’；

F2：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTTGGAGGGGCTCCGACAAC-3’；

R：5’-TCCACCACCAGTAGCTCCACACCACTCCAG-3’；

特异荧光序列FAM如SEQ.ID.NO:6所示，特异荧光序列HEX如SEQ.ID.NO:7所示，具体的：

特异荧光序列FAM：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’；

特异荧光序列HEX：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’。

进一步的，所述抗白粉病基因PmBMYD表达的蛋白为氨基酸序列SEQ.ID.NO:2所示的蛋白。

本发明还提供了上述的KASP引物对检测小麦成株期抗白粉病基因型的方法，包括如下步骤：

以待测小麦的基因组DNA为模板，用所述的KASP引物进行PCR扩增，然后根据检测到的荧光颜色判断样品基因型类型，红色表示基因型为CC，蓝色表示基因型为TT。携有基因型TT的材料抗性显著优于携带基因型CC的材料。

本发明还提供了鉴定上述小麦成株期抗白粉病基因型的试剂盒，所述试剂盒含有所述KASP引物。

上述的KASP引物可在小麦抗白粉病分子辅助育种中进行应用，以缩短抗白粉病材料的育种周期。

本发明的有益效果为：

本发明实施例在以携有优异抗病等位位点T的抗病材料白蚂蚁蛋和含有感病等位位点C感病材料濮麦9号的两个亲本构建的155株F

附图说明

图1为(a)2017，(b)2018,(c)2019,(d)2020和(e)BLUP值环境中河南省小麦核心种质资源白粉病抗性全基因关联分析的曼哈顿图。横坐标1～7代表1A～7A，8～14代表1B～7B，15～21代表1D～7D。水平虚线表示关联分析结果中显著阈值LOD＝3。PmBMYD(Qpm-3B)是在本申请中发现的新基因。

图2为TraesCS3B01G483700.1和RGA S-L8两基因蛋白序列比对图。

图3为携有优异抗病等位位点T的抗病材料白蚂蚁蛋和含有感病等位位点C感病材料濮麦9号的两个亲本构建的155株F

具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明进行更加详细的说明，以便于对本发明技术方案的理解，但并不用于对本发明保护范围的限制。

术语解释：Kasp标记是根据基因序列中单个碱基的不同来设计的特异性引物，通常是将具有多态性的核苷酸位点设计在引物的3’端、将与通用荧光引物结合后能发出不同颜色的FAM序列标签和HEX序列标签设计在引物5’端，基于ARMPCR原理，用通用的荧光引物进行扩增，根据检测到信号的颜色来判断单个核苷酸的多态性。

一、成株期抗白粉病基因PmBMYD的鉴定

为了快速鉴定一批新的小麦成株期白粉病抗性基因和种质资源，用小麦660K芯片对由371份小麦农家种和267份释放品种组成的637份河南省小麦核心种质(所述637份河南省小麦核心种质均由河南省农业科学院分子育种室提供，公众可从河南省农业科学院分子育种室获得)，进行了基因分型并结合2017至2020四年田间小麦成株期抗白粉病表型数据进行了多位点全基因组关联分析。

表1 637份河南省小麦核心种质明细表

SNP AX-109052670在四年田间环境中被5种关联分析方法共检测到12次，并且在他们的BLUP值环境中也能被重复检测到，将该位点命名为Qpm-3BL，该位点对总表型变异的解释比例为0.00％～12.98％。

对小麦成株期白粉病抗性位点Qpm-3BL所处的染色体区段进行了候选基因的预测。当上述637份河南省小麦核心种质的r

表2 QPm-3BL候选区间内68个注释基因的KEGG分析

二、KASP标记在亲本白蚂蚁蛋与濮麦9号的155个F

在生信网站Triticeae Multi-omics Center(

Forward primer：

F1：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTTGGAGGGGCTCCGACAAT-3’；

Forward primer:

F2：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTTGGAGGGGCTCCGACAAC-3’；

Reverse primer：

R：5’-TCCACCACCAGTAGCTCCACACCACTCCAG-3’；

特异荧光序列FAM为5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’；

特异荧光序列HEX为5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’。

2、反应体系

DNA(50ng/ul),2×KASP Master mix,KASP Assay mix(100uM的Forward primer-F1，Forward primer-F2，Reverse primer-R三种引物和无菌水以12:12:30:46的体积比列混合物)。

反应体系：

3、反应程序

采用上述反应体系和反应程序对亲本白蚂蚁蛋与濮麦9号，以及二者的155个F

表3 KASP标记在亲本白蚂蚁蛋与濮麦9号的155个F

表格中的抗病表型鉴定方法改自于石鹏皋(1987)的五级分类法，根据小麦上面四个小麦叶片发病程度进行评估。免疫：整蘖无病；高抗：旗叶和倒二叶发病程度1％以下，下部叶发病程度5％以下；中抗：旗叶和倒二叶发病程度1～5％，下部两片叶发病程度5～25％；中感：旗叶和倒二叶发病程度5～25％,下部叶片发病程度25～50％；高感：旗叶和倒二叶发病程度25％以上，下部叶片50％以上。分别用数字0、1、2、3和4代换免疫、高抗、中抗、中感和高感用于关联分析。

分型结果分布为含基因型TT的有40个株系，携有TC的69个，CC的46个，分离比符合1:2:1(χ

以上所述之实施例，只是本发明的较佳实施例而已，并非限制本发明的实施范围，故凡依本发明专利范围所述的构造、特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括于本发明申请专利范围内。

SEQUENCE LISTING

<110> 河南省作物分子育种研究院

<120> 一种用于检测小麦成株期抗白粉病基因PmBMYD的KASP引物及其应用

<130> 无

<160> 7

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 3667

<212> DNA

<213> Triticum aestivum

<400> 1

atgagagctg tgtcccccgt gcttgttgat gccaaatcgc taacccgtgg tcaatctttc 60

ctgtcagttg cgcacgctgc tcggccccca acctattctg cttgactgac tgaacagttg 120

ttttgtcacc aggtaatgat tttgattgtg ctcagtttcc ctcaaaaaag ataaaaaatt 180

gattttgact gaatatgcac catgtcagat tagttcattc acagcttgca agtttcccaa 240

cacaactaaa atcgcatgtt gaacaaccaa ctaccttccc agaaaccaca taccatgtaa 300

ttagcactct ccttgtataa ttattagtac cctctccttc gaagaagcac acttctagca 360

tttttctgac ctgtataaca actgcaacta ttttgttcca taataagcat tagagttgca 420

tagttgatac aactatattc aagtcaagag tgtcaagtca tgcaaacgtg cgtgtagtac 480

tatgtattaa catgtcttaa atctttcctt ccttcatgct acggtttatc aggcccatga 540

gcaaaactct atatctcttt tcttatcacg gaccctgtta gtacttttgt ctgattatct 600

cagtgtcagt ctgtcagacg acaaaaagtg ttgattatac atatttatct agtactggta 660

gtacattgac accaggtatc ttctcccatg atacattaat aaaaaaaatt cttaaatatc 720

aacagagcta ctcgttccat ccatgcacga aaccagtgga gtaatgtcaa caaacctata 780

aattttcagt tcgaaaacta gtggaagtaa aacaaccatt ggagaaagtt tctctctgtt 840

catacaagct aagctaactc tcgacttaat tttcttggat gaaattggtt attgccccat 900

ttaacatatt gatctatatt tattttgttc aggacaaatg gcggaggcgg tgctcgttgc 960

tctcggaaag attgggaatg tcttagctga tgaagctacc aaggctttgc tggccaagct 1020

gtcagaaaaa gttagtaatc tgattgatct ggatgacaag attgagggaa tagcgaagca 1080

attaaataca atgaagaacg tcatacagca gataggcacg ccgtacctag ccgacaaagt 1140

cgtaaagggt tggattgggg aggtgaggaa gttggcctac catgttgagg atgtgatgga 1200

caaatactca tatcactctc ttcatgtgga aaaagggttt ctgaagaagt gcctcaaagg 1260

atcacattat gtccgggttt ttagtcaaat tgccgatgag gtagtcaaga tagagaagga 1320

gataaagcaa gttatcggac tcaaggagca atggctgcaa ccatcccagc ttgttcatga 1380

cccgtgcact gagatggaaa gacaacggtc ccaagatatc ttccctgaac ttgtgaaaga 1440

tgaagatctt attggaattg aagataacag gagaatgatg actgaatggt tgtactcgga 1500

tgagatggag actacggtga taacggtgtc gggtatgggt gggttgggaa aaacaaccct 1560

cgtcacaaat gtgtatgaac gtgaaaagat caacttccaa acaagtgcgt ggatggttgt 1620

gtctcagacc tacagtttgg atgctctgtt gaggaagtta ctcgagaagg ttaccgaaca 1680

accatcatca cctaacattg acaggatgga tgtgcatgac ttgaaggaag aaataaagcg 1740

aaagcttaaa gataggaaat gtttaattgt attggatgat gtctggaaca aggaagtgta 1800

ctctcaaatg cgagatgcat tccagaattc tcatgcaagt cgcatcatca tcacaacgcg 1860

gaacaatcat gttgctgctg ttgctcactt gacacgccgt atcgttctca agcctttggg 1920

gaatgctcac gcattcgaac tcttctgcag gagggtcttt tatatcaaga aggaccatga 1980

gtatgagtgt cccaatcatc tcatgaaaac tgctaggtct atagttgata gatgtcaggg 2040

tctgccacta gcaattttat caataggtgg tgttttgtct tcgaggccac aaacacaata 2100

ctcttgggag cagatataca atcaactctc aactgagctg tcgaagaatg atcatctccg 2160

ggcagtttta aatctgagct accatgacct atctggagac ctcagaaact gccttttgta 2220

ttgcagcctt ttcccggaag actacccgat gtcacgtgag agccttgtga ggctgtgggt 2280

tgcagaaggc tttgtgtgta gcaaaggaaa tagcaccccg gaggaggtgg ccgagggaaa 2340

cctgacggaa ctgatatacc gcaatatgct tgaagtcaag gagacagatg aactgggaag 2400

ggtgagcacc tgtacgatgc atgatattgt gcgagacctg gctctttgtg ttgcaagcga 2460

ggagcagttt gtatgtgcaa atgattatgc cacattgata catatgaata aggatgttcg 2520

tcgtctgtca tcatgtggat ggaaaggcaa tactgcactg aaaattaagc ttccccgtct 2580

tcgaactcta gtgtcagtag gagcaatttc atccatgcct gccatgccgt tctcagtttc 2640

gtcagaatcc agctacctga ctgtcctcga gctacaagac tctgaaatca ctgaagtgcc 2700

ggcatggata ggtacactct tcaatttaca ttacattggc ttacgccgca ccaaggtgag 2760

gtcactccca gactctgttg agaaactatc gaacctgcaa actctggaca tcaagcaaac 2820

taacatagag accctaccaa gagggattgc taagatcaag aatctacggc acctcttagc 2880

tgatagatat gctgatgaga agcagacgga gtttcgatac tttgtcggaa ttcaagcacc 2940

gaaagaactg cccaacattg aagggctgca gactcttgag accatccaag ccaacaaaga 3000

cttggctgag cagctggaga gaatggtgca attgcgaact ctgtggattg acaacataag 3060

ttctgctgaa tgcgcaacta tttttgctgc cctgtcaaat atgccgcttc tttccagtct 3120

gcttcttgct ggaagagatg agaacgaggc actttgtttc gagtccctcc agccaatgtc 3180

cacacatctc cacaagctga tcatcagagg gaaatgggcc aagggaacgc tggagtgccc 3240

gatattccgc agccacggag aaaatctcaa gtatctagct ctaagctggt gtcacctttg 3300

ggaagacgag gatccactgg ggatgcttgc accacacttg ccaaacctca catatctgcg 3360

gctcaacaac atgcgcagtg caaacatttt ggttctttct gcagattcct tccctcacct 3420

gaagagcctt acactgaagc acatgcataa tgtcaacgag ctaaagatca tcgatggcgc 3480

ccttccgagc atcgaaggtt tgtatgtcgt gtcattgtcg aagctggata aggtccctca 3540

aggcattgaa tcccttagtt ccctgaagaa gctctggctg ctgggcttgc acgggggctt 3600

caaagctcag tgggacaaga acggaatgca gcagaagatg gtgcatgttc aggagcttcg 3660

tgtctga 3667

<210> 2

<211> 926

<212> PRT

<213> Triticum aestivum

<400> 2

Met Arg Ala Val Ser Pro Val Leu Val Asp Ala Lys Ser Leu Thr Arg

1 5 10 15

Gln Met Ala Glu Ala Val Leu Val Ala Leu Gly Lys Ile Gly Asn Val

20 25 30

Leu Ala Asp Glu Ala Thr Lys Ala Leu Leu Ala Lys Leu Ser Glu Lys

35 40 45

Val Ser Asn Leu Ile Asp Leu Asp Asp Lys Ile Glu Gly Ile Ala Lys

50 55 60

Gln Leu Asn Thr Met Lys Asn Val Ile Gln Gln Ile Gly Thr Pro Tyr

65 70 75 80

Leu Ala Asp Lys Val Val Lys Gly Trp Ile Gly Glu Val Arg Lys Leu

85 90 95

Ala Tyr His Val Glu Asp Val Met Asp Lys Tyr Ser Tyr His Ser Leu

100 105 110

His Val Glu Lys Gly Phe Leu Lys Lys Cys Leu Lys Gly Ser His Tyr

115 120 125

Val Arg Val Phe Ser Gln Ile Ala Asp Glu Val Val Lys Ile Glu Lys

130 135 140

Glu Ile Lys Gln Val Ile Gly Leu Lys Glu Gln Trp Leu Gln Pro Ser

145 150 155 160

Gln Leu Val His Asp Pro Cys Thr Glu Met Glu Arg Gln Arg Ser Gln

165 170 175

Asp Ile Phe Pro Glu Leu Val Lys Asp Glu Asp Leu Ile Gly Ile Glu

180 185 190

Asp Asn Arg Arg Met Met Thr Glu Trp Leu Tyr Ser Asp Glu Met Glu

195 200 205

Thr Thr Val Ile Thr Val Ser Gly Met Gly Gly Leu Gly Lys Thr Thr

210 215 220

Leu Val Thr Asn Val Tyr Glu Arg Glu Lys Ile Asn Phe Gln Thr Ser

225 230 235 240

Ala Trp Met Val Val Ser Gln Thr Tyr Ser Leu Asp Ala Leu Leu Arg

245 250 255

Lys Leu Leu Glu Lys Val Thr Glu Gln Pro Ser Ser Pro Asn Ile Asp

260 265 270

Arg Met Asp Val His Asp Leu Lys Glu Glu Ile Lys Arg Lys Leu Lys

275 280 285

Asp Arg Lys Cys Leu Ile Val Leu Asp Asp Val Trp Asn Lys Glu Val

290 295 300

Tyr Ser Gln Met Arg Asp Ala Phe Gln Asn Ser His Ala Ser Arg Ile

305 310 315 320

Ile Ile Thr Thr Arg Asn Asn His Val Ala Ala Val Ala His Leu Thr

325 330 335

Arg Arg Ile Val Leu Lys Pro Leu Gly Asn Ala His Ala Phe Glu Leu

340 345 350

Phe Cys Arg Arg Val Phe Tyr Ile Lys Lys Asp His Glu Tyr Glu Cys

355 360 365

Pro Asn His Leu Met Lys Thr Ala Arg Ser Ile Val Asp Arg Cys Gln

370 375 380

Gly Leu Pro Leu Ala Ile Leu Ser Ile Gly Gly Val Leu Ser Ser Arg

385 390 395 400

Pro Gln Thr Gln Tyr Ser Trp Glu Gln Ile Tyr Asn Gln Leu Ser Thr

405 410 415

Glu Leu Ser Lys Asn Asp His Leu Arg Ala Val Leu Asn Leu Ser Tyr

420 425 430

His Asp Leu Ser Gly Asp Leu Arg Asn Cys Leu Leu Tyr Cys Ser Leu

435 440 445

Phe Pro Glu Asp Tyr Pro Met Ser Arg Glu Ser Leu Val Arg Leu Trp

450 455 460

Val Ala Glu Gly Phe Val Cys Ser Lys Gly Asn Ser Thr Pro Glu Glu

465 470 475 480

Val Ala Glu Gly Asn Leu Thr Glu Leu Ile Tyr Arg Asn Met Leu Glu

485 490 495

Val Lys Glu Thr Asp Glu Leu Gly Arg Val Ser Thr Cys Thr Met His

500 505 510

Asp Ile Val Arg Asp Leu Ala Leu Cys Val Ala Ser Glu Glu Gln Phe

515 520 525

Val Cys Ala Asn Asp Tyr Ala Thr Leu Ile His Met Asn Lys Asp Val

530 535 540

Arg Arg Leu Ser Ser Cys Gly Trp Lys Gly Asn Thr Ala Leu Lys Ile

545 550 555 560

Lys Leu Pro Arg Leu Arg Thr Leu Val Ser Val Gly Ala Ile Ser Ser

565 570 575

Met Pro Ala Met Pro Phe Ser Val Ser Ser Glu Ser Ser Tyr Leu Thr

580 585 590

Val Leu Glu Leu Gln Asp Ser Glu Ile Thr Glu Val Pro Ala Trp Ile

595 600 605

Gly Thr Leu Phe Asn Leu His Tyr Ile Gly Leu Arg Arg Thr Lys Val

610 615 620

Arg Ser Leu Pro Asp Ser Val Glu Lys Leu Ser Asn Leu Gln Thr Leu

625 630 635 640

Asp Ile Lys Gln Thr Asn Ile Glu Thr Leu Pro Arg Gly Ile Ala Lys

645 650 655

Ile Lys Asn Leu Arg His Leu Leu Ala Asp Arg Tyr Ala Asp Glu Lys

660 665 670

Gln Thr Glu Phe Arg Tyr Phe Val Gly Ile Gln Ala Pro Lys Glu Leu

675 680 685

Pro Asn Ile Glu Gly Leu Gln Thr Leu Glu Thr Ile Gln Ala Asn Lys

690 695 700

Asp Leu Ala Glu Gln Leu Glu Arg Met Val Gln Leu Arg Thr Leu Trp

705 710 715 720

Ile Asp Asn Ile Ser Ser Ala Glu Cys Ala Thr Ile Phe Ala Ala Leu

725 730 735

Ser Asn Met Pro Leu Leu Ser Ser Leu Leu Leu Ala Gly Arg Asp Glu

740 745 750

Asn Glu Ala Leu Cys Phe Glu Ser Leu Gln Pro Met Ser Thr His Leu

755 760 765

His Lys Leu Ile Ile Arg Gly Lys Trp Ala Lys Gly Thr Leu Glu Cys

770 775 780

Pro Ile Phe Arg Ser His Gly Glu Asn Leu Lys Tyr Leu Ala Leu Ser

785 790 795 800

Trp Cys His Leu Trp Glu Asp Glu Asp Pro Leu Gly Met Leu Ala Pro

805 810 815

His Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Leu Arg Leu Asn Asn Met Arg Ser Ala

820 825 830

Asn Ile Leu Val Leu Ser Ala Asp Ser Phe Pro His Leu Lys Ser Leu

835 840 845

Thr Leu Lys His Met His Asn Val Asn Glu Leu Lys Ile Ile Asp Gly

850 855 860

Ala Leu Pro Ser Ile Glu Gly Leu Tyr Val Val Ser Leu Ser Lys Leu

865 870 875 880

Asp Lys Val Pro Gln Gly Ile Glu Ser Leu Ser Ser Leu Lys Lys Leu

885 890 895

Trp Leu Leu Gly Leu His Gly Gly Phe Lys Ala Gln Trp Asp Lys Asn

900 905 910

Gly Met Gln Gln Lys Met Val His Val Gln Glu Leu Arg Val

915 920 925

<210> 3

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 3

gaaggtgacc aagttcatgc tttggagggg ctccgacaat 40

<210> 4

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Seuqence）

<400> 4

gaaggtcgga gtcaacggat tttggagggg ctccgacaac 40

<210> 5

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 5

tccaccacca gtagctccac accactccag 30

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 6

gaaggtgacc aagttcatgc t 21

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 7

gaaggtcgga gtcaacggat t 21