单链嵌合多肽和多链嵌合多肽以及其用途

摘要

本公开涉及生物技术领域，更具体地，涉及具有位于两个靶标结合结构域之间的接头结构域的单链嵌合多肽和多链嵌合多肽，其可以用于多种应用，包括但不限于刺激免疫细胞、诱导或增加免疫细胞的增殖、诱导免疫细胞的分化或治疗有需要的受试者(例如患有癌症或与老化相关的疾病或病况的受试者)。

说明书

本申请要求以下申请的优先权：2019年3月11日提交的美国专利申请第62/816,683号；2018年8月30日提交的美国专利申请第62/725,038号；2019年3月12日提交的美国专利申请第62/817,244号；2019年7月31日提交的美国专利申请第62/881,039号；2018年8月30日提交的美国专利申请第62/724,969号；2019年3月12日提交的美国专利申请第62/817,230号；2018年8月30日提交的美国专利申请第62/725,043号；2018年8月30日提交的美国专利申请第62/725,010号；2018年10月22日提交的美国专利申请第62/749,007号；2018年10月17日提交的美国专利申请第62/746,832号；2018年10月23日提交的美国专利申请第62/749,506号；2019年3月12日提交的美国专利申请第62/817,241号；和2019年7月31日提交的美国专利申请第62/881,088号，其中的每一个在此以全文引用的方式并入。

技术领域

本公开涉及生物技术领域，更具体地，涉及具有位于两个靶标结合结构域之间的接头结构域的单链嵌合多肽和多链嵌合多肽，其适用于各种应用。

背景技术

过继免疫疗法或细胞疗法需要体内培养从受试者获得的免疫细胞(和任选地对免疫细胞进行基因操作以表达嵌合抗原受体或T细胞受体)，之后给予回所述受试者体内。需要足够数目的免疫细胞以便在受试者中提供治疗作用。在许多实例中，需要持续三周或三周以上培养从受试者获得的免疫细胞才可获得治疗有效数目的免疫细胞。另外，许多体外培养从受试者获得的免疫细胞的方法需要一层饲养细胞，所述方法需要随后纯化或分离免疫细胞，之后再给予回受试者体内。

发明内容

本发明基于以下发现：具有位于两个靶标结合结构域之间的接头结构域的单链嵌合多肽和多链嵌合多肽可有效刺激免疫细胞、诱导或增加免疫细胞的增殖、诱导免疫细胞的分化或治疗有需要的受试者(例如患有癌症或与老化相关的疾病或病况的受试者)。本发明还基于以下发现：本文描述的多链嵌合多肽通过增加免疫细胞的有氧糖酵解(Warburg效应)、氧化磷酸化及线粒体储备呼吸能力促进其代谢，以支持其分化成效应细胞并增强其效应细胞功能。

在一些方面，本文提供了促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法，其包括使自然杀手细胞或T细胞在允许自然杀手细胞或T细胞激活和增殖的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各独立地选自以下组成的组：可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体以及共刺激分子的配体。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和接头结构域彼此直接邻接。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括第一靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。在一些实施例中，接头结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括接头结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括第一靶标结合结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。在一些实施例中，第二靶标结合结构域和接头结构域彼此直接邻接。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括第二靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在一些实施例中，抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD52、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、D26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。在一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。在一些实施例中，可溶性白介素或细胞因子受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是共刺激分子的配体。在一些实施例中，共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，接头结构域是可溶性组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包括以下中的一个或多个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包括以下中的任一个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域不能结合因子VIIa。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。在一些实施例中，多单链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。在一些实施例中，接头结构域选自以下组成的组：κ链和λ链。在一些实施例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。在一些实施例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。在一些实施例中，单链嵌合多肽还在其N端和/或C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在一些实施例中，单链嵌合多肽在其N端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在一些实施例中，一个或多个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。在一些实施例中，单链嵌合多肽在其C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在一些实施例中，一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。在一些实施例中，单链嵌合多肽在其N端和C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在一些实施例中，在N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括在N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。在一些实施例中，在C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括在C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包含相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在一些实施例中，抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。在一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。在一些实施例中，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域是可溶性白介素或细胞因子受体。在一些实施例中，可溶性白介素或细胞因子受体是可溶性TGF-β受体II(TGFβRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是共刺激分子的配体。在一些实施例中，共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，单链嵌合多肽还在其N端包含信号序列。在一些实施例中，单链嵌合多肽在其N端缺少信号序列。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包含位于单链嵌合多肽的N端或C端的肽标签。在一些实施例中，单链嵌合多肽还在其N端包括信号序列。在一些实施例中，单链嵌合多肽在其N端缺少信号序列。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，接触步骤进行约2小时至约20天的一段时间。在一些实施例中，接触步骤进行约1天至约15天的一段时间。在一些实施例中，液体培养基是无血清液体培养基。在一些实施例中，液体培养基是化学成分确定的液体培养基。在一些实施例中，液体培养基以约0.5:1至约2:1的摩尔比包含单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。在一些实施例中，液体培养基以约0.8:1至约1.2:1的摩尔比包含单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，NK细胞或T细胞是先前从受试者获得的。在一些实施例中，所述方法还包括在接触步骤之前从受试者获得NK细胞或T细胞。在一些实施例中，NK细胞或T细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。在一些实施例中，所述方法还包括在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到NK细胞或T细胞中。在一些实施例中，所述方法还包括在接触步骤之前，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到NK细胞或T细胞中。在一些实施例中，所述方法还包括在接触步骤之后，分离NK细胞或T细胞。在一些实施例中，与在接触步骤之前一种或多种蛋白质的表达水平或分泌相比，在接触步骤之后，NK细胞或T细胞的一种或多种蛋白质的表达水平或分泌增加，所述蛋白质选自以下组成的组：TNF-α、IFN-γ、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素、2B4、CD8、CD11a、CD16、CD25、CD27、CD48、CD49d、CD54、CD56、CD58、CD62L、CD69、CD70、CD94、CD137、CD158a、CD158b、CD158e、CD178、CD226、CD253、NKG2A、NKG2C、NKG2D、LIR-1、LILR-B1、KIR2DL1、KIR3DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、CXCR3、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM-1、NKG2A、TRAIL、FasL、CXCR3、CXCR4、LTB、MX1、BAX、TNF-α和IFN-γ。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，所述方法还包括在接触步骤之后将NK细胞或T细胞给予有需要的受试者。在一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。在一些实施例中，与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病(Parkinson's disease)、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病(Huntington'sdisease)、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。在一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在一些实施例中，癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewingsarcoma)、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。在一些实施例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在一些实施例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

在一些方面，本文提供通过本文描述的任一种方法产生的激活NK细胞或T细胞，所述方法采用单链嵌合多肽。在一些方面，本文提供包括这种激活NK细胞或T细胞的药物组合物。在一些方面，本文提供包括这种药物组合物的试剂盒。在一些方面，本文提供杀死有需要的受试者的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任一种方法产生的激活NK细胞或激活T细胞或包括这种NK细胞或T细胞的药物组合物给予受试者，所述产生方法采用单链嵌合多肽。在一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在一些实施例中，癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。在一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在一些实施例中，与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在一些实施例中，杀死有需要的受试者的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法包括将治疗有效量的通过本文描述的任一种方法产生的激活NK细胞或激活T细胞或包括这种激活NK细胞或T细胞的药物组合物给予受试者，所述产生方法采用单链嵌合多肽。在一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在一些实施例中，癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。在一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在一些实施例中，与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。在一些实施例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在一些实施例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

在一些方面，本文提供试剂盒，其包括：(i)包括第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下组成的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素或细胞因子受体以及共刺激分子的配体；以及(ii)包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和接头结构域彼此直接邻接。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包含第一靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。在一些实施例中，接头结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括接头结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括第一靶标结合结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。在一些实施例中，第二靶标结合结构域和接头结构域彼此直接邻接。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括第二靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在一些实施例中，抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

在包括单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。在一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。在一些实施例中，可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是共刺激分子的配体。在一些实施例中，共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

在包括单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，接头结构域是可溶性组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包括与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包括与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包括与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包括以下中的一个或多个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包括以下中的任一个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域不能结合因子VIIa。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。在一些实施例中，单链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

在包括单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。在一些实施例中，接头结构域选自以下组成的组：κ链和λ链。在一些实施例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。在一些实施例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

在包括单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，单链嵌合多肽还在其N端和/或C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在一些实施例中，单链嵌合多肽在其N端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在一些实施例中，一个或多个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。在一些实施例中，单链嵌合多肽在其C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在一些实施例中，一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。在一些实施例中，单链嵌合多肽在其N端和C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在一些实施例中，在N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括在N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。在一些实施例中，在C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括在C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

在包括单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包括相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在包括单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。在一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。在一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是共刺激分子的配体。在一些实施例中，共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。在一些实施例中，单链嵌合多肽还包括位于单链嵌合多肽的N端或C端的肽标签。在一些实施例中，单链嵌合多肽还在其N端包括信号序列。在一些实施例中，单链嵌合多肽在其N端缺少信号序列。

在一些方面，本文提供促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法，其包括使自然杀手细胞或T细胞在允许自然杀手细胞或T细胞激活和增殖的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括：(1)有效量的多链嵌合多肽，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；以及(2)有效量的IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和接头结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。在一些实施例中，接头结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括第一嵌合多肽中的接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在一些实施例中，第二嵌合多肽还包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括第一嵌合多肽和第二嵌合多肽以及IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到一个嵌合多肽中的接头结构域的抗原结合结构域，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。在一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。在一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是共刺激分子的配体。在一些实施例中，共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括第一嵌合多肽和第二嵌合多肽以及IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到一个嵌合多肽中的接头结构域的抗原结合结构域，第一嵌合多肽还包括一个或多个其它靶标结合结构域，其中一个或多个靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与所述一对亲和结构域中的第一结构域之间。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在接头结构域与一个或多个靶标抗原结合结构域中的至少一个之间的接头序列，和/或在一个或多个靶标抗原结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端和/或C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第一靶标结合结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第一靶标结合结构域之间的接头序列。在一些实施例中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于第一嵌合多肽中的接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接接头结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括如下安置的接头序列：(i)在接头结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的所述至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间，和/或(ii)在一对亲和结构域中的第一结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的所述至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括第一嵌合多肽和第二嵌合多肽以及IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到一个嵌合多肽中的接头结构域的抗原结合结构域，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端和/或C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第二结构域。在一些实施例中，第二嵌合多肽还包括第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第二结构域之间的接头序列。在一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第二靶标结合结构域。在一些实施例中，第二嵌合多肽还包括第二嵌合多肽中一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括第一嵌合多肽和第二嵌合多肽以及IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到一个嵌合多肽中的接头结构域的抗原结合结构域，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包括相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包含相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括第一嵌合多肽和第二嵌合多肽以及IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到一个嵌合多肽中的接头结构域的抗原结合结构域，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD3的受体以及CD28的受体。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。在一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。在一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。在一些实施例中，第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的某一个或两个是共刺激分子的配体。在一些实施例中，共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。在一些实施例中，第一嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。在一些实施例中，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括第一嵌合多肽和第二嵌合多肽以及IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到一个嵌合多肽中的接头结构域的抗原结合结构域，接头结构域为可溶性组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包括与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包括与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包括与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包括以下中的一个或多个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包括以下中的任一个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域不能结合到因子VIIa。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。在一些实施例中，多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括第一嵌合多肽和第二嵌合多肽以及IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到一个嵌合多肽中的接头结构域的抗原结合结构域，IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。在一些实施例中，接头结构域选自以下组成的组：κ链和λ链。在一些实施例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。在一些实施例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括第一嵌合多肽和第二嵌合多肽以及IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到一个嵌合多肽中的接头结构域的抗原结合结构域，所述一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域(sushi domain)和可溶性IL-15。在一些实施例中，可溶性IL15具有D8N或D8A氨基酸取代。在一些实施例中，人IL15Rα是成熟全长IL15Rα。在一些实施例中，所述一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶(barnase)和芽胞杆菌RNA酶抑制子(barnstar)、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。在一些实施例中，第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽还在其N端包括信号序列。在一些实施例中，第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽在其N端缺少信号序列。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括第一嵌合多肽和第二嵌合多肽以及IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到一个嵌合多肽中的接头结构域的抗原结合结构域，接触步骤进行约2小时至约20天的一段时间。在一些实施例中，接触步骤进行约1天至约15天的一段时间。在一些实施例中，液体培养基是无血清液体培养基。在一些实施例中，液体培养基是化学成分确定的液体培养基。在一些实施例中，液体培养基以约0.5:1至约2:1的摩尔比包含多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。在一些实施例中，液体培养基以约0.8:1至约1.2:1的摩尔比包含多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。在一些实施例中，NK细胞或T细胞是先前从受试者获得的。在一些实施例中，所述方法还包括在接触步骤之前从受试者获得NK细胞或T细胞。在一些实施例中，NK细胞或T细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。在一些实施例中，所述方法还包括在所述接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到NK细胞或T细胞中。在一些实施例中，所述方法还包括在接触步骤之前，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到NK细胞或T细胞中。在一些实施例中，所述方法还包括在接触步骤之后，分离NK细胞或T细胞。在一些实施例中，与在接触步骤之前一种或多种蛋白质的表达水平或分泌相比，在接触步骤之后，NK细胞或T细胞的一种或多种蛋白质的表达水平或分泌增加，所述蛋白质选自以下组成的组：TNF-α、IFN-γ、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素、2B4、CD8、CD11a、CD16、CD25、CD27、CD48、CD49d、CD54、CD56、CD58、CD62L、CD69、CD70、CD94、CD137、CD158a、CD158b、CD158e、CD178、CD226、CD253、NKG2A、NKG2C、NKG2D、LIR-1、LILR-B1、KIR2DL1、KIR3DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、CXCR3、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM-1、NKG2A、TRAIL、FasL、CXCR3、CXCR4、LTB、MX1、BAX、TNF-α和IFN-γ。在一些实施例中，所述方法还包括在接触步骤之后将NK细胞或T细胞给予有需要的受试者。

在促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法的一些实施例中，所述方法包括使自然杀手细胞或T细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括第一嵌合多肽和第二嵌合多肽以及IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到一个嵌合多肽中的接头结构域的抗原结合结构域，受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。在一些实施例中，与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。在一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在一些实施例中，癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。在一些实施例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在一些实施例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

在一些方面，本文提供通过本文描述的任一种方法产生的激活NK细胞或T细胞，所述方法采用多链嵌合多肽。在一些方面，本文提供包括这种激活NK细胞或T细胞的药物组合物。在一些方面，本文提供包括这种药物组合物的试剂盒。在一些方面，本文提供杀死有需要的受试者的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任一种方法产生的激活NK细胞或激活T细胞或包括这种NK细胞或T细胞的药物组合物给予受试者，所述产生方法采用多链嵌合多肽。在一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在一些实施例中，癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。在一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在一些实施例中，与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在一些实施例中，杀死有需要的受试者的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法包括将治疗有效量的通过本文描述的任一种方法产生的激活NK细胞或激活T细胞或包括这种激活NK细胞或T细胞的药物组合物给予受试者，所述产生方法采用多链嵌合多肽。在一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在一些实施例中，癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。在一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在一些实施例中，与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。在一些实施例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在一些实施例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

在一些方面，本文提供试剂盒，其包括：1)多链嵌合多肽，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；且以及(2)有效量的IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和接头结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。在一些实施例中，接头结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括第一嵌合多肽中的接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在一些实施例中，第二嵌合多肽还包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在包括多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。在一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。在一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是共刺激分子的配体。在一些实施例中，共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

在包括多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括一个或多个其它靶标结合结构域，其中一个或多个靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在接头结构域与一个或多个靶标抗原结合结构域中的至少一个之间的接头序列，和/或在一个或多个靶标抗原结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端和/或C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第一靶标结合结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第一靶标结合结构域之间的接头序列。在一些实施例中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于第一嵌合多肽中的接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接接头结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽还包括如下安置的接头序列：(i)在接头结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的所述至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间，和/或(ii)在一对亲和结构域中的第一结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的所述至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

在包括多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第二结构域。在一些实施例中，第二嵌合多肽还包括第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第二结构域之间的接头序列。在一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第二靶标结合结构域。在一些实施例中，第二嵌合多肽还包括第二嵌合多肽中一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

在包括多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的某两个或更多个包括相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包括相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv。

在包括多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16-结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD3的受体以及CD28的受体。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。在一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面受体选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。在一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGFβRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是共刺激分子的配体。在一些实施例中，共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

在包括多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，接头结构域是可溶性组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包括与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包括与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包括与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包括以下中的一个或多个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包括以下中的任一个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域不能结合到因子VIIa。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。在一些实施例中，多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

在包括多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。在一些实施例中，接头结构域选自以下组成的组：κ链和λ链。在一些实施例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。在一些实施例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

在包括多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体的试剂盒的一些实施例中，一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。在一些实施例中，可溶性IL15具有D8N或D8A氨基酸取代。在一些实施例中，人IL15Rα是成熟全长IL15Rα。在一些实施例中，所述一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶(barnase)和芽胞杆菌RNA酶抑制子(barnstar)、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。在一些实施例中，第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽还在其N端包括信号序列。在一些实施例中，第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽在其N端缺少信号序列。在一些实施例中，第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽还在其N端包括信号序列。在一些实施例中，第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽在其N端缺少信号序列。

本文还提供增加免疫细胞的葡萄糖消耗的方法，其包括：使免疫细胞在允许免疫细胞的葡萄糖消耗的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括有效量的(i)包括第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，及任选的(ii)包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下的组：可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体以及共刺激分子的配体。

本文还提供增加免疫细胞的氧化磷酸化的方法，其包括：使免疫细胞在允许免疫细胞的氧化磷酸化的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括有效量的(i)包括第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，及任选的(ii)包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下的组：可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体以及共刺激分子的配体。

本文还提供增加免疫细胞的有氧糖酵解的方法，其包括：使免疫细胞在允许免疫细胞的有氧糖酵解的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括有效量的(i)包括第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，及任选的(ii)包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下的组：可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体以及共刺激分子的配体。

本文还提供增加免疫细胞的细胞外酸化率(ECAR)的方法，其包括：使免疫细胞在允许免疫细胞的细胞外酸化的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括有效量的(i)包括第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，及任选的(ii)包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下的组：可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体以及共刺激分子的配体。

本文还提供增加免疫细胞的线粒体耗氧率的方法，其包括：使免疫细胞在允许免疫细胞的线粒体耗氧率的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括有效量的(i)包括第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，及任选的(ii)包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下的组：可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体以及共刺激分子的配体。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基包括单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，接触步骤进行约2小时至约20天(例如约1天至约15天)的一段时间。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基是无血清液体培养基。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基是化学成分确定的液体培养基。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基包括血清。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基以约0.5:1至约2:1(例如约0.8:1至约1.2:1)的摩尔比包括单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和接头结构域彼此直接邻接。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽还包含第一靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，接头结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括接头结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括第一靶标结合结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第二靶标结合结构域和接头结构域彼此直接邻接。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括第二靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个结合到选自以下的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD52、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，接头结构域是可溶性组织因子结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包含与SEQID NO:1至少80％相同、至少90％相同或至少95％相同的序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包括以下中的一个或多个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包括以下中的任一个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子结构域不能够结合因子VIIa。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，接头结构域选自以下的组：κ链和λ链。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽还在N端和/或C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽在其N端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，一个或多个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽在其C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽在其N端和C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，在N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括在N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，在C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括在C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包括相同的氨基酸序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包括相同的氨基酸序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、a UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是共刺激分子的配体。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括位于单链嵌合多肽的N端或C端的肽标签。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞是先前从受试者获得的。本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之前将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之后分离免疫细胞。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，与在接触步骤之前一种或多种蛋白质的表达水平或分泌相比，在接触步骤之后，免疫细胞的一种或多种蛋白质的表达水平或分泌增加，所述蛋白质选自以下的组：TNF-α、IFN-γ、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素、2B4、CD8、CD11a、CD16、CD25、CD27、CD48、CD49d、CD54、CD56、CD58、CD62L、CD69、CD70、CD94、CD137、CD158a、CD158b、CD158e、CD178、CD226、CD253、NKG2A、NKG2C、NKG2D、LIR-1、LILR-B1、KIR2DL1、KIR3DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、CXCR3、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM-1、NKG2A、TRAIL、FasL、CXCR3、CXCR4、LTB、MX1、BAX、TNF-α和IFN-γ。将免疫细胞给予有需要的受试者。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，与年龄相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有癌症。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有感染性疾病。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

本文还提供通过本文描述的任一种方法产生的激活免疫细胞。本文还提供药物组合物，其包括通过本文描述的任一种方法产生的任一种激活免疫细胞。本文还提供试剂盒，其包括药物组合物，所述药物组合物包括通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞。

本文还提供杀死有需要的受试者的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有癌症。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

本文还提供治疗有需要的受试者的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有癌症。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有感染性疾病。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

本文还提供增加免疫细胞的葡萄糖消耗的方法，其包括：使免疫细胞在允许免疫细胞的葡萄糖消耗的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括(1)有效量的多链嵌合多肽，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；以及(2)有效量的IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

本文还提供增加免疫细胞的氧化磷酸化的方法，其包括：使免疫细胞在允许免疫细胞的氧化磷酸化的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括(1)有效量的多链嵌合多肽，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域第结合而缔合；以及(2)有效量的IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

本文还提供增加免疫细胞的有氧糖酵解的方法，其包括：使免疫细胞在允许免疫细胞的有氧糖酵解的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括(1)有效量的多链嵌合多肽，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；以及(2)有效量的IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

本文还提供增加免疫细胞的细胞外酸化率(ECAR)的方法，其包括：使免疫细胞在允许免疫细胞的细胞外酸化的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括(1)有效量的多链嵌合多肽，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域第结合而缔合；以及(2)有效量的IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

本文还提供增加免疫细胞的线粒体耗氧率的方法，其包括：使免疫细胞在允许免疫细胞的线粒体耗氧率的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括(1)有效量的多链嵌合多肽，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；以及(2)有效量的IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基包括单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，接触步骤进行约2小时至约20天(例如约1天至约15天)的一段时间。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基是无血清液体培养基。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基是化学成分确定的液体培养基。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基包括血清。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基以约0.5:1至约2:1(例如约0.8:1至约1.2:1)的摩尔比包括单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和接头结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，接头结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个特异性结合到选自以下的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、a UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括一个或多个其它靶标结合结构域，其中一个或多个靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在接头结构域与一个或多个靶标抗原结合结构域中的至少一个之间的接头序列，和/或在一个或多个靶标抗原结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第一结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第一靶标结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第一靶标结合结构域之间的接头序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于第一嵌合多肽中的接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接接头结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括如下安置的接头序列：(i)在接头结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的所述至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间，和/或(ii)在一对亲和结构域中的第一结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的所述至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端和/或C端包括一个或多个其它靶标结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第二结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第二结构域之间的接头序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第二靶标结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包括相同的氨基酸序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包括相同的氨基酸序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，抗原结合结构域包含scFv。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、a UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD3的受体以及CD28的受体。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端或C端包括肽标签。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包括肽标签。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，接头结构域是可溶性组织因子结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包括与SEQID NO:1至少80％相同、至少90％相同或至少95％相同的序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包括以下中的一个或多个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包括以下中的任一个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子结构域不能够结合到因子VIIa。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，接头结构域选自以下的组：κ链和λ链。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，可溶性IL15具有D8N或D8A氨基酸取代。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，人IL15Rα是成熟全长IL15Rα。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽还在其N端包括信号序列。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽在其N端缺少信号序列。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞是先前从受试者获得的。本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之前将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之后分离免疫细胞。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，与在接触步骤之前一种或多种蛋白质的表达水平或分泌相比，在接触步骤之后，NK细胞或T细胞的一种或多种蛋白质的表达水平或分泌增加，所述蛋白质选自以下的组：TNF-α、IFN-γ、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素、2B4、CD8、CD11a、CD16、CD25、CD27、CD48、CD49d、CD54、CD56、CD58、CD62L、CD69、CD70、CD94、CD137、CD158a、CD158b、CD158e、CD178、CD226、CD253、NKG2A、NKG2C、NKG2D、LIR-1、LILR-B1、KIR2DL1、KIR3DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、CXCR3、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM-1、NKG2A、TRAIL、FasL、CXCR3、CXCR4、LTB、MX1、BAX、TNF-α和IFN-γ。本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将免疫细胞给予有需要的受试者。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有癌症。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有感染性疾病。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

本文还提供使用本文描述的任一种方法获得的激活免疫细胞。还提供药物组合物，其包括通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞。本文还提供试剂盒，其包括本文描述的任一种药物组合物，所述药物组合物包括通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞。

本文还提供杀死有需要的受试者的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，其包括将治疗有效量的使用本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有癌症。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

本文还提供治疗有需要的受试者的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有癌症。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有感染性疾病。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

在本文描述的任一种方法或试剂盒的一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不刺激血液凝固。在本文描述的任一种方法或试剂盒的一些实施例中，可溶性组织因子结构域包含来自野生型可溶性人组织因子的序列(或来自其的任何序列)或由所述序列组成。

本文还提供诱导免疫细胞分化成记忆或记忆样免疫细胞的方法，其包括使免疫细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括：(1)有效量的多链嵌合多肽，所述多链嵌合多肽包含：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；以及(2)有效量的IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

本文还提供诱导免疫细胞分化成记忆或记忆样免疫细胞的方法，其包括使免疫细胞在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括有效量的(i)包括第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，以及(ii)包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞是先前从受试者获得的。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞选自以下＝的组：未成熟胸腺细胞、外周血Treg细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、λδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀手T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀手细胞。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在所述接触步骤之后将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。本文描述的任一种方法的一些实施例还包括将免疫细胞给予有需要的受试者。

如本文所用，术语“嵌合”是指多肽包括最初来源于两个不同来源(例如两种天然存在的不同蛋白质，例如来自相同或不同物种)的氨基酸序列(例如结构域)。举例而言，嵌合多肽可以包括来自至少两种天然存在的不同人蛋白质的结构域。在一些实例中，嵌合多肽可以包括作为合成序列(例如scFv)的结构域和来源于天然存在的蛋白质(例如天然存在的人蛋白质)的结构域。在一些实施例中，嵌合多肽可以包括至少两个不同的作为合成序列(例如两个不同scFv)的结构域。

“抗原结合结构域”是能够特异性结合到一种或多种不同抗原的一个或多个蛋白质结构域(例如，由来自单个多肽的氨基酸形成或由来自两个或更多个多肽(例如，相同或不同的多肽)的氨基酸形成)。在一些实例中，抗原结合结构域可能以与天然存在的抗体相似的特异性和亲和力结合到抗原或表位。在一些实施例中，抗原结合结构域可以是抗体或其片段。在一些实施例中，抗原结合结构域可以包括替代支架。本文描述抗原结合结构域的非限制性实例。抗原结合结构域的其它实例是本领域已知的。

“可溶性组织因子结构域”是指与缺少跨膜结构域和细胞内结构域的野生型哺乳动物组织因子蛋白(例如，野生型人组织因子蛋白)的段具有至少70％同一性(例如，至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性、至少95％同一性、至少99％同一性或100％相同)的多肽。本文描述可溶性组织因子结构域的非限制性实例。

术语“可溶性白介素蛋白”在本文中用于指成熟并且分泌的白介素蛋白或其生物活性片段。在一些实例中，可溶性白介素蛋白可以包括与野生型成熟并且分泌的哺乳动物白介素蛋白(例如，野生型人白介素蛋白)至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同的序列，并且保留其生物活性。本文描述可溶性白介素蛋白的非限制性实例。

术语“可溶性细胞因子蛋白”在本文中用于指成熟并且分泌的细胞因子蛋白或其生物活性片段。在一些实例中，可溶性细胞因子蛋白可以包括与野生型成熟并且分泌的哺乳动物白介素蛋白(例如，野生型人白介素蛋白)至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同的序列，并且保留其生物活性。本文描述可溶性细胞因子蛋白的非限制性实例。

术语“可溶性白介素受体”在本文中以最广泛的意义用于指一种多肽，其缺少能够结合一个或多个其天然配体(例如，在生理条件下，例如在室温下、在磷酸盐缓冲盐水中)的跨膜结构域(和任选的细胞内结构域)。例如，可溶性白介素受体可以包括与野生型白介素受体的细胞外结构域至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列，并且保留其特异性结合到一个或多个其天然配体的能力，但缺少其跨膜结构域(并且任选地，还缺少其细胞内结构域)。本文描述可溶性白介素受体的非限制性实例。

术语“可溶性细胞因子受体”在本文中以最广泛的意义用于指一种多肽，其缺少能够结合一个或多个其天然配体(例如，在生理条件下，例如在室温下、在磷酸盐缓冲盐水中)的跨膜结构域(和任选的细胞内结构域)。例如，可溶性细胞因子受体可以包括与野生型细胞因子受体的细胞外结构域至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列，并且保留其特异性结合到一个或多个其天然配体的能力，但缺少其跨膜结构域(并且任选地，还缺少其细胞内结构域)。本文描述可溶性细胞因子受体的非限制性实例。

术语“共刺激分子的配体”在本文中以最广泛的意义用于指一种多肽，其能够结合并激活免疫细胞上的共刺激受体分子(例如，在生理条件下，例如在室温下、在磷酸盐缓冲盐水中)。例如，共刺激分子的配体可以包括与共刺激分子的配体至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列，其保留其特异性结合到其天然受体中的一个或多个的能力。本文描述共刺激分子的配体的非限制性实例。

术语“抗体”在本文中以最广泛的意义使用并且包括某些类型的免疫球蛋白分子，所述免疫球蛋白分子包括一个或多个特异性结合到抗原或表位的抗原结合结构域。抗体具体包括例如完整抗体(例如，完整免疫球蛋白)、抗体片段和多特异性抗体。抗原结合结构域的一个实例是由VH-VL二聚体形成的抗原结合结构域。本文描述抗体的其它实例。抗体的其它实例是本领域已知的。

“亲和力”是指抗原结合位点与其结合配偶体(例如，抗原或表位)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外说明，否则如本文所用，“亲和力”是指固有结合亲和力，其反映抗原结合结构域与抗原或表位的成员之间的1:1相互作用。分子X与其配偶体Y的亲和力可以通过解离平衡常数(K

如本文所用的“单链多肽”是指单蛋白质链。

术语“一对亲和结构域”是以小于小于1×10

术语“表位”是指特异性结合到抗原结合结构域的抗原的一部分。表位可以例如由表面可接近的氨基酸残基和/或糖侧链组成，并且可以具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象和非构象表位的区别在于，在存在变性溶剂的情况下，与前者的结合而非与后者的结合可能会丢失。表位可以包含直接参与结合的氨基酸残基和不直接参与结合的其它氨基酸残基。鉴别与抗原结合结构域结合的表位的方法是本领域已知的。

“免疫效应细胞”是指哺乳动物的免疫系统的细胞，其能够直接或间接地识别哺乳动物中的病原性细胞(例如，癌细胞)和/或引起所述细胞的细胞停滞或细胞死亡。免疫效应细胞的非限制性实例包括巨噬细胞、自然杀手细胞、T淋巴细胞(例如，细胞毒性T淋巴细胞和T辅助细胞)、嗜中性粒细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞。免疫效应细胞的其它实例是本领域已知的。

术语“治疗”是指改善病症的至少一种症状。在一些实例中，所治疗的病症是癌症，并且改善癌症的至少一种症状包括减少异常增殖、基因表达、信号传导、翻译和/或因子的分泌。一般来说，治疗方法包括将治疗有效量的组合物给予需要或已确定为需要这种治疗的受试者，所述组合物减少病症的至少一种症状。

除非另外定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。本文描述了用于本发明的方法和材料；还可以使用其它在本领域已知的合适的方法和材料。材料、方法和实例仅是说明性的并且不旨在是限制性的。本文所提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其它参考文献通过全文引用的方式并入。在发生冲突的情况下，应以本说明书(包含定义)为准。

本发明的其它特征和优点将通过以下详细描述和附图以及通过权利要求书变得显而易见。

附图说明

图1显示示例性IL-7/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图2显示示例性IL-21//TF/IL-15DNA构建体的示意图。

图3显示示例性IL-7/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图4显示产生IL-21/TF/IL-15:IL-7/IL-15RαSu复合物(21t15-7s)的示例性IL-7/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15融合蛋白之间的相互作用的示意图。

图5显示通过用21t15-7s+抗TF IgG1抗体刺激引起的原代自然杀手(NK)细胞的扩增。

图6显示使用CD25 MFI和CD69 MFI作为NK细胞激活的标记，扩增的原代NK细胞的激活。

图7显示扩增的NK细胞对K562人肿瘤细胞的细胞毒活性，其中用21t15-7s+抗TFIgG1抗体刺激的NK细胞展现比未用21t15-7s+抗TF IgG1抗体刺激的NK细胞更强的K562细胞特异性溶解。

图8显示示例性TGF-βRII/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图9显示示例性IL-21/TF/IL-15DNA构建体的示意图。

图10显示示例性TGF-βRII/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图11显示产生IL-21/TF/IL-15:TGF-βRII/IL-15RαSU复合物(21t15-TGFRs)的示例性TGF-βRII/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15融合蛋白之间的相互作用的示意图。

图12显示用21t15-TGFRs+抗TF IgG1抗体刺激的原代自然杀手(NK)单元(带方块的深色线)或与单独的21t15-TGFRs、抗TF IgG1抗体、抗TF IgG4抗体或21t15-TGFRs+抗TFIgG4抗体组合接触的原代NK细胞(显示的全部其它数据)的扩增。

图13显示使用CD25 MFI(顶部)和CD69 MFI(底部)作为NK细胞激活的标记，扩增的原代NK细胞的激活。

图14显示示例性IL-21/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图15显示示例性IL-7/TF/IL-15DNA构建体的示意图。

图16显示示例性IL-21/IL-15RαSu与IL-7/TF/IL-15DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图17显示产生IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu复合物(7t15-21s)的示例性IL-21/IL-15RαSu与IL-7/TF/IL-15融合蛋白之间的相互作用的示意图。

图18以图解形式显示通过用21t15-TGFRs+抗TF IgG1抗体刺激引起的原代自然杀手(NK)细胞的激活和扩增。

图19显示抗TF IgG1抗体、7t15-21s和含有等量抗TF IgG1抗体和7t15-21s的复合物的尺寸排阻色谱(SEC)图。

图20是显示人NK细胞的耗氧率(OCR)(以皮摩尔/分钟(pmol/min)为单位)的图，所述人NK细胞从血液分离(1×10

图21是显示人NK细胞的细胞外酸化率(ECAR)(以mpH/min为单位)的图，所述人NK细胞从血液分离(1×10

图22是显示18t15-12s构建体的结构的示意图。

图23是显示从两个不同供体的血液分离的人NK细胞(2×10

图24是显示从两个不同供体的血液中分离的人NK细胞(2×10

图25显示示例性IL-12/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图26显示示例性IL-18/TF/IL-15DNA构建体的示意图。

图27显示示例性IL-12/IL-15RαSu与IL-18/TF/IL-15DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图28显示产生IL-18/TF/IL-15:IL-12/IL-15RαSu复合物(18t15-12s)的示例性IL-12/IL-15RαSu与IL-18/TF/IL-15融合蛋白之间的相互作用的示意图。

图29显示来自抗TF亲和柱的18t15-12s纯化洗脱的色谱。

图30显示在分析型尺寸排阻柱上洗脱后，抗TF抗体/SEC纯化的18t15-12s蛋白的示例性色谱图，展现单体多蛋白18t15-12s复合物与蛋白质聚集体分离。

图31显示二硫键还原后18t15-12s复合物的4-12％SDS-PAGE的实例。泳道1：SeeBlue Plus2标记；泳道2：抗TF抗体纯化的18t15-12s(0.5μg)；泳道3：抗TF抗体纯化的18t15-12s(1μg)。

图32显示去糖基化和未去糖基化18t15-12s的SDS PAGE分析。泳道1：抗TF抗体纯化的18t15-12s(0.5μg)，未去糖基化；泳道2：抗TF抗体纯化的18t15-12s(1μg)，未去糖基化；泳道3：18t15-12s(1μg)，去糖基化；泳道4：Mark12未染色的制造商。

图33显示用于18t15-12s复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人IL-12检测抗体(BAF 219)。

图34显示用于18t15-12s复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人IL-15检测抗体(BAM 247)。

图35显示用于18t15-12s复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人IL-18检测抗体(D045-6)。

图36显示用于18t15-12s复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子(I43)捕获抗体和抗人组织因子检测抗体。

图37显示由18t15-12s复合物(空心方块)和重组IL-15(黑色方块)介导的IL-15依赖性32Dβ细胞的增殖。

图38显示18t15-12s复合物(空心方块)内IL-18的生物活性，其中重组IL-18(黑色方块)和重组IL-12(黑色圆)分别用作阳性和阴性对照。

图39显示18t15-12s复合物(空心方块)内IL-12的生物活性，其中重组IL-12(黑色圆)和重组IL-18(空心方块)分别用作阳性和阴性对照。

图40A显示由18t15-12s复合物诱导的NK细胞的细胞表面CD25表达的流式细胞术图。图40B显示由18t15-12s复合物诱导的NK细胞的细胞表面CD69表达的流式细胞术图。

图41显示由18t15-12s复合物诱导的NK细胞的细胞内干扰素γ表达的流式细胞术图。

图42显示条形图，其显示18t15-12s诱导的人NK细胞对K562的细胞毒性。将每孔1×10

图43显示示例性IL-12/IL-15RαSu/αCD16 DNA构建体的示意图。

图44显示示例性IL-18/TF/IL-15DNA构建体的示意图。

图45显示示例性IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv与IL-18/TF/IL-15DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图46显示示例性的18t15-12s/αCD16蛋白复合物的示意图。

图47显示用于18t15-12s16复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人IL-12(深色线)或抗人组织因子检测抗体(浅色线)。

图48显示示例性TGF-βRII/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图49显示示例性IL-21/TF/IL-15构建体的示意图。

图50显示示例性IL-IL-21/TF/IL-15与TGFβRII/IL-15RαSu构建体之间的相互作用的示意图。

图51显示产生IL-21/TF/IL-15/TGFβRII/IL-15RαSu复合物(21t15-TGFRs)的示例性TGFβRII/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15融合蛋白之间的相互作用的示意图。

图52显示来自抗TF抗体亲和柱的21t15-TGFRs纯化洗脱的色谱。

图53显示示例性的21t15-TGFRs尺寸排阻色谱，其显示主要蛋白质峰和高分子量峰。

图54显示二硫键还原后21t15-TGFRs复合物的4-12％SDS-PAGE的实例。泳道1：Mark12未染色的标记(左侧的数字指示以kDa为单位的分子量)；泳道2：21t15-TGFRs(0.5μg)；泳道3：21t15-TGFRs(1μg)；泳道4：21t15-TGFRs，去糖基化(1μg)，其中MW是53kDa和39.08kDa的预期大小。

图55显示用于21t15-TGFRs复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人IL-21检测抗体(13-7218-81，BioLegend)。

图56显示用于21t15-TGFRs复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人IL-15检测抗体(BAM 247，R&D Systems)。

图57显示用于21t15-TGFRs复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人TGFβRII检测抗体(BAF241，R&D Systems)。

图58显示用于21t15-TGFRs复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子(I43)捕获抗体和抗人组织因子检测抗体。

图59显示与IL-15(黑色方块)相比，由21t15-TGFRs复合物(空心正方形)介导的IL-15依赖性32Dβ细胞增殖。

图60显示21t15-TGFRs复合物(空心方块)内TGFβRII结构域的生物活性。TGFβRII/Fc(黑色方块)充当阳性对照。

图61A显示由21t15-TGFRs复合物诱导的NK细胞的细胞表面CD25表达的流式细胞术图。图61B显示由21t15-TGFRs复合物诱导的NK细胞的细胞表面CD69表达的流式细胞术图。

图62显示由21t15-TGFRs复合物诱导的NK细胞的细胞内干扰素γ表达的流式细胞术图。

图63显示条形图，其显示21t15-TGFRs诱导的人NK细胞对K562的细胞毒性。将每孔1×10

图64是示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的示意图。

图65是色谱，其显示示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽从抗组织因子亲和柱的洗脱。

图66是色谱，其显示装载有示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的Superdex 200Increase 10/300GL凝胶过滤柱的洗脱。

图67是使用抗组织因子亲和柱纯化的示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)。

图68是显示使用实例53描述的方法进行的示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的ELISA定量的图。纯化的组织因子用作对照。

图69是显示示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽刺激从两个供体的血液分离出的CD4

图70是显示示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽刺激从两个供体的血液分离出的CD8

图71是显示示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽刺激从两个供体的血液分离出的CD4

图72显示示例性IL-7/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图73显示示例性IL-21/TF/IL-15DNA构建体的示意图。

图74显示示例性IL-7/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图75显示产生IL-21/TF/IL-15:IL-7/IL-15RαSu复合物(21t15-7s)的示例性IL-7/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15融合蛋白之间的相互作用的示意图。

图76显示示例性TGF-βRII/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图77显示示例性IL-21/TF/IL-15DNA构建体的示意图。

图78显示示例性TGF-βRII/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图79显示产生IL-21/TF/IL-15:TGF-βRII/IL-15RαSU复合物(21t15-TGFR)的示例性TGF-βRII/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15融合蛋白之间的相互作用的示意图。

图80显示示例性IL-21/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图81显示示例性IL-7/TF/IL-15DNA构建体的示意图。

图82显示示例性IL-21/IL-15RαSu与IL-7/TF/IL-15DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图83显示产生IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSU复合物(7t15-21s)的示例性IL-21/IL-15RαSu与IL-7/TF/IL-15融合蛋白之间的相互作用的示意图。

图84显示抗TF IgG1抗体、7t15-21s和含有等量抗TF IgG1抗体和7t15-21s的复合物的尺寸排阻色谱(SEC)图。

图85显示7t15-16s21构建体的示意图。

图86显示7t15-16s21构建体的另一示意图。

图87A和87B是显示与对照蛋白质相比，7t15-16s21与表达人CD16b的CHO细胞的结合的图。

图88A-88C是来自使用针对IL-15、IL-21和IL-7的抗体检测7t15-16s21的ELISA实验的结果。

图89显示用7t15-16s21或重组IL-15进行32Dβ细胞增殖分析的结果。

图90是显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有7t15-16s21蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图91显示7t15-16s21的分析型SEC图。

图92显示TGFRt15-16s21构建体的示意图。

图93显示TGFRt15-16s21构建体的另一示意图。

图94A和94B显示TGFRt15-16s21和7t15-21s与表达人CD16b的CHO细胞的结合亲和力。图94A显示TGFRt15-16s21与表达人CD16b的CHO细胞的结合亲和力。图94B显示7t15-21s与表达人CD16b的CHO细胞的结合亲和力。

图95显示由TGFRt15-16s21和TGFR-Fc引起的TGFβ1抑制的结果。

图96显示用TGFRt15-16s21或重组IL-15进行的32Dβ细胞增殖分析的结果。

图97A-97C显示使用ELISA用对应抗体检测TGFRt15-16s21中的IL-15、IL-21和TGFβRII的结果。

图98是显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有TGFRt15-16s21蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图99显示TGFRt15-16s21的还原SDS-PAGE分析的结果。

图100显示7t15-7s构建体的示意图。

图101显示7t15-7s构建体的另一示意图。

图102是显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有7t15-7s蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图103显示使用ELISA对7t15-7s中的TF、IL-15和IL-7进行的检测。

图104A和104B显示用7t15-7s处理和用对照物处理的小鼠的脾脏重量和免疫细胞类型的百分比。图115A显示与PBS对照相比，用7t15-7s处理的小鼠的脾脏重量。图115B显示与PBS对照相比，用7t15-7s处理的小鼠中CD4

图105显示TGFRt15-TGFRs构建体的示意图。

图106显示TGFRt15-TGFRs构建体的另一示意图。

图107显示由TGFRt15-TGFRs和TGFR-Fc引起的TGFβ1抑制的结果。

图108显示用TGFRt15-TGFRs或重组IL-15进行32Dβ细胞增殖分析的结果。

图109A和109B显示使用ELISA用对应抗体检测TGFRt15-TGFRs中的IL-15和TGFβRII的结果。

图110是显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含TGFRt15-TGFRs蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图111显示TGFRt15-TGFRs的分析型SEC图。

图112显示如通过还原SDS-PAGE分析的去糖基化前后的TGFRt15-TGFR。

图113A和113B显示用TGFRt15-TGFRs处理和用对照物处理的小鼠的脾脏重量和免疫细胞类型的百分比。图113A显示与PBS对照相比，用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量。图113B显示与PBS对照相比，用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中CD4

图114A和114B显示用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中92小时内的脾脏重量和免疫刺激。图114A显示在处理后16、24、48、72和92小时用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量。图114B显示在处理后16、24、48、72和92小时用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中免疫细胞的百分比。

图115A和115B显示在一段时间内用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中Ki67和颗粒酶B的表达。

图116显示在C57BL/6小鼠中，TGFRt15-TGFRs增强脾细胞的细胞毒性。

图117显示在胰腺癌小鼠模型中，响应于PBS处理、单独的化疗、单独的TGFRt15-TGFRs或化疗与TGFRt15-TGFRs组合的肿瘤尺寸变化。

图118显示从用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠分离的NK细胞的细胞毒性。

图119A-119E显示黑色素瘤小鼠模型中TGFRt15-TGFRs的体内功效的结果。图119A显示处理方案的示意图。图119B显示在盐水处理、化疗(DTX)或化疗(DTX)、TGFRt15-TGFRs与TA99(抗TRP1抗体)组合处理之后一段时间内的肿瘤体积。图119C显示使用荧光标记的针对NK1.1的抗体进行的周边血液分析。图119D显示使用荧光标记的针对CD8的抗体进行的周边血液分析。图119E显示使用荧光标记的针对CD4的抗体进行的周边血液分析。

图120显示7t15-21s137L(长版)构建体的示意图。

图121显示7t15-21s137L(长版)构建体的另一示意图。

图122是显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含7t15-21s137L(长版)蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图123显示7t15-21s137L(长版)的分析型SEC图。

图124显示7t15-21s137L(短版)与CD137L(4.1BBL)的结合。

图125A-125C显示用ELISA对7t15-21s137L(短版)中的IL15、IL21和IL7进行的检测。图125A显示用ELISA对7t15-21s137L(短版)中的IL15进行的检测。图125B显示用ELISA对7t15-21s137L(短版)中的IL21进行的检测。图125C显示用ELISA对7t15-21s137L(短版)中的IL7进行的检测。

图126显示来自CTLL-2细胞增殖分析的结果。

图127显示7t15-1s137L(短版)在促进含IL21R的B9细胞增殖中的活性。

图128显示7t15-TGFRs构建体的示意图。

图129显示7t15-TGFRs构建体的另一示意图。

图130显示由7t15-TGFR和TGFR-Fc引起的TGFβ1抑制的结果。

图131A-131C显示用ELISA对7t15-TGFRs中的IL-15、TGFβRII和IL-7进行的检测。

图132显示用7t15-TGFRs或重组IL-15进行32Dβ细胞增殖分析的结果。

图133是显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有7t15-TGFRs蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图134显示如使用还原SDS-PAGE分析的去糖基化前后的7t15-TGFRs。

图135显示7t15-TGFRs蛋白中IL-7、IL-15和TGFβRII的ELISA检测。

图136A和136B显示用7t15-TGFRs处理和用对照物处理的小鼠的脾脏重量和免疫细胞类型的百分比。图136A显示与PBS对照相比，用7t15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量。图136B显示与PBS对照相比，在用不同剂量的7t15-TGFRs处理的小鼠中，CD4

图137A和137B显示在C57BL/6小鼠中，7t15-TGFRs对CD4

图138A和138B显示在C57BL/6小鼠中，7t15-TGFRs对CD8

图139显示在C57BL/6小鼠中，7t15-TGFRs增强脾细胞的细胞毒性。

图140显示TGFRt15-21s137L构建体的示意图。

图141显示TGFRt15-21s137L构建体的另一示意图。

图142是显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有TGFRt15-21s137L蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图143显示TGFRt15-TGFRs21构建体的示意图。

图144显示TGFRt15-TGFRs21构建体的另一示意图。

图145是显示在在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含TGFRt15-TGFRs21蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图146显示通过还原SDS-PAGE分析的去糖基化前后的TGFRt15-TGFRs21。

图147A和147B显示使用ELISA进行的TGFRt15-TGFRs21组分的检测。

图148A和148B显示在用对照物处理和用TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠的脾脏中存在的CD4

图149显示用TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠中脾细胞的颗粒酶B表达的上调。

图150显示在C57BL/6小鼠中，TGFRt15-TGFRs21增强脾细胞的细胞毒性。

图151显示TGFRt15-TGFRs16构建体的示意图。

图152显示TGFRt15-TGFRs16构建体的另一示意图。

图153显示TGFRt15-TGFRs137L构建体的示意图。

图154显示TGFRt15-TGFRs137L构建体的另一示意图。

图155是示例性2t2单链嵌合多肽的示意图。

图156显示使用32Dβ细胞增殖分析测得的与重组IL-2相比的2t2中的IL-2活性。

图157显示使用CTLL-2细胞增殖分析测得的与重组IL-2相比的2t2中的IL-2活性。

图158显示用标准食物或高脂肪饮食喂养并用PBS对照(未处理)或用2t2处理的ApoE

图159显示用标准食物或高脂肪饮食喂养并用PBS对照(未处理)或用2t2处理的ApoE

图160是显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有2t2蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图161显示2t2的分析型SEC图。

图162A和162B显示2t2在去糖基化前后的还原SDS-PAGE分析。图162A显示2t2在去糖基化之前的还原SDS-PAGE分析。图162B显示2t2在去糖基化之后的还原SDS-PAGE分析。

图163A和163B显示使用2t2对C57BL/6小鼠进行免疫刺激的结果。图163A显示用2t2处理之后的脾脏重量。图163B显示用2t2处理之后的免疫细胞类型的百分比。

图164显示用2t2处理的小鼠中的CD4

图165显示2t2在C57BL/6小鼠中的药物动力学。

图166A和166B显示2t2在减轻ApoE

图167显示与用对照物处理的小鼠相比，用2t2处理的小鼠中的空腹血糖水平。

图168显示来自用2t2处理的小鼠和用对照物处理的小鼠的血液淋巴细胞中CD4

图169是示例性15t15单链嵌合多肽的示意图。

图170显示32Dβ细胞增殖分析中，与重组IL-15相比，15t15的IL-15活性。

图171是显示在抗TF树脂上结合和洗脱后，含有15t15蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图172A和172B显示15t15在去糖基化前后的还原SDS-PAGE分析。图172A显示15t15在去糖基化之前的还原SDS-PAGE分析。图172B显示15t15在去糖基化之后的还原SDS-PAGE分析。

图173是一组直方图和一组图表，显示在用18t15-12s、18t15-12s16和7t15-21s+抗TF抗体刺激之后，NK细胞的表面表型变化。

图174是一组图表，显示在用以下刺激之后，淋巴细胞群体的表面表型变化：18t15-12s；18t15-12s16；单细胞因子rhIL15、rhIL18和rhIL-12的混合物；7t15-21s+抗TF抗体；7t15-21s；或抗TF抗体。

图175是在用单独的多链构建体或在抗TF IgG1或抗TF IgG4存在下刺激之后NK细胞体外增殖增加的图。

图176是在用7t15-21s和抗TF抗体的组合刺激之后NK细胞在一段时间内体外增殖增加的图。

图177是7t15-21s+抗TF抗体扩增的NK细胞上表面表型变化的图。

图178是示意图和一组图表，显示在用7t15-21、TGFRt15-TGFRs或2t2处理之后，NSG小鼠中7t15-21s和抗抗体扩增的NK细胞的存留。

图179A和179B是一组图像和一组图表，显示7t15-21s+抗TF抗体扩增的NK细胞杀死以化学方式诱导的衰老人成纤维细胞。

图180A-180C是一组图像和一组图表，显示7t15-21s+抗TF抗体扩增的NK细胞杀死UV诱导的衰老人成纤维细胞。

图181显示在用7t15-21s、7t15-21s+抗TF抗体(IgG1)或7t15-21s+抗TF抗体(IgG4)刺激后NK细胞的增殖。

图182显示7t15-21s+抗TF抗体(IgG1)和7t15-21s137L(短版)+抗TF抗体(IgG1)诱导的NK细胞扩增。

图183显示在用由7t15-21s和抗TF抗体(IgG1)复合物激活的NK细胞处理后，NSG小鼠中Daudi肿瘤细胞的清除率。

图184A-184E显示用西方饮食喂养并用2t2或TGFRt15-TGFRs处理的ApoE

图185显示用单链或多链嵌合多肽处理之后，因子X(FX)激活的图。

图186显示凝血酶原时间(PT)测试中含有不同浓度的因诺维(Innovin)的缓冲液的凝结时间。

图187显示PT分析中多链嵌合多肽的凝结时间。

图188显示当与32DB细胞混合时，PT分析中多链嵌合多肽的凝结时间。

图189显示当与人PBMC混合时，PT分析中多链嵌合多肽的凝结时间。

图190显示7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)与CD137(4.1BB)的结合。

图191A-191D显示使用ELISA通过相应抗体对7t15-21s137L(长版)中的IL7、IL21、IL15和4.1BBL进行的检测。

图192显示如通过含IL2RαβγCTLL2细胞增殖分析评估的7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)的IL-15活性。

图193A-193C显示响应于2t2或IL2处理，CD4

图194是显示在用7t15-21s+抗组织因子(TF)抗体(IgG1))(50nM)扩增之后，来自两个不同供体的NK细胞(相对于未暴露的NK细胞)中DNA去甲基化的百分比差异的图。

具体实施方式

本文提供多种单链嵌合多肽和多链嵌合多肽、其使用方法以及包括所述多肽的试剂盒。在一些实施例中，单链和多链嵌合多肽包括位于两个靶标结合结构域之间的接头结构域。在一些实施例中，接头结构域是或包括可溶性组织因子结构域。在一些实施例中，接头结构域可以通过同源IgG1抗体(例如，单克隆抗体)识别。在一些实施例中，本文提供的单链或多链嵌合多肽可以用于刺激免疫细胞、诱导或增加免疫细胞增殖、诱导免疫细胞的分化或治疗有需要的受试者(例如，患有癌症或与老化相关的疾病或病况的受试者)。

单链嵌合多肽

本文描述的任一种方法的一些实施例包括使用本文描述的任一种单链嵌合多肽。本文描述的任一种试剂盒的一些实施例包括本文描述的任一种单链嵌合多肽。本文提供的单链嵌合多肽包括第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下组成的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域和可溶性白介素或细胞因子受体以及共刺激分子的配体。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽的一些实例中，单链嵌合多肽可以具有以下总长度：约50个氨基酸至约3000个氨基酸，约50个氨基酸至约2500个氨基酸，约50个氨基酸至约2000个氨基酸，约50个氨基酸至约1500个氨基酸，约50个氨基酸至约1000个氨基酸，约50个氨基酸至约950个氨基酸，约50个氨基酸至约900个氨基酸，约50个氨基酸至约850个氨基酸，约50个氨基酸至约800个氨基酸，约50个氨基酸至约750个氨基酸，约50个氨基酸至约700个氨基酸，约50个氨基酸至约650个氨基酸，约50个氨基酸至约600个氨基酸，约50个氨基酸至约550个氨基酸，约50个氨基酸至约500个氨基酸，约50个氨基酸至约480个氨基酸，约50个氨基酸至约460个氨基酸，约50个氨基酸至约440个氨基酸，约50个氨基酸至约420个氨基酸，约50个氨基酸至约400个氨基酸，约50个氨基酸至约380个氨基酸，约50个氨基酸至约360个氨基酸，约50个氨基酸至约340个氨基酸，约50个氨基酸至约320个氨基酸，约50个氨基酸至约300个氨基酸，约50个氨基酸至约280个氨基酸，约50个氨基酸至约260个氨基酸，约50个氨基酸至约240个氨基酸，约50个氨基酸至约220个氨基酸，约50个氨基酸至约200个氨基酸，约50个氨基酸至约150个氨基酸，约50个氨基酸至约100个氨基酸，约100个氨基酸至约3000个氨基酸，约100个氨基酸至约2500个氨基酸，约100个氨基酸至约2000个氨基酸，约100个氨基酸至约1500个氨基酸，约100个氨基酸至约1000个氨基酸，约100个氨基酸至约950个氨基酸，约100个氨基酸至约900个氨基酸，约100个氨基酸至约850个氨基酸，约100个氨基酸至约800个氨基酸，约100个氨基酸至约750个氨基酸，约100个氨基酸至约700个氨基酸，约100个氨基酸至约650个氨基酸，约100个氨基酸至约600个氨基酸，约100个氨基酸至约550个氨基酸，约100个氨基酸至约500个氨基酸，约100个氨基酸至约480个氨基酸，约100个氨基酸至约460个氨基酸，约100个氨基酸至约440个氨基酸，约100个氨基酸至约420个氨基酸，约100个氨基酸至约400个氨基酸，约100个氨基酸至约380个氨基酸，约100个氨基酸至约360个氨基酸，约100个氨基酸至约340个氨基酸，约100个氨基酸至约320个氨基酸，约100个氨基酸至约300个氨基酸，约100个氨基酸至约280个氨基酸，约100个氨基酸至约260个氨基酸，约100个氨基酸至约240个氨基酸，约100个氨基酸至约220个氨基酸，约100个氨基酸至约200个氨基酸，约100个氨基酸至约150个氨基酸，约150个氨基酸至约3000个氨基酸，约150个氨基酸至约2500个氨基酸，约150个氨基酸至约2000个氨基酸，约150个氨基酸至约1500个氨基酸，约150个氨基酸至约1000个氨基酸，约150个氨基酸至约950个氨基酸，约150个氨基酸至约900个氨基酸，约150个氨基酸至约850个氨基酸，约150个氨基酸至约800个氨基酸，约150个氨基酸至约750个氨基酸，约150个氨基酸至约700个氨基酸，约150个氨基酸至约650个氨基酸，约150个氨基酸至约600个氨基酸，约150个氨基酸至约550个氨基酸，约150个氨基酸至约500个氨基酸，约150个氨基酸至约480个氨基酸，约150个氨基酸至约460个氨基酸，约150个氨基酸至约440个氨基酸，约150个氨基酸至约420个氨基酸，约150个氨基酸至约400个氨基酸，约150个氨基酸至约380个氨基酸，约150个氨基酸至约360个氨基酸，约150个氨基酸至约340个氨基酸，约150个氨基酸至约320个氨基酸，约150个氨基酸至约300个氨基酸，约150个氨基酸至约280个氨基酸，约150个氨基酸至约260个氨基酸，约150个氨基酸至约240个氨基酸，约150个氨基酸至约220个氨基酸，约150个氨基酸至约200个氨基酸，约200个氨基酸至约3000个氨基酸，约200个氨基酸至约2500个氨基酸，约200个氨基酸至约2000个氨基酸，约200个氨基酸至约1500个氨基酸，约200个氨基酸至约1000个氨基酸，约200个氨基酸至约950个氨基酸，约200个氨基酸至约900个氨基酸，约200个氨基酸至约850个氨基酸，约200个氨基酸至约800个氨基酸，约200个氨基酸至约750个氨基酸，约200个氨基酸至约700个氨基酸，约200个氨基酸至约650个氨基酸，约200个氨基酸至约600个氨基酸，约200个氨基酸至约550个氨基酸，约200个氨基酸至约500个氨基酸，约200个氨基酸至约480个氨基酸，约200个氨基酸至约460个氨基酸，约200个氨基酸至约440个氨基酸，约200个氨基酸至约420个氨基酸，约200个氨基酸至约400个氨基酸，约200个氨基酸至约380个氨基酸，约200个氨基酸至约360个氨基酸，约200个氨基酸至约340个氨基酸，约200个氨基酸至约320个氨基酸，约200个氨基酸至约300个氨基酸，约200个氨基酸至约280个氨基酸，约200个氨基酸至约260个氨基酸，约200个氨基酸至约240个氨基酸，约200个氨基酸至约220个氨基酸，约220个氨基酸至约3000个氨基酸，约220个氨基酸至约2500个氨基酸，约220个氨基酸至约2000个氨基酸，约220个氨基酸至约1500个氨基酸，约220个氨基酸至约1000个氨基酸，约220个氨基酸至约950个氨基酸，约220个氨基酸至约900个氨基酸，约220个氨基酸至约850个氨基酸，约220个氨基酸至约800个氨基酸，约220个氨基酸至约750个氨基酸，约220个氨基酸至约700个氨基酸，约220个氨基酸至约650个氨基酸，约220个氨基酸至约600个氨基酸，约220个氨基酸至约550个氨基酸，约220个氨基酸至约500个氨基酸，约220个氨基酸至约480个氨基酸，约220个氨基酸至约460个氨基酸，约220个氨基酸至约440个氨基酸，约220个氨基酸至约420个氨基酸，约220个氨基酸至约400个氨基酸，约220个氨基酸至约380个氨基酸，约220个氨基酸至约360个氨基酸，约220个氨基酸至约340个氨基酸，约220个氨基酸至约320个氨基酸，约220个氨基酸至约300个氨基酸，约220个氨基酸至约280个氨基酸，约220个氨基酸至约260个氨基酸，约220个氨基酸至约240个氨基酸，约240个氨基酸至约3000个氨基酸，约240个氨基酸至约2500个氨基酸，约240个氨基酸至约2000个氨基酸，约240个氨基酸至约1500个氨基酸，约240个氨基酸至约1000个氨基酸，约240个氨基酸至约950个氨基酸，约240个氨基酸至约900个氨基酸，约240个氨基酸至约850个氨基酸，约240个氨基酸至约800个氨基酸，约240个氨基酸至约750个氨基酸，约240个氨基酸至约700个氨基酸，约240个氨基酸至约650个氨基酸，约240个氨基酸至约600个氨基酸，约240个氨基酸至约550个氨基酸，约240个氨基酸至约500个氨基酸，约240个氨基酸至约480个氨基酸，约240个氨基酸至约460个氨基酸，约240个氨基酸至约440个氨基酸，约240个氨基酸至约420个氨基酸，约240个氨基酸至约400个氨基酸，约240个氨基酸至约380个氨基酸，约240个氨基酸至约360个氨基酸，约240个氨基酸至约340个氨基酸，约240个氨基酸至约320个氨基酸，约240个氨基酸至约300个氨基酸，约240个氨基酸至约280个氨基酸，约240个氨基酸至约260个氨基酸，约260个氨基酸至约3000个氨基酸，约260个氨基酸至约2500个氨基酸，约260个氨基酸至约2000个氨基酸，约260个氨基酸至约1500个氨基酸，约260个氨基酸至约1000个氨基酸，约260个氨基酸至约950个氨基酸，约260个氨基酸至约900个氨基酸，约260个氨基酸至约850个氨基酸，约260个氨基酸至约800个氨基酸，约260个氨基酸至约750个氨基酸，约260个氨基酸至约700个氨基酸，约260个氨基酸至约650个氨基酸，约260个氨基酸至约600个氨基酸，约260个氨基酸至约550个氨基酸，约260个氨基酸至约500个氨基酸，约260个氨基酸至约480个氨基酸，约260个氨基酸至约460个氨基酸，约260个氨基酸至约440个氨基酸，约260个氨基酸至约420个氨基酸，约260个氨基酸至约400个氨基酸，约260个氨基酸至约380个氨基酸，约260个氨基酸至约360个氨基酸，约260个氨基酸至约340个氨基酸，约260个氨基酸至约320个氨基酸，约260个氨基酸至约300个氨基酸，约260个氨基酸至约280个氨基酸，约280个氨基酸至约3000个氨基酸，约280个氨基酸至约2500个氨基酸，约280个氨基酸至约2000个氨基酸，约280个氨基酸至约1500个氨基酸，约280个氨基酸至约1000个氨基酸，约280个氨基酸至约950个氨基酸，约280个氨基酸至约900个氨基酸，约280个氨基酸至约850个氨基酸，约280个氨基酸至约800个氨基酸，约280个氨基酸至约750个氨基酸，约280个氨基酸至约700个氨基酸，约280个氨基酸至约650个氨基酸，约280个氨基酸至约600个氨基酸，约280个氨基酸至约550个氨基酸，约280个氨基酸至约500个氨基酸，约280个氨基酸至约480个氨基酸，约280个氨基酸至约460个氨基酸，约280个氨基酸至约440个氨基酸，约280个氨基酸至约420个氨基酸，约280个氨基酸至约400个氨基酸，约280个氨基酸至约380个氨基酸，约280个氨基酸至约360个氨基酸，约280个氨基酸至约340个氨基酸，约280个氨基酸至约320个氨基酸，约280个氨基酸至约300个氨基酸，约300个氨基酸至约3000个氨基酸，约300个氨基酸至约2500个氨基酸，约300个氨基酸至约2000个氨基酸，约300个氨基酸至约1500个氨基酸，约300个氨基酸至约1000个氨基酸，约300个氨基酸至约950个氨基酸，约300个氨基酸至约900个氨基酸，约300个氨基酸至约850个氨基酸，约300个氨基酸至约800个氨基酸，约300个氨基酸至约750个氨基酸，约300个氨基酸至约700个氨基酸，约300个氨基酸至约650个氨基酸，约300个氨基酸至约600个氨基酸，约300个氨基酸至约550个氨基酸，约300个氨基酸至约500个氨基酸，约300个氨基酸至约480个氨基酸，约300个氨基酸至约460个氨基酸，约300个氨基酸至约440个氨基酸，约300个氨基酸至约420个氨基酸，约300个氨基酸至约400个氨基酸，约300个氨基酸至约380个氨基酸，约300个氨基酸至约360个氨基酸，约300个氨基酸至约340个氨基酸，约300个氨基酸至约320个氨基酸，约320个氨基酸至约3000个氨基酸，约320个氨基酸至约2500个氨基酸，约320个氨基酸至约2000个氨基酸，约320个氨基酸至约1500个氨基酸，约320个氨基酸至约1000个氨基酸，约320个氨基酸至约950个氨基酸，约320个氨基酸至约900个氨基酸，约320个氨基酸至约850个氨基酸，约320个氨基酸至约800个氨基酸，约320个氨基酸至约750个氨基酸，约320个氨基酸至约700个氨基酸，约320个氨基酸至约650个氨基酸，约320个氨基酸至约600个氨基酸，约320个氨基酸至约550个氨基酸，约320个氨基酸至约500个氨基酸，约320个氨基酸至约480个氨基酸，约320个氨基酸至约460个氨基酸，约320个氨基酸至约440个氨基酸，约320个氨基酸至约420个氨基酸，约320个氨基酸至约400个氨基酸，约320个氨基酸至约380个氨基酸，约320个氨基酸至约360个氨基酸，约320个氨基酸至约340个氨基酸，约340个氨基酸至约3000个氨基酸，约340个氨基酸至约2500个氨基酸，约340个氨基酸至约2000个氨基酸，约340个氨基酸至约1500个氨基酸，约340个氨基酸至约1000个氨基酸，约340个氨基酸至约950个氨基酸，约340个氨基酸至约900个氨基酸，约340个氨基酸至约850个氨基酸，约340个氨基酸至约800个氨基酸，约340个氨基酸至约750个氨基酸，约340个氨基酸至约700个氨基酸，约340个氨基酸至约650个氨基酸，约340个氨基酸至约600个氨基酸，约340个氨基酸至约550个氨基酸，约340个氨基酸至约500个氨基酸，约340个氨基酸至约480个氨基酸，约340个氨基酸至约460个氨基酸，约340个氨基酸至约440个氨基酸，约340个氨基酸至约420个氨基酸，约340个氨基酸至约400个氨基酸，约340个氨基酸至约380个氨基酸，约340个氨基酸至约360个氨基酸，约360个氨基酸至约3000个氨基酸，约360个氨基酸至约2500个氨基酸，约360个氨基酸至约2000个氨基酸，约360个氨基酸至约1500个氨基酸，约360个氨基酸至约1000个氨基酸，约360个氨基酸至约950个氨基酸，约360个氨基酸至约900个氨基酸，约360个氨基酸至约850个氨基酸，约360个氨基酸至约800个氨基酸，约360个氨基酸至约750个氨基酸，约360个氨基酸至约700个氨基酸，约360个氨基酸至约650个氨基酸，约360个氨基酸至约600个氨基酸，约360个氨基酸至约550个氨基酸，约360个氨基酸至约500个氨基酸，约360个氨基酸至约480个氨基酸，约360个氨基酸至约460个氨基酸，约360个氨基酸至约440个氨基酸，约360个氨基酸至约420个氨基酸，约360个氨基酸至约400个氨基酸，约360个氨基酸至约380个氨基酸，约380个氨基酸至约3000个氨基酸，约380个氨基酸至约2500个氨基酸，约380个氨基酸至约2000个氨基酸，约380个氨基酸至约1500个氨基酸，约380个氨基酸至约1000个氨基酸，约380个氨基酸至约950个氨基酸，约380个氨基酸至约900个氨基酸，约380个氨基酸至约850个氨基酸，约380个氨基酸至约800个氨基酸，约380个氨基酸至约750个氨基酸，约380个氨基酸至约700个氨基酸，约380个氨基酸至约650个氨基酸，约380个氨基酸至约600个氨基酸，约380个氨基酸至约550个氨基酸，约380个氨基酸至约500个氨基酸，约380个氨基酸至约480个氨基酸，约380个氨基酸至约460个氨基酸，约380个氨基酸至约440个氨基酸，约380个氨基酸至约420个氨基酸，约380个氨基酸至约400个氨基酸，约400个氨基酸至约3000个氨基酸，约400个氨基酸至约2500个氨基酸，约400个氨基酸至约2000个氨基酸，约400个氨基酸至约1500个氨基酸，约400个氨基酸至约1000个氨基酸，约400个氨基酸至约950个氨基酸，约400个氨基酸至约900个氨基酸，约400个氨基酸至约850个氨基酸，约400个氨基酸至约800个氨基酸，约400个氨基酸至约750个氨基酸，约400个氨基酸至约700个氨基酸，约400个氨基酸至约650个氨基酸，约400个氨基酸至约600个氨基酸，约400个氨基酸至约550个氨基酸，约400个氨基酸至约500个氨基酸，约400个氨基酸至约480个氨基酸，约400个氨基酸至约460个氨基酸，约400个氨基酸至约440个氨基酸，约400个氨基酸至约420个氨基酸，约420个氨基酸至约3000个氨基酸，约420个氨基酸至约2500个氨基酸，约420个氨基酸至约2000个氨基酸，约420个氨基酸至约1500个氨基酸，约420个氨基酸至约1000个氨基酸，约420个氨基酸至约950个氨基酸，约420个氨基酸至约900个氨基酸，约420个氨基酸至约850个氨基酸，约420个氨基酸至约800个氨基酸，约420个氨基酸至约750个氨基酸，约420个氨基酸至约700个氨基酸，约420个氨基酸至约650个氨基酸，约420个氨基酸至约600个氨基酸，约420个氨基酸至约550个氨基酸，约420个氨基酸至约500个氨基酸，约420个氨基酸至约480个氨基酸，约420个氨基酸至约460个氨基酸，约420个氨基酸至约440个氨基酸，约440个氨基酸至约3000个氨基酸，约440个氨基酸至约2500个氨基酸，约440个氨基酸至约2000个氨基酸，约440个氨基酸至约1500个氨基酸，约440个氨基酸至约1000个氨基酸，约440个氨基酸至约950个氨基酸，约440个氨基酸至约900个氨基酸，约440个氨基酸至约850个氨基酸，约440个氨基酸至约800个氨基酸，约440个氨基酸至约750个氨基酸，约440个氨基酸至约700个氨基酸，约440个氨基酸至约650个氨基酸，约440个氨基酸至约600个氨基酸，约440个氨基酸至约550个氨基酸，约440个氨基酸至约500个氨基酸，约440个氨基酸至约480个氨基酸，约440个氨基酸至约460个氨基酸，约460个氨基酸至约3000个氨基酸，约460个氨基酸至约2500个氨基酸，约460个氨基酸至约2000个氨基酸，约460个氨基酸至约1500个氨基酸，约460个氨基酸至约1000个氨基酸，约460个氨基酸至约950个氨基酸，约460个氨基酸至约900个氨基酸，约460个氨基酸至约850个氨基酸，约460个氨基酸至约800个氨基酸，约460个氨基酸至约750个氨基酸，约460个氨基酸至约700个氨基酸，约460个氨基酸至约650个氨基酸，约460个氨基酸至约600个氨基酸，约460个氨基酸至约550个氨基酸，约460个氨基酸至约500个氨基酸，约460个氨基酸至约480个氨基酸，约480个氨基酸至约3000个氨基酸，约480个氨基酸至约2500个氨基酸，约480个氨基酸至约2000个氨基酸，约480个氨基酸至约1500个氨基酸，约480个氨基酸至约1000个氨基酸，约480个氨基酸至约950个氨基酸，约480个氨基酸至约900个氨基酸，约480个氨基酸至约850个氨基酸，约480个氨基酸至约800个氨基酸，约480个氨基酸至约750个氨基酸，约480个氨基酸至约700个氨基酸，约480个氨基酸至约650个氨基酸，约480个氨基酸至约600个氨基酸，约480个氨基酸至约550个氨基酸，约480个氨基酸至约500个氨基酸，约500个氨基酸至约3000个氨基酸，约500个氨基酸至约2500个氨基酸，约500个氨基酸至约2000个氨基酸，约500个氨基酸至约1500个氨基酸，约500个氨基酸至约1000个氨基酸，约500个氨基酸至约950个氨基酸，约500个氨基酸至约900个氨基酸，约500个氨基酸至约850个氨基酸，约500个氨基酸至约800个氨基酸，约500个氨基酸至约750个氨基酸，约500个氨基酸至约700个氨基酸，约500个氨基酸至约650个氨基酸，约500个氨基酸至约600个氨基酸，约500个氨基酸至约550个氨基酸，约550个氨基酸至约3000个氨基酸，约550个氨基酸至约2500个氨基酸，约550个氨基酸至约2000个氨基酸，约550个氨基酸至约1500个氨基酸，约550个氨基酸至约1000个氨基酸，约550个氨基酸至约950个氨基酸，约550个氨基酸至约900个氨基酸，约550个氨基酸至约850个氨基酸，约550个氨基酸至约800个氨基酸，约550个氨基酸至约750个氨基酸，约550个氨基酸至约700个氨基酸，约550个氨基酸至约650个氨基酸，约550个氨基酸至约600个氨基酸，约600个氨基酸至约3000个氨基酸，约600个氨基酸至约2500个氨基酸，约600个氨基酸至约2000个氨基酸，约600个氨基酸至约1500个氨基酸，约600个氨基酸至约1000个氨基酸，约600个氨基酸至约950个氨基酸，约600个氨基酸至约900个氨基酸，约600个氨基酸至约850个氨基酸，约600个氨基酸至约800个氨基酸，约600个氨基酸至约750个氨基酸，约600个氨基酸至约700个氨基酸，约600个氨基酸至约650个氨基酸，约650个氨基酸至约3000个氨基酸，约650个氨基酸至约2500个氨基酸，约650个氨基酸至约2000个氨基酸，约650个氨基酸至约1500个氨基酸，约650个氨基酸至约1000个氨基酸，约650个氨基酸至约950个氨基酸，约650个氨基酸至约900个氨基酸，约650个氨基酸至约850个氨基酸，约650个氨基酸至约800个氨基酸，约650个氨基酸至约750个氨基酸，约650个氨基酸至约700个氨基酸，约700个氨基酸至约3000个氨基酸，约700个氨基酸至约2500个氨基酸，约700个氨基酸至约2000个氨基酸，约700个氨基酸至约1500个氨基酸，约700个氨基酸至约1000个氨基酸，约700个氨基酸至约950个氨基酸，约700个氨基酸至约900个氨基酸，约700个氨基酸至约850个氨基酸，约700个氨基酸至约800个氨基酸，约700个氨基酸至约750个氨基酸，约750个氨基酸至约3000个氨基酸，约750个氨基酸至约2500个氨基酸，约750个氨基酸至约2000个氨基酸，约750个氨基酸至约1500个氨基酸，约750个氨基酸至约1000个氨基酸，约750个氨基酸至约950个氨基酸，约750个氨基酸至约900个氨基酸，约750个氨基酸至约850个氨基酸，约750个氨基酸至约800个氨基酸，约800个氨基酸至约3000个氨基酸，约800个氨基酸至约2500个氨基酸，约800个氨基酸至约2000个氨基酸，约800个氨基酸至约1500个氨基酸，约800个氨基酸至约1000个氨基酸，约800个氨基酸至约950个氨基酸，约800个氨基酸至约900个氨基酸，约800个氨基酸至约850个氨基酸，约850个氨基酸至约3000个氨基酸，约850个氨基酸至约2500个氨基酸，约850个氨基酸至约2000个氨基酸，约850个氨基酸至约1500个氨基酸，约850个氨基酸至约1000个氨基酸，约850个氨基酸至约950个氨基酸，约850个氨基酸至约900个氨基酸，约900个氨基酸至约3000个氨基酸，约900个氨基酸至约2500个氨基酸，约900个氨基酸至约2000个氨基酸，约900个氨基酸至约1500个氨基酸，约900个氨基酸至约1000个氨基酸，约900个氨基酸至约950个氨基酸，约950个氨基酸至约3000个氨基酸，约950个氨基酸至约2500个氨基酸，约950个氨基酸至约2000个氨基酸，约950个氨基酸至约1500个氨基酸，约950个氨基酸至约1000个氨基酸，约1000个氨基酸至约3000个氨基酸，约1000个氨基酸至约2500个氨基酸，约1000个氨基酸至约2000个氨基酸，约1000个氨基酸至约1500个氨基酸，约1500个氨基酸至约3000个氨基酸，约1500个氨基酸至约2500个氨基酸，约1500个氨基酸至约2000个氨基酸，约2000个氨基酸至约3000个氨基酸，约2000个氨基酸至约2500个氨基酸，或约2500个氨基酸至约3000个氨基酸。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头)彼此直接邻接。在本文描述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽还包含在第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。在本文描述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)与第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)彼此直接邻接。在本文描述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽还包含在接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)与第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)彼此直接邻接。在本文描述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽还包含在第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。在本文描述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，

第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)彼此直接邻接。在本文描述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽还包含在第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与接头结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头结构域)之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。

这些嵌合多肽、核酸、载体、细胞和方法的非限制性方面在下文描述，并且可在无限制的情况下以任何组合使用。这些嵌合多肽、核酸、载体、细胞和方法的其它方面是本领域已知的。

多链嵌合多肽

本文描述的任一种方法的一些实施例包括使用本文描述的任一种多链嵌合多肽。本文描述的任一种试剂盒的一些实施例包括本文描述的任一种多链嵌合多肽。

本文提供的多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；以及(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合。

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽的总长度可各自独立地为约50个氨基酸至约3000个氨基酸，约50个氨基酸至约2500个氨基酸，约50个氨基酸至约2000个氨基酸，约50个氨基酸至约1500个氨基酸，约50个氨基酸至约1000个氨基酸，约50个氨基酸至约950个氨基酸，约50个氨基酸至约900个氨基酸，约50个氨基酸至约850个氨基酸，约50个氨基酸至约800个氨基酸，约50个氨基酸至约750个氨基酸，约50个氨基酸至约700个氨基酸，约50个氨基酸至约650个氨基酸，约50个氨基酸至约600个氨基酸，约50个氨基酸至约550个氨基酸，约50个氨基酸至约500个氨基酸，约50个氨基酸至约480个氨基酸，约50个氨基酸至约460个氨基酸，约50个氨基酸至约440个氨基酸，约50个氨基酸至约420个氨基酸，约50个氨基酸至约400个氨基酸，约50个氨基酸至约380个氨基酸，约50个氨基酸至约360个氨基酸，约50个氨基酸至约340个氨基酸，约50个氨基酸至约320个氨基酸，约50个氨基酸至约300个氨基酸，约50个氨基酸至约280个氨基酸，约50个氨基酸至约260个氨基酸，约50个氨基酸至约240个氨基酸，约50个氨基酸至约220个氨基酸，约50个氨基酸至约200个氨基酸，约50个氨基酸至约150个氨基酸，约50个氨基酸至约100个氨基酸，约100个氨基酸至约3000个氨基酸，约100个氨基酸至约2500个氨基酸，约100个氨基酸至约2000个氨基酸，约100个氨基酸至约1500个氨基酸，约100个氨基酸至约1000个氨基酸，约100个氨基酸至约950个氨基酸，约100个氨基酸至约900个氨基酸，约100个氨基酸至约850个氨基酸，约100个氨基酸至约800个氨基酸，约100个氨基酸至约750个氨基酸，约100个氨基酸至约700个氨基酸，约100个氨基酸至约650个氨基酸，约100个氨基酸至约600个氨基酸，约100个氨基酸至约550个氨基酸，约100个氨基酸至约500个氨基酸，约100个氨基酸至约480个氨基酸，约100个氨基酸至约460个氨基酸，约100个氨基酸至约440个氨基酸，约100个氨基酸至约420个氨基酸，约100个氨基酸至约400个氨基酸，约100个氨基酸至约380个氨基酸，约100个氨基酸至约360个氨基酸，约100个氨基酸至约340个氨基酸，约100个氨基酸至约320个氨基酸，约100个氨基酸至约300个氨基酸，约100个氨基酸至约280个氨基酸，约100个氨基酸至约260个氨基酸，约100个氨基酸至约240个氨基酸，约100个氨基酸至约220个氨基酸，约100个氨基酸至约200个氨基酸，约100个氨基酸至约150个氨基酸，约150个氨基酸至约3000个氨基酸，约150个氨基酸至约2500个氨基酸，约150个氨基酸至约2000个氨基酸，约150个氨基酸至约1500个氨基酸，约150个氨基酸至约1000个氨基酸，约150个氨基酸至约950个氨基酸，约150个氨基酸至约900个氨基酸，约150个氨基酸至约850个氨基酸，约150个氨基酸至约800个氨基酸，约150个氨基酸至约750个氨基酸，约150个氨基酸至约700个氨基酸，约150个氨基酸至约650个氨基酸，约150个氨基酸至约600个氨基酸，约150个氨基酸至约550个氨基酸，约150个氨基酸至约500个氨基酸，约150个氨基酸至约480个氨基酸，约150个氨基酸至约460个氨基酸，约150个氨基酸至约440个氨基酸，约150个氨基酸至约420个氨基酸，约150个氨基酸至约400个氨基酸，约150个氨基酸至约380个氨基酸，约150个氨基酸至约360个氨基酸，约150个氨基酸至约340个氨基酸，约150个氨基酸至约320个氨基酸，约150个氨基酸至约300个氨基酸，约150个氨基酸至约280个氨基酸，约150个氨基酸至约260个氨基酸，约150个氨基酸至约240个氨基酸，约150个氨基酸至约220个氨基酸，约150个氨基酸至约200个氨基酸，约200个氨基酸至约3000个氨基酸，约200个氨基酸至约2500个氨基酸，约200个氨基酸至约2000个氨基酸，约200个氨基酸至约1500个氨基酸，约200个氨基酸至约1000个氨基酸，约200个氨基酸至约950个氨基酸，约200个氨基酸至约900个氨基酸，约200个氨基酸至约850个氨基酸，约200个氨基酸至约800个氨基酸，约200个氨基酸至约750个氨基酸，约200个氨基酸至约700个氨基酸，约200个氨基酸至约650个氨基酸，约200个氨基酸至约600个氨基酸，约200个氨基酸至约550个氨基酸，约200个氨基酸至约500个氨基酸，约200个氨基酸至约480个氨基酸，约200个氨基酸至约460个氨基酸，约200个氨基酸至约440个氨基酸，约200个氨基酸至约420个氨基酸，约200个氨基酸至约400个氨基酸，约200个氨基酸至约380个氨基酸，约200个氨基酸至约360个氨基酸，约200个氨基酸至约340个氨基酸，约200个氨基酸至约320个氨基酸，约200个氨基酸至约300个氨基酸，约200个氨基酸至约280个氨基酸，约200个氨基酸至约260个氨基酸，约200个氨基酸至约240个氨基酸，约200个氨基酸至约220个氨基酸，约220个氨基酸至约3000个氨基酸，约220个氨基酸至约2500个氨基酸，约220个氨基酸至约2000个氨基酸，约220个氨基酸至约1500个氨基酸，约220个氨基酸至约1000个氨基酸，约220个氨基酸至约950个氨基酸，约220个氨基酸至约900个氨基酸，约220个氨基酸至约850个氨基酸，约220个氨基酸至约800个氨基酸，约220个氨基酸至约750个氨基酸，约220个氨基酸至约700个氨基酸，约220个氨基酸至约650个氨基酸，约220个氨基酸至约600个氨基酸，约220个氨基酸至约550个氨基酸，约220个氨基酸至约500个氨基酸，约220个氨基酸至约480个氨基酸，约220个氨基酸至约460个氨基酸，约220个氨基酸至约440个氨基酸，约220个氨基酸至约420个氨基酸，约220个氨基酸至约400个氨基酸，约220个氨基酸至约380个氨基酸，约220个氨基酸至约360个氨基酸，约220个氨基酸至约340个氨基酸，约220个氨基酸至约320个氨基酸，约220个氨基酸至约300个氨基酸，约220个氨基酸至约280个氨基酸，约220个氨基酸至约260个氨基酸，约220个氨基酸至约240个氨基酸，约240个氨基酸至约3000个氨基酸，约240个氨基酸至约2500个氨基酸，约240个氨基酸至约2000个氨基酸，约240个氨基酸至约1500个氨基酸，约240个氨基酸至约1000个氨基酸，约240个氨基酸至约950个氨基酸，约240个氨基酸至约900个氨基酸，约240个氨基酸至约850个氨基酸，约240个氨基酸至约800个氨基酸，约240个氨基酸至约750个氨基酸，约240个氨基酸至约700个氨基酸，约240个氨基酸至约650个氨基酸，约240个氨基酸至约600个氨基酸，约240个氨基酸至约550个氨基酸，约240个氨基酸至约500个氨基酸，约240个氨基酸至约480个氨基酸，约240个氨基酸至约460个氨基酸，约240个氨基酸至约440个氨基酸，约240个氨基酸至约420个氨基酸，约240个氨基酸至约400个氨基酸，约240个氨基酸至约380个氨基酸，约240个氨基酸至约360个氨基酸，约240个氨基酸至约340个氨基酸，约240个氨基酸至约320个氨基酸，约240个氨基酸至约300个氨基酸，约240个氨基酸至约280个氨基酸，约240个氨基酸至约260个氨基酸，约260个氨基酸至约3000个氨基酸，约260个氨基酸至约2500个氨基酸，约260个氨基酸至约2000个氨基酸，约260个氨基酸至约1500个氨基酸，约260个氨基酸至约1000个氨基酸，约260个氨基酸至约950个氨基酸，约260个氨基酸至约900个氨基酸，约260个氨基酸至约850个氨基酸，约260个氨基酸至约800个氨基酸，约260个氨基酸至约750个氨基酸，约260个氨基酸至约700个氨基酸，约260个氨基酸至约650个氨基酸，约260个氨基酸至约600个氨基酸，约260个氨基酸至约550个氨基酸，约260个氨基酸至约500个氨基酸，约260个氨基酸至约480个氨基酸，约260个氨基酸至约460个氨基酸，约260个氨基酸至约440个氨基酸，约260个氨基酸至约420个氨基酸，约260个氨基酸至约400个氨基酸，约260个氨基酸至约380个氨基酸，约260个氨基酸至约360个氨基酸，约260个氨基酸至约340个氨基酸，约260个氨基酸至约320个氨基酸，约260个氨基酸至约300个氨基酸，约260个氨基酸至约280个氨基酸，约280个氨基酸至约3000个氨基酸，约280个氨基酸至约2500个氨基酸，约280个氨基酸至约2000个氨基酸，约280个氨基酸至约1500个氨基酸，约280个氨基酸至约1000个氨基酸，约280个氨基酸至约950个氨基酸，约280个氨基酸至约900个氨基酸，约280个氨基酸至约850个氨基酸，约280个氨基酸至约800个氨基酸，约280个氨基酸至约750个氨基酸，约280个氨基酸至约700个氨基酸，约280个氨基酸至约650个氨基酸，约280个氨基酸至约600个氨基酸，约280个氨基酸至约550个氨基酸，约280个氨基酸至约500个氨基酸，约280个氨基酸至约480个氨基酸，约280个氨基酸至约460个氨基酸，约280个氨基酸至约440个氨基酸，约280个氨基酸至约420个氨基酸，约280个氨基酸至约400个氨基酸，约280个氨基酸至约380个氨基酸，约280个氨基酸至约360个氨基酸，约280个氨基酸至约340个氨基酸，约280个氨基酸至约320个氨基酸，约280个氨基酸至约300个氨基酸，约300个氨基酸至约3000个氨基酸，约300个氨基酸至约2500个氨基酸，约300个氨基酸至约2000个氨基酸，约300个氨基酸至约1500个氨基酸，约300个氨基酸至约1000个氨基酸，约300个氨基酸至约950个氨基酸，约300个氨基酸至约900个氨基酸，约300个氨基酸至约850个氨基酸，约300个氨基酸至约800个氨基酸，约300个氨基酸至约750个氨基酸，约300个氨基酸至约700个氨基酸，约300个氨基酸至约650个氨基酸，约300个氨基酸至约600个氨基酸，约300个氨基酸至约550个氨基酸，约300个氨基酸至约500个氨基酸，约300个氨基酸至约480个氨基酸，约300个氨基酸至约460个氨基酸，约300个氨基酸至约440个氨基酸，约300个氨基酸至约420个氨基酸，约300个氨基酸至约400个氨基酸，约300个氨基酸至约380个氨基酸，约300个氨基酸至约360个氨基酸，约300个氨基酸至约340个氨基酸，约300个氨基酸至约320个氨基酸，约320个氨基酸至约3000个氨基酸，约320个氨基酸至约2500个氨基酸，约320个氨基酸至约2000个氨基酸，约320个氨基酸至约1500个氨基酸，约320个氨基酸至约1000个氨基酸，约320个氨基酸至约950个氨基酸，约320个氨基酸至约900个氨基酸，约320个氨基酸至约850个氨基酸，约320个氨基酸至约800个氨基酸，约320个氨基酸至约750个氨基酸，约320个氨基酸至约700个氨基酸，约320个氨基酸至约650个氨基酸，约320个氨基酸至约600个氨基酸，约320个氨基酸至约550个氨基酸，约320个氨基酸至约500个氨基酸，约320个氨基酸至约480个氨基酸，约320个氨基酸至约460个氨基酸，约320个氨基酸至约440个氨基酸，约320个氨基酸至约420个氨基酸，约320个氨基酸至约400个氨基酸，约320个氨基酸至约380个氨基酸，约320个氨基酸至约360个氨基酸，约320个氨基酸至约340个氨基酸，约340个氨基酸至约3000个氨基酸，约340个氨基酸至约2500个氨基酸，约340个氨基酸至约2000个氨基酸，约340个氨基酸至约1500个氨基酸，约340个氨基酸至约1000个氨基酸，约340个氨基酸至约950个氨基酸，约340个氨基酸至约900个氨基酸，约340个氨基酸至约850个氨基酸，约340个氨基酸至约800个氨基酸，约340个氨基酸至约750个氨基酸，约340个氨基酸至约700个氨基酸，约340个氨基酸至约650个氨基酸，约340个氨基酸至约600个氨基酸，约340个氨基酸至约550个氨基酸，约340个氨基酸至约500个氨基酸，约340个氨基酸至约480个氨基酸，约340个氨基酸至约460个氨基酸，约340个氨基酸至约440个氨基酸，约340个氨基酸至约420个氨基酸，约340个氨基酸至约400个氨基酸，约340个氨基酸至约380个氨基酸，约340个氨基酸至约360个氨基酸，约360个氨基酸至约3000个氨基酸，约360个氨基酸至约2500个氨基酸，约360个氨基酸至约2000个氨基酸，约360个氨基酸至约1500个氨基酸，约360个氨基酸至约1000个氨基酸，约360个氨基酸至约950个氨基酸，约360个氨基酸至约900个氨基酸，约360个氨基酸至约850个氨基酸，约360个氨基酸至约800个氨基酸，约360个氨基酸至约750个氨基酸，约360个氨基酸至约700个氨基酸，约360个氨基酸至约650个氨基酸，约360个氨基酸至约600个氨基酸，约360个氨基酸至约550个氨基酸，约360个氨基酸至约500个氨基酸，约360个氨基酸至约480个氨基酸，约360个氨基酸至约460个氨基酸，约360个氨基酸至约440个氨基酸，约360个氨基酸至约420个氨基酸，约360个氨基酸至约400个氨基酸，约360个氨基酸至约380个氨基酸，约380个氨基酸至约3000个氨基酸，约380个氨基酸至约2500个氨基酸，约380个氨基酸至约2000个氨基酸，约380个氨基酸至约1500个氨基酸，约380个氨基酸至约1000个氨基酸，约380个氨基酸至约950个氨基酸，约380个氨基酸至约900个氨基酸，约380个氨基酸至约850个氨基酸，约380个氨基酸至约800个氨基酸，约380个氨基酸至约750个氨基酸，约380个氨基酸至约700个氨基酸，约380个氨基酸至约650个氨基酸，约380个氨基酸至约600个氨基酸，约380个氨基酸至约550个氨基酸，约380个氨基酸至约500个氨基酸，约380个氨基酸至约480个氨基酸，约380个氨基酸至约460个氨基酸，约380个氨基酸至约440个氨基酸，约380个氨基酸至约420个氨基酸，约380个氨基酸至约400个氨基酸，约400个氨基酸至约3000个氨基酸，约400个氨基酸至约2500个氨基酸，约400个氨基酸至约2000个氨基酸，约400个氨基酸至约1500个氨基酸，约400个氨基酸至约1000个氨基酸，约400个氨基酸至约950个氨基酸，约400个氨基酸至约900个氨基酸，约400个氨基酸至约850个氨基酸，约400个氨基酸至约800个氨基酸，约400个氨基酸至约750个氨基酸，约400个氨基酸至约700个氨基酸，约400个氨基酸至约650个氨基酸，约400个氨基酸至约600个氨基酸，约400个氨基酸至约550个氨基酸，约400个氨基酸至约500个氨基酸，约400个氨基酸至约480个氨基酸，约400个氨基酸至约460个氨基酸，约400个氨基酸至约440个氨基酸，约400个氨基酸至约420个氨基酸，约420个氨基酸至约3000个氨基酸，约420个氨基酸至约2500个氨基酸，约420个氨基酸至约2000个氨基酸，约420个氨基酸至约1500个氨基酸，约420个氨基酸至约1000个氨基酸，约420个氨基酸至约950个氨基酸，约420个氨基酸至约900个氨基酸，约420个氨基酸至约850个氨基酸，约420个氨基酸至约800个氨基酸，约420个氨基酸至约750个氨基酸，约420个氨基酸至约700个氨基酸，约420个氨基酸至约650个氨基酸，约420个氨基酸至约600个氨基酸，约420个氨基酸至约550个氨基酸，约420个氨基酸至约500个氨基酸，约420个氨基酸至约480个氨基酸，约420个氨基酸至约460个氨基酸，约420个氨基酸至约440个氨基酸，约440个氨基酸至约3000个氨基酸，约440个氨基酸至约2500个氨基酸，约440个氨基酸至约2000个氨基酸，约440个氨基酸至约1500个氨基酸，约440个氨基酸至约1000个氨基酸，约440个氨基酸至约950个氨基酸，约440个氨基酸至约900个氨基酸，约440个氨基酸至约850个氨基酸，约440个氨基酸至约800个氨基酸，约440个氨基酸至约750个氨基酸，约440个氨基酸至约700个氨基酸，约440个氨基酸至约650个氨基酸，约440个氨基酸至约600个氨基酸，约440个氨基酸至约550个氨基酸，约440个氨基酸至约500个氨基酸，约440个氨基酸至约480个氨基酸，约440个氨基酸至约460个氨基酸，约460个氨基酸至约3000个氨基酸，约460个氨基酸至约2500个氨基酸，约460个氨基酸至约2000个氨基酸，约460个氨基酸至约1500个氨基酸，约460个氨基酸至约1000个氨基酸，约460个氨基酸至约950个氨基酸，约460个氨基酸至约900个氨基酸，约460个氨基酸至约850个氨基酸，约460个氨基酸至约800个氨基酸，约460个氨基酸至约750个氨基酸，约460个氨基酸至约700个氨基酸，约460个氨基酸至约650个氨基酸，约460个氨基酸至约600个氨基酸，约460个氨基酸至约550个氨基酸，约460个氨基酸至约500个氨基酸，约460个氨基酸至约480个氨基酸，约480个氨基酸至约3000个氨基酸，约480个氨基酸至约2500个氨基酸，约480个氨基酸至约2000个氨基酸，约480个氨基酸至约1500个氨基酸，约480个氨基酸至约1000个氨基酸，约480个氨基酸至约950个氨基酸，约480个氨基酸至约900个氨基酸，约480个氨基酸至约850个氨基酸，约480个氨基酸至约800个氨基酸，约480个氨基酸至约750个氨基酸，约480个氨基酸至约700个氨基酸，约480个氨基酸至约650个氨基酸，约480个氨基酸至约600个氨基酸，约480个氨基酸至约550个氨基酸，约480个氨基酸至约500个氨基酸，约500个氨基酸至约3000个氨基酸，约500个氨基酸至约2500个氨基酸，约500个氨基酸至约2000个氨基酸，约500个氨基酸至约1500个氨基酸，约500个氨基酸至约1000个氨基酸，约500个氨基酸至约950个氨基酸，约500个氨基酸至约900个氨基酸，约500个氨基酸至约850个氨基酸，约500个氨基酸至约800个氨基酸，约500个氨基酸至约750个氨基酸，约500个氨基酸至约700个氨基酸，约500个氨基酸至约650个氨基酸，约500个氨基酸至约600个氨基酸，约500个氨基酸至约550个氨基酸，约550个氨基酸至约3000个氨基酸，约550个氨基酸至约2500个氨基酸，约550个氨基酸至约2000个氨基酸，约550个氨基酸至约1500个氨基酸，约550个氨基酸至约1000个氨基酸，约550个氨基酸至约950个氨基酸，约550个氨基酸至约900个氨基酸，约550个氨基酸至约850个氨基酸，约550个氨基酸至约800个氨基酸，约550个氨基酸至约750个氨基酸，约550个氨基酸至约700个氨基酸，约550个氨基酸至约650个氨基酸，约550个氨基酸至约600个氨基酸，约600个氨基酸至约3000个氨基酸，约600个氨基酸至约2500个氨基酸，约600个氨基酸至约2000个氨基酸，约600个氨基酸至约1500个氨基酸，约600个氨基酸至约1000个氨基酸，约600个氨基酸至约950个氨基酸，约600个氨基酸至约900个氨基酸，约600个氨基酸至约850个氨基酸，约600个氨基酸至约800个氨基酸，约600个氨基酸至约750个氨基酸，约600个氨基酸至约700个氨基酸，约600个氨基酸至约650个氨基酸，约650个氨基酸至约3000个氨基酸，约650个氨基酸至约2500个氨基酸，约650个氨基酸至约2000个氨基酸，约650个氨基酸至约1500个氨基酸，约650个氨基酸至约1000个氨基酸，约650个氨基酸至约950个氨基酸，约650个氨基酸至约900个氨基酸，约650个氨基酸至约850个氨基酸，约650个氨基酸至约800个氨基酸，约650个氨基酸至约750个氨基酸，约650个氨基酸至约700个氨基酸，约700个氨基酸至约3000个氨基酸，约700个氨基酸至约2500个氨基酸，约700个氨基酸至约2000个氨基酸，约700个氨基酸至约1500个氨基酸，约700个氨基酸至约1000个氨基酸，约700个氨基酸至约950个氨基酸，约700个氨基酸至约900个氨基酸，约700个氨基酸至约850个氨基酸，约700个氨基酸至约800个氨基酸，约700个氨基酸至约750个氨基酸，约750个氨基酸至约3000个氨基酸，约750个氨基酸至约2500个氨基酸，约750个氨基酸至约2000个氨基酸，约750个氨基酸至约1500个氨基酸，约750个氨基酸至约1000个氨基酸，约750个氨基酸至约950个氨基酸，约750个氨基酸至约900个氨基酸，约750个氨基酸至约850个氨基酸，约750个氨基酸至约800个氨基酸，约800个氨基酸至约3000个氨基酸，约800个氨基酸至约2500个氨基酸，约800个氨基酸至约2000个氨基酸，约800个氨基酸至约1500个氨基酸，约800个氨基酸至约1000个氨基酸，约800个氨基酸至约950个氨基酸，约800个氨基酸至约900个氨基酸，约800个氨基酸至约850个氨基酸，约850个氨基酸至约3000个氨基酸，约850个氨基酸至约2500个氨基酸，约850个氨基酸至约2000个氨基酸，约850个氨基酸至约1500个氨基酸，约850个氨基酸至约1000个氨基酸，约850个氨基酸至约950个氨基酸，约850个氨基酸至约900个氨基酸，约900个氨基酸至约3000个氨基酸，约900个氨基酸至约2500个氨基酸，约900个氨基酸至约2000个氨基酸，约900个氨基酸至约1500个氨基酸，约900个氨基酸至约1000个氨基酸，约900个氨基酸至约950个氨基酸，约950个氨基酸至约3000个氨基酸，约950个氨基酸至约2500个氨基酸，约950个氨基酸至约2000个氨基酸，约950个氨基酸至约1500个氨基酸，约950个氨基酸至约1000个氨基酸，约1000个氨基酸至约3000个氨基酸，约1000个氨基酸至约2500个氨基酸，约1000个氨基酸至约2000个氨基酸，约1000个氨基酸至约1500个氨基酸，约1500个氨基酸至约3000个氨基酸，约1500个氨基酸至约2500个氨基酸，约1500个氨基酸至约2000个氨基酸，约2000个氨基酸至约3000个氨基酸，约2000个氨基酸至约2500个氨基酸，或约2500个氨基酸至约3000个氨基酸。图1和图2描绘本文提供的示例性多链嵌合多肽的图。

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如，本文描述的任一个第一靶标结合结构域)与接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包含在第一靶标结合结构域(例如，本文描述的任一个示例性第一靶标结合结构域)与接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，接头结构域(例如，本文描述的任一种示例性接头结构域)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的任一个示例性第一结构域)在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包含在接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的任一个示例性第一结构域)之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的任一个示例性第二结构域)与第二靶标结合结构域(例如，本文描述的任一个示例性第二靶标结合结构域)在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，

第二嵌合多肽还包含在一对亲和结构域中的第二结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的任一个示例性第二结构域)与第二靶标结合结构域(例如，本文描述的任一个示例性第二靶标结合结构域)之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。

组织因子

人组织因子是263个氨基酸的跨膜蛋白，其含有三个结构域：(1)219个氨基酸的N端细胞外结构域(残基1-219)；(2)22个氨基酸的跨膜结构域(残基220-242)；和(3)21个氨基酸的胞质C端尾(残基242-263)((UniProtKB标识号：P13726)。胞质尾在Ser

由两个纤连蛋白III型结构域构成的组织因子的细胞外结构域通过六氨基酸接头与跨膜结构域连接。这一接头提供构象灵活性，以使组织因子细胞外结构域与其跨膜结构域和胞质结构域解偶联。每个组织因子纤连蛋白III型模块均由两个重叠的β折叠构成，其中顶层折叠结构域含有三个反平行的β链，而底层折叠含有四个β链。β链通过β环在链βA和βB、βC和βD以及βE和βF之间连接，其在两个模块中均构象保守。有三个短的α螺旋段连接β链。组织因子的独特特征是链β10与链β11之间的17个氨基酸的β-发夹，这不是纤连蛋白超家族的常见成分。N端结构域还在β6F与β7G之间包含一个12个氨基酸的环，所述环不存在于C端结构域，并且是组织因子特有的。这种纤连蛋白III型结构域结构是免疫球蛋白样家族蛋白质折叠的特征，并且在广泛多种细胞外蛋白中是保守的。

一旦酶原FVII与组织结合形成活性组织因子-FVIIa复合物，就可通过有限的蛋白水解将其迅速转化成FVIIa。FVIIa以大约0.1nM(血浆FVII的1％)的浓度作为酶循环，也可以直接结合到组织因子。组织因子与FVIIa在组织因子-FVIIa复合物上的变构相互作用极大地提高了FVIIa的酶促活性：小的发色肽基底物的水解速率提高约20到100倍，并且天然大分子底物FIX和FX的激活速率提高接近一百万倍。与结合到组织因子时FVIIa活性位点的变构激活相一致，磷脂双层上组织因子-FVIIa复合物的形成(即，当磷脂酰基-L-丝氨酸暴露在膜表面时)以Ca

FVII是约50kDa的单链多肽，由406个氨基酸残基组成，具有N端富含γ-羧基谷氨酸(GLA)的结构域、两个表皮生长因子样结构域(EGF1和EFG2)和C端丝氨酸蛋白酶结构域。FVII通过在EGF2与蛋白酶结构域之间的短接头区中Ile-

FVIIa活性位点在膜表面上方的组织因子介导的定位对于FVIIa朝向同源底物很重要。游离FVIIa在结合到膜上时采用稳定扩展结构，其活性位点定位在膜表面上方约

丙氨酸扫描诱变已用于评定组织因子细胞外结构域中特定氨基酸侧链对与FVIIa相互作用的作用(Gibbs等人,《生物化学(Biochemistry)》33(47):14003-14010,1994；Schullek等人,《生物化学杂志(J Biol Chem)》269(30):19399-19403,1994)。丙氨酸取代鉴别出有限数量的残基位置，在这些位置处，丙氨酸置换引起对FVIIa结合的亲和力降低5到10倍。发现这些残基侧链中的大多数在晶体结构中充分暴露于溶剂，与大分子配体相互作用一致。FVIIa配体结合位点位于两个模块之间边界处的宽广区上。在C模块中，位于突出的B-C环上的残基Arg

组织因子-FVIIa的已知生理底物是FVII、FIX和FX以及某些蛋白酶激活受体。突变分析已鉴别出许多残基，当突变时，所述残基支持对小肽基底物的完全FVIIa酰胺分解活性，但缺少支持大分子底物(即，FVII、FIX和FX)激活的能力(Ruf等人,《生物化学杂志》267(31):22206-22210,1992；Ruf等人,《生物化学杂志》267(9):6375-6381,1992；Huang等人,《生物化学杂志》271(36):21752-21757,1996；Kirchhofer等人,《生物化学》39(25):7380-7387,2000)。已显示在残基159-165处的组织因子环区和在这一柔性环中或附近的残基对于组织因子-FVIIa复合物的蛋白水解活性至关重要。这定义了提出的组织因子的底物结合位点外区，所述区与FVIIa活性位点相距甚远。甘氨酸残基被稍大的残基丙氨酸取代会大大损害组织因子-FVIIa的蛋白水解活性。这表明甘氨酸提供的柔性对于用于组织因子大分子底物识别的残基159-165的环至关重要。

还证明了残基Lys

示例性接头结构域和IgG1抗体构建体

在本文描述的任一种方法、组合物或试剂盒的一些实例中，接头结构域可以是或包括由同源IgG1抗体(例如，单克隆抗体)识别的任何抗原。IgG1抗体与抗体的其它IgG类别的区别在于其恒定区，尤其铰链区和上部CH2结构域(参见例如Vadarsson等人,IgG子类和同种异型：从结构到效应功能(IgG Subclasses and Allotypes:From Structure toEffector Functions),《免疫学前沿(Front Immunol.)》,5,章节520,2014)。人IgG1是唯一已知结合到人CD16a并激活人CD16a的信号传导的IgG子类。

多个接头结构域中的任何一个都可以用于本文提供的单链嵌合多肽和多链嵌合多肽中。在某些实施例中，接头结构域由抗体(例如，IgG1抗体)或抗体片段识别。在一些实施例中，接头结构域是由同源抗κ轻链IgG1抗体识别的抗体κ轻链。在一些实施例中，接头结构域是由同源抗λ轻链人IgG1抗体识别的抗体λ轻链。多个κ轻链和λ轻链是本领域已知的(参见例如Smith等人,抗原性质和复杂度影响人抗体轻链使用和特异性(Antigen Natureand Complexity Influence Human Antibody Light Chain Usage and Specificity),《疫苗(Vaccine)》,34(25):2813-2820,2016。在一些实施例中，接头结构域是或包含由同源人IgG1抗体(例如，单克隆抗体)识别的人多肽(例如，抗体的人κ轻链或抗体的人λ轻链)。在一些实施例中，同源人IgG1抗体包括至少两个抗原结合结构域，并且每个抗原结合结构域特异性结合到接头结构域。在一些实施例中，同源人IgG1抗体包括至少两个抗原结合结构域，并且仅抗原结合结构域的子组(例如，一个)特异性结合到接头结构域。在一些实施例中，接头结构域可以是本文描述的任一个可溶性组织因子结构域。

在本文描述的任一种方法、组合物和试剂盒的一些实施例中，IgG1抗体构建体可以是IgG1抗体(例如，特异性结合到接头结构域的单克隆或多克隆IgG1抗体)。在本文描述的任一种方法、组合物和试剂盒的一些实施例中，IgG1抗体构建体可以是抗体或抗体片段，其包括IgG1 Fc区(例如，人IgG1 Fc区)并且特异性结合到接头结构域。如本领域已知，IgG1Fc区结合到CD16a(FcRγIII)(例如，人CD16a)并且诱导其细胞内信号传导。在一些实施例中，IgG1抗体构建体可以是单链或多链多肽，其包括能够特异性结合到CD16a(FcRγIII)(例如，人CD16a)并且能够诱导其在自然杀手细胞(例如，人自然杀手细胞)内的细胞内信号传导的Fc区，并且特异性结合到接头结构域。在一些实施例中，IgG1抗体构建体可以是单链或多链多肽，其包括Fc区并且特异性结合到接头结构域，所述Fc区包括与野生型IgG1 Fc结构域(例如，野生型人IgG1 Fc结构域，例如SEQ ID NO:96)至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同或至少99％相同)的序列并且能够特异性结合到CD16a(FcRγIII)(例如，人CD16a)并能够诱导其在自然杀手细胞(例如，人自然杀手细胞)中的细胞内信号传导。在本文描述的任一种方法、组合物或试剂盒的一些实施例中，IgG1抗体构建体可以是抗体或抗体片段，其特异性结合到接头结构域并且包括非IgG1 Fc区(例如，IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)，所述非IgG1 Fc区已经过改变(例如，取代野生型非IgG1 Fc区中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)，使得非IgG1 Fc区能够结合到CD16a(FcRγIII)(例如，人CD16a)并诱导其在自然杀手细胞(例如，人自然杀手细胞)中的细胞内信号传导。在本文描述的任一种方法、组合物或试剂盒的一些实施例中，IgG1抗体构建体特异性结合到接头结构域并且包括非人Fc区(例如，来自非人抗体的Fc区)，所述非人Fc区已经过改变(例如，取代野生型非人Fc区中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)，使得非人Fc区能够结合到人CD16a(人FcRγIII)并诱导其在自然杀手细胞(例如，人自然杀手细胞)中的细胞内信号传导。

野生型人IgG1 Fc区(SEQ ID NO:96)

PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

野生型人IgG2 Fc区(SEQ ID NO:97)

APPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

野生型人IgG3 Fc区(SEQ ID NO:98)

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野生型人IgG4 Fc区(SEQ ID NO:99)

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在一些实施例中，接头结构域可以具有以下总长度：约20个氨基酸至约220个氨基酸，约20个氨基酸至约215个氨基酸，约20个氨基酸至约210个氨基酸，约20个氨基酸至约205个氨基酸，约20个氨基酸至约200个氨基酸，约20个氨基酸至约195个氨基酸，约20个氨基酸至约190个氨基酸，约20个氨基酸至约185个氨基酸，约20个氨基酸至约180个氨基酸，约20个氨基酸至约175个氨基酸，约20个氨基酸至约170个氨基酸，约20个氨基酸至约165个氨基酸，约20个氨基酸至约160个氨基酸，约20个氨基酸至约155个氨基酸，约20个氨基酸至约150个氨基酸，约20个氨基酸至约145个氨基酸，约20个氨基酸至约140个氨基酸，约20个氨基酸至约135个氨基酸，约20个氨基酸至约130个氨基酸，约20个氨基酸至约125个氨基酸，约20个氨基酸至约120个氨基酸，约20个氨基酸至约115个氨基酸，约20个氨基酸至约110个氨基酸，约20个氨基酸至约105个氨基酸，约20个氨基酸至约100个氨基酸，约20个氨基酸至约95个氨基酸，约20个氨基酸至约90个氨基酸，约20个氨基酸至约85个氨基酸，约20个氨基酸至约80个氨基酸，约20个氨基酸至约75个氨基酸，约20个氨基酸至约70个氨基酸，约20个氨基酸至约60个氨基酸，约20个氨基酸至约50个氨基酸，约20个氨基酸至约40个氨基酸，约20个氨基酸至约30个氨基酸，约30个氨基酸至约220个氨基酸，约30个氨基酸至约215个氨基酸，约30个氨基酸至约210个氨基酸，约30个氨基酸至约205个氨基酸，约30个氨基酸至约200个氨基酸，约30个氨基酸至约195个氨基酸，约30个氨基酸至约190个氨基酸，约30个氨基酸至约185个氨基酸，约30个氨基酸至约180个氨基酸，约30个氨基酸至约175个氨基酸，约30个氨基酸至约170个氨基酸，约30个氨基酸至约165个氨基酸，约30个氨基酸至约160个氨基酸，约30个氨基酸至约155个氨基酸，约30个氨基酸至约150个氨基酸，约30个氨基酸至约145个氨基酸，约30个氨基酸至约140个氨基酸，约30个氨基酸至约135个氨基酸，约30个氨基酸至约130个氨基酸，约30个氨基酸至约125个氨基酸，约30个氨基酸至约120个氨基酸，约30个氨基酸至约115个氨基酸，约30个氨基酸至约110个氨基酸，约30个氨基酸至约105个氨基酸，约30个氨基酸至约100个氨基酸，约30个氨基酸至约95个氨基酸，约30个氨基酸至约90个氨基酸，约30个氨基酸至约85个氨基酸，约30个氨基酸至约80个氨基酸，约30个氨基酸至约75个氨基酸，约30个氨基酸至约70个氨基酸，约30个氨基酸至约60个氨基酸，约30个氨基酸至约50个氨基酸，约30个氨基酸至约40个氨基酸，约40个氨基酸至约220个氨基酸，约40个氨基酸至约215个氨基酸，约40个氨基酸至约210个氨基酸，约40个氨基酸至约205个氨基酸，约40个氨基酸至约200个氨基酸，约40个氨基酸至约195个氨基酸，约40个氨基酸至约190个氨基酸，约40个氨基酸至约185个氨基酸，约40个氨基酸至约180个氨基酸，约40个氨基酸至约175个氨基酸，约40个氨基酸至约170个氨基酸，约40个氨基酸至约165个氨基酸，约40个氨基酸至约160个氨基酸，约40个氨基酸至约155个氨基酸，约40个氨基酸至约150个氨基酸，约40个氨基酸至约145个氨基酸，约40个氨基酸至约140个氨基酸，约40个氨基酸至约135个氨基酸，约40个氨基酸至约130个氨基酸，约40个氨基酸至约125个氨基酸，约40个氨基酸至约120个氨基酸，约40个氨基酸至约115个氨基酸，约40个氨基酸至约110个氨基酸，约40个氨基酸至约105个氨基酸，约40个氨基酸至约100个氨基酸，约40个氨基酸至约95个氨基酸，约40个氨基酸至约90个氨基酸，约40个氨基酸至约85个氨基酸，约40个氨基酸至约80个氨基酸，约40个氨基酸至约75个氨基酸，约40个氨基酸至约70个氨基酸，约40个氨基酸至约60个氨基酸，约40个氨基酸至约50个氨基酸，约50个氨基酸至约220个氨基酸，约50个氨基酸至约215个氨基酸，约50个氨基酸至约210个氨基酸，约50个氨基酸至约205个氨基酸，约50个氨基酸至约200个氨基酸，约50个氨基酸至约195个氨基酸，约50个氨基酸至约190个氨基酸，约50个氨基酸至约185个氨基酸，约50个氨基酸至约180个氨基酸，约50个氨基酸至约175个氨基酸，约50个氨基酸至约170个氨基酸，约50个氨基酸至约165个氨基酸，约50个氨基酸至约160个氨基酸，约50个氨基酸至约155个氨基酸，约50个氨基酸至约150个氨基酸，约50个氨基酸至约145个氨基酸，约50个氨基酸至约140个氨基酸，约50个氨基酸至约135个氨基酸，约50个氨基酸至约130个氨基酸，约50个氨基酸至约125个氨基酸，约50个氨基酸至约120个氨基酸，约50个氨基酸至约115个氨基酸，约50个氨基酸至约110个氨基酸，约50个氨基酸至约105个氨基酸，约50个氨基酸至约100个氨基酸，约50个氨基酸至约95个氨基酸，约50个氨基酸至约90个氨基酸，约50个氨基酸至约85个氨基酸，约50个氨基酸至约80个氨基酸，约50个氨基酸至约75个氨基酸，约50个氨基酸至约70个氨基酸，约50个氨基酸至约60个氨基酸，约60个氨基酸至约220个氨基酸，约60个氨基酸至约215个氨基酸，约60个氨基酸至约210个氨基酸，约60个氨基酸至约205个氨基酸，约60个氨基酸至约200个氨基酸，约60个氨基酸至约195个氨基酸，约60个氨基酸至约190个氨基酸，约60个氨基酸至约185个氨基酸，约60个氨基酸至约180个氨基酸，约60个氨基酸至约175个氨基酸，约60个氨基酸至约170个氨基酸，约60个氨基酸至约165个氨基酸，约60个氨基酸至约160个氨基酸，约60个氨基酸至约155个氨基酸，约60个氨基酸至约150个氨基酸，约60个氨基酸至约145个氨基酸，约60个氨基酸至约140个氨基酸，约60个氨基酸至约135个氨基酸，约60个氨基酸至约130个氨基酸，约60个氨基酸至约125个氨基酸，约60个氨基酸至约120个氨基酸，约60个氨基酸至约115个氨基酸，约60个氨基酸至约110个氨基酸，约60个氨基酸至约105个氨基酸，约60个氨基酸至约100个氨基酸，约60个氨基酸至约95个氨基酸，约60个氨基酸至约90个氨基酸，约60个氨基酸至约85个氨基酸，约60个氨基酸至约80个氨基酸，约60个氨基酸至约75个氨基酸，约60个氨基酸至约70个氨基酸，约70个氨基酸至约220个氨基酸，约70个氨基酸至约215个氨基酸，约70个氨基酸至约210个氨基酸，约70个氨基酸至约205个氨基酸，约70个氨基酸至约200个氨基酸，约70个氨基酸至约195个氨基酸，约70个氨基酸至约190个氨基酸，约70个氨基酸至约185个氨基酸，约70个氨基酸至约180个氨基酸，约70个氨基酸至约175个氨基酸，约70个氨基酸至约170个氨基酸，约70个氨基酸至约165个氨基酸，约70个氨基酸至约160个氨基酸，约70个氨基酸至约155个氨基酸，约70个氨基酸至约150个氨基酸，约70个氨基酸至约145个氨基酸，约70个氨基酸至约140个氨基酸，约70个氨基酸至约135个氨基酸，约70个氨基酸至约130个氨基酸，约70个氨基酸至约125个氨基酸，约70个氨基酸至约120个氨基酸，约70个氨基酸至约115个氨基酸，约70个氨基酸至约110个氨基酸，约70个氨基酸至约105个氨基酸，约70个氨基酸至约100个氨基酸，约70个氨基酸至约95个氨基酸，约70个氨基酸至约90个氨基酸，约70个氨基酸至约85个氨基酸，约70个氨基酸至约80个氨基酸，约80个氨基酸至约220个氨基酸，约80个氨基酸至约215个氨基酸，约80个氨基酸至约210个氨基酸，约80个氨基酸至约205个氨基酸，约80个氨基酸至约200个氨基酸，约80个氨基酸至约195个氨基酸，约80个氨基酸至约190个氨基酸，约80个氨基酸至约185个氨基酸，约80个氨基酸至约180个氨基酸，约80个氨基酸至约175个氨基酸，约80个氨基酸至约170个氨基酸，约80个氨基酸至约165个氨基酸，约80个氨基酸至约160个氨基酸，约80个氨基酸至约155个氨基酸，约80个氨基酸至约150个氨基酸，约80个氨基酸至约145个氨基酸，约80个氨基酸至约140个氨基酸，约80个氨基酸至约135个氨基酸，约80个氨基酸至约130个氨基酸，约80个氨基酸至约125个氨基酸，约80个氨基酸至约120个氨基酸，约80个氨基酸至约115个氨基酸，约80个氨基酸至约110个氨基酸，约80个氨基酸至约105个氨基酸，约80个氨基酸至约100个氨基酸，约80个氨基酸至约95个氨基酸，约80个氨基酸至约90个氨基酸，约90个氨基酸至约220个氨基酸，约90个氨基酸至约215个氨基酸，约90个氨基酸至约210个氨基酸，约90个氨基酸至约205个氨基酸，约90个氨基酸至约200个氨基酸，约90个氨基酸至约195个氨基酸，约90个氨基酸至约190个氨基酸，约90个氨基酸至约185个氨基酸，约90个氨基酸至约180个氨基酸，约90个氨基酸至约175个氨基酸，约90个氨基酸至约170个氨基酸，约90个氨基酸至约165个氨基酸，约90个氨基酸至约160个氨基酸，约90个氨基酸至约155个氨基酸，约90个氨基酸至约150个氨基酸，约90个氨基酸至约145个氨基酸，约90个氨基酸至约140个氨基酸，约90个氨基酸至约135个氨基酸，约90个氨基酸至约130个氨基酸，约90个氨基酸至约125个氨基酸，约90个氨基酸至约120个氨基酸，约90个氨基酸至约115个氨基酸，约90个氨基酸至约110个氨基酸，约90个氨基酸至约105个氨基酸，约90个氨基酸至约100个氨基酸，约100个氨基酸至约220个氨基酸，约100个氨基酸至约215个氨基酸，约100个氨基酸至约210个氨基酸，约100个氨基酸至约205个氨基酸，约100个氨基酸至约200个氨基酸，约100个氨基酸至约195个氨基酸，约100个氨基酸至约190个氨基酸，约100个氨基酸至约185个氨基酸，约100个氨基酸至约180个氨基酸，约100个氨基酸至约175个氨基酸，约100个氨基酸至约170个氨基酸，约100个氨基酸至约165个氨基酸，约100个氨基酸至约160个氨基酸，约100个氨基酸至约155个氨基酸，约100个氨基酸至约150个氨基酸，约100个氨基酸至约145个氨基酸，约100个氨基酸至约140个氨基酸，约100个氨基酸至约135个氨基酸，约100个氨基酸至约130个氨基酸，约100个氨基酸至约125个氨基酸，约100个氨基酸至约120个氨基酸，约100个氨基酸至约115个氨基酸，约100个氨基酸至约110个氨基酸，约110个氨基酸至约220个氨基酸，约110个氨基酸至约215个氨基酸，约110个氨基酸至约210个氨基酸，约110个氨基酸至约205个氨基酸，约110个氨基酸至约200个氨基酸，约110个氨基酸至约195个氨基酸，约110个氨基酸至约190个氨基酸，约110个氨基酸至约185个氨基酸，约110个氨基酸至约180个氨基酸，约110个氨基酸至约175个氨基酸，约110个氨基酸至约170个氨基酸，约110个氨基酸至约165个氨基酸，约110个氨基酸至约160个氨基酸，约110个氨基酸至约155个氨基酸，约110个氨基酸至约150个氨基酸，约110个氨基酸至约145个氨基酸，约110个氨基酸至约140个氨基酸，约110个氨基酸至约135个氨基酸，约110个氨基酸至约130个氨基酸，约110个氨基酸至约125个氨基酸，约110个氨基酸至约120个氨基酸，约110个氨基酸至约115个氨基酸，约115个氨基酸至约220个氨基酸，约115个氨基酸至约215个氨基酸，约115个氨基酸至约210个氨基酸，约115个氨基酸至约205个氨基酸，约115个氨基酸至约200个氨基酸，约115个氨基酸至约195个氨基酸，约115个氨基酸至约190个氨基酸，约115个氨基酸至约185个氨基酸，约115个氨基酸至约180个氨基酸，约115个氨基酸至约175个氨基酸，约115个氨基酸至约170个氨基酸，约115个氨基酸至约165个氨基酸，约115个氨基酸至约160个氨基酸，约115个氨基酸至约155个氨基酸，约115个氨基酸至约150个氨基酸，约115个氨基酸至约145个氨基酸，约115个氨基酸至约140个氨基酸，约115个氨基酸至约135个氨基酸，约115个氨基酸至约130个氨基酸，约115个氨基酸至约125个氨基酸，约115个氨基酸至约120个氨基酸，约120个氨基酸至约220个氨基酸，约120个氨基酸至约215个氨基酸，约120个氨基酸至约210个氨基酸，约120个氨基酸至约205个氨基酸，约120个氨基酸至约200个氨基酸，约120个氨基酸至约195个氨基酸，约120个氨基酸至约190个氨基酸，约120个氨基酸至约185个氨基酸，约120个氨基酸至约180个氨基酸，约120个氨基酸至约175个氨基酸，约120个氨基酸至约170个氨基酸，约120个氨基酸至约165个氨基酸，约120个氨基酸至约160个氨基酸，约120个氨基酸至约155个氨基酸，约120个氨基酸至约150个氨基酸，约120个氨基酸至约145个氨基酸，约120个氨基酸至约140个氨基酸，约120个氨基酸至约135个氨基酸，约120个氨基酸至约130个氨基酸，约120个氨基酸至约125个氨基酸，约125个氨基酸至约220个氨基酸，约125个氨基酸至约215个氨基酸，约125个氨基酸至约210个氨基酸，约125个氨基酸至约205个氨基酸，约125个氨基酸至约200个氨基酸，约125个氨基酸至约195个氨基酸，约125个氨基酸至约190个氨基酸，约125个氨基酸至约185个氨基酸，约125个氨基酸至约180个氨基酸，约125个氨基酸至约175个氨基酸，约125个氨基酸至约170个氨基酸，约125个氨基酸至约165个氨基酸，约125个氨基酸至约160个氨基酸，约125个氨基酸至约155个氨基酸，约125个氨基酸至约150个氨基酸，约125个氨基酸至约145个氨基酸，约125个氨基酸至约140个氨基酸，约125个氨基酸至约135个氨基酸，约125个氨基酸至约130个氨基酸，约130个氨基酸至约220个氨基酸，约130个氨基酸至约215个氨基酸，约130个氨基酸至约210个氨基酸，约130个氨基酸至约205个氨基酸，约130个氨基酸至约200个氨基酸，约130个氨基酸至约195个氨基酸，约130个氨基酸至约190个氨基酸，约130个氨基酸至约185个氨基酸，约130个氨基酸至约180个氨基酸，约130个氨基酸至约175个氨基酸，约130个氨基酸至约170个氨基酸，约130个氨基酸至约165个氨基酸，约130个氨基酸至约160个氨基酸，约130个氨基酸至约155个氨基酸，约130个氨基酸至约150个氨基酸，约130个氨基酸至约145个氨基酸，约130个氨基酸至约140个氨基酸，约130个氨基酸至约135个氨基酸，约135个氨基酸至约220个氨基酸，约135个氨基酸至约215个氨基酸，约135个氨基酸至约210个氨基酸，约135个氨基酸至约205个氨基酸，约135个氨基酸至约200个氨基酸，约135个氨基酸至约195个氨基酸，约135个氨基酸至约190个氨基酸，约135个氨基酸至约185个氨基酸，约135个氨基酸至约180个氨基酸，约135个氨基酸至约175个氨基酸，约135个氨基酸至约170个氨基酸，约135个氨基酸至约165个氨基酸，约135个氨基酸至约160个氨基酸，约135个氨基酸至约155个氨基酸，约135个氨基酸至约150个氨基酸，约135个氨基酸至约145个氨基酸，约135个氨基酸至约140个氨基酸，约140个氨基酸至约220个氨基酸，约140个氨基酸至约215个氨基酸，约140个氨基酸至约210个氨基酸，约140个氨基酸至约205个氨基酸，约140个氨基酸至约200个氨基酸，约140个氨基酸至约195个氨基酸，约140个氨基酸至约190个氨基酸，约140个氨基酸至约185个氨基酸，约140个氨基酸至约180个氨基酸，约140个氨基酸至约175个氨基酸，约140个氨基酸至约170个氨基酸，约140个氨基酸至约165个氨基酸，约140个氨基酸至约160个氨基酸，约140个氨基酸至约155个氨基酸，约140个氨基酸至约150个氨基酸，约140个氨基酸至约145个氨基酸，约145个氨基酸至约220个氨基酸，约145个氨基酸至约215个氨基酸，约145个氨基酸至约210个氨基酸，约145个氨基酸至约205个氨基酸，约145个氨基酸至约200个氨基酸，约145个氨基酸至约195个氨基酸，约145个氨基酸至约190个氨基酸，约145个氨基酸至约185个氨基酸，约145个氨基酸至约180个氨基酸，约145个氨基酸至约175个氨基酸，约145个氨基酸至约170个氨基酸，约145个氨基酸至约165个氨基酸，约145个氨基酸至约160个氨基酸，约145个氨基酸至约155个氨基酸，约145个氨基酸至约150个氨基酸，约150个氨基酸至约220个氨基酸，约150个氨基酸至约215个氨基酸，约150个氨基酸至约210个氨基酸，约150个氨基酸至约205个氨基酸，约150个氨基酸至约200个氨基酸，约150个氨基酸至约195个氨基酸，约150个氨基酸至约190个氨基酸，约150个氨基酸至约185个氨基酸，约150个氨基酸至约180个氨基酸，约150个氨基酸至约175个氨基酸，约150个氨基酸至约170个氨基酸，约150个氨基酸至约165个氨基酸，约150个氨基酸至约160个氨基酸，约150个氨基酸至约155个氨基酸，约155个氨基酸至约220个氨基酸，约155个氨基酸至约215个氨基酸，约155个氨基酸至约210个氨基酸，约155个氨基酸至约205个氨基酸，约155个氨基酸至约200个氨基酸，约155个氨基酸至约195个氨基酸，约155个氨基酸至约190个氨基酸，约155个氨基酸至约185个氨基酸，约155个氨基酸至约180个氨基酸，约155个氨基酸至约175个氨基酸，约155个氨基酸至约170个氨基酸，约155个氨基酸至约165个氨基酸，约155个氨基酸至约160个氨基酸，约160个氨基酸至约220个氨基酸，约160个氨基酸至约215个氨基酸，约160个氨基酸至约210个氨基酸，约160个氨基酸至约205个氨基酸，约160个氨基酸至约200个氨基酸，约160个氨基酸至约195个氨基酸，约160个氨基酸至约190个氨基酸，约160个氨基酸至约185个氨基酸，约160个氨基酸至约180个氨基酸，约160个氨基酸至约175个氨基酸，约160个氨基酸至约170个氨基酸，约160个氨基酸至约165个氨基酸，约165个氨基酸至约220个氨基酸，约165个氨基酸至约215个氨基酸，约165个氨基酸至约210个氨基酸，约165个氨基酸至约205个氨基酸，约165个氨基酸至约200个氨基酸，约165个氨基酸至约195个氨基酸，约165个氨基酸至约190个氨基酸，约165个氨基酸至约185个氨基酸，约165个氨基酸至约180个氨基酸，约165个氨基酸至约175个氨基酸，约165个氨基酸至约170个氨基酸，约170个氨基酸至约220个氨基酸，约170个氨基酸至约215个氨基酸，约170个氨基酸至约210个氨基酸，约170个氨基酸至约205个氨基酸，约170个氨基酸至约200个氨基酸，约170个氨基酸至约195个氨基酸，约170个氨基酸至约190个氨基酸，约170个氨基酸至约185个氨基酸，约170个氨基酸至约180个氨基酸，约170个氨基酸至约175个氨基酸，约175个氨基酸至约220个氨基酸，约175个氨基酸至约215个氨基酸，约175个氨基酸至约210个氨基酸，约175个氨基酸至约205个氨基酸，约175个氨基酸至约200个氨基酸，约175个氨基酸至约195个氨基酸，约175个氨基酸至约190个氨基酸，约175个氨基酸至约185个氨基酸，约175个氨基酸至约180个氨基酸，约180个氨基酸至约220个氨基酸，约180个氨基酸至约215个氨基酸，约180个氨基酸至约210个氨基酸，约180个氨基酸至约205个氨基酸，约180个氨基酸至约200个氨基酸，约180个氨基酸至约195个氨基酸，约180个氨基酸至约190个氨基酸，约180个氨基酸至约185个氨基酸，约185个氨基酸至约220个氨基酸，约185个氨基酸至约215个氨基酸，约185个氨基酸至约210个氨基酸，约185个氨基酸至约205个氨基酸，约185个氨基酸至约200个氨基酸，约185个氨基酸至约195个氨基酸，约185个氨基酸至约190个氨基酸，约190个氨基酸至约220个氨基酸，约190个氨基酸至约215个氨基酸，约190个氨基酸至约210个氨基酸，约190个氨基酸至约205个氨基酸，约190个氨基酸至约200个氨基酸，约190个氨基酸至约195个氨基酸，约195个氨基酸至约220个氨基酸，约195个氨基酸至约215个氨基酸，约195个氨基酸至约210个氨基酸，约195个氨基酸至约205个氨基酸，约195个氨基酸至约200个氨基酸，约200个氨基酸至约220个氨基酸，约200个氨基酸至约215个氨基酸，约200个氨基酸至约210个氨基酸，约200个氨基酸至约205个氨基酸，约205个氨基酸至约220个氨基酸，约205个氨基酸至约215个氨基酸，约205个氨基酸至约210个氨基酸，约210个氨基酸至约220个氨基酸，约210个氨基酸至约215个氨基酸，或约215个氨基酸至约220个氨基酸。

可溶性组织因子结构域

在本文描述的任一种方法、组合物或试剂盒的一些实例中，接头结构域可以是可溶性组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是缺少信号序列、跨膜结构域和细胞内结构域的野生型组织因子多肽。在一些实例中，可溶性组织因子结构域可以是组织因子突变体，其中野生型组织因子多肽缺少信号序列、跨膜结构域和细胞内结构域，并且已在所选氨基酸处经过进一步修饰。在一些实例中，可溶性组织因子结构域可以是可溶性人组织因子结构域。在一些实例中，可溶性组织因子结构域可以是可溶性小鼠组织因子结构域。在一些实例中，可溶性组织因子结构域可以是可溶性大鼠组织因子结构域。下文显示可溶性人组织因子结构域、小鼠可溶性组织因子结构域、大鼠可溶性组织因子结构域和突变可溶性组织因子结构域的非限制性实例。

示例性可溶性人组织因子结构域(SEQ ID NO:1)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

编码可溶性人组织因子结构域的示例性核酸(SEQ ID NO:2)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

示例性可溶性小鼠组织因子结构域(SEQ ID NO:3)

AGIPEKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKNKCFSTTDTECDLTDEIVKDVTWAYEAKVLSVPRRNSVHGDGDQLVIHGEEPPFTNAPKFLPYRDTNLGQPVIQQFEQDGRKLNVVVKDSLTLVRKNGTFLTLRQVFGKDLGYIITYRKGSSTGKKTNITNTNEFSIDVEEGVSYCFFVQAMIFSRKTNQNSPGSSTVCTEQWKSFLGE

示例性可溶性大鼠组织因子结构域(SEQ ID NO:4)

AGTPPGKAFNLTWISTDFKTILEWQPKPTNYTYTVQISDRSRNWKYKCTGTTDTECDLTDEIVKDVNWTYEARVLSVPWRNSTHGKETLFGTHGEEPPFTNARKFLPYRDTKIGQPVIQKYEQGGTKLKVTVKDSFTLVRKNGTFLTLRQVFGNDLGYILTYRKDSSTGRKTNTTHTNEFLIDVEKGVSYCFFAQAVIFSRKTNHKSPESITKCTEQWKSVLGE

示例性突变可溶性人组织因子结构域(SEQ ID NO:5)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFATALEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECALTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVARNNTALSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

示例性突变可溶性人组织因子结构域(SEQ ID NO:6)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFATALEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDAKSKCFYTTDTECALTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLAENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVARNNTALSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

在一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以包括与SEQ ID NO:1、3、4、5或6至少70％相同、至少72％相同、至少74％相同、至少76％相同、至少78％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以包括SEQ ID NO:1、3、4、5或6的序列，其中一到二十个氨基酸(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)从其N端去除和/或一到二十个氨基酸(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)从其C端去除。

如本领域的技术人员将了解，在不同哺乳动物物种之间保守的氨基酸的突变更可能降低蛋白质的活性和/或结构稳定性，而在不同哺乳动物物种之间不保守的蛋白质的突变不太可能降低蛋白质的活性和/或结构稳定性。

在一些实例中，可溶性组织因子结构域不能结合到因子VIIa。在一些实例中，可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。在一些实施例中，单链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

在一些实例中，可溶性组织因子结构域可以是可溶性人组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是可溶性小鼠组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是可溶性大鼠组织因子结构域。

在一些实例中，可溶性组织因子结构域不包括以下中的一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个或七个)：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施例中，突变可溶性组织因子具有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6的氨基酸序列。

在一些实例中，可溶性组织因子结构域可以由包括与SEQ ID NO:2至少70％相同、至少72％相同、至少74％相同、至少76％相同、至少78％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列的核酸编码。

在一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以具有以下总长度：约20个氨基酸至约220个氨基酸，约20个氨基酸至约215个氨基酸，约20个氨基酸至约210个氨基酸，约20个氨基酸至约205个氨基酸，约20个氨基酸至约200个氨基酸，约20个氨基酸至约195个氨基酸，约20个氨基酸至约190个氨基酸，约20个氨基酸至约185个氨基酸，约20个氨基酸至约180个氨基酸，约20个氨基酸至约175个氨基酸，约20个氨基酸至约170个氨基酸，约20个氨基酸至约165个氨基酸，约20个氨基酸至约160个氨基酸，约20个氨基酸至约155个氨基酸，约20个氨基酸至约150个氨基酸，约20个氨基酸至约145个氨基酸，约20个氨基酸至约140个氨基酸，约20个氨基酸至约135个氨基酸，约20个氨基酸至约130个氨基酸，约20个氨基酸至约125个氨基酸，约20个氨基酸至约120个氨基酸，约20个氨基酸至约115个氨基酸，约20个氨基酸至约110个氨基酸，约20个氨基酸至约105个氨基酸，约20个氨基酸至约100个氨基酸，约20个氨基酸至约95个氨基酸，约20个氨基酸至约90个氨基酸，约20个氨基酸至约85个氨基酸，约20个氨基酸至约80个氨基酸，约20个氨基酸至约75个氨基酸，约20个氨基酸至约70个氨基酸，约20个氨基酸至约60个氨基酸，约20个氨基酸至约50个氨基酸，约20个氨基酸至约40个氨基酸，约20个氨基酸至约30个氨基酸，约30个氨基酸至约220个氨基酸，约30个氨基酸至约215个氨基酸，约30个氨基酸至约210个氨基酸，约30个氨基酸至约205个氨基酸，约30个氨基酸至约200个氨基酸，约30个氨基酸至约195个氨基酸，约30个氨基酸至约190个氨基酸，约30个氨基酸至约185个氨基酸，约30个氨基酸至约180个氨基酸，约30个氨基酸至约175个氨基酸，约30个氨基酸至约170个氨基酸，约30个氨基酸至约165个氨基酸，约30个氨基酸至约160个氨基酸，约30个氨基酸至约155个氨基酸，约30个氨基酸至约150个氨基酸，约30个氨基酸至约145个氨基酸，约30个氨基酸至约140个氨基酸，约30个氨基酸至约135个氨基酸，约30个氨基酸至约130个氨基酸，约30个氨基酸至约125个氨基酸，约30个氨基酸至约120个氨基酸，约30个氨基酸至约115个氨基酸，约30个氨基酸至约110个氨基酸，约30个氨基酸至约105个氨基酸，约30个氨基酸至约100个氨基酸，约30个氨基酸至约95个氨基酸，约30个氨基酸至约90个氨基酸，约30个氨基酸至约85个氨基酸，约30个氨基酸至约80个氨基酸，约30个氨基酸至约75个氨基酸，约30个氨基酸至约70个氨基酸，约30个氨基酸至约60个氨基酸，约30个氨基酸至约50个氨基酸，约30个氨基酸至约40个氨基酸，约40个氨基酸至约220个氨基酸，约40个氨基酸至约215个氨基酸，约40个氨基酸至约210个氨基酸，约40个氨基酸至约205个氨基酸，约40个氨基酸至约200个氨基酸，约40个氨基酸至约195个氨基酸，约40个氨基酸至约190个氨基酸，约40个氨基酸至约185个氨基酸，约40个氨基酸至约180个氨基酸，约40个氨基酸至约175个氨基酸，约40个氨基酸至约170个氨基酸，约40个氨基酸至约165个氨基酸，约40个氨基酸至约160个氨基酸，约40个氨基酸至约155个氨基酸，约40个氨基酸至约150个氨基酸，约40个氨基酸至约145个氨基酸，约40个氨基酸至约140个氨基酸，约40个氨基酸至约135个氨基酸，约40个氨基酸至约130个氨基酸，约40个氨基酸至约125个氨基酸，约40个氨基酸至约120个氨基酸，约40个氨基酸至约115个氨基酸，约40个氨基酸至约110个氨基酸，约40个氨基酸至约105个氨基酸，约40个氨基酸至约100个氨基酸，约40个氨基酸至约95个氨基酸，约40个氨基酸至约90个氨基酸，约40个氨基酸至约85个氨基酸，约40个氨基酸至约80个氨基酸，约40个氨基酸至约75个氨基酸，约40个氨基酸至约70个氨基酸，约40个氨基酸至约60个氨基酸，约40个氨基酸至约50个氨基酸，约50个氨基酸至约220个氨基酸，约50个氨基酸至约215个氨基酸，约50个氨基酸至约210个氨基酸，约50个氨基酸至约205个氨基酸，约50个氨基酸至约200个氨基酸，约50个氨基酸至约195个氨基酸，约50个氨基酸至约190个氨基酸，约50个氨基酸至约185个氨基酸，约50个氨基酸至约180个氨基酸，约50个氨基酸至约175个氨基酸，约50个氨基酸至约170个氨基酸，约50个氨基酸至约165个氨基酸，约50个氨基酸至约160个氨基酸，约50个氨基酸至约155个氨基酸，约50个氨基酸至约150个氨基酸，约50个氨基酸至约145个氨基酸，约50个氨基酸至约140个氨基酸，约50个氨基酸至约135个氨基酸，约50个氨基酸至约130个氨基酸，约50个氨基酸至约125个氨基酸，约50个氨基酸至约120个氨基酸，约50个氨基酸至约115个氨基酸，约50个氨基酸至约110个氨基酸，约50个氨基酸至约105个氨基酸，约50个氨基酸至约100个氨基酸，约50个氨基酸至约95个氨基酸，约50个氨基酸至约90个氨基酸，约50个氨基酸至约85个氨基酸，约50个氨基酸至约80个氨基酸，约50个氨基酸至约75个氨基酸，约50个氨基酸至约70个氨基酸，约50个氨基酸至约60个氨基酸，约60个氨基酸至约220个氨基酸，约60个氨基酸至约215个氨基酸，约60个氨基酸至约210个氨基酸，约60个氨基酸至约205个氨基酸，约60个氨基酸至约200个氨基酸，约60个氨基酸至约195个氨基酸，约60个氨基酸至约190个氨基酸，约60个氨基酸至约185个氨基酸，约60个氨基酸至约180个氨基酸，约60个氨基酸至约175个氨基酸，约60个氨基酸至约170个氨基酸，约60个氨基酸至约165个氨基酸，约60个氨基酸至约160个氨基酸，约60个氨基酸至约155个氨基酸，约60个氨基酸至约150个氨基酸，约60个氨基酸至约145个氨基酸，约60个氨基酸至约140个氨基酸，约60个氨基酸至约135个氨基酸，约60个氨基酸至约130个氨基酸，约60个氨基酸至约125个氨基酸，约60个氨基酸至约120个氨基酸，约60个氨基酸至约115个氨基酸，约60个氨基酸至约110个氨基酸，约60个氨基酸至约105个氨基酸，约60个氨基酸至约100个氨基酸，约60个氨基酸至约95个氨基酸，约60个氨基酸至约90个氨基酸，约60个氨基酸至约85个氨基酸，约60个氨基酸至约80个氨基酸，约60个氨基酸至约75个氨基酸，约60个氨基酸至约70个氨基酸，约70个氨基酸至约220个氨基酸，约70个氨基酸至约215个氨基酸，约70个氨基酸至约210个氨基酸，约70个氨基酸至约205个氨基酸，约70个氨基酸至约200个氨基酸，约70个氨基酸至约195个氨基酸，约70个氨基酸至约190个氨基酸，约70个氨基酸至约185个氨基酸，约70个氨基酸至约180个氨基酸，约70个氨基酸至约175个氨基酸，约70个氨基酸至约170个氨基酸，约70个氨基酸至约165个氨基酸，约70个氨基酸至约160个氨基酸，约70个氨基酸至约155个氨基酸，约70个氨基酸至约150个氨基酸，约70个氨基酸至约145个氨基酸，约70个氨基酸至约140个氨基酸，约70个氨基酸至约135个氨基酸，约70个氨基酸至约130个氨基酸，约70个氨基酸至约125个氨基酸，约70个氨基酸至约120个氨基酸，约70个氨基酸至约115个氨基酸，约70个氨基酸至约110个氨基酸，约70个氨基酸至约105个氨基酸，约70个氨基酸至约100个氨基酸，约70个氨基酸至约95个氨基酸，约70个氨基酸至约90个氨基酸，约70个氨基酸至约85个氨基酸，约70个氨基酸至约80个氨基酸，约80个氨基酸至约220个氨基酸，约80个氨基酸至约215个氨基酸，约80个氨基酸至约210个氨基酸，约80个氨基酸至约205个氨基酸，约80个氨基酸至约200个氨基酸，约80个氨基酸至约195个氨基酸，约80个氨基酸至约190个氨基酸，约80个氨基酸至约185个氨基酸，约80个氨基酸至约180个氨基酸，约80个氨基酸至约175个氨基酸，约80个氨基酸至约170个氨基酸，约80个氨基酸至约165个氨基酸，约80个氨基酸至约160个氨基酸，约80个氨基酸至约155个氨基酸，约80个氨基酸至约150个氨基酸，约80个氨基酸至约145个氨基酸，约80个氨基酸至约140个氨基酸，约80个氨基酸至约135个氨基酸，约80个氨基酸至约130个氨基酸，约80个氨基酸至约125个氨基酸，约80个氨基酸至约120个氨基酸，约80个氨基酸至约115个氨基酸，约80个氨基酸至约110个氨基酸，约80个氨基酸至约105个氨基酸，约80个氨基酸至约100个氨基酸，约80个氨基酸至约95个氨基酸，约80个氨基酸至约90个氨基酸，约90个氨基酸至约220个氨基酸，约90个氨基酸至约215个氨基酸，约90个氨基酸至约210个氨基酸，约90个氨基酸至约205个氨基酸，约90个氨基酸至约200个氨基酸，约90个氨基酸至约195个氨基酸，约90个氨基酸至约190个氨基酸，约90个氨基酸至约185个氨基酸，约90个氨基酸至约180个氨基酸，约90个氨基酸至约175个氨基酸，约90个氨基酸至约170个氨基酸，约90个氨基酸至约165个氨基酸，约90个氨基酸至约160个氨基酸，约90个氨基酸至约155个氨基酸，约90个氨基酸至约150个氨基酸，约90个氨基酸至约145个氨基酸，约90个氨基酸至约140个氨基酸，约90个氨基酸至约135个氨基酸，约90个氨基酸至约130个氨基酸，约90个氨基酸至约125个氨基酸，约90个氨基酸至约120个氨基酸，约90个氨基酸至约115个氨基酸，约90个氨基酸至约110个氨基酸，约90个氨基酸至约105个氨基酸，约90个氨基酸至约100个氨基酸，约100个氨基酸至约220个氨基酸，约100个氨基酸至约215个氨基酸，约100个氨基酸至约210个氨基酸，约100个氨基酸至约205个氨基酸，约100个氨基酸至约200个氨基酸，约100个氨基酸至约195个氨基酸，约100个氨基酸至约190个氨基酸，约100个氨基酸至约185个氨基酸，约100个氨基酸至约180个氨基酸，约100个氨基酸至约175个氨基酸，约100个氨基酸至约170个氨基酸，约100个氨基酸至约165个氨基酸，约100个氨基酸至约160个氨基酸，约100个氨基酸至约155个氨基酸，约100个氨基酸至约150个氨基酸，约100个氨基酸至约145个氨基酸，约100个氨基酸至约140个氨基酸，约100个氨基酸至约135个氨基酸，约100个氨基酸至约130个氨基酸，约100个氨基酸至约125个氨基酸，约100个氨基酸至约120个氨基酸，约100个氨基酸至约115个氨基酸，约100个氨基酸至约110个氨基酸，约110个氨基酸至约220个氨基酸，约110个氨基酸至约215个氨基酸，约110个氨基酸至约210个氨基酸，约110个氨基酸至约205个氨基酸，约110个氨基酸至约200个氨基酸，约110个氨基酸至约195个氨基酸，约110个氨基酸至约190个氨基酸，约110个氨基酸至约185个氨基酸，约110个氨基酸至约180个氨基酸，约110个氨基酸至约175个氨基酸，约110个氨基酸至约170个氨基酸，约110个氨基酸至约165个氨基酸，约110个氨基酸至约160个氨基酸，约110个氨基酸至约155个氨基酸，约110个氨基酸至约150个氨基酸，约110个氨基酸至约145个氨基酸，约110个氨基酸至约140个氨基酸，约110个氨基酸至约135个氨基酸，约110个氨基酸至约130个氨基酸，约110个氨基酸至约125个氨基酸，约110个氨基酸至约120个氨基酸，约110个氨基酸至约115个氨基酸，约115个氨基酸至约220个氨基酸，约115个氨基酸至约215个氨基酸，约115个氨基酸至约210个氨基酸，约115个氨基酸至约205个氨基酸，约115个氨基酸至约200个氨基酸，约115个氨基酸至约195个氨基酸，约115个氨基酸至约190个氨基酸，约115个氨基酸至约185个氨基酸，约115个氨基酸至约180个氨基酸，约115个氨基酸至约175个氨基酸，约115个氨基酸至约170个氨基酸，约115个氨基酸至约165个氨基酸，约115个氨基酸至约160个氨基酸，约115个氨基酸至约155个氨基酸，约115个氨基酸至约150个氨基酸，约115个氨基酸至约145个氨基酸，约115个氨基酸至约140个氨基酸，约115个氨基酸至约135个氨基酸，约115个氨基酸至约130个氨基酸，约115个氨基酸至约125个氨基酸，约115个氨基酸至约120个氨基酸，约120个氨基酸至约220个氨基酸，约120个氨基酸至约215个氨基酸，约120个氨基酸至约210个氨基酸，约120个氨基酸至约205个氨基酸，约120个氨基酸至约200个氨基酸，约120个氨基酸至约195个氨基酸，约120个氨基酸至约190个氨基酸，约120个氨基酸至约185个氨基酸，约120个氨基酸至约180个氨基酸，约120个氨基酸至约175个氨基酸，约120个氨基酸至约170个氨基酸，约120个氨基酸至约165个氨基酸，约120个氨基酸至约160个氨基酸，约120个氨基酸至约155个氨基酸，约120个氨基酸至约150个氨基酸，约120个氨基酸至约145个氨基酸，约120个氨基酸至约140个氨基酸，约120个氨基酸至约135个氨基酸，约120个氨基酸至约130个氨基酸，约120个氨基酸至约125个氨基酸，约125个氨基酸至约220个氨基酸，约125个氨基酸至约215个氨基酸，约125个氨基酸至约210个氨基酸，约125个氨基酸至约205个氨基酸，约125个氨基酸至约200个氨基酸，约125个氨基酸至约195个氨基酸，约125个氨基酸至约190个氨基酸，约125个氨基酸至约185个氨基酸，约125个氨基酸至约180个氨基酸，约125个氨基酸至约175个氨基酸，约125个氨基酸至约170个氨基酸，约125个氨基酸至约165个氨基酸，约125个氨基酸至约160个氨基酸，约125个氨基酸至约155个氨基酸，约125个氨基酸至约150个氨基酸，约125个氨基酸至约145个氨基酸，约125个氨基酸至约140个氨基酸，约125个氨基酸至约135个氨基酸，约125个氨基酸至约130个氨基酸，约130个氨基酸至约220个氨基酸，约130个氨基酸至约215个氨基酸，约130个氨基酸至约210个氨基酸，约130个氨基酸至约205个氨基酸，约130个氨基酸至约200个氨基酸，约130个氨基酸至约195个氨基酸，约130个氨基酸至约190个氨基酸，约130个氨基酸至约185个氨基酸，约130个氨基酸至约180个氨基酸，约130个氨基酸至约175个氨基酸，约130个氨基酸至约170个氨基酸，约130个氨基酸至约165个氨基酸，约130个氨基酸至约160个氨基酸，约130个氨基酸至约155个氨基酸，约130个氨基酸至约150个氨基酸，约130个氨基酸至约145个氨基酸，约130个氨基酸至约140个氨基酸，约130个氨基酸至约135个氨基酸，约135个氨基酸至约220个氨基酸，约135个氨基酸至约215个氨基酸，约135个氨基酸至约210个氨基酸，约135个氨基酸至约205个氨基酸，约135个氨基酸至约200个氨基酸，约135个氨基酸至约195个氨基酸，约135个氨基酸至约190个氨基酸，约135个氨基酸至约185个氨基酸，约135个氨基酸至约180个氨基酸，约135个氨基酸至约175个氨基酸，约135个氨基酸至约170个氨基酸，约135个氨基酸至约165个氨基酸，约135个氨基酸至约160个氨基酸，约135个氨基酸至约155个氨基酸，约135个氨基酸至约150个氨基酸，约135个氨基酸至约145个氨基酸，约135个氨基酸至约140个氨基酸，约140个氨基酸至约220个氨基酸，约140个氨基酸至约215个氨基酸，约140个氨基酸至约210个氨基酸，约140个氨基酸至约205个氨基酸，约140个氨基酸至约200个氨基酸，约140个氨基酸至约195个氨基酸，约140个氨基酸至约190个氨基酸，约140个氨基酸至约185个氨基酸，约140个氨基酸至约180个氨基酸，约140个氨基酸至约175个氨基酸，约140个氨基酸至约170个氨基酸，约140个氨基酸至约165个氨基酸，约140个氨基酸至约160个氨基酸，约140个氨基酸至约155个氨基酸，约140个氨基酸至约150个氨基酸，约140个氨基酸至约145个氨基酸，约145个氨基酸至约220个氨基酸，约145个氨基酸至约215个氨基酸，约145个氨基酸至约210个氨基酸，约145个氨基酸至约205个氨基酸，约145个氨基酸至约200个氨基酸，约145个氨基酸至约195个氨基酸，约145个氨基酸至约190个氨基酸，约145个氨基酸至约185个氨基酸，约145个氨基酸至约180个氨基酸，约145个氨基酸至约175个氨基酸，约145个氨基酸至约170个氨基酸，约145个氨基酸至约165个氨基酸，约145个氨基酸至约160个氨基酸，约145个氨基酸至约155个氨基酸，约145个氨基酸至约150个氨基酸，约150个氨基酸至约220个氨基酸，约150个氨基酸至约215个氨基酸，约150个氨基酸至约210个氨基酸，约150个氨基酸至约205个氨基酸，约150个氨基酸至约200个氨基酸，约150个氨基酸至约195个氨基酸，约150个氨基酸至约190个氨基酸，约150个氨基酸至约185个氨基酸，约150个氨基酸至约180个氨基酸，约150个氨基酸至约175个氨基酸，约150个氨基酸至约170个氨基酸，约150个氨基酸至约165个氨基酸，约150个氨基酸至约160个氨基酸，约150个氨基酸至约155个氨基酸，约155个氨基酸至约220个氨基酸，约155个氨基酸至约215个氨基酸，约155个氨基酸至约210个氨基酸，约155个氨基酸至约205个氨基酸，约155个氨基酸至约200个氨基酸，约155个氨基酸至约195个氨基酸，约155个氨基酸至约190个氨基酸，约155个氨基酸至约185个氨基酸，约155个氨基酸至约180个氨基酸，约155个氨基酸至约175个氨基酸，约155个氨基酸至约170个氨基酸，约155个氨基酸至约165个氨基酸，约155个氨基酸至约160个氨基酸，约160个氨基酸至约220个氨基酸，约160个氨基酸至约215个氨基酸，约160个氨基酸至约210个氨基酸，约160个氨基酸至约205个氨基酸，约160个氨基酸至约200个氨基酸，约160个氨基酸至约195个氨基酸，约160个氨基酸至约190个氨基酸，约160个氨基酸至约185个氨基酸，约160个氨基酸至约180个氨基酸，约160个氨基酸至约175个氨基酸，约160个氨基酸至约170个氨基酸，约160个氨基酸至约165个氨基酸，约165个氨基酸至约220个氨基酸，约165个氨基酸至约215个氨基酸，约165个氨基酸至约210个氨基酸，约165个氨基酸至约205个氨基酸，约165个氨基酸至约200个氨基酸，约165个氨基酸至约195个氨基酸，约165个氨基酸至约190个氨基酸，约165个氨基酸至约185个氨基酸，约165个氨基酸至约180个氨基酸，约165个氨基酸至约175个氨基酸，约165个氨基酸至约170个氨基酸，约170个氨基酸至约220个氨基酸，约170个氨基酸至约215个氨基酸，约170个氨基酸至约210个氨基酸，约170个氨基酸至约205个氨基酸，约170个氨基酸至约200个氨基酸，约170个氨基酸至约195个氨基酸，约170个氨基酸至约190个氨基酸，约170个氨基酸至约185个氨基酸，约170个氨基酸至约180个氨基酸，约170个氨基酸至约175个氨基酸，约175个氨基酸至约220个氨基酸，约175个氨基酸至约215个氨基酸，约175个氨基酸至约210个氨基酸，约175个氨基酸至约205个氨基酸，约175个氨基酸至约200个氨基酸，约175个氨基酸至约195个氨基酸，约175个氨基酸至约190个氨基酸，约175个氨基酸至约185个氨基酸，约175个氨基酸至约180个氨基酸，约180个氨基酸至约220个氨基酸，约180个氨基酸至约215个氨基酸，约180个氨基酸至约210个氨基酸，约180个氨基酸至约205个氨基酸，约180个氨基酸至约200个氨基酸，约180个氨基酸至约195个氨基酸，约180个氨基酸至约190个氨基酸，约180个氨基酸至约185个氨基酸，约185个氨基酸至约220个氨基酸，约185个氨基酸至约215个氨基酸，约185个氨基酸至约210个氨基酸，约185个氨基酸至约205个氨基酸，约185个氨基酸至约200个氨基酸，约185个氨基酸至约195个氨基酸，约185个氨基酸至约190个氨基酸，约190个氨基酸至约220个氨基酸，约190个氨基酸至约215个氨基酸，约190个氨基酸至约210个氨基酸，约190个氨基酸至约205个氨基酸，约190个氨基酸至约200个氨基酸，约190个氨基酸至约195个氨基酸，约195个氨基酸至约220个氨基酸，约195个氨基酸至约215个氨基酸，约195个氨基酸至约210个氨基酸，约195个氨基酸至约205个氨基酸，约195个氨基酸至约200个氨基酸，约200个氨基酸至约220个氨基酸，约200个氨基酸至约215个氨基酸，约200个氨基酸至约210个氨基酸，约200个氨基酸至约205个氨基酸，约205个氨基酸至约220个氨基酸，约205个氨基酸至约215个氨基酸，约205个氨基酸至约210个氨基酸，约210个氨基酸至约220个氨基酸，约210个氨基酸至约215个氨基酸，或约215个氨基酸至约220个氨基酸。

接头序列

在一些实施例中，接头序列可以是柔性接头序列。可以使用的接头序列的非限制性实例描述于Klein等人,《蛋白质工程、设计和选择(Protein Engineering,Design&Selection)》第27卷,第10期,第325-330页,2014；Priyanka等人,《蛋白质科学(ProteinSci.)》,2013年2月；22(2):153-167。在一些实例中，接头序列是合成接头序列。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，多肽可以包括一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个接头序列(例如，相同或不同的接头序列，例如本文描述或本领域中已知的任一个示例性接头序列)。在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，多肽可以包括一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个接头序列(例如，相同或不同的接头序列，例如本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。

在一些实施例中，接头序列可以具有以下总长度：1个氨基酸至约100个氨基酸，1个氨基酸至约90个氨基酸，1个氨基酸至约80个氨基酸，1个氨基酸至约70个氨基酸，1个氨基酸至约60个氨基酸，1个氨基酸至约50个氨基酸，1个氨基酸至约45个氨基酸，1个氨基酸至约40个氨基酸，1个氨基酸至约35个氨基酸，1个氨基酸至约30个氨基酸，1个氨基酸至约25个氨基酸，1个氨基酸至约24个氨基酸，1个氨基酸至约22个氨基酸，1个氨基酸至约20个氨基酸，1个氨基酸至约18个氨基酸，1个氨基酸至约16个氨基酸，1个氨基酸至约14个氨基酸，1个氨基酸至约12个氨基酸，1个氨基酸至约10个氨基酸，1个氨基酸至约8个氨基酸，1个氨基酸至约6个氨基酸，1个氨基酸至约4个氨基酸，约2个氨基酸至约100个氨基酸，约2个氨基酸至约90个氨基酸，约2个氨基酸至约80个氨基酸，约2个氨基酸至约70个氨基酸，约2个氨基酸至约60个氨基酸，约2个氨基酸至约50个氨基酸，约2个氨基酸至约45个氨基酸，约2个氨基酸至约40个氨基酸，约2个氨基酸至约35个氨基酸，约2个氨基酸至约30个氨基酸，约2个氨基酸至约25个氨基酸，约2个氨基酸至约24个氨基酸，约2个氨基酸至约22个氨基酸，约2个氨基酸至约20个氨基酸，约2个氨基酸至约18个氨基酸，约2个氨基酸至约16个氨基酸，约2个氨基酸至约14个氨基酸，约2个氨基酸至约12个氨基酸，约2个氨基酸至约10个氨基酸，约2个氨基酸至约8个氨基酸，约2个氨基酸至约6个氨基酸，约2个氨基酸至约4个氨基酸，约4个氨基酸至约100个氨基酸，约4个氨基酸至约90个氨基酸，约4个氨基酸至约80个氨基酸，约4个氨基酸至约70个氨基酸，约4个氨基酸至约60个氨基酸，约4个氨基酸至约50个氨基酸，约4个氨基酸至约45个氨基酸，约4个氨基酸至约40个氨基酸，约4个氨基酸至约35个氨基酸，约4个氨基酸至约30个氨基酸，约4个氨基酸至约25个氨基酸，约4个氨基酸至约24个氨基酸，约4个氨基酸至约22个氨基酸，约4个氨基酸至约20个氨基酸，约4个氨基酸至约18个氨基酸，约4个氨基酸至约16个氨基酸，约4个氨基酸至约14个氨基酸，约4个氨基酸至约12个氨基酸，约4个氨基酸至约10个氨基酸，约4个氨基酸至约8个氨基酸，约4个氨基酸至约6个氨基酸，约6个氨基酸至约100个氨基酸，约6个氨基酸至约90个氨基酸，约6个氨基酸至约80个氨基酸，约6个氨基酸至约70个氨基酸，约6个氨基酸至约60个氨基酸，约6个氨基酸至约50个氨基酸，约6个氨基酸至约45个氨基酸，约6个氨基酸至约40个氨基酸，约6个氨基酸至约35个氨基酸，约6个氨基酸至约30个氨基酸，约6个氨基酸至约25个氨基酸，约6个氨基酸至约24个氨基酸，约6个氨基酸至约22个氨基酸，约6个氨基酸至约20个氨基酸，约6个氨基酸至约18个氨基酸，约6个氨基酸至约16个氨基酸，约6个氨基酸至约14个氨基酸，约6个氨基酸至约12个氨基酸，约6个氨基酸至约10个氨基酸，约6个氨基酸至约8个氨基酸，约8个氨基酸至约100个氨基酸，约8个氨基酸至约90个氨基酸，约8个氨基酸至约80个氨基酸，约8个氨基酸至约70个氨基酸，约8个氨基酸至约60个氨基酸，约8个氨基酸至约50个氨基酸，约8个氨基酸至约45个氨基酸，约8个氨基酸至约40个氨基酸，约8个氨基酸至约35个氨基酸，约8个氨基酸至约30个氨基酸，约8个氨基酸至约25个氨基酸，约8个氨基酸至约24个氨基酸，约8个氨基酸至约22个氨基酸，约8个氨基酸至约20个氨基酸，约8个氨基酸至约18个氨基酸，约8个氨基酸至约16个氨基酸，约8个氨基酸至约14个氨基酸，约8个氨基酸至约12个氨基酸，约8个氨基酸至约10个氨基酸，约10个氨基酸至约100个氨基酸，约10个氨基酸至约90个氨基酸，约10个氨基酸至约80个氨基酸，约10个氨基酸至约70个氨基酸，约10个氨基酸至约60个氨基酸，约10个氨基酸至约50个氨基酸，约10个氨基酸至约45个氨基酸，约10个氨基酸至约40个氨基酸，约10个氨基酸至约35个氨基酸，约10个氨基酸至约30个氨基酸，约10个氨基酸至约25个氨基酸，约10个氨基酸至约24个氨基酸，约10个氨基酸至约22个氨基酸，约10个氨基酸至约20个氨基酸，约10个氨基酸至约18个氨基酸，约10个氨基酸至约16个氨基酸，约10个氨基酸至约14个氨基酸，约10个氨基酸至约12个氨基酸，约12个氨基酸至约100个氨基酸，约12个氨基酸至约90个氨基酸，约12个氨基酸至约80个氨基酸，约12个氨基酸至约70个氨基酸，约12个氨基酸至约60个氨基酸，约12个氨基酸至约50个氨基酸，约12个氨基酸至约45个氨基酸，约12个氨基酸至约40个氨基酸，约12个氨基酸至约35个氨基酸，约12个氨基酸至约30个氨基酸，约12个氨基酸至约25个氨基酸，约12个氨基酸至约24个氨基酸，约12个氨基酸至约22个氨基酸，约12个氨基酸至约20个氨基酸，约12个氨基酸至约18个氨基酸，约12个氨基酸至约16个氨基酸，约12个氨基酸至约14个氨基酸，约14个氨基酸至约100个氨基酸，约14个氨基酸至约90个氨基酸，约14个氨基酸至约80个氨基酸，约14个氨基酸至约70个氨基酸，约14个氨基酸至约60个氨基酸，约14个氨基酸至约50个氨基酸，约14个氨基酸至约45个氨基酸，约14个氨基酸至约40个氨基酸，约14个氨基酸至约35个氨基酸，约14个氨基酸至约30个氨基酸，约14个氨基酸至约25个氨基酸，约14个氨基酸至约24个氨基酸，约14个氨基酸至约22个氨基酸，约14个氨基酸至约20个氨基酸，约14个氨基酸至约18个氨基酸，约14个氨基酸至约16个氨基酸，约16个氨基酸至约100个氨基酸，约16个氨基酸至约90个氨基酸，约16个氨基酸至约80个氨基酸，约16个氨基酸至约70个氨基酸，约16个氨基酸至约60个氨基酸，约16个氨基酸至约50个氨基酸，约16个氨基酸至约45个氨基酸，约16个氨基酸至约40个氨基酸，约16个氨基酸至约35个氨基酸，约16个氨基酸至约30个氨基酸，约16个氨基酸至约25个氨基酸，约16个氨基酸至约24个氨基酸，约16个氨基酸至约22个氨基酸，约16个氨基酸至约20个氨基酸，约16个氨基酸至约18个氨基酸，约18个氨基酸至约100个氨基酸，约18个氨基酸至约90个氨基酸，约18个氨基酸至约80个氨基酸，约18个氨基酸至约70个氨基酸，约18个氨基酸至约60个氨基酸，约18个氨基酸至约50个氨基酸，约18个氨基酸至约45个氨基酸，约18个氨基酸至约40个氨基酸，约18个氨基酸至约35个氨基酸，约18个氨基酸至约30个氨基酸，约18个氨基酸至约25个氨基酸，约18个氨基酸至约24个氨基酸，约18个氨基酸至约22个氨基酸，约18个氨基酸至约20个氨基酸，约20个氨基酸至约100个氨基酸，约20个氨基酸至约90个氨基酸，约20个氨基酸至约80个氨基酸，约20个氨基酸至约70个氨基酸，约20个氨基酸至约60个氨基酸，约20个氨基酸至约50个氨基酸，约20个氨基酸至约45个氨基酸，约20个氨基酸至约40个氨基酸，约20个氨基酸至约35个氨基酸，约20个氨基酸至约30个氨基酸，约20个氨基酸至约25个氨基酸，约20个氨基酸至约24个氨基酸，约20个氨基酸至约22个氨基酸，约22个氨基酸至约100个氨基酸，约22个氨基酸至约90个氨基酸，约22个氨基酸至约80个氨基酸，约22个氨基酸至约70个氨基酸，约22个氨基酸至约60个氨基酸，约22个氨基酸至约50个氨基酸，约22个氨基酸至约45个氨基酸，约22个氨基酸至约40个氨基酸，约22个氨基酸至约35个氨基酸，约22个氨基酸至约30个氨基酸，约22个氨基酸至约25个氨基酸，约22个氨基酸至约24个氨基酸，约25个氨基酸至约100个氨基酸，约25个氨基酸至约90个氨基酸，约25个氨基酸至约80个氨基酸，约25个氨基酸至约70个氨基酸，约25个氨基酸至约60个氨基酸，约25个氨基酸至约50个氨基酸，约25个氨基酸至约45个氨基酸，约25个氨基酸至约40个氨基酸，约25个氨基酸至约35个氨基酸，约25个氨基酸至约30个氨基酸，约30个氨基酸至约100个氨基酸，约30个氨基酸至约90个氨基酸，约30个氨基酸至约80个氨基酸，约30个氨基酸至约70个氨基酸，约30个氨基酸至约60个氨基酸，约30个氨基酸至约50个氨基酸，约30个氨基酸至约45个氨基酸，约30个氨基酸至约40个氨基酸，约30个氨基酸至约35个氨基酸，约35个氨基酸至约100个氨基酸，约35个氨基酸至约90个氨基酸，约35个氨基酸至约80个氨基酸，约35个氨基酸至约70个氨基酸，约35个氨基酸至约60个氨基酸，约35个氨基酸至约50个氨基酸，约35个氨基酸至约45个氨基酸，约35个氨基酸至约40个氨基酸，约40个氨基酸至约100个氨基酸，约40个氨基酸至约90个氨基酸，约40个氨基酸至约80个氨基酸，约40个氨基酸至约70个氨基酸，约40个氨基酸至约60个氨基酸，约40个氨基酸至约50个氨基酸，约40个氨基酸至约45个氨基酸，约45个氨基酸至约100个氨基酸，约45个氨基酸至约90个氨基酸，约45个氨基酸至约80个氨基酸，约45个氨基酸至约70个氨基酸，约45个氨基酸至约60个氨基酸，约45个氨基酸至约50个氨基酸，约50个氨基酸至约100个氨基酸，约50个氨基酸至约90个氨基酸，约50个氨基酸至约80个氨基酸，约50个氨基酸至约70个氨基酸，约50个氨基酸至约60个氨基酸，约60个氨基酸至约100个氨基酸，约60个氨基酸至约90个氨基酸，约60个氨基酸至约80个氨基酸，约60个氨基酸至约70个氨基酸，约70个氨基酸至约100个氨基酸，约70个氨基酸至约90个氨基酸，约70个氨基酸至约80个氨基酸，约80个氨基酸至约100个氨基酸，约80个氨基酸至约90个氨基酸，或约90个氨基酸至约100个氨基酸。

在一些实施例中，接头序列富含甘氨酸(Gly或G)残基。在一些实施例中，接头序列富含丝氨酸(Ser或S)残基。在一些实施例中，接头序列富含甘氨酸和丝氨酸残基。在一些实施例中，接头序列具有一个或多个甘氨酸-丝氨酸残基对(GS)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个GS对。在一些实施例中，接头序列具有一个或多个Gly-Gly-Gly-Ser(GGGS)序列，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个GGGS序列。在一些实施例中，接头序列具有一个或多个Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(GGGGS)序列，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个GGGGS序列。在一些实施例中，接头序列具有一个或多个Gly-Gly-Ser-Gly(GGSG)序列，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个GGSG序列。

在一些实施例中，接头序列可以包含以下或由以下组成：GGGGSGGGGSGGGGS(SEQID NO:7)。在一些实施例中，接头序列可以由包含以下或由以下组成的核酸编码：GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT(SEQ ID NO:8)。在一些实施例中，接头序列可以包含以下或由以下组成：GGGSGGGS(SEQ ID NO:9)。

靶标结合结构域

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和/或其它一个或多个靶标结合结构域可以是抗原结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性抗原结合结构域)、可溶性白介素或细胞因子蛋白(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性可溶性白介素蛋白或可溶性细胞因子蛋白)、可溶性白介素或细胞因子受体(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性可溶性白介素受体或可溶性细胞因子受体)和共刺激分子的配体(例如，本文描述或本领域已知的任一种共刺激分子的示例性配体)。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性第一靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性第二靶标结合结构域)和一个或多个其它靶标结合结构域可以各自独立地特异性结合到选自以下的组的靶标：CD16a、CD28、CD3(例如，CD3α、CD3β、CD3δ、CD3Μ和CD3K中的一个或多个)、CD33、CD20、CD19、CD22、CD40、CD47、CD52、CD70、CD80、CD86、CD123、CD137、CD272、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、PDL-2、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、B7-H4、HVEM、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、VISTA、a UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、OX40、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和/或一个或多个其它靶标结合结构域可以是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。在一些实例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和/或一个或多个其它靶标结合结构域可以是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。在一些实例中，可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和/或一个或多个其它靶标结合结构域可以是共刺激分子的配体。共刺激分子的配体的非限制性实例包括可溶性CD80、可溶性CD86、可溶性CD40、可溶性ICOSL、可溶性CD70、可溶性OX40L、可溶性4-1BBL、可溶性GITRL、可溶性LIGHT、可溶性TIM3、可溶性TIM4、可溶性ICAM1、可溶性LFA3、可溶性CD1d或可溶性LLT-1。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和/或一个或多个其它靶标结合结构域可以各自独立地具有以下氨基酸总数目：约5个氨基酸至约1000个氨基酸，约5个氨基酸至约950个氨基酸，约5个氨基酸至约900个氨基酸，约5个氨基酸至约850个氨基酸，约5个氨基酸至约800个氨基酸，约5个氨基酸至约750个氨基酸，约5个氨基酸至约700个氨基酸，约5个氨基酸至约650个氨基酸，约5个氨基酸至约600个氨基酸，约5个氨基酸至约550个氨基酸，约5个氨基酸至约500个氨基酸，约5个氨基酸至约450个氨基酸，约5个氨基酸至约400个氨基酸，约5个氨基酸至约350个氨基酸，约5个氨基酸至约300个氨基酸，约5个氨基酸至约280个氨基酸，约5个氨基酸至约260个氨基酸，约5个氨基酸至约240个氨基酸，约5个氨基酸至约220个氨基酸，约5个氨基酸至约200个氨基酸，约5个氨基酸至约195个氨基酸，约5个氨基酸至约190个氨基酸，约5个氨基酸至约185个氨基酸，约5个氨基酸至约180个氨基酸，约5个氨基酸至约175个氨基酸，约5个氨基酸至约170个氨基酸，约5个氨基酸至约165个氨基酸，约5个氨基酸至约160个氨基酸，约5个氨基酸至约155个氨基酸，约5个氨基酸至约150个氨基酸，约5个氨基酸至约145个氨基酸，约5个氨基酸至约140个氨基酸，约5个氨基酸至约135个氨基酸，约5个氨基酸至约130个氨基酸，约5个氨基酸至约125个氨基酸，约5个氨基酸至约120个氨基酸，约5个氨基酸至约115个氨基酸，约5个氨基酸至约110个氨基酸，约5个氨基酸至约105个氨基酸，约5个氨基酸至约100个氨基酸，约5个氨基酸至约95个氨基酸，约5个氨基酸至约90个氨基酸，约5个氨基酸至约85个氨基酸，约5个氨基酸至约80个氨基酸，约5个氨基酸至约75个氨基酸，约5个氨基酸至约70个氨基酸，约5个氨基酸至约65个氨基酸，约5个氨基酸至约60个氨基酸，约5个氨基酸至约55个氨基酸，约5个氨基酸至约50个氨基酸，约5个氨基酸至约45个氨基酸，约5个氨基酸至约40个氨基酸，约5个氨基酸至约35个氨基酸，约5个氨基酸至约30个氨基酸，约5个氨基酸至约25个氨基酸，约5个氨基酸至约20个氨基酸，约5个氨基酸至约15个氨基酸，约5个氨基酸至约10个氨基酸，约10个氨基酸至约1000个氨基酸，约10个氨基酸至约950个氨基酸，约10个氨基酸至约900个氨基酸，约10个氨基酸至约850个氨基酸，约10个氨基酸至约800个氨基酸，约10个氨基酸至约750个氨基酸，约10个氨基酸至约700个氨基酸，约10个氨基酸至约650个氨基酸，约10个氨基酸至约600个氨基酸，约10个氨基酸至约550个氨基酸，约10个氨基酸至约500个氨基酸，约10个氨基酸至约450个氨基酸，约10个氨基酸至约400个氨基酸，约10个氨基酸至约350个氨基酸，约10个氨基酸至约300个氨基酸，约10个氨基酸至约280个氨基酸，约10个氨基酸至约260个氨基酸，约10个氨基酸至约240个氨基酸，约10个氨基酸至约220个氨基酸，约10个氨基酸至约200个氨基酸，约10个氨基酸至约195个氨基酸，约10个氨基酸至约190个氨基酸，约10个氨基酸至约185个氨基酸，约10个氨基酸至约180个氨基酸，约10个氨基酸至约175个氨基酸，约10个氨基酸至约170个氨基酸，约10个氨基酸至约165个氨基酸，约10个氨基酸至约160个氨基酸，约10个氨基酸至约155个氨基酸，约10个氨基酸至约150个氨基酸，约10个氨基酸至约145个氨基酸，约10个氨基酸至约140个氨基酸，约10个氨基酸至约135个氨基酸，约10个氨基酸至约130个氨基酸，约10个氨基酸至约125个氨基酸，约10个氨基酸至约120个氨基酸，约10个氨基酸至约115个氨基酸，约10个氨基酸至约110个氨基酸，约10个氨基酸至约105个氨基酸，约10个氨基酸至约100个氨基酸，约10个氨基酸至约95个氨基酸，约10个氨基酸至约90个氨基酸，约10个氨基酸至约85个氨基酸，约10个氨基酸至约80个氨基酸，约10个氨基酸至约75个氨基酸，约10个氨基酸至约70个氨基酸，约10个氨基酸至约65个氨基酸，约10个氨基酸至约60个氨基酸，约10个氨基酸至约55个氨基酸，约10个氨基酸至约50个氨基酸，约10个氨基酸至约45个氨基酸，约10个氨基酸至约40个氨基酸，约10个氨基酸至约35个氨基酸，约10个氨基酸至约30个氨基酸，约10个氨基酸至约25个氨基酸，约10个氨基酸至约20个氨基酸，约10个氨基酸至约15个氨基酸，约15个氨基酸至约1000个氨基酸，约15个氨基酸至约950个氨基酸，约15个氨基酸至约900个氨基酸，约15个氨基酸至约850个氨基酸，约15个氨基酸至约800个氨基酸，约15个氨基酸至约750个氨基酸，约15个氨基酸至约700个氨基酸，约15个氨基酸至约650个氨基酸，约15个氨基酸至约600个氨基酸，约15个氨基酸至约550个氨基酸，约15个氨基酸至约500个氨基酸，约15个氨基酸至约450个氨基酸，约15个氨基酸至约400个氨基酸，约15个氨基酸至约350个氨基酸，约15个氨基酸至约300个氨基酸，约15个氨基酸至约280个氨基酸，约15个氨基酸至约260个氨基酸，约15个氨基酸至约240个氨基酸，约15个氨基酸至约220个氨基酸，约15个氨基酸至约200个氨基酸，约15个氨基酸至约195个氨基酸，约15个氨基酸至约190个氨基酸，约15个氨基酸至约185个氨基酸，约15个氨基酸至约180个氨基酸，约15个氨基酸至约175个氨基酸，约15个氨基酸至约170个氨基酸，约15个氨基酸至约165个氨基酸，约15个氨基酸至约160个氨基酸，约15个氨基酸至约155个氨基酸，约15个氨基酸至约150个氨基酸，约15个氨基酸至约145个氨基酸，约15个氨基酸至约140个氨基酸，约15个氨基酸至约135个氨基酸，约15个氨基酸至约130个氨基酸，约15个氨基酸至约125个氨基酸，约15个氨基酸至约120个氨基酸，约15个氨基酸至约115个氨基酸，约15个氨基酸至约110个氨基酸，约15个氨基酸至约105个氨基酸，约15个氨基酸至约100个氨基酸，约15个氨基酸至约95个氨基酸，约15个氨基酸至约90个氨基酸，约15个氨基酸至约85个氨基酸，约15个氨基酸至约80个氨基酸，约15个氨基酸至约75个氨基酸，约15个氨基酸至约70个氨基酸，约15个氨基酸至约65个氨基酸，约15个氨基酸至约60个氨基酸，约15个氨基酸至约55个氨基酸，约15个氨基酸至约50个氨基酸，约15个氨基酸至约45个氨基酸，约15个氨基酸至约40个氨基酸，约15个氨基酸至约35个氨基酸，约15个氨基酸至约30个氨基酸，约15个氨基酸至约25个氨基酸，约15个氨基酸至约20个氨基酸，约20个氨基酸至约1000个氨基酸，约20个氨基酸至约950个氨基酸，约20个氨基酸至约900个氨基酸，约20个氨基酸至约850个氨基酸，约20个氨基酸至约800个氨基酸，约20个氨基酸至约750个氨基酸，约20个氨基酸至约700个氨基酸，约20个氨基酸至约650个氨基酸，约20个氨基酸至约600个氨基酸，约20个氨基酸至约550个氨基酸，约20个氨基酸至约500个氨基酸，约20个氨基酸至约450个氨基酸，约20个氨基酸至约400个氨基酸，约20个氨基酸至约350个氨基酸，约20个氨基酸至约300个氨基酸，约20个氨基酸至约280个氨基酸，约20个氨基酸至约260个氨基酸，约20个氨基酸至约240个氨基酸，约20个氨基酸至约220个氨基酸，约20个氨基酸至约200个氨基酸，约20个氨基酸至约195个氨基酸，约20个氨基酸至约190个氨基酸，约20个氨基酸至约185个氨基酸，约20个氨基酸至约180个氨基酸，约20个氨基酸至约175个氨基酸，约20个氨基酸至约170个氨基酸，约20个氨基酸至约165个氨基酸，约20个氨基酸至约160个氨基酸，约20个氨基酸至约155个氨基酸，约20个氨基酸至约150个氨基酸，约20个氨基酸至约145个氨基酸，约20个氨基酸至约140个氨基酸，约20个氨基酸至约135个氨基酸，约20个氨基酸至约130个氨基酸，约20个氨基酸至约125个氨基酸，约20个氨基酸至约120个氨基酸，约20个氨基酸至约115个氨基酸，约20个氨基酸至约110个氨基酸，约20个氨基酸至约105个氨基酸，约20个氨基酸至约100个氨基酸，约20个氨基酸至约95个氨基酸，约20个氨基酸至约90个氨基酸，约20个氨基酸至约85个氨基酸，约20个氨基酸至约80个氨基酸，约20个氨基酸至约75个氨基酸，约20个氨基酸至约70个氨基酸，约20个氨基酸至约65个氨基酸，约20个氨基酸至约60个氨基酸，约20个氨基酸至约55个氨基酸，约20个氨基酸至约50个氨基酸，约20个氨基酸至约45个氨基酸，约20个氨基酸至约40个氨基酸，约20个氨基酸至约35个氨基酸，约20个氨基酸至约30个氨基酸，约20个氨基酸至约25个氨基酸，约25个氨基酸至约1000个氨基酸，约25个氨基酸至约950个氨基酸，约25个氨基酸至约900个氨基酸，约25个氨基酸至约850个氨基酸，约25个氨基酸至约800个氨基酸，约25个氨基酸至约750个氨基酸，约25个氨基酸至约700个氨基酸，约25个氨基酸至约650个氨基酸，约25个氨基酸至约600个氨基酸，约25个氨基酸至约550个氨基酸，约25个氨基酸至约500个氨基酸，约25个氨基酸至约450个氨基酸，约25个氨基酸至约400个氨基酸，约25个氨基酸至约350个氨基酸，约25个氨基酸至约300个氨基酸，约25个氨基酸至约280个氨基酸，约25个氨基酸至约260个氨基酸，约25个氨基酸至约240个氨基酸，约25个氨基酸至约220个氨基酸，约25个氨基酸至约200个氨基酸，约25个氨基酸至约195个氨基酸，约25个氨基酸至约190个氨基酸，约25个氨基酸至约185个氨基酸，约25个氨基酸至约180个氨基酸，约25个氨基酸至约175个氨基酸，约25个氨基酸至约170个氨基酸，约25个氨基酸至约165个氨基酸，约25个氨基酸至约160个氨基酸，约25个氨基酸至约155个氨基酸，约25个氨基酸至约150个氨基酸，约25个氨基酸至约145个氨基酸，约25个氨基酸至约140个氨基酸，约25个氨基酸至约135个氨基酸，约25个氨基酸至约130个氨基酸，约25个氨基酸至约125个氨基酸，约25个氨基酸至约120个氨基酸，约25个氨基酸至约115个氨基酸，约25个氨基酸至约110个氨基酸，约25个氨基酸至约105个氨基酸，约25个氨基酸至约100个氨基酸，约25个氨基酸至约95个氨基酸，约25个氨基酸至约90个氨基酸，约25个氨基酸至约85个氨基酸，约25个氨基酸至约80个氨基酸，约25个氨基酸至约75个氨基酸，约25个氨基酸至约70个氨基酸，约25个氨基酸至约65个氨基酸，约25个氨基酸至约60个氨基酸，约25个氨基酸至约55个氨基酸，约25个氨基酸至约50个氨基酸，约25个氨基酸至约45个氨基酸，约25个氨基酸至约40个氨基酸，约25个氨基酸至约35个氨基酸，约25个氨基酸至约30个氨基酸，约30个氨基酸至约1000个氨基酸，约30个氨基酸至约950个氨基酸，约30个氨基酸至约900个氨基酸，约30个氨基酸至约850个氨基酸，约30个氨基酸至约800个氨基酸，约30个氨基酸至约750个氨基酸，约30个氨基酸至约700个氨基酸，约30个氨基酸至约650个氨基酸，约30个氨基酸至约600个氨基酸，约30个氨基酸至约550个氨基酸，约30个氨基酸至约500个氨基酸，约30个氨基酸至约450个氨基酸，约30个氨基酸至约400个氨基酸，约30个氨基酸至约350个氨基酸，约30个氨基酸至约300个氨基酸，约30个氨基酸至约280个氨基酸，约30个氨基酸至约260个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约450个氨基酸，约180个氨基酸至约400个氨基酸，约180个氨基酸至约350个氨基酸，约180个氨基酸至约300个氨基酸，约180个氨基酸至约280个氨基酸，约180个氨基酸至约260个氨基酸，约180个氨基酸至约240个氨基酸，约180个氨基酸至约220个氨基酸，约180个氨基酸至约200个氨基酸，约180个氨基酸至约195个氨基酸，约180个氨基酸至约190个氨基酸，约180个氨基酸至约185个氨基酸，约185个氨基酸至约1000个氨基酸，约185个氨基酸至约950个氨基酸，约185个氨基酸至约900个氨基酸，约185个氨基酸至约850个氨基酸，约185个氨基酸至约800个氨基酸，约185个氨基酸至约750个氨基酸，约185个氨基酸至约700个氨基酸，约185个氨基酸至约650个氨基酸，约185个氨基酸至约600个氨基酸，约185个氨基酸至约550个氨基酸，约185个氨基酸至约500个氨基酸，约185个氨基酸至约450个氨基酸，约185个氨基酸至约400个氨基酸，约185个氨基酸至约350个氨基酸，约185个氨基酸至约300个氨基酸，约185个氨基酸至约280个氨基酸，约185个氨基酸至约260个氨基酸，约185个氨基酸至约240个氨基酸，约185个氨基酸至约220个氨基酸，约185个氨基酸至约200个氨基酸，约185个氨基酸至约195个氨基酸，约185个氨基酸至约190个氨基酸，约190个氨基酸至约1000个氨基酸，约190个氨基酸至约950个氨基酸，约190个氨基酸至约900个氨基酸，约190个氨基酸至约850个氨基酸，约190个氨基酸至约800个氨基酸，约190个氨基酸至约750个氨基酸，约190个氨基酸至约700个氨基酸，约190个氨基酸至约650个氨基酸，约190个氨基酸至约600个氨基酸，约190个氨基酸至约550个氨基酸，约190个氨基酸至约500个氨基酸，约190个氨基酸至约450个氨基酸，约190个氨基酸至约400个氨基酸，约190个氨基酸至约350个氨基酸，约190个氨基酸至约300个氨基酸，约190个氨基酸至约280个氨基酸，约190个氨基酸至约260个氨基酸，约190个氨基酸至约240个氨基酸，约190个氨基酸至约220个氨基酸，约190个氨基酸至约200个氨基酸，约190个氨基酸至约195个氨基酸，约195个氨基酸至约1000个氨基酸，约195个氨基酸至约950个氨基酸，约195个氨基酸至约900个氨基酸，约195个氨基酸至约850个氨基酸，约195个氨基酸至约800个氨基酸，约195个氨基酸至约750个氨基酸，约195个氨基酸至约700个氨基酸，约195个氨基酸至约650个氨基酸，约195个氨基酸至约600个氨基酸，约195个氨基酸至约550个氨基酸，约195个氨基酸至约500个氨基酸，约195个氨基酸至约450个氨基酸，约195个氨基酸至约400个氨基酸，约195个氨基酸至约350个氨基酸，约195个氨基酸至约300个氨基酸，约195个氨基酸至约280个氨基酸，约195个氨基酸至约260个氨基酸，约195个氨基酸至约240个氨基酸，约195个氨基酸至约220个氨基酸，约195个氨基酸至约200个氨基酸，约200个氨基酸至约1000个氨基酸，约200个氨基酸至约950个氨基酸，约200个氨基酸至约900个氨基酸，约200个氨基酸至约850个氨基酸，约200个氨基酸至约800个氨基酸，约200个氨基酸至约750个氨基酸，约200个氨基酸至约700个氨基酸，约200个氨基酸至约650个氨基酸，约200个氨基酸至约600个氨基酸，约200个氨基酸至约550个氨基酸，约200个氨基酸至约500个氨基酸，约200个氨基酸至约450个氨基酸，约200个氨基酸至约400个氨基酸，约200个氨基酸至约350个氨基酸，约200个氨基酸至约300个氨基酸，约200个氨基酸至约280个氨基酸，约200个氨基酸至约260个氨基酸，约200个氨基酸至约240个氨基酸，约200个氨基酸至约220个氨基酸，约220个氨基酸至约1000个氨基酸，约220个氨基酸至约950个氨基酸，约220个氨基酸至约900个氨基酸，约220个氨基酸至约850个氨基酸，约220个氨基酸至约800个氨基酸，约220个氨基酸至约750个氨基酸，约220个氨基酸至约700个氨基酸，约220个氨基酸至约650个氨基酸，约220个氨基酸至约600个氨基酸，约220个氨基酸至约550个氨基酸，约220个氨基酸至约500个氨基酸，约220个氨基酸至约450个氨基酸，约220个氨基酸至约400个氨基酸，约220个氨基酸至约350个氨基酸，约220个氨基酸至约300个氨基酸，约220个氨基酸至约280个氨基酸，约220个氨基酸至约260个氨基酸，约220个氨基酸至约240个氨基酸，约240个氨基酸至约1000个氨基酸，约240个氨基酸至约950个氨基酸，约240个氨基酸至约900个氨基酸，约240个氨基酸至约850个氨基酸，约240个氨基酸至约800个氨基酸，约240个氨基酸至约750个氨基酸，约240个氨基酸至约700个氨基酸，约240个氨基酸至约650个氨基酸，约240个氨基酸至约600个氨基酸，约240个氨基酸至约550个氨基酸，约240个氨基酸至约500个氨基酸，约240个氨基酸至约450个氨基酸，约240个氨基酸至约400个氨基酸，约240个氨基酸至约350个氨基酸，约240个氨基酸至约300个氨基酸，约240个氨基酸至约280个氨基酸，约240个氨基酸至约260个氨基酸，约260个氨基酸至约1000个氨基酸，约260个氨基酸至约950个氨基酸，约260个氨基酸至约900个氨基酸，约260个氨基酸至约850个氨基酸，约260个氨基酸至约800个氨基酸，约260个氨基酸至约750个氨基酸，约260个氨基酸至约700个氨基酸，约260个氨基酸至约650个氨基酸，约260个氨基酸至约600个氨基酸，约260个氨基酸至约550个氨基酸，约260个氨基酸至约500个氨基酸，约260个氨基酸至约450个氨基酸，约260个氨基酸至约400个氨基酸，约260个氨基酸至约350个氨基酸，约260个氨基酸至约300个氨基酸，约260个氨基酸至约280个氨基酸，约280个氨基酸至约1000个氨基酸，约280个氨基酸至约950个氨基酸，约280个氨基酸至约900个氨基酸，约280个氨基酸至约850个氨基酸，约280个氨基酸至约800个氨基酸，约280个氨基酸至约750个氨基酸，约280个氨基酸至约700个氨基酸，约280个氨基酸至约650个氨基酸，约280个氨基酸至约600个氨基酸，约280个氨基酸至约550个氨基酸，约280个氨基酸至约500个氨基酸，约280个氨基酸至约450个氨基酸，约280个氨基酸至约400个氨基酸，约280个氨基酸至约350个氨基酸，约280个氨基酸至约300个氨基酸，约300个氨基酸至约1000个氨基酸，约300个氨基酸至约950个氨基酸，约300个氨基酸至约900个氨基酸，约300个氨基酸至约850个氨基酸，约300个氨基酸至约800个氨基酸，约300个氨基酸至约750个氨基酸，约300个氨基酸至约700个氨基酸，约300个氨基酸至约650个氨基酸，约300个氨基酸至约600个氨基酸，约300个氨基酸至约550个氨基酸，约300个氨基酸至约500个氨基酸，约300个氨基酸至约450个氨基酸，约300个氨基酸至约400个氨基酸，约300个氨基酸至约350个氨基酸，约350个氨基酸至约1000个氨基酸，约350个氨基酸至约950个氨基酸，约350个氨基酸至约900个氨基酸，约350个氨基酸至约850个氨基酸，约350个氨基酸至约800个氨基酸，约350个氨基酸至约750个氨基酸，约350个氨基酸至约700个氨基酸，约350个氨基酸至约650个氨基酸，约350个氨基酸至约600个氨基酸，约350个氨基酸至约550个氨基酸，约350个氨基酸至约500个氨基酸，约350个氨基酸至约450个氨基酸，约350个氨基酸至约400个氨基酸，约400个氨基酸至约1000个氨基酸，约400个氨基酸至约950个氨基酸，约400个氨基酸至约900个氨基酸，约400个氨基酸至约850个氨基酸，约400个氨基酸至约800个氨基酸，约400个氨基酸至约750个氨基酸，约400个氨基酸至约700个氨基酸，约400个氨基酸至约650个氨基酸，约400个氨基酸至约600个氨基酸，约400个氨基酸至约550个氨基酸，约400个氨基酸至约500个氨基酸，约400个氨基酸至约450个氨基酸，约450个氨基酸至约1000个氨基酸，约450个氨基酸至约950个氨基酸，约450个氨基酸至约900个氨基酸，约450个氨基酸至约850个氨基酸，约450个氨基酸至约800个氨基酸，约450个氨基酸至约750个氨基酸，约450个氨基酸至约700个氨基酸，约450个氨基酸至约650个氨基酸，约450个氨基酸至约600个氨基酸，约450个氨基酸至约550个氨基酸，约450个氨基酸至约500个氨基酸，约500个氨基酸至约1000个氨基酸，约500个氨基酸至约950个氨基酸，约500个氨基酸至约900个氨基酸，约500个氨基酸至约850个氨基酸，约500个氨基酸至约800个氨基酸，约500个氨基酸至约750个氨基酸，约500个氨基酸至约700个氨基酸，约500个氨基酸至约650个氨基酸，约500个氨基酸至约600个氨基酸，约500个氨基酸至约550个氨基酸，约550个氨基酸至约1000个氨基酸，约550个氨基酸至约950个氨基酸，约550个氨基酸至约900个氨基酸，约550个氨基酸至约850个氨基酸，约550个氨基酸至约800个氨基酸，约550个氨基酸至约750个氨基酸，约550个氨基酸至约700个氨基酸，约550个氨基酸至约650个氨基酸，约550个氨基酸至约600个氨基酸，约600个氨基酸至约1000个氨基酸，约600个氨基酸至约950个氨基酸，约600个氨基酸至约900个氨基酸，约600个氨基酸至约850个氨基酸，约600个氨基酸至约800个氨基酸，约600个氨基酸至约750个氨基酸，约600个氨基酸至约700个氨基酸，约600个氨基酸至约650个氨基酸，约650个氨基酸至约1000个氨基酸，约650个氨基酸至约950个氨基酸，约650个氨基酸至约900个氨基酸，约650个氨基酸至约850个氨基酸，约650个氨基酸至约800个氨基酸，约650个氨基酸至约750个氨基酸，约650个氨基酸至约700个氨基酸，约700个氨基酸至约1000个氨基酸，约700个氨基酸至约950个氨基酸，约700个氨基酸至约900个氨基酸，约700个氨基酸至约850个氨基酸，约700个氨基酸至约800个氨基酸，约700个氨基酸至约750个氨基酸，约750个氨基酸至约1000个氨基酸，约750个氨基酸至约950个氨基酸，约750个氨基酸至约900个氨基酸，约750个氨基酸至约850个氨基酸，约750个氨基酸至约800个氨基酸，约800个氨基酸至约1000个氨基酸，约800个氨基酸至约950个氨基酸，约800个氨基酸至约900个氨基酸，约800个氨基酸至约850个氨基酸，约850个氨基酸至约1000个氨基酸，约850个氨基酸至约950个氨基酸，约850个氨基酸至约900个氨基酸，约900个氨基酸至约1000个氨基酸，约900个氨基酸至约950个氨基酸，或约950个氨基酸至约1000个氨基酸。

本文描述的任一个靶标结合结构域能够以小于1×10

本文描述的任一个靶标结合结构域能够以如下K

本文描述的任一个靶标结合结构域能够以如下K

可以使用本领域中已知的多种不同方法来确定本文描述的任一种抗原结合蛋白构建体的K

抗原结合结构域

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括或是scFv或单结构域抗体(例如，V

在一些实例中，抗原结合结构域(例如，本文描述的任一个抗原结合结构域)可以特异性结合到以下中的任一个：CD16a(参见例如第9,035,026号美国专利中描述的那些)、CD28(参见例如第7,723,482号美国专利中描述的那些)、CD3(参见例如第9,226,962号美国专利中描述的那些)、CD33(参见例如第8,759,494号美国专利中描述的那些)、CD20(参见例如WO 2014/026054中描述的那些)、CD19(参见例如第9,701,758号美国专利中描述的那些)、CD22(参见例如WO 2003/104425中描述的那些)、CD123(参见例如WO 2014/130635中描述的那些)、IL-1R(参见例如第8,741,604号美国专利中描述的那些)、IL-1(参见例如WO2014/095808中描述的那些)、VEGF(参见例如第9,090,684号美国专利中描述的那些)、IL-6R(参见例如第7,482,436号美国专利中描述的那些)、IL-4(参见例如第2012/0171197号美国专利申请公开中描述的那些)、IL-10(参见例如第2016/0340413号美国专利申请公开中描述的那些)、PDL-1(参见例如Drees等人,《蛋白质表达和纯化(ProteinExpress.Purif.)》94:60-66,2014中所描述的那些)、TIGIT(参见例如第2017/0198042号美国专利申请公开中所描述的那些)、PD-1(参见例如第7,488,802号美国专利中所描述的那些)、TIM3(参见例如第8,552,156号美国专利中所描述的那些)、CTLA4(参见例如WO 2012/120125中所描述的那些)、MICA(参见例如WO 2016/154585中所描述的那些)、MICB(参见例如第8,753,640号美国专利中所描述的那些)、IL-6(参见例如Gejima等人,《人抗体(HumanAntibodies)》11(4):121-129,2002中所描述的那些)、IL-8(参见例如第6,117,980号美国专利中所描述的那些)、TNFα(参见例如Geng等人,《免疫学研究(Immunol.Res.)》62(3):377-385,2015中所描述的那些)、CD26a(参见例如WO 2017/189526中所描述的那些)、CD36(参见例如第2015/0259429号美国专利申请公开中所描述的那些)、ULBP2(参见例如第9,273,136号美国专利中所描述的那些)、CD30(参见例如Homach等人,《斯堪的纳维亚免疫学杂志(Scand.J.Immunol.)》48(5):497-501,1998中所描述的那些)、CD200(参见例如第9,085,623号美国专利中所描述的那些)、IGF-1R(参见例如第2017/0051063号美国专利申请公开中所描述的那些)、MUC4AC(参见例如WO 2012/170470中所描述的那些)、MUC5AC(参见例如第9,238,084号美国专利中所描述的那些)、Trop-2(参见例如WO 2013/068946中所描述的那些)、CMET(参见例如Edwardraja等人,《生物技术与生物工程(Biotechnol.Bioeng.)》106(3):367-375,2010中所描述的那些)、EGFR(参见例如Akbari等人,《蛋白质表达和纯化》127:8-15,2016中所描述的那些)、HER1(参见例如第2013/0274446号美国专利申请公开中所描述的那些)、HER2(参见例如Cao等人,《生物技术快报(Biotechnol.Lett.)》37(7):1347-1354,2015中所描述的那些)、HER3(参见例如第9,505,843号美国专利中所描述的那些)、PSMA(参见例如Parker等人,《蛋白质表达和纯化》89(2):136-145,2013中所描述的那些)、CEA(参见例如WO 1995/015341中所描述的那些)、B7H3(参见例如第9,371,395号美国专利中所描述的那些)、EPCAM(参见例如WO 2014/159531中描述的那些)、BCMA(参见例如Smith等人,《分子疗法(Mol.Ther.)》26(6):1447-1456,2018中所描述的那些)、P-钙粘着蛋白(参见例如第7,452,537号美国专利中所描述的那些)、CEACAM5(参见例如第9,617,345号美国专利中所描述的那些)、UL16结合蛋白(参见例如WO 2017/083612中所描述的那些)、HLA-DR(参见例如Pistillo等人,《实验和临床免疫遗传学(Exp.Clin.Immunogenet.)》14(2):123-130,1997中所描述的那些)、DLL4(参见例如WO2014/007513中所描述的那些)、TYRO3(参见例如WO 2016/166348中所描述的那些)、AXL(参见例如WO 2012/175692中所描述的那些)、MER(参见例如WO 2016/106221中所描述的那些)、CD122(参见例如第2016/0367664号美国专利申请公开中所描述的那些)、CD155(参见例如WO 2017/149538中所描述的那些)或PDGF-DD(参见例如第9,441,034号美国专利中所描述的那些)。存在于本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链多肽中的抗原结合结构域各自独立地选自以下组成的组：VHH结构域、VNAR结构域和scFv。

在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和/或一个或多个其它抗原结合结构域中的一个或多个可以是抗CD3 scFv。在一些实施例中，抗CD3 scFv可以包括重链可变结构域和/或轻链可变结构域，所述重链可变结构域包括与QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:16)至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列，所述轻链可变域包括与QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINR(SEQ ID NO:17)至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列。在一些实施例中，scFv(例如本文描述的任一个scFv)可以包括在重链可变结构域与轻链可变结构域之间的接头序列(例如本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。在一些实施例中，抗CD3 scFv可以包括：由核酸编码的重链可变结构域，所述核酸包括与

CAAGTTCAGCTCCAGCAAAGCGGCGCCGAACTCGCTCGGCCCGGCGCTTCCGTGAAGATGTCTTGTAAGGCCTCCGGCTATACCTTCACCCGGTACACAATGCACTGGGTCAAGCAACGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATTGGCTATATCAACCCCTCCCGGGGCTATACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAAGCCACCCTCACCACCGACAAGTCCAGCAGCACCGCTTACATGCAGCTGAGCTCTTTAACATCCGAGGATTCCGCCGTGTACTACTGCGCTCGGTACTACGACGATCATTACTGCCTCGATTACTGGGGCCAAGGTACCACCTTAACAGTCTCCTCC(SEQ ID NO:18)至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列；和/或由核酸编码的轻链可变结构域，所述核酸包括与CAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCTATTATGAGCGCTAGCCCCGGTGAAAAGGTGACTATGACATGCAGCGCCAGCTCTTCCGTGAGCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAGTCCGGCACCAGCCCTAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCAGCGGCGTCCCCGCTCACTTTCGGGGCTCCGGCTCCGGAACAAGCTACTCTCTGACCATCAGCGGCATGGAAGCCGAGGATGCCGCTACCTATTACTGTCAGCAGTGGAGCTCCAACCCCTTCACCTTTGGATCCGGCACCAAGCTCGAGATTAATCGT(SEQ ID NO:19)至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列。

在一些实施例中，抗CD3 scFv可以包括与以下至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:20)。在一些实施例中，抗CD3 scFv可以包括存在于SEQ ID NO:20中的六个CDR。

在一些实施例中，抗CD3 scFv可以包括由核酸序列编码的序列，所述序列与以下至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)：

CAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCTATTATGAGCGCTAGCCCCGGTGAAAAGGTGACTATGACATGCAGCGCCAGCTCTTCCGTGAGCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAGTCCGGCACCAGCCCTAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCAGCGGCGTCCCCGCTCACTTTCGGGGCTCCGGCTCCGGAACAAGCTACTCTCTGACCATCAGCGGCATGGAAGCCGAGGATGCCGCTACCTATTACTGTCAGCAGTGGAGCTCCAACCCCTTCACCTTTGGATCCGGCACCAAGCTCGAGATTAATCGTGGAGGCGGAGGTAGCGGAGGAGGCGGATCCGGCGGTGGAGGTAGCCAAGTTCAGCTCCAGCAAAGCGGCGCCGAACTCGCTCGGCCCGGCGCTTCCGTGAAGATGTCTTGTAAGGCCTCCGGCTATACCTTCACCCGGTACACAATGCACTGGGTCAAGCAACGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATTGGCTATATCAACCCCTCCCGGGGCTATACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAAGCCACCCTCACCACCGACAAGTCCAGCAGCACCGCTTACATGCAGCTGAGCTCTTTAACATCCGAGGATTCCGCCGTGTACTACTGCGCTCGGTACTACGACGATCATTACTGCCTCGATTACTGGGGCCAAGGTACCACCTTAACAGTCTCCTCC(SEQ ID NO:21)。

在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和/或一个或多个其它抗原结合结构域中的一个或多个可以是抗CD28 scFv。在一些实施例中，抗CD28 scFv可以包括重链可变结构域和/或轻链可变结构域，所述重链可变结构域包括与DIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO:22)至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列，所述轻链可变域包括与VQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSS(SEQ ID NO:23)至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列。在一些实施例中，抗CD28 scFv可以包括重链可变结构域和/或轻链可变结构域，所述重链可变结构域由包括与GACATCGAGATGACACAGTCCCCCGCTATCATGAGCGCCTCTTTAGGAGAACGTGTGACCATGACTTGTACAGCTTCCTCCAGCGTGAGCAGCTCCTATTTCCACTGGTACCAGCAGAAACCCGGCTCCTCCCCTAAACTGTGTATCTACTCCACAAGCAATTTAGCTAGCGGCGTGCCTCCTCGTTTTAGCGGCTCCGGCAGCACCTCTTACTCTTTAACCATTAGCTCTATGGAGGCCGAAGATGCCGCCACATACTTTTGCCATCAGTACCACCGGTCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACAAAGCTGGAGACCAAGCGG(SEQ ID NO:24)至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列的核酸编码，所述轻链可变结构域由包括与GTGCAGCTGCAGCAGTCCGGACCCGAACTGGTCAAGCCCGGTGCCTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACCTCCTACGTCATCCAATGGGTGAAGCAGAAGCCCGGTCAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAATCCCTACAACGATTACACCAAGTATAACGAAAAGTTTAAGGGCAAGGCCACTCTGACAAGCGACAAGAGCTCCATTACCGCCTACATGGAGTTTTCCTCTTTAACTTCTGAGGACTCCGCTTTATACTATTGCGCTCGTTGGGGCGATGGCAATTATTGGGGCCGGGGAACTACTTTAACAGTGAGCTCC(SEQ ID NO:25)至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列的核酸编码。

在一些实施例中，抗CD28 scFv可以包括与以下至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

VQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO:26)。在一些实施例中，抗CD28 scFv可以包括存在于SEQ IDNO:26中的六个CDR。

在一些实施例中，抗CD28 scFv可以包括由核酸序列编码的序列，所述序列与以下至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)：

GTGCAGCTGCAGCAGTCCGGACCCGAACTGGTCAAGCCCGGTGCCTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACCTCCTACGTCATCCAATGGGTGAAGCAGAAGCCCGGTCAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAATCCCTACAACGATTACACCAAGTATAACGAAAAGTTTAAGGGCAAGGCCACTCTGACAAGCGACAAGAGCTCCATTACCGCCTACATGGAGTTTTCCTCTTTAACTTCTGAGGACTCCGCTTTATACTATTGCGCTCGTTGGGGCGATGGCAATTATTGGGGCCGGGGAACTACTTTAACAGTGAGCTCCGGCGGCGGCGGAAGCGGAGGTGGAGGATCTGGCGGTGGAGGCAGCGACATCGAGATGACACAGTCCCCCGCTATCATGAGCGCCTCTTTAGGAGAACGTGTGACCATGACTTGTACAGCTTCCTCCAGCGTGAGCAGCTCCTATTTCCACTGGTACCAGCAGAAACCCGGCTCCTCCCCTAAACTGTGTATCTACTCCACAAGCAATTTAGCTAGCGGCGTGCCTCCTCGTTTTAGCGGCTCCGGCAGCACCTCTTACTCTTTAACCATTAGCTCTATGGAGGCCGAAGATGCCGCCACATACTTTTGCCATCAGTACCACCGGTCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACAAAGCTGGAGACCAAGCGG(SEQ ID NO:27)。

在一些实施例中，本文描述的任一个抗原结合结构域是BiTe、(scFv)

VHH结构域是可在骆驼科动物中发现的单个单体可变抗体结构域。VNAR结构域是可在软骨鱼中发现的单个单体可变抗体结构域。VHH结构域和V

在一些实施例中，本文描述的单链嵌合多肽或多链嵌合多肽中的每个抗原结合结构域都是VHH结构域，或至少一个抗原结合结构域是VHH结构域。在一些实施例中，本文描述的单链嵌合多肽或多链嵌合多肽中的每个抗原结合结构域都是VNAR结构域，或至少一个抗原结合结构域是VNAR结构域。在一些实施例中，本文描述的单链嵌合多肽或多链嵌合多肽中的每个抗原结合结构域都是scFv结构域，或至少一个抗原结合结构域是scFv结构域。DART描述于例如Garber,《自然综述：药物发现(Nature Reviews Drug Discovery)》13:799-801,2014中。

在本文描述的任一个抗原结合结构域的一些实施例中，抗原结合结构域可以结合到选自以下组成的组的抗原：蛋白质、碳水化合物、脂质和其组合。

抗原结合结构域的其它实例和方面是本领域已知的。

可溶性白介素或细胞因子蛋白

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个可以是可溶性白介素蛋白、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。在一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下的组：IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白(例如，ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4、ULPB5或ULBP6。可溶性IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF和FLT3L的非限制性实例。

人可溶性IL-2(SEQ ID NO:28)

人可溶性IL-3(SEQ ID NO:29)

人可溶性IL-8(SEQ ID NO:31)

人可溶性IL-10(SEQ ID NO:32)

人可溶性IL-12β(p40)(SEQ ID NO:33)

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS

编码人可溶性IL-12β(p40)的核酸(SEQ ID NO:34)

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC

人可溶性IL-12α(p35)(SEQ ID NO:35)

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

编码人可溶性IL-12α(p35)的核酸(SEQ ID NO:36)

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC示例性人可溶性IL-12(SEQ ID NO:37)

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

编码示例性人可溶性IL-12的核酸(SEQ ID NO:38)

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC

人可溶性IL-15(SEQ ID NO:39)

人可溶性IL-17(SEQ ID NO:40)

人可溶性IL-18(SEQ ID NO:41)

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVT

ISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLA

CEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED

编码人可溶性IL-18的核酸(SEQ ID NO:42)

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT人可溶性PDGF-DD(SEQ ID NO:45)

人可溶性SCF(SEQ ID NO:46)

人可溶性FLT3L(SEQ ID NO:47)

示例性可溶性细胞表面蛋白包括可溶性MICA、MICB和ULP16结合蛋白(例如，ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4、ULBP5或ULBP6)。下文列出可溶性MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4、ULBP5和ULBP6的示例性序列。

人可溶性MICA(SEQ ID NO:48)

人可溶性MICB(SEQ ID NO:49)

人可溶性ULBP1(SEQ ID NO:50)

人可溶性ULBP2(SEQ ID NO:51)

人可溶性ULBP3(SEQ ID NO:52)

人可溶性ULBP4(SEQ ID NO:53)

人可溶性ULBP5(SEQ ID NO:54)

人可溶性ULBP6(SEQ ID NO:55)

在一些实施例中，可溶性IL-12蛋白可以包括：与SEQ ID NO:33至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的第一序列，以及与SEQ ID NO:35至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的第二序列。在一些实施例中，可溶性IL-12还可以包括在第一序列与第二序列之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。

在一些实施例中，可溶性IL-12蛋白由第一核酸和第二核酸序列编码，所述第一核酸编码与SEQ ID NO:34至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的第一序列，所述第二核酸序列编码与SEQ ID NO:36至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的第二序列。在一些实施例中，编码可溶性IL-12蛋白的核酸还包括在第一核酸与第二核酸之间的编码接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)的核酸序列。

在一些实施例中，可溶性IL-12蛋白包括与SEQ ID NO:37至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列。在一些实施例中，可溶性IL-12蛋白由核酸编码，所述核酸包括与SEQID NO:38至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列。

在一些实施例中，可溶性IL-18蛋白可以包括与SEQ ID NO:41至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列。在一些实施例中，可溶性IL-18蛋白由核酸编码，所述核酸包括与SEQ ID NO:42至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列。

可溶性白介素蛋白和可溶性细胞因子蛋白的其它实例是本领域已知的。

可溶性白介素或细胞因子受体

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素受体或可溶性细胞因子受体。在一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)(参见例如Yung等人,《美国呼吸与重症医学杂志(Am.J.Resp.Crit.Care Med.)》194(9):1140-1151,2016中所描述的那些)、可溶性TGF-βRIII(参见例如Heng等人,《胎盘(Placenta)》57:320,2017中所描述的那些)、可溶性NKG2D(参见例如Cosman等人,《免疫(Immunity)》14(2):123-133,2001；Costa等人,《免疫学前沿(Front.Immunol.)》,第9卷,第1150章,2018年5月29日；数字对象标识符：10.3389/fimmu.2018.01150)、可溶性NKp30(参见例如Costa等人,《免疫学前沿》,第9卷,第1150章,2018年5月29日；数字对象标识符：10.3389/fimmu.2018.01150)、可溶性NKp44(参见例如Costa等人,《免疫学前沿》,第9卷,第1150章,2018年5月29日；数字对象标识符：10.3389/fimmu.2018.01150中所描述的那些)、可溶性NKp46(参见例如Mandelboim等人,《自然(Nature)》409:1055-1060,2001；Costa等人,《免疫学前沿》,第9卷,第1150章,2018年5月29日；数字对象标识符：10.3389/fimmu.2018.01150)、可溶性DNAM-1(参见例如Costa等人,《免疫学前沿》,第9卷,第1150章,2018年5月29日；数字对象标识符：10.3389/fimmu.2018.01150中所描述的那些)、scMHCI(参见例如Washburn等人,《科学公共图书馆综合卷(PLoS One)》6(3):e18439,2011中所描述的那些)、scMHCII(参见例如Bishwajit等人,《细胞免疫学(Cellular Immunol.)》170(1):25-33,1996中所描述的那些)、scTCR(参见例如Weber等人,《自然》356(6372):793-796,1992中所描述的那些)、可溶性CD155(参见例如Tahara-Hanaoka等人,《国际免疫学(Int.Immunol.)》16(4):533-538,2004中所描述的那些)或可溶性CD28(参见例如Hebbar等人,《临床与实验免疫学(Clin.Exp.Immunol.)》136:388-392,2004)。

在一些实施例中，可溶性TGFβRII受体可以包括：与IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ ID NO:56)至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的第一序列，以及与IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ ID NO:56)至少70％相同(例如至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的第二序列。在一些实施例中，可溶性TGF-βRII受体还可以包括在第一序列与第二序列之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。

在一些实施例中，可溶性TGF-βRII受体由第一核酸和第二核酸序列编码，所述第一核酸编码与ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:57)至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的第一序列，所述第二核酸序列编码与ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQID NO:57)至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的第二序列。在一些实施例中，编码可溶性TGF-βRII受体的核酸还包括在第一核酸与第二核酸之间的编码接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)的核酸序列。

在一些实施例中，可溶性TGF-βRII受体包括与IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ ID NO:60)至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列。在一些实施例中，可溶性TGF-βRII受体由核酸编码，所述核酸包括与ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:61)至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列。

可溶性白介素受体和可溶性细胞因子受体的其它实例是本领域已知的。

共刺激分子的配体

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是共刺激分子的配体。在一些实施例中，共刺激分子的配体是可溶性CD80(参见例如Haile等人,《免疫学杂志》2013年9月1日；191(5):2829-36中所描述的那些，和WO2004/076488A1中所描述的那些)、可溶性CD86(参见例如Jeannin等人,《免疫》2000年9月；13(3):303-12中所描述的那些，和WO 2004/076488 A1中所描述的那些)、可溶性CD40(参见例如Elgueta等人,《免疫学评价(ImmunologicalReviews)》,229(1),doi.org/10.1111/j.1600-065X.2009.00782.x中所描述的那些，和WO2001/083755 A2中所描述的那些)、可溶性ICOSL(参见例如Chattopadyhay等人,《免疫学杂志》,2006年9月15日,177(6)3920-3929中所描述的那些)、可溶性CD70(参见例如Miller等人,《神经外科杂志(J.Neurosurg.)》,2010年8月；113(2):280-5中所描述的那些和US2009/0148942 A1中所描述的那些)、可溶性OX40L(参见例如Kondo等人,《人类免疫学(Hum.Immunol.)》,2007年7月；68(7):563-71.2007年4月13日电子版中所描述的那些)、可溶性4-1BBL(参见例如Wang等人,《癌症免疫与免疫疗法(Cancer Immunol Immunother)》,2012年4月；61(4):489-95中所描述的那些)、可溶性GITRL(参见例如Stone等人,《病毒学杂志(J.Virol.)》,2006年2月；80(4):1762-72中所描述的那些)、可溶性LIGHT(参见例如Maeda等人,《免疫学杂志》,2018年7月1日；201(1):202-214中所描述的那些)、可溶性TIM3(参见例如Clayton等人,《病毒学杂志》,2015年4月；89(7):3723-36中所描述的那些)、可溶性TIM4(参见例如Rhein等人,《病毒学杂志》,2016年6月10日；90(13):6097-6111中所描述的那些)、可溶性ICAM1(参见例如Witkowsa和Borawska,《欧洲细胞因子网络(Eur CytokineNetw.)》2004年4月至6月；15(2):91-8中所描述的那些)、可溶性LFA3(参见例如Menshawy等人,《比较临床病理学(Comparative Clinical Pathology)》,27(3),721-727,doi.org/10.1007/s00580-018-2657-x中所描述的那些)、可溶性CD1d(参见例如Brennan等人,《美国科学院院报(PNAS)》,2017年8月1日,114(31)8348-8353中所描述的那些)或可溶性LLT-1(参见例如Chalan等人,《科学公共图书馆综合卷》,10(7),e0132436,doi.org/10.1371/journal.pone.0132436中所描述的那些)。

在一些实施例中，可溶性CD80、可溶性CD86、可溶性CD40、可溶性ICOSL、可溶性CD70、可溶性OX40L、可溶性4-1BBL、可溶性GITRL、可溶性LIGHT、可溶性TIM3、可溶性TIM4、可溶性ICAM1、可溶性LFA3、可溶性CD1d或可溶性LLT-1可以包括与野生型序列至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列。

共刺激分子的配体的其它实例是本领域已知的。

其它抗原结合结构域

本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例还可以在其N端和/或C端包含一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽或多链嵌合多肽可以在其N端包括一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)。在一些实施例中，在单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)可以直接邻接第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)或接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)。在一些实施例中，单链嵌合多肽或多链嵌合多肽还包括接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)，所述接头序列在单链嵌合多肽N端的至少一个其它靶标结合结构域中的一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)或接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)之间。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例中，多肽在其C端包括一个或多个(例如两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)。在一些实施例中，在单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)直接邻接第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)或接头结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头结构域)。在一些实施例中，单链嵌合多肽或多链嵌合多肽还包含接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)，所述接头序列在单链嵌合多肽C端的至少一个其它靶标结合结构域中的一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)或接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)之间。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例中，多肽在其N端和其C端包括一个或多个(例如两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)。在一些实施例中，在单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的N端的一个或多个其它抗原结合结构域中的一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)可以直接邻接第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)或接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)。在一些实施例中，单链嵌合多肽或多链嵌合多肽还包括接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)，所述接头序列在N端的一个或多个其它抗原结合结构域中的一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)或接头结构域(例如，任一个示例性接头结构域)之间。在一些实施例中，在C端的一个或多个其它抗原结合结构域中的一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)直接邻接第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)或接头结构域(例如，任一个示例性接头结构域)。在一些实施例中，单链嵌合多肽或多链嵌合多肽还包括接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)，所述接头序列在C端的一个或多个其它抗原结合结构域中的一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)或接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)之间。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)和一个或多个其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)中的两个或更多个(例如，三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)和一个或多个其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)中的两个或更多个(例如，三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)和一个或多个其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)中的两个或更多个(例如，三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)包括相同的氨基酸序列。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)和一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)各自特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)和一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)各自特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)其它靶标结合结构域各自包含相同的氨基酸序列。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)和一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)特异性结合到不同的抗原。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性抗原结合结构域)。在本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性抗原结合结构域)。在一些实施例中，抗原结合结构域可以包括scFv或单结构域抗体。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)和一个或多个靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)中的一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD40、CD47、CD52、CD70、CD80、CD86、CD123、CD137、CD272、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、PDL-2、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、B7-H4、HVEM、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、VISTA、a UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、OX40、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)和一个或多个其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。可溶性白介素蛋白、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白的非限制性实例包括：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

在本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)、第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)和一个或多个其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。可溶性白介素受体和可溶性细胞因子受体的非限制性实例包括：可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)，其中一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个位于接头结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头结构域)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的任一个示例性第一结构域)之间。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽还可以包括在接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)，和/或一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的本文描述的任一个示例性第一结构域)之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端和/或C端包括一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)其它靶标结合结构域。在一些实施例中，在多链嵌合多肽的第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)直接邻接一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的本文描述的任一个示例性第一结构域)。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽还包括在一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的本文描述的任一个示例性第一结构域)之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。在一些实施例中，在多链嵌合多肽的第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)直接邻接第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽还包含在一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)位于接头结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头结构域)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的任一个示例性第一结构域)之间。在一些实施例中，在多链嵌合多肽的第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)直接邻接第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)或一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的本文描述的任一个示例性第一结构域)。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽还包含接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个接头序列)，所述接头序列安置于第一嵌合多肽中至少一个其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)或一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的本文描述的任一个示例性第一结构域)之间。在一些实施例中，在多链嵌合多肽的第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)直接邻接第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)或一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的任一个示例性第一结构域)。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽还包括接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个接头序列)，所述接头序列安置于第一嵌合多肽中至少一个其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与第一靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)或一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的本文描述的任一个示例性第一结构域)之间。在一些实施例中，位于接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的本文描述的任一个第一结构域)之间的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)，直接邻接接头结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽还包含如下安置的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)：(i)在接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域(例如，本文描述的任一个示例性接头结构域)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的任一个示例性第一结构域)之间；和/或(ii)在一对亲和结构域中的第一结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端和/或C端包括一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)其它靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)。在一些实施例中，在多链嵌合多肽的第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)直接邻接一对亲和结构域中的第二结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的本文描述的任一个示例性第二结构域)。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第二嵌合多肽还包括第二嵌合多肽中在一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与一对亲和结构域中的第二结构域(例如，本文描述的任一对示例性亲和结构域中的本文描述的任一个示例性第二结构域)之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。在一些实施例中，在多链嵌合多肽的第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)直接邻接第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个靶标结合结构域)。在一些实施例中，第二嵌合多肽还包括第二嵌合多肽中在一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)与第二靶标结合结构域(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性靶标结合结构域)之间的接头序列(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性接头序列)。

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个(例如，三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个或十个或更多个)特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个(例如，三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个或十个或更多个)特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个(例如，三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个或十个或更多个)包括相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包括相同的氨基酸序列。

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个(例如，两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个或十个或更多个)是抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域(例如，scFv或单结构域抗体)。

亲和结构域对

在一些实施例中，多链嵌合多肽包括：1)包括一对亲和结构域中的第一结构域的第一嵌合多肽，和2)包括一对亲和结构域中的第二结构域的第二嵌合多肽，使得第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合。在一些实施例中，一对亲和结构域是来自IL-15受体的α链(IL15Rα)(例如人IL-15受体(IL-15Rα))的寿司结构域和可溶性IL-15(例如，人可溶性IL-15)。寿司结构域，也称为短共有重复序列或1型糖蛋白基序，是蛋白质-蛋白质相互作用中的常见基序。已在许多蛋白质结合分子，包括补体组分C1r、C1s、因子H和C2m以及非免疫分子因子XIII和β2-糖蛋白上鉴别了寿司结构域。典型的寿司结构域具有大约60个氨基酸残基，并且包含四个半胱氨酸(Ranganathan,《太平洋生物计算专题讨论会(Pac.Symp Biocomput.)》2000:155-67)。第一半胱氨酸可以与第三半胱氨酸形成二硫键，并且第二半胱氨酸可以与第四半胱氨酸形成二硫桥键。在其中一对亲和结构域中的一个成员是可溶性IL-15的一些实施例中，可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。在其中一对亲和结构域中的一个成员是人IL-15受体的α链(IL15Rα)的一些实施例中，人IL15Rα是成熟全长IL15Rα。在一些实施例中，所述一对亲和结构域是芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子。在一些实施例中，所述一对亲和结构域是PKA和AKAP。在一些实施例中，所述一对亲和结构域是基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块(Rossi,《美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci USA.)》103:6841-6846,2006；Sharkey等人,《癌症研究(Cancer Res.)》68:5282-5290,2008；Rossi等人,《药物科学趋势(Trends Pharmacol Sci.)》33:474-481,2012)或基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25相互作用的SNARE模块(Deyev等人,《自然·生物技术(NatBiotechnol.)》1486-1492,2003)。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽包括一对亲和结构域中的第一结构域，并且多链嵌合多肽的第二嵌合多肽包括一对亲和结构域中的第二结构域，其中一对亲和结构域中的第一结构域和一对亲和结构域中的第二结构域以小于1×10

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽包括一对亲和结构域中的第一结构域，并且多链嵌合多肽的第二嵌合多肽包括一对亲和结构域中的第二结构域，其中一对亲和结构域中的第一结构域、一对亲和结构域中的第二结构域或两者是约10至100个氨基酸的长度。例如，一对亲和结构域中的第一结构域、一对亲和结构域中的第二结构域或两者可以是约10至100个氨基酸的长度，约15至100个氨基酸的长度，约20至100个氨基酸的长度，约25至100个氨基酸的长度，约30至100个氨基酸的长度，约35至100个氨基酸的长度，约40至100个氨基酸的长度，约45至100个氨基酸的长度，约50至100个氨基酸的长度，约55至100个氨基酸的长度，约60至100个氨基酸的长度，约65至100个氨基酸的长度，约70至100个氨基酸的长度，约75至100个氨基酸的长度，约80至100个氨基酸的长度，约85至100个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约95至100个氨基酸的长度，约10至95个氨基酸的长度，约10至90个氨基酸的长度，约10至85个氨基酸的长度，约10至80个氨基酸的长度，约10至75个氨基酸的长度，约10至70个氨基酸的长度，约10至65个氨基酸的长度，约10至60个氨基酸的长度，约10至55个氨基酸的长度，约10至50个氨基酸的长度，约10至45个氨基酸的长度，约10至40个氨基酸的长度，约10至35个氨基酸的长度，约10至30个氨基酸的长度，约10至25个氨基酸的长度，约10至20个氨基酸的长度，约10至15个氨基酸的长度，约20至30个氨基酸的长度，约30至40个氨基酸的长度，约40至50个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，约60至70个氨基酸的长度，约70至80个氨基酸的长度，约80至90个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约20至90个氨基酸的长度，约30至80个氨基酸的长度，约40至70个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，或介于两者之间的任何范围。在一些实施例中，一对亲和结构域中的第一结构域、一对亲和结构域中的第二结构域或两者是约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个氨基酸的长度。

在一些实施例中，本文公开的一对亲和结构域中的第一和/或第二结构域中的任一个可以在其N端和/或C端包括一个或多个其它氨基酸(例如1、2、3、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸)，只要一对亲和结构域中第一和/或第二结构域的功能保留完整即可。例如，来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域可以在N端和/或C端包括一个或多个其它氨基酸，同时仍保留与可溶性IL-15结合的能力。另外地或可替代地，可溶性IL-15可以在N端和/或C端包括一个或多个其它氨基酸，同时仍保留与来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域结合的能力。

来自IL-15受体α的α链(IL15Rα)的寿司结构域的非限制性实例可以包括与ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:10)至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施例中，来自IL15Rα的α链的寿司结构域可以由包括ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:11)的核酸编码。

在一些实施例中，可溶性IL-15可以包括与NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:39)至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施例中，可溶性IL-15可以由包括AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:110)的序列的核酸编码。

信号序列

在一些实施例中，单链嵌合多肽在其N端包括信号序列。如本领域普通技术人员将理解，信号序列是存在于许多内源产生的蛋白质的N端的氨基酸序列，其将蛋白质引导到分泌路径(例如，蛋白质被引导以存在于某些细胞内细胞器中、存在于细胞膜中或从细胞中分泌)。信号序列是异质的，并且其一级氨基酸序列差异很大。但是，信号序列的长度典型地为16至30个氨基酸，并且包括亲水、通常带正电荷的N端区、中央疏水结构域和含有信号肽酶的裂解位点的C端区。

在一些实施例中，单链嵌合多肽包括具有氨基酸序列MKWVTFISLLFLFSSAYS(SEQID NO:62)的信号序列。在一些实施例中，单链嵌合多肽包括由核酸序列ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC(SEQ ID NO:63)、ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC(SEQ ID NO:64)或ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC(SEQ ID NO:65)编码的信号序列。

在一些实施例中，单链嵌合多肽包括具有氨基酸序列MKCLLYLAFLFLGVNC(SEQ IDNO:66)的信号序列。在一些实施例中，单链嵌合多肽包括具有氨基酸序列MGQIVTMFEALPHIIDEVINIVIIVLIIITSIKAVYNFATCGILALVSFLFLAGRSCG(SEQ ID NO:67)的信号序列。在一些实施例中，单链嵌合多肽包括具有氨基酸序列MPNHQSGSPTGSSDLLLSGKKQRPHLALRRKRRREMRKINRKVRRMNLAPIKEKTAWQHLQALISEAEEVLKTSQTPQNSLTLFLALLSVLGPPVTG(SEQ ID NO:68)的信号序列。在一些实施例中，单链嵌合多肽包括具有氨基酸序列MDSKGSSQKGSRLLLLLVVSNLLLCQGVVS(SEQ ID NO:69)的信号序列。本领域普通技术人员将知道其它适当的用于单链嵌合多肽的信号序列。

在一些实施例中，单链嵌合多肽包括长度约10至100个氨基酸的信号序列。例如，信号序列可以是约10至100个氨基酸的长度，约15至100个氨基酸的长度，约20至100个氨基酸的长度，约25至100个氨基酸的长度，约30至100个氨基酸的长度，约35至100个氨基酸的长度，约40至100个氨基酸的长度，约45至100个氨基酸的长度，约50至100个氨基酸的长度，约55至100个氨基酸的长度，约60至100个氨基酸的长度，约65至100个氨基酸的长度，约70至100个氨基酸的长度，约75至100个氨基酸的长度，约80至100个氨基酸的长度，约85至100个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约95至100个氨基酸的长度，约10至95个氨基酸的长度，约10至90个氨基酸的长度，约10至85个氨基酸的长度，约10至80个氨基酸的长度，约10至75个氨基酸的长度，约10至70个氨基酸的长度，约10至65个氨基酸的长度，约10至60个氨基酸的长度，约10至55个氨基酸的长度，约10至50个氨基酸的长度，约10至45个氨基酸的长度，约10至40个氨基酸的长度，约10至35个氨基酸的长度，约10至30个氨基酸的长度，约10至25个氨基酸的长度，约10至20个氨基酸的长度，约10至15个氨基酸的长度，约20至30个氨基酸的长度，约30至40个氨基酸的长度，约40至50个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，约60至70个氨基酸的长度，约70至80个氨基酸的长度，约80至90个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约20至90个氨基酸的长度，约30至80个氨基酸的长度，约40至70个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，或介于两者之间的任何范围。在一些实施例中，信号序列的长度为约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个氨基酸。

在一些实施例中，本文公开的任一个信号序列可以在其N端和/或C端包括一个或多个其它氨基酸(例如，1、2、3、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸)，只要信号序列的功能保留完整即可。例如，具有氨基酸序列MKWVTFISLLFLFSSAYS(SEQ ID NO:62)的信号序列可以在N端或C端包括一个或多个其它氨基酸，同时仍保留将单链嵌合多肽引导到分泌路径的能力。

在一些实施例中，单链嵌合多肽包括将单链嵌合多肽引导到细胞外空间中的信号序列。这类实施例适用于产生相对容易分离和/或纯化的单链嵌合多肽。

在一些实施例中，多链嵌合多肽包括在其N端包括信号序列的第一嵌合多肽。在一些实施例中，多链嵌合多肽包括在其N端包括信号序列的第二嵌合多肽。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽和多链嵌合多肽的第二嵌合多肽都包括信号序列。如本领域普通技术人员将理解，信号序列是存在于许多内源产生的蛋白质的N端的氨基酸序列，其将蛋白质引导到分泌路径(例如，蛋白质被引导以存在于某些细胞内细胞器中、存在于细胞膜中或从细胞中分泌)。信号序列是异质的，并且其一级氨基酸序列差异很大。但是，信号序列的长度典型地为16至30个氨基酸，并且包括亲水、通常带正电荷的N端区、中央疏水结构域和含有信号肽酶的裂解位点的C端区。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括具有氨基酸序列MKWVTFISLLFLFSSAYS(SEQ ID NO:62)的信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括由核酸序列ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC(SEQ ID NO:63)、ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC(SEQ ID NO:64)或ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC(SEQ ID NO:65)编码的信号序列。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括具有氨基酸序列MKCLLYLAFLFLGVNC(SEQ ID NO:66)的信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括具有氨基酸序列MGQIVTMFEALPHIIDEVINIVIIVLIIITSIKAVYNFATCGILALVSFLFLAGRSCG(SEQ ID NO:67)的信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括具有氨基酸序列MPNHQSGSPTGSSDLLLSGKKQRPHLALRRKRRREMRKINRKVRRMNLAPIKEKTAWQHLQALISEAEEVLKTSQTPQNSLTLFLALLSVLGPPVTG(SEQ ID NO:68)的信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括具有氨基酸序列MDSKGSSQKGSRLLLLLVVSNLLLCQGVVS(SEQ ID NO:69)的信号序列。本领域普通技术人员将知道用于本文所描述的多链嵌合多肽的第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽的其它适当的信号序列。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括长度约10至100个氨基酸的信号序列。例如，信号序列可以是约10至100个氨基酸的长度，约15至100个氨基酸的长度，约20至100个氨基酸的长度，约25至100个氨基酸的长度，约30至100个氨基酸的长度，约35至100个氨基酸的长度，约40至100个氨基酸的长度，约45至100个氨基酸的长度，约50至100个氨基酸的长度，约55至100个氨基酸的长度，约60至100个氨基酸的长度，约65至100个氨基酸的长度，约70至100个氨基酸的长度，约75至100个氨基酸的长度，约80至100个氨基酸的长度，约85至100个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约95至100个氨基酸的长度，约10至95个氨基酸的长度，约10至90个氨基酸的长度，约10至85个氨基酸的长度，约10至80个氨基酸的长度，约10至75个氨基酸的长度，约10至70个氨基酸的长度，约10至65个氨基酸的长度，约10至60个氨基酸的长度，约10至55个氨基酸的长度，约10至50个氨基酸的长度，约10至45个氨基酸的长度，约10至40个氨基酸的长度，约10至35个氨基酸的长度，约10至30个氨基酸的长度，约10至25个氨基酸的长度，约10至20个氨基酸的长度，约10至15个氨基酸的长度，约20至30个氨基酸的长度，约30至40个氨基酸的长度，约40至50个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，约60至70个氨基酸的长度，约70至80个氨基酸的长度，约80至90个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约20至90个氨基酸的长度，约30至80个氨基酸的长度，约40至70个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，或介于两者之间的任何范围。在一些实施例中，信号序列的长度为约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个氨基酸。

在一些实施例中，本文公开的任一个信号序列可以在其N端和/或C端包括一个或多个其它氨基酸(例如，1、2、3、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸)，只要信号序列的功能保留完整即可。例如，具有氨基酸序列MKCLLYLAFLFLGVNC(SEQ ID NO:66)的信号序列可以在N端或C端包括一个或多个其它氨基酸，同时仍保留将多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者引导到分泌路径的能力。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括将多链嵌合多肽引导到细胞外空间中的信号序列。这类实施例可以用于产生相对容易分离和/或纯化的多链嵌合多肽。

肽标签

在一些实施例中，单链嵌合多肽包括肽标签(例如，在单链嵌合多肽的N端或C端)。在一些实施例中，单链嵌合多肽包括两个或更多个肽标签。

可以包括在单链嵌合多肽中的示例性肽标签包括但不限于AviTag(GLNDIFEAQKIEWHE；SEQ ID NO:70)、钙调蛋白标签(KRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGAL；SEQ IDNO:71)、聚谷氨酸盐标签(EEEEEE；SEQ ID NO:72)、E标签(GAPVPYPDPLEPR；SEQ ID NO:73)、FLAG标签(DYKDDDDK；SEQ ID NO:74)、HA标签、来自血细胞凝聚素的肽(YPYDVPDYA；SEQ IDNO:75)、his标签(HHHHH(SEQ ID NO:76)；HHHHHH(SEQ ID NO:77)；HHHHHHH(SEQ ID NO:78)；HHHHHHHH(SEQ ID NO:79)；HHHHHHHHH(SEQ ID NO:80)；或HHHHHHHHHH(SEQ ID NO:81))、myc标签(EQKLISEEDL；SEQ ID NO:82)、NE标签(TKENPRSNQEESYDDNES；SEQ ID NO:83)、S标签(KETAAAKFERQHMDS；SEQ ID NO:84)、SBP标签(MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP；SEQ ID NO:85)、Softag 1(SLAELLNAGLGGS；SEQ ID NO:86)、Softag 3(TQDPSRVG；SEQ ID NO:87)、Spot标签(PDRVRAVSHWSS；SEQ ID NO:88)、Strep标签(WSHPQFEK；SEQ ID NO:89)、TC标签(CCPGCC；SEQ ID NO:90)、Ty标签(EVHTNQDPLD；SEQ IDNO:91)、V5标签(GKPIPNPLLGLDST；SEQ ID NO:92)、VSV标签(YTDIEMNRLGK；SEQ ID NO:93)和Xpress标签(DLYDDDDK；SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，组织因子蛋白是肽标签。

可以包括在单链嵌合多肽中的肽标签可以用于与单链嵌合多肽相关的多种应用中的任一种中。例如，肽标签可以用于纯化单链嵌合多肽。作为一个非限制性实例，单链嵌合多肽可以包括myc标签；并且可以使用识别myc标签的抗体纯化。识别myc标签的抗体的一个非限制性实例是9E10，其可以从非商业发展研究杂交瘤库(Developmental StudiesHybridoma Bank)获得。作为另一非限制性实例，单链嵌合多肽可以包括组氨酸标签；并且可以使用镍或钴螯合物纯化。本领域普通技术人员将知道其它合适的标签和结合这些标签以便纯化单链嵌合多肽的试剂。在一些实施例中，纯化后从单链嵌合多肽去除肽标签。在一些实施例中，纯化后未从单链嵌合多肽去除肽标签。

可以包括在单链嵌合多肽中的肽标签可以用于例如单链嵌合多肽的免疫沉淀、单链嵌合多肽的成像(例如，通过蛋白质印迹法、ELISA、流式细胞术和/或免疫细胞化学)和/或单链嵌合多肽的增溶。

在一些实施例中，单链嵌合多肽包括长度约10至100个氨基酸的肽标签。例如，肽标签可以是约10至100个氨基酸的长度，约15至100个氨基酸的长度，约20至100个氨基酸的长度，约25至100个氨基酸的长度，约30至100个氨基酸的长度，约35至100个氨基酸的长度，约40至100个氨基酸的长度，约45至100个氨基酸的长度，约50至100个氨基酸的长度，约55至100个氨基酸的长度，约60至100个氨基酸的长度，约65至100个氨基酸的长度，约70至100个氨基酸的长度，约75至100个氨基酸的长度，约80至100个氨基酸的长度，约85至100个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约95至100个氨基酸的长度，约10至95个氨基酸的长度，约10至90个氨基酸的长度，约10至85个氨基酸的长度，约10至80个氨基酸的长度，约10至75个氨基酸的长度，约10至70个氨基酸的长度，约10至65个氨基酸的长度，约10至60个氨基酸的长度，约10至55个氨基酸的长度，约10至50个氨基酸的长度，约10至45个氨基酸的长度，约10至40个氨基酸的长度，约10至35个氨基酸的长度，约10至30个氨基酸的长度，约10至25个氨基酸的长度，约10至20个氨基酸的长度，约10至15个氨基酸的长度，约20至30个氨基酸的长度，约30至40个氨基酸的长度，约40至50个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，约60至70个氨基酸的长度，约70至80个氨基酸的长度，约80至90个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约20至90个氨基酸的长度，约30至80个氨基酸的长度，约40至70个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，或介于两者之间的任何范围。在一些实施例中，肽标签的长度为约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个氨基酸。

单链嵌合多肽中包括的肽标签可以具有任何合适的长度。例如，肽标签的长度可以是5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个或更多个氨基酸。在单链嵌合多肽包括两个或更多个肽标签的实施例中，两个或更多个肽标签可以具有相同或不同的长度。在一些实施例中，本文公开的任一个肽标签可以在N端和/或C端包括一个或多个其它氨基酸(例如，1、2、3、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸)，只要肽标签的功能保留完整即可。例如，具有氨基酸序列EQKLISEEDL(SEQ ID NO:82)的myc标签可以包括一个或多个其它氨基酸(例如，在肽标签的N端和/或C端)，同时仍保留与抗体(例如，9E10)结合的能力。

在一些实施例中，多链嵌合多肽包括第一嵌合多肽，其包括肽标签(例如，在第一嵌合多肽的N端或C端)。在一些实施例中，多链嵌合多肽包括第二嵌合多肽，其包括肽标签(例如，在第二嵌合多肽的N端或C端)。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽和多链嵌合多肽的第二嵌合多肽都包括肽标签。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括两个或更多个肽标签。

可以包括在多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者中的示例性肽标签包括但不限于AviTag(GLNDIFEAQKIEWHE；SEQ ID NO:70)、钙调蛋白标签((KRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGAL；SEQ ID NO:71)、聚谷氨酸盐标签(EEEEEE；SEQ ID NO:72)、E标签(GAPVPYPDPLEPR；SEQ ID NO:73)、FLAG标签((DYKDDDDK；SEQ ID NO:74)、HA标签、来自血细胞凝聚素的肽(YPYDVPDYA；SEQ ID NO:75)、his标签(HHHHH(SEQ ID NO:76)；HHHHHH(SEQ ID NO:77)；HHHHHHH(SEQ ID NO:78)；HHHHHHHH(SEQ ID NO:79)；HHHHHHHHH(SEQ ID NO:80)；或HHHHHHHHHH(SEQ ID NO:81)、myc标签(EQKLISEEDL；SEQ ID NO:82)、NE标签(TKENPRSNQEESYDDNES；SEQ ID NO:83)、S标签(KETAAAKFERQHMDS；SEQ ID NO:84)、SBP标签(MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP；SEQ ID NO:85)、Softag 1(SLAELLNAGLGGS；SEQ ID NO:86)、Softag 3(TQDPSRVG；SEQ ID NO:87)、Spot标签(PDRVRAVSHWSS；SEQ ID NO:88)、Strep标签((WSHPQFEK；SEQ ID NO:89)、TC标签(CCPGCC；SEQ ID NO:90)、Ty标签(EVHTNQDPLD；SEQ ID NO:91)、V5标签(GKPIPNPLLGLDST；SEQ IDNO:92)、VSV标签(YTDIEMNRLGK；SEQ ID NO:93)和Xpress标签(DLYDDDDK；SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，组织因子蛋白是肽标签。

可以包括在多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者中的肽标签可以用于与多链嵌合多肽相关的多种应用中的任一种中。例如，肽标签可以用于纯化多链嵌合多肽。作为一个非限制性实例，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽(例如，重组表达的第一嵌合多肽)、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽(例如，重组表达的第二嵌合多肽)或两者可以包括myc标签；可以使用识别myc标签的抗体纯化包括加myc标签的第一嵌合多肽、加myc标签的第二嵌合多肽或两者的多链嵌合多肽。识别myc标签的抗体的一个非限制性实例是9E10，其可以从非商业发展研究杂交瘤库(Developmental Studies Hybridoma Bank)获得。作为另一非限制性实例，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽(例如，重组表达的第一嵌合多肽)、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽(例如，重组表达的第二嵌合多肽)或两者可以包括组氨酸标签；可使用镍或钴螯合物纯化包括加组氨酸标签的第一嵌合多肽、加组氨酸标签的第二嵌合多肽或两者的多链嵌合多肽。本领域普通技术人员将知道其它合适的标签和结合这些标签的试剂以用于纯化多链嵌合多肽。在一些实施例中，纯化后从多链嵌合多肽的第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽去除肽标签。在一些实施例中，纯化后未从多链嵌合多肽的第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽去除肽标签。

可以包括在多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者中的肽标签可以用于例如多链嵌合多肽的免疫沉淀、多链嵌合多肽的成像(例如，通过蛋白质印迹法、ELISA、流式细胞术和/或免疫细胞化学)和/或多链嵌合多肽的增溶。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括长度约10至100个氨基酸的肽标签。例如，肽标签可以是约10至100个氨基酸的长度，约15至100个氨基酸的长度，约20至100个氨基酸的长度，约25至100个氨基酸的长度，约30至100个氨基酸的长度，约35至100个氨基酸的长度，约40至100个氨基酸的长度，约45至100个氨基酸的长度，约50至100个氨基酸的长度，约55至100个氨基酸的长度，约60至100个氨基酸的长度，约65至100个氨基酸的长度，约70至100个氨基酸的长度，约75至100个氨基酸的长度，约80至100个氨基酸的长度，约85至100个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约95至100个氨基酸的长度，约10至95个氨基酸的长度，约10至90个氨基酸的长度，约10至85个氨基酸的长度，约10至80个氨基酸的长度，约10至75个氨基酸的长度，约10至70个氨基酸的长度，约10至65个氨基酸的长度，约10至60个氨基酸的长度，约10至55个氨基酸的长度，约10至50个氨基酸的长度，约10至45个氨基酸的长度，约10至40个氨基酸的长度，约10至35个氨基酸的长度，约10至30个氨基酸的长度，约10至25个氨基酸的长度，约10至20个氨基酸的长度，约10至15个氨基酸的长度，约20至30个氨基酸的长度，约30至40个氨基酸的长度，约40至50个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，约60至70个氨基酸的长度，约70至80个氨基酸的长度，约80至90个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约20至90个氨基酸的长度，约30至80个氨基酸的长度，约40至70个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，或介于两者之间的任何范围。在一些实施例中，肽标签的长度为约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个氨基酸。

多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者中包括的肽标签可以具有任何合适的长度。例如，肽标签的长度可以是5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个或更多个氨基酸。在多链嵌合多肽包括两个或更多个肽标签的实施例中，两个或更多个肽标签可以具有相同或不同的长度。在一些实施例中，本文公开的任一个肽标签可以在N端和/或C端包括一个或多个其它氨基酸(例如，1、2、3、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸)，只要肽标签的功能保留完整即可。例如，具有氨基酸序列EQKLISEEDL(SEQID NO:82)的myc标签可以包括一个或多个其它氨基酸(例如，在肽标签的N端和/或C端)，同时仍保留与抗体(例如，9E10)结合的能力。

A型单链嵌合多肽的示例性实施例

在本文描述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和/或第二靶标结合结构域可以独立地特异性结合到CD3(例如，人CD3)或CD28(例如，人CD28)。在一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到CD3(例如，人CD3)，而第二靶标结合结构域特异性结合到CD28(例如，人CD28)。在一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到CD28(例如，人CD28)，而第二靶标结合结构域特异性结合到CD3(例如，人CD3)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域彼此直接邻接。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括在第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域与第二靶标结合结构域彼此直接邻接。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括在可溶性组织因子结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域(例如，本文描述的任一个示例性抗原结合结构域)。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

特异性结合到CD3的scFv的非限制性实例可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:20)。

在一些实施例中，特异性结合到CD3的scFv可以由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGTGGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGCCAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGC(SEQ ID NO:12)。

特异性结合到CD28的scFv的非限制性实例可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

VQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO:26)。

在一些实施例中，特异性结合到CD28的scFv可以由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCCGACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG(SEQ ID NO:13)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和/或第二靶标结合结构域是可溶性受体(例如，可溶性CD28受体或可溶性CD3受体)。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO:100)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGTGGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGCCAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCCGACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG(SEQ ID NO:101)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO:102)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCTTATTATTTTTATTCAGCTCCGCCTATTCCCAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGTGGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGCCAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCCGACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG(SEQ ID NO:103)。

B型单链嵌合多肽的示例性实施例

在本文描述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和/或第二靶标结合结构域可以独立地特异性结合到IL-2受体(例如，人IL-2受体)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域彼此直接邻接。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括在第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域与第二靶标结合结构域彼此直接邻接。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括在可溶性组织因子结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域是可溶性人IL-2蛋白。特异性结合到IL-2受体的IL-2蛋白的非限制性实例可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT(SEQ ID NO:28)。

在一些实施例中，特异性结合到IL-2受体的IL-2蛋白可以由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCTACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAATTAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTTTTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAGAAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGCAAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTAATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATATGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTACCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTAACT(SEQ ID NO:104)。

在一些实施例中，特异性结合到IL-2受体的IL-2蛋白可以由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GCCCCCACCTCCTCCTCCACCAAGAAGACCCAGCTGCAGCTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTAAACGGCATCAACAACTACAAGAACCCCAAGCTGACTCGTATGCTGACCTTCAAGTTCTACATGCCCAAGAAGGCCACCGAGCTGAAGCATTTACAGTGTTTAGAGGAGGAGCTGAAGCCCCTCGAGGAGGTGCTGAATTTAGCCCAGTCCAAGAATTTCCATTTAAGGCCCCGGGATTTAATCAGCAACATCAACGTGATCGTTTTAGAGCTGAAGGGCTCCGAGACCACCTTCATGTGCGAGTACGCCGACGAGACCGCCACCATCGTGGAGTTTTTAAATCGTTGGATCACCTTCTGCCAGTCCATCATCTCCACTTTAACC(SEQ ID NO:105)在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT(SEQ ID NO:106)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GCCCCCACCTCCTCCTCCACCAAGAAGACCCAGCTGCAGCTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTAAACGGCATCAACAACTACAAGAACCCCAAGCTGACTCGTATGCTGACCTTCAAGTTCTACATGCCCAAGAAGGCCACCGAGCTGAAGCATTTACAGTGTTTAGAGGAGGAGCTGAAGCCCCTCGAGGAGGTGCTGAATTTAGCCCAGTCCAAGAATTTCCATTTAAGGCCCCGGGATTTAATCAGCAACATCAACGTGATCGTTTTAGAGCTGAAGGGCTCCGAGACCACCTTCATGTGCGAGTACGCCGACGAGACCGCCACCATCGTGGAGTTTTTAAATCGTTGGATCACCTTCTGCCAGTCCATCATCTCCACTTTAACCAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCTACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAATTAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTTTTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAGAAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGCAAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTAATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATATGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTACCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTAACT(SEQ ID NO:107)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT(SEQ ID NO:108)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGCCCCCACCTCCTCCTCCACCAAGAAGACCCAGCTGCAGCTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTAAACGGCATCAACAACTACAAGAACCCCAAGCTGACTCGTATGCTGACCTTCAAGTTCTACATGCCCAAGAAGGCCACCGAGCTGAAGCATTTACAGTGTTTAGAGGAGGAGCTGAAGCCCCTCGAGGAGGTGCTGAATTTAGCCCAGTCCAAGAATTTCCATTTAAGGCCCCGGGATTTAATCAGCAACATCAACGTGATCGTTTTAGAGCTGAAGGGCTCCGAGACCACCTTCATGTGCGAGTACGCCGACGAGACCGCCACCATCGTGGAGTTTTTAAATCGTTGGATCACCTTCTGCCAGTCCATCATCTCCACTTTAACCAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCTACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAATTAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTTTTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAGAAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGCAAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTAATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATATGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTACCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTAACT(SEQID NO:109)。

C型单链嵌合多肽的示例性实施例

在本文描述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和/或第二靶标结合结构域可以独立地特异性结合到IL-15受体(例如，人IL-15受体)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域彼此直接邻接。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括在第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域与第二靶标结合结构域彼此直接邻接。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽还包括在可溶性组织因子结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域是可溶性人IL-15蛋白。特异性结合到IL-15受体的IL-15蛋白的非限制性实例可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:39)。

在一些实施例中，特异性结合到IL-15受体的IL-15蛋白可以由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

AACTGGGTGAACGTGATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAGGATTTAATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACTCTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTAGCTGCAAGGTGACTGCCATGAAGTGCTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGCGATGCCAGCATCCACGACACTGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAACAACTCTTTAAGCAGCAACGGCAACGTGACAGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTTTACAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACTAGC(SEQ ID NO:111)。

在一些实施例中，特异性结合到IL-15受体的IL-15蛋白可以由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:110)

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:112)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

AACTGGGTGAACGTGATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAGGATTTAATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACTCTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTAGCTGCAAGGTGACTGCCATGAAGTGCTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGCGATGCCAGCATCCACGACACTGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAACAACTCTTTAAGCAGCAACGGCAACGTGACAGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTTTACAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACTAGCAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:113)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:114)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCAACTGGGTGAACGTGATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAGGATTTAATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACTCTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTAGCTGCAAGGTGACTGCCATGAAGTGCTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGCGATGCCAGCATCCACGACACTGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAACAACTCTTTAAGCAGCAACGGCAACGTGACAGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTTTACAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACTAGCAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:115)。

示例性多链嵌合多肽-A型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-15或可溶性IL-18。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地是可溶性IL-15或可溶性IL-18。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域都特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-12的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-12的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-18(例如，可溶性人IL-18)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-18包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED(SEQ ID NO:41)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-18由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT(SEQ ID NO:42)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性IL-12(例如，可溶性人IL-12)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12包括可溶性人IL-12β(p40)的序列和可溶性人IL-12α(p35)的序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12还包括在可溶性IL-12β(p40)的序列与可溶性人IL-12α(p35)的序列之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头序列)。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头序列包含GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12β(p40)的序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS(SEQ ID NO:33)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12β(p40)由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC(SEQ ID NO:34)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12α(p35)包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS(SEQ ID NO:35)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12α(p35)由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC(SEQ IDNO:36)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNEDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:116)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:117)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSYFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNEDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:118)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGCTACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:119)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:120)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:121)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:122)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCCATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:123)。

示例性多链嵌合多肽-B型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-21的受体或TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21多肽)或可溶性TGF-β受体(例如，可溶性TGF-βRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地是可溶性IL-21或可溶性TGF-β受体(例如，可溶性TGF-βRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域都特异性结合到IL-21的受体或TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合TGF-β，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:124)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:125)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性TGF-β受体(例如，可溶性TGF-βRII受体(例如，可溶性人TGF-βRII受体))。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括可溶性人TGF-βRII的第一序列和可溶性人TGF-βRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括安置于可溶性人TGF-βRII的第一序列与可溶性人TGF-βRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:57)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:57)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:61)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人TGFβRII受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:60)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:126)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:127)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:128)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:129)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:130)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATCACGTGTCCTCCTCCTATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGTATTAGA(SEQ ID NO:131)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:132)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATCACGTGTCCTCCTCCTATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGTATTAGA(SEQ ID NO:133)。

示例性多链嵌合多肽-C型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体或IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21多肽)或可溶性IL-7(例如，可溶性人IL-7多肽)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地是可溶性IL-21或可溶性IL-7。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域都特异性结合到IL-21的受体或IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:124)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC(SEQ ID NO:134)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:125)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7的序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:135)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACAC(SEQ ID NO:136)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:126)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCCTCAGGCACTACAAATACTGTGGCAGCATATAATTTAACTTGGAAATCAACTAATTTCAAGACAATTTTGGAGTGGGAACCCAAACCCGTCAATCAAGTCTACACTGTTCAAATAAGCACTAAGTCAGGAGATTGGAAAAGCAAATGCTTTTACACAACAGACACAGAGTGTGACCTCACCGACGAGATTGTGAAGGATGTGAAGCAGACGTACTTGGCACGGGTCTTCTCCTACCCGGCAGGGAATGTGGAGAGCACCGGTTCTGCTGGGGAGCCTCTGTATGAGAACTCCCCAGAGTTCACACCTTACCTGGAGACAAACCTCGGACAGCCAACAATTCAGAGTTTTGAACAGGTGGGAACAAAAGTGAATGTGACCGTAGAAGATGAACGGACTTTAGTCAGAAGGAACAACACTTTCCTAAGCCTCCGGGATGTTTTTGGCAAGGACTTAATTTATACACTTTATTATTGGAAATCTTCAAGTTCAGGAAAGAAAACAGCCAAAACAAACACTAATGAGTTTTTGATTGATGTGGATAAAGGAGAAAACTACTGTTTCAGTGTTCAAGCAGTGATTCCCTCCCGAACAGTTAACCGGAAGAGTACAGACAGCCCGGTAGAGTGTATGGGCCAGGAGAAAGGGGAATTCAGAGAAAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:127)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MGVKVLFALICIAVAEAQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:128)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGGGAGTGAAAGTTCTTTTTGCCCTTATTTGTATTGCTGTGGCCGAGGCCCAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCCTCAGGCACTACAAATACTGTGGCAGCATATAATTTAACTTGGAAATCAACTAATTTCAAGACAATTTTGGAGTGGGAACCCAAACCCGTCAATCAAGTCTACACTGTTCAAATAAGCACTAAGTCAGGAGATTGGAAAAGCAAATGCTTTTACACAACAGACACAGAGTGTGACCTCACCGACGAGATTGTGAAGGATGTGAAGCAGACGTACTTGGCACGGGTCTTCTCCTACCCGGCAGGGAATGTGGAGAGCACCGGTTCTGCTGGGGAGCCTCTGTATGAGAACTCCCCAGAGTTCACACCTTACCTGGAGACAAACCTCGGACAGCCAACAATTCAGAGTTTTGAACAGGTGGGAACAAAAGTGAATGTGACCGTAGAAGATGAACGGACTTTAGTCAGAAGGAACAACACTTTCCTAAGCCTCCGGGATGTTTTTGGCAAGGACTTAATTTATACACTTTATTATTGGAAATCTTCAAGTTCAGGAAAGAAAACAGCCAAAACAAACACTAATGAGTTTTTGATTGATGTGGATAAAGGAGAAAACTACTGTTTCAGTGTTCAAGCAGTGATTCCCTCCCGAACAGTTAACCGGAAGAGTACAGACAGCCCGGTAGAGTGTATGGGCCAGGAGAAAGGGGAATTCAGAGAAAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:129)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQID NO:137)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACACATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGCATTAGA(SEQ ID NO:138)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MGVKVLFALICIAVAEADCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:139)

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGGGAGTGAAAGTTCTTTTTGCCCTTATTTGTATTGCTGTGGCCGAGGCCGATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACACATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGCATTAGA(SEQ ID NO:140)。

示例性多链嵌合多肽-D型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体或IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21多肽)或可溶性IL-7(例如，可溶性人IL-7多肽)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地为可溶性IL-21或可溶性IL-7。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域都特异性结合到IL-21的受体或IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:124)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC(SEQ ID NO:134)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:125)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7的序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:135)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACAC(SEQ ID NO:136)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:141)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:142)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:143)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQID NO:144)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:145)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ IDNO:146)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQID NO:147)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:148)。

示例性多链嵌合多肽-E型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-18(例如，可溶性人IL-18)的受体、IL-12(例如，可溶性人IL-12)的受体或CD16(例如，抗CD16 scFv)。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括其它靶标结合结构域。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括其它靶标结合结构域。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-12的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中第二靶标结合结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和其它抗原结合结构域中的一个或多个是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和其它抗原结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-15或可溶性IL-18。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地是可溶性IL-15或可溶性IL-18。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域都特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-12的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-12的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到CD16，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到CD16。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-18(例如，可溶性人IL-18)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-18包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED(SEQ ID NO:41)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-18由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT(SEQ ID NO:42)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性IL-12(例如，可溶性人IL-12)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-15包括可溶性人IL-12β(p40)的序列和可溶性人IL-12α(p35)的序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-15(例如，可溶性人IL-15)还包括在可溶性IL-12β(p40)的序列与可溶性人IL-12α(p35)的序列之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头序列)。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头序列包含GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12β(p40)的序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS(SEQ ID NO:33)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12β(p40)由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC(SEQ ID NO:34)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12α(p35)包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS(SEQ ID NO:35)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12α(p35)由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC(SEQ IDNO:36)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域包括特异性结合到CD16的scFv(例如，抗CD16 scFv)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH(SEQ ID NO:149)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的轻链可变结构域序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT(SEQ ID NO:150)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括重链可变结构域，所述重链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ ID NO:151)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的重链可变结构域序列编码：

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:152)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNEDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:116)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:117)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSYFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNEDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:118)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGCTACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:119)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQID NO:153)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:154)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ ID NO:155)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCCATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:156)。

示例性多链嵌合多肽-F型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7(例如，可溶性人IL-7)的受体、CD16(例如，抗CD16 scFv)或IL-21(例如，可溶性人IL-21)的受体。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括其它靶标结合结构域。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括其它靶标结合结构域。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中第二靶标结合结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和其它抗原结合结构域中的一个或多个是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和其它抗原结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到受体IL-7，而第二靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-21的受体。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-7蛋白。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-7蛋白是可溶性人IL-7。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二抗原结合结构域包括特异性结合到CD16的靶标结合结构域。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括特异性结合到CD16的scFv。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性IL-21。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-21是可溶性人IL-21。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括特异性结合到IL-21的受体的其它靶标结合结构域。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域包括可溶性IL-21。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-21是可溶性人IL-21。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括特异性结合到CD16的其它靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-7(例如，可溶性人IL-7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:135)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACAC(SEQ ID NO:136)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT(SEQ ID NO:197)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21的序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:124)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC(SEQ ID NO:134)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:125)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域包括特异性结合到CD16的scFv(例如，抗CD16 scFv)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH(SEQ ID NO:149)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的轻链可变结构域序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT(SEQ ID NO:150)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括重链可变结构域，所述重链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ ID NO:151)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的重链可变结构域序列编码：

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:152)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:141)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:142)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:143)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQID NO:144)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSRITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:157)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGGATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:158)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSRITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:159)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGGATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:160)。

示例性多链嵌合多肽-G型

在本文描述的任一个多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β(例如，人TGFβRII受体)、CD16(例如，抗CD16scFv)或IL-21(例如，可溶性人IL-21)的受体。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括其它靶标结合结构域。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括其它靶标结合结构域。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中第二靶标结合结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和其它抗原结合结构域中的一个或多个是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和其它抗原结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β、CD16或IL-21的受体。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-21的受体。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域特异性结合到CD16。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二抗原结合结构域包括特异性结合到CD16的抗原结合结构域。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二抗原结合结构域包括特异性结合到CD16的scFv。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性IL-21。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性人IL-21。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括特异性结合到IL-21的受体的其它靶标结合结构域。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域包括可溶性IL-21。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-21是可溶性人IL-21。在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括特异性结合到CD16的其它靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括TGFβRII受体(例如，可溶性人TGFβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括可溶性人TGF-βRII的第一序列和可溶性人TGF-βRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括安置于可溶性人TGF-βRII的第一序列与可溶性人TGF-βRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:57)

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:57)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:60)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:198)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21的序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:124)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC(SEQ ID NO:134)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:125)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH(SEQ ID NO:149)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的轻链可变结构域序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT(SEQ ID NO:150)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括重链可变结构域，所述重链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ ID NO:151)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的重链可变结构域序列编码：

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:152)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:161)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:162)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:163)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:164)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSRITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:157)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGGATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:158)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSRITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:159)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGGATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:160)。

示例性多链嵌合多肽-H型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括可溶性IL-7(例如，可溶性人IL-7)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:135)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT(SEQ ID NO:197)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:141)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:142)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:143)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQID NO:144)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQID NO:137)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACACATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGCATTAGA(SEQ ID NO:138)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:139)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:140)。

示例性多链嵌合多肽-I型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体(例如可溶性TGF-βRII受体，例如可溶性人TGF-βRII)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括可溶性人TGF-βRII的第一序列和可溶性人TGF-βRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括安置于可溶性人TGF-βRII的第一序列与可溶性人TGF-βRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:57)

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:57)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:60)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:198)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:161)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:162)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:163)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:164)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:130)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:131)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:132)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:133)。

示例性多链嵌合多肽-J型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体、IL-21的受体或CD137L的受体。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括其它靶标结合结构域。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域特异性结合到IL-21(例如可溶性IL-21，例如可溶性人IL-21)的受体或CD137L(例如可溶性CD137L，例如可溶性人CD137L)的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中第二靶标结合结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括其它靶标结合结构域。在一些实施例中，其它靶标结合结构域和

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和其它靶标结合结构域中的一个或多个是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和其它靶标结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。在一些实施例中，其它靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域是可溶性IL-7(例如，可溶性人IL-7)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:135)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT(SEQ ID NO:197)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域或其它靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域或其它靶标结合结构域是可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:124)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:125)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域特异性结合到CD137L的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包含特异性结合到CD137L的受体的其它靶标结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域和/或其它靶标结合结构域是可溶性CD137L(例如，可溶性人CD137L)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:165)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:166)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:167)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:168)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:141)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:142)

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:143)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQID NO:144)在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:169)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:170)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:171)

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:172)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:173)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:174)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:175)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:176)。

示例性多链嵌合多肽-K型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体或TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-7蛋白(例如，可溶性人IL-7蛋白)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7蛋白包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:135)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT(SEQ ID NO:197)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包含特异性结合到TGF-β的靶标结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体(例如可溶性TGF-βRII受体，例如可溶性人TGF-βRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括可溶性人TGF-βRII的第一序列和可溶性人TGF-βRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括安置于可溶性人TGF-βRII的第一序列与可溶性人TGF-βRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:57)

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:57)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:60)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:198)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:141)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:142)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:143)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQID NO:144)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:130)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:131)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:132)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:133)。

示例性多链嵌合多肽-L型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β、IL-21的受体或CD137L的受体。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括其它靶标结合结构域。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域特异性结合到IL-21(例如，可溶性IL-21，例如可溶性人IL-21)的受体或CD137L(例如，可溶性CD137L，例如可溶性人CD137L)的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中第二靶标结合结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和其它靶标结合结构域中的一个或多个是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和其它靶标结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体(例如可溶性TGFβRII受体，例如可溶性人TGFβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括可溶性人TGF-βRII的第一序列和可溶性人TGF-βRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括安置于可溶性人TGF-βRII的第一序列与可溶性人TGF-βRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:57)

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:57)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:60)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:198)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域或其它靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域或其它靶标结合结构域包括可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:124)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:125)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域或其它靶标结合结构域特异性结合到CD137L的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域和/或其它靶标结合结构域包括可溶性CD137L(例如，可溶性人CD137L)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性CD137L包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:165)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性CD137L由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:166)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L包括与以下至少80％相同(例如，至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:167)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L由与以下至少80％相同(例如，至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:168)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:161)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:162)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:163)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:164)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:169)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:170)

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:171)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:172)

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:173)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:174)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:175)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:176)。

示例性多链嵌合多肽-M型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β或IL-21的受体。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括其它靶标结合结构域。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域特异性结合到IL-21(例如可溶性IL-21，例如可溶性人IL-21)的受体或TGF-β(例如可溶性TGF-β受体，例如可溶性TGFβRII受体)。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中第二靶标结合结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β或IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体(例如可溶性TGFβRII受体，例如可溶性人TGFβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括可溶性人TGF-βRII的第一序列和可溶性人TGF-βRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括安置于可溶性人TGF-βRII的第一序列与可溶性人TGF-βRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:58)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:57)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:59)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:60)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:198)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性IL-21(例如，人可溶性IL-21)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-21包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:124)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:125)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:161)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:162)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:163)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:164)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:177)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:178)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:179)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQID NO:180)。

示例性多链嵌合多肽-N型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β或CD16。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括其它靶标结合结构域。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域特异性结合到CD16(例如，抗CD16 scFv)或TGF-β(例如可溶性TGF-β受体，例如可溶性TGFβRII受体)。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中第二靶标结合结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β或CD16。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体(例如可溶性TGFβRII受体，例如可溶性人TGFβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括可溶性人TGF-βRII的第一序列和可溶性人TGF-βRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括安置于可溶性人TGF-βRII的第一序列与可溶性人TGF-βRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ IDNO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:57)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:57)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:60)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:198)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域特异性结合到CD16。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括抗CD16 scFv。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH(SEQ ID NO:149)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的轻链可变结构域序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT(SEQ ID NO:150)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括重链可变结构域，所述重链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ ID NO:151)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的重链可变结构域序列编码：

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:152)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:161)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:162)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:163)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:164)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ IDNO:181)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:182)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ ID NO:183)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:184)。

示例性多链嵌合多肽-O型

在本文描述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β或CD137L的受体。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括其它靶标结合结构域。在本文描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域特异性结合到TGF-β的受体(例如可溶性TGF-β受体，例如可溶性TGFβRII受体)或CD137L。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽还包含在第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括在第一嵌合多肽中可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中一对亲和结构域中的第二结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽还包括在第二嵌合多肽中第二靶标结合结构域与其它靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文描述的任一个示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可以是本文描述的任一个示例性可溶性组织因子结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可以是本文描述的任一对示例性亲和结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合结构域特异性结合到CD137L。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域或其它靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体(例如可溶性TGFβRII受体，例如可溶性人TGFβRII受体)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括可溶性人TGF-βRII的第一序列和可溶性人TGF-βRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII包括安置于可溶性人TGF-βRII的第一序列与可溶性人TGF-βRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ IDNO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:56)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:57)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGF-βRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:57)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:60)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:198)。

在一些实施例中这些多链嵌合多肽，第二靶标结合结构域包括可溶性CD137L蛋白(例如，可溶性人CD137L蛋白)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L包括与以下至少80％相同(例如，至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:165)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L由与以下至少80％相同(例如，至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:166)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L包括与以下至少80％相同(例如，至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:167)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L由与以下至少80％相同(例如，至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:168)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:161)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:162)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:163)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:164)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:185)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:186)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:187)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:188)。

组合物/试剂盒

本文还提供组合物(例如，药物组合物)，其包括本文描述的任何单链嵌合多肽、多链嵌合多肽、任何细胞或任何核酸中的至少一种。在一些实施例中，组合物包括本文描述的任何单链嵌合多肽中的至少一种。在一些实施例中，组合物包括本文描述的任何多链嵌合多肽中的至少一种。在一些实施例中，组合物包括任一种免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞，例如使用本文描述的任一种方法产生的任一种免疫细胞)。

在一些实施例中，将药物组合物配制成用于不同的给药途径(例如，静脉内、皮下)。在一些实施例中，药物组合物可以包括药学上可接受的载剂(例如，磷酸盐缓冲盐水)。

可将药物组合物的单次或多次给药给予有需要的受试者，其取决于例如：受试者所需和耐受的剂量和频率。配制物应提供足够量的活性剂以有效治疗、预防或改善病况、疾病或症状。

本文还提供试剂盒，其包括本文描述的单链嵌合多肽、多链嵌合多肽、组合物、核酸或细胞(例如，免疫细胞)中的任一种。在一些实施例中，试剂盒可以包括用于进行本文描述的任一种方法的说明书。在一些实施例中，试剂盒可以包括至少一个剂量的本文描述的任一种药物组合物。

本文还提供通过本文描述的任一种方法产生的免疫细胞(例如，激活NK细胞或T细胞)。本文还提供药物组合物，其包括通过本文描述的任一种方法产生的任一种激活免疫细胞(例如，激活NK细胞或T细胞)。本文还提供试剂盒，其包括本文描述的任一种药物组合物，所述药物组合物包括通过本文描述的任一种方法产生的任一种激活免疫细胞(例如，激活NK细胞或T细胞)。

本文还提供试剂盒，其包括(i)本文描述的任一种单链嵌合多肽，和(ii)本文描述的任一种IgG1抗体构建体。本文还提供试剂盒，其包括(ii)本文描述的任一种多链嵌合多肽，和(ii)本文描述的任一种IgG1抗体构建体。在本文描述的任一种试剂盒的一些实施例中，试剂盒进一步还包括用于进行本文描述的任一种方法的说明书。

核酸/载体

本文还提供核酸，其编码本文描述的任一种单链嵌合多肽。本文还提供载体，其包括编码本文描述的任一种单链嵌合多肽的任一种核酸。

本文还提供核酸，其编码本文描述的任一种多链嵌合多肽。在一些实施例中，第一核酸可以编码第一嵌合多肽，而第二核酸可以编码第二嵌合多肽。在一些实施例中，单个核酸可以编码第一嵌合多肽和第二嵌合多肽两者。

本文还提供载体，其包括编码本文描述的任一种多链嵌合多肽的任一种核酸。在一些实施例中，第一载体可以包括编码第一嵌合多肽的核酸，而第二载体可以包括编码第二嵌合多肽的核酸。在一些实施例中，单个载体可以包括编码第一嵌合多肽的第一核酸和编码第二嵌合多肽的第二核酸。

本文还提供核酸，其编码本文描述的任一种IgG1抗体构建体。

本文描述的任一种载体可以是表达载体。例如，表达载体可以包括启动子序列，所述启动子序列可操作地连接到编码单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的第一嵌合多肽和第二嵌合多肽的序列。

载体的非限制性实例包括质粒、转座子、粘粒和病毒载体(例如，任何腺病毒载体(例如pSV或pCMV载体)、腺相关病毒(AAV)载体、慢病毒载体和逆转录病毒载体)和任何

细胞

本文还提供细胞(例如，本文描述或本领域已知的任一种示例性细胞)，其包含编码本文描述的任一种单链嵌合多肽的本文描述的任一种核酸。

本文还提供细胞(例如，本文描述或本领域已知的任一种示例性细胞)，其包括编码本文描述的任一种单链嵌合多肽的本文描述的任一种载体。

本文还提供细胞(例如，本文描述或本领域已知的任一种示例性细胞)，其包含编码本文描述的任一种多链嵌合多肽(例如，编码第一和第二嵌合多肽两者)的本文描述的任一种核酸。本文还提供细胞(例如，本文描述或本领域已知的任一种示例性细胞)，其包含编码本文描述的任一种第一嵌合多肽的本文描述的任一种核酸。还提供细胞(例如，本文描述或本领域已知的任一种示例性细胞)，其包含编码本文描述的任一种第二嵌合多肽的本文描述的任一种核酸。

本文还提供细胞(例如，本文描述或本领域已知的任一种示例性细胞)，其包括编码本文描述的任一种多链嵌合多肽(例如，编码第一和第二嵌合多肽两者)的本文描述的任一种载体。本文还提供细胞(例如，本文描述或本领域已知的任一种示例性细胞)，其包括编码本文描述的任一种第一嵌合多肽的本文描述的任一种载体。本文还提供细胞(例如，本文描述或本领域已知的任一种示例性细胞)，其包括编码本文描述的任一种第二嵌合多肽的本文描述的任一种载体。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，细胞可以是真核细胞。如本文所用，术语“真核细胞”是指具有明显的膜结合核的细胞。这类细胞可以包括例如哺乳动物(例如，啮齿动物、非人灵长类动物或人)、昆虫、真菌或植物细胞。在一些实施例中，真核细胞是酵母细胞，如啤酒酵母。在一些实施例中，真核细胞是高级真核生物，如哺乳动物、禽类、植物或昆虫细胞。哺乳动物细胞的非限制性实例包括中国仓鼠卵巢细胞和人胚胎肾细胞(例如，HEK293细胞)。

将核酸和表达载体引入到细胞(例如，真核细胞)中的方法是本领域已知的。可用于将核酸引入到细胞中的方法的非限制性实例包括脂质转染、转染、电穿孔、显微注射、磷酸钙转染、基于树状大分子的转染、阳离子聚合物转染、细胞挤压、声致穿孔、光学转染、刺穿感染、流体动力学递送、磁转染、病毒转导(例如，腺病毒和慢病毒转导)和纳米颗粒转染。

产生单链和多链嵌合多肽的方法

本文还提供产生本文描述的任一种单链嵌合多肽的方法，其包括在足以引起产生单链嵌合多肽的条件下在培养基中培养本文描述的任一种细胞；和从细胞和/或培养基回收单链嵌合多肽。

可以使用本领域众所周知的技术(例如硫酸铵沉淀、聚乙二醇沉淀、离子交换色谱(阴离子或阳离子)、基于疏水相互作用的色谱、金属亲和色谱、配体亲和色谱和尺寸排阻色谱)从培养基或细胞(例如真核细胞)回收单链嵌合多肽。

本文还提供通过本文描述的任一种方法产生的单链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种单链嵌合多肽)。

本文还提供产生本文描述的任一种多链嵌合多肽的方法，其包括在足以引起产生多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养本文描述的任一种细胞；和从细胞和/或培养基回收多链嵌合多肽。

本文还提供产生本文描述的任一种多链嵌合多肽的方法，其包括：在足以引起产生第一嵌合多肽的条件下在第一培养基中培养本文描述的任一种细胞；从细胞和/或第一培养基回收第一嵌合多肽；在足以引起产生第二嵌合多肽的条件下在第二培养基中培养本文描述的任一种细胞；从细胞和/或第二培养基回收第二嵌合多肽；和将回收的第一嵌合多肽和回收的第二嵌合多肽组合(例如，混合)以形成多链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种多链嵌合多肽)。

可以使用本领域众所周知的技术(例如，硫酸铵沉淀、聚乙二醇沉淀、离子交换色谱(阴离子或阳离子)、基于疏水相互作用的色谱、金属亲和色谱、配体亲和色谱和尺寸排阻色谱)从细胞(例如真核细胞)回收多链嵌合多肽、第一嵌合多肽或第二嵌合多肽。

本文还提供通过本文描述的任一种方法产生的多链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种多链嵌合多肽)、第一嵌合多肽(例如，任一种第一嵌合多肽)或第二嵌合多肽(例如，任一种第二嵌合多肽)。

培养细胞的方法是本领域众所周知的。可以将细胞体外维持在有利于增殖、分化和生长的条件下。简单来说，可以通过使细胞(例如，任何细胞)与细胞培养基接触来培养细胞，所述细胞培养基包括必需的生长因子和补充剂以支持细胞活力和生长。

促进免疫细胞激活和增殖的方法

本文还提供促进免疫细胞(例如，本文描述或本领域已知的任一种示例性免疫细胞)的激活和增殖的方法，其包括使免疫细胞在允许免疫细胞激活和增殖的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括有效量的(i)本文描述的任一种单链或多链嵌合多肽，和(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体(例如，特异性结合到接头结构域的单克隆或多克隆人、小鼠、兔或山羊IgG1抗体，或本文描述的任一种其它示例性IgG1抗体构建体)。

在这些方法的一些实施例中，IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。在这些方法的一些实施例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。在这些方法的一些实施例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

在这些方法的一些实施例中，接触步骤进行约2小时至约20天的一段时间(例如，约2小时至约18天，约2小时至约16天，约2小时至约14天，约2小时至约12天，约2小时至约10天，约2小时至约8天，约2小时至约7天，约2小时至约6天，约2小时至约5天，约2小时至约4天，约2小时至约3天，约2小时至约2天，约2小时至约1天，约6小时至约18天，约6小时至约16天，约6小时至约14天，约6小时至约12天，约6小时至约10天，约6小时至约8天，约6小时至约7天，约6小时至约6天，约6小时至约5天，约6小时至约4天，约6小时至约3天，约6小时至约2天，约6小时至约1天，约12小时至约18天，约12小时至约16天，约12小时至约14天，约12小时至约12天，约12小时至约10天，约12小时至约8天，约12小时至约7天，约12小时至约6天，约12小时至约5天，约12小时至约4天，约12小时至约3天，约12小时至约2天，约12小时至约1天，约1天至约18天，约1天至约16天，约1天至约15天，约1天至约14天，约1天至约12天，约1天至约10天，约1天至约8天，约1天至约7天，约1天至约6天，约1天至约5天，约1天至约4天，约1天至约3天，约1天至约2天，约2天至约18天，约2天至约16天，约2天至约14天，约2天至约12天，约2天至约10天，约2天至约8天，约2天至约7天，约2天至约6天，约2天至约5天，约2天至约4天，约2天至约3天，约3天至约18天，约3天至约16天，约3天至约14天，约3天至约12天，约3天至约10天，约3天至约8天，约3天至约7天，约3天至约6天，约3天至约5天，约3天至约4天，约4天至约18天，约4天至约16天，约4天至约14天，约4天至约12天，约4天至约10天，约4天至约8天，约4天至约7天，约4天至约6天，约4天至约5天，约5天至约18天，约5天至约16天，约5天至约14天，约5天至约12天，约5天至约10天，约5天至约8天，约5天至约7天，约5天至约6天，约6天至约18天，约6天至约16天，约6天至约14天，约6天至约12天，约6天至约10天，约6天至约8天，约6天至约7天，约7天至约18天，约7天至约16天，约7天至约14天，约7天至约12天，约7天至约10天，约7天至约8天，约8天至约18天，约8天至约16天，约8天至约14天，约8天至约12天，约8天至约10天，约9天至约18天，约9天至约16天，约9天至约14天，约9天至约12天，约12天至约18天，约12天至约16天，约12天至约14天，约14天至约18天，约14天至约16天，或约16天至约18天。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基是无血清液体培养基。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基是化学成分确定的液体培养基。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基以约0.5:1至约2:1(例如约0.8:1至约1.2:1)的摩尔比包括单链或多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀手T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀手细胞。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞是T细胞或自然杀手细胞。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞是先前从受试者获得的。本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将免疫细胞引入到编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸中。

本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之前将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。

本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之后分离免疫细胞。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，与一种或多种蛋白质在接触步骤之前的表达水平或分泌比较，在接触步骤之后，免疫细胞的一种或多种蛋白质的表达水平或分泌增加，所述蛋白质选自以下组成的组：2B4、CD8、CD11a、CD16、CD25、CD27、CD48、CD49d、CD54、CD56、CD58、CD62L、CD69、CD70、CD94、CD137、CD158a、CD158b、CD158e、CD178、CD226、CD253、NKG2A、NKG2C、NKG2D、LIR-1、LILR-B1、KIR2DL1、KIR3DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、CXCR3、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM-1、NKG2A、TRAIL、FasL、CXCR3、CXCR4、LTB、MX1、BAX、TNF-α和IFN-γ。

本文描述的任一种方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将免疫细胞给予有需要的受试者。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，与年龄相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有癌症。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，受试者已被鉴定或诊断为患有感染性疾病。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

本文还提供通过本文描述的任一种方法产生的激活免疫细胞。本文还提供药物组合物，其包括通过本文描述的任一种方法产生的任一种免疫细胞。本文还提供试剂盒，其包括任一种药物组合物，所述药物组合物包括通过本文描述的任一种方法产生的任一种激活免疫细胞。

刺激免疫细胞的方法

本文还提供刺激免疫细胞(例如，本文描述或本领域已知的任一种示例性免疫细胞)的方法，其包括使免疫细胞与有效量的本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽或本文描述的任一种组合物(例如，药物组合物)接触。在一些实例中，免疫细胞在体外(例如，在足以引起对免疫细胞的刺激的条件下在合适的液体培养基中)进行接触。在一些实例中，接触还包括使免疫细胞与有效量的本文描述的任一种IgG1抗体构建体接触。

在一些实例中，免疫细胞是先前从受试者(例如哺乳动物，例如人)获得的。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。

在一些实例中，免疫细胞在体内进行接触。在这类实施例中，以足以引起受试者中的免疫细胞的刺激的量给予受试者(例如哺乳动物，例如人)单链嵌合多肽或多链嵌合多肽。在本文描述的任一种方法、组合物和试剂盒的一些实施例中，将IgG1抗体构建体(例如，本文描述的任一种示例性IgG1抗体构建体)以与单链嵌合多肽或多链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽)的给药组合(例如，同时或依序)的方式给予受试者。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞可以是未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8

在一些实例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。在一些实例中，免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)先前已经过基因修饰以表达共刺激分子(例如，CD28)。

这些方法的一些实施例可能还包括在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)中。这些方法的一些实施例可能还包括在接触步骤之后，将编码共刺激分子(例如，CD28)的核酸引入到免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)中。

这些方法的一些实施例可能还包括将治疗有效量的免疫细胞给予有需要的受试者(例如，本文描述的任一个示例性受试者)。

在一些实例中，受试者可以是被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况的受试者。与年龄相关的疾病或病症的非限制性实例包括：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在一些实例中，受试者可以是已被鉴别或诊断为患有癌症的受试者。癌症的非限制性实例包括：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在一些实例中，受试者可以是已被诊断或鉴别为患有感染性疾病的受试者。感染性疾病的非限制性实例包括感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

可以使用本领域已知的方法来确定免疫细胞的激活。例如，可以通过检测在免疫细胞激活后分泌的细胞因子和趋化因子的水平或上调的细胞毒性颗粒、激活受体和调节分子的水平来确定免疫细胞的激活。在免疫细胞激活后分泌的细胞因子和趋化因子或上调的细胞毒性颗粒、激活受体和调节分子的非限制性实例包括：IL-2、干扰素γ、IL-1、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-22、IL-33、白三烯B4、CCL5、TNFα、穿孔素、TGFβ、STAT3、STAT4、STAT5、RORKT、FOXP3、GATA3、颗粒酶A、颗粒酶B、2B4、CD8、CD11a、CD16、CD25、CD27、CD48、CD49d、CD54、CD56、CD58、CD62L、CD69、CD70、CD94、CD137、CD158a、CD158b、CD158e、CD178、CD226、CD253、NKG2A、NKG2C、NKG2D、LIR-1、LILR-B1、KIR2DL1、KIR3DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、CXCR3、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM-1、NKG2A、TRAIL、FasL、CXCR3、CXCR4、LTB、MX1、BAX、TNF-α和IFN-γ。可以使用免疫分析(例如，酶联免疫吸附分析)进行这些细胞因子和趋化因子的检测。例如，免疫细胞的激活可以引起以下增加约1％至约800％(例如，约1％至约750％，约1％至约700％，约1％至约650％，约1％至约600％，约1％至约550％，约1％至约500％，约1％至约450％，约1％至约400％，约1％至约350％，约1％至约300％，约1％至约280％，约1％至约260％，约1％至约240％，约1％至约220％，约1％至约200％，约1％至约180％，约1％至约160％，约1％至约140％，约1％至约120％，约1％至约100％，约1％至约90％，约1％至约80％，约1％至约70％，约1％至约60％，约1％至约50％，约1％至约45％，约1％至约40％，约1％至约35％，约1％至约30％，约1％至约25％，约1％至约20％，约1％至约15％，约1％至约10％，约1％至约5％，约5％至约800％，约5％至约750％，约5％至约700％，约5％至约650％，约5％至约600％，约5％至约550％，约5％至约500％，约5％至约450％，约5％至约400％，约5％至约350％，约5％至约300％，约5％至约280％，约5％至约260％，约5％至约240％，约5％至约220％，约5％至约200％，约5％至约180％，约5％至约160％，约5％至约140％，约5％至约120％，约5％至约100％，约5％至约90％，约5％至约80％，约5％至约70％，约5％至约60％，约5％至约50％，约5％至约45％，约5％至约40％，约5％至约35％，约5％至约30％，约5％至约25％，约5％至约20％，约5％至约15％，约5％至约10％，约10％至约800％，约10％至约750％，约10％至约700％，约10％至约650％，约10％至约600％，约10％至约550％，约10％至约500％，约10％至约450％，约10％至约400％，约10％至约350％，约10％至约300％，约10％至约280％，约10％至约260％，约10％至约240％，约10％至约220％，约10％至约200％，约10％至约180％，约10％至约160％，约10％至约140％，约10％至约120％，约10％至约100％，约10％至约90％，约10％至约80％，约10％至约70％，约10％至约60％，约10％至约50％，约10％至约45％，约10％至约40％，约10％至约35％，约10％至约30％，约10％至约25％，约10％至约20％，约10％至约15％，约15％至约800％，约15％至约750％，约15％至约700％，约15％至约650％，约15％至约600％，约15％至约550％，约15％至约500％，约15％至约450％，约15％至约400％，约15％至约350％，约15％至约300％，约15％至约280％，约15％至约260％，约15％至约240％，约15％至约220％，约15％至约200％，约15％至约180％，约15％至约160％，约15％至约140％，约15％至约120％，约15％至约100％，约15％至约90％，约15％至约80％，约15％至约70％，约15％至约60％，约15％至约50％，约15％至约45％，约15％至约40％，约15％至约35％，约15％至约30％，约15％至约25％，约15％至约20％，约20％至约800％，约20％至约750％，约20％至约700％，约20％至约650％，约20％至约600％，约20％至约550％，约20％至约500％，约20％至约450％，约20％至约400％，约20％至约350％，约20％至约300％，约20％至约280％，约20％至约260％，约20％至约240％，约20％至约220％，约20％至约200％，约20％至约180％，约20％至约160％，约20％至约140％，约20％至约120％，约20％至约100％，约20％至约90％，约20％至约80％，约20％至约70％，约20％至约60％，约20％至约50％，约20％至约45％，约20％至约40％，约20％至约35％，约20％至约30％，约20％至约25％，约25％至约800％，约25％至约750％，约25％至约700％，约25％至约650％，约25％至约600％，约25％至约550％，约25％至约500％，约25％至约450％，约25％至约400％，约25％至约350％，约25％至约300％，约25％至约280％，约25％至约260％，约25％至约240％，约25％至约220％，约25％至约200％，约25％至约180％，约25％至约160％，约25％至约140％，约25％至约120％，约25％至约100％，约25％至约90％，约25％至约80％，约25％至约70％，约25％至约60％，约25％至约50％，约25％至约45％，约25％至约40％，约25％至约35％，约35％至约800％，约35％至约750％，约35％至约700％，约35％至约650％，约35％至约600％，约35％至约550％，约35％至约500％，约35％至约450％，约35％至约400％，约35％至约350％，约35％至约300％，约35％至约280％，约35％至约260％，约35％至约240％，约35％至约220％，约35％至约200％，约35％至约180％，约35％至约160％，约35％至约140％，约35％至约120％，约35％至约100％，约35％至约90％，约35％至约80％，约35％至约70％，约35％至约60％，约35％至约50％，约35％至约45％，约35％至约40％，约40％至约800％，约40％至约750％，约40％至约700％，约40％至约650％，约40％至约600％，约40％至约550％，约40％至约500％，约40％至约450％，约40％至约400％，约40％至约350％，约40％至约300％，约40％至约280％，约40％至约260％，约40％至约240％，约40％至约220％，约40％至约200％，约40％至约180％，约40％至约160％，约40％至约140％，约40％至约120％，约40％至约100％，约40％至约90％，约40％至约80％，约40％至约70％，约40％至约60％，约40％至约50％，约40％至约45％，约45％至约800％，约45％至约750％，约45％至约700％，约45％至约650％，约45％至约600％，约45％至约550％，约45％至约500％，约45％至约450％，约45％至约400％，约45％至约350％，约45％至约300％，约45％至约280％，约45％至约260％，约45％至约240％，约45％至约220％，约45％至约200％，约45％至约180％，约45％至约160％，约45％至约140％，约45％至约120％，约45％至约100％，约45％至约90％，约45％至约80％，约45％至约70％，约45％至约60％，约45％至约50％，约50％至约800％，约50％至约750％，约50％至约700％，约50％至约650％，约50％至约600％，约50％至约550％，约50％至约500％，约50％至约450％，约50％至约400％，约50％至约350％，约50％至约300％，约50％至约280％，约50％至约260％，约50％至约240％，约50％至约220％，约50％至约200％，约50％至约180％，约50％至约160％，约50％至约140％，约50％至约120％，约50％至约100％，约50％至约90％，约50％至约80％，约50％至约70％，约50％至约60％，约60％至约800％，约60％至约750％，约60％至约700％，约60％至约650％，约60％至约600％，约60％至约550％，约60％至约500％，约60％至约450％，约60％至约400％，约60％至约350％，约60％至约300％，约60％至约280％，约60％至约260％，约60％至约240％，约60％至约220％，约60％至约200％，约60％至约180％，约60％至约160％，约60％至约140％，约60％至约120％，约60％至约100％，约60％至约90％，约60％至约80％，约60％至约70％，约70％至约800％，约70％至约750％，约70％至约700％，约70％至约650％，约70％至约600％，约70％至约550％，约70％至约500％，约70％至约450％，约70％至约400％，约70％至约350％，约70％至约300％，约70％至约280％，约70％至约260％，约70％至约240％，约70％至约220％，约70％至约200％，约70％至约180％，约70％至约160％，约70％至约140％，约70％至约120％，约70％至约100％，约70％至约90％，约70％至约80％，约80％至约800％，约80％至约750％，约80％至约700％，约80％至约650％，约80％至约600％，约80％至约550％，约80％至约500％，约80％至约450％，约80％至约400％，约80％至约350％，约80％至约300％，约80％至约280％，约80％至约260％，约80％至约240％，约80％至约220％，约80％至约200％，约80％至约180％，约80％至约160％，约80％至约140％，约80％至约120％，约80％至约100％，约80％至约90％，约90％至约800％，约90％至约750％，约90％至约700％，约90％至约650％，约90％至约600％，约90％至约550％，约90％至约500％，约90％至约450％，约90％至约400％，约90％至约350％，约90％至约300％，约90％至约280％，约90％至约260％，约90％至约240％，约90％至约220％，约90％至约200％，约90％至约180％，约90％至约160％，约90％至约140％，约90％至约120％，约90％至约100％，约100％至约800％，约100％至约750％，约100％至约700％，约100％至约650％，约100％至约600％，约100％至约550％，约100％至约500％，约100％至约450％，约100％至约400％，约100％至约350％，约100％至约300％，约100％至约280％，约100％至约260％，约100％至约240％，约100％至约220％，约100％至约200％，约100％至约180％，约100％至约160％，约100％至约140％，约100％至约120％，约120％至约800％，约120％至约750％，约120％至约700％，约120％至约650％，约120％至约600％，约120％至约550％，约120％至约500％，约120％至约450％，约120％至约400％，约120％至约350％，约120％至约300％，约120％至约280％，约120％至约260％，约120％至约240％，约120％至约220％，约120％至约200％，约120％至约180％，约120％至约160％，约120％至约140％，约140％至约800％，约140％至约750％，约140％至约700％，约140％至约650％，约140％至约600％，约140％至约550％，约140％至约500％，约140％至约450％，约140％至约400％，约140％至约350％，约140％至约300％，约140％至约280％，约140％至约260％，约140％至约240％，约140％至约220％，约140％至约200％，约140％至约180％，约140％至约160％，约160％至约800％，约160％至约750％，约160％至约700％，约160％至约650％，约160％至约600％，约160％至约550％，约160％至约500％，约160％至约450％，约160％至约400％，约160％至约350％，约160％至约300％，约160％至约280％，约160％至约260％，约160％至约240％，约160％至约220％，约160％至约200％，约160％至约180％，约180％至约800％，约180％至约750％，约180％至约700％，约180％至约650％，约180％至约600％，约180％至约550％，约180％至约500％，约180％至约450％，约180％至约400％，约180％至约350％，约180％至约300％，约180％至约280％，约180％至约260％，约180％至约240％，约180％至约220％，约180％至约200％，约200％至约800％，约200％至约750％，约200％至约700％，约200％至约650％，约200％至约600％，约200％至约550％，约200％至约500％，约200％至约450％，约200％至约400％，约200％至约350％，约200％至约300％，约200％至约280％，约200％至约260％，约200％至约240％，约200％至约220％，约220％至约800％，约220％至约750％，约220％至约700％，约220％至约650％，约220％至约600％，约220％至约550％，约220％至约500％，约220％至约450％，约220％至约400％，约220％至约350％，约220％至约300％，约220％至约280％，约220％至约260％，约220％至约240％，约240％至约800％，约240％至约750％，约240％至约700％，约240％至约650％，约240％至约600％，约240％至约550％，约240％至约500％，约240％至约450％，约240％至约400％，约240％至约350％，约240％至约300％，约240％至约280％，约240％至约260％，约260％至约800％，约260％至约750％，约260％至约700％，约260％至约650％，约260％至约600％，约260％至约550％，约260％至约500％，约260％至约450％，约260％至约400％，约260％至约350％，约260％至约300％，约260％至约280％，约280％至约800％，约280％至约750％，约280％至约700％，约280％至约650％，约280％至约600％，约280％至约550％，约280％至约500％，约280％至约450％，约280％至约400％，约280％至约350％，约280％至约300％，约300％至约800％，约300％至约750％，约300％至约700％，约300％至约650％，约300％至约600％，约300％至约550％，约300％至约500％，约300％至约450％，约300％至约400％，约300％至约350％，约350％至约800％，约350％至约750％，约350％至约700％，约350％至约650％，约350％至约600％，约350％至约550％，约350％至约500％，约350％至约450％，约350％至约400％，约400％至约800％，约400％至约750％，约400％至约700％，约400％至约650％，约400％至约600％，约400％至约550％，约400％至约500％，约400％至约450％，约450％至约800％，约450％至约750％，约450％至约700％，约450％至约650％，约450％至约600％，约450％至约550％，约450％至约500％，约500％至约800％，约500％至约750％，约500％至约700％，约500％至约650％，约500％至约600％，约500％至约550％，约550％至约800％，约550％至约750％，约550％至约700％，约550％至约650％，约550％至约600％，约600％至约800％，约600％至约750％，约600％至约700％，约600％至约650％，约650％至约800％，约650％至约750％，约650％至约700％，约700％至约800％，约700％至约750％，或约750％至约800％)：本文描述的任何细胞因子、趋化因子、细胞毒性颗粒、激活受体或调节分子中的一个或多个(例如，任何IL-2、干扰素γ、IL-1、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-22、IL-33、白三烯B4、CCL5、TNFα、颗粒酶、穿孔素、TGFβ、STAT3、STAT4、STAT5、RORγT、FOXP3和GATA3中的一个或多个)(例如，与未与本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽接触的对照中的一个或多个细胞因子和趋化因子的水平相比)。

诱导或增加免疫细胞增殖的方法

本文还提供诱导或增加免疫细胞(例如，本文描述或本领域已知的任一种示例性免疫细胞)增殖的方法，其包括使免疫细胞与有效量的本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽或本文描述的任一种组合物(例如，药物组合物)接触。在一些实例中，免疫细胞在体外(例如，在足以引起对免疫细胞的刺激的条件下在合适的液体培养基中))进行接触。在一些实例中，以使免疫细胞在体外与单链嵌合多肽或多链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种单链嵌合多肽或多链嵌合多肽)接触组合(例如，同时或依序)的方式，使免疫细胞在体外进一步与本文描述的任一种IgG1抗体构建体接触。

在一些实例中，免疫细胞是先前从受试者(例如哺乳动物，例如人)获得的。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。

在一些实例中，免疫细胞在体内进行接触。在这类实施例中，以足以引起受试者中的免疫细胞的刺激的量给予受试者(例如哺乳动物，例如人)单链嵌合多肽或多链嵌合多肽。在这类实施例中，可以进一步将本文描述的任一种IgG1抗体构建体给予受试者。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞可以是未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8

在一些实例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。在一些实例中，免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)先前已经过基因修饰以表达共刺激分子(例如，CD28)。

这些方法的一些实施例可能还包括在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)中。这些方法的一些实施例可能还包括在接触步骤之后，将编码共刺激分子(例如，CD28)的核酸引入到免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)中。

这些方法的一些实施例可能还包括将治疗有效量的免疫细胞给予有需要的受试者(例如，本文描述的任一个示例性受试者)。

在一些实例中，受试者可以是被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况的受试者。与年龄相关的疾病或病症的非限制性实例包括：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在一些实例中，受试者可以是已被鉴别或诊断为患有癌症的受试者。癌症的非限制性实例包括：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在一些实例中，受试者可以是已被诊断或鉴别为患有感染性疾病的受试者。感染性疾病的非限制性实例包括感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

免疫细胞增殖的检测可以使用本领域中已知的方法，例如细胞测量术(例如，荧光辅助流式细胞术)、显微术和免疫荧光显微术，例如通过将未接触单链嵌合多肽或多链嵌合多肽的样本中免疫细胞浓度之增加速率与接触本文描述的任一种单链嵌合多肽或本文描述的任一种多链嵌合多肽的相似样本中免疫细胞浓度的增加速率进行比较来进行)。

在其它实例中，可以通过检测由使免疫细胞增殖而分泌的细胞因子或趋化因子或上调的细胞毒性颗粒、激活受体、调节分子中的一个或多个(例如，IL-2、IFN-γ、IL-1、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-22、IL-33、白三烯B4、CCL5、TNFα、穿孔素、TGFβ、STAT3、RORKT、FOXP3、STAT6、GATA3、颗粒酶A、颗粒酶B、2B4、CD8、CD11a、CD16、CD25、CD27、CD48、CD49d、CD54、CD56、CD58、CD62L、CD69、CD70、CD94、CD137、CD158a、CD158b、CD158e、CD178、CD226、CD253、NKG2A、NKG2C、NKG2D、LIR-1、LILR-B1、KIR2DL1、KIR3DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、CXCR3、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM-1、NKG2A、TRAIL、FasL、CXCR3、CXCR4、LTB、MX1、BAX、TNF-α和IFN-γ中的一个或多个)的水平增加(例如，与未接触本文描述的任一种单链嵌合多肽的对照中一个或多个细胞因子和趋化因子的水平相比较)来间接检测免疫细胞增殖。

在一些实施例中，本文提供的方法可以引起与未接触本文描述的任一种单链嵌合多肽任一种多链嵌合多肽的相似对照样本中免疫细胞浓度的增加速率相比，与本文描述的任一种单链嵌合多肽任一种多链嵌合多肽接触的样本中的增加速率增加(例如，约1％至约800％增加或本文描述的这一范围的任何子范围)。

诱导免疫细胞分化的方法

本文还提供诱导免疫细胞(例如，本文描述或本领域已知的任一种示例性免疫细胞)分化成记忆或记忆样免疫细胞的方法，其包括使免疫细胞与有效量的本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽或本文描述的任一种组合物(例如，药物组合物)接触。在一些实例中，免疫细胞在体外(例如，在足以引起对免疫细胞的刺激的条件下在合适的液体培养基中)进行接触。在一些实例中，免疫细胞进一步在体外与有效量的本文描述的任一种IgG1抗体构建体接触。

在一些实例中，免疫细胞是先前从受试者(例如哺乳动物，例如人)获得的。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。

在一些实例中，免疫细胞在体内进行接触。在这类实施例中，以足以引起受试者中的免疫细胞的刺激的量给予受试者(例如哺乳动物，例如人)单链嵌合多肽或多链嵌合多肽。在一些实例中，以使免疫细胞在体内与单链嵌合多肽或多链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽)接触组合(例如，同时或依序)的方式，使免疫细胞在体内与本文描述的任一种IgG1抗体构建体接触。

在本文描述的任何方法的一些实例中，免疫细胞可以是未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀手T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞或自然杀手细胞或其组合。

在一些实例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。在一些实例中，免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)先前已经过基因修饰以表达共刺激分子(例如，CD28)。

这些方法的一些实施例可能还包括在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)中。这些方法的一些实施例可能还包括在接触步骤之后，将编码共刺激分子(例如，CD28)的核酸引入到免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)中。

这些方法的一些实施例可能还包括将治疗有效量的免疫细胞给予有需要的受试者(例如，本文描述的任一个示例性受试者)。

在一些实例中，受试者可以是被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况的受试者。与年龄相关的疾病或病症的非限制性实例包括：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在一些实例中，受试者可以是已被鉴别或诊断为患有癌症的受试者。癌症的非限制性实例包括：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在一些实例中，受试者可以是已被诊断或鉴别为患有感染性疾病的受试者。感染性疾病的非限制性实例包括感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

在一些实例中，免疫细胞是NK细胞，并且记忆NK细胞的检测可以包括例如检测IL-12、IL-18、IL-33、STAT4、Zbtb32、DNAM-1、BIM、Noxa、SOCS1、BNIP3、BNIP3L、IFN-γ、TNFα、CXCL16、CXCR6、NKG2D、TRAIL、CD49、CD25、CD69、CD62L、Ly49D、CD49b和Ly79H中的一个或多个的水平。O'Sullivan等人,《免疫》43:634-645,2015中描述对NK记忆细胞和其检测方法的描述。

在一些实例中，免疫细胞是T细胞，并且记忆T细胞的检测可以包括例如检测CD45RO、CCR7、L-选择蛋白(CD62L)、CD44、CD45RA、整联蛋白αeβ7、CD43、CD27、CD28、IL-7Rα、CD95、IL-2Rα、CXCR3和LFA-1中的一个或多个的表达水平。在一些实例中，免疫细胞是B细胞，并且记忆B细胞的检测可以包括例如CD27表达水平的检测。记忆或记忆样免疫细胞的其它类型和标记是本领域已知的。

治疗方法

本文还提供治疗有需要的受试者(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性受试者)的方法，其包括将治疗有效量的本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽或本文描述的任一种组合物(例如，药物组合物)给予受试者。在一些实施例中，可以进一步将治疗有效量的本文描述的任一种IgG1抗体构建体给予受试者。

在这些方法的一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。癌症的非限制性实例包括：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。在一些实施例中，这些方法可以引起受试者中癌症的一种或多种症状的数目、严重性或频率降低(例如，与治疗前受试者中癌症的一种或多种症状的数目、严重性或频率相比)。在一些实施例中，这些方法可以引起受试者中一种或多种实体肿瘤的体积减少(例如，约1％减少至约99％减少，约1％减少至约95％减少，约1％减少至约90％减少，约1％减少至约85％减少，约1％减少至约80％减少，约1％减少至约75％减少，约1％减少至约70％减少，约1％减少至约65％减少，约1％减少至约60％减少，约1％减少至约55％减少，约1％减少至约50％减少，约1％减少至约45％减少，约1％减少至约40％减少，约1％减少至约35％减少，约1％减少至约30％减少，约1％减少至约25％减少，约1％减少至约20％减少，约1％减少至约15％减少，约1％减少至约10％减少，约1％减少至约5％减少，约5％减少至约99％减少，约5％减少至约95％减少，约5％减少至约90％减少，约5％减少至约85％减少，约5％减少至约80％减少，约5％减少至约75％减少，约5％减少至约70％减少，约5％减少至约65％减少，约5％减少至约60％减少，约5％减少至约55％减少，约5％减少至约50％减少，约5％减少至约45％减少，约5％减少至约40％减少，约5％减少至约35％减少，约5％减少至约30％减少，约5％减少至约25％减少，约5％减少至约20％减少，约5％减少至约15％减少，约5％减少至约10％减少，约10％减少至约99％减少，约10％减少至约95％减少，约10％减少至约90％减少，约10％减少至约85％减少，约10％减少至约80％减少，约10％减少至约75％减少，约10％减少至约70％减少，约10％减少至约65％减少，约10％减少至约60％减少，约10％减少至约55％减少，约10％减少至约50％减少，约10％减少至约45％减少，约10％减少至约40％减少，约10％减少至约35％减少，约10％减少至约30％减少，约10％减少至约25％减少，约10％减少至约20％减少，约10％减少至约15％减少，约15％减少至约99％减少，约15％减少至约95％减少，约15％减少至约90％减少，约15％减少至约85％减少，约15％减少至约80％减少，约15％减少至约75％减少，约15％减少至约70％减少，约15％减少至约65％减少，约15％减少至约60％减少，约15％减少至约55％减少，约15％减少至约50％减少，约15％减少至约45％减少，约15％减少至约40％减少，约15％减少至约35％减少，约15％减少至约30％减少，约15％减少至约25％减少，约15％减少至约20％减少，约20％减少至约99％减少，约20％减少至约95％减少，约20％减少至约90％减少，约20％减少至约85％减少，约20％减少至约80％减少，约20％减少至约75％减少，约20％减少至约70％减少，约20％减少至约65％减少，约20％减少至约60％减少，约20％减少至约55％减少，约20％减少至约50％减少，约20％减少至约45％减少，约20％减少至约40％减少，约20％减少至约35％减少，约20％减少至约30％减少，约20％减少至约25％减少，约25％减少至约99％减少，约25％减少至约95％减少，约25％减少至约90％减少，约25％减少至约85％减少，约25％减少至约80％减少，约25％减少至约75％减少，约25％减少至约70％减少，约25％减少至约65％减少，约25％减少至约60％减少，约25％减少至约55％减少，约25％减少至约50％减少，约25％减少至约45％减少，约25％减少至约40％减少，约25％减少至约35％减少，约25％减少至约30％减少，约30％减少至约99％减少，约30％减少至约95％减少，约30％减少至约90％减少，约30％减少至约85％减少，约30％减少至约80％减少，约30％减少至约75％减少，约30％减少至约70％减少，约30％减少至约65％减少，约30％减少至约60％减少，约30％减少至约55％减少，约30％减少至约50％减少，约30％减少至约45％减少，约30％减少至约40％减少，约30％减少至约35％减少，约35％减少至约99％减少，约35％减少至约95％减少，约35％减少至约90％减少，约35％减少至约85％减少，约35％减少至约80％减少，约35％减少至约75％减少，约35％减少至约70％减少，约35％减少至约65％减少，约35％减少至约60％减少，约35％减少至约55％减少，约35％减少至约50％减少，约35％减少至约45％减少，约35％减少至约40％减少，约40％减少至约99％减少，约40％减少至约95％减少，约40％减少至约90％减少，约40％减少至约85％减少，约40％减少至约80％减少，约40％减少至约75％减少，约40％减少至约70％减少，约40％减少至约65％减少，约40％减少至约60％减少，约40％减少至约55％减少，约40％减少至约50％减少，约40％减少至约45％减少，约45％减少至约99％减少，约45％减少至约95％减少，约45％减少至约90％减少，约45％减少至约85％减少，约45％减少至约80％减少，约45％减少至约75％减少，约45％减少至约70％减少，约45％减少至约65％减少，约45％减少至约60％减少，约45％减少至约55％减少，约45％减少至约50％减少，约50％减少至约99％减少，约50％减少至约95％减少，约50％减少至约90％减少，约50％减少至约85％减少，约50％减少至约80％减少，约50％减少至约75％减少，约50％减少至约70％减少，约50％减少至约65％减少，约50％减少至约60％减少，约50％减少至约55％减少，约55％减少至约99％减少，约55％减少至约95％减少，约55％减少至约90％减少，约55％减少至约85％减少，约55％减少至约80％减少，约55％减少至约75％减少，约55％减少至约70％减少，约55％减少至约65％减少，约55％减少至约60％减少，约60％减少至约99％减少，约60％减少至约95％减少，约60％减少至约90％减少，约60％减少至约85％减少，约60％减少至约80％减少，约60％减少至约75％减少，约60％减少至约70％减少，约60％减少至约65％减少，约65％减少至约99％减少，约65％减少至约95％减少，约65％减少至约90％减少，约65％减少至约85％减少，约65％减少至约80％减少，约65％减少至约75％减少，约65％减少至约70％减少，约70％减少至约99％减少，约70％减少至约95％减少，约70％减少至约90％减少，约70％减少至约85％减少，约70％减少至约80％减少，约70％减少至约75％减少，约75％减少至约99％减少，约75％减少至约95％减少，约75％减少至约90％减少，约75％减少至约85％减少，约75％减少至约80％减少，约80％减少至约99％减少，约80％减少至约95％减少，约80％减少至约90％减少，约80％减少至约85％减少，约85％减少至约99％减少，约85％减少至约95％减少，约85％减少至约90％减少，约90％减少至约99％减少，约90％减少至约95％减少，或约95％减少至约99％减少)(例如，与治疗之前或治疗开始时一种或多种实体肿瘤的体积相比)。在一些实施例中，这些方法可减少(例如，约1％减少至约99％减少或本文描述的这一范围的任何子范围)在受试者中发生转移或发生一种或多种其它转移的风险(例如，与在治疗之前的受试者或给予不同治疗的相似受试者或受试者群体中发生转移或发生一种或多种其它转移的风险相比)。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。与老化相关的疾病或病况的非限制性实例包括：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。在一些实例中，这些方法可以引起受试者中与老化相关的疾病或病况的一种或多种症状的数目、严重性或频率降低(例如，与治疗前受试者中与老化相关的疾病或病况的一种或多种症状的数目、严重性或频率相比)。在一些实例中，方法可以引起例如与治疗前受试者中衰老细胞的数目相比，受试者中衰老细胞的数目降低(例如，受试者中与老化相关的疾病或病症中所涉及和/或牵涉的一种或多种特定组织中衰老细胞的数目降低)(例如，约1％降低至约99％降低，约1％降低至约95％降低，约1％降低至约90％降低，约1％降低至约85％降低，约1％降低至约80％降低，约1％降低至约75％降低，约1％降低至约70％降低，约1％降低至约65％降低，约1％降低至约60％降低，约1％降低至约55％降低，约1％降低至约50％降低，约1％降低至约45％降低，约1％降低至约40％降低，约1％降低至约35％降低，约1％降低至约30％降低，约1％降低至约25％降低，约1％降低至约20％降低，约1％降低至约15％降低，约1％降低至约10％降低，约1％降低至约5％降低，约5％降低至约99％降低，约5％降低至约95％降低，约5％降低至约90％降低，约5％降低至约85％降低，约5％降低至约80％降低，约5％降低至约75％降低，约5％降低至约70％降低，约5％降低至约65％降低，约5％降低至约60％降低，约5％降低至约55％降低，约5％降低至约50％降低，约5％降低至约45％降低，约5％降低至约40％降低，约5％降低至约35％降低，约5％降低至约30％降低，约5％降低至约25％降低，约5％降低至约20％降低，约5％降低至约15％降低，约5％降低至约10％降低，约10％降低至约99％降低，约10％降低至约95％降低，约10％降低至约90％降低，约10％降低至约85％降低，约10％降低至约80％降低，约10％降低至约75％降低，约10％降低至约70％降低，约10％降低至约65％降低，约10％降低至约60％降低，约10％降低至约55％降低，约10％降低至约50％降低，约10％降低至约45％降低，约10％降低至约40％降低，约10％降低至约35％降低，约10％降低至约30％降低，约10％降低至约25％降低，约10％降低至约20％降低，约10％降低至约15％降低，约15％降低至约99％降低，约15％降低至约95％降低，约15％降低至约90％降低，约15％降低至约85％降低，约15％降低至约80％降低，约15％降低至约75％降低，约15％降低至约70％降低，约15％降低至约65％降低，约15％降低至约60％降低，约15％降低至约55％降低，约15％降低至约50％降低，约15％降低至约45％降低，约15％降低至约40％降低，约15％降低至约35％降低，约15％降低至约30％降低，约15％降低至约25％降低，约15％降低至约20％降低，约20％降低至约99％降低，约20％降低至约95％降低，约20％降低至约90％降低，约20％降低至约85％降低，约20％降低至约80％降低，约20％降低至约75％降低，约20％降低至约70％降低，约20％降低至约65％降低，约20％降低至约60％降低，约20％降低至约55％降低，约20％降低至约50％降低，约20％降低至约45％降低，约20％降低至约40％降低，约20％降低至约35％降低，约20％降低至约30％降低，约20％降低至约25％降低，约25％降低至约99％降低，约25％降低至约95％降低，约25％降低至约90％降低，约25％降低至约85％降低，约25％降低至约80％降低，约25％降低至约75％降低，约25％降低至约70％降低，约25％降低至约65％降低，约25％降低至约60％降低，约25％降低至约55％降低，约25％降低至约50％降低，约25％降低至约45％降低，约25％降低至约40％降低，约25％降低至约35％降低，约25％降低至约30％降低，约30％降低至约99％降低，约30％降低至约95％降低，约30％降低至约90％降低，约30％降低至约85％降低，约30％降低至约80％降低，约30％降低至约75％降低，约30％降低至约70％降低，约30％降低至约65％降低，约30％降低至约60％降低，约30％降低至约55％降低，约30％降低至约50％降低，约30％降低至约45％降低，约30％降低至约40％降低，约30％降低至约35％降低，约35％降低至约99％降低，约35％降低至约95％降低，约35％降低至约90％降低，约35％降低至约85％降低，约35％降低至约80％降低，约35％降低至约75％降低，约35％降低至约70％降低，约35％降低至约65％降低，约35％降低至约60％降低，约35％降低至约55％降低，约35％降低至约50％降低，约35％降低至约45％降低，约35％降低至约40％降低，约40％降低至约99％降低，约40％降低至约95％降低，约40％降低至约90％降低，约40％降低至约85％降低，约40％降低至约80％降低，约40％降低至约75％降低，约40％降低至约70％降低，约40％降低至约65％降低，约40％降低至约60％降低，约40％降低至约55％降低，约40％降低至约50％降低，约40％降低至约45％降低，约45％降低至约99％降低，约45％降低至约95％降低，约45％降低至约90％降低，约45％降低至约85％降低，约45％降低至约80％降低，约45％降低至约75％降低，约45％降低至约70％降低，约45％降低至约65％降低，约45％降低至约60％降低，约45％降低至约55％降低，约45％降低至约50％降低，约50％降低至约99％降低，约50％降低至约95％降低，约50％降低至约90％降低，约50％降低至约85％降低，约50％降低至约80％降低，约50％降低至约75％降低，约50％降低至约70％降低，约50％降低至约65％降低，约50％降低至约60％降低，约50％降低至约55％降低，约55％降低至约99％降低，约55％降低至约95％降低，约55％降低至约90％降低，约55％降低至约85％降低，约55％降低至约80％降低，约55％降低至约75％降低，约55％降低至约70％降低，约55％降低至约65％降低，约55％降低至约60％降低，约60％降低至约99％降低，约60％降低至约95％降低，约60％降低至约90％降低，约60％降低至约85％降低，约60％降低至约80％降低，约60％降低至约75％降低，约60％降低至约70％降低，约60％降低至约65％降低，约65％降低至约99％降低，约65％降低至约95％降低，约65％降低至约90％降低，约65％降低至约85％降低，约65％降低至约80％降低，约65％降低至约75％降低，约65％降低至约70％降低，约70％降低至约99％降低，约70％降低至约95％降低，约70％降低至约90％降低，约70％降低至约85％降低，约70％降低至约80％降低，约70％降低至约75％降低，约75％降低至约99％降低，约75％降低至约95％降低，约75％降低至约90％降低，约75％降低至约85％降低，约75％降低至约80％降低，约80％降低至约99％降低，约80％降低至约95％降低，约80％降低至约90％降低，约80％降低至约85％降低，约85％降低至约99％降低，约85％降低至约95％降低，约85％降低至约90％降低，约90％降低至约99％降低，约90％降低至约95％降低，或约95％降低至约99％降低)。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。感染性疾病的非限制性实例包括感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。在一些实施例中，这些方法可以引起受试者中感染滴度(例如，病毒滴度)降低(例如，与治疗前受试者中的感染滴度相比)。在一些实施例中，这些方法可以引起受试者中感染性疾病(例如，病毒感染)的一种或多种症状的数目、严重性或频率降低(例如，与治疗前受试者中感染性疾病的一种或多种症状的数目、严重性或频率相比)。

术语“受试者”是指任何哺乳动物。在一些实施例中，受试者或“需要治疗的受试者”可以是犬科动物(例如，狗)、猫科动物(例如，猫)、马科动物(例如，马)、绵羊、牛、猪、山羊、灵长类动物，例如猿猴(例如，猴(例如狨猴、狒狒)或猿(例如，大猩猩、黑猩猩、猩猩或长臂猿)或人；或啮齿动物(例如，小鼠、豚鼠、仓鼠或大鼠)。在一些实施例中，受试者或“需要治疗的受试者”可以是非人哺乳动物，尤其可以采用常规用作证明在人中的治疗功效的模型的哺乳动物(例如，鼠、兔、猪、犬或灵长类动物)。

杀死癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法

本文还提供杀死有需要的受试者(例如，本文描述或本领域已知的任一个示例性受试者)的癌细胞(例如，本文描述或本领域已知的任一种示例性癌症类型)、受感染细胞(例如，感染本文描述或本领域已知的任一种示例性病毒的细胞)或衰老细胞(例如，衰老癌细胞、衰老成纤维细胞或衰老内皮细胞)的方法，其包括将治疗有效量的本文描述的任一种单链嵌合多肽或任一种多链嵌合多肽或本文描述的任一种组合物(例如，药物组合物)给予受试者。在一些实施例中，可以进一步将治疗有效量的本文描述的任一种IgG1抗体构建体给予受试者。

在这些方法的一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。癌症的非限制性实例包括：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。与老化相关的疾病或病况的非限制性实例包括：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。感染性疾病的非限制性实例包括感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

衰老细胞

衰老是不可逆的生长停滞的一种形式，伴随着表型变化、对细胞凋亡的抗性和损伤感知信号传导路径的激活。最早关于培养的人成纤维细胞描述了细胞衰老，所述细胞失去了增殖能力，在约50群体翻倍后到达永久停滞(称为海弗利克极限(Hayflick limit))。衰老被认为是可由广泛范围的内在和外在伤害，包括氧化和遗传毒性应激、DNA损伤、端粒损耗、致癌激活、线粒体功能障碍或化疗剂诱导的应激反应。

衰老细胞保留代谢活性，并且可以通过其分泌表型影响组织止血、疾病和老化。衰老被认为是生理过程，并且对促进伤口愈合、组织稳态、再生和纤维化调节很重要。例如，在伤口愈合过程中观察到衰老细胞的瞬时诱导，并且其有助于伤口愈合。衰老的最重要作用之一可能是其在肿瘤抑制中的作用。但是，衰老细胞的积累也驱动老化和与老化相关的疾病和病况。衰老表型还可以触发慢性炎性反应，并且因此增强慢性炎性病况以促进肿瘤生长。衰老与老化之间的联系最初是基于衰老细胞在老化组织中积累的观察结果。转基因模型的使用已使得能够在许多年龄相关的病理中系统地检测衰老细胞。选择性消除衰老细胞的策略已证实，衰老细胞确实可以在老化和相关病理中起因果作用。

衰老细胞显示重要且独特的特性，包括形态、染色质组织、基因表达和代谢的变化。存在与细胞衰老相关的几种生化和功能特性，如(i)细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制子p16和p21的表达增加，(ii)存在衰老相关的β-半乳糖苷酶，即溶酶体活性的标记，(iii)出现衰老相关的异染色质灶和核纤层蛋白B1水平下调，(iv)对由抗凋亡BCL家族蛋白表达增加引起的细胞凋亡的抗性，和(v)CD26(DPP4)、CD36(清道夫(Scavenger)受体)、叉头框4(FOXO4)和分泌性载体膜蛋白4(SCAMP4)上调。衰老细胞还表达炎性特征，即所谓的衰老相关分泌表型(SASP)。通过SASP，衰老细胞产生广泛范围的炎性细胞因子(IL-6、IL-8)、生长因子(TGF-β)、趋化因子(CCL-2)和基质金属蛋白酶(MMP-3、MMP-9)，其以细胞自主方式运作以增强衰老(自分泌作用)，并且与微环境通信并改变微环境(旁分泌作用)。SASP因子可以通过触发衰老监视，即免疫介导的衰老细胞清除来促进肿瘤抑制。但是，慢性炎症也是肿瘤发生的已知驱动因素，并且越来越多的证据表明，慢性SASP也可以促进癌症和与老化相关的疾病。

衰老细胞的分泌概况取决于环境。例如，人成纤维细胞中不同的线粒体功能障碍诱导的线粒体功能障碍相关衰老(MiDAS)引起缺乏IL-1依赖性炎性因子的SASP出现。NAD+/NADH比率的降低激活AMPK信号传导，其通过激活p53诱导MiDAS。结果，p53抑制NF-κB信号传导，其为促炎性SASP的关键诱导因素。相反，由人细胞中持续性DNA损伤引起的细胞衰老诱导炎性SASP，其依赖于共济失调毛细血管扩张突变(ATM)激酶的激活，而不依赖于p53的激活。特别地，IL-6和IL-8的表达和分泌水平提高。还展现了由异位表达p16INK4a和p21CIP1引起的细胞衰老诱导人成纤维细胞的衰老表型，且不存在炎性SASP，表明生长停滞本身并不刺激SASP。

衰老的最主要特征之一是稳定生长停滞。这是通过两个重要路径，即p16/Rb和p53/p21实现的，这两个路径都是肿瘤抑制的关键。DNA损伤引起：(1)染色质中γH2Ax(组蛋白编码基因)和53BP1(DNA损伤反应中涉及)的高沉积：这引起激酶级联反应的激活，最终引起p53激活，和(2)p16INK4a和ARF(均由CDKN2A编码)和P15INK4b(由CDKN2B编码)的激活：p53诱导细胞周期蛋白依赖性激酶抑制子(p21)的转录，并且与p16INK4a和p15INK4b两者一起阻断细胞周期进展的基因(CDK4和CDK6)。这最终引起成视网膜细胞瘤蛋白(Rb)磷酸化不足，并且使细胞周期停滞在G1期。

在正常老化的情况下，选择性杀死衰老细胞已显示可显著改善小鼠的健康寿命，并且改善与年龄相关的疾病或癌症疗法的结果(Ovadya,《临床研究杂志(J ClinInvest.)》128(4):1247-1254,2018)。在自然界中，衰老细胞通常被先天免疫细胞去除。衰老的诱导不仅阻止了受损/改变的细胞的潜在增殖和转化，而且还通过产生SASP因子(主要充当自然杀手(NK)细胞的化学引诱物(如IL-15和CCL2)和巨噬细胞的化学引诱物(如CFS-1和CCL2))促进组织修复。这些先天免疫细胞介导消除应激细胞的免疫监视机制。衰老细胞通常上调NK细胞激活受体NKG2D和DNAM-1配体，其属于应激诱导性配体家族：抵抗感染性疾病和恶性肿瘤的一线免疫防御的重要组分。受体激活后，NK细胞可以接着通过其溶细胞机构特异性诱导衰老细胞的死亡。已在肝纤维化(Sagiv,《致癌基因(Oncogene)》32(15):1971-1977,2013)、肝细胞癌(Iannello,《实验医学杂志(J Exp Med)》210(10):2057-2069,2013)、多发性骨髓瘤(Soriani,《血液(Blood)》113(15):3503-3511,2009)和由甲羟戊酸路径功能异常应激的神经胶质瘤细胞(Ciaglia,《国际癌症杂志(Int J Cancer)》142(1):176-190,2018)中指出了NK细胞在衰老细胞的免疫监视中的作用。子宫内膜细胞经历急性细胞衰老，并且不会分化成蜕膜细胞。分化的蜕膜细胞分泌IL-15，从而募集子宫NK细胞以靶向并消除未分化的衰老细胞，因此有助于重塑和年轻化子宫内膜(Brighton，《E生命(Elife)》6：e31274，2017)。以相似机制，在肝纤维化过程中，表达p53的衰老肝卫星细胞使驻留库普弗(Kupfer)巨噬细胞和新浸润的巨噬细胞的极化偏向促炎性M1表型，其显示衰老活性。已显示F4/80+巨噬细胞在清除小鼠子宫衰老细胞以维持产后子宫功能中起关键作用。

衰老细胞主要通过上调NKG2D(在NK细胞上表达)的配体、趋化因子和其它SASP因子来募集NK细胞。肝纤维化的体内模型已显示激活的NK细胞有效清除衰老细胞(Krizhanovsky,《细胞(Cell)》134(4):657-667,2008)。研究已描述多种模型来研究衰老，包括肝纤维化(Krizhanovsky，《细胞》134(4):657-667,2008)、骨关节炎(Xu，《老年学杂志：A系列，生物科学与医学(J Gerontol A Biol Sci Med Sci)》72(6):780-785，2017)和帕金森氏病(Chinta，《细胞报告(Cell Rep)》22(4):930-940,2018)。用于研究衰老细胞的动物模型描述于：Krizhanovsky,《细胞》134(4):657-667,2008；Baker,《自然》479(7372):232-236,2011；Farr,《自然·医学(Nat Med)》23(9):1072-1079,2017；Bourgeois,《欧洲生物化学学会联合会快报(FEBS Lett)》592(12):2083-2097,2018；Xu,《自然·医学》24(8):1246-1256,2018)中。

增加免疫细胞的葡萄糖消耗的方法

本文还提供增加免疫细胞的葡萄糖消耗的方法，其包括：使免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)在允许免疫细胞的葡萄糖消耗的条件下在液体培养基(例如，本文描述的任一种液体培养基)中进行接触，所述液体培养基包括有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种单链嵌合多肽)，以及(ii)包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体(例如，本文描述的任一种示例性IgG1抗体构建体)，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素或细胞因子受体以及共刺激分子的配体。

本文还提供增加免疫细胞的葡萄糖消耗的方法，其包括：使免疫细胞在允许免疫细胞的葡萄糖消耗的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包括(1)有效量的多链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种多链嵌合多肽)，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域第结合而缔合；以及(2)有效量的IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，将葡萄糖消耗的增加与未接触单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和任选的IgG1抗体构建体的相似免疫细胞中葡萄糖消耗的水平进行比较，所述任选的IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。

可以用于检测葡萄糖消耗的非限制性分析包括：例如包括使用放射性标记的3-O-甲基葡萄糖或放射性标记的2-脱氧-葡萄糖的分析，或检测2-脱氧葡萄糖的酶促荧光测定分析。可以用于检测葡萄糖消耗的分析的其它实例描述于例如Yamamoto等人,《药理学现行方案(Curr.Protoc.Pharmacol.)》,第12章,第12.14.1-22节,2011年12月；Zou等人,《生物化学与生物物理方法杂志(J.Biochem.Biophys.Methods)》64(3):207-215,2005年9月；和MacKrell等人,《糖尿病(Diabetes)》第1-9页，于2012年3月13日在线发布。

在这些方法的一些实施例中，液体培养基包括单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。在这些方法的一些实例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到可溶性组织因子结构域。在这些方法的一些实例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到可溶性组织因子结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，接触步骤进行约2小时至约20天的一段时期(例如，约2小时至约18天，约2小时至约16天，约2小时至约14天，约2小时至约12天，约2小时至约10天，约2小时至约8天，约2小时至约7天，约2小时至约6天，约2小时至约5天，约2小时至约4天，约2小时至约3天，约2小时至约2天，约2小时至约1天，约6小时至约18天，约6小时至约16天，约6小时至约14天，约6小时至约12天，约6小时至约10天，约6小时至约8天，约6小时至约7天，约6小时至约6天，约6小时至约5天，约6小时至约4天，约6小时至约3天，约6小时至约2天，约6小时至约1天，约12小时至约18天，约12小时至约16天，约12小时至约14天，约12小时至约12天，约12小时至约10天，约12小时至约8天，约12小时至约7天，约12小时至约6天，约12小时至约5天，约12小时至约4天，约12小时至约3天，约12小时至约2天，约12小时至约1天，约1天至约18天，约1天至约16天，约1天至约15天，约1天至约14天，约1天至约12天，约1天至约10天，约1天至约8天，约1天至约7天，约1天至约6天，约1天至约5天，约1天至约4天，约1天至约3天，约1天至约2天，约2天至约18天，约2天至约16天，约2天至约14天，约2天至约12天，约2天至约10天，约2天至约8天，约2天至约7天，约2天至约6天，约2天至约5天，约2天至约4天，约2天至约3天，约3天至约18天，约3天至约16天，约3天至约14天，约3天至约12天，约3天至约10天，约3天至约8天，约3天至约7天，约3天至约6天，约3天至约5天，约3天至约4天，约4天至约18天，约4天至约16天，约4天至约14天，约4天至约12天，约4天至约10天，约4天至约8天，约4天至约7天，约4天至约6天，约4天至约5天，约5天至约18天，约5天至约16天，约5天至约14天，约5天至约12天，约5天至约10天，约5天至约8天，约5天至约7天，约5天至约6天，约6天至约18天，约6天至约16天，约6天至约14天，约6天至约12天，约6天至约10天，约6天至约8天，约6天至约7天，约7天至约18天，约7天至约16天，约7天至约14天，约7天至约12天，约7天至约10天，约7天至约8天，约8天至约18天，约8天至约16天，约8天至约14天，约8天至约12天，约8天至约10天，约9天至约18天，约9天至约16天，约9天至约14天，约9天至约12天，约12天至约18天，约12天至约16天，约12天至约14天，约14天至约18天，约14天至约16天，或约16天至约18天)。

在这些方法的一些实施例中，液体培养基可以是无血清液体培养基。在这些方法的一些实施例中，液体培养基可以是化学成分确定的液体培养基。在这些方法的其它实例中，液体培养基包括血清。

在这些方法的一些实例中，液体培养基以约0.5:1至约2:1(例如，约0.8:1至约1.2:1)的摩尔比包括单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

在这些方法的一些实施例中，免疫细胞选自以下的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀手T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀手细胞。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞是T细胞或自然杀手细胞。

在这些方法的一些实例中，免疫细胞是先前从受试者获得的。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。在这些方法的一些实施例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之前将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后分离免疫细胞。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将免疫细胞给予有需要的受试者。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与年龄相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在这些方法的一些实例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

本文还提供通过这些方法中的任一种产生的激活免疫细胞。本文还提供药物组合物，其包括通过这些方法中的任一种产生的任一种激活免疫细胞。本文还提供试剂盒，其包括通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种药物组合物。

本文还提供杀死有需要的受试者的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任何方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

本文还提供治疗有需要的受试者的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实施例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在这些方法的一些实例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

增加免疫细胞的氧化磷酸化的方法

本文还提供增加免疫细胞的氧化磷酸化的方法，其包括：使免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)在允许免疫细胞的氧化磷酸化的条件下在液体培养基(例如，本文描述的任一种液体培养基)中进行接触，所述液体培养基包括有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种单链嵌合多肽)，以及(ii)包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体(例如，本文描述的任一种示例性IgG1抗体构建体)，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素或细胞因子受体以及共刺激分子的配体。

本文还提供增加免疫细胞的氧化磷酸化的方法，其包括：使免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)在允许免疫细胞的氧化磷酸化的条件下在液体培养基(例如，本文描述的任一种液体培养基)中进行接触，所述液体培养基包含：(1)有效量的多链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种多链嵌合多肽)，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包含：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；以及(2)有效量的IgG1抗体构建体(例如，本文描述的任一种示例性IgG1抗体构建体)，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，将氧化磷酸化的增加与未接触多链嵌合多肽的单链嵌合多肽和任选的IgG1抗体构建体的相似免疫细胞中氧化磷酸化的水平进行比较，所述任选的IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。

可以用于检测氧化磷酸化的非限制性分析包括例如免疫荧光分析和比色分析。可以用于确定氧化磷酸化水平的非限制性商业分析为MitoTox

在这些方法的一些实施例中，液体培养基包括单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。在这些方法的一些实例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到可溶性组织因子结构域。在这些方法的一些实例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到可溶性组织因子结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，接触步骤进行约2小时至约20天的一段时期(例如，约2小时至约18天，约2小时至约16天，约2小时至约14天，约2小时至约12天，约2小时至约10天，约2小时至约8天，约2小时至约7天，约2小时至约6天，约2小时至约5天，约2小时至约4天，约2小时至约3天，约2小时至约2天，约2小时至约1天，约6小时至约18天，约6小时至约16天，约6小时至约14天，约6小时至约12天，约6小时至约10天，约6小时至约8天，约6小时至约7天，约6小时至约6天，约6小时至约5天，约6小时至约4天，约6小时至约3天，约6小时至约2天，约6小时至约1天，约12小时至约18天，约12小时至约16天，约12小时至约14天，约12小时至约12天，约12小时至约10天，约12小时至约8天，约12小时至约7天，约12小时至约6天，约12小时至约5天，约12小时至约4天，约12小时至约3天，约12小时至约2天，约12小时至约1天，约1天至约18天，约1天至约16天，约1天至约15天，约1天至约14天，约1天至约12天，约1天至约10天，约1天至约8天，约1天至约7天，约1天至约6天，约1天至约5天，约1天至约4天，约1天至约3天，约1天至约2天，约2天至约18天，约2天至约16天，约2天至约14天，约2天至约12天，约2天至约10天，约2天至约8天，约2天至约7天，约2天至约6天，约2天至约5天，约2天至约4天，约2天至约3天，约3天至约18天，约3天至约16天，约3天至约14天，约3天至约12天，约3天至约10天，约3天至约8天，约3天至约7天，约3天至约6天，约3天至约5天，约3天至约4天，约4天至约18天，约4天至约16天，约4天至约14天，约4天至约12天，约4天至约10天，约4天至约8天，约4天至约7天，约4天至约6天，约4天至约5天，约5天至约18天，约5天至约16天，约5天至约14天，约5天至约12天，约5天至约10天，约5天至约8天，约5天至约7天，约5天至约6天，约6天至约18天，约6天至约16天，约6天至约14天，约6天至约12天，约6天至约10天，约6天至约8天，约6天至约7天，约7天至约18天，约7天至约16天，约7天至约14天，约7天至约12天，约7天至约10天，约7天至约8天，约8天至约18天，约8天至约16天，约8天至约14天，约8天至约12天，约8天至约10天，约9天至约18天，约9天至约16天，约9天至约14天，约9天至约12天，约12天至约18天，约12天至约16天，约12天至约14天，约14天至约18天，约14天至约16天，或约16天至约18天)。

在这些方法的一些实施例中，液体培养基可以是无血清液体培养基。在这些方法的一些实施例中，液体培养基可以是化学成分确定的液体培养基。在这些方法的其它实例中，液体培养基包括血清。

在这些方法的一些实例中，液体培养基以约0.5:1至约2:1(例如，约0.8:1至约1.2:1)的摩尔比包括单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

在这些方法的一些实施例中，免疫细胞选自以下的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀手T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀手细胞。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞是T细胞或自然杀手细胞。

在这些方法的一些实例中，免疫细胞是先前从受试者获得的。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。在这些方法的一些实施例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之前将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后分离免疫细胞。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将免疫细胞给予有需要的受试者。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与年龄相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在这些方法的一些实例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

本文还提供通过这些方法中的任一种产生的激活免疫细胞。本文还提供药物组合物，其包括通过这些方法中的任一种产生的任一种激活免疫细胞。本文还提供试剂盒，其包括通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种药物组合物。

本文还提供杀死有需要的受试者的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任何方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

本文还提供治疗有需要的受试者的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实施例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在这些方法的一些实例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

增加免疫细胞的有氧糖酵解的方法

本文还提供增加免疫细胞的有氧糖酵解的方法，其包括：使免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)在允许免疫细胞的有氧糖酵解的条件下在液体培养基(例如，本文描述的任一种液体培养基)中进行接触，所述液体培养基包括有效量的(i)包括第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种单链嵌合多肽)，以及(ii)包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体(例如，本文描述的任一种示例性IgG1抗体构建体)，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素或细胞因子受体以及共刺激分子的配体。

本文还提供增加免疫细胞的有氧糖酵解的方法，其包括：使免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)在允许免疫细胞的有氧糖酵解的条件下在液体培养基(例如，本文描述的任一种液体培养基)中进行接触，所述液体培养基包括：(1)有效量的多链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种多链嵌合多肽)，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；以及(2)有效量的IgG1抗体构建体(例如，本文描述的任一种示例性IgG1抗体构建体)，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，将有氧糖酵解的增加与未接触单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和任选的IgG1抗体构建体的相似免疫细胞中有氧糖酵解的水平进行比较，所述任选的IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。

可以用于检测有氧糖酵解的非限制性分析包括例如检测ATP和/或CO

在这些方法的一些实施例中，液体培养基包括单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。在这些方法的一些实例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到可溶性组织因子结构域。在这些方法的一些实例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到可溶性组织因子结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，接触步骤进行约2小时至约20天的一段时期(例如，约2小时至约18天，约2小时至约16天，约2小时至约14天，约2小时至约12天，约2小时至约10天，约2小时至约8天，约2小时至约7天，约2小时至约6天，约2小时至约5天，约2小时至约4天，约2小时至约3天，约2小时至约2天，约2小时至约1天，约6小时至约18天，约6小时至约16天，约6小时至约14天，约6小时至约12天，约6小时至约10天，约6小时至约8天，约6小时至约7天，约6小时至约6天，约6小时至约5天，约6小时至约4天，约6小时至约3天，约6小时至约2天，约6小时至约1天，约12小时至约18天，约12小时至约16天，约12小时至约14天，约12小时至约12天，约12小时至约10天，约12小时至约8天，约12小时至约7天，约12小时至约6天，约12小时至约5天，约12小时至约4天，约12小时至约3天，约12小时至约2天，约12小时至约1天，约1天至约18天，约1天至约16天，约1天至约15天，约1天至约14天，约1天至约12天，约1天至约10天，约1天至约8天，约1天至约7天，约1天至约6天，约1天至约5天，约1天至约4天，约1天至约3天，约1天至约2天，约2天至约18天，约2天至约16天，约2天至约14天，约2天至约12天，约2天至约10天，约2天至约8天，约2天至约7天，约2天至约6天，约2天至约5天，约2天至约4天，约2天至约3天，约3天至约18天，约3天至约16天，约3天至约14天，约3天至约12天，约3天至约10天，约3天至约8天，约3天至约7天，约3天至约6天，约3天至约5天，约3天至约4天，约4天至约18天，约4天至约16天，约4天至约14天，约4天至约12天，约4天至约10天，约4天至约8天，约4天至约7天，约4天至约6天，约4天至约5天，约5天至约18天，约5天至约16天，约5天至约14天，约5天至约12天，约5天至约10天，约5天至约8天，约5天至约7天，约5天至约6天，约6天至约18天，约6天至约16天，约6天至约14天，约6天至约12天，约6天至约10天，约6天至约8天，约6天至约7天，约7天至约18天，约7天至约16天，约7天至约14天，约7天至约12天，约7天至约10天，约7天至约8天，约8天至约18天，约8天至约16天，约8天至约14天，约8天至约12天，约8天至约10天，约9天至约18天，约9天至约16天，约9天至约14天，约9天至约12天，约12天至约18天，约12天至约16天，约12天至约14天，约14天至约18天，约14天至约16天，或约16天至约18天)。

在这些方法的一些实施例中，液体培养基可以是无血清液体培养基。在这些方法的一些实施例中，液体培养基可以是化学成分确定的液体培养基。在这些方法的其它实例中，液体培养基包括血清。

在这些方法的一些实例中，液体培养基以约0.5:1至约2:1(例如，约0.8:1至约1.2:1)的摩尔比包括单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

在这些方法的一些实施例中，免疫细胞选自以下的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀手T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀手细胞。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞是T细胞或自然杀手细胞。

在这些方法的一些实例中，免疫细胞是先前从受试者获得的。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。在这些方法的一些实施例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之前将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后分离免疫细胞。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将免疫细胞给予有需要的受试者。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与年龄相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在这些方法的一些实例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

本文还提供通过这些方法中的任一种产生的激活免疫细胞。本文还提供药物组合物，其包括通过这些方法中的任一种产生的任一种激活免疫细胞。本文还提供试剂盒，其包括通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种药物组合物。

本文还提供杀死有需要的受试者的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任何方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

本文还提供治疗有需要的受试者的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实施例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在这些方法的一些实例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

增加免疫细胞的细胞外酸化率(ECAR)的方法

本文还提供增加免疫细胞的细胞外酸化率(ECAR)的方法，其包括：使免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)在允许免疫细胞的细胞外酸化的条件下在液体培养基(例如，本文描述的任一种液体培养基)中进行接触，所述液体培养基包括有效量的(i)包括第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种单链嵌合多肽)，以及(ii)包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体(例如，本文描述的任一种示例性IgG1抗体构建体)，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素或细胞因子受体以及共刺激分子的配体。

本文还提供增加免疫细胞的细胞外酸化率(ECAR)的方法，其包括：使免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)在允许免疫细胞的细胞外酸化的条件下在液体培养基(例如，本文描述的任一种液体培养基)中进行接触，所述液体培养基包括：(1)有效量的多链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种多链嵌合多肽)，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；以及(2)有效量的IgG1抗体构建体(例如，本文描述的任一种示例性IgG1抗体构建体)，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，将细胞外酸化率(ECAR)的增加与未接触单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和任选的IgG1抗体构建体的相似免疫细胞中细胞外酸化率(ECAR)的水平进行比较，所述任选的IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。

可以用于检测细胞外酸化率(ECAR)的非限制性商业分析包括例如糖酵解分析(细胞外酸化试剂盒)(ab197244或ab197245)(Abcam)、

在这些方法的一些实施例中，液体培养基包括单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。在这些方法的一些实例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到可溶性组织因子结构域。在这些方法的一些实例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到可溶性组织因子结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，接触步骤进行约2小时至约20天的一段时期(例如，约2小时至约18天，约2小时至约16天，约2小时至约14天，约2小时至约12天，约2小时至约10天，约2小时至约8天，约2小时至约7天，约2小时至约6天，约2小时至约5天，约2小时至约4天，约2小时至约3天，约2小时至约2天，约2小时至约1天，约6小时至约18天，约6小时至约16天，约6小时至约14天，约6小时至约12天，约6小时至约10天，约6小时至约8天，约6小时至约7天，约6小时至约6天，约6小时至约5天，约6小时至约4天，约6小时至约3天，约6小时至约2天，约6小时至约1天，约12小时至约18天，约12小时至约16天，约12小时至约14天，约12小时至约12天，约12小时至约10天，约12小时至约8天，约12小时至约7天，约12小时至约6天，约12小时至约5天，约12小时至约4天，约12小时至约3天，约12小时至约2天，约12小时至约1天，约1天至约18天，约1天至约16天，约1天至约15天，约1天至约14天，约1天至约12天，约1天至约10天，约1天至约8天，约1天至约7天，约1天至约6天，约1天至约5天，约1天至约4天，约1天至约3天，约1天至约2天，约2天至约18天，约2天至约16天，约2天至约14天，约2天至约12天，约2天至约10天，约2天至约8天，约2天至约7天，约2天至约6天，约2天至约5天，约2天至约4天，约2天至约3天，约3天至约18天，约3天至约16天，约3天至约14天，约3天至约12天，约3天至约10天，约3天至约8天，约3天至约7天，约3天至约6天，约3天至约5天，约3天至约4天，约4天至约18天，约4天至约16天，约4天至约14天，约4天至约12天，约4天至约10天，约4天至约8天，约4天至约7天，约4天至约6天，约4天至约5天，约5天至约18天，约5天至约16天，约5天至约14天，约5天至约12天，约5天至约10天，约5天至约8天，约5天至约7天，约5天至约6天，约6天至约18天，约6天至约16天，约6天至约14天，约6天至约12天，约6天至约10天，约6天至约8天，约6天至约7天，约7天至约18天，约7天至约16天，约7天至约14天，约7天至约12天，约7天至约10天，约7天至约8天，约8天至约18天，约8天至约16天，约8天至约14天，约8天至约12天，约8天至约10天，约9天至约18天，约9天至约16天，约9天至约14天，约9天至约12天，约12天至约18天，约12天至约16天，约12天至约14天，约14天至约18天，约14天至约16天，或约16天至约18天)。

在这些方法的一些实施例中，液体培养基可以是无血清液体培养基。在这些方法的一些实施例中，液体培养基可以是化学成分确定的液体培养基。在这些方法的其它实例中，液体培养基包括血清。

在这些方法的一些实例中，液体培养基以约0.5:1至约2:1(例如，约0.8:1至约1.2:1)的摩尔比包括单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

在这些方法的一些实施例中，免疫细胞选自以下的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀手T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀手细胞。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞是T细胞或自然杀手细胞。

在这些方法的一些实例中，免疫细胞是先前从受试者获得的。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。在这些方法的一些实施例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之前将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后分离免疫细胞。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将免疫细胞给予有需要的受试者。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与年龄相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在这些方法的一些实例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

本文还提供通过这些方法中的任一种产生的激活免疫细胞。本文还提供药物组合物，其包括通过这些方法中的任一种产生的任一种激活免疫细胞。本文还提供试剂盒，其包括通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种药物组合物。

本文还提供杀死有需要的受试者的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任何方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

本文还提供治疗有需要的受试者的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实施例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在这些方法的一些实例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

增加免疫细胞的线粒体耗氧率的方法

本文还提供增加免疫细胞的线粒体耗氧率的方法，其包括：使免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)在允许免疫细胞的线粒体耗氧率的条件下在液体培养基(例如，本文描述的任一种液体培养基)中进行接触，所述液体培养基包括有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种单链嵌合多肽)，以及(ii)包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体(例如，本文描述的任一种示例性IgG1抗体构建体)，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素或细胞因子受体以及共刺激分子的配体。

本文还提供增加免疫细胞的线粒体耗氧率的方法，其包括：使免疫细胞(例如，本文描述的任一种免疫细胞)在允许免疫细胞的线粒体耗氧率的条件下在液体培养基(例如，本文描述的任一种液体培养基)中进行接触，所述液体培养基包括：(1)有效量的多链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种多链嵌合多肽)，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)接头结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；以及(2)有效量的IgG1抗体构建体(例如，本文描述的任一种示例性IgG1抗体构建体)，所述IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，将线粒体耗氧率的增加与未接触单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和任选的IgG1抗体构建体的相似免疫细胞中线粒体耗氧率的水平进行比较，所述任选的IgG1抗体构建体包括至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。

可以用于检测线粒体耗氧率的非限制性商业分析包括例如包括使用电极或市售试剂盒(例如耗氧率分析试剂盒(Cayman Chemical))的分析、Seahorse分析(如Sakamuri等人,《老年科学(Geroscience)》40(3):347-356,2018中所描述)。可以用于检测线粒体耗氧率的分析的其它实例描述于例如Li等人,《线粒体异常(Mitochondrial Disorders)》第63-72页,2011年12月；Kumagi等人,《突触(Synapse)》e22067,2018年8月；Takahashi等人,《生理科学杂志(J.Physiol.Sci.)》67(6):731-737,2017；和Iihoshi等人,《毒理学快报(Toxicol.Lett.)》277:109-114,2017。

在这些方法的一些实施例中，液体培养基包括单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。在这些方法的一些实例中，IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到可溶性组织因子结构域。在这些方法的一些实例中，IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到可溶性组织因子结构域。

在本文描述的任一种方法的一些实施例中，接触步骤进行约2小时至约20天的一段时期(例如，约2小时至约18天，约2小时至约16天，约2小时至约14天，约2小时至约12天，约2小时至约10天，约2小时至约8天，约2小时至约7天，约2小时至约6天，约2小时至约5天，约2小时至约4天，约2小时至约3天，约2小时至约2天，约2小时至约1天，约6小时至约18天，约6小时至约16天，约6小时至约14天，约6小时至约12天，约6小时至约10天，约6小时至约8天，约6小时至约7天，约6小时至约6天，约6小时至约5天，约6小时至约4天，约6小时至约3天，约6小时至约2天，约6小时至约1天，约12小时至约18天，约12小时至约16天，约12小时至约14天，约12小时至约12天，约12小时至约10天，约12小时至约8天，约12小时至约7天，约12小时至约6天，约12小时至约5天，约12小时至约4天，约12小时至约3天，约12小时至约2天，约12小时至约1天，约1天至约18天，约1天至约16天，约1天至约15天，约1天至约14天，约1天至约12天，约1天至约10天，约1天至约8天，约1天至约7天，约1天至约6天，约1天至约5天，约1天至约4天，约1天至约3天，约1天至约2天，约2天至约18天，约2天至约16天，约2天至约14天，约2天至约12天，约2天至约10天，约2天至约8天，约2天至约7天，约2天至约6天，约2天至约5天，约2天至约4天，约2天至约3天，约3天至约18天，约3天至约16天，约3天至约14天，约3天至约12天，约3天至约10天，约3天至约8天，约3天至约7天，约3天至约6天，约3天至约5天，约3天至约4天，约4天至约18天，约4天至约16天，约4天至约14天，约4天至约12天，约4天至约10天，约4天至约8天，约4天至约7天，约4天至约6天，约4天至约5天，约5天至约18天，约5天至约16天，约5天至约14天，约5天至约12天，约5天至约10天，约5天至约8天，约5天至约7天，约5天至约6天，约6天至约18天，约6天至约16天，约6天至约14天，约6天至约12天，约6天至约10天，约6天至约8天，约6天至约7天，约7天至约18天，约7天至约16天，约7天至约14天，约7天至约12天，约7天至约10天，约7天至约8天，约8天至约18天，约8天至约16天，约8天至约14天，约8天至约12天，约8天至约10天，约9天至约18天，约9天至约16天，约9天至约14天，约9天至约12天，约12天至约18天，约12天至约16天，约12天至约14天，约14天至约18天，约14天至约16天，或约16天至约18天)。

在这些方法的一些实施例中，液体培养基可以是无血清液体培养基。在这些方法的一些实施例中，液体培养基可以是化学成分确定的液体培养基。在这些方法的其它实例中，液体培养基包括血清。

在这些方法的一些实例中，液体培养基以约0.5:1至约2:1(例如，约0.8:1至约1.2:1)的摩尔比包括单链嵌合多肽或多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

在这些方法的一些实施例中，免疫细胞选自以下的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀手T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀手细胞。在本文描述的任一种方法的一些实施例中，免疫细胞是T细胞或自然杀手细胞。

在这些方法的一些实例中，免疫细胞是先前从受试者获得的。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。在这些方法的一些实施例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之前将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后分离免疫细胞。这些方法的一些实施例还包括在接触步骤之后将免疫细胞给予有需要的受试者。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与年龄相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在这些方法的一些实例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

本文还提供通过这些方法中的任一种产生的激活免疫细胞。本文还提供药物组合物，其包括通过这些方法中的任一种产生的任一种激活免疫细胞。本文还提供试剂盒，其包括通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种药物组合物。

本文还提供杀死有需要的受试者的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任何方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

本文还提供治疗有需要的受试者的方法，其包括将治疗有效量的通过本文描述的任一种方法产生的本文描述的任一种激活免疫细胞或本文描述的任一种药物组合物给予受试者。在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。在这些方法的一些实施例中，癌症选自以下的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在这些方法的一些实例中，与老化相关的疾病或病况选自以下的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。在这些方法的一些实例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

其它治疗剂

本文描述的任一种方法的一些实施例还可包括将治疗有效量的一种或多种其它治疗剂给予受试者(例如，本文描述的任一个受试者)。可以将一种或多种其它治疗剂与单链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种单链嵌合多肽)、多链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种多链嵌合多肽)或激活免疫细胞(例如，激活NK细胞或激活T细胞)基本上同时给予受试者(例如作为单种调配物或两种或更多种调配物给予受试者)。在一些实施例中，可以在给予单链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种单链嵌合多肽)、多链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种多链嵌合多肽)或激活免疫细胞(例如，激活NK细胞或激活T细胞)之前将一种或多种其它治疗剂给予受试者。在一些实施例中，可以在将单链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种单链嵌合多肽)、多链嵌合多肽(例如，本文描述的任一种多链嵌合多肽)或激活免疫细胞(例如，激活NK细胞或激活T细胞)给予受试者之后将一种或多种其它治疗剂给予受试者。

其它治疗剂的非限制性实例包括：抗癌药物、激活受体激动剂、免疫检查点抑制剂、用于阻断HLA特异性抑制受体的试剂、糖原合酶激酶(GSK)3抑制剂和抗体。

抗癌药物的非限制性实例包括抗代谢药物(例如，5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨(capecitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、氟尿苷(floxuridine)、氟达拉滨(fludarabine)、吉西他滨(gemcitabine)、羟基尿素、甲胺喋呤、6-硫鸟嘌呤、克拉屈滨(cladribine)、奈拉滨(nelarabine)、喷司他汀(pentostatin)或培美曲塞(pemetrexed))、植物碱(例如，长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)、喜树碱(camptothecin)、9-甲氧基喜树碱、冠狗牙花定碱(coronaridine)、紫杉醇、乌檀根碱(naucleaoral)、二异戊二烯基化吲哚生物碱(diprenylated indole alkaloid)、山矢车菊碱(montamine)、希什金矢车菊碱(schischkiniin)、原小蘖碱(protoberberine)、小蘖碱(berberine)、血根碱(sanguinarine)、白屈菜红碱(chelerythrine)、白屈菜碱(chelidonine)、鹅掌楸碱(liriodenine)、山岗蠹吾碱(clivorine)、β-咔啉、脱甲氧基娃儿藤碱(antofine)、娃儿藤碱(tylophorine)、白叶藤碱(cryptolepine)、新白叶藤碱(neocryptolepine)、紫堇诺灵碱(corynoline)、依兰碱(sampangine)、咔唑、文珠兰碱(crinamine)、高山网球花碱(montanine)、玫瑰树碱(ellipticine)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenisopide)、伊立替康(irinotecan)、拓扑替康(topotecan)或吖啶酮生物碱)、蛋白酶体抑制剂(例如，乳胞素(lactacystin)、双硫仑(disulfiram)、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯、马里佐米(marizomib)(盐孢菌素(salinosporamide)A)、奥普佐米(oprozomib)(ONX-0912)、地兰佐米(delanzomib)(CEP-18770)、环氧霉素(epoxomicin)、MG132、β-羟基β-甲基丁酸盐、硼替佐米(bortezomib)、卡非佐米(carfilzomib)或埃沙佐米(ixazomib))、抗肿瘤抗生素(例如，阿霉素(doxorubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、表柔比星(epirubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、伊达比星(idarubicin)、放线菌素(actinomycin)、普卡霉素(plicamycin)、丝裂霉素(mitomycin)或博来霉素(bleomycin))、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(例如，伏立诺他(vorinostat)、帕比诺他(panobinostat)、贝林司他(belinostat)、吉韦诺他(givinostat)、阿贝辛他(abexinostat)、缩肽(depsipeptide)、恩替诺特(entinostat)、苯基丁酸盐、丙戊酸、曲古抑菌素(trichostatin)A、达西司他(dacinostat)、莫西司他(mocetinostat)、普瑞司他(pracinostat)、烟酰胺(nicotinamide)、坎比诺尔(cambinol)、替诺文(tenovin)1、替诺文6、斯汀诺(sirtinol)、利可司他(ricolinostat)、替非司他(tefinostat)、凯维林(kevetrin)、奎西司他(quisinostat)、雷米诺他(resminostat)、泰克地那林(tacedinaline)、西达本胺(chidamide)或赛利司他(selisistat))、酪氨酸激酶抑制剂(例如，阿昔替尼(axitinib)、达沙替尼(dasatinib)、恩可非尼(encorafinib)、厄洛替尼(erlotinib)、伊马替尼(imatinib)、尼洛替尼(nilotinib)、帕唑帕尼(pazopanib)和舒尼替尼(sunitinib))和化疗剂(例如，全反式维甲酸、阿扎胞苷(azacitidine)、硫唑嘌呤(azathioprine)、去氧氟尿苷、埃博霉素(epothilone)、羟脲、伊马替尼、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星(valrubicin)、维罗非尼(vemurafenib)和来那度胺(lenalidomide))。化疗剂的其它实例包括烷化剂，例如二氯甲二乙胺、环磷酰胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法仑(melphalan)、异环磷酰胺(ifosfamide)、噻替派(thiotepa)、六甲三聚氰胺(hexamethylmelamine)、白消安(busulfan)、六甲蜜胺(altretamine)、丙卡巴肼(procarbazine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、卡莫司汀(carmustine)、罗莫司汀(lumustine)、链脲霉素(streptozocin)、卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)和奥沙利铂(oxaliplatin)。

激活受体激动剂的非限制性实例包括激活和增强NK细胞的细胞毒性的激活受体的任何激动剂，包括抗CD16抗体(例如，抗CD16/CD30双特异性单克隆抗体(BiMAb))和基于Fc的融合蛋白。检查点抑制剂的非限制性实例包括抗PD-1抗体(例如，MEDI0680)、抗PD-L1抗体(例如，BCD-135、BGB-A333、CBT-502、CK-301、CS1001、FAZ053、KN035、MDX-1105、MSB2311、SHR-1316、抗PD-L1/CTLA-4双特异性抗体KN046、抗PD-L1/TGFβRII融合蛋白M7824、抗PD-L1/TIM-3双特异性抗体LY3415244、阿特珠单抗(atezolizumab)或阿维鲁单抗(avelumab))、抗TIM3抗体(例如，TSR-022、Sym023或MBG453)和抗CTLA-4抗体(例如，AGEN1884、MK-1308或抗CTLA-4/OX40双特异性抗体ATOR-1015)。用于阻断HLA特异性抑制受体的试剂的非限制性实例包括莫那力单抗(monalizumab)(例如，抗HLA-ENKG2A抑制受体单克隆抗体)。GSK3抑制剂的非限制性实例包括替格鲁西布(tideglusib)或CHIR99021。可以用作其它治疗剂的抗体的非限制性实例包括抗CD26抗体(例如，YS110)、抗CD36抗体和可结合到NK细胞上的Fc受体(例如，CD16)并激活所述受体的任何其它抗体或抗体构建体。在一些实施例中，其它治疗剂可以是胰岛素或二甲双胍(metformin)。

实例

在以下实例中进一步描述本发明，所述实例不限制权利要求书中所描述的本发明的范围。

实例1.示例性多链嵌合多肽的构建和其特性评估

产生两种多链嵌合多肽并且评估其特性。两种多链嵌合多肽中的每一种均包括第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括与第一靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第一结构域共价连接的可溶性组织因子结构域。两种多链嵌合多肽中的每一种中的第二嵌合多肽包括一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域。

多链嵌合多肽的逻辑基础构建的描述

组织因子(TF)是一种稳定的跨膜蛋白，含有236个氨基酸残基。组织因子的截短的重组219个氨基酸的细胞外结构域是可溶的，并且已知在细菌或哺乳动物细胞中以高水平表达。在不希望受特定理论束缚的情况下，申请人推测219-aa组织因子可以用作产生独特多链嵌合多肽的连接接头。

由在发酵液中生长的CHO-K1细胞以高水平产生包括可溶性组织因子结构域的第一嵌合多肽。通过在固体基质上偶联的抗组织因子单克隆抗体(mAb)纯化这些第一嵌合多肽。值得注意的是，组织因子含有FVIIa和FX的结合位点。当组织因子未锚定到磷脂双层时，组织因子-FVIIa复合物对FX的催化活性低约100万倍。因此，在不希望受特定理论束缚的情况下，申请人推测在第一嵌合多肽的构建中使用不跨膜的组织因子的219-aa细胞外结构域可以消除第一嵌合多肽中组织因子的促凝活性。为了进一步降低或消除219-aa组织因子的促凝活性，可以在组织因子中进行选择突变，具体来说在已知有助于FVIIa结合位点结合能的七个氨基酸残基上进行。

所描述的嵌合多肽的结合相互作用的表征

为了确定第一和第二嵌合多肽是否彼此结合以形成多链嵌合多肽，进行体外结合分析。为了确定包含可溶性组织因子结构域的第一嵌合多肽是否由抗TF mAb识别并结合，进行体外结合分析。值得注意的是，数据表明突变组织因子蛋白仍由已知与组织因子上的FX结合位点结合的抗TF mAb识别并选择性结合。为了确定包含与scFv或细胞因子共价连接的可溶性组织因子结构域的第一嵌合多肽(参见图1和图2)是否具有功能性scFvs或细胞因子，进行体外结合分析。来自前述分析的数据与具有预期生物活性的纯化的第一嵌合多肽一致(例如，scFv选择性结合预期靶抗原或细胞因子选择性结合预期受体或结合蛋白)。

另外，使用包括彼此结合的第一和第二嵌合多肽的两个多链嵌合多肽进行的实验证明预期靶标结合活性(例如，多链嵌合多肽特异性结合到由第一靶标结合结构域特异性识别的靶标和由第二靶标结合结构域特异性识别的靶标)。

基于前述结果，申请人得出结论，可溶性组织因子连接接头提供或实现了编码scFv、白介素、细胞因子、白介素受体或细胞因子受体的多肽在三维空间中相对于可溶性组织因子结构域并且相对于彼此的适当呈现，使得各自保留预期生物特性(和活性)。

当第一和第二嵌合多肽两者被共表达时，异二聚复合物以高水平分泌到发酵液中。捕获复合物并且使用亲和色谱通过结合到固体基质的抗TF mAb容易地纯化。如通过体外结合分析所分析，这些多链嵌合多肽的第一和第二靶标结合结构域保留其预期生物活性。因此，多链嵌合多肽的组装提供适用于生物活性的结构域的空间呈现和折叠。重要的是，多链嵌合多肽的空间布置不干扰组织因子上的FX结合位点，这使得能够使用抗TF mAb进行亲和纯化。

所描述的嵌合多肽的稳定性的表征

预期两种纯化的多链嵌合多肽均为稳定的。这些多链嵌合多肽在人血清中在37℃下培育72小时时具有结构完整性和完全生物活性。

所描述的嵌合多肽聚集倾向的表征

预期两种纯化的多链嵌合多肽在4℃下存储在PBS中时均不形成聚集体。

所描述的嵌合多肽的粘度表征

预期包括多链嵌合多肽的组合物在以高达50mg/mL的浓度调配于PBS中时不具有任何粘度问题。

多链嵌合多肽平台用于选择性结合临床上相关靶标的论述

我们的研究数据显示，我们的平台技术可以用于产生呈如上文所论述的任何型式的可以与来源于抗体的靶标结合结构域融合的分子、粘附分子、受体、细胞因子、趋化因子等。在适当的靶标结合结构域的情况下，所得多链嵌合多肽可以促进各种免疫效应细胞的结合并且介导包括癌细胞、病毒感染细胞或衰老细胞的靶细胞的破坏。多链嵌合多肽中的其它结构域刺激、激活并吸引免疫系统，以增强效应细胞对所靶向细胞的细胞毒性。

实例2：IL-7/IL-15RαSu DNA构建体的产生

在非限制性实例中，产生IL-7/IL-15RαSu DNA构建体(参见图1)。人IL-7序列、人IL-15RαSu序列、人IL-15序列和人组织因子219序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智(Genewiz)合成。制备DNA构建体，将IL-7序列连接到IL-15RαSu序列。最终的IL-7/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。

实例3：IL-21/TF/IL-15DNA构建体的产生

在非限制性实例中，通过将IL-21序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-21/TF构建体与IL-15的N端编码区连接，制备IL-21/TF/IL-15构建体(参见图2)。

实例4：IL-7/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将IL-7/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(如以引用的方式并入本文的Hughes,《人基因疗法》16:457-72,2005所描述)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性IL-21/TF/IL-15:IL-7/IL-15RαSu蛋白复合物(称为21t15-7s，参见图3和4)。使用抗TF抗体亲和色谱和尺寸排阻色谱从CHO-K1细胞培养上清液中纯化21t15-7s蛋白，得到由IL-7/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15融合蛋白组成的可溶性(非聚集)蛋白复合物。

在一些情况下，将前导(信号序列)肽从完整的多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

实例5：通过免疫亲和色谱纯化21t15-7s

将抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团

21t15-7s的细胞培养收获物用1M Tris碱调节到pH 7.4，并且加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集280nm处的吸光度，并且然后通过添加1M Tris碱将样本中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的

每次洗脱后，接着使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用10个柱体积的PBS、0.05％叠氮化钠中和所述柱，并且存储在2-8℃下。

实例6：TGF-βRII/IL-15RαSu DNA构建体的产生

在非限制性实例中，产生TGF-βRII/IL-15RαSu DNA构建体(参见图8)。人TGF-βRII序列、人IL-15RαSu序列、人IL-15序列和人组织因子219序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。制备DNA构建体，将TGF-βRII序列(由接头分隔)连接到IL-15RαSu序列。最终的TGF-βRII/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。

实例7：IL-21/TF/IL-15DNA构建体的产生

在非限制性实例中，通过将IL-21序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-21/TF构建体与IL-15的N端编码区连接，制备IL-21/TF/IL-15构建体(参见图9)。

实例8：TGF-βRII/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将TGF-βRII/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(如以引用方式并入本文的Hughes,《人基因疗法》16:457-72,2005所描述)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性IL-21/TF/IL-15:TGF-βRII/IL-15RαSu蛋白复合物(称为21t15-TGFRs，参见图10和11)。使用抗TF抗体亲和色谱和尺寸排阻色谱从CHO-K1细胞培养上清液中纯化21t15-TGFRs蛋白，得到由TGF-βRII/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15融合蛋白组成的可溶性(非聚集)蛋白复合物。

实例9：尺寸排阻色谱

将通用电气医疗集团

实例10：21t15-7s和21t15-TGFRs的SDS-PAGE

为了测定纯度和蛋白质分子量，使用4-12％NuPage Bis-Tris蛋白质凝胶SDS-PAGE分析纯化的21t15-7s或21t15-TGFRs蛋白质样本。凝胶将用InstantBlue

实例11：CHO-K1细胞中21t15-7s和21t15-TGFRs的糖基化

根据制造商的说明书，使用蛋白质去糖基化混合物II试剂盒(新英格兰生物实验室(New England Biolabs))证实CHO-K1细胞中21t15-7s的糖基化或CHO-K1细胞中21t15-TGFRs的糖基化。

实例12：21t15-7s和21t15-TGFRs复合物的重组蛋白定量

使用标准夹心ELISA方法检测并定量21t15-7s复合物或21t15-TGFRs复合物。抗人组织因子抗体(IgG1)充当捕获抗体，并且生物素化抗人IL-21、IL-15或IL-7抗体(21t15-7s)或生物素化抗人IL-21、IL-15或TGF-βRII抗体(21t15-TGFRs)充当检测抗体。使用抗人组织因子捕获抗体和抗人组织因子抗体(IgG1)检测抗体检测纯化的21t15-7s或21t15-TGFRs蛋白复合物中的组织因子。将抗TF ELISA与相似浓度下的纯化的组织因子进行比较。

实例13：21t15-7s复合物+抗TF IgG1抗体或21t15-TGFRs复合物+抗TF IgG1抗体的原代自然杀手(NK)细胞的扩增能力

为了评定21t15-7s复合物扩增原代自然杀手(NK)细胞的能力，将21t15-7s复合物和21t15-7s复合物+抗TF IgG1抗体添加到从新鲜人白细胞样本获得的NK细胞中。在37°和5％CO

为了评定21t15-TGFRs复合物扩增原代自然杀手(NK)细胞的能力，将21t15-TGFRs复合物和21t15-TGFRs复合物+抗TF IgG1抗体添加到从新鲜人白细胞样本获得的NK细胞中。在37°和5％CO

实例14：21t15-7s复合物+抗TF IgG1抗体或21t15-TGFRs复合物+抗TF IgG1抗体激活扩增的NK细胞

用21t15-7s复合物+抗TF IgG1抗体过夜刺激纯化的NK细胞后，可以离体诱导原代NK细胞。从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>80％，并且通过用CD56-BV421和CD16-BV510特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以1×10

用21t15-TGFRs复合物+抗TF IgG1抗体过夜刺激纯化的NK细胞后，可以离体诱导原代NK细胞。从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>80％，并且通过用CD56-BV421和CD16-BV510特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以1×10

实例15：NK细胞对人肿瘤细胞的细胞毒性

从血库获得新鲜的人白细胞。使用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)通过负向选择分离NK细胞。NK细胞的纯度>80％，并且通过用CD56-BV421和CD16-BV510特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以1×10

实例16：IL-21/IL-15RαSu DNA构建体的产生

在非限制性实例中，产生IL-21/IL-15RαSu DNA构建体。人IL-21序列和人IL-15RαSu序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。制备DNA构建体，将IL-21序列连接到IL-15RαSu序列。最终的IL-21/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。参见图14。

实例17：IL-7/TF/IL-15DNA构建体的产生

在非限制性实例中，通过将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-7/TF构建体与IL-15的N端编码区连接来制备IL-7/TF/IL-15构建体。参见图15。

实例18：IL-21/IL-15Rα寿司DNA构建体的产生

在非限制性实例中，产生IL-21/IL-15RαSu的第二嵌合多肽。人IL-21和人IL-15Rα寿司序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。制备DNA构建体，将IL-21序列连接到IL-15Rα寿司序列。最终的IL-21/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。

实例19：IL-7/TF/IL-15DNA构建体的产生

在非限制性实例中，通过将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-7/TF构建体与IL-15的N端编码区连接来制备IL-7/TF/IL-15的示例性第一嵌合多肽。编码IL-7/TF/IL-15的第一嵌合多肽(包括前导序列)的核酸序列由金唯智合成。

实例20：IL-21/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将IL-21/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(如以引用方式并入本文的Hughes,《人基因疗法》16:457-72,2005所描述)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu蛋白复合物(称为7t15-21s)。使用抗TF抗体(IgG1)亲和色谱和尺寸排阻色谱从CHO-K1细胞培养上清液中纯化7t15-21s蛋白，得到由IL-21/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15融合蛋白组成的可溶性(非聚集)蛋白复合物。参见图16和17。

实例21：IL-21/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的分析型尺寸排阻色谱(SEC)分析

为了确定抗组织因子单克隆抗体和7t15-21s是否可以形成抗体-融合体-分子复合物，进行分析型尺寸排阻色谱(SEC)。将Superdex 200Increase 10/300GL凝胶过滤柱(来自通用电气医疗集团)连接到AKTA Avant系统(来自通用电气医疗集团)。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.7mL/min。抗TF mAb(1mg/mL)、7t15-21s(1mg/mL)和以1:1比混合的混合物的样本，因此每种蛋白质的最终浓度为0.5mg/mL)处于PBS中。使用毛细管环将每个样本注入Superdex 200柱，并且通过SEC进行分析。每个样本的SEC纯化洗脱色谱如图19所示。SEC结果表明7t15-21s有两个蛋白峰，可能代表7t15-21s的二聚体(表观分子量为199.2kDa)和更高的低聚物，并且抗TF mAb有一个峰(表观分子量为206.8kDa)。但是，如所预期，在含有抗TF mAb和7t15-21s的混合物样本中形成了更高分子量的新蛋白质峰(表观分子量为576.9kDa)，表明抗TF mAb和7t15-21s通过抗TF mAb与融合蛋白复合物中的TF结合形成抗体-抗原复合物。

实例22：7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体的原代自然杀手(NK)细胞的扩增能力

为了评定7t15-21s复合物扩增原代自然杀手(NK)细胞的能力，将7t15-21s复合物和7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体添加到从新鲜人白细胞样本获得的NK细胞中。在37℃和5％CO

实例23：7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体激活扩增的NK细胞

用7t15-21s复合物+TF IgG1抗体过夜刺激纯化的NK细胞后，离体诱导原代NK细胞。从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>80％，并且通过用CD56-BV421和CD16-BV510特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以1×10

实例24：使用7t15-21s和21t15-7s与抗TF IgG1抗体组合增加NK细胞中的葡萄糖代谢

进行一组实验以确定(1)7t15-21s与抗TF IgG1抗体的组合或(2)21t15-7s与抗TFIgG1抗体的组合对从人血中纯化的NK细胞的耗氧率(OCR)和细胞外酸化率(ECAR)的影响。在这些实验中，从血库中获得新鲜的人白细胞，并且使用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)通过负向选择分离NK细胞。NK细胞的纯度>80％，并且通过用CD56-BV421和CD16-BV510特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以1×10

数据显示(1)100nM 7t15-21s和50nM抗TF IgG1抗体以及(2)100nM 21t15-7s和50nM抗TF IgG1的组合引起耗氧率(图20)和细胞外酸化率(ECAR)(图21)显著增加。

实例25：使用18t15-12s增加NK细胞中的葡萄糖代谢

进行了一组实验以确定18t15-12s的构建体(图22)对从人血中纯化的NK细胞的耗氧率和细胞外酸化率(ECAR)的影响。

在这些实验中，从血库中两个不同的人供体获得新鲜的人白细胞，并且使用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)通过负向选择分离NK细胞。NK细胞的纯度>80％，并且通过用CD56-BV421和CD16-BV510特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以2×10

数据显示，与用重组人IL-12、重组人IL-15和重组人IL-18的组合激活的相同细胞相比，18t15-12s引起耗氧率(图23)和细胞外酸化率(ECAR)(图24)显著提高。

实例26：IL-12/IL-15RαSu DNA构建体的产生

在非限制性实例中，产生IL-12/IL-15R酳u DNA构建体。(参见图25)人IL-12亚基序列、人IL-15RαSu序列、人IL-15序列、人组织因子219序列和人IL-18序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。制备DNA构建体，用GS(3)接头将IL-12亚基β(p40)连接到IL-12亚基α(p35)以产生IL-12的单链形式，并且然后直接将IL-12序列连接到IL-15RαSu序列。最终的IL-12/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。

IL12/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:123)：

(信号肽)

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC

(人IL-12亚基β(p40))

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC

(接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人IL-12亚基α(p35))

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

实例27：IL-18/TF/IL-15DNA构建体的产生

在非限制性实例中，制备IL-18/TF/IL-15构建体(参见图26)，将IL-18序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-18/TF构建体与IL-15的N端编码区连接。由金唯智合成的IL-18/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:119)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC

(人IL-18)

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

实例28：IL-12/IL-15RαSu和IL-18/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将IL-12/IL-15RαSu和IL-18/TF/IL-15DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(如以引用方式并入本文的Hughes,《人基因疗法》16:457-72,2005所描述)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性IL-18/TF/IL-15:IL-12/IL-15RαSu蛋白复合物(称为18t15-12s，参见图27和28)。使用抗TF抗体亲和色谱和尺寸排阻色谱从CHO-K1细胞培养上清液中纯化18t15-12s蛋白，得到由IL-12/IL-15RαSu和IL-18/TF/IL-15融合蛋白组成的可溶性(非聚集)蛋白复合物。

IL12/IL-15RαSu融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:122)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-12亚基β(p40))

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人IL-12亚基α(p35))

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTP SLKCIR

IL-18/TF/IL-15融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:118)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-18)

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在一些情况下，将前导(信号序列)肽从完整的多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

实例29：通过免疫亲和色谱纯化18t15-12s

将抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团

18t15-12s的细胞培养收获物用1M Tris碱调节到pH 7.4，并且加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集280nm处的吸光度，并且然后通过添加1M Tris碱将样本中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的

每次洗脱后，接着使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用10个柱体积的PBS、0.05％叠氮化钠中和所述柱，并且存储在2-8℃下。

实例30：18t15-12s的尺寸排阻色谱

将通用电气医疗集团

实例31：18t15-12s的SDS-PAGE

为了测定纯度和蛋白质分子量，使用4-12％NuPage Bis-Tris蛋白质凝胶SDS-PAGE分析纯化的18t15-12s蛋白质样本。凝胶用InstantBlue

实例32：CHO-K1细胞中18t15-12s的糖基化

根据制造商的说明书，使用蛋白质去糖基化混合物II试剂盒(新英格兰生物实验室)证实CHO-K1细胞中18t15-12s的糖基化。图32显示去糖基化和未去糖基化的18t15-12s的示例SDS PAGE。去糖基化降低18t15-12s的分子量，如图32泳道4所示。

实例33：18t15-12s复合物的重组蛋白定量

使用标准夹心ELISA方法检测并定量18t15-12s复合物(参见图33到36)。抗人组织因子抗体充当捕获抗体，并且生物素化抗人IL-12、IL-15或IL-18抗体(BAF 219、BAM 247、D045-6，全部为安迪生物公司(R&D Systems)产品)充当检测抗体。还使用抗人组织因子捕获抗体(I43)和抗人组织因子抗体检测抗体来检测纯化的18t15-12s蛋白复合物中的组织因子。将I43/抗TF Ab ELISA与相似浓度下的纯化组织因子进行比较。

实例34：18t15-12s复合物的免疫刺激能力

为了评定18t15-12s复合物的IL-15免疫刺激活性，向200μL IMDM:10％FBS培养基中的32Dβ细胞(104个细胞/孔)中添加浓度逐渐提高的18t15-12s。将32Dβ细胞在37℃下培育3天。在第四天，添加WST-1增殖试剂(10μL/孔)，并且在4小时后，在450nm处测量吸光度，以基于WST-1裂解为可溶性甲臜染料来确定细胞增殖。评定人重组IL-15的生物活性作为阳性对照。如图37所示，18t15-12s展现32Dβ细胞的IL-15依赖性细胞增殖。与人重组IL-15相比，18t15-12s复合物展现降低的活性，可能是由于IL-18和组织因子与IL-15结构域的连接所致。

为了评定18t15-12s复合物中IL-12和IL-18的个别活性，将18t15-12s添加到200μL IMDM:10％热灭活的FBS培养基中的HEK-Blue IL-12和HEK-Blue IL-18报告细胞(5×10

实例35：18t15-12s复合物诱导细胞因子诱导的记忆样NK细胞

在用饱和量的IL-12(10ng/mL)、IL-15(50ng/mL)和IL-18(50ng/mL)过夜刺激纯化的NK细胞后，可以离体诱导细胞因子诱导的记忆样NK细胞。这些记忆样特性已通过IL-2受体ɑ(IL-2Rɑ、CD25)、CD69(和其它激活标记)的表达和增加的IFN-γ产生进行测量。为了评估18t15-12s复合物促进细胞因子诱导的记忆样NK细胞产生的能力，用0.01nM至10000nM的18t15-12s复合物或个别细胞因子(重组IL-12(10ng/mL)、IL-18(50ng/mL)和IL-15(50ng/mL))的组合刺激纯化的人NK细胞(>95％CD56+)14-18小时。通过抗体染色和流式细胞术评定细胞表面CD25和CD 69表达以及细胞内IFN-γ水平。

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以0.2×10

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以0.2×10

实例36：NK细胞对人肿瘤细胞的体外细胞毒性

在存在浓度逐渐提高的18t15-12s复合物或作为对照的细胞因子混合物的情况下，将人骨髓性白血病细胞K562(用CellTrace紫罗兰标记)与纯化的人NK细胞一起培育。20小时后，收获培养物，用碘化丙啶(PI)染色，并且通过流式细胞术评定。如图42所示，18t15-12s复合物以与细胞因子混合物相似或更高的水平诱导人NK对K562的细胞毒性，其中18t15-12s复合物和细胞因子混合物均诱导比培养基对照更大的细胞毒性。

实例37：IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv和IL-18/TF/IL-15DNA构建体的产生

在非限制性实例中，产生IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv和IL-18/TF/IL-15DNA构建体(参见图43)。人IL-12亚基序列、人IL-15RαSu序列、人IL-15序列、人组织因子219序列和人IL-18序列由金唯智合成。制备DNA构建体，用GS(3)接头将IL-12亚基β(p40)连接到IL-12亚基α(p35)以产生IL-12的单链形式，直接将IL-12序列连接到IL-15RαSu序列，并且直接将IL-12/IL-15RαSu构建体连接到αCD16scFv的N端编码区(称为18t15-12s16)。

IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv构建体的核酸序列如下(SEQ ID NO:156)：

(信号肽)

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC

(人IL-12亚基β(p40))

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC

(接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人IL-12亚基α(p35))

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(抗人CD16轻链可变结构域)

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT

(接头)

GGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCC

(抗人CD16重链可变结构域)

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG

还制备构建体，将IL-18序列连接到组织因子219的N端编码区，并且将IL-18/TF构建体与IL-15的N端编码区连接(参见图44)。IL-18/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:119)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC

(人IL-18)

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

实例38：IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv和IL-18/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv和IL-18/TF/IL-15构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(Hughes，《人基因疗法》16:457-72,2005，以引用的方式并入本文)中，然后将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得分泌可溶性IL-18/TF/IL-15:IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv蛋白复合物(称为18t15-12s/αCD16)。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达引起分泌可溶性IL-18/TF/IL-15:IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv蛋白复合物(称为18t15-12s/αCD16；参见图45和46)，其可以通过抗TF抗体亲和与其它色谱方法纯化。在一些情况下，将信号肽从完整多肽上裂解下来以产生成熟形式。

IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQID NO:155)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-12亚基β(p40))

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人IL-12亚基α(p35))

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(抗人CD16轻链可变结构域)

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(抗人CD16重链可变结构域)

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR

IL-18/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:118)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-18)

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

实例39：IL-18/IL-15RαSu和IL-12/TF/IL-15DNA构建体的产生

在非限制性实例中，产生IL-18/IL-15RαSu和IL-12/TF/IL-15DNA构建体。人IL-18亚基序列、人IL-15RαSu序列、人IL-12序列、人组织因子219序列和人IL-15序列由金唯智合成。制备DNA构建体，将IL-18直接连接到IL-15RαSu。还制备其它构建体，将IL-12序列连接到人组织因子219形式的N端编码区，并且进一步将IL-12/TF构建体连接到IL-15的N端编码区。如上所描述，使用IL-12的单链形式(p40-接头-p35)。

IL-18/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:189)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC

(人IL-18)

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

IL-12/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:190)：

(信号肽)

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC

(人IL-12亚基β(p40))

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC

(接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人IL-12亚基α(p35))

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

实例40：IL-18/IL-15RαSu和IL-12/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将IL-18/IL-15RαSu和IL-12/TF/IL-15构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(Hughes,《人基因疗法》16:457-72,2005，以引用的方式并入本文)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达引起分泌可溶性IL-12/TF/IL-15:IL-18/IL-15RαSu蛋白复合物(称为12t15/s18)，其可以通过抗TF抗体亲和与其它色谱方法纯化。

IL-18/IL-15RαSu融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:191)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-18)

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

IL-12/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:192)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-12亚基β(p40))

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人IL-12亚基α(p35))

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

实例41：18t15-12s16复合物的重组蛋白定量

使用标准夹心ELISA方法检测并定量18t15-12s16复合物(包含IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv；IL-18/TF/IL-15)(参见图47)。抗人组织因子抗体/IL-2或抗TF抗体/IL-18充当捕获抗体，并且生物素化抗人IL-12或IL-18抗体(BAF 219、D045-6，均为安迪生物公司产品)充当检测抗体。还使用抗人组织因子抗体(I43)和抗人组织因子抗体检测抗体来检测组织因子。

实例42：TGFβRII/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15构建体的产生

在非限制性实例中，产生TGFβRII/IL-15RαSu DNA构建体(参见图48)。人TGFβRII二聚体和人IL-21序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。制备DNA构建体，用接头将TGFβRII连接到另一TGFβRII以产生TGFβRII的单链形式，并且然后直接将TGFβRII单链二聚体序列连接到IL-15RαSu的N端编码区。

TGFβRII/IL-15RαSu构建体(包括信号序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:133)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβRII-第1片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT

(接头)

GGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGT

(人TGFβRII-第2片段)

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATCACGTGTCCTCCTCCTATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGTATTAGA

另外，制备IL-21/TF/IL-15构建体，将IL-21序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-21/TF构建体连接到IL-15的N端编码区(参见图49)。IL-21/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:129)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人组织因子219)

TCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

实例43：TGFβRII/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将TGFβRII/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(如以引用的方式并入本文的Hughes,《人基因疗法》16:457-72,2005中所描述)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得分泌可溶性IL-21/TF/IL-15:TGFβRII/IL-15RαSu蛋白复合物(称为21t15-TGFRs，参见图50和51)。使用抗TF抗体亲和色谱和其它色谱方法从CHO-K1细胞培养上清液中纯化21t15-TGFRs复合物。

TGFβRII/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:132)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβRII-第1片段)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人TGFβRII-第2片段)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

成熟的IL-21/TF/IL-15融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ IDNO:128)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

实例44：通过免疫亲和谱法纯化21t15-TGFRs

将抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA

21t15-TGFRs的细胞培养收获物用1M Tris碱调节到pH 7.4，并且加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集280nm处的吸光度，并且然后接着通过添加1M Tris碱将样本中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的

每次洗脱后，接着使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用10个柱体积的PBS、0.05％叠氮化钠中和所述柱，并且存储在2-8℃下。

实例45：21t15-TGFRs的尺寸排阻色谱

将通用电气医疗集团

实例46：21t15-TGFRs的SDS-PAGE

为了测定纯度和蛋白质分子量，使用4-12％NuPage Bis-Tris蛋白质凝胶SDS-PAGE在还原条件下分析纯化的21t15-TGFRs复合蛋白质样本。凝胶用InstantBlue

实例47：21t15-TGFRs复合物的重组蛋白定量

使用标准夹心ELISA方法检测并定量21t15-TGFRs复合物(参见图55到59)。抗人组织因子抗体充当捕获抗体并且生物素化抗人IL-21、IL-15或TGFβRII充当检测抗体。还使用抗人组织因子捕获抗体(I43)和抗人组织因子抗体检测抗体来检测组织因子。将I43/抗TFAb ELISA与相似浓度下的纯化组织因子进行比较。

实例48：21t15-TGFRs复合物的免疫刺激能力

为了评定21t15-TGFRs复合物的IL-15免疫刺激活性，向200μL IMDM:10％FBS培养基中的32Dβ细胞(10

另外，HEK-Blue TGFβ报告细胞(hkb-tgfb，InvivoGen)用于测量21t15-TGFRs阻断TGFβ1活性的能力(图60)。将浓度逐渐提高的21t15-TGFRs与0.1nM TGFβ1混合并添加到200μL IMDM:10％热灭活FBS培养基中的HEK-Blue TGFβ报告细胞(2.5×10

这些结果证明21t15-TGFRs复合物的TGFβRII结构域保留其捕获TGFβ1的能力。与人重组TGFβRII/Fc相比，21t15-TGFRs阻断TGFβ1活性的能力降低，可能是由于TGFβRII连接到IL-15Rα寿司结构域所致。

实例49：21t15-TGFRs复合物诱导细胞因子诱导的记忆样NK细胞

在用饱和量的细胞因子过夜刺激纯化的NK细胞后，可以离体诱导细胞因子诱导的记忆样NK细胞。这些记忆样特性可以通过IL-2受体ɑ(IL-2Rɑ、CD25)、CD69(和其它激活标记)的表达以及增加的IFN-γ产生来测量。为了评估21t15-TGFRs复合物促进细胞因子诱导的记忆样NK细胞产生的能力，用1nM至100nM的21t15-TGFRs复合物刺激纯化的人NK细胞(>95％CD56+)14-18小时。通过抗体染色和流式细胞术评定细胞表面CD25和CD 69表达以及细胞内IFN-γ水平。

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以0.2×10

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以0.2×10

实例50：NK细胞对人肿瘤细胞的体外细胞毒性

在存在浓度逐渐提高的21t15-TGFRs复合物的情况下，将人骨髓性白血病细胞K562(用CellTrace紫罗兰标记)与纯化的人NK细胞一起培育(使用StemCell人NK细胞纯化试剂盒(E:T比；2:1))。20小时后，收获培养物，用碘化丙啶(PI)染色，并且通过流式细胞术评定。如图63所示，与对照相比，21t15-TGFRs复合物诱导人NK对K562的细胞毒性。

实例51：IL-21/TF突变体/IL-15DNA构建体和与TGFβRII/IL-15RαSu的所得融合蛋白复合物的产生

在非限制性实例中，通过将IL-21直接连接到组织因子219突变体的N端编码区，并且进一步将IL-21/TF突变体连接到IL-15的N端编码区来制备IL-21/TF突变体/IL-15DNA构建体。

IL-21/TF突变体/IL-15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:193，加阴影的核苷酸是突变体，并且突变密码子带有下划线)：

(信号序列)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人组织因子219突变体)

TCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTC

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

IL-21/TF突变体/IL-15构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:194，取代的残基加阴影)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFATALEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECALTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVARNNTALSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIH DTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

在一些实施例中，IL-21/TF突变体/IL-15DNA构建体可以与TGFβRII/IL-15RαSuDNA构建体组合，使用如上所描述的逆转录病毒载体转染到细胞中，并且表达为IL-21/TF突变体/IL-15和TGFβRII/IL-15RαSu融合蛋白。TGFβRII/IL-15RαSu融合蛋白的IL-15RαSu结构域结合到IL-21/TF突变体/IL-15融合蛋白的IL-15结构域，以产生IL-21/TF突变体/IL-15:TGFβRII/IL-15RαSu复合物。

实例52：IL-21/IL-15RαSu和TGFβRII/TF/IL-15DNA构建体和所得融合蛋白复合物的产生

在非限制性实例中，通过将IL-21直接连接到IL-15RαSu亚基序列来制备IL-21/IL-15RαSu DNA构建体。IL-21/IL-15RαSu构建体(包括信号序列)的核酸序列如下(SEQ IDNO:148)：

(信号序列)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

IL-21/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:147)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTP SLKCIR

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

在一些实施例中，IL-21/IL-15RαSu DNA构建体可以与TGFβRII/TF/IL-15DNA构建体组合，转染到如上所描述的逆转录病毒载体中，并且表达为IL-21/IL-15RαSu和TGFβRII/TF/IL-15融合蛋白。IL-21/IL-15RαSu融合蛋白的IL-15RαSu结构域结合到TGFβRII/TF/IL-15融合蛋白的IL-15结构域，以产生TGFβRII/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu复合物。

通过将TGFβRII序列连接到人组织因子219形式的N端编码区，并且然后将TGFβRII/TF构建体连接到IL-15的N端编码区，产生TGFβRII/TF/IL-15RαSu DNA构建体。如上所描述，使用TGFβRII的单链形式(TGFβRII-接头-TGFβRII)。TGFβRII/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:164)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβRII-第1片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT

(接头)

GGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGT

(人TGFβRII-第2片段)

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

TCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFβRII/TF/IL-15融合蛋白(包括信号肽)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:163)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβRII-第1片段)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人TGFβRII-第2片段)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

实例53.示例性单链嵌合多肽的产生

产生示例性单链嵌合多肽(αCD3scFv/TF/αCD28scFv)(图64)，其包括作为抗CD3scFv的第一靶标结合结构域、可溶性人组织因子结构域和作为抗CD28 scFv的第二靶标结合结构域。这种单链嵌合多肽的核酸和氨基酸序列如下文所示。

编码示例性单链嵌合多肽(αCD3scFv/TF/αCD28scFv)的核酸(SEQ ID NO:103)

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCTTATTATTTTTATTCAGCTCCGCCTATTCC

(αCD3轻链可变区)

CAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGT

(接头)

GGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGC

(αCD3重链可变区)

CAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGC

(人组织因子219形式)

TCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(αCD28轻链可变区)

GTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGC

(接头)

GGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCC

(αCD28轻链可变区)

GACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG

示例性单链嵌合多肽(αCD3scFv/TF/αCD28scFv)(SEQ ID NO:102)

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(αCD3轻链可变区)

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINR

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(αCD3重链可变区)

QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(αCD28轻链可变区)

VQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSS

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(αCD28重链可变区)

DIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR

产生第二示例性单链嵌合多肽(αCD28scFv/TF/αCD3scFv)(图65)，其包括作为抗CD28scFv的第一靶标结合结构域、可溶性人组织因子结构域和作为抗CD3 scFv的第二靶标结合结构域。这种单链嵌合多肽的核酸和氨基酸序列如下文所示。

编码示例性单链嵌合多肽(αCD28scFv/TF/αCD3scFv)的核酸(SEQ ID NO:195)

(信号肽)

ATGAAATGGGTCACCTTCATCTCTTTACTGTTTTTATTTAGCAGCGCCTACAGC

(αCD28轻链可变区)

GTGCAGCTGCAGCAGTCCGGACCCGAACTGGTCAAGCCCGGTGCCTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACCTCCTACGTCATCCAATGGGTGAAGCAGAAGCCCGGTCAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAATCCCTACAACGATTACACCAAGTATAACGAAAAGTTTAAGGGCAAGGCCACTCTGACAAGCGACAAGAGCTCCATTACCGCCTACATGGAGTTTTCCTCTTTAACTTCTGAGGACTCCGCTTTATACTATTGCGCTCGTTGGGGCGATGGCAATTATTGGGGCCGGGGAACTACTTTAACAGTGAGCTCC

(接头)

GGCGGCGGCGGAAGCGGAGGTGGAGGATCTGGCGGTGGAGGCAGC

(αCD28重链可变区)

GACATCGAGATGACACAGTCCCCCGCTATCATGAGCGCCTCTTTAGGAGAACGTGTGACCATGACTTGTACAGCTTCCTCCAGCGTGAGCAGCTCCTATTTCCACTGGTACCAGCAGAAACCCGGCTCCTCCCCTAAACTGTGTATCTACTCCACAAGCAATTTAGCTAGCGGCGTGCCTCCTCGTTTTAGCGGCTCCGGCAGCACCTCTTACTCTTTAACCATTAGCTCTATGGAGGCCGAAGATGCCGCCACATACTTTTGCCATCAGTACCACCGGTCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACAAAGCTGGAGACCAAGCGG

(人组织因子219形式)

AGCGGCACCACCAACACAGTGGCCGCCTACAATCTGACTTGGAAATCCACCAACTTCAAGACCATCCTCGAGTGGGAGCCCAAGCCCGTTAATCAAGTTTATACCGTGCAGATTTCCACCAAGAGCGGCGACTGGAAATCCAAGTGCTTCTATACCACAGACACCGAGTGCGATCTCACCGACGAGATCGTCAAAGACGTGAAGCAGACATATTTAGCTAGGGTGTTCTCCTACCCCGCTGGAAACGTGGAGAGCACCGGATCCGCTGGAGAGCCTTTATACGAGAACTCCCCCGAATTCACCCCCTATCTGGAAACCAATTTAGGCCAGCCCACCATCCAGAGCTTCGAACAAGTTGGCACAAAGGTGAACGTCACCGTCGAAGATGAGAGGACTTTAGTGCGGAGGAACAATACATTTTTATCCTTACGTGACGTCTTCGGCAAGGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCTAGCTCCTCCGGCAAGAAGACCGCCAAGACCAATACCAACGAATTTTTAATTGACGTGGACAAGGGCGAGAACTACTGCTTCTCCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACAGTGAACCGGAAGTCCACCGACTCCCCCGTGGAGTGCATGGGCCAAGAGAAGGGAGAGTTTCGTGAG

(αCD3轻链可变区)

CAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCTATTATGAGCGCTAGCCCCGGTGAAAAGGTGACTATGACATGCAGCGCCAGCTCTTCCGTGAGCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAGTCCGGCACCAGCCCTAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCAGCGGCGTCCCCGCTCACTTTCGGGGCTCCGGCTCCGGAACAAGCTACTCTCTGACCATCAGCGGCATGGAAGCCGAGGATGCCGCTACCTATTACTGTCAGCAGTGGAGCTCCAACCCCTTCACCTTTGGATCCGGCACCAAGCTCGAGATTAATCGT

(接头)

GGAGGCGGAGGTAGCGGAGGAGGCGGATCCGGCGGTGGAGGTAGC

(αCD3重链可变区)

CAAGTTCAGCTCCAGCAAAGCGGCGCCGAACTCGCTCGGCCCGGCGCTTCCGTGAAGATGTCTTGTAAGGCCTCCGGCTATACCTTCACCCGGTACACAATGCACTGGGTCAAGCAACGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATTGGCTATATCAACCCCTCCCGGGGCTATACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAAGCCACCCTCACCACCGACAAGTCCAGCAGCACCGCTTACATGCAGCTGAGCTCTTTAACATCCGAGGATTCCGCCGTGTACTACTGCGCTCGGTACTACGACGATCATTACTGCCTCGATTACTGGGGCCAAGGTACCACCTTAACAGTCTCCTCC

示例性单链嵌合多肽(αCD28scFv/TF/αCD3scFv)(SEQ ID NO:196)

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(αCD28轻链可变区)

VQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSS

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(αCD28重链可变区)

DIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(αCD3轻链可变区)

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVP AHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINR

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(αCD3重链可变区)

QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS

将编码αCD3scFv/TF/αCD28scFv的核酸克隆到经过修饰的逆转录病毒表达载体中，如先前所描述(Hughes等人,《人基因疗法》16:457-72,2005)。将编码αCD3scFv/TF/αCD28scFv的表达载体转染到CHO-K1细胞中。表达载体在CHO-K1细胞中的表达允许分泌可溶性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽(称为3t28)，其可以通过抗TF抗体亲和与其它色谱方法来纯化。

将抗组织因子亲和柱用于纯化αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽。抗组织因子亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤都使用4mL/min的流速，洗脱步骤的流速为2mL/min。

使用1M Tris碱将包括αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的细胞培养收获物调节到pH 7.4并且加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱(上文所描述)上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，然后通过添加1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样本缓冲交换到PBS中。图65中的数据显示抗组织因子亲和柱可以结合含有人可溶性组织因子结构域的αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽。将缓冲交换的蛋白质样本存储在2-8℃下以用于进一步的生化分析和生物活性测试。

每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗组织因子亲和柱。然后使用10个柱体积的PBS、0.05％NaN

使用连接到AKTA Avant系统(来自通用电气医疗集团)的Superdex 200Increase10/300GL凝胶过滤柱(来自通用电气医疗集团)，对αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽进行分析型尺寸排阻色谱(SEC)。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。使用0.8mL/min的流速。使用毛细管环将两百微升的αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽(1mg/mL)注射到柱上。注射单链嵌合多肽后，使1.25个柱体积的PBS流入柱中。SEC纯化洗脱色谱如图66所示。数据显示存在3个蛋白质峰，可能代表αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的单体和二聚体或其它不同形式。

为了测定αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的纯度和蛋白质分子量，通过标准的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法在还原条件下分析从抗组织因子亲和柱纯化的αCD3scFv/TF/αCD28scFv蛋白质样本。凝胶用InstantBlue染色约30分钟且用纯化水脱色过夜。图67显示使用抗组织因子亲和柱纯化的αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的SDS凝胶。结果显示，纯化的αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽在还原的SDS凝胶中具有预期分子量(72kDa)。

实例54.αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的功能表征

基于ELISAd方法证实了αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的形成。使用捕捉抗体、抗人组织因子抗体(I43)和检测抗体抗TF抗体，使用抗TF抗体(I43)/抗TF抗体特异性ELISA检测αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽(图68)。将相似浓度的纯化的组织因子蛋白用作对照。

进行进一步的体外实验，以确定αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽是否能够激活人周边血液单核细胞(PBMC)。从血库获得新鲜人白细胞，并且使用密度梯度Histopaque(西格马)分离周边血液单核细胞(PBMC)。对细胞进行计数，并且以0.2×10

进行另一实验，其中对使用Histopaque(西格玛)从血液分离的PBMC进行计数，并且以0.2×10

实例55.示例性多链嵌合多肽的构建和其特性评估

产生两种多链嵌合多肽并且评估其特性。两种多链嵌合多肽中的每一种均包括第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括与第一靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第一结构域共价连接的可溶性组织因子结构域。两种多链嵌合多肽中的每一种中的第二嵌合多肽包括一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域。

多链嵌合多肽的逻辑基础构建的描述

组织因子(TF)是一种稳定的跨膜蛋白，含有236个氨基酸残基。组织因子的截短的重组219个氨基酸的细胞外结构域是可溶的，并且已知在细菌或哺乳动物细胞中以高水平表达。在不希望受特定理论束缚的情况下，申请人推测219-aa组织因子可以用作产生独特多链嵌合多肽的连接接头。

由在发酵液中生长的CHO-K1细胞以高水平产生包括可溶性组织因子结构域的第一嵌合多肽。通过在固体基质上偶联的抗组织因子单克隆抗体(mAb)纯化这些第一嵌合多肽。值得注意的是，组织因子含有FVIIa和FX的结合位点。当组织因子未锚定到磷脂双层时，组织因子-FVIIa复合物对FX的催化活性低约100万倍。因此，在不希望受特定理论束缚的情况下，申请人推测在第一嵌合多肽的构建中使用不跨膜的组织因子的219-aa细胞外结构域可以消除第一嵌合多肽中组织因子的促凝活性。为了进一步降低或消除219-aa组织因子的促凝活性，可以在组织因子中进行选择突变，具体来说在已知有助于FVIIa结合位点结合能的七个氨基酸残基上进行。

所描述的嵌合多肽的结合相互作用的表征

为了确定第一和第二嵌合多肽是否彼此结合以形成多链嵌合多肽，进行体外结合分析。为了确定包含可溶性组织因子结构域的第一嵌合多肽是否由抗TF mAb识别并结合，进行体外结合分析。值得注意的是，数据表明突变组织因子蛋白仍由已知与组织因子上的FX结合位点结合的抗TF mAb识别并选择性结合。为了确定包含与scFv或细胞因子共价连接的可溶性组织因子结构域的第一嵌合多肽(参见图72和图73)是否具有功能性scFv或细胞因子，进行体外结合分析。来自前述分析的数据与具有预期生物活性的纯化的第一嵌合多肽一致(例如，scFv选择性结合预期靶抗原或细胞因子选择性结合预期受体或结合蛋白)。

另外，使用包括彼此结合的第一和第二嵌合多肽的两种多链嵌合多肽进行的实验证明预期靶标结合活性(例如，多链嵌合多肽特异性结合到由第一靶标结合结构域特异性识别的靶标和由第二靶标结合结构域特异性识别的靶标)。

基于前述结果，申请人得出结论，可溶性组织因子连接接头提供或实现了编码scFv、白介素、细胞因子、白介素受体或细胞因子受体的多肽在三维空间中相对于可溶性组织因子结构域并且相对于彼此的适当呈现，使得各自保留预期生物特性(和活性)。

当第一和第二嵌合多肽两者被共表达时，异二聚复合物以高水平分泌到发酵液中。捕获复合物并且使用亲和色谱通过结合到固体基质的抗TF mAb容易地纯化。如通过体外结合分析所分析，这些多链嵌合多肽的第一和第二靶标结合结构域保留其预期生物活性。因此，多链嵌合多肽的组装提供适用于生物活性的结构域的空间呈现和折叠。重要的是，多链嵌合多肽的空间布置不干扰组织因子上的FX结合位点，这使得能够使用抗TF mAb进行亲和纯化。

所描述的嵌合多肽的稳定性的表征

预期两种纯化的多链嵌合多肽均为稳定的。这些多链嵌合多肽在人血清中在37℃下培育72小时时具有结构完整性并预期具有完全生物活性。

所描述的嵌合多肽聚集倾向的表征

预期两种纯化的多链嵌合多肽在4℃下存储在PBS中时均不形成聚集体。

所描述的嵌合多肽的粘度表征

预期包括多链嵌合多肽的组合物在以高达50mg/mL的浓度调配于PBS中时不具有任何粘度问题。

多链嵌合多肽平台用于选择性结合临床上相关靶标的论述

我们的研究数据显示，我们的平台技术可以用于产生呈如上文所论述的任何型式的可以与来源于抗体的靶标结合结构域融合的分子、粘附分子、受体、细胞因子、趋化因子等。在适当的靶标结合结构域的情况下，所得多链嵌合多肽可以促进各种免疫效应细胞的结合并且介导包括癌细胞、病毒感染细胞或衰老细胞的靶细胞的破坏。多链嵌合多肽中的其它结构域刺激、激活并吸引免疫系统，以增强效应细胞对靶细胞的细胞毒性。

实例56：IL-7/IL-15RαSu DNA构建体的产生

在非限制性实例中，产生IL-7/IL-15RαSu DNA构建体(参见图72)。人IL-7序列、人IL-15RαSu序列、人IL-15序列和人组织因子219序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。制备DNA构建体，将IL-7序列连接到IL-15RαSu序列。最终的IL-7/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。

编码IL-7/IL-15RαSu构建体的第二嵌合多肽(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:140)：

(信号肽)

ATGGGAGTGAAAGTTCTTTTTGCCCTTATTTGTATTGCTGTGGCCGAGGCC

(人IL-7)

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGCATTAGA

IL-7/IL-15RαSu构建体的第二嵌合多肽(包括信号肽序列)如下(SEQ ID NO:139)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIH

DTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

实例57：IL-21/TF/IL-15DNA构建体的产生

在非限制性实例中，通过将IL-21序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-21/TF构建体与IL-15的N端编码区连接，制备IL-21/TF/IL-15构建体(参见图73)。

由金唯智合成的编码IL-21/TF/IL-15构建体的第一嵌合多肽(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:129)：

(信号肽)

ATGGGAGTGAAAGTTCTTTTTGCCCTTATTTGTATTGCTGTGGCCGAGGCC

(人IL-21片段)

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC

(人组织因子219)

TCAGGCACTACAAATACTGTGGCAGCATATAATTTAACTTGGAAATCAACTAATTTCAAGACAATTTTGGAGTGGGAACCCAAACCCGTCAATCAAGTCTACACTGTTCAAATAAGCACTAAGTCAGGAGATTGGAAAAGCAAATGCTTTTACACAACAGACACAGAGTGTGACCTCACCGACGAGATTGTGAAGGATGTGAAGCAGACGTACTTGGCACGGGTCTTCTCCTACCCGGCAGGGAATGTGGAGAGCACCGGTTCTGCTGGGGAGCCTCTGTATGAGAACTCCCCAGAGTTCACACCTTACCTGGAGACAAACCTCGGACAGCCAACAATTCAGAGTTTTGAACAGGTGGGAACAAAAGTGAATGTGACCGTAGAAGATGAACGGACTTTAGTCAGAAGGAACAACACTTTCCTAAGCCTCCGGGATGTTTTTGGCAAGGACTTAATTTATACACTTTATTATTGGAAATCTTCAAGTTCAGGAAAGAAAACAGCCAAAACAAACACTAATGAGTTTTTGATTGATGTGGATAAAGGAGAAAACTACTGTTTCAGTGTTCAAGCAGTGATTCCCTCCCGAACAGTTAACCGGAAGAGTACAGACAGCCCGGTAGAGTGTATGGGCCAGGAGAAAGGGGAATTCAGAGAA

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

包括前导序列的IL-21/TF/IL-15构建体的第一嵌合多肽是SEQ ID NO:128：

(信号肽)

MGVKVLFALICIAVAEA

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

实例58：IL-7/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将IL-7/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(如以引用方式并入本文的Hughes,《人基因疗法》16:457-72,2005所描述)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性IL-21/TF/IL-15:IL-7/IL-15RαSu蛋白复合物(称为21t15-7s，参见图74和75)。使用抗TF抗体亲和色谱和尺寸排阻色谱从CHO-K1细胞培养上清液中纯化21t15-7s蛋白，得到由IL-7/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15融合蛋白组成的可溶性(非聚集)蛋白复合物。

在一些情况下，将前导(信号序列)肽从完整的多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

实例59：通过免疫亲和色谱纯化21t15-7s

将抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团

21t15-7s的细胞培养收获物用1M Tris碱调节到pH 7.4，并且加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集280nm处的吸光度，并且然后通过添加1M Tris碱将样本中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的

每次洗脱后，接着使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用10个柱体积的PBS、0.05％叠氮化钠中和所述柱，并且存储在2-8℃下。

实例60：TGF-βRII/IL-15RαSu DNA构建体的产生

在非限制性实例中，产生TGF-βRII/IL-15RαSu DNA构建体(参见图76)。人TGF-βRII序列、人IL-15RαSu序列、人IL-15序列和人组织因子219序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。制备DNA构建体，将TGF-βRII序列(由接头分隔)连接到IL-15RαSu序列。最终的TGF-βRII/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。

实例61：IL-21/TF/IL-15DNA构建体的产生

在非限制性实例中，通过将IL-21序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-21/TF构建体与IL-15的N端编码区连接，制备IL-21/TF/IL-15构建体(参见图77)。

实例62：TGF-βRII/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将TGF-βRII/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(如以引用方式并入本文的Hughes,《人基因疗法》16:457-72,2005所描述)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性IL-21/TF/IL-15:TGF-βRII/IL-15RαSu蛋白复合物(称为21t15-TGFRs，参见图78和79)。使用抗TF抗体亲和色谱和尺寸排阻色谱从CHO-K1细胞培养上清液中纯化21t15-TGFRs蛋白，得到由TGF-βRII/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15融合蛋白组成的可溶性(非聚集)蛋白复合物。

实例63：尺寸排阻色谱

将通用电气医疗集团

实例64：21t15-7s和21t15-TGFRs的SDS-PAGE

为了测定纯度和蛋白质分子量，使用4-12％NuPage Bis-Tris蛋白质凝胶SDS-PAGE分析纯化的21t15-7s或21t15-TGFRs蛋白质样本。凝胶将用InstantBlue

实例65：CHO-K1细胞中21t15-7s和21t15-TGFRs的糖基化

根据制造商的说明书，使用蛋白质去糖基化混合物II试剂盒(新英格兰生物实验室)证实CHO-K1细胞中21t15-7s的糖基化或CHO-K1细胞中21t15-TGFRs的糖基化。

实例66：21t15-7s和21t15-TGFRs复合物的重组蛋白定量

使用标准夹心ELISA方法检测并定量21t15-7s复合物或21t15-TGFRs复合物。抗人组织因子抗体(IgG1)充当捕获抗体，并且生物素化抗人IL-21、IL-15或IL-7抗体(21t15-7s)或生物素化抗人IL-21、IL-15或TGF-βRII抗体(21t15-TGFRs)充当检测抗体。使用抗人组织因子捕获抗体和抗人组织因子抗体(IgG1)检测抗体检测纯化的21t15-7s或21t15-TGFRs蛋白复合物中的组织因子。将抗TF ELISA与相似浓度下的纯化的组织因子进行比较。

实例67：IL-21/IL-15RαSu DNA构建体的产生

在非限制性实例中，产生IL-21/IL-15RαSu DNA构建体。人IL-21序列和人IL-15RαSu序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。制备DNA构建体，将IL-21序列连接到IL-15RαSu序列。最终的IL-21/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。参见图80。

实例68：IL-7/TF/IL-15DNA构建体的产生

在非限制性实例中，通过将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-7/TF构建体与IL-15的N端编码区连接来制备IL-7/TF/IL-15构建体。参见图81。

实例69：IL-21/IL-15Rα寿司DNA构建体的产生

在非限制性实例中，产生IL-21/IL-15RαSu的第二嵌合多肽。人IL-21和人IL-15Rα寿司序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。制备DNA构建体，将IL-21序列连接到IL-15Rα寿司序列。最终的IL-21/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。

由金唯智合成的编码IL-21/IL-15RαSu结构域的第二嵌合多肽(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:148)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

IL-21/IL-15Rα寿司结构域的第二嵌合多肽(包括前导序列)如下(SEQ ID NO:147)：

(信号序列)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

实例70：IL-7/TF/IL-15DNA构建体的产生

在非限制性实例中，通过将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-7/TF构建体与IL-15的N端编码区连接来制备IL-7/TF/IL-15的示例性第一嵌合多肽。由金唯智合成的编码IL-7/TF/IL-15的第一嵌合多肽(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:144)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-7片段)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

IL-7/TF/IL-15的第一嵌合多肽(包括前导序列)如下(SEQ ID NO:143)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

实例71：IL-21/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将IL-21/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(如以引用方式并入本文的Hughes,《人基因疗法》16:457-72,2005所描述)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu蛋白复合物(称为7t15-21s)。使用抗TF抗体(IgG1)亲和色谱和尺寸排阻色谱从CHO-K1细胞培养上清液中纯化7t15-21s蛋白，得到由IL-21/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15融合蛋白组成的可溶性(非聚集)蛋白复合物。参见图82和83。

实例72：IL-21/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的分析型尺寸排阻色谱(SEC)分析

为了确定抗组织因子单克隆抗体和7t15-21s是否可以形成抗体-融合体-分子复合物，进行分析型尺寸排阻色谱(SEC)。将Superdex 200Increase 10/300GL凝胶过滤柱(来自通用电气医疗集团)连接到AKTA Avant系统(来自通用电气医疗集团)。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.7mL/min。抗TF mAb(1mg/mL)、7t15-21s(1mg/mL)和以1:1比混合的混合物的样本，因此每种蛋白质的最终浓度为0.5mg/mL)处于PBS中。使用毛细管环将每个样本注入Superdex 200柱，并且通过SEC进行分析。每个样本的SEC纯化洗脱色谱如图84所示。SEC结果表明7t15-21s有两个蛋白峰，可能代表7t15-21s的二聚体(表观分子量为199.2kDa)和更高的低聚物，并且抗TF mAb有一个峰(表观分子量为206.8kDa)。但是，如所预期，在含有抗TF mAb和7t15-21s的混合物样本中形成了更高分子量的新蛋白质峰(表观分子量为576.9kDa)，表明抗TF mAb和7t15-21s通过抗TF mAb与融合蛋白复合物中的TF结合形成抗体-抗原复合物。

实例73：7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体的原代自然杀手(NK)细胞的扩增能力

为了评定7t15-21s复合物扩增原代自然杀手(NK)细胞的能力，将7t15-21s复合物和7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体添加到从新鲜人白细胞样本获得的NK细胞中。在37℃和5％CO

实例74：7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体激活扩增的NK细胞

用7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体过夜刺激纯化的NK细胞后，离体诱导原代NK细胞。从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>80％，并且通过用CD56-BV421和CD16-BV510特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以1×10

实例75：7t15-16s21融合蛋白产生和表征

产生融合蛋白复合物，其包含抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21和IL-7/TF/IL-15融合蛋白。人IL-7和IL-21序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制备构建体，将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。参见图85和86。

以下显示包含IL-7连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

IL-7/TF/IL-15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

IL-7/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将人CD16scFv序列连接到IL-15RαSu链的N端编码区，接着连接到由金唯智合成的IL-21的N端编码区来制备构建体。以下显示包含抗CD16scFv连接到IL-15RαSu链的N端，后接IL-21的N端编码区的构建体的核酸和蛋白质序列。

抗CD16SscFv/IL-15RαSu/IL-21构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

((抗人CD16scFv)

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(抗人CD16scFv)

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

将抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21和IL-7/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如先前所描述(Hughes MS、Yu YY、Dudley ME、Zheng Z、Robbins PF、Li Y等人.《来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能(Transfer of a TCR gene derived from a patient with a marked antitumorresponse conveys highly active T-cell effector functions)》.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21蛋白复合物(称为7t15-16s21)，其可以通过基于抗TF抗体的亲和与其它色谱方法纯化。

7t15-16s21与表达人CD16b的CHO细胞结合

用pMC质粒中的人CD16b转染CHO细胞，并且用10μg/mL杀稻瘟菌素选择10天。将稳定表达CD16b的CHO细胞用1.2μg/mL的7t15-16s21(含有抗人CD16 scFv)或18t15-12s(不含抗人CD16 scFv)染色作为阴性对照，并且然后用生物素化抗人组织因子和PE结合的抗生蛋白链菌素染色。如图87A所示，仅有含有7t15-16s21的抗人CD16scFv使细胞染色。如图87B所示，18t15-12s没有使表达人CD16b的CHO细胞染色。

使用ELISA检测7t15-16s21中的IL-15、IL-21和IL-7

96孔板用100μL(8μg/mL)含有抗TF抗体的R5(涂布缓冲液)涂布并且在室温(RT)下培育2小时。洗涤板3次，并且用100μL含有1％BSA的PBS阻断。将7t15-16s21的连续稀释液(以1:3的比)添加到孔中，并且在RT下培育60min。洗涤3次后，将50ng/mL的生物素化抗IL15抗体(BAM247，安迪生物公司)、500ng/mL的生物素化抗IL-21抗体(13-7218-81，安迪生物公司)或500ng/mL的生物素化抗IL-7抗体(506602，安迪生物公司)添加到孔中并且在RT下培育60min。将板洗涤3次，并且与0.25μg/mL的HRP-SA(Jackson ImmunoResearch)以每孔100μL在RT下培育30min，接着洗涤4次并与100μl的ABTS在RT下培育2min。在405nm处读取吸光度。如图88A到88C所示，通过个别抗体检测7t15-16s21中的IL-15、IL-21和IL-7结构域。

7t15-16s21中的IL-15促进含IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

为了分析7t15-16s21中IL-15的活性，使用表达IL2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞，将7t15-16s21的IL-15活性与重组IL-15进行比较，并且评估其对促进细胞增殖的作用。将IL-15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10

来自抗TF亲和柱的7t15-16s21的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的7t15-16s21加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF亲和柱上。然后用5个柱体积的PBS洗涤所述柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样本缓冲交换到PBS中。图90是显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有7t15-16s21蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。如图90所示，抗TF抗体亲和柱结合含有TF的7t15-16s21。将缓冲交换的蛋白质样本存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

7t15-16s21的分析型尺寸排阻色谱(SEC)分析

为了对7t15-16s21进行尺寸排阻色谱(SEC)分析，使用与AKTA Avant系统(通用电气医疗集团)连接的Superdex 200Increase 10/300GL凝胶过滤柱(通用电气医疗集团)。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.7mL/min。使用毛细管环将含有7t15-16s21于PBS中的样本注入Superdex 200柱，并且通过SEC进行分析。如图91所示，SEC结果显示7t15-16s21有两个蛋白质峰。

实例76：TGFRt15-16s21融合蛋白的产生和表征

产生包含抗人CD16scFv/IL-15RαSu/IL21和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图92和93)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219和IL-15序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制备构建体，将两个TGFβ受体II序列与G4S(3)接头连接以产生TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

两个TGFβ受体II/TF/IL-15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(两个人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将抗人CD16scFv序列连接到IL-15RαSu链的N端编码区，接着连接到由金唯智合成的IL-21的N端编码区来制备构建体。以下显示包含抗人CD16scFv连接到IL-15RαSu的N端，后接IL-21的N端编码区的构建体的核酸和蛋白质序列。

抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(抗人CD16scFv)

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(抗人CD16scFv)

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

将抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如先前所描述(Hughes MS、Yu YY、Dudley ME、Zheng Z、Robbins PF、Li Y等人.《来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21蛋白复合物(称为TGFRt15-16s21)，其可以通过基于抗TF抗体的亲和与其它色谱方法纯化。

TGFRt15-16s21与表达人CD16b的CHO细胞之间的相互作用

用pMC质粒中的人CD16b转染CHO细胞，并且用10μg/mL杀稻瘟菌素选择10天。将稳定表达CD16b的细胞用1.2μg/mL的TGFRt15-16s21(含有抗人CD16 scFv)或7t15-21s(不含抗人CD16 scFv)染色作为阴性对照，并且然后用生物素化抗人组织因子和PE结合的抗生蛋白链菌素染色。如图94A和94B所示，含有抗人CD16scFv的TGFRt15-16s21显示正结合，而7t15-21s不显示结合。

TGFRt15-16s21对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响

为了评估TGFRt15-16s21中TGFβRII的活性，分析TGFRt15-16s21对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响。将HEK-Blue TGFβ细胞(Invivogen)用预温热的PBS洗涤两次，并且以5×10

TGFRt15-16s21中的IL-15促进含IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

为了分析TGFRt15-16s21中IL-15的活性，使用表达IL2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞将TGFRt15-16s21的IL-15活性与重组IL-15进行比较，并且评估其对促进细胞增殖的作用。将IL-15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10

使用ELISA检测TGFRt15-16s21中的IL-15、IL-21和TGFβRII

96孔板用100μL(8μg/mL)含有抗TF抗体的R5(涂布缓冲液)涂布并且在室温(RT)下培育2小时。洗涤板3次，并且用100μL含有1％BSA的PBS阻断。添加以1:3的比连续稀释的TGFRt15-16s21，并且在RT下培育60min。洗涤三次后，每孔施加50ng/mL的生物素化抗IL-15抗体(BAM247，安迪生物公司)、500ng/mL的生物素化抗IL-21抗体(13-7218-81，安迪生物公司)或200ng/mL的生物素化抗TGFβRII抗体(BAF241，安迪生物公司)，并且在RT下培育60min。洗涤三次后，以每孔100μL与0.25μg/mL的HRP-SA(Jackson ImmunoResearch)在RT下培育30min，接着洗涤4次，并且与100μL的ABTS在RT下培育2min。在405nm处读取吸光度。如图97A到97C所示，通过个别抗体检测TGFRt15-16s21中的IL-15、IL-21和TGFβRII结构域。

使用抗TF抗体亲和柱的TGFRt15-16s21的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的TGFRt15-16s21加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤所述柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样本缓冲交换到PBS中。如图14所示，抗TF抗体亲和柱结合到含有组织因子作为融合搭配物的TGFRt15-16s21。将缓冲交换的蛋白质样本存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

TGFRt15-16s21的还原SDS-PAGE

为了测定TGFRt15-16s21蛋白的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)分析用抗TF抗体亲和柱纯化的蛋白质样本(图98)。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30min，接着在纯化水中脱色过夜。

为了验证TGFRt15-16s21蛋白在CHO细胞中翻译后经历糖基化，根据制造商的说明书，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质去糖基化混合物II试剂盒进行去糖基化实验。图99显示未去糖基化(红色轮廓的泳道1)和去糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态下样本的还原SDS-PAGE分析的结果。结果显示，当在CHO细胞中表达时，TGFRt15-16s21蛋白被糖基化。去糖基化后，纯化的样本在还原SDS凝胶中显示预期的分子量(69kDa和48kDa)。泳道M加载有10μL SeeBlue Plus2预染标准液。

实例77：7t15-7s融合蛋白的产生和表征

产生包含IL-7/TF/IL-15和IL-7/IL-15RαSu融合蛋白的融合蛋白复合物。人IL-7、组织因子219和IL-15序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制备构建体，将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含IL-7连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将IL-7序列连接到由金唯智合成的IL-15RαSu链的N端编码区来制备构建体。以下显示包含IL-7连接到IL-15RαSu链的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

7s构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

7s融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

将IL-7/TF/IL-15和IL-7/IL-15RαSu构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如先前所描述(Hughes MS、Yu YY、Dudley ME、Zheng Z、Robbins PF、Li Y等人.《来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:IL-7/IL-15RαSu蛋白复合物(称为7t15-7s)，其可以通过抗TF抗体亲和与其它色谱方法纯化。参见图100和101。

使用抗TF抗体亲和柱的7t15-7s的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的7t15-7s加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样本缓冲交换到PBS中。如图102所示，抗TF抗体亲和柱结合到含有组织因子(TF)作为融合配偶体的7t15-7s。将缓冲交换的蛋白质样本存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

C57BL/6小鼠中7t15-7s的免疫刺激

7t15-7s是多链多肽(本文描述的A型多链多肽)，包括第一多肽(7t15)和第二多肽(7s)，所述第一多肽是人IL-7、人组织因子219片段和人IL-15的可溶性融合体，所述第二多肽是人IL-7和人IL-15受体α链的寿司结构域的可溶性融合体。

CHO细胞用IL7-TF-IL15(7t15)和IL7-IL15Ra寿司结构域(7s)载体共转染。从转染的CHO细胞培养上清液中纯化7t15-7s复合物。通过ELISA在复合物中证明IL-7、IL-15和组织因子(TF)组分，如图103所示。将人源化抗TF单克隆抗体用作捕获抗体来确定7t15-7s中的TF，并且将生物素化抗人IL-15抗体(安迪生物公司)和生物素化抗人IL-7抗体(安迪生物公司)用作检测抗体，分别检测7t15-7s中的IL-15和IL-7，之后使用过氧化物酶结合的链霉亲和素(杰克逊免疫研究实验室(Jackson ImmunoResearch Lab))和ABTS底物(SurmodicsIVD,Inc.)。将7t15-7s以10mg/kg皮下注射到C57BL/6小鼠中，以确定7t15-7s的体内免疫刺激活性。将用PBS皮下处理的C57BL/6小鼠用作对照。在处理后第4天收集小鼠脾脏并称重。制备单份的脾细胞悬浮液，并且用荧光染料结合的抗CD4、抗CD8和抗NK1.1抗体染色，并通过流式细胞术分析CD4

实例78：TGFRt15-TGFRs融合蛋白产生和表征

产生包含TGFβ受体II/IL-15RαSu和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219和IL-15序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制备构建体，将两个TGFβ受体II序列与G4S(3)接头连接以产生TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

两个TGFβ受体II/TF/IL-15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(两个人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到由金唯智合成的IL-15RαSu链来制备构建体。以下显示包含TGFβ受体II连接到IL-15RαSu的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFβ受体II/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(两个人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

两种TGFβ受体II/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(两个人TGFβ受体II细胞外结构域)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

将TGFβR/IL-15RαSu和TGFβR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如先前所描述(Hughes MS、Yu YY、Dudley ME、Zheng Z、Robbins PF、Li Y等人.《来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性TGFβR/TF/IL-15:TGFβR/IL-15RαSu蛋白复合物(称为TGFRt15-TGFRs)，其可以通过抗TF抗体亲和与其它色谱方法纯化。参见图105和106。

TGFRt15-TGFRs对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响

为了评估TGFRt15-TGFRs中TGFβRII的活性，分析TGFRt15-16s21对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响。将HEK-Blue TGFβ细胞(Invivogen)用预温热的PBS洗涤两次，并且以5×10

TGFRt15-TGFRs中的IL-15促进含IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

为了评估TGFRt15-TGFRs中IL-15的活性，使用表达IL2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞将TGFRt15-TGFRs的IL-15活性与重组IL-15进行比较，并且评估其对促进细胞增殖的作用。将IL-15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10

使用ELISA用对应抗体检测TGFRt15-TGFRs中的IL-15和TGFβRII结构域

96孔板用100μL(8μg/mL)含有抗TF抗体的R5(涂布缓冲液)涂布并且在室温(RT)下培育2小时。洗涤板3次，并且用100μL含有1％BSA的PBS阻断。TGFRt15-TGFRs以1:3连续稀释添加，并且在RT下培育60min。洗涤3次后，将50ng/mL的生物素化抗IL-15抗体(BAM247，安迪生物公司)或200ng/mL的生物素化抗TGFβRII抗体(BAF241，安迪生物公司)添加到孔中并且在RT下培育60min。接着将板洗涤3次，并且以每孔100μL添加0.25μg/mL的HRP-SA(杰克逊免疫研究)，并且在RT下培育30min，接着洗涤4次并与100μL的ABTS在RT下培育2min。读取405nm处的吸光度。如图109A和109B所示，通过个别抗体检测TGFRt15-TGFRs中的IL-15和TGFβRII结构域。

来自抗TF抗体亲和柱的TGFRt15-TGFRs的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的TGFRt15-TGFRs加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样本缓冲交换到PBS中。如图110所示，抗TF抗体亲和柱结合到含有TF作为融合配偶体的TGFRt15-TGFRs。将缓冲交换的蛋白质样本存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

TGFRt15-TGFRs的分析型尺寸排阻色谱(SEC)分析

将Superdex 200Increase 10/300GL凝胶过滤柱(来自通用电气医疗集团)连接到AKTA Avant系统(来自通用电气医疗集团)。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.7mL/min。使用毛细管环将含有TGFRt15-TGFRs于PBS中的样本注入Superdex 200柱，并且通过SEC分析。样本的SEC纯化洗脱色谱如图111所示。SEC结果显示TGFRt15-TGFRs的四个蛋白质峰。

TGFRt15-TGFRs的还原SDS-PAGE分析

为了测定TGFRt15-TGFRs蛋白的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法分析用抗TF抗体亲和柱纯化的蛋白质样本。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30min，接着在纯化水中脱色过夜。

为了验证TGFRt15-TGFRs蛋白在CHO细胞中翻译后经历糖基化，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质去糖基化混合物II试剂盒和制造商的说明书进行去糖基化实验。图112显示未去糖基化(红色轮廓的泳道1)和去糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态的样本的还原SDS-PAGE分析。结果显示，当在CHO细胞中表达时，TGFRt15-TGFRs蛋白被糖基化。去糖基化后，纯化的样本在还原SDS凝胶中显示预期的分子量(69kDa和39kDa)。泳道M加载有10ulSeeBlue Plus2预染标准液。

TGFRt15-TGFRs在C57BL/6小鼠中的免疫刺激活性

TGFRt15-TGFRs是多链多肽(本文描述的A型多链多肽)，包括第一多肽和第二多肽，所述第一多肽是两个TGFβRII结构域人组织因子219片段和人IL-15的可溶性融合体，所述第二多肽是两个TGFβRII结构域和人IL-15受体α链的寿司结构域的可溶性融合体。

将野生型C57BL/6小鼠用对照溶液或0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg或10mg/kgTGFRt15-TGFRs皮下处理。处理后四天，评估脾脏重量和脾脏中存在的各种免疫细胞类型的百分比。如图113A所示，用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量随TGFRt15-TGFRs剂量的增加而增加。此外，分别用1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量比用对照溶液处理的小鼠高。另外，评估在对照物处理和TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏中存在的CD4

在野生型C57BL/6小鼠中评估TGFRt15-TGFRs分子的药代动力学。用3mg/kg剂量的TGFRt15-TGFRs皮下处理小鼠。在各个时间点从尾静脉排出小鼠血液，并且制备血清。用ELISA测定小鼠血清中的TGFRt15-TGFRs浓度(捕获：抗人组织因子抗体；检测：生物素化抗人TGFβ受体抗体，之后使用过氧化物酶结合的链霉亲和素和ABTS底物)。结果显示，TGFRt15-TGFRs在C57BL/6小鼠中的半衰期为12.66小时。

制备小鼠脾细胞以便评估随时间推移TGFRt15-TGFRs在小鼠中的免疫刺激活性。如图114A所示，用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量在处理后48小时增加，并且随时间持续增加。另外，评估在对照物处理和TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏中存在的CD4

此外，在单剂量(3mg/kg)的TGFRt15-TGFRs后从小鼠分离的脾细胞中，评估基于脾细胞Ki67表达的免疫细胞的动态增殖和基于颗粒酶B表达的细胞毒性潜力。如图115A和115B所示，在用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠脾脏中，NK细胞的Ki67和颗粒酶B的表达在处理后24小时增加，并且CD8

还评估来自用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。用CellTrace紫罗兰标小鼠莫洛尼氏(Moloney)白血病细胞(Yac-1)，并且将其用作肿瘤靶细胞。在处理后的各个时间点，由TGFRt15-TGFRs(3mg/kg)处理的小鼠脾脏制备脾细胞，并且将其用作效应细胞。将靶细胞与效应细胞以E:T比＝10:1混合，并且在37℃下培育20小时。通过使用流式细胞术分析碘化丙啶阳性、紫罗兰标记的Yac-1细胞来评定靶细胞活力。使用以下公式计算Yac-1肿瘤抑制的百分比：(1-[实验样本中的Yac-1活细胞数]/[不含脾细胞的样本中的Yac-1活细胞数])×100。如图116所示，来自TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾细胞对Yac-1细胞的细胞毒性比对照小鼠脾细胞强。

响应于化疗和/或TGFRt15-TGFRs的肿瘤尺寸分析

将胰腺癌细胞(SW1990，

体外衰老B16F10黑色素瘤模型

接着，评估激活的小鼠NK细胞在体外杀死衰老B16F10黑色素瘤细胞。用CellTrace紫罗兰标记B16F10衰老细胞(B16F10-SNC)细胞，并且与不同E:T比的体外2t2激活的小鼠NK细胞(从用TGFRt15-TGFRs 10mg/kg注射4天的C57BL/6小鼠脾脏中分离)一起培育16小时。将细胞用胰蛋白酶处理，洗涤并再悬浮于含有碘化丙啶(PI)溶液的完全培养基中。通过流式细胞术评定细胞毒性(图118)。

TGFRt15-TGFRs在黑色素瘤小鼠模型中的体内功效

接着，使用含有TGFRt15-TGFRs的组合治疗评估TGFRt15-TGFRs在黑色素瘤小鼠模型中的体内功效。图119A显示处理方案的示意图。向C57BL/6小鼠皮下注射0.5×10

实例79：7t15-21s137L(长版)融合蛋白产生和表征

产生包含IL-21/IL-15RαSu/CD137L和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物。具体来说，制备构建体，将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。以下显示包含IL-7连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

以下显示21s137L的核酸和蛋白质序列。21s137L构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137L)

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA

21s137L融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137L)

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

将IL-21/IL-15RαSu/CD137L和IL-7/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如先前所描述(Hughes MS、Yu YY、Dudley ME、Zheng Z、Robbins PF、Li Y等人.《来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu/CD137L蛋白复合物(称为7t15-21s137L)，其可以通过抗TF抗体亲和与其它色谱方法纯化。

使用抗TF抗体亲和柱的7t15-21s137L的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的7t15-21s137L(图120和121)加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样本缓冲交换到PBS中。如图122所示，抗TF抗体亲和柱结合到含有TF作为融合配偶体的7t15-21s137L。将缓冲交换的蛋白质样本存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTAAvant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。图123显示7t15-21s137L的分析型SEC图。

实例80：7t15-21s137L(短版)融合蛋白产生和表征

产生包含IL-21/IL-15RαSu/CD137L和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物。具体来说，制备构建体，将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。以下显示包含IL-7连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

以下显示21s137L(短版)的核酸和蛋白质序列。21s137L(短版)构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137配体短版)

GATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC

21s137L(短版)构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137配体短版)

DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI

将IL-21/IL-15RαSu/CD137L(短版)和IL-7/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如先前所描述(Hughes MS、Yu YY、Dudley ME、Zheng Z、Robbins PF、Li Y等人.《来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu/CD137L蛋白复合物(称为7t15-21s137L(短版))，其可以通过抗TF抗体亲和与其它色谱方法纯化。

7t15-21s137L(短版)与CD137(4.1BB)的结合

在第1天，用100μL(2.5μg/mL)含有GAH IgG Fc(G-102-C，安迪生物科技公司)的R5(涂布缓冲液)或仅R5涂布96孔板且在4℃下培育过夜。在第2天，将板洗涤三次，并且在37℃下用300μL含1％BSA的PBS阻断2小时。以100μL/孔添加10ng/mL的4.1BB/Fc(838-4B，安迪生物公司)，并且在RT下培育2小时。洗涤三次后，将7t15-21s137L或7t15-21s以1/3的比(从10nM开始)连续稀释，并且在4℃下培育过夜。在第3天，在3次洗涤后，以每孔100μL添加300ng/mL的生物素化抗hTF抗体(BAF2339，安迪生物公司)，并且在RT下培育2小时。然后将板洗涤三次，并且与0.25μg/mL的HRP-SA(杰克逊免疫研究)以每孔100μL培育30min，接着洗涤3次并与100μL的ABTS在RT下培育2min。在405nm处读取吸光度。如图124所示，与7t15-21s相比，7t15-21s137L(短版)显示与4.1BB/Fc的显著相互作用(蓝线)。

用ELISA检测7t15-21s137L(短版)中的IL-15、IL-21和IL-7

96孔板用100μL(8μg/mL)含有抗TF抗体的R5(涂布缓冲液)涂布并且在RT下培育2小时。洗涤板3次，并且用100μL含有1％BSA的PBS阻断。添加以1:3的比连续稀释的7t15-21s137L(短版)，并且在RT下培育60min。洗涤三次后，将50ng/mL的生物素化抗IL15抗体(BAM247，安迪生物公司)、500ng/mL的生物素化抗IL21抗体(13-7218-81，安迪生物公司)或500ng/mL的生物素化抗IL7抗体(506602，安迪生物公司)添加到孔中，并且在RT下培育60min。洗涤三次并且与0.25μg/mL的HRP-SA(杰克逊免疫研究)以每孔100μL在RT下培育30min，接着洗涤四次，并且与100μL的ABTS在RT下培育2min。在405nm处读取吸光度。如图125A到125C所示，通过个别抗体检测7t15-21s137L(短版)中的IL-15、IL-21和IL-7结构域。

7t15-1s137L(短版)中的IL-15促进含IL2Rαβγ的CTLL2细胞增殖

为了评估7t15-21s137L(短版)中IL-15的活性，在促进表达IL2Rαβγ的CTLL2细胞增殖方面将7t15-21s137L(短版)与重组IL15进行比较。将IL-15依赖性CTLL2细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10

7t15-1s137L(短版)中的IL-21促进含IL21R的B9细胞增殖

为了评估7t15-21s137L(短版)的IL-21活性，在促进表达IL-21R的B9细胞增殖方面将7t15-21s137L(短版)与重组IL-21进行比较。将含有IL-21R的B9细胞用RPMI-10％FBS洗涤5次，并且以1×10

实例86：7t15-TGFRs融合蛋白产生和表征

产生包含TGFβ受体II/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图128和129)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219、IL-15和IL-7序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制备构建体，将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。以下显示包含IL-7连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到由金唯智合成的IL-15RαSu链来制备构建体。以下显示包含TGFβ受体II连接到IL-15RαSu的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRs构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

TGFRs融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

7t15-TGFRs对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响

为了评估7t15-TGFRs中TGFβR的活性，分析7t15-TGFRs对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响。将HEK-Blue TGFβ细胞(Invivogen)用预温热的PBS洗涤两次，并且以5×10

用ELISA检测7t15-TGFRs中的IL-15、TGFβRII和IL-7

96孔板用100μL(8μg/mL)含有抗TF抗体的R5(涂布缓冲液)涂布并且在室温(RT)下培育2小时。洗涤板三次，并且用100μL含有1％BSA的PBS阻断。添加7t15-TGFRs的连续稀释液(1:3的比)，并且在RT下培育60min。洗涤3次后，添加50ng/mL的生物素化抗IL-15抗体(BAM247，安迪生物公司)、200ng/mL的生物素化抗TGFbRII抗体(BAF241，安迪生物公司)或500ng/mL的生物素化抗IL-7抗体(506602，安迪生物公司)并在RT下培育60min。洗涤三次后，与0.25μg/mL的HRP-SA(杰克逊免疫研究)以每孔100μL在RT下培育进行30min，接着洗涤4次，并且与100μL ABTS在RT下培育2min。在405nm处读取吸光度。如图131A到131C所示，通过个别抗体检测7t15-TGFRs中的IL-15、TGFR和IL-7。

7t15-TGFRs中的IL-15促进含IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

为了评估7t15-TGFRs中IL-15的活性，使用表达IL2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞，将7t15-TGFRs与重组IL-15进行比较，并且评估其对促进细胞增殖的作用。将IL-15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10

使用抗TF抗体亲和柱的7t15-TGFRs的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的7t15-TGFRs加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样本缓冲交换到PBS中。如图133所示，抗TF抗体亲和柱可以结合到含有TF作为7t15-TGFRs的融合搭配物的7t15-TGFRs。将缓冲交换的蛋白质样本存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

7t15-TGFRs的还原SDS-PAGE分析

为了测定蛋白质的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法分析用抗TF抗体亲和柱纯化的7t15-TGFRs蛋白质样本。电泳后，凝胶用InstantBlue染色约30min，之后在纯化水中脱色过夜。为了验证7t15-TGFRs蛋白在CHO细胞中翻译后经历糖基化，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质去糖基化混合物II试剂盒和制造商的说明书进行去糖基化实验。图134显示未去糖基化(红色轮廓的泳道1)和去糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态的样本的还原SDS-PAGE分析。这些结果显示所述蛋白在CHO细胞中表达时被糖基化。去糖基化后，纯化的样本在还原SDS凝胶中显示预期的分子量(55kDa和39kDa)。泳道M加载有10ul SeeBlue Plus2预染标准液。

7t15-TGFRs的表征

7t15-TGFRs是多链多肽(本文描述的A型多链多肽)，包括第一多肽和第二多肽，所述第一多肽是人IL-7、人组织因子219片段和人IL-15的可溶性融合体(7t15)，所述第二多肽是单链的两个TGFβRII结构域和人IL-15受体α链的寿司结构域的可溶性融合体(TGFRs)。

CHO细胞用7t15和TGFRs载体共转染。从转染的CHO细胞培养上清液中纯化7t15-TGFRs复合物。如图135所示，通过ELISA证明复合物中的IL-7、IL-15、TGFβ受体和组织因子(TF)组分。使用人源化抗TF单克隆抗体作为捕获抗体来确定7t15-TGFRs中的TF，并且使用针对人IL-15抗体(安迪生物公司)、人IL-7(Biolegend)、抗-TGFβ受体(安迪生物公司)的生物素化抗体作为检测抗体，以分别确定7t15-TGFRs中的IL-7、IL-15和TGFβ受体。然后使用过氧化物酶结合的链霉亲和素(杰克逊免疫研究实验室)和ABTS底物(Surmodics IVD，Inc.)以检测结合的生物素化抗体。通过ELISA分析结果(图135)。

C57BL/6小鼠中7t15-TGFRs的体内表征

为了确定体内7t15-TGFRs的免疫刺激活性，将C57BL/6小鼠用对照溶液(PBS)或7t15-TGFRs以0.3、1、3和10mg/kg进行皮下处理。使经过处理的小鼠安乐死。在处理后第4天收集小鼠脾脏并称重。制备单份脾细胞悬浮液，并且用荧光染料结合的抗CD4、抗CD8和抗NK1.1抗体染色，并且通过流式细胞术分析CD4

CD4+和CD8+T细胞的CD44表达

已知IL-15诱导T细胞上的CD44表达和记忆T细胞的发育。评定在7t15-TGFRs处理的小鼠中CD4

此外，还评估在小鼠单剂量处理后，7t15-TGFRs诱导的脾细胞基于Ki67表达的免疫细胞的动态增殖，和脾细胞基于颗粒酶B表达的细胞毒性潜力。用7t15-TGFRs以3mg/kg皮下处理C57BL/6小鼠。使经过处理的小鼠安乐死并制备脾细胞。制备的脾细胞用荧光染料结合的抗CD4、抗CD8和抗-NK1.1(NK)抗体针对免疫细胞亚群进行染色，并且然后用抗Ki67抗体针对细胞增殖进行细胞内染色，并且用抗颗粒酶B抗体针对细胞毒性标记进行细胞内染色。通过流式细胞术分析对应免疫细胞亚群的Ki67和颗粒酶B的平均荧光强度(MFI)。如图138A和138B所示，在用7t15-TGFRs处理的小鼠的脾脏中，与PBS对照物处理相比，CD8

另外，还评估小鼠脾细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。将小鼠Yac-1细胞用CellTrace紫罗兰标记，并且用作肿瘤靶细胞。从7t15-TGFRs处理的小鼠制备脾细胞，并且将其用作效应细胞。将靶细胞与效应细胞以E:T比＝10:1在RPMI-10培养基中在具有或不具有100nM的7t15-TGFRs的情况下混合，并且在37℃下培育20小时。通过使用流式细胞术分析紫罗兰标记的活Yac-1细胞来评定靶标Yac-1细胞抑制。使用以下公式计算Yac-1抑制的百分比：(1-实验样本中的Yac-1活细胞数/不含脾细胞的样本中的Yac-1活细胞数)×100。如图139所示，7t15-TGFRs处理的小鼠脾细胞对Yac-1细胞的细胞毒性强于对照小鼠脾细胞，并且在细胞毒性分析过程中添加7t15-TGFRs进一步增强脾细胞对Yac-1靶细胞的细胞毒性。

实例81：TGFRt15-21s137L融合蛋白产生和表征

产生包含IL-21/IL-15RαSu/CD137L和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219和IL-15序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制备构建体，将两个TGFβ受体II序列连接到G4S(3)接头以产生TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

TGFRt15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFRt15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

以下显示21s137L的核酸和蛋白质序列。21s137L构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137L)

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA

21s137L融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137L)

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

将IL-21/IL-15RαSu/CD137L和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如先前所描述(Hughes MS、Yu YY、Dudley ME、Zheng Z、Robbins PF、Li Y等人.《来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu/CD137L蛋白复合物(称为TGFRt15-21s137L)，其可以通过抗TF抗体亲和与其它色谱方法纯化。参见图140和141。

使用抗TF抗体亲和柱的TGFRt15-21s137L的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的TGFRt15-21s137L加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样本缓冲交换到PBS中。如图142所示，抗TF抗体亲和柱结合到含有TF作为TGFRt15-21s137L的融合配偶体的TGFRt15-21s137L。将缓冲交换的蛋白质样本存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

实例82：TGFRt15-TGFRs21融合蛋白产生和表征

产生包含TGFβ受体II/IL-15RαSu/IL-21和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219、IL-21和IL-15序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制备构建体，将两个TGFβ受体II序列与G4S(3)接头连接以产生TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRt15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFRt15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到IL-15RαSu链，接着连接到由金唯智合成的IL-21的N端编码区来制备构建体。以下显示包含TGFβ受体II连接到IL-15RαSu的N端，后接IL-21的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRs21构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

TGFRs21融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

将TGFR/IL-15RαSu/IL-21和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如前所述(Hughes MS、Yu YY、Dudley ME、Zheng Z、Robbins PF、Li Y等人.《来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:TGFR/IL-15RαSu/IL-21蛋白复合物(称为TGFRt15-TGFRs21)，其可以通过抗TF抗体亲和与其它色谱方法纯化。参见图143和144。

使用抗TF抗体亲和柱的TGFRt15-TGFRs21的纯化洗脱色谱

从细胞培养物中收获的TGFRt15-TGFRs21被加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样本缓冲交换到PBS中。如图145所示，抗TF抗体亲和柱结合到含有TF作为融合配偶体的TGFRt15-TGFRs21。将缓冲交换的蛋白质样本存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

TGFRt15-TGFRs21的还原SDS-PAGE分析

为了测定蛋白质的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法分析用抗TF抗体亲和柱纯化的TGFRt15-TGFRs21蛋白样本。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30min，接着在纯化水中脱色过夜。

为了验证TGFRt15-TGFRs21蛋白质在CHO细胞中翻译后经历糖基化，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质去糖基化混合物II试剂盒和制造商的说明书进行去糖基化实验。图146显示未去糖基化(红色轮廓的泳道1)和去糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态的样本的还原SDS-PAGE分析。清楚的是，蛋白质在CHO细胞中表达时被糖基化。去糖基化后，纯化的样本在还原SDS凝胶中显示预期的分子量(69kDa和55kDa)。泳道M加载有10ul SeeBlue Plus2预染标准液。

TGFRt15-TGFRs21在C57BL/6小鼠中的免疫刺激

TGFRt15-TGFRs21是多链多肽(本文描述的A型多链多肽)，包括第一多肽和第二多肽，所述第一多肽是单链的两个TGFβRII结构域、人组织因子219片段和人IL-15的可溶性融合体(TGFRt15)，所述第二多肽是单链的两个TGFβRII结构域、人IL-15受体α链的寿司结构域和人IL-21的可溶性融合体(TGFRs21)。

CHO细胞用TGFRt15和TGFRs21载体共转染。从转染的CHO细胞培养上清液中纯化TGFRt15-TGFRs21复合物。如图147A和147B所示，通过ELISA证明复合物中的TGFβ受体、IL-15、IL-21和组织因子(TF)组分。使用人源化抗TF单克隆抗体作为捕获抗体以确定TGFRt15-TGFRs21中的TF，使用生物素化抗人IL-15抗体(安迪生物公司)、生物素化抗人TGFβ受体抗体(安迪生物公司)和生物素化抗人IL-21抗体(安迪生物公司)作为检测抗体以分别确定TGFRt15-TGFRs21中的IL-15、TGFβ受体和IL-21。为了检测，使用过氧化物酶结合的链霉亲和素(杰克逊免疫研究实验室)和ABTS。

用对照溶液(PBS)或TGFRt15-TGFRs21以3mg/kg皮下处理野生型C57BL/6小鼠。处理后四天，评估脾脏重量和脾脏中存在的各种免疫细胞类型的百分比。如图148A所示，评估在对照物处理和TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠的脾脏中存在的CD4

如图148A所示，在用TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠的脾脏中，在单次TGFRt15-TGFRs21处理后第4天，CD8

另外，还评估小鼠脾细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。将小鼠Yac-1细胞用CellTrace紫罗兰标记，并且用作肿瘤靶细胞。从TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠制备脾细胞，并且将其用作效应细胞。将靶细胞与效应细胞以E:T比＝10:1在RPMI-10培养基中在具有或不具有100nM的TGFRt15-TGFRs21的情况下混合，并且在37℃下培育24小时。通过使用流式细胞术分析紫罗兰标记的活Yac-1细胞来评定靶标Yac-1细胞抑制。使用以下公式计算Yac-1抑制的百分比：(1-[实验样本中Yac-1活细胞数]/[不含脾细胞的样本中Yac-1活细胞数])×100。如图150所示，在细胞毒性分析期间，在存在TGFRt15-TGFRs21的情况下，TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠脾细胞对Yac-1细胞的细胞毒性强于对照小鼠细胞(图150的图例所示)。

实例83：TGFRt15-TGFRs16融合蛋白产生

产生包含TGFβ受体II/IL-15RαSu/抗CD16scFv和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(参见图151和152)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219和IL-15序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制备构建体，将两个TGFβ受体II序列与G4S(3)接头连接以产生TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRt15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFRt15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到IL-15RαSu链，接着连接到由金唯智合成的抗CD16scFv序列来制备构建体。以下显示包含TGFβ受体II连接到IL-15RαSu的N端，后接抗CD16scFv序列的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRs16构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(抗人CD16scFv)

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG

TGFRs16融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(抗人CD16scFv)

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

将TGFR/IL-15RαSu/抗CD16scFv和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如前所述(Hughes MS、Yu YY、Dudley ME、Zheng Z、Robbins PF、Li Y等人.《来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:TGFR/IL-15RαSu/抗CD16scFv蛋白复合物(称为TGFRt15-TGFRs16)，其可以通过抗TF抗体亲和与其它色谱方法纯化。

实例84：TGFRt15-TGFRs137L融合蛋白产生

产生包含TGFβ受体II/IL-15RαSu/CD137L和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(参见图153和154)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219、CD137L和IL-15序列是从UniProt网站获得的，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制备构建体，将两个TGFβ受体II序列与G4S(3)接头连接以产生TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRt15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFRt15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到IL-15RαSu链，接着连接到(G4S)3接头和由金唯智合成的CD137L序列来制备构建体。以下显示包含TGFβ受体II连接到IL-15RαSu的N端，后接(G4S)3接头和CD137L序列的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRs137L构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137L)

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA

TGFRs137L融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137L)

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

将TGFR/IL-15RαSu/CD137L和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如先前所描述(Hughes MS、Yu YY、Dudley ME、Zheng Z、Robbins PF、Li Y等人.《来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:TGFR/IL-15RαSu/CD137L蛋白复合物(称为TGFRt15-TGFRs137L)，其可以通过抗TF抗体亲和与其它色谱方法纯化。

实例85.示例性单链嵌合多肽2t2的产生和表征

产生示例性单链嵌合多肽(IL-2/TF/IL-2，或2t2)(图155)，其包括结合到IL-2受体的第一靶标结合结构域、可溶性人组织因子结构域和结合到IL-2受体的第二靶标结合结构域。这种单链嵌合多肽的核酸和氨基酸序列如下文所示。

编码示例性单链嵌合多肽(IL-2/TF/IL-2)的核酸(SEQ ID NO:109)

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(第一IL-2片段)

GCCCCCACCTCCTCCTCCACCAAGAAGACCCAGCTGCAGCTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTAAACGGCATCAACAACTACAAGAACCCCAAGCTGACTCGTATGCTGACCTTCAAGTTCTACATGCCCAAGAAGGCCACCGAGCTGAAGCATTTACAGTGTTTAGAGGAGGAGCTGAAGCCCCTCGAGGAGGTGCTGAATTTAGCCCAGTCCAAGAATTTCCATTTAAGGCCCCGGGATTTAATCAGCAACATCAACGTGATCGTTTTAGAGCTGAAGGGCTCCGAGACCACCTTCATGTGCGAGTACGCCGACGAGACCGCCACCATCGTGGAGTTTTTAAATCGTTGGATCACCTTCTGCCAGTCCATCATCTCCACTTTAACC

(人组织因子219形式)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(第二IL-2片段)

GCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCTACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAATTAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTTTTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAGAAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGCAAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTAATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATATGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTACCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTAACT

示例性单链嵌合多肽(IL-2/TF/IL-2)(SEQ ID NO:108)

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-2)

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-2)

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT

将编码IL-2/TF/IL-2的核酸克隆到经过修饰的逆转录病毒表达载体中，如先前所描述(Hughes等人,《人基因疗法》16:457-72,2005)。将编码IL-2/TF/IL-2的表达载体转染到CHO-K1细胞中。表达载体在CHO-K1细胞中的表达使得分泌可溶性IL-2/TF/IL-2单链嵌合多肽(称为2t2)，其可以通过抗TF抗体亲和与其它色谱方法来纯化。

IL-2和2t2以相似方式促进含有IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

为了评估2t2的IL-2活性，在促进表达IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞的增殖方面对2t2与重组IL-2进行比较。IL-2依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10

相较于IL-2，2t2显示促进含有IL-2Rαβγ的CTLL-2细胞增殖的能力改善

为了评估2t2的IL-2活性，在促进表达IL-2Rα、IL-2Rβ和共同γ链的CTLL-2细胞的增殖方面对2t2与重组IL-2进行比较。IL-2依赖性CTLL-2细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10

2t2抑制ApoE

向六周龄雌性ApoE

2t2使血液淋巴细胞中的CD4

向六周龄雌性ApoE

来自抗TF抗体亲和柱的2t2的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的2t2加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样本缓冲交换到PBS中。如图160所示，抗TF抗体亲和柱结合到含有TF作为融合结构域的2t2。将缓冲交换的蛋白质样本存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

2t2的分析型尺寸排阻色谱(SEC)分析

为了使用分析型尺寸排阻色谱(SEC)分析2t2，将Superdex 200Increase 10/300GL凝胶过滤柱(来自通用电气医疗集团)连接到AKTA Avant系统(来自通用电气医疗集团)。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.7mL/min。使用毛细管环将含有2t2于PBS中的样本注入Superdex 200柱，并且通过SEC分析。样本的SEC色谱如图161所示。SEC结果表明2t2有两个蛋白质峰。

2t2的还原SDS-PAGE

为了测定蛋白质的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法分析用抗TF抗体亲和柱纯化的2t2蛋白质样本。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30min，接着在纯化水中脱色过夜。

为了验证2t2蛋白在CHO细胞中翻译后经历糖基化，根据制造商说明书使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质去糖基化混合物II试剂盒进行去糖基化实验。图162A和162B显示未去糖基化(红色轮廓的泳道1)和去糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态的样本的还原SDS-PAGE分析。结果显示，2t2蛋白在CHO细胞中表达时被糖基化。去糖基化后，纯化的样本在还原SDS凝胶中以预期分子量(56kDa)运行。泳道M加载有10μL SeeBlue Plus2预染标准液。

2t2的体内表征

将2t2以各种剂量皮下注射到C57BL/6小鼠中，以确定2t2的体内免疫刺激活性。用对照溶液(PBS)或0.1、0.4、2和10mg/kg的2t2皮下处理小鼠。在处理后第3天使经过处理的小鼠安乐死。在处理后第3天收集小鼠脾脏并称重。制备单份的脾细胞悬浮液，并且制备的脾细胞针对CD4

已知IL-2上调免疫细胞的CD25表达。我们因此获知2t2处理的小鼠中的CD4

还研究了C57BL/6小鼠中2t2的药代动力学。将2t2以1mg/kg皮下注射到C57BL/6小鼠中。在如图165所示的多个时间点从小鼠尾静脉抽血，并且制备血清。用ELISA测定2t2浓度(捕获：抗组织因子抗体；检测：生物素化抗人IL-2抗体，之后使用SA-HRP和ABTS底物)。2t2的半衰期是1.83小时，用PK Solutions 2.0(Summit Research Services)计算。

2t2减少ApoE

向六周龄雌性ApoE

2t2抑制2型糖尿病的进展

对雄性BKS.Cg-Dock7

2t2在第一次注射后使血液淋巴细胞中的CD4

对雄性BKS.Cg-Dock7

实例86.示例性单链嵌合多肽15t15的产生和表征

产生第二示例性单链嵌合多肽(IL-15/TF/IL-15或15t15)(图169)，其包括结合到IL-15受体的第一靶标结合结构域、可溶性人组织因子结构域和结合到IL-15受体的第二靶标结合结构域。这种单链嵌合多肽的核酸和氨基酸序列如下文所示。

编码示例性单链嵌合多肽(IL-15/TF/IL-15)的核酸(SEQ ID NO:115)

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(第一IL-15片段)

AACTGGGTGAACGTGATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAGGATTTAATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACTCTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTAGCTGCAAGGTGACTGCCATGAAGTGCTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGCGATGCCAGCATCCACGACACTGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAACAACTCTTTAAGCAGCAACGGCAACGTGACAGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTTTACAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACTAGC

(人组织因子219形式)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(第二IL-15片段)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

示例性单链嵌合多肽(IL-15/TF/IL-15)(SEQ ID NO:114)

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

将编码IL-15/TF/IL-15的核酸克隆到经过修饰的逆转录病毒表达载体中，如先前所描述(Hughes等人,《人基因疗法》16:457-72,2005)。将编码IL-15/TF/IL-15的表达载体转染到CHO-K1细胞中。表达载体在CHO-K1细胞中的表达使得分泌可溶性IL-15/TF/IL-15单链嵌合多肽(称为15t15)，其可以通过抗TF抗体亲和与其它色谱方法来纯化。

15t15促进含有IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

在表达IL2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞中对15t15的IL-15活性与重组IL-15进行比较。IL-15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤五次，并且以2×10

来自抗TF抗体亲和柱的15t15的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的15t15加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样本后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30kDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样本缓冲交换到PBS中。如图171所示，抗TF抗体亲和柱结合到含有TF作为融合结构域的15t15。将缓冲交换的蛋白质样本存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

15t15的还原SDS-PAGE

为了测定蛋白质的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法分析用抗TF抗体亲和柱纯化的15t15蛋白质样本。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30min，接着在纯化水中脱色过夜。

为了验证15t15蛋白在CHO细胞中翻译后经历糖基化，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质去糖基化混合物II试剂盒和制造商说明书进行去糖基化实验。图172A和172B显示未去糖基化(红色轮廓的泳道1)和去糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态的样本的还原SDS-PAGE分析。结果显示，15t15蛋白在CHO细胞中表达时被糖基化。去糖基化后，纯化的样本在还原SDS凝胶中以预期分子量(50kDa)运行。泳道M加载有10μL SeeBlue Plus2预染标准液。

实例87：由多链嵌合多肽构建体单独或与抗抗体组合而体外刺激NK细胞

进行一组实验，以评定NK细胞在用18t15-12s、18t15-12s16和7t15-21s+抗TF抗体刺激后的表面表型的变化。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56

进行一组实验，以评定用18t15-12s、18t15-12s16和7t15-21s刺激后淋巴细胞群体的表面表型的变化。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞。用Ficoll-PAQUE Plus(通用电气医疗集团)密度梯度培养基分离外周血淋巴细胞。对细胞进行计数，并且以0.2×10

实施例88：7t15-21s和抗TF抗体体外诱导NK细胞增殖

进行一组实验，以确定7t15-21s或7t15-21s+抗TF抗体的组合对免疫细胞增殖的影响。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56

进行一组实验，以确定用7t15-21s+抗TF抗体的组合处理之后的NK增殖。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56

进行一组实验，以确定用7t15-21s+抗TF抗体处理之后扩增的NK细胞的细胞表面表型变化。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56

实例89：体内诱导免疫细胞增殖

进行一组实验，以确定用7t15-21s、TGFRt15-TGFRs和2t2处理之后，7t15-21s+抗TF抗体使NSG小鼠中的NK细胞扩增的作用。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56

实例90：用多链构建体+抗TF抗体处理后NK介导的细胞毒性

进行一组实验，以确定7t15-21s+抗TF抗体扩增的NK细胞有效杀死化学诱导的衰老人成纤维细胞。在这些实验中，将人肺成纤维细胞(IMR-90和WI-38)用阿霉素(0.8霱)处理48小时。将细胞静置48小时，然后再次用阿霉素(0.8霱)处理48小时。更换含阿霉素的培养基，并且将细胞在培养基中静置7天。图179A显示证实衰老诱导的β半乳糖苷酶染色。如下扩增从健康供体分离的NK细胞：用7t15-21s(100nM)和抗TF抗体(50nM)处理NK细胞15天。每2天后，将细胞以2×10

进行一组实验，以评定7t15-21s+抗TF抗体扩增的NK细胞有效杀死UV诱导的衰老人成纤维细胞。在这些实验中，使人包皮成纤维细胞(HFF)在48孔板(0.1×10

为了评定UV诱导的衰老人成纤维细胞的杀死，如下扩增从健康供体分离的NK细胞：用7t15-21s(100nM)和抗TF抗体(50nM)处理NK细胞15天。每2天后，将细胞以2×10

实例91：体外激活和增殖NK细胞

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56

用以下分子刺激细胞5天：7t15-21s(100nM)、7t15-21s(100nM)+抗TF抗体(IgG1Ab，50nM)或7t15-21s(100nM)+抗TF抗体(IgG4 Ab，50nM)。每2天后，将细胞以2×10

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56

实例92：患有癌症的受试者的治疗

将Daudi肿瘤细胞(人伯基特氏淋巴瘤)(ATCC)培养在完全培养基(RPMI 1640(Gibco)，补充有2mM L-谷氨酰胺(Thermo Life Technologies)、青霉素(Thermo LifeTechnologies)、链霉素(Thermo Life Technologies)和10％FBS(Hyclone))中。将Daudi细胞在温热的HBSS缓冲液(Hyclone)中、在室温下以1000RPM洗涤三次，每次10分钟。将细胞再悬浮于10×10

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56

将7t15-21s+抗TF抗体(IgG1)扩增的NK细胞在温热的HBSS缓冲液(Hyclone)中、在室温下以1000RPM洗涤三次，每次10分钟。在第10天将NK细胞再悬浮于10×10

实例93：改善纹理和/或外形和/或毛发

从第0天起，用普通饮食(在图184A中显示为“CD”)或西方饮食(在图184B-E中显示为“WD”)喂养ApoE

实例94：用单链或多链嵌合多肽处理后的组织因子凝血分析

在用单链或多链嵌合多肽处理后，进行一组实验以评定凝血。为了引发凝血级联路径，组织因子(TF)结合到因子VIIa(FVIIa)以形成TF/FVIIa复合物。然后，TF/FVIIa复合物结合因子X(FX)，并且将FX转化为FXa。

因子VIIa(FVIIa)活性分析

一种测量凝血的分析涉及测量因子VIIa(FVIIa)活性。这类分析需要组织因子和钙的存在。TF/FVIIa复合物活性可以通过小的底物或天然蛋白质底物，例如因子X(FX)进行测量。当FX用作底物时，磷脂也是TF/FVIIa活性所需的。在这一分析中，用FVIIa特异性发色底物S-2288(Diapharma，俄亥俄州西切斯特(West Chester,OH))确定FVIIa活性。S-2288底物的颜色变化可以通过分光光度法测量，并且与FVIIa(例如，TF/FVIIa复合物)的蛋白水解活性成比例。

在这些实验中，比较以下组的FVIIa活性：组织因子结构域的219个氨基酸的细胞外结构域(TF

为了评定FVIIa的活性，将FVIIa和TF

表1FVIIa活性

WT：野生型TF

表2.FVIIa活性

WT：野生型TF

因子X(FX)激活分析

测量凝血的另一分析涉及测量因子X(FX)的激活。简单来说，在钙和磷脂的存在下，TF/VIIa将凝血因子X(FX)激活为因子Xa(FXa)。与不含跨膜结构域的TF

在这些实验中，将多链嵌合多肽(18t15-12s、小鼠(m)21t15、21t15-TGFRs和21t15-7s)的FX激活与阳性对照(因诺维)或TF

凝血酶原时间测试

测量凝血的第三种分析是凝血酶原时间(PT)测试，其测量凝血活性。此处，PT测试使用市售正常人血浆(Ci-Trol凝血对照，I级)进行。对于标准PT测试，在钙的存在下，通过添加脂化重组人TF

如图186所示，将不同量的因诺维(例如，用纯化水重构，等效于10nM脂化重组人TF

在另一实验中，对TF

还进行研究以评估在存在携带多链嵌合多肽的细胞因子组分的受体的其它细胞(32Dβ或人PBMC)存在下，培育多链嵌合多肽是否会影响PT分析中的凝血时间。为了检查表达IL-15受体的细胞(32Dβ细胞)或表达IL-15和IL-21受体的细胞(PBMC)是否会结合含IL-15的多链嵌合多肽以模拟天然TF作为细胞FVIIa受体，将含TF

实例95：7t15-21s137L(长版)的表征

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:144)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:143)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

21s137L构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:172)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137L)

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA

21s137L融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:171)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137L)

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE

进行以下实验以评估7t15-21s137L中的CD137L部分是否完整以结合到CD137(4.1BB)。在第1天，用100μL(2.5μg/mL)含有GAH IgG Fc(G-102-C，安迪生物公司)的R5(涂布缓冲液)涂布96孔板过夜。在第2天，将板洗涤三次，并且在37℃下用300μL含1％BSA的PBS阻断2小时。在室温下以100μl/孔添加10ng/ml的4.1BB/Fc(838-4B，安迪生物公司)，历时2小时。洗涤三次后，以10nM开始添加7t15-21s137L(长版)或7t15-21s137Ls(短版)，或以1/3稀释度从180ng/mL开始添加重组人4.1BBL，接着在4℃下培育过夜。在第3天，将板洗涤三次，并且以每孔100μL施加500ng/mL的生物素化山羊抗人4.1BBL(BAF2295，安迪生物公司)，接着在RT下培育2小时。将板洗涤三次，并且以每孔100μL与0.25μg/mL HRP-SA(杰克逊免疫研究)一起培育30min。然后将板洗涤三次，并且与100μL ABTS在RT下培育2min。在405nm处读取结果。如图190所示，与重组人4.1BB配体(rhCD137L，浅灰色星形)相比，7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)均可以与4.1BB/Fc(深色菱形和灰色方块)相互作用。与7t15-21s137L(短版)(灰色方块)相比，7t15-21s137L(长版)(深色菱形)与4.1BB/Fc更好地相互作用。

进行以下实验以评估7t15-21s137L(长版)中的组分IL7、IL21、IL15和4.1BBL是否完整，以使用ELISA通过个别抗体检测。96孔板用100μL(4μg/mL)含有抗TF(人IgG1)的R5(涂布缓冲液)涂布并且在RT下培育2小时。洗涤板3次，并且用100μL含有1％BSA的PBS阻断。以10nM起始并且以1/3稀释度添加纯化的7t15-21s137L(长版)，接着在RT下培育60min。将板洗涤三次，并且每孔添加500ng/mL生物素化抗IL7(506602，安迪生物公司)、500ng/mL生物化抗IL21(13-7218-81，安迪生物公司)、50ng/mL生物素化抗IL15(BAM247，安迪生物公司)或500ng/ml生物素化山羊抗人4.1BBL(BAF2295，安迪生物公司)并在室温下培育60min。将板洗涤三次并在RT下以每孔100μL与0.25μg/mL的HRP-SA(杰克逊免疫研究)培育30min。将板洗涤四次，并且与100μL ABTS在室温下培育2min。在405nm处读取吸光度结果。如图191A到191D所示，通过个别抗体检测到7t15-21s137L(长版)中的组分，包括IL7、IL21、IL15和4.1BBL。

进行以下实验以评估7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)中IL15的活性。将7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)促进表达IL2Rαβγ的CTLL2细胞增殖的能力与重组IL15进行比较。将IL15依赖性CTLL2细胞用IMDM-10％FBS洗涤五次，并且以2×10

实例96：2t2诱导Treg细胞

通过Ficoll Paque Plus(GE17144003)从5mL全血血沉棕黄层分离健康供体(供体163)的周边血液单核细胞(PBMC)。然后用ACK溶解PBMC以去除红血球。用IMDM-10％FBS洗涤细胞并进行计数。将1.8×10

实例97：将免疫细胞分化成记忆样免疫细胞

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56

将处理组的未扩增NK细胞用作完全DNA甲基化水平的阳性对照(数据未显示)。使NK细胞沉淀(1×10

这两个IFNγCpG位点的DNA甲基化状态的分析揭示，与未暴露的NK细胞相比，由7t15-21s+抗TF抗体支持的NK细胞中的DNA去甲基化水平更高(图194)。这些7t15-21s+抗TF抗体支持的NK细胞展现与未暴露的NK细胞相差47.70％±11.76的DNA甲基化(即去甲基化)。这两个IFNγCpG位点的DNA甲基化水平与用7t15-21s+抗TF抗体处理后的IFNγ表达增加相关。这些数据表明，NK细胞的长期暴露(培养扩增14天)联合7t15-21s+抗TF抗体的组合方案能够诱导两个低甲基化IFNγCpG位点(-186和-54)的DNA去甲基化，并且7t15-21s+抗TF抗体(IgG1)能够通过CpG位点的DNA去甲基化以表观遗传方式对IFNγ的基因表达进行再编程，从而使得NK细胞相互转化为先天性免疫记忆NK细胞。

其它实施例

应理解，虽然已经结合其具体描述对本发明进行了描述，但前面的描述旨在说明而非限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求书的范围限定。其它方面、优点以及修改都处于以下权利要求书的范围内。

示例性实施例

实施例A1.一种单链嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)可溶性组织因子结构域；和

(iii)第二靶标结合结构域。

实施例A2.根据实施例A1所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域彼此直接邻接。

实施例A3.根据实施例A1所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例A4.根据实施例A1到A3所述的单链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。

实施例A5.根据实施例A1到A3中的任一例所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在可溶性组织因子结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例A6.根据实施例A1所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。

实施例A7.根据实施例A1所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在第一靶标结合结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例A8.根据实施例A6或A7的单链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域彼此直接邻接。

实施例A9.根据实施例A6或A7所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在第二靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例A10.根据实施例A1到A9中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。

实施例A11.根据实施例A10所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例A12.根据实施例A11所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例A13.根据实施例A1到A9中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例A14.根据实施例A1到A13中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。

实施例A15.根据实施例A14所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例A16.根据实施例A13所述的单链嵌合多肽，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例A17.根据实施例A1到A16中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-D的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例A18.根据实施例A1到A16中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例A19.根据实施例A18所述的单链嵌合多肽，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-D、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例A20.根据实施例A1到A16中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。

实施例A21.根据实施例A20所述的单链嵌合多肽，其中可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例A22.根据实施例A1到A21中任一例所述的单链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例A23.根据实施例A22所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例A24.根据实施例A23所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例A25.根据实施例A24所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例A26.根据实施例A22到A25中任一例所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例A27.根据实施例A26所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例A28.根据实施例A1到A27中任一例所述的单链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不能够结合因子VIIa。

实施例A29.根据实施例A1到A28中任一例所述的单链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。

实施例A30.根据实施例A1到A29中任一例所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

实施例A31.根据实施例A1到A30中任一例所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还在其N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例A32.根据实施例A31所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽在其N端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例A33.根据实施例A32所述的单链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域。

实施例A34.根据实施例A33所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例A35.根据实施例A31所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽在其C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例A36.根据实施例A35所述的单链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域。

实施例A37.根据实施例A35所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例A38.根据实施例A31所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽在其N端和C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例A39.根据实施例A38所述的单链嵌合多肽，其中在N端的一个或多个其它抗原结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域。

实施例A40.根据实施例A38所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在N端的一个或多个其它抗原结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例A41.根据实施例A38所述的单链嵌合多肽，其中在C端的一个或多个其它抗原结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域。

实施例A42.根据实施例A38所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在C端的一个或多个其它抗原结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例A43.根据实施例A31到A42中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例A44.根据实施例A43所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例A45.根据实施例A44所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例A46.根据实施例A43所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各特异性结合到相同的抗原。

实施例A47.根据实施例A46所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各特异性结合到相同的表位。

实施例A48.根据实施例A47所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各包含相同的氨基酸序列。

实施例A49.根据实施例A31到A42中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例A50.根据实施例A31到A49中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。

实施例A51.根据实施例A50所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例A52.根据实施例A51所述的单链嵌合多肽，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例A53.根据实施例A31到A52中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-D的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例A54.根据实施例A31到A52中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例A55.根据实施例A54所述的单链嵌合多肽，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-D、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例A56.根据实施例A31到A52中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。

实施例A57.根据实施例A56所述的单链嵌合多肽，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

实施例A58.根据实施例A1到A57中任一例所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还在其N端包含信号序列。

实施例A59.根据实施例A1到A58中任一例所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含位于单链嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例A60.一种组合物，其包含根据实施例A1到A59所述的任一种单链嵌合多肽。

实施例A61.根据实施例A60所述的组合物，其中组合物是药物组合物。

实施例A62.一种试剂盒，其包含至少一个剂量的根据实施例A60或A61所述的组合物。

实施例A63.一种核酸，其编码根据实施例A1到A59中任一例所述的任一种单链嵌合多肽。

实施例A64.一种载体，其包含根据实施例A63所述的核酸。

实施例A65.根据实施例A64所述的载体，其中载体是表达载体。

实施例A66.一种细胞，其包含根据实施例A63所述的核酸或根据实施例A64或A65所述的载体。

实施例A67.一种产生单链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起产生单链嵌合多肽的条件下在培养基中培养根据实施例A66所述的细胞；和

从细胞和/或培养基回收单链嵌合多肽。

实施例A68.一种单链嵌合多肽，其通过根据实施例A67所述的方法产生。

实施例A69.根据实施例A26所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少80％相同的序列。

实施例A70.根据实施例A69所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少90％相同的序列。

实施例A71.根据实施例A70所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少95％相同的序列。

实施例A72.根据实施例A71所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5 100％相同的序列。

实施例A73.根据实施例A26所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少80％相同的序列。

实施例A74.根据实施例A73所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少90％相同的序列。

实施例A75.根据实施例A74所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少95％相同的序列。

实施例A76.根据实施例A75所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6 100％相同的序列。

实施例B1.一种单链嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)可溶性组织因子结构域；和

(iii)第二靶标结合结构域，

其中：

第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各特异性结合到IL-2受体；或

第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各特异性结合到IL-15受体。

实施例B2.根据实施例B1的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域彼此直接邻接。

实施例B3.根据实施例B1所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例B4.根据实施例B1到B3所述的单链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。

实施例B5.根据实施例B1到B3中的任一例所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在可溶性组织因子结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例B6.根据实施例B1所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。

实施例B7.根据实施例B1所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在第一靶标结合结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例B8.根据实施例B6或B7的单链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域彼此直接邻接。

实施例B9.根据实施例B6或B7所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在第二靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例B10.根据实施例B1到B9中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域都是可溶性白介素蛋白。

实施例B11.根据实施例B10所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域是可溶性IL-2蛋白。

实施例B12.根据实施例B11所述的单链嵌合多肽，其中可溶性IL-2蛋白是可溶性人IL-2蛋白。

实施例B13.根据实施例B12所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人IL-2蛋白包含SEQID NO:28。

实施例B14.根据实施例B10所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域是可溶性IL-15蛋白。

实施例B15.根据实施例B14所述的单链嵌合多肽，其中可溶性IL-15蛋白是可溶性人IL-15蛋白。

实施例B16.根据实施例B15所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人IL-15蛋白包含SEQ ID NO:39。

实施例B17.根据实施例B1到B16中任一例所述的单链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例B18.根据实施例B17所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例B19.根据实施例B18所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例B20.根据实施例B19所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例B21.根据实施例B17到B20中任一例所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例B22.根据实施例B21所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例B23.根据实施例B1到B22中任一例所述的单链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不能够结合因子VIIa。

实施例B24.根据实施例B1到B23中任一例所述的单链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。

实施例B25.根据实施例B1到B24中任一例所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

实施例B26.根据实施例B1到B25中任一例所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还在其N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例B27.根据实施例B26所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽在其N端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例B28.根据实施例B27所述的单链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域。

实施例B29.根据实施例B28所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例B30.根据实施例B26所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽在其C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例B31.根据实施例B30所述的单链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域。

实施例B32.根据实施例B30所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例B33.根据实施例B26所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽在其N端和C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例B34.根据实施例B33所述的单链嵌合多肽，其中在N端的一个或多个其它抗原结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域。

实施例B35.根据实施例B33所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在N端的一个或多个其它抗原结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例B36.根据实施例B33所述的单链嵌合多肽，其中在C端的一个或多个其它抗原结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域。

实施例B37.根据实施例B33所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含在C端的一个或多个其它抗原结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例B38.根据实施例B26到B37中任一例所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的每一个特异性结合到IL-2受体或IL-15受体。

实施例B39.根据实施例B38所述的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的每一个包含相同的氨基酸序列。

实施例B40.根据实施例B26到B37中任一例所述的单链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域是抗原结合结构域。

实施例B41.根据实施例B40所述的单链嵌合多肽，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例B42.根据实施例B26到B37、B40和B41中任一例所述的单链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、a UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例B43.根据实施例B6到B37、B40和B41中任一例所述的单链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例B44.根据实施例B43所述的单链嵌合多肽，其中可溶性白介素或细胞因子蛋白选自由以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

实施例B45.根据实施例B6到B37、B40和B41中任一例所述的单链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例B46.根据实施例B45所述的单链嵌合多肽，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)和可溶性TGF-βRIII。

实施例B47.根据实施例B1到B46中任一例所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还在其N端包含信号序列。

实施例B48.根据实施例B1到B47中任一例所述的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽还包含位于单链嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例B49.一种组合物，其包含根据实施例B1到B48所述的任一种单链嵌合多肽。

实施例B50.根据实施例B49所述的组合物，其中组合物是药物组合物。

实施例B51.一种试剂盒，其包含至少一个剂量的根据实施例B49或B50所述的组合物。

实施例B52.一种核酸，其编码根据实施例B1至B48中任一例所述的任一种单链嵌合多肽。

实施例B53.一种载体，其包含根据实施例B52所述的核酸。

实施例B54.根据实施例B53所述的载体，其中载体是表达载体。

实施例B55.一种细胞，其包含根据实施例B52所述的核酸或根据实施例B53或B54所述的载体。

实施例B56.一种产生单链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起产生单链嵌合多肽的条件下在培养基中培养根据实施例B55所述的细胞；和

从细胞和/或培养基回收单链嵌合多肽。

实施例B57.一种单链嵌合多肽，其通过根据实施例B56所述的方法产生。

实施例B58.根据实施例B21所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少80％相同的序列。

实施例B59.根据实施例B58所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少90％相同的序列。

实施例B60.根据实施例B59所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少95％相同的序列。

实施例B61.根据实施例B60所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5 100％相同的序列。

实施例B62.根据实施例B21所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少80％相同的序列。

实施例B63.根据实施例B62所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少90％相同的序列。

实施例B64.根据实施例B63所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少95％相同的序列。

实施例B65.根据实施例B64所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6 100％相同的序列。

实施例B66.根据实施例B17所述的单链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子不会引发哺乳动物的凝血。

实施例C1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)可溶性组织因子结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合。

实施例C2.根据实施例C1所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例C3.根据实施例C1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例C4.根据实施例C1到C3中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例C5.根据实施例C1到C3中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例C6.根据实施例C1到C5中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例C7.根据实施例C1到C5中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例C8.根据实施例C1到C7中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。

实施例C9.根据实施例C8所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例C10.根据实施例C9所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例C11.根据实施例C1到C7中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例C12.根据实施例C1到C11中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。

实施例C13.根据实施例C12所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例C14.根据实施例C12或C13所述的多链嵌合多肽，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例C15.根据实施例C1到C14中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例C16.根据实施例C1到C14中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例C17.根据实施例C16所述的多链嵌合多肽，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例C18.根据实施例C1到C14中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。

实施例C19.根据实施例C18所述的多链嵌合多肽，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例C20.根据实施例C1到C19中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域，其中一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例C21.根据实施例C20所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含在可溶性组织因子结构域与一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个之间的接头序列，和/或在一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例C22.根据实施例C1到C19中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例C23.根据实施例C22所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例C24.根据实施例C22所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例C25.根据实施例C22所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第一靶标结合结构域。

实施例C26.根据实施例C22所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例C27.根据实施例C22所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例C28.根据实施例C27所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例C29.根据实施例C27所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例C30.根据实施例C27所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例C31.根据实施例C27所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例C32.根据实施例C27所述的多链嵌合多肽，其中位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接可溶性组织因子结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例C33.根据实施例C27所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含如下安置的接头序列：(i)在可溶性组织因子结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间；和/或(ii)在一对亲和结构域中的第一结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例C34.根据实施例C1到C33中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例C35.根据实施例C34所述的多链嵌合多肽，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第二结构域。

实施例C36.根据实施例C34所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第二结构域之间的接头序列。

实施例C37.根据实施例C34所述的多链嵌合多肽，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第二靶标结合结构域。

实施例C38.根据实施例C34所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例C39.根据实施例C20到C38中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例C40.根据实施例C39所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例C41.根据实施例C40所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例C42.根据实施例C39所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各特异性结合到相同的抗原。

实施例C43.根据实施例C42所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各特异性结合到相同的表位。

实施例C44.根据实施例C43所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例C45.根据实施例C20到C38中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例C46.根据实施例C20到C45中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。

实施例C47.根据实施例C46所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例C48.根据实施例C47所述的多链嵌合多肽，其中抗原结合结构域包含scFv。

实施例C49.根据实施例C20到C48中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD3的受体以及CD28的受体。

实施例C50.根据实施例C20到C48中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例C51.根据实施例C50所述的多链嵌合多肽，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例C52.根据实施例C20到C48中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。

实施例C53.根据实施例C52所述的多链嵌合多肽，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

实施例C54.根据实施例C1到C53中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例C55.根据实施例C1到C53中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例C56.根据实施例C1到C55中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例C57.根据实施例C56所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例C58.根据实施例C57所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例C59.根据实施例C58所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例C60.根据实施例C56到C59中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例C61.根据实施例C60所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例C62.根据实施例C1到C61中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不能够结合到因子VIIa。

实施例C63.根据实施例C1到C62中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。

实施例C64.根据实施例C1到C63中任一例所述的多链嵌合多肽，其中多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

实施例C65.根据实施例C1到C64中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例C66.根据实施例C65所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例C67.根据实施例C65或C66所述的多链嵌合多肽，其中人IL15Rα是成熟全长IL15Rα。

实施例C68.根据实施例C1到C64中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例C69.根据实施例C1到C68中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽还在其N端包含信号序列。

实施例C70.一种组合物，其包含根据实施例C1到C69所述的任一种多链嵌合多肽。

实施例C71.根据实施例C70所述的组合物，其中组合物是药物组合物。

实施例C72.一种试剂盒，其包含至少一个剂量的根据实施例C70或C71所述的组合物。

实施例C73.一种核酸，其编码根据实施例C1到C69中任一例所述的任一种多链嵌合多肽。

实施例C74.一种载体，其包含根据实施例C73所述的核酸。

实施例C75.根据实施例C74所述的载体，其中载体是表达载体。

实施例C76.一种细胞，其包含根据实施例C73所述的核酸或根据实施例C74或C75所述的载体。

实施例C77.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起产生多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养根据实施例C76所述的细胞；和

从细胞和/或培养基回收多链嵌合多肽。

实施例C78.一种多链嵌合多肽，其通过根据实施例C77所述的方法产生。

实施例C79.根据实施例C56所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少80％相同的序列。

实施例C80.根据实施例C79所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少90％相同的序列。

实施例C81.根据实施例C80所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少95％相同的序列。

实施例C82.根据实施例C81所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5 100％相同的序列。

实施例C83.根据实施例C56所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少80％相同的序列。

实施例C84.根据实施例C83所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少90％相同的序列。

实施例C85.根据实施例C84所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少95％相同的序列。

实施例C86.根据实施例C85所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6 100％相同的序列。

实施例D1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)可溶性组织因子结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中：

第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；

第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。

实施例D2.根据实施例D1所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例D3.根据实施例D1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例D4.根据实施例D1至D3中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例D5.根据实施例D1至D3中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例D6.根据实施例D1至D5中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例D7.根据实施例D1至D5中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例D8.根据实施例D1至D7中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例D9.根据实施例D8所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例D10.根据实施例D9所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例D11.根据实施例D10所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例D12.根据实施例D8到D11中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例D13.根据实施例D12所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例D14.根据实施例D1到D13中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不能够结合到因子VIIa。

实施例D15.根据实施例D1到D14中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。

实施例D16.根据实施例D1到D15中任一例所述的多链嵌合多肽，其中多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

实施例D17.根据实施例D1到D16中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例D18.根据实施例D1到D17中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例D19.根据实施例D1到D18中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽还在其N端包含信号序列。

实施例D20.根据实施例D19所述的多链嵌合多肽，其中信号序列包含SEQ ID NO:62。

实施例D21.根据实施例D20所述的多链嵌合多肽，其中信号序列是SEQ ID NO:62。

实施例D22.根据实施例D1到D21中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例D23.根据实施例D22所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例D24.根据实施例D22所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含与SEQ IDNO:39 80％相同的序列。

实施例D25.根据实施例D24所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含与SEQ IDNO:39 90％相同的序列。

实施例D26.根据实施例D25所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含与SEQ IDNO:39 95％相同的序列。

实施例D27.根据实施例D26所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含SEQ IDNO:39。

实施例D28.根据实施例D22至D27中任一项所述的多链嵌合多肽，其中IL15Rα的寿司结构域包含来自人IL15Rα的寿司结构域。

实施例D29.根据实施例D28所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含与SEQ ID NO:10 80％相同的序列。

实施例D30.根据实施例D29所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含与SEQ ID NO:10 90％相同的序列。

实施例D31.根据实施例D30所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含与SEQ ID NO:10 95％相同的序列。

实施例D32.根据实施例D31所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含SEQ ID NO:10。

实施例D33.根据实施例D28所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域是成熟全长IL15Rα。

实施例D34.根据实施例D1到D21中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例D35.根据实施例D1到D34中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是激动抗原结合结构域。

实施例D36.根据实施例D35所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是激动抗原结合结构域。

实施例D37.根据实施例D35或D36所述的多链嵌合多肽，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例D38.根据实施例D1到D34中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-15或可溶性IL-18。

实施例D39.根据实施例D38所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地是可溶性IL-15或可溶性IL-18。

实施例D40.根据实施例D1到D39中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域都特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。

实施例D41.根据实施例D40所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例D42.根据实施例D41所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例D43.根据实施例D1到D39中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到IL-12的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体。

实施例D44.根据实施例D1到D39中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-12的受体。

实施例D45.根据实施例D44所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域包含可溶性IL-18。

实施例D46.根据实施例D45所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-18是可溶性人IL-18。

实施例D47.根据实施例D46所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-18包含与SEQID NO:41至少80％相同的序列。

实施例D48.根据实施例D47所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-18包含与SEQID NO:41至少90％相同的序列。

实施例D49.根据实施例D48所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-18包含与SEQID NO:41至少95％相同的序列。

实施例D50.根据实施例D49所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-18包含SEQ IDNO:41的序列。

实施例D51.根据实施例D44到D50中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域包含可溶性IL-12。

实施例D52.根据实施例D51所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-18是可溶性人IL-12。

实施例D53.根据实施例D52所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-15包含可溶性人IL-12β(p40)的序列和可溶性人IL-12α(p35)的序列。

实施例D54.根据实施例D53所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-15还包含可溶性IL-12(p40)的序列与可溶性人IL-12α(p35)的序列之间的接头序列。

实施例D55.根据实施例D54所述的多链嵌合多肽，其中接头序列包含SEQ ID NO:7。

实施例D56.根据实施例D53到D55中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-12β(p40)的序列包含与SEQ ID NO:33至少80％相同的序列。

实施例D57.根据实施例D56所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-12β(p40)的序列包含与SEQ ID NO:33至少90％相同的序列。

实施例D58.根据实施例D57所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-12β(p40)的序列包含与SEQ ID NO:33至少95％相同的序列。

实施例D59.根据实施例D58所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-12β(p40)的序列包含SEQ ID NO:33。

实施例D60.根据实施例D53到D59中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-12α(p35)的序列包含与SEQ ID NO:35至少80％相同的序列。

实施例D61.根据实施例D60所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-12α(p35)的序列包含与SEQ ID NO:35至少90％相同的序列。

实施例D62.根据实施例D61所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-12α(p35)的序列包含与SEQ ID NO:35至少95％相同的序列。

实施例D63.根据实施例D62所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-12α(p35)的序列包含SEQ ID NO:35。

实施例D64.根据实施例D1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:116至少80％相同的序列。

实施例D65.根据实施例D64所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:116至少90％相同的序列。

实施例D66.根据实施例D65所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:116至少95％相同的序列。

实施例D67.根据实施例D66所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:116。

实施例D68.根据实施例D67所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:118。

实施例D69.根据实施例D1和D64到D68中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:120至少80％相同的序列。

实施例D70.根据实施例D69所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:120至少90％相同的序列。

实施例D71.根据实施例D70所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:120至少95％相同的序列。

实施例D72.根据实施例D71所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:120。

实施例D73.根据实施例D72所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:122。

实施例D74.根据实施例D1到D63中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域，其中一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例D75.根据实施例D74所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含在可溶性组织因子结构域与一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个之间的接头序列，和/或在一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例D76.根据实施例D1到D63中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例D77.根据实施例D76所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例D78.根据实施例D76所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例D79.根据实施例D76所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第一靶标结合结构域。

实施例D80.根据实施例D76所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例D81.根据实施例D76所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例D82.根据实施例D81所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例D83.根据实施例D81所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例D84.根据实施例D81所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例D85.根据实施例D81所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例D86.根据实施例D81所述的多链嵌合多肽，其中位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接可溶性组织因子结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例D87.根据实施例D81所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含如下安置的接头序列：(i)在可溶性组织因子结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间；和/或(ii)在一对亲和结构域中的第一结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例D88.根据实施例D1到D63和D74到D87中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例D89.根据实施例D88所述的多链嵌合多肽，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第二结构域。

实施例D90.根据实施例D88所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第二结构域之间的接头序列。

实施例D91.根据实施例D88所述的多链嵌合多肽，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第二靶标结合结构域。

实施例D92.根据实施例D88所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例D93.根据实施例D74到D92中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例D94.根据实施例D93所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例D95.根据实施例D94所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例D96.根据实施例D74到D92中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例D97.根据实施例D74到D96中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它抗原结合结构域特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体和CD28的受体。

实施例D98.根据实施例D74到D96中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例D99.根据实施例D98所述的多链嵌合多肽，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例D100.根据实施例D74到D96中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。

实施例D101.根据实施例D100所述的多链嵌合多肽，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKP30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122或可溶性CD28。

实施例D102.一种组合物，其包含根据实施例D1到D101所述的任一种多链嵌合多肽。

实施例D103.根据实施例D102所述的组合物，其中组合物是药物组合物。

实施例D104.一种试剂盒，其包含至少一个剂量的根据实施例D102或D103所述的组合物。

实施例D105.一种核酸，其编码根据实施例D1到D101中任一例所述的任一种多链嵌合多肽。

实施例D106.一种载体，其包含根据实施例D105所述的核酸。

实施例D107.根据实施例D106所述的载体，其中载体是表达载体。

实施例D108.一种细胞，其包含根据实施例D105所述的核酸或根据实施例D106或D107所述的载体。

实施例D109.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起产生多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养根据实施例D108所述的细胞；和

从细胞和/或培养基回收多链嵌合多肽。

实施例D110.一种多链嵌合多肽，其通过根据实施例D109所述的方法产生。

实施例D111.根据实施例D8所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少80％相同的序列。

实施例D112.根据实施例D111所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少90％相同的序列。

实施例D113.根据实施例D112所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少95％相同的序列。

实施例D114.根据实施例D113所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5 100％相同的序列。

实施例D115.根据实施例D8所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少80％相同的序列。

实施例D116.根据实施例D115所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少90％相同的序列。

实施例D117.根据实施例D116所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少95％相同的序列。

实施例D118.根据实施例D117所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6 100％相同的序列。

实施例E1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)可溶性组织因子结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中：

第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；且

第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-21的受体或肿瘤生长因子受体βII(TGFβRII)的配体。

实施例E2.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例E3.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例E4.根据实施例E1到E3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例E5.根据实施例E1到E3中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例E6.根据实施例E1到E5中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例E7.根据实施例E1到E5中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例E8.根据实施例E1到E7中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例E9.根据实施例E8所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例E10.根据实施例E9所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例E11.根据实施例E10所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例E12.根据实施例E8至E11中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例E13.根据实施例E12所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例E14.根据实施例E1至E13中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不能结合到因子VIIa。

实施例E15.根据实施例E1至E14中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。

实施例E16.根据实施例E1到E15中任一例所述的多链嵌合多肽，其中多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

实施例E17.根据实施例E1至E16中任一例的所述多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例E18.根据实施例E1至E17中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例E19.根据实施例E1至E18中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽还在其N端包含信号序列。

实施例E20.根据实施例E19所述的多链嵌合多肽，其中信号序列包含SEQ ID NO:62。

实施例E21.根据实施例E20所述的多链嵌合多肽，其中信号序列是SEQ ID NO:62。

实施例E22.根据实施例E1到E21中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例E23.根据实施例E22所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例E24.根据实施例E22所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含与SEQ IDNO:39 80％相同的序列。

实施例E25.根据实施例E24所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含与SEQ IDNO:39 90％相同的序列。

实施例E26.根据实施例E25所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含与SEQ IDNO:39 95％相同的序列。

实施例E27.根据实施例E26所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含SEQ IDNO:39。

实施例E28.根据实施例E22至E27中任一例所述的多链嵌合多肽，其中IL15Rα的寿司结构域包含来自人IL15Rα的寿司结构域。

实施例E29.根据实施例E28所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含与SEQ ID NO:10 80％相同的序列。

实施例E30.根据实施例E29所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含与SEQ ID NO:10 90％相同的序列。

实施例E31.根据实施例E30所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含与SEQ ID NO:10 95％相同的序列。

实施例E32.根据实施例E31所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含SEQ ID NO:10。

实施例E33.根据实施例E28所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域是成熟全长IL15Rα。

实施例E34.根据实施例E1至E21中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例E35.根据实施例E1到E34中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。

实施例E36.根据实施例E35所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域是抗原结合结构域。

实施例E37.根据实施例E35或E36所述的多链嵌合多肽，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例E38.根据实施例E1到E34中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-21或可溶性TGFβRII。

实施例E39.根据实施例E1到E38中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域都特异性结合到IL-21的受体或TGFβRII的配体。

实施例E40.根据实施例E39所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例E41.根据实施例E40所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例E42.根据实施例E1到E38中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到TGFβRII的配体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例E43.根据实施例E1到E38中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到TGFβRII的配体。

实施例E44.根据实施例E43所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例E45.根据实施例E44所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-21是可溶性人IL-21。

实施例E46.根据实施例E45所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-21包含与SEQID NO:124至少80％相同的序列。

实施例E47.根据实施例E46所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-21包含与SEQID NO:124至少90％相同的序列。

实施例E48.根据实施例E47所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-21包含与SEQID NO:124至少95％相同的序列。

实施例E49.根据实施例E48所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-21包含SEQ IDNO:124的序列。

实施例E50.根据实施例E43到E49中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域包含可溶性TGFβRII。

实施例E51.根据实施例E50所述的多链嵌合多肽，其中可溶性TGFβRII是可溶性人TGFβRII。

实施例E52.根据实施例E51所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人TGFβRII包含可溶性人TGFβRII的第一序列和可溶性人TGFβRII的第二序列。

实施例E53.根据实施例E52所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII还包含可溶性TGFβRII类的第一序列与可溶性人TGFβRII的第二序列之间的接头序列。

实施例E54.根据实施例E53所述的多链嵌合多肽，其中接头序列包含SEQ ID NO:7。

实施例E55.根据实施例E52到E54中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的第一序列包含与SEQ ID NO:56至少80％相同的序列。

实施例E56.根据实施例E55所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的第一序列包含与SEQ ID NO:56至少90％相同的序列。

实施例E57.根据实施例E56所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的第一序列包含与SEQ ID NO:56至少95％相同的序列。

实施例E58.根据实施例E57所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的第一序列包含SEQ ID NO:56。

实施例E59.根据实施例E52到E58中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的第二序列包含与SEQ ID NO:56至少80％相同的序列。

实施例E60.根据实施例E59所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的第二序列包含与SEQ ID NO:56至少90％相同的序列。

实施例E61.根据实施例E60所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的第二序列包含与SEQ ID NO:56至少95％相同的序列。

实施例E62.根据实施例E61所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的第二序列包含SEQ ID NO:56。

实施例E63.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:126至少80％相同的序列。

实施例E64.根据实施例E63所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:126至少90％相同的序列。

实施例E65.根据实施例E64所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:126至少95％相同的序列。

实施例E66.根据实施例E65所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:126。

实施例E67.根据实施例E66所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:128。

实施例E68.根据实施例E1和E63到E67中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:130至少80％相同的序列。

实施例E69.根据实施例E68所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:130至少90％相同的序列。

实施例E70.根据实施例E69所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:130至少95％相同的序列。

实施例E71.根据实施例E70所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:130。

实施例E72.根据实施例E71所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:132。

实施例E73.根据实施例E1到E62中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域，其中一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例E74.根据实施例E73所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含在可溶性组织因子结构域与一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个之间的接头序列，和/或在一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例E75.根据实施例E1到E62中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例E76.根据实施例E75所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例E77.根据实施例E75所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例E78.根据实施例E75所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第一靶标结合结构域。

实施例E79.根据实施例E75所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例E80.根据实施例E75所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例E81.根据实施例E80所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例E82.根据实施例E80所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例E83.根据实施例E80所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例E84.根据实施例E80所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例E85.根据实施例E80所述的多链嵌合多肽，其中位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接可溶性组织因子结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例E86.根据实施例E80所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含如下安置的接头序列：(i)在可溶性组织因子结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间；和/或(ii)在一对亲和结构域中的第一结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例E87.根据实施例E1到E62和E73到E86中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例E88.根据实施例E87所述的多链嵌合多肽，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第二结构域。

实施例E89.根据实施例E87所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第二结构域之间的接头序列。

实施例E90.根据实施例E87所述的多链嵌合多肽，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第二靶标结合结构域。

实施例E91.根据实施例E87所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例E92.根据实施例E73到E91中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例E93.根据实施例E92所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例E94.根据实施例E93所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例E95.根据实施例E73到E91中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例E96.根据实施例E73到E95中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它抗原结合结构域特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-D、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体和CD28的受体。

实施例E97.根据实施例E73到E95中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例E98.根据实施例E97所述的多链嵌合多肽，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例E99.根据实施例E73到E95中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例E100.根据实施例E99所述的多链嵌合多肽，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例E101.一种组合物，其包含根据实施例E1到E100所述的任一种多链嵌合多肽。

实施例E102.根据实施例E101所述的组合物，其中组合物是药物组合物。

实施例E103.一种试剂盒，其包含至少一个剂量的根据实施例E101或E102所述的组合物。

实施例E104.一种核酸，其编码根据实施例E1到E100中任一例所述的任一种多链嵌合多肽。

实施例E105.一种载体，其包含根据实施例E104所述的核酸。

实施例E106.根据实施例E105所述的载体，其中载体是表达载体。

实施例E107.一种细胞，其包含根据实施例C161所述的核酸或根据实施例E105或E106所述的载体。

实施例E108.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起产生多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养根据实施例E107所述的细胞；和

从细胞和/或培养基回收多链嵌合多肽。

实施例E109.一种多链嵌合多肽，其通过根据实施例E108所述的方法产生。

实施例E110.根据实施例E12所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少80％相同的序列。

实施例E111.根据实施例E110所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少90％相同的序列。

实施例E112.根据实施例E111所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少95％相同的序列。

实施例E113.根据实施例E112所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5 100％相同的序列。

实施例E114.根据实施例E12所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少80％相同的序列。

实施例E115.根据实施例E114所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少90％相同的序列。

实施例E116.根据实施例E115所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少95％相同的序列。

实施例E117.根据实施例E116所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6 100％相同的序列。

实施例F1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(c)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)可溶性组织因子结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(d)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中：

第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；

第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-21的受体或IL-7的受体。

实施例F2.根据实施例F1所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例F3.根据实施例F1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例F4.根据实施例F1到F3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例F5.根据实施例F1到F3中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例F6.根据实施例F1到F5中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例F7.根据实施例F1到F5中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例F8.根据实施例F1到F7中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例F9.根据实施例F8所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例F10.根据实施例F9所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例F11.根据实施例F10所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例F12.根据实施例F11所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含SEQ ID NO:1。

实施例F13.根据实施例F8所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少80％相同的序列。

实施例F14.根据实施例F13所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少90％相同的序列。

实施例F15.根据实施例F14所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少95％相同的序列。

实施例F16.根据实施例F15所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含SEQ ID NO:5。

实施例F17.根据实施例F8所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少80％相同的序列。

实施例F18.根据实施例F17所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少90％相同的序列。

实施例F19.根据实施例F18所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少95％相同的序列。

实施例F20.根据实施例F19所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含SEQ ID NO:6。

实施例F21.根据实施例F8到F11、F13到F15和F17到F19中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例F22.根据实施例F21所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例F23.根据实施例F1到F22中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不能够结合到因子VIIa。

实施例F24.根据实施例F1到F23中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。

实施例F25.根据实施例F1到F24中任一例所述的多链嵌合多肽，其中多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

实施例F26.根据实施例F1到F25中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例F27.根据实施例F1到F26中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例F28.根据实施例F1到F27中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽还在其N端包含信号序列。

实施例F29.根据实施例F28所述的多链嵌合多肽，其中信号序列包含SEQ ID NO:62。

实施例F30.根据实施例F28所述的多链嵌合多肽，其中信号序列是SEQ ID NO:44。

实施例F31.根据实施例F1到F30中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例F32.根据实施例F31所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例F33.根据实施例F31所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含与SEQ IDNO:39至少80％相同的序列。

实施例F34.根据实施例F33所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含与SEQ IDNO:39至少90％相同的序列。

实施例F35.根据实施例F34所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含与SEQ IDNO:39至少95％相同的序列。

实施例F36.根据实施例F35所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含SEQ IDNO:39。

实施例F37.根据实施例F31至F36中任一项所述的多链嵌合多肽，其中IL15Rα的寿司结构域包含来自人IL15Rα的寿司结构域。

实施例F38.根据实施例F37所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含与SEQ ID NO:10至少80％相同的序列。

实施例F39.根据实施例F38所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含与SEQ ID NO:10至少90％相同的序列。

实施例F40.根据实施例F39所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含与SEQ ID NO:10至少95％相同的序列。

实施例F41.根据实施例F40所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含SEQ ID NO:10。

实施例F42.根据实施例F37所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域是成熟全长IL15Rα。

实施例F43.根据实施例F1到F30中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例F44.根据实施例F1到F43中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是激动抗原结合结构域。

实施例F45.根据实施例F44所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是激动抗原结合结构域。

实施例F46.根据实施例F44或F45所述的多链嵌合多肽，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例F47.根据实施例F1到F43中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-21或可溶性IL-7。

实施例F48.根据实施例F47所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地是可溶性IL-21或可溶性IL-7。

实施例F49.根据实施例F1到F48中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域都特异性结合到IL-21的受体或IL-7的受体。

实施例F50.根据实施例F49所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例F51.根据实施例F50所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例F52.根据实施例F1到F48中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体。

实施例F53.根据实施例F1到F48中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例F54.根据实施例F53所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例F55.根据实施例F54所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-21是可溶性人IL-21。

实施例F56.根据实施例F55所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-21包含与SEQID NO:124至少80％相同的序列。

实施例F57.根据实施例F56所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-21包含与SEQID NO:124至少90％相同的序列。

实施例F58.根据实施例F57所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-21包含与SEQID NO:124至少95％相同的序列。

实施例F59.根据实施例F58所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-21包含SEQ IDNO:124的序列。

实施例F60.根据实施例F53到F59中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域包含可溶性IL-7。

实施例F61.根据实施例D60所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-7是可溶性人IL-7。

实施例F62.根据实施例F61所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-7包含与SEQID NO:135至少80％相同的序列。

实施例F63.根据实施例F62所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-7包含与SEQID NO:135至少90％相同的序列。

实施例F64.根据实施例F63所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-7包含与SEQID NO:135至少95％相同的序列。

实施例F65.根据实施例F64所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人IL-7包含SEQ IDNO:135的序列。

实施例F66.根据实施例F1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:141至少80％相同的序列。

实施例F67.根据实施例F66所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少90％相同的序列。

实施例F68.根据实施例F67所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少95％相同的序列。

实施例F69.根据实施例F68所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:141。

实施例F70.根据实施例F69所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:143。

实施例F71.根据实施例F1和F66到F70中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:145至少80％相同的序列。

实施例F72.根据实施例F71所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:145至少90％相同的序列。

实施例F73.根据实施例F72所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:145至少95％相同的序列。

实施例F74.根据实施例F73所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:145。

实施例F75.根据实施例F74所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:147。

实施例F76.根据实施例F1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:126至少80％相同的序列。

实施例F77.根据实施例F76所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:126至少90％相同的序列。

实施例F78.根据实施例F77所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:126至少95％相同的序列。

实施例F79.根据实施例F68所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:126。

实施例F80.根据实施例F69所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:128。

实施例F81.根据实施例F1和F76到F80中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:137至少80％相同的序列。

实施例F82.根据实施例F81所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:137至少90％相同的序列。

实施例F83.根据实施例F82所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:137至少95％相同的序列。

实施例F84.根据实施例F83所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:137。

实施例F85.根据实施例F84所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:139。

实施例F86.根据实施例F1到F65中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包括一个或多个其它靶标结合结构域，其中一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例F87.根据实施例F86所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含在可溶性组织因子结构域与一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个之间的接头序列，和/或在一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例F88.根据实施例F1到F65中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例F89.根据实施例F88所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例F90.根据实施例F88所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例F91.根据实施例F88所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第一靶标结合结构域。

实施例F92.根据实施例F88所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例F93.根据实施例F88所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例F94.根据实施例F93所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例F95.根据实施例F93所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例F96.根据实施例F93所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例F97.根据实施例F93所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例F98.根据实施例F93所述的多链嵌合多肽，其中位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接可溶性组织因子结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例F99.根据实施例F93所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含如下安置的接头序列：(i)在可溶性组织因子结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间；和/或(ii)在一对亲和结构域中的第一结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例F100.根据实施例F1到F65和F86到F99中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例F101.根据实施例F100所述的多链嵌合多肽，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第二结构域。

实施例F102.根据实施例F100所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第二结构域之间的接头序列。

实施例F103.根据实施例F100所述的多链嵌合多肽，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第二靶标结合结构域。

实施例F104.根据实施例F100所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例F105.根据实施例F86到F104中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例F106.根据实施例F105所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例F107.根据实施例F106所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例F108.根据实施例F86到F104中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例F109.根据实施例F86到F108中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它抗原结合结构域特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体和CD28的受体。

实施例F110.根据实施例F86到F108中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例F111.根据实施例F110所述的多链嵌合多肽，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例F112.根据实施例F86到F108中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。

实施例F113.根据实施例F112所述的多链嵌合多肽，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122或可溶性CD28。

实施例F114.一种组合物，其包含根据实施例F1到F113所述的任一种多链嵌合多肽。

实施例F115.根据实施例F114所述的组合物，其中组合物是药物组合物。

实施例F116.一种试剂盒，其包含至少一个剂量的根据实施例F114或F115所述的组合物。

实施例F117.一种核酸，其编码根据实施例F1到F113中任一例所述的任一种多链嵌合多肽。

实施例F118.一种载体，其包含根据实施例F117所述的核酸。

实施例F119.根据实施例F118所述的载体，其中载体是表达载体。

实施例F120.一种细胞，其包含根据实施例F117所述的核酸或根据实施例F118或F119所述的载体。

实施例F121.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起产生多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养根据实施例F120所述的细胞；和

从细胞和/或培养基回收多链嵌合多肽。

实施例F122.一种多链嵌合多肽，其通过根据实施例F121所述的方法产生。

实施例G1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(e)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)可溶性组织因子结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(f)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中：

第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；且

第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到：IL-7的受体、CD16、IL-21的受体、TGF-β或CD137L的受体。

实施例G2.根据实施例G1所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例G3.根据实施例G1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例G4.根据实施例G1到G3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例G5.根据实施例G1到G3中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例G6.根据实施例G1到G5中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例G7.根据实施例G1到G5中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例G8.根据实施例G1到G7中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例G9.根据实施例G8所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例G10.根据实施例G9所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例G11.根据实施例G10所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例G12.根据实施例G8到G11中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例G13.根据实施例G12所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例G14.根据实施例G1到G13中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不能够结合到因子VIIa。

实施例G15.根据实施例G1到G14中任一例所述的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。

实施例G16.根据实施例G1到G15中任一例所述的多链嵌合多肽，其中多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

实施例G17.根据实施例G1到G16中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例G18.根据实施例G1到G17中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例G19.根据实施例G1到G18中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽还在其N端包含信号序列。

实施例G20.根据实施例G19所述的多链嵌合多肽，其中信号序列包含SEQ ID NO:62。

实施例G21.根据实施例G20所述的多链嵌合多肽，其中信号序列是SEQ ID NO:62。

实施例G22.根据实施例G1到G21中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例G23.根据实施例G22所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例G24.根据实施例G22所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含与SEQ IDNO:39 80％相同的序列。

实施例G25.根据实施例G24所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含与SEQ IDNO:39 90％相同的序列。

实施例G26.根据实施例G25所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含与SEQ IDNO:39 95％相同的序列。

实施例G27.根据实施例G26所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-15包含SEQ IDNO:39。

实施例G28.根据实施例G22至G27中任一项所述的多链嵌合多肽，其中IL15Rα的寿司结构域包含来自人IL15Rα的寿司结构域。

实施例G29.根据实施例G28所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含与SEQ ID NO:10 80％相同的序列。

实施例G30.根据实施例G29所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含与SEQ ID NO:10 90％相同的序列。

实施例G31.根据实施例G30所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含与SEQ ID NO:10 95％相同的序列。

实施例G32.根据实施例G31所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域包含SEQ ID NO:10。

实施例G33.根据实施例G28所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司结构域是成熟全长IL15Rα。

实施例G34.根据实施例G1到G21中任一例所述的多链嵌合多肽，其中一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例G35.根据实施例G1至G34中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体、CD16或IL-21的受体。

实施例G36.根据实施例G35所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-21的受体。

实施例G37.根据实施例G36所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域包含可溶性IL-7蛋白。

实施例G38.根据实施例G37所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-7是可溶性人IL-7。

实施例G39.根据实施例G36到G38中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合结构域包含特异性结合到CD16的抗原结合结构域。

实施例G40.根据实施例G39所述的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合结构域包含特异性结合到CD16的scFv。

实施例G41.根据实施例G36到G38中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例G42.根据实施例G41所述的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例G43.根据实施例G42所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-21是可溶性人IL-21。

实施例G44.根据实施例G36到G40中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合结构域还包含特异性结合到IL-21的受体的其它靶标结合结构域。

实施例G45.根据实施例G44所述的多链嵌合多肽，其中其它靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例G46.根据实施例G45所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-21是可溶性人IL-12。

实施例G47.根据实施例G1到G34中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β、CD16或IL-21的受体。

实施例G48.根据实施例G47所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-21的受体。

实施例G49.根据实施例G48所述的多特异性嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例G50.根据实施例G49所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G51.根据实施例G48到G50中任一例所述的多特异性嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域特异性结合到CD16。

实施例G52.根据实施例G51所述的多特异性嵌合多肽，其中第二抗原结合结构域包含特异性结合到CD16的抗原结合结构域。

实施例G53.根据实施例G52所述的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合结构域包含特异性结合到CD16的scFv。

实施例G54.根据实施例G48到G50中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例G55.根据实施例G54所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例G56.根据实施例G55所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域包含可溶性人IL-21。

实施例G57.根据实施例G48到G53中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含特异性结合到IL-21的受体的其它靶标结合结构域。

实施例G58.根据实施例G57所述的多链嵌合多肽，其中其它靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例G59.根据实施例G58所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-21是可溶性人IL-21。

实施例G60.根据实施例G1到G34中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体。

实施例G61.根据实施例G60所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括可溶性IL-7。

实施例G62.根据实施例G61所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-7是可溶性人IL-7。

实施例G63.根据实施例G1到G34中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β。

实施例G64.根据实施例G63所述的多特异性嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例G65.根据实施例G64所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G66.根据实施例G1到G34中任一例所述的多特异性嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体、IL-21的受体或CD137L的受体。

实施例G67.根据实施例G66所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。

实施例G68.根据实施例G67所述的多特异性嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域是可溶性IL-7。

实施例G69.根据实施例G68所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性IL-7是可溶性人IL-7。

实施例G70.根据实施例G67到G69中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例G71.根据实施例G70所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域是可溶性IL-21。

实施例G72.根据实施例G71所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-21是可溶性人IL-21。

实施例G73.根据实施例G67到G69中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合结构域特异性结合到CD137L的受体。

实施例G74.根据实施例G73所述的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合结构域是可溶性CD137L。

实施例G75.根据实施例G74所述的多链嵌合多肽，其中可溶性CD137L是可溶性人CD137L。

实施例G76.根据实施例G67到G72中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含特异性结合到CD137L的受体的其它靶标结合结构域。

实施例G77.根据实施例G76所述的多链嵌合多肽，其中其它靶标结合结构域包含可溶性CD137L。

实施例G78.根据实施例G77所述的多链嵌合多肽，其中可溶性CD137L是可溶性人CD137L。

实施例G79.根据实施例G1到G34中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体或TGF-β。

实施例G80.根据实施例G79所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，而第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β。

实施例G81.根据实施例G80所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域包含可溶性IL-7蛋白。

实施例G82.根据实施例G81所述的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-7是可溶性人IL-7。

实施例G83.根据实施例G80到G82中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合结构域包含特异性结合到TGF-β的抗原结合结构域。

实施例G84.根据实施例G83所述的多特异性嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例G85.根据实施例G84所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G86.根据实施例G1到G34中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β、IL-21的受体或CD137L的受体。

实施例G87.根据实施例G86所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。

实施例G88.根据实施例G87所述的多特异性嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例G89.根据实施例G88所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G90.根据实施例G87到G89中任一例所述的多特异性嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例G91.根据实施例G90所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例G92.根据实施例G91所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域包含可溶性人IL-21。

实施例G93.根据实施例G87到G89中任一例所述的多特异性嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域特异性结合到CD137L的受体。

实施例G94.根据实施例G93所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域包含可溶性CD137L。

实施例G95.根据实施例G94所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域包含可溶性人CD137L。

实施例G96.根据实施例G87到G92中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含特异性结合到CD137L的受体的其它靶标结合结构域。

实施例G97.根据实施例G96所述的多链嵌合多肽，其中其它靶标结合结构域包含可溶性CD137L。

实施例G98.根据实施例G97所述的多链嵌合多肽，其中可溶性CD137L是可溶性人CD137L。

实施例G99.根据实施例G1到G34中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β或IL-21的受体。

实施例G100.根据实施例G99所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β或IL-21的受体。

实施例G101.根据实施例G100所述的多特异性嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例G102.根据实施例G101所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G103.根据实施例G100到G102中任一例所述的多特异性嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例G104.根据实施例G103所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例G105.根据实施例G104所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域包含可溶性人IL-21。

实施例G106.根据实施例G100到G102中任一例所述的多特异性嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β。

实施例G107.根据实施例G106所述的多特异性嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例G108.根据实施例G107所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G109.根据实施例G100到G105中任一例所述的多特异性嵌合多肽，其中第二多肽还包含特异性结合到TGF-β的其它靶标结合结构域。

实施例G110.根据实施例G109所述的多特异性嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例G111.根据实施例G110所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G112.根据实施例G1到G34中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β或IL-16。

实施例G113.根据实施例G112所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β或IL-16。

实施例G114.根据实施例G113所述的多特异性嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例G115.根据实施例G114所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G116.根据实施例G113到G115中任一例所述的多特异性嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域特异性结合到IL-16。

实施例G117.根据实施例G116所述的多特异性嵌合多肽，其中第二抗原结合结构域包含特异性结合到CD16的抗原结合结构域。

实施例G118.根据实施例G117所述的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合结构域包含特异性结合到CD16的scFv。

实施例G119.根据实施例G113到G115中任一例所述的多特异性嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β。

实施例G120.根据实施例G119所述的多特异性嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例G121.根据实施例G120所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G122.根据实施例G113到G118中任一例所述的多特异性嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含特异性结合到TGF-β的其它靶标结合结构域。

实施例G123.根据实施例G122所述的多特异性嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例G124.根据实施例G123所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G125.根据实施例G1到G34中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β或CD137L的受体。

实施例G126.根据实施例G125所述的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合结构域特异性结合到CD137L的受体。

实施例G127.根据实施例G126所述的多特异性嵌合多肽，其中第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例G128.根据实施例G127所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G129.根据实施例G128所述的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合结构域包含可溶性CD137L蛋白。

实施例G130.根据实施例G129所述的多链嵌合多肽，其中可溶性CD137L蛋白是可溶性人CD137L。

实施例G131.根据实施例G126到G130中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含特异性结合到TGF-β的其它靶标结合结构域。

实施例G132.根据实施例G131所述的多特异性嵌合多肽，其中其它靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例G133.根据实施例G132所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G134.根据实施例G1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少80％相同的序列。

实施例G135.根据实施例G134所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少90％相同的序列。

实施例G136.根据实施例G135所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少95％相同的序列。

实施例G137.根据实施例G136所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:141。

实施例G138.根据实施例G137所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:143。

实施例G139.根据实施例G1和G134到G138中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:157至少80％相同的序列。

实施例G140.根据实施例G139所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:157至少90％相同的序列。

实施例G141.根据实施例G140所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:157至少95％相同的序列。

实施例G142.根据实施例G141所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:157。

实施例G143.根据实施例G142所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:159。

实施例G144.根据实施例G1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少80％相同的序列。

实施例G145.根据实施例G144所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少90％相同的序列。

实施例G146.根据实施例G145所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少95％相同的序列。

实施例G147.根据实施例G146所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:161。

实施例G148.根据实施例G147所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:163。

实施例G149.根据实施例G1和G144到G148中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:157至少80％相同的序列。

实施例G150.根据实施例G149所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:157至少90％相同的序列。

实施例G151.根据实施例G150所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:157至少95％相同的序列。

实施例G152.根据实施例G151所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:157。

实施例G153.根据实施例G152所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:159。

实施例G154.根据实施例G1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少80％相同的序列。

实施例G155.根据实施例G154所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少90％相同的序列。

实施例G156.根据实施例G155所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少95％相同的序列。

实施例G157.根据实施例G156所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:141。

实施例G158.根据实施例G157所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:143。

实施例G159.根据实施例G1和G154到G158中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:137至少80％相同的序列。

实施例G160.根据实施例G159所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:137至少90％相同的序列。

实施例G161.根据实施例G160所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:137至少95％相同的序列。

实施例G162.根据实施例G161所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:137。

实施例G163.根据实施例G162所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:139。

实施例G164.根据实施例G1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少80％相同的序列。

实施例G165.根据实施例G164所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少90％相同的序列。

实施例G166.根据实施例G165所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少95％相同的序列。

实施例G167.根据实施例G166所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:161。

实施例G168.根据实施例G167所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:163。

实施例G169.根据实施例G1和G164到G168中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:130至少80％相同的序列。

实施例G170.根据实施例G169所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:130至少90％相同的序列。

实施例G171.根据实施例G170所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:130至少95％相同的序列。

实施例G172.根据实施例G171所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:130。

实施例G173.根据实施例G172所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:132。

实施例G174.根据实施例G1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少80％相同的序列。

实施例G175.根据实施例G174所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少90％相同的序列。

实施例G176.根据实施例G175所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少95％相同的序列。

实施例G177.根据实施例G176所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:141。

实施例G178.根据实施例G177所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:143。

实施例G179.根据实施例G1和G174到G178中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:169至少80％相同的序列。

实施例G180.根据实施例G179所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:169至少90％相同的序列。

实施例G181.根据实施例G180所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:169至少95％相同的序列。

实施例G182.根据实施例G181所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:169。

实施例G183.根据实施例G182所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:171。

实施例G184.根据实施例G1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少80％相同的序列。

实施例G185.根据实施例G184所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少90％相同的序列。

实施例G186.根据实施例G185所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少95％相同的序列。

实施例G187.根据实施例G186所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:141。

实施例G188.根据实施例G187所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:143。

实施例G189.根据实施例G1和G184到G188中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:173至少80％相同的序列。

实施例G190.根据实施例G189所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:173至少90％相同的序列。

实施例G191.根据实施例G190所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:173至少95％相同的序列。

实施例G192.根据实施例G191所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:173。

实施例G193.根据实施例G192所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:175。

实施例G194.根据实施例G1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少80％相同的序列。

实施例G195.根据实施例G194所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少90％相同的序列。

实施例G196.根据实施例G195所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:141至少95％相同的序列。

实施例G197.根据实施例G196所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:141。

实施例G198.根据实施例G197所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:143。

实施例G199.根据实施例G1和G194到G198中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:129至少80％相同的序列。

实施例G200.根据实施例G199所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:130至少90％相同的序列。

实施例G201.根据实施例G200所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:130至少95％相同的序列。

实施例G202.根据实施例G201所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:130。

实施例G203.根据实施例G202所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:132。

实施例G204.根据实施例G1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少80％相同的序列。

实施例G205.根据实施例G204所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少90％相同的序列。

实施例G206.根据实施例G205所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少95％相同的序列。

实施例G207.根据实施例G206所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:161。

实施例G208.根据实施例G207所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:163。

实施例G209.根据实施例G1和G204到G208中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:169至少80％相同的序列。

实施例G210.根据实施例G209所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:169至少90％相同的序列。

实施例G211.根据实施例G210所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:169至少95％相同的序列。

实施例G212.根据实施例G211所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:169。

实施例G213.根据实施例G212所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:171。

实施例G214.根据实施例G1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少80％相同的序列。

实施例G215.根据实施例G214所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少90％相同的序列。

实施例G216.根据实施例G215所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少95％相同的序列。

实施例G217.根据实施例GE216所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:161。

实施例G218.根据实施例G217所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:163。

实施例G219.根据实施例G1和G214到G218中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:177至少80％相同的序列。

实施例G220.根据实施例G219所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:177至少90％相同的序列。

实施例G221.根据实施例G220所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:177至少95％相同的序列。

实施例G222.根据实施例G221所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:177。

实施例G223.根据实施例G222所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:179。

实施例G224.根据实施例G1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少80％相同的序列。

实施例G225.根据实施例G224所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少90％相同的序列。

实施例G226.根据实施例G225所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少95％相同的序列。

实施例G227.根据实施例G226所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:161。

实施例G228.根据实施例G227所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:163。

实施例G229.根据实施例G1和G224到G228中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:181至少80％相同的序列。

实施例G230.根据实施例G229所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:181至少90％相同的序列。

实施例G231.根据实施例G230所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:181至少95％相同的序列。

实施例G232.根据实施例G231所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:181。

实施例G233.根据实施例G232所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:183。

实施例G234.根据实施例G1所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少80％相同的序列。

实施例G235.根据实施例G234所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少90％相同的序列。

实施例G236.根据实施例G235所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQID NO:161至少95％相同的序列。

实施例G237.根据实施例G236所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:161。

实施例G238.根据实施例G237所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQID NO:163。

实施例G239.根据实施例G1和G234到G238中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:185至少80％相同的序列。

实施例G240.根据实施例G239所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:185至少90％相同的序列。

实施例G241.根据实施例G240所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQID NO:185至少95％相同的序列。

实施例G242.根据实施例G241所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:185。

实施例G243.根据实施例G242所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQID NO:187。

实施例G244.根据实施例G1到G133中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包括一个或多个其它靶标结合结构域，其中一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例G245.根据实施例G244所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含在可溶性组织因子结构域与一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个之间的接头序列，和/或在一个或多个其它抗原结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例G246.根据实施例G1到G133中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例G247.根据实施例G246所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例G248.根据实施例G246所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例G249.根据实施例G246所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第一靶标结合结构域。

实施例G250.根据实施例G246所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例G251.根据实施例G246所述的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例G252.根据实施例G251所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例G253.根据实施例G251所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例G254.根据实施例G251所述的多链嵌合多肽，其中在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例G255.根据实施例G251所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例G256.根据实施例G251所述的多链嵌合多肽，其中位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接可溶性组织因子结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例G257.根据实施例G251所述的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽还包含如下安置的接头序列：(i)在可溶性组织因子结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间；和/或(ii)在一对亲和结构域中的第一结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例G258.根据实施例G44到G46、G57到G59、G76到G78、G96到G98、G109到G111、G122到G124和G131到G133中任一例所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含其它靶标结合结构域。

实施例G259.根据实施例G258所述的多链嵌合多肽，其中在第二嵌合多肽中，所述其它靶标结合结构域直接邻接一对亲和结构域中的第二结构域。

实施例G260.根据实施例G258所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的所述其它靶标结合结构域与一对亲和结构域中的第二结构域之间的接头序列。

实施例G261.根据实施例G258所述的多链嵌合多肽，其中在第二嵌合多肽中，所述其它靶标结合结构域直接邻接第二靶标结合结构域。

实施例G262.根据实施例G258所述的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的所述其它靶标结合结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例G263.一种组合物，其包含根据实施例G1到G262所述的任一种多链嵌合多肽。

实施例G264.根据实施例G263所述的组合物，其中组合物是药物组合物。

实施例G265.一种试剂盒，其包含至少一个剂量的根据实施例G263或G264所述的组合物。

实施例G266.一种核酸，其编码根据实施例G1到G262中任一例所述的任一种多链嵌合多肽。

实施例G267.一种载体，其包含根据实施例G266所述的核酸。

实施例G268.根据实施例G267所述的载体，其中载体是表达载体。

实施例G269.一种细胞，其包含根据实施例G266所述的核酸或根据实施例G267或G268所述的载体。

实施例G270.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起产生多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养根据实施例G269所述的细胞；和

从细胞和/或培养基回收多链嵌合多肽。

实施例G271.一种多链嵌合多肽，其通过根据实施例G327所述的方法产生。

实施例G272.根据实施例G8所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少80％相同的序列。

实施例G273.根据实施例G272所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少90％相同的序列。

实施例G274.根据实施例G273所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5至少95％相同的序列。

实施例G275.根据实施例G274所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:5 100％相同的序列。

实施例G276.根据实施例G8所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少80％相同的序列。

实施例G277.根据实施例G276所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少90％相同的序列。

实施例G278.根据实施例G277所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6至少95％相同的序列。

实施例G279.根据实施例G279所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:6 100％相同的序列。

实施例H1.一种促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法，所述方法包含：

使自然杀手细胞或T细胞在允许自然杀手细胞或T细胞激活和增殖的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，

其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下组成的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素或细胞因子受体以及共刺激分子的配体。

实施例H2.根据实施例H1所述的方法，其中第一靶标结合结构域和接头结构域彼此直接邻接。

实施例H3.根据实施例H1所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含第一靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。

实施例H4.根据实施例H1到H3中任一例所述的方法，其中接头结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。

实施例H5.根据实施例H1到H3中任一例所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含接头结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H6.根据实施例H1所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。

实施例H7.根据实施例H1所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含第一靶标结合结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H8.根据实施例H6或H7所述的方法，其中第二靶标结合结构域和接头结构域彼此直接邻接。

实施例H9.根据实施例H6或H7所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含第二靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。

实施例H10.根据实施例H1到H9中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。

实施例H11.根据实施例H10所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例H12.根据实施例H11所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例H13.根据实施例H1到H9中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例H14.根据实施例H1到H13中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。

实施例H15.根据实施例H14所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例H16.根据实施例H14或H15所述的方法，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例H17.根据实施例H1至H16中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD52、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例H18.根据实施例H1到H16中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例H19.根据实施例H18所述的方法，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例H20.根据实施例H1到H16中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。

实施例H21.根据实施例H20所述的方法，其中可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例H22.根据实施例H1到H21中任一例所述的方法，其中接头结构域是可溶性组织因子结构域。

实施例H23.根据实施例H22所述的方法，其中可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例H24.根据实施例H23所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQID NO:1至少80％相同的序列。

实施例H25.根据实施例H24所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQID NO:1至少90％相同的序列。

实施例H26.根据实施例H25所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQID NO:1至少95％相同的序列。

实施例H27.根据实施例H23到H26中任一例所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例H28.根据实施例H27所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例H29.根据实施例H22到H28中任一例所述的方法，其中可溶性组织因子结构域不能够结合因子VIIa。

实施例H30.根据实施例H22到H29中任一例所述的方法，其中可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。

实施例H31.根据实施例H22到H30中任一例所述的方法，其中单链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

实施例H32.根据实施例H22到H31中任一例所述的方法，其中IgG1抗体构建体包含至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。

实施例H33.根据实施例H1到H21中的任一例所述的方法，其中接头结构域选自以下组成的组：κ链和λ链。

实施例H34.根据实施例H1到H33中的任一例所述的方法，其中IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。

实施例H35.根据实施例H1到H33中的任一例所述的方法，其中IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

实施例H36.根据实施例H1到H35中的任一例所述的方法，其中单链嵌合多肽还在其N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H37.根据实施例H36所述的方法，其中单链嵌合多肽在其N端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H38.根据实施例H37所述的方法，其中一个或多个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。

实施例H39.根据实施例H38所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

实施例H40.根据实施例H36所述的方法，其中单链嵌合多肽在其C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H41.根据实施例H40所述的方法，其中一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。

实施例H42.根据实施例H40所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

实施例H43.根据实施例H36所述的方法，其中单链嵌合多肽在其N端和C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H44.根据实施例H43所述的方法，其中在N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。

实施例H45.根据实施例H43所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含在N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

实施例H46.根据实施例H43所述的方法，其中在C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。

实施例H47.根据实施例H43所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含在C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

实施例H48.根据实施例H36到H47中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例H49.根据实施例H48所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例H50.根据实施例H49所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例H51.根据实施例H48所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。

实施例H52.根据实施例H51所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。

实施例H53.根据实施例H52所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例H54.根据实施例H36到H47中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例H55.根据实施例H36到H54中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。

实施例H56.根据实施例H55所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例H57.根据实施例H55或H56所述的方法，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例H58.根据实施例H36到H57中的任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例H59.根据实施例H36到H57中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例H60.根据实施例H59所述的方法，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例H61.根据实施例H36到H57中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。

实施例H62.根据实施例H61所述的方法，其中可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或可溶性细胞表面受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

实施例H63.根据实施例H36到H57中的任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是共刺激分子的配体。

实施例H64.根据实施例H63所述的方法，其中共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

实施例H65.根据实施例H1到H64中任一例所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含位于单链嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例H66.根据实施例H1到H65中的任一例所述的方法，其中接触步骤进行约2小时至约20天的一段时间。

实施例H67.根据实施例H66所述的方法，其中接触步骤进行约1天至约15天的一段时间。

实施例H68.根据实施例H1到H67中的任一例所述的方法，其中液体培养基是无血清液体培养基。

实施例H69.根据实施例H1到H67中的任一例所述的方法，其中液体培养基是化学成分确定的液体培养基。

实施例H70.根据实施例H1到H69中的任一例所述的方法，其中液体培养基以约0.5:1到约2:1的摩尔比包含单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

实施例H71.根据实施例H70所述的方法，其中液体培养基以约0.8:1至约1.2:1的摩尔比包含单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

实施例H72.根据实施例H1到H71中的任一例所述的方法，其中NK细胞或T细胞是先前从受试者获得的。

实施例H73.根据实施例H72所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之前从受试者获得NK细胞或T细胞。

实施例H74.根据实施例H1到H73中的任一例所述的方法，其中NK细胞或T细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例H75.根据实施例H1到H73中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之后将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到NK细胞或T细胞中。

实施例H76.根据实施例H1到H73中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之前将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到NK细胞或T细胞中。

实施例H77.根据实施例H1到H76中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之后分离NK细胞或T细胞。

实施例H78.根据实施例H1到H77中的任一例所述的方法，其中与在接触步骤之前一种或多种蛋白质的表达水平或分泌相比，在接触步骤之后，NK细胞或T细胞的一种或多种蛋白质的表达水平或分泌增加，所述蛋白质选自以下组成的组：TNF-α、IFN-Υ、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素、2B4、CD8、CD11a、CD16、CD25、CD27、CD48、CD49d、CD54、CD56、CD58、CD62L、CD69、CD70、CD94、CD137、CD158a、CD158b、CD158e、CD178、CD226、CD253、NKG2A、NKG2C、NKG2D、LIR-1、LILR-B1、KIR2DL1、KIR3DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、CXCR3、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM-1、NKG2A、TRAIL、FasL、CXCR3、CXCR4、LTB、MX1、BAX、TNF-α和IFN-γ。

实施例H79.根据实施例H1到H78中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之后将NK细胞或T细胞给予有需要的受试者。

实施例H80.根据实施例H79所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例H81.根据实施例H80所述的方法，其中与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

实施例H82.根据实施例H79所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例H83.根据实施例H82所述的方法，其中癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H84.根据实施例H79所述的方法，其中受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例H85.根据实施例H84所述的方法，其中感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例H86.一种激活NK细胞或T细胞，其通过根据实施例H1到H78中任一例所述的方法产生。

实施例H87.一种药物组合物，其包含根据实施例H86所述的激活NK细胞或激活T细胞。

实施例H88.一种试剂盒，其包含药物组合物，所述药物组合物包含根据实施例H86所述的激活NK细胞或激活T细胞。

实施例H89.一种杀死有需要的受试者中的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，所述方法包含将治疗有效量的根据实施例H86所述的激活NK细胞或激活T细胞或根据实施例H87所述的药物组合物给予受试者。

实施例H90.根据实施例H89所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例H91.根据实施例H90所述的方法，其中癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H92.根据实施例H89所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例H93.根据实施例H92所述的方法，其中与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

实施例H94.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包含将治疗有效量的根据实施例H86所述的激活NK细胞或激活T细胞或根据实施例H87所述的药物组合物给予受试者。

实施例H95.根据实施例H94所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例H96.根据实施例H95所述的方法，其中癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H97.根据实施例H94所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例H98.根据实施例H97所述的方法，其中与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

实施例H99.根据实施例H94所述的方法，其中受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例H100.根据实施例H99所述的方法，其中感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例H101.一种试剂盒，其包含：

(i)单链嵌合多肽，其包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下组成的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素或细胞因子受体和共刺激分子的配体；和

(ii)IgG1抗体构建体，其包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

实施例H102.根据实施例H101所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和接头结构域彼此直接邻接。

实施例H103.根据实施例H101所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽还包含第一靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。

实施例H104.根据实施例H101到H103中任一例所述的试剂盒，其中接头结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。

实施例H105.根据实施例H101到H103中任一例所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽还包含接头结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H106.根据实施例H101所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。

实施例H107.根据实施例H101所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽还包含第一靶标结合结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H108.根据实施例H106或H107所述的试剂盒，其中第二靶标结合结构域和接头结构域彼此直接邻接。

实施例H109.根据实施例H106或H107所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽还包含第二靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。

实施例H110.根据实施例H101到H109中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。

实施例H111.根据实施例H110所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例H112.根据实施例H111所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例H113.根据实施例H101到H109中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例H114.根据实施例H101到H113中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。

实施例H115.根据实施例H114所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例H116.根据实施例H114或H115所述的方法，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例H117.根据实施例H101到H116中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例H118.根据实施例H101到H116中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例H119.根据实施例H118所述的试剂盒，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例H120.根据实施例H101到H116中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H121.根据实施例H120所述的试剂盒，其中可溶性白介素或细胞因子受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例H122.根据实施例H101到H121中任一例所述的试剂盒，其中接头结构域是可溶性组织因子结构域。

实施例H123.根据实施例H122所述的试剂盒，其中可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例H124.根据实施例H123所述的试剂盒，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例H125.根据实施例H124所述的试剂盒，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例H126.根据实施例H125所述的试剂盒，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例H127.根据实施例H123到H126中任一例所述的试剂盒，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例H128.根据实施例H127所述的试剂盒，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例H129.根据实施例H122到H128中任一例所述的试剂盒，其中可溶性组织因子结构域不能够结合因子VIIa。

实施例H130.根据实施例H122到H129中任一例所述的试剂盒，其中可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。

实施例H131.根据实施例H122到H130中任一例所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

实施例H132.根据实施例H122到H131中任一例所述的方法，其中IgG1抗体构建体包含至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。

实施例H133.根据实施例H101到H121中的任一例所述的试剂盒，其中接头结构域选自以下组成的组：κ链和λ链。

实施例H134.根据实施例H101到H133中的任一例所述的试剂盒，其中IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。

实施例H135.根据实施例H101到H133中的任一例所述的试剂盒，其中IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

实施例H136.根据实施例H101到H135中任一例所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽还在其N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H137.根据实施例H136所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽在其N端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H138.根据实施例H137所述的试剂盒，其中一个或多个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。

实施例H139.根据实施例H138所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽还包含至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

实施例H140.根据实施例H136所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽在其C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H141.根据实施例H140所述的试剂盒，其中一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。

实施例H142.根据实施例H140所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽还包含至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

实施例H143.根据实施例H136所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽在其N端和C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H144.根据实施例H143所述的试剂盒，其中在N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。

实施例H145.根据实施例H143所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽还包含在N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

实施例H146.根据实施例H143所述的试剂盒，其中在C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。

实施例H147.根据实施例H143所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽还包含在C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

实施例H148.根据实施例H136到H147中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例H149.根据实施例H148所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例H150.根据实施例H149所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例H151.根据实施例H148所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。

实施例H152.根据实施例H151所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。

实施例H153.根据实施例H152所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例H154.根据实施例H136到H147中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例H155.根据实施例H136到H154中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。

实施例H156.根据实施例H155所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例H157.根据实施例H155或H156所述的试剂盒，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例H158.根据实施例H136到H157中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例H159.根据实施例H136到H157中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例H160.根据实施例H159所述的试剂盒，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例H161.根据实施例H136到H157中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H162.根据实施例H161所述的试剂盒，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

实施例H163.根据实施例H136到H162中的任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是共刺激分子的配体。

实施例H164.根据实施例H163所述的试剂盒，其中共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

实施例H165.根据实施例H101到H164中任一例所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽还包含位于单链嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例H166.一种促进自然杀手细胞或T细胞的激活和增殖的方法，所述方法包含：

使自然杀手细胞或T细胞在允许自然杀手细胞或T细胞激活和增殖的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含：

(1)有效量的多链嵌合多肽，其包含：

(c)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)接头结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(d)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；和

(2)有效量的IgG1抗体构建体，其包含至少一个与接头结构域特异性结合的抗原结合结构域。

实施例H167.根据实施例H166所述的方法，其中第一靶标结合结构域和接头结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H168.根据实施例H166所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。

实施例H169.根据实施例H166到H168中的任一例所述的方法，其中接头结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H170.根据实施例H166到H168中的任一例所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H171.根据实施例H166到H170中的任一例所述的方法，其中一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H172.根据实施例H166到H170中的任一例所述的方法，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H173.根据实施例H166到H172中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。

实施例H174.根据实施例H173所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例H175.根据实施例H174所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例H176.根据实施例H166到H172中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例H177.根据实施例H166到H176中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。

实施例H178.根据实施例H177所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例H179.根据实施例H177或H178所述的方法，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例H180.根据实施例H166到H179中的任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例H181.根据实施例H166到H179中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例H182.根据实施例H181所述的方法，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例H183.根据实施例H166到H179中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H184.根据实施例H183所述的方法，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例H185.根据实施例H166到H184中的任一例所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域，其中一个或多个靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例H186.根据实施例H185所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含在接头结构域与一个或多个靶标抗原结合结构域中的至少一个之间的接头序列，和/或在一个或多个靶标抗原结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H187.根据实施例H166到H184中任一例所述的方法，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H188.根据实施例H187所述的方法，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例H189.根据实施例H187所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H190.根据实施例H187所述的方法，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第一靶标结合结构域。

实施例H191.根据实施例H187所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H192.根据实施例H187所述的方法，其中一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于第一嵌合多肽中的接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例H193.根据实施例H192所述的方法，其中在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例H194.根据实施例H192所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H195.根据实施例H192所述的方法，其中在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例H196.根据实施例H192所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H197.根据实施例H192所述的方法，其中位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接接头结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例H198.根据实施例H192所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含如下安置的接头序列：(i)在接头结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间，和/或(ii)在一对亲和结构域中的第一结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例H199.根据实施例H166到H198中任一例所述的方法，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H200.根据实施例H199所述的方法，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第二结构域。

实施例H201.根据实施例H199所述的方法，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第二结构域之间的接头序列。

实施例H202.根据实施例H199所述的方法，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第二靶标结合结构域。

实施例H203.根据实施例H199所述的方法，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H204.根据实施例H185到H203中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例H205.根据实施例H204所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例H206.根据实施例H205所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例H207.根据实施例H204所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。

实施例H208.根据实施例H207所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。

实施例H209.根据实施例H208所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例H210.根据实施例H185到H203中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例H211.根据实施例H185到H210中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。

实施例H212.根据实施例H211所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例H213.根据实施例H211或H212所述的方法，其中抗原结合结构域包含scFv。

实施例H214.根据实施例H185到H213中的任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD3的受体以及CD28的受体。

实施例H215.根据实施例H185到H213中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例H216.根据实施例H215所述的方法，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例H217.根据实施例H185到H213中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H218.根据实施例H217所述的方法，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

实施例H219.根据实施例H166到H218中任一例所述的方法，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例H220.根据实施例H166到H218中任一例所述的方法，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例H221.根据实施例H166到H220中任一例所述的方法，其中接头结构域是可溶性组织因子结构域。

实施例H222.根据实施例H221所述的方法，其中可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例H223.根据实施例H222所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例H224.根据实施例H223所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例H225.根据实施例H224所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例H226.根据实施例H222到H225中任一例所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例H227.根据实施例H226所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例H228.根据实施例H221到H227中任一例所述的方法，其中可溶性组织因子结构域不能够结合到因子VIIa。

实施例H229.根据实施例H221到H228中任一例所述的方法，其中可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。

实施例H230.根据实施例H221到H229中任一例所述的方法，其中多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

实施例H231.根据实施例H221到H230中任一例所述方法，其中IgG1抗体构建体包含至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。

实施例H232.根据实施例H166到H220中的任一例所述的方法，其中接头结构域选自以下组成的组：κ链和λ链。

实施例H233.根据实施例H166到H232中的任一例所述的方法，其中IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。

实施例H234.根据实施例H166到H232中的任一例所述的方法，其中IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

实施例H235.根据实施例H166到H234中任一例所述的方法，其中一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例H236.根据实施例H235所述的方法，其中可溶性IL15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例H237.根据实施例H235或H236所述的方法，其中人IL15Rα是成熟全长IL15Rα。

实施例H238.根据实施例H166到H234中任一例所述的方法，其中一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例H239.根据实施例H166到H238中任一例所述的方法，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽还在其N端包含信号序列。

实施例H240.根据实施例H166到H238中的任一例所述的方法，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽在其N端缺少信号序列。

实施例H241.根据实施例H166到H240中的任一例所述的方法，其中接触步骤进行约2小时至约20天的一段时间。

实施例H242.根据实施例H241所述的方法，其中接触步骤进行约1天至约15天的一段时间。

实施例H243.根据实施例H166到H242中的任一例所述的方法，其中液体培养基是无血清液体培养基。

实施例H244.根据实施例H166到H242中的任一例所述的方法，其中液体培养基是化学成分确定的液体培养基。

实施例H245.根据实施例H166到H244中的任一例所述的方法，其中液体培养基以约0.5:1至约2:1的摩尔比包含多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

实施例H246.根据实施例H245所述的方法，其中液体培养基以约0.8:1至约1.2:1的摩尔比包含多链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

实施例H247.根据实施例H166到H246中的任一例所述的方法，其中NK细胞或T细胞是先前从受试者获得的。

实施例H248.根据实施例H247所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之前从受试者获得NK细胞或T细胞。

实施例H249.根据实施例H166到H248中的任一例所述的方法，其中NK细胞或T细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例H250.根据实施例H166到H248中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之后将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到NK细胞或T细胞中。

实施例H251.根据实施例H166到H248中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之前将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到NK细胞或T细胞中。

实施例H252.根据实施例H166到H251中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之后分离NK细胞或T细胞。

实施例H253.根据实施例H166到H252中的任一例所述的方法，其中与在接触步骤之前一种或多种蛋白质的表达水平或分泌相比，在接触步骤之后，NK细胞或T细胞的一种或多种蛋白质的表达水平或分泌增加，所述蛋白质选自以下组成的组：TNF-α、IFN-Υ、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素、2B4、CD8、CD11a、CD16、CD25、CD27、CD48、CD49d、CD54、CD56、CD58、CD62L、CD69、CD70、CD94、CD137、CD158a、CD158b、CD158e、CD178、CD226、CD253、NKG2A、NKG2C、NKG2D、LIR-1、LILR-B1、KIR2DL1、KIR3DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、CXCR3、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM-1、NKG2A、TRAIL、FasL、CXCR3、CXCR4、LTB、MX1、BAX、TNF-α和IFN-γ。

实施例H254.根据实施例H166到H253中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之后将NK细胞或T细胞给予有需要的受试者。

实施例H255.根据实施例H254所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例H256.根据实施例H255所述的方法，其中与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

实施例H257.根据实施例H254所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例H258.根据实施例H257所述的方法，其中癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H259.根据实施例H254所述的方法，其中受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例H260.根据实施例H259所述的方法，其中感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例H261.一种激活NK细胞或T细胞，其通过根据实施例H166到H253中任一例所述的方法产生。

实施例H262.一种药物组合物，其包含根据实施例H261所述的激活NK细胞或激活T细胞。

实施例H263.一种试剂盒，其包含药物组合物，所述药物组合物包含根据实施例H261所述的激活NK细胞或激活T细胞。

实施例H264.一种杀死有需要的受试者中的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，所述方法包含将治疗有效量的根据实施例H261所述的激活NK细胞或激活T细胞或根据实施例H262所述的药物组合物给予受试者。

实施例H265.根据实施例H264所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例H266.根据实施例H265所述的方法，其中癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H267.根据实施例H264所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例H268.根据实施例H267所述的方法，其中与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

实施例H269.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包含将治疗有效量的根据实施例H261所述的激活NK细胞或激活T细胞或根据实施例H262所述的药物组合物给予受试者。

实施例H270.根据实施例H269所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例H271.根据实施例H270所述的方法，其中癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H272.根据实施例H269所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例H273.根据实施例H272所述的方法，其中与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

实施例H274.根据实施例H269所述的方法，其中受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例H275.根据实施例H274所述的方法，其中感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例H276.一种试剂盒，其包含：

(1)多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)接头结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；和

(2)有效量的IgG1抗体，其包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

实施例H277.根据实施例H276所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和接头结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H278.根据实施例H276所述的试剂盒，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。

实施例H279.根据实施例H276到H278中任一例所述的试剂盒，其中接头结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H280.根据实施例H276到H278中的任一例所述的试剂盒，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H281.根据实施例H276到H280中任一例所述的试剂盒，其中一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H282.根据实施例H276到H280中的任一例所述的试剂盒，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H283.根据实施例H276到H282中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。

实施例H284.根据实施例H283所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例H285.根据实施例H284所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例H286.根据实施例H276到H282中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例H287.根据实施例H276到H286中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。

实施例H288.根据实施例H287所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例H289.根据实施例H287或H288所述的试剂盒，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例H290.根据实施例H276到H289中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例H291.根据实施例H276到H289中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例H292.根据实施例H291所述的试剂盒，其中可溶性白介素或细胞因子蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例H293.根据实施例H276到H289中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H294.根据实施例H293所述的试剂盒，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例H295.根据实施例H276到H294中的任一例所述的试剂盒，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域，其中一个或多个靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例H296.根据实施例H295所述的试剂盒，其中第一嵌合多肽还包含在接头结构域与一个或多个靶标抗原结合结构域中的至少一个之间的接头序列，和/或在一个或多个靶标抗原结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H297.根据实施例H276到H294中任一例所述的试剂盒，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H298.根据实施例H297所述的试剂盒，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例H299.根据实施例H297所述的试剂盒，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H300.根据实施例H297所述的试剂盒，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第一靶标结合结构域。

实施例H301.根据实施例H297所述的试剂盒，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H302.根据实施例H297所述的试剂盒，其中一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于第一嵌合多肽中的接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例H303.根据实施例H302所述的试剂盒，其中在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例H304.根据实施例H302所述的试剂盒，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H305.根据实施例H302所述的试剂盒，其中在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例H306.根据实施例H302所述的试剂盒，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H307.根据实施例H302所述的试剂盒，其中位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接接头结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例H308.根据实施例H302所述的试剂盒，其中第一嵌合多肽还包含如下安置的接头序列：(i)在接头结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间，和/或(ii)在一对亲和结构域中的第一结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例H309.根据实施例H276到H308中任一例所述的试剂盒，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H310.根据实施例H309所述的试剂盒，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第二结构域。

实施例H311.根据实施例H309所述的试剂盒，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第二结构域之间的接头序列。

实施例H312.根据实施例H309所述的试剂盒，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第二靶标结合结构域。

实施例H313.根据实施例H309所述的试剂盒，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H314.根据实施例H295到H313中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例H315.根据实施例H314所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例H316.根据实施例H315所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例H317.根据实施例H314所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。

实施例H318.根据实施例H317所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。

实施例H319.根据实施例H318所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例H320.根据实施例H295到H313中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例H321.根据实施例H295到H320中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。

实施例H322.根据实施例H321所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例H323.根据实施例H321或H322所述的试剂盒，其中抗原结合结构域包含scFv。

实施例H324.根据实施例H295到H323中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-β受体III(TGF-βRIII)的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD3的受体以及CD28的受体。

实施例H325.根据实施例H295到H323中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例H326.根据实施例H325所述的试剂盒，其中可溶性白介素或细胞因子蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例H327.根据实施例H295到H323中任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H328.根据实施例H327所述的试剂盒，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

实施例H329.根据实施例H295到H328中的任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是共刺激分子的配体。

实施例H330.根据实施例H329所述的试剂盒，其中共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

实施例H331.根据实施例H276到H330中任一例所述的试剂盒，其中接头结构域是可溶性组织因子结构域。

实施例H332.根据实施例H331所述的试剂盒，其中可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例H333.根据实施例H332所述的试剂盒，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例H334.根据实施例H333所述的试剂盒，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例H335.根据实施例H334所述的试剂盒，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例H336.根据实施例H332到H335中任一例所述的试剂盒，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例H337.根据实施例H336所述的试剂盒，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例H338.根据实施例H331到H337中任一例所述的试剂盒，其中可溶性组织因子结构域不能够结合到因子VIIa。

实施例H339.根据实施例H331到H338中任一例所述的试剂盒，其中可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。

实施例H340.根据实施例H331到H339中任一例所述的试剂盒，其中多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

实施例H341.根据实施例H331到H340中任一例所述的试剂盒，其中IgG1抗体构建体包含至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。

实施例H342.根据实施例H276到H330中的任一例所述的试剂盒，其中接头结构域选自以下组成的组：κ链和λ链。

实施例H343.根据实施例H276到H342中的任一例所述的试剂盒，其中IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。

实施例H344.根据实施例H276到H342中的任一例所述的试剂盒，其中IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

实施例H345.根据实施例H276到H344中任一例所述的试剂盒，其中一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例H346.根据实施例H345所述的试剂盒，其中可溶性IL15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例H347.根据实施例H345或H346所述的试剂盒，其中人IL15Rα是成熟全长IL15Rα。

实施例H348.根据实施例H276到H344中任一例所述的试剂盒，其中一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例H349.根据实施例H276到H348中任一例所述的试剂盒，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽还在其N端包含信号序列。

实施例H350.根据实施例H276到H348中的任一例所述的试剂盒，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽在其N端缺少信号序列。

实施例H351.根据实施例H1到H16中的任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是共刺激分子的配体。

实施例H352.根据实施例H351所述的方法，其中共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

实施例H353.根据实施例H1到H62中任一例所述的方法，其中单链嵌合多肽还在其N端包含信号序列。

实施例H354.根据实施例H1到H62中的任一例所述的方法，其中单链嵌合多肽在其N端缺少信号序列。

实施例H355.根据实施例H101到H162中任一例所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽还在其N端包含信号序列。

实施例H356.根据实施例H101到H162中的任一例所述的试剂盒，其中单链嵌合多肽在其N端缺少信号序列。

实施例H357.根据实施例H166到H179中的任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是共刺激分子的配体。

实施例H358.根据实施例H357所述的方法，其中共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

实施例H359.根据实施例H185到H217中的任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是共刺激分子的配体。

实施例H360.根据实施例H359所述的方法，其中共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

实施例H361.根据实施例H276到H294中的任一例所述的试剂盒，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是共刺激分子的配体。

实施例H362.根据实施例H361所述的试剂盒，其中共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

实施例H363.根据实施例H276到H330中任一例所述的试剂盒，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例H364.根据实施例H276到H328中任一例所述的试剂盒，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例H365.一种增加免疫细胞的葡萄糖消耗的方法，所述方法包含：

使免疫细胞在允许免疫细胞的葡萄糖消耗的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，

其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下组成的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素或细胞因子受体以及共刺激分子的配体。

实施例H366.一种增加免疫细胞的氧化磷酸化的方法，所述方法包含：

使免疫细胞在允许免疫细胞的氧化磷酸化的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，

其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下组成的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素或细胞因子受体以及共刺激分子的配体。

实施例H367.一种增加免疫细胞的有氧糖酵解的方法，所述方法包含：

使免疫细胞在允许免疫细胞的有氧糖酵解的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，

其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下组成的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素或细胞因子受体以及共刺激分子的配体。

实施例H368.一种增加免疫细胞的细胞外酸化率(ECAR)的方法，所述方法包含：

使免疫细胞在允许免疫细胞的细胞外酸化的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，

其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下组成的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素或细胞因子受体以及共刺激分子的配体。

实施例H369.一种增加免疫细胞的线粒体耗氧率的方法，所述方法包含：

使免疫细胞在允许免疫细胞的线粒体耗氧率的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含有效量的(i)包含第一靶标结合结构域、接头结构域和第二靶标结合结构域的单链嵌合多肽，以及(ii)包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域的IgG1抗体构建体，

其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地选自以下组成的组：可溶性白介素或细胞因子蛋白、抗原结合结构域、可溶性白介素或细胞因子受体以及共刺激分子的配体。

实施例H370.根据实施例H365到H369中的任一例所述的方法，其中液体培养基包括单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

实施例H371.根据实施例H370所述的方法，其中IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。

实施例H372.根据实施例H370所述的方法，其中IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

实施例H373.根据实施例H365到H372中的任一例所述的方法，其中接触步骤进行约2小时至约20天的一段时间。

实施例H374.根据实施例H373所述的方法，其中接触步骤进行约1天至约15天的一段时间。

实施例H375.根据实施例H365到H374中的任一例所述的方法，其中液体培养基是无血清液体培养基。

实施例H376.根据实施例H365到H374中的任一例所述的方法，其中液体培养基是化学成分确定的液体培养基。

实施例H377.根据实施例H365到H374中的任一例所述的方法，其中液体培养基包含血清。

实施例H378.根据实施例H365到H377中的任一例所述的方法，其中液体培养基以约0.5:1至约2:1的摩尔比包含单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

实施例H379.根据实施例H378所述的方法，其中液体培养基以约0.8:1至约1.2:1的摩尔比包含单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

实施例H380.根据实施例H365到H379中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和接头结构域彼此直接邻接。

实施例H381.根据实施例H365到H379中的任一例所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含第一靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。

实施例H382.根据实施例H365到H381中任一例所述的方法，其中接头结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。

实施例H383.根据实施例H365到H381中任一例所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含接头结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H384.根据实施例H365到H379中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域彼此直接邻接。

实施例H385.根据实施例H365到H379中的任一例所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含第一靶标结合结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H386.根据实施例H384或H385所述的方法，其中第二靶标结合结构域和接头结构域彼此直接邻接。

实施例H387.根据实施例H384或H385所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含第二靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。

实施例H388.根据实施例H365到H387中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。

实施例H389.根据实施例H388所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例H390.根据实施例H389所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例H391.根据实施例H365到H387中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例H392.根据实施例H365到H391中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。

实施例H393.根据实施例H392所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例H394.根据实施例H392或H393所述的方法，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例H395.根据实施例H365到H394中的任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD52、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例H396.根据实施例H365到H394中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例H397.根据实施例H396所述的方法，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例H398.根据实施例H365到H394中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H399.根据实施例H398所述的方法，其中可溶性白介素或细胞因子受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例H400.根据实施例H365到H399中任一例所述的方法，其中接头结构域是可溶性组织因子结构域。

实施例H401.根据实施例H400所述的方法，其中可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例H402.根据实施例H401所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例H403.根据实施例H402所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例H404.根据实施例H403所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例H405.根据实施例H401到H404中任一例所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例H406.根据实施例H405所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例H407.根据实施例H400到H406中任一例所述的方法，其中可溶性组织因子结构域不能够结合因子VIIa。

实施例H408.根据实施例H400到H407中任一例所述的方法，其中可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。

实施例H409.根据实施例H400到H408中任一例所述的方法，其中单链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

实施例H410.根据实施例H400到H409中任一例所述方法，其中IgG1抗体构建体包含至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。

实施例H411.根据实施例H365到H399中的任一例所述的方法，其中接头结构域选自以下组成的组：κ链和λ链。

实施例H412.根据实施例H365到H411中的任一例所述的方法，其中IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。

实施例H413.根据实施例H365到H411中的任一例所述的方法，其中IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

实施例H414.根据实施例H365到H413中任一例所述的方法，其中单链嵌合多肽在其N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H415.根据实施例H414所述的方法，其中单链嵌合多肽在其N端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H416.根据实施例H415所述的方法，其中一个或多个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。

实施例H417.根据实施例H416所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

实施例H418.根据实施例H414所述的方法，其中单链嵌合多肽在其C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H419.根据实施例H418所述的方法，其中一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。

实施例H420.根据实施例H418所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含至少一个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

实施例H421.根据实施例H414所述的方法，其中单链嵌合多肽在其N端和C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H422.根据实施例H421所述的方法，其中在N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。

实施例H423.根据实施例H421所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含在N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

实施例H424.根据实施例H421所述的方法，其中在C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个直接邻接第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域。

实施例H425.根据实施例H421所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含在C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的一个与第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域或接头结构域之间的接头序列。

实施例H426.根据实施例H414到H425中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例H427.根据实施例H426所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例H428.根据实施例H427所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例H429.根据实施例H426所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。

实施例H430.根据实施例H429所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。

实施例H431.根据实施例H430所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例H432.根据实施例H414到H425中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例H433.根据实施例H414到H432中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。

实施例H434.根据实施例H433所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例H435.根据实施例H433或H434所述的方法，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例H436.根据实施例H414到H435中的任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例H437.根据实施例H414到H432中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例H438.根据实施例H437所述的方法，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例H439.根据实施例H414到H432中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H440.根据实施例H439所述的方法，其中可溶性白介素或细胞因子受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

实施例H441.根据实施例H414到H432中的任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是共刺激分子的配体。

实施例H442.根据实施例H441所述的方法，其中共刺激分子的配体是可溶性CD80、CD86、CD40、ICOSL、CD70、OX40L、4-1BBL、GITRL、LIGHT、TIM3、TIM4、ICAM1、LFA3、CD1d或LLT-1。

实施例H443.根据实施例H365到H442中任一例所述的方法，其中单链嵌合多肽还包含位于单链嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例H444.根据实施例H365到H443中的任一例所述的方法，其中NK细胞或T细胞是先前从受试者获得的。

实施例H445.根据实施例H444所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之前从受试者获得NK细胞或T细胞。

实施例H446.根据实施例H365到H445中的任一例所述的方法，其中免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例H447.根据实施例H365到H445中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之后将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。

实施例H448.根据实施例H365到H445中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之前将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。

实施例H449.根据实施例H365到H448中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之后分离免疫细胞。

实施例H450.根据实施例H365到H449中的任一例所述的方法，其中与在接触步骤之前一种或多种蛋白质的表达水平或分泌相比，在接触步骤之后，免疫细胞的一种或多种蛋白质的表达水平或分泌增加，所述蛋白质选自以下组成的组：TNF-α、IFN-Υ、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素、2B4、CD8、CD11a、CD16、CD25、CD27、CD48、CD49d、CD54、CD56、CD58、CD62L、CD69、CD70、CD94、CD137、CD158a、CD158b、CD158e、CD178、CD226、CD253、NKG2A、NKG2C、NKG2D、LIR-1、LILR-B1、KIR2DL1、KIR3DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、CXCR3、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM-1、NKG2A、TRAIL、FasL、CXCR3、CXCR4、LTB、MX1、BAX、TNF-α和IFN-γ。

实施例H451.根据实施例H365到H450中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之后将免疫细胞给予有需要的受试者。

实施例H452.根据实施例H451所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例H453.根据实施例H452所述的方法，其中与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

实施例H454.根据实施例H451所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例H455.根据实施例H454所述的方法，其中癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H456.根据实施例H451所述的方法，其中受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例H457.根据实施例H456所述的方法，其中感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例H458.一种激活免疫细胞，其通过根据实施例H365到H450中任一例所述的方法产生。

实施例H459.一种药物组合物，其包含根据实施例H458所述的激活免疫细胞。

实施例H460.一种试剂盒，其包含药物组合物，所述药物组合物包含根据实施例H458所述的激活免疫细胞。

实施例H461.一种杀死有需要的受试者中的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，所述方法包含将治疗有效量的根据实施例H458所述的激活免疫细胞或根据实施例H459所述的药物组合物给予受试者。

实施例H462.根据实施例H461所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例H463.根据实施例H462所述的方法，其中癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H464.根据实施例H462所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例H465.根据实施例H464所述的方法，其中与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

实施例H466.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包含将治疗有效量的根据实施例H458所述的激活免疫细胞或根据实施例H459所述的药物组合物给予受试者。

实施例H467.根据实施例H466所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例H468.根据实施例H467所述的方法，其中癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H469.根据实施例H466所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例H470.根据实施例H469所述的方法，其中与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

实施例H471.根据实施例H466所述的方法，其中受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例H472.根据实施例H471所述的方法，其中感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

实施例H473.一种增加免疫细胞的葡萄糖消耗的方法，所述方法包含：

使免疫细胞在允许免疫细胞的葡萄糖消耗的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含：(1)有效量的多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)接头结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；和

(2)有效量的IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

实施例H474.一种增加免疫细胞的氧化磷酸化的方法，所述方法包含：

使免疫细胞在允许免疫细胞的氧化磷酸化的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含：(1)有效量的多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)接头结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；和

(2)有效量的IgG1抗体构建体，所述IgG1抗体构建体包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

实施例H475.一种增加免疫细胞的有氧糖酵解的方法，所述方法包含：

使免疫细胞在允许免疫细胞的有氧糖酵解的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含：(1)有效量的多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)接头结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；和

(2)有效量的IgG1抗体构建体，其包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

实施例H476.一种增加免疫细胞的细胞外酸化率(ECAR)的方法，所述方法包含：

使免疫细胞在允许免疫细胞的细胞外酸化的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含：(1)有效量的多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)接头结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；和

(2)有效量的IgG1抗体构建体，其包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

实施例H477.一种增加免疫细胞的线粒体耗氧率的方法，所述方法包含：

使免疫细胞在允许免疫细胞的线粒体耗氧率的条件下在液体培养基中进行接触，所述液体培养基包含：(1)有效量的多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)接头结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合；和

(2)有效量的IgG1抗体构建体，其包含至少一个特异性结合到接头结构域的抗原结合结构域。

实施例H478.根据实施例H473到H477中的任一例所述的方法，其中液体培养基包括单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

实施例H479.根据实施例H478所述的方法，其中IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。

实施例H480.根据实施例H478所述的方法，其中IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

实施例H481.根据实施例H473到H480中的任一例所述的方法，其中接触步骤进行约2小时至约20天的一段时间。

实施例H482.根据实施例H481所述的方法，其中接触步骤进行约1天至约15天的一段时间。

实施例H483.根据实施例H473到H482中的任一例所述的方法，其中液体培养基是无血清液体培养基。

实施例H484.根据实施例H473到H482中的任一例所述的方法，其中液体培养基是化学成分确定的液体培养基。

实施例H485.根据实施例H473到H482中的任一例所述的方法，其中液体培养基包含血清。

实施例H486.根据实施例H473到H485中的任一例所述的方法，其中液体培养基以约0.5:1至约2:1的摩尔比包含单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

实施例H487.根据实施例H486所述的方法，其中液体培养基以约0.8:1至约1.2:1的摩尔比包含单链嵌合多肽和IgG1抗体构建体。

实施例H488.根据实施例H473到H487中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和接头结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H489.根据实施例H473到H487中的任一例所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与接头结构域之间的接头序列。

实施例H490.根据实施例H473到H489中任一例所述的方法，其中接头结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H491.根据实施例H473到H489中的任一例所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含第一嵌合多肽中的接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H492.根据实施例H473到H491中任一例所述的方法，其中一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H493.根据实施例H473到H491中的任一例所述的方法，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的所第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H494.根据实施例H473到H493中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。

实施例H495.根据实施例H494所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例H496.根据实施例H495所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例H497.根据实施例H473到H493中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例H498.根据实施例H473到H497中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。

实施例H499.根据实施例H498所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例H500.根据实施例H498或H499所述的方法，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例H501.根据实施例H473到H500中的任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例H502.根据实施例H473到H497中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例H503.根据实施例H502所述的方法，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例H504.根据实施例H473到H497中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H505.根据实施例H504所述的方法，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例H506.根据实施例H473到H505中的任一例所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域，其中一个或多个靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例H507.根据实施例H506所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含在接头结构域与一个或多个靶标抗原结合结构域中的至少一个之间的接头序列，和/或在一个或多个靶标抗原结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H508.根据实施例H473到H505中任一例所述的方法，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H509.根据实施例H508所述的方法，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例H510.根据实施例H508所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H511.根据实施例H508所述的方法，其中在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第一靶标结合结构域。

实施例H512.根据实施例H508所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H513.根据实施例H508所述的方法，其中一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于第一嵌合多肽中的接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例H514.根据实施例H513所述的方法，其中在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例H515.根据实施例H513所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H516.根据实施例H513所述的方法，其中在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个其它靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例H517.根据实施例H513所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。

实施例H518.根据实施例H513所述的方法，其中位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接接头结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。

实施例H519.根据实施例H513所述的方法，其中第一嵌合多肽还包含如下安置的接头序列：(i)在接头结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间，和/或(ii)在一对亲和结构域中的第一结构域与一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

实施例H520.根据实施例H473到H519中任一例所述的方法，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端和/或C端包含一个或多个其它靶标结合结构域。

实施例H521.根据实施例H520所述的方法，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第二结构域。

实施例H522.根据实施例H520所述的方法，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第二结构域之间的接头序列。

实施例H523.根据实施例H520所述的方法，其中在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第二靶标结合结构域。

实施例H524.根据实施例H520所述的方法，其中第二嵌合多肽还包含第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个与第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例H525.根据实施例H506到H524中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例H526.根据实施例H525所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例H527.根据实施例H526所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例H528.根据实施例H525所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。

实施例H529.根据实施例H528所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。

实施例H530.根据实施例H529所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例H531.根据实施例H506到H524中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例H532.根据实施例H506到H531中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。

实施例H533.根据实施例H532所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例H534.根据实施例H532或H533所述的方法，其中抗原结合结构域包含scFv。

实施例H535.根据实施例H506到H534中的任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD3的受体以及CD28的受体。

实施例H536.根据实施例H506到H534中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白。

实施例H537.根据实施例H536所述的方法，其中可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或可溶性细胞表面蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB和ULP16结合蛋白。

实施例H538.根据实施例H506到H534中任一例所述的方法，其中第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个其它靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H539.根据实施例H538所述的方法，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

实施例H540.根据实施例H473到H539中任一例所述的方法，其中第一嵌合多肽还在第一嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例H541.根据实施例H473到H539中任一例所述的方法，其中第二嵌合多肽还在第二嵌合多肽的N端或C端包含肽标签。

实施例H542.根据实施例H473到H541中任一例所述的方法，其中接头结构域是可溶性组织因子结构域。

实施例H543.根据实施例H542所述的方法，其中可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例H544.根据实施例H543所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例H545.根据实施例H544所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例H546.根据实施例H545所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例H547.根据实施例H543到H546中任一例所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例H548.根据实施例H547所述的方法，其中可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一个：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例H549.根据实施例H542到H548中任一例所述的方法，其中可溶性组织因子结构域不能够结合到因子VIIa。

实施例H550.根据实施例H542到H549中任一例所述的方法，其中可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化成因子Xa。

实施例H551.根据实施例H542到H550中任一例所述的方法，其中多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝固。

实施例H552.根据实施例H542到H551中任一例所述方法，其中IgG1抗体构建体包含至少一个特异性结合到可溶性组织因子结构域的抗原结合结构域。

实施例H553.根据实施例H473到H541中的任一例所述的方法，其中接头结构域选自以下组成的组：κ链和λ链。

实施例H554.根据实施例H473到H553中的任一例所述的方法，其中IgG1抗体构建体是单克隆IgG1抗体，其中单克隆IgG1抗体中的两个抗原结合结构域都特异性结合到接头结构域。

实施例H555.根据实施例H473到H553中的任一例所述的方法，其中IgG1抗体构建体是双特异性IgG1抗体，其中双特异性IgG1抗体中的两个抗原结合结构域中的一个特异性结合到接头结构域。

实施例H556.根据实施例H473到H555中任一例所述的方法，其中一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例H557.根据实施例H556所述的方法，其中可溶性IL15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例H558.根据实施例H556或H557所述的方法，其中人IL15Rα是成熟全长IL15Rα。

实施例H559.根据实施例H473到H555中任一例所述的方法，其中一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例H560.根据实施例H473到H559中任一例所述的方法，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽还在其N端包含信号序列。

实施例H561.根据实施例H473到H559中的任一例所述的方法，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽在其N端缺少信号序列。

实施例H562.根据实施例H473到H561中的任一例所述的方法，其中免疫细胞是先前从受试者获得的。

实施例H563.根据实施例H562所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。

实施例H564.根据实施例H473到H563中的任一例所述的方法，其中免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例H565.根据实施例H473到H563中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之后将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。

实施例H566.根据实施例H473到H563中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之前将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。

实施例H567.根据实施例H473到H566中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之后分离免疫细胞。

实施例H568.根据实施例H473到H567中的任一例所述的方法，其中与在接触步骤之前一种或多种蛋白质的表达水平或分泌相比，在接触步骤之后，免疫细胞的一种或多种蛋白质的表达水平或分泌增加，所述蛋白质选自以下组成的组：TNF-α、IFN-Υ、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素、2B4、CD8、CD11a、CD16、CD25、CD27、CD48、CD49d、CD54、CD56、CD58、CD62L、CD69、CD70、CD94、CD137、CD158a、CD158b、CD158e、CD178、CD226、CD253、NKG2A、NKG2C、NKG2D、LIR-1、LILR-B1、KIR2DL1、KIR3DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、CXCR3、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM-1、NKG2A、TRAIL、FasL、CXCR3、CXCR4、LTB、MX1、BAX、TNF-α和IFN-γ。

实施例H569.根据实施例H473到H568中的任一例所述的方法，其中方法还包含在接触步骤之后将免疫细胞给予有需要的受试者。

实施例H570.根据实施例H569所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例H571.根据实施例H570所述的方法，其中与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

实施例H572.根据实施例H569所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例H573.根据实施例H572所述的方法，其中癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H574.根据实施例H569所述的方法，其中受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例H575.根据实施例H574所述的方法，其中感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例H576.一种激活免疫细胞，其通过根据实施例H473到H568中任一例所述的方法产生。

实施例H577.一种药物组合物，其包含根据实施例H576所述的激活细胞。

实施例H578.一种试剂盒，其包含药物组合物，所述药物组合物包含根据实施例H261所述的激活免疫细胞。

实施例H579.一种杀死有需要的受试者中的癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，所述方法包含将治疗有效量的根据实施例H576所述的激活免疫细胞或根据实施例H577所述的药物组合物给予受试者。

实施例H580.根据实施例H579所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例H581.根据实施例H580所述的方法，其中癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H582.根据实施例H579所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例H583.根据实施例H582所述的方法，其中与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

实施例H584.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包含将治疗有效量的根据实施例H576所述的激活免疫细胞或根据实施例H577所述的药物组合物给予受试者。

实施例H585.根据实施例H584所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例H586.根据实施例H585所述的方法，其中癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃食道癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H587.根据实施例H584所述的方法，其中受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例H588.根据实施例H587所述的方法，其中与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化症、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失调、多发性硬化症和肾功能障碍。

实施例H589.根据实施例H584所述的方法，其中受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例H590.根据实施例H589所述的方法，其中感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

序列表

<110> HCW生物制剂公司（HCW BIOLOGICS, INC.）

<120> 单链嵌合多肽和多链嵌合多肽及其用途

<130> 47039-0012WO1

<140>

<141>

<150> 62/881,088

<151> 2019-07-31

<150> 62/881,039

<151> 2019-07-31

<150> 62/817,244

<151> 2019-03-12

<150> 62/817,241

<151> 2019-03-12

<150> 62/817,230

<151> 2019-03-12

<150> 62/816,683

<151> 2019-03-11

<150> 62/749,506

<151> 2018-10-23

<150> 62/749,007

<151> 2018-10-22

<150> 62/746,832

<151> 2018-10-17

<150> 62/725,043

<151> 2018-08-30

<150> 62/725,038

<151> 2018-08-30

<150> 62/725,010

<151> 2018-08-30

<150> 62/724,969

<151> 2018-08-30

<160> 198

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 219

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“可溶性人组织因子结构域”

<400> 1

Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser

1 5 10 15

Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln

20 25 30

Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys

35 40 45

Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val

50 55 60

Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala

65 70 75 80

Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn

85 90 95

Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr

100 105 110

Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu

115 120 125

Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg

130 135 140

Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser

145 150 155 160

Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu

165 170 175

Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val

180 185 190

Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu

195 200 205

Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

210 215

<210> 2

<211> 657

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“可溶性人组织因子结构域”

<400> 2

agcggcacaa ccaacacagt cgctgcctat aacctcactt ggaagagcac caacttcaaa 60

accatcctcg aatgggaacc caaacccgtt aaccaagttt acaccgtgca gatcagcacc 120

aagtccggcg actggaagtc caaatgtttc tataccaccg acaccgagtg cgatctcacc 180

gatgagatcg tgaaagatgt gaaacagacc tacctcgccc gggtgtttag ctaccccgcc 240

ggcaatgtgg agagcactgg ttccgctggc gagcctttat acgagaacag ccccgaattt 300

accccttacc tcgagaccaa tttaggacag cccaccatcc aaagctttga gcaagttggc 360

acaaaggtga atgtgacagt ggaggacgag cggactttag tgcggcggaa caacaccttt 420

ctcagcctcc gggatgtgtt cggcaaagat ttaatctaca cactgtatta ctggaagtcc 480

tcttcctccg gcaagaagac agctaaaacc aacacaaacg agtttttaat cgacgtggat 540

aaaggcgaaa actactgttt cagcgtgcaa gctgtgatcc cctcccggac cgtgaatagg 600

aaaagcaccg atagccccgt tgagtgcatg ggccaagaaa agggcgagtt ccgggag 657

<210> 3

<211> 223

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“可溶性小鼠组织因子结构域”

<400> 3

Ala Gly Ile Pro Glu Lys Ala Phe Asn Leu Thr Trp Ile Ser Thr Asp

1 5 10 15

Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Gln Pro Lys Pro Thr Asn Tyr Thr Tyr

20 25 30

Thr Val Gln Ile Ser Asp Arg Ser Arg Asn Trp Lys Asn Lys Cys Phe

35 40 45

Ser Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp

50 55 60

Val Thr Trp Ala Tyr Glu Ala Lys Val Leu Ser Val Pro Arg Arg Asn

65 70 75 80

Ser Val His Gly Asp Gly Asp Gln Leu Val Ile His Gly Glu Glu Pro

85 90 95

Pro Phe Thr Asn Ala Pro Lys Phe Leu Pro Tyr Arg Asp Thr Asn Leu

100 105 110

Gly Gln Pro Val Ile Gln Gln Phe Glu Gln Asp Gly Arg Lys Leu Asn

115 120 125

Val Val Val Lys Asp Ser Leu Thr Leu Val Arg Lys Asn Gly Thr Phe

130 135 140

Leu Thr Leu Arg Gln Val Phe Gly Lys Asp Leu Gly Tyr Ile Ile Thr

145 150 155 160

Tyr Arg Lys Gly Ser Ser Thr Gly Lys Lys Thr Asn Ile Thr Asn Thr

165 170 175

Asn Glu Phe Ser Ile Asp Val Glu Glu Gly Val Ser Tyr Cys Phe Phe

180 185 190

Val Gln Ala Met Ile Phe Ser Arg Lys Thr Asn Gln Asn Ser Pro Gly

195 200 205

Ser Ser Thr Val Cys Thr Glu Gln Trp Lys Ser Phe Leu Gly Glu

210 215 220

<210> 4

<211> 224

<212> PRT

<213> 大鼠

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“可溶性大鼠组织因子结构域”

<400> 4

Ala Gly Thr Pro Pro Gly Lys Ala Phe Asn Leu Thr Trp Ile Ser Thr

1 5 10 15

Asp Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Gln Pro Lys Pro Thr Asn Tyr Thr

20 25 30

Tyr Thr Val Gln Ile Ser Asp Arg Ser Arg Asn Trp Lys Tyr Lys Cys

35 40 45

Thr Gly Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys

50 55 60

Asp Val Asn Trp Thr Tyr Glu Ala Arg Val Leu Ser Val Pro Trp Arg

65 70 75 80

Asn Ser Thr His Gly Lys Glu Thr Leu Phe Gly Thr His Gly Glu Glu

85 90 95

Pro Pro Phe Thr Asn Ala Arg Lys Phe Leu Pro Tyr Arg Asp Thr Lys

100 105 110

Ile Gly Gln Pro Val Ile Gln Lys Tyr Glu Gln Gly Gly Thr Lys Leu

115 120 125

Lys Val Thr Val Lys Asp Ser Phe Thr Leu Val Arg Lys Asn Gly Thr

130 135 140

Phe Leu Thr Leu Arg Gln Val Phe Gly Asn Asp Leu Gly Tyr Ile Leu

145 150 155 160

Thr Tyr Arg Lys Asp Ser Ser Thr Gly Arg Lys Thr Asn Thr Thr His

165 170 175

Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Glu Lys Gly Val Ser Tyr Cys Phe

180 185 190

Phe Ala Gln Ala Val Ile Phe Ser Arg Lys Thr Asn His Lys Ser Pro

195 200 205

Glu Ser Ile Thr Lys Cys Thr Glu Gln Trp Lys Ser Val Leu Gly Glu

210 215 220

<210> 5

<211> 219

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“突变可溶性人组织因子结构域”

<400> 5

Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser

1 5 10 15

Thr Asn Phe Ala Thr Ala Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln

20 25 30

Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys

35 40 45

Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Ala Leu Thr Asp Glu Ile Val

50 55 60

Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala

65 70 75 80

Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn

85 90 95

Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr

100 105 110

Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu

115 120 125

Asp Glu Arg Thr Leu Val Ala Arg Asn Asn Thr Ala Leu Ser Leu Arg

130 135 140

Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser

145 150 155 160

Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu

165 170 175

Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val

180 185 190

Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu

195 200 205

Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

210 215

<210> 6

<211> 219

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“突变可溶性人组织因子结构域”

<400> 6

Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser

1 5 10 15

Thr Asn Phe Ala Thr Ala Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln

20 25 30

Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Ala Lys Ser Lys

35 40 45

Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Ala Leu Thr Asp Glu Ile Val

50 55 60

Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala

65 70 75 80

Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Ala Glu Asn

85 90 95

Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr

100 105 110

Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu

115 120 125

Asp Glu Arg Thr Leu Val Ala Arg Asn Asn Thr Ala Leu Ser Leu Arg

130 135 140

Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser

145 150 155 160

Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu

165 170 175

Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val

180 185 190

Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu

195 200 205

Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

210 215

<210> 7

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成接头序列”

<400> 7

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 8

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成接头序列”

<400> 8

ggcggtggag gatccggagg aggtggctcc ggcggcggag gatct 45

<210> 9

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成接头序列”

<400> 9

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 10

<211> 65

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“来自IL-15受体α的α链（IL15Rα）的寿司结构域”

<400> 10

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

20 25 30

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 11

<211> 195

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“来自IL-15受体α的α链（IL15Rα）的寿司结构域”

<400> 11

attacatgcc cccctcccat gagcgtggag cacgccgaca tctgggtgaa gagctatagc 60

ctctacagcc gggagaggta tatctgtaac agcggcttca agaggaaggc cggcaccagc 120

agcctcaccg agtgcgtgct gaataaggct accaacgtgg ctcactggac aacaccctct 180

ttaaagtgca tccgg 195

<210> 12

<211> 723

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成抗CD3 scFv序列”

<400> 12

cagatcgtgc tgacccaaag ccccgccatc atgagcgcta gccccggtga gaaggtgacc 60

atgacatgct ccgcttccag ctccgtgtcc tacatgaact ggtatcagca gaaaagcgga 120

accagcccca aaaggtggat ctacgacacc agcaagctgg cctccggagt gcccgctcat 180

ttccggggct ctggatccgg caccagctac tctttaacca tttccggcat ggaagctgaa 240

gacgctgcca cctactattg ccagcaatgg agcagcaacc ccttcacatt cggatctggc 300

accaagctcg aaatcaatcg tggaggaggt ggcagcggcg gcggtggatc cggcggagga 360

ggaagccaag ttcaactcca gcagagcggc gctgaactgg cccggcccgg cgcctccgtc 420

aagatgagct gcaaggcttc cggctataca tttactcgtt acacaatgca ttgggtcaag 480

cagaggcccg gtcaaggttt agagtggatc ggatatatca acccttcccg gggctacacc 540

aactataacc aaaagttcaa ggataaagcc actttaacca ctgacaagag ctcctccacc 600

gcctacatgc agctgtcctc tttaaccagc gaggactccg ctgtttacta ctgcgctagg 660

tattacgacg accactactg tttagactat tggggacaag gtaccacttt aaccgtcagc 720

agc 723

<210> 13

<211> 708

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> 标注=“人工序列的描述：合成抗CD28 scFv序列”

<400> 13

gtccagctgc agcagagcgg acccgaactc gtgaaacccg gtgcttccgt gaaaatgtct 60

tgtaaggcca gcggatacac cttcacctcc tatgtgatcc agtgggtcaa acagaagccc 120

ggacaaggtc tcgagtggat cggcagcatc aacccttaca acgactatac caaatacaac 180

gagaagttta agggaaaggc tactttaacc tccgacaaaa gctccatcac agcctacatg 240

gagttcagct ctttaacatc cgaggacagc gctctgtact attgcgcccg gtggggcgac 300

ggcaattact ggggacgggg cacaacactg accgtgagca gcggaggcgg aggctccggc 360

ggaggcggat ctggcggtgg cggctccgac atcgagatga cccagtcccc cgctatcatg 420

tccgcctctt taggcgagcg ggtcacaatg acttgtacag cctcctccag cgtctcctcc 480

tcctacttcc attggtacca acagaaaccc ggaagctccc ctaaactgtg catctacagc 540

accagcaatc tcgccagcgg cgtgccccct aggttttccg gaagcggaag caccagctac 600

tctttaacca tctcctccat ggaggctgag gatgccgcca cctacttttg tcaccagtac 660

caccggtccc ccaccttcgg aggcggcacc aaactggaga caaagagg 708

<210> 14

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成测序引物C186-IFNG135F”

<400> 14

ggtgggtata atggg 15

<210> 15

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成 测序引物C54-IFNG261F”

<400> 15

attattttat tttaaaaaat ttgtg 25

<210> 16

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> 标注=“人工序列的描述：合成抗CD3 scFv重链可变结构域序列”

<400> 16

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 17

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> 标注=“人工序列的描述：合成抗CD3 scFv轻链可变结构域序列”

<400> 17

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg

100 105

<210> 18

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> 标注=“人工序列的描述：合成抗CD3 scFv重链可变结构域序列”

<400> 18

caagttcagc tccagcaaag cggcgccgaa ctcgctcggc ccggcgcttc cgtgaagatg 60

tcttgtaagg cctccggcta taccttcacc cggtacacaa tgcactgggt caagcaacgg 120

cccggtcaag gtttagagtg gattggctat atcaacccct cccggggcta taccaactac 180

aaccagaagt tcaaggacaa agccaccctc accaccgaca agtccagcag caccgcttac 240

atgcagctga gctctttaac atccgaggat tccgccgtgt actactgcgc tcggtactac 300

gacgatcatt actgcctcga ttactggggc caaggtacca ccttaacagt ctcctcc 357

<210> 19

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> 标注=“人工序列的描述：合成抗CD3 scFv轻链可变结构域序列”

<400> 19

cagatcgtgc tgacccagtc ccccgctatt atgagcgcta gccccggtga aaaggtgact 60

atgacatgca gcgccagctc ttccgtgagc tacatgaact ggtatcagca gaagtccggc 120

accagcccta aaaggtggat ctacgacacc agcaagctgg ccagcggcgt ccccgctcac 180

tttcggggct ccggctccgg aacaagctac tctctgacca tcagcggcat ggaagccgag 240

gatgccgcta cctattactg tcagcagtgg agctccaacc ccttcacctt tggatccggc 300

accaagctcg agattaatcg t 321

<210> 20

<211> 241

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> 标注=“人工序列的描述：合成抗CD3 scFv序列”

<400> 20

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln

115 120 125

Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys

130 135 140

Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys

145 150 155 160

Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser

165 170 175

Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu

180 185 190

Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu

195 200 205

Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp

210 215 220

His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser

225 230 235 240

Ser

<210> 21

<211> 723

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> 标注=“人工序列的描述：合成抗CD3 scFv序列”

<400> 21

cagatcgtgc tgacccagtc ccccgctatt atgagcgcta gccccggtga aaaggtgact 60

atgacatgca gcgccagctc ttccgtgagc tacatgaact ggtatcagca gaagtccggc 120

accagcccta aaaggtggat ctacgacacc agcaagctgg ccagcggcgt ccccgctcac 180

tttcggggct ccggctccgg aacaagctac tctctgacca tcagcggcat ggaagccgag 240

gatgccgcta cctattactg tcagcagtgg agctccaacc ccttcacctt tggatccggc 300

accaagctcg agattaatcg tggaggcgga ggtagcggag gaggcggatc cggcggtgga 360

ggtagccaag ttcagctcca gcaaagcggc gccgaactcg ctcggcccgg cgcttccgtg 420

aagatgtctt gtaaggcctc cggctatacc ttcacccggt acacaatgca ctgggtcaag 480

caacggcccg gtcaaggttt agagtggatt ggctatatca acccctcccg gggctatacc 540

aactacaacc agaagttcaa ggacaaagcc accctcacca ccgacaagtc cagcagcacc 600

gcttacatgc agctgagctc tttaacatcc gaggattccg ccgtgtacta ctgcgctcgg 660

tactacgacg atcattactg cctcgattac tggggccaag gtaccacctt aacagtctcc 720

tcc 723

<210> 22

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成抗CD28 scFv重链可变结构域序列”

<400> 22

Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Cys

35 40 45

Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Thr Lys Arg

100 105

<210> 23

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成抗CD28 scFv轻链可变结构域序列”

<400> 23

Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val

20 25 30

Ile Gln Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ser Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

50 55 60

Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ile Thr Ala Tyr Met

65 70 75 80

Glu Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Trp Gly Asp Gly Asn Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Thr Leu Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 24

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成抗CD28 scFv重链可变结构域序列”

<400> 24

gacatcgaga tgacacagtc ccccgctatc atgagcgcct ctttaggaga acgtgtgacc 60

atgacttgta cagcttcctc cagcgtgagc agctcctatt tccactggta ccagcagaaa 120

cccggctcct cccctaaact gtgtatctac tccacaagca atttagctag cggcgtgcct 180

cctcgtttta gcggctccgg cagcacctct tactctttaa ccattagctc tatggaggcc 240

gaagatgccg ccacatactt ttgccatcag taccaccggt cccctacctt tggcggaggc 300

acaaagctgg agaccaagcg g 321

<210> 25

<211> 342

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成抗CD28 scFv轻链可变结构域序列”

<400> 25

gtgcagctgc agcagtccgg acccgaactg gtcaagcccg gtgcctccgt gaaaatgtct 60

tgtaaggctt ctggctacac ctttacctcc tacgtcatcc aatgggtgaa gcagaagccc 120

ggtcaaggtc tcgagtggat cggcagcatc aatccctaca acgattacac caagtataac 180

gaaaagttta agggcaaggc cactctgaca agcgacaaga gctccattac cgcctacatg 240

gagttttcct ctttaacttc tgaggactcc gctttatact attgcgctcg ttggggcgat 300

ggcaattatt ggggccgggg aactacttta acagtgagct cc 342

<210> 26

<211> 236

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> 标注=“人工序列的描述：合成抗CD28 scFv序列”

<400> 26

Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val

20 25 30

Ile Gln Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ser Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

50 55 60

Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ile Thr Ala Tyr Met

65 70 75 80

Glu Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Trp Gly Asp Gly Asn Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Thr Leu Thr Val

100 105 110

Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu

130 135 140

Gly Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser

145 150 155 160

Ser Tyr Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu

165 170 175

Cys Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe

180 185 190

Ser Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu

195 200 205

Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro

210 215 220

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Thr Lys Arg

225 230 235

<210> 27

<211> 708

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> 标注=“人工序列的描述：合成抗CD28 scFv序列”

<400> 27

gtgcagctgc agcagtccgg acccgaactg gtcaagcccg gtgcctccgt gaaaatgtct 60

tgtaaggctt ctggctacac ctttacctcc tacgtcatcc aatgggtgaa gcagaagccc 120

ggtcaaggtc tcgagtggat cggcagcatc aatccctaca acgattacac caagtataac 180

gaaaagttta agggcaaggc cactctgaca agcgacaaga gctccattac cgcctacatg 240

gagttttcct ctttaacttc tgaggactcc gctttatact attgcgctcg ttggggcgat 300

ggcaattatt ggggccgggg aactacttta acagtgagct ccggcggcgg cggaagcgga 360

ggtggaggat ctggcggtgg aggcagcgac atcgagatga cacagtcccc cgctatcatg 420

agcgcctctt taggagaacg tgtgaccatg acttgtacag cttcctccag cgtgagcagc 480

tcctatttcc actggtacca gcagaaaccc ggctcctccc ctaaactgtg tatctactcc 540

acaagcaatt tagctagcgg cgtgcctcct cgttttagcg gctccggcag cacctcttac 600

tctttaacca ttagctctat ggaggccgaa gatgccgcca catacttttg ccatcagtac 660

caccggtccc ctacctttgg cggaggcaca aagctggaga ccaagcgg 708

<210> 28

<211> 133

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-2”

<400> 28

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 29

<211> 133

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-3”

<400> 29

Ala Pro Met Thr Gln Thr Thr Pro Leu Lys Thr Ser Trp Val Asn Cys

1 5 10 15

Ser Asn Met Ile Asp Glu Ile Ile Thr His Leu Lys Gln Pro Pro Leu

20 25 30

Pro Leu Leu Asp Phe Asn Asn Leu Asn Gly Glu Asp Gln Asp Ile Leu

35 40 45

Met Glu Asn Asn Leu Arg Arg Pro Asn Leu Glu Ala Phe Asn Arg Ala

50 55 60

Val Lys Ser Leu Gln Asn Ala Ser Ala Ile Glu Ser Ile Leu Lys Asn

65 70 75 80

Leu Leu Pro Cys Leu Pro Leu Ala Thr Ala Ala Pro Thr Arg His Pro

85 90 95

Ile His Ile Lys Asp Gly Asp Trp Asn Glu Phe Arg Arg Lys Leu Thr

100 105 110

Phe Tyr Leu Lys Thr Leu Glu Asn Ala Gln Ala Gln Gln Thr Thr Leu

115 120 125

Ser Leu Ala Ile Phe

130

<210> 30

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成测序引物IFNG127F”

<400> 30

atggtatagg tgggtataat gg 22

<210> 31

<211> 79

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-8”

<400> 31

Glu Gly Ala Val Leu Pro Arg Ser Ala Lys Glu Leu Arg Cys Gln Cys

1 5 10 15

Ile Lys Thr Tyr Ser Lys Pro Phe His Pro Lys Phe Ile Lys Glu Leu

20 25 30

Arg Val Ile Glu Ser Gly Pro His Cys Ala Asn Thr Glu Ile Ile Val

35 40 45

Lys Leu Ser Asp Gly Arg Glu Leu Cys Leu Asp Pro Lys Glu Asn Trp

50 55 60

Val Gln Arg Val Val Glu Lys Phe Leu Lys Arg Ala Glu Asn Ser

65 70 75

<210> 32

<211> 160

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-10”

<400> 32

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

1 5 10 15

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

20 25 30

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

35 40 45

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

85 90 95

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

100 105 110

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

115 120 125

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

130 135 140

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

145 150 155 160

<210> 33

<211> 306

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-12β（p40）”

<400> 33

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser

305

<210> 34

<211> 918

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-12β（p40）”

<400> 34

atttgggaac tgaagaagga cgtctacgtg gtcgaactgg actggtatcc cgatgctccc 60

ggcgaaatgg tggtgctcac ttgtgacacc cccgaagaag acggcatcac ttggaccctc 120

gatcagagca gcgaggtgct gggctccgga aagaccctca caatccaagt taaggagttc 180

ggagacgctg gccaatacac atgccacaag ggaggcgagg tgctcagcca ttccttatta 240

ttattacaca agaaggaaga cggaatctgg tccaccgaca ttttaaaaga tcagaaggag 300

cccaagaata agaccttttt aaggtgtgag gccaaaaact acagcggtcg tttcacttgt 360

tggtggctga ccaccatttc caccgattta accttctccg tgaaaagcag ccggggaagc 420

tccgaccctc aaggtgtgac atgtggagcc gctaccctca gcgctgagag ggttcgtggc 480

gataacaagg aatacgagta cagcgtggag tgccaagaag atagcgcttg tcccgctgcc 540

gaagaatctt tacccattga ggtgatggtg gacgccgtgc acaaactcaa gtacgagaac 600

tacacctcct ccttctttat ccgggacatc attaagcccg atcctcctaa gaatttacag 660

ctgaagcctc tcaaaaatag ccggcaagtt gaggtctctt gggaatatcc cgacacttgg 720

agcacacccc acagctactt ctctttaacc ttttgtgtgc aagttcaagg taaaagcaag 780

cgggagaaga aagaccgggt gtttaccgac aaaaccagcg ccaccgtcat ctgtcggaag 840

aacgcctcca tcagcgtgag ggctcaagat cgttattact ccagcagctg gtccgagtgg 900

gccagcgtgc cttgttcc 918

<210> 35

<211> 197

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-12α（p35）”

<400> 35

Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu

1 5 10 15

His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys

20 25 30

Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp

35 40 45

His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu

50 55 60

Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr

65 70 75 80

Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe

85 90 95

Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr

100 105 110

Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys

115 120 125

Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu

130 135 140

Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser

145 150 155 160

Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu

165 170 175

Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser

180 185 190

Tyr Leu Asn Ala Ser

195

<210> 36

<211> 591

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-12α（p35）”

<400> 36

cgtaacctcc ccgtggctac ccccgatccc ggaatgttcc cttgtttaca ccacagccag 60

aatttactga gggccgtgag caacatgctg cagaaagcta ggcagacttt agaattttac 120

ccttgcacca gcgaggagat cgaccatgaa gatatcacca aggacaagac atccaccgtg 180

gaggcttgtt tacctctgga gctgacaaag aacgagtctt gtctcaactc tcgtgaaacc 240

agcttcatca caaatggctc ttgtttagct tcccggaaga cctcctttat gatggcttta 300

tgcctcagct ccatctacga ggatttaaag atgtaccaag tggagttcaa gaccatgaac 360

gccaagctgc tcatggaccc taaacggcag atctttttag accagaacat gctggctgtg 420

attgatgagc tgatgcaagc tttaaacttc aactccgaga ccgtccctca gaagtcctcc 480

ctcgaggagc ccgattttta caagacaaag atcaaactgt gcattttact ccacgccttt 540

aggatccggg ccgtgaccat tgaccgggtc atgagctatt taaacgccag c 591

<210> 37

<211> 518

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-12”

<400> 37

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

325 330 335

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

340 345 350

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

355 360 365

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

370 375 380

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

385 390 395 400

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

405 410 415

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

420 425 430

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

435 440 445

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

450 455 460

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

465 470 475 480

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

485 490 495

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

500 505 510

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser

515

<210> 38

<211> 1554

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-12”

<400> 38

atttgggaac tgaagaagga cgtctacgtg gtcgaactgg actggtatcc cgatgctccc 60

ggcgaaatgg tggtgctcac ttgtgacacc cccgaagaag acggcatcac ttggaccctc 120

gatcagagca gcgaggtgct gggctccgga aagaccctca caatccaagt taaggagttc 180

ggagacgctg gccaatacac atgccacaag ggaggcgagg tgctcagcca ttccttatta 240

ttattacaca agaaggaaga cggaatctgg tccaccgaca ttttaaaaga tcagaaggag 300

cccaagaata agaccttttt aaggtgtgag gccaaaaact acagcggtcg tttcacttgt 360

tggtggctga ccaccatttc caccgattta accttctccg tgaaaagcag ccggggaagc 420

tccgaccctc aaggtgtgac atgtggagcc gctaccctca gcgctgagag ggttcgtggc 480

gataacaagg aatacgagta cagcgtggag tgccaagaag atagcgcttg tcccgctgcc 540

gaagaatctt tacccattga ggtgatggtg gacgccgtgc acaaactcaa gtacgagaac 600

tacacctcct ccttctttat ccgggacatc attaagcccg atcctcctaa gaatttacag 660

ctgaagcctc tcaaaaatag ccggcaagtt gaggtctctt gggaatatcc cgacacttgg 720

agcacacccc acagctactt ctctttaacc ttttgtgtgc aagttcaagg taaaagcaag 780

cgggagaaga aagaccgggt gtttaccgac aaaaccagcg ccaccgtcat ctgtcggaag 840

aacgcctcca tcagcgtgag ggctcaagat cgttattact ccagcagctg gtccgagtgg 900

gccagcgtgc cttgttccgg cggtggagga tccggaggag gtggctccgg cggcggagga 960

tctcgtaacc tccccgtggc tacccccgat cccggaatgt tcccttgttt acaccacagc 1020

cagaatttac tgagggccgt gagcaacatg ctgcagaaag ctaggcagac tttagaattt 1080

tacccttgca ccagcgagga gatcgaccat gaagatatca ccaaggacaa gacatccacc 1140

gtggaggctt gtttacctct ggagctgaca aagaacgagt cttgtctcaa ctctcgtgaa 1200

accagcttca tcacaaatgg ctcttgttta gcttcccgga agacctcctt tatgatggct 1260

ttatgcctca gctccatcta cgaggattta aagatgtacc aagtggagtt caagaccatg 1320

aacgccaagc tgctcatgga ccctaaacgg cagatctttt tagaccagaa catgctggct 1380

gtgattgatg agctgatgca agctttaaac ttcaactccg agaccgtccc tcagaagtcc 1440

tccctcgagg agcccgattt ttacaagaca aagatcaaac tgtgcatttt actccacgcc 1500

tttaggatcc gggccgtgac cattgaccgg gtcatgagct atttaaacgc cagc 1554

<210> 39

<211> 114

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-15”

<400> 39

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 40

<211> 132

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-17”

<400> 40

Gly Ile Thr Ile Pro Arg Asn Pro Gly Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys

1 5 10 15

Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn Leu Asn Ile His Asn Arg Asn

20 25 30

Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr

35 40 45

Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser

50 55 60

Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His Leu Gly Cys Ile Asn Ala Asp

65 70 75 80

Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu Ile

85 90 95

Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Pro His Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu

100 105 110

Glu Lys Ile Leu Val Ser Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Ile Val

115 120 125

His His Val Ala

130

<210> 41

<211> 157

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-18”

<400> 41

Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn

1 5 10 15

Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp

20 25 30

Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile

35 40 45

Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val Thr Ile

50 55 60

Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile

65 70 75 80

Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys

85 90 95

Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys

100 105 110

Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu

115 120 125

Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu

130 135 140

Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp

145 150 155

<210> 42

<211> 471

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性IL-18”

<400> 42

tacttcggca aactggaatc caagctgagc gtgatccgga atttaaacga ccaagttctg 60

tttatcgatc aaggtaaccg gcctctgttc gaggacatga ccgactccga ttgccgggac 120

aatgcccccc ggaccatctt cattatctcc atgtacaagg acagccagcc ccggggcatg 180

gctgtgacaa ttagcgtgaa gtgtgagaaa atcagcactt tatcttgtga gaacaagatc 240

atctccttta aggaaatgaa cccccccgat aacatcaagg acaccaagtc cgatatcatc 300

ttcttccagc ggtccgtgcc cggtcacgat aacaagatgc agttcgaatc ctcctcctac 360

gagggctact ttttagcttg tgaaaaggag agggatttat tcaagctgat cctcaagaag 420

gaggacgagc tgggcgatcg ttccatcatg ttcaccgtcc aaaacgagga t 471

<210> 43

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成测序引物IFNG355R-bio”

<400> 43

caatatacta cacctcctct aactac 26

<210> 44

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 44

Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu

1 5 10 15

Ala

<210> 45

<211> 352

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性PDGF-DD”

<400> 45

Arg Asp Thr Ser Ala Thr Pro Gln Ser Ala Ser Ile Lys Ala Leu Arg

1 5 10 15

Asn Ala Asn Leu Arg Arg Asp Glu Ser Asn His Leu Thr Asp Leu Tyr

20 25 30

Arg Arg Asp Glu Thr Ile Gln Val Lys Gly Asn Gly Tyr Val Gln Ser

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Pro Arg Phe Pro Asn Ser Tyr Pro Arg Asn Leu Leu Leu Thr Trp Arg

50 55 60

Leu His Ser Gln Glu Asn Thr Arg Ile Gln Leu Val Phe Asp Asn Gln

65 70 75 80

Phe Gly Leu Glu Glu Ala Glu Asn Asp Ile Cys Arg Tyr Asp Phe Val

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Glu Val Glu Asp Ile Ser Glu Thr Ser Thr Ile Ile Arg Gly Arg Trp

100 105 110

Cys Gly His Lys Glu Val Pro Pro Arg Ile Lys Ser Arg Thr Asn Gln

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Ile Lys Ile Thr Phe Lys Ser Asp Asp Tyr Phe Val Ala Lys Pro Gly

130 135 140

Phe Lys Ile Tyr Tyr Ser Leu Leu Glu Asp Phe Gln Pro Ala Ala Ala

145 150 155 160

Ser Glu Thr Asn Trp Glu Ser Val Thr Ser Ser Ile Ser Gly Val Ser

165 170 175

Tyr Asn Ser Pro Ser Val Thr Asp Pro Thr Leu Ile Ala Asp Ala Leu

180 185 190

Asp Lys Lys Ile Ala Glu Phe Asp Thr Val Glu Asp Leu Leu Lys Tyr

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Phe Asn Pro Glu Ser Trp Gln Glu Asp Leu Glu Asn Met Tyr Leu Asp

210 215 220

Thr Pro Arg Tyr Arg Gly Arg Ser Tyr His Asp Arg Lys Ser Lys Val

225 230 235 240

Asp Leu Asp Arg Leu Asn Asp Asp Ala Lys Arg Tyr Ser Cys Thr Pro

245 250 255

Arg Asn Tyr Ser Val Asn Ile Arg Glu Glu Leu Lys Leu Ala Asn Val

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Val Phe Phe Pro Arg Cys Leu Leu Val Gln Arg Cys Gly Gly Asn Cys

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Gly Cys Gly Thr Val Asn Trp Arg Ser Cys Thr Cys Asn Ser Gly Lys

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Thr Val Lys Lys Tyr His Glu Val Leu Gln Phe Glu Pro Gly His Ile

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Lys Arg Arg Gly Arg Ala Lys Thr Met Ala Leu Val Asp Ile Gln Leu

325 330 335

Asp His His Glu Arg Cys Asp Cys Ile Cys Ser Ser Arg Pro Pro Arg

340 345 350

<210> 46

<211> 248

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性SCF”

<400> 46

Glu Gly Ile Cys Arg Asn Arg Val Thr Asn Asn Val Lys Asp Val Thr

1 5 10 15

Lys Leu Val Ala Asn Leu Pro Lys Asp Tyr Met Ile Thr Leu Lys Tyr

20 25 30

Val Pro Gly Met Asp Val Leu Pro Ser His Cys Trp Ile Ser Glu Met

35 40 45

Val Val Gln Leu Ser Asp Ser Leu Thr Asp Leu Leu Asp Lys Phe Ser

50 55 60

Asn Ile Ser Glu Gly Leu Ser Asn Tyr Ser Ile Ile Asp Lys Leu Val

65 70 75 80

Asn Ile Val Asp Asp Leu Val Glu Cys Val Lys Glu Asn Ser Ser Lys

85 90 95

Asp Leu Lys Lys Ser Phe Lys Ser Pro Glu Pro Arg Leu Phe Thr Pro

100 105 110

Glu Glu Phe Phe Arg Ile Phe Asn Arg Ser Ile Asp Ala Phe Lys Asp

115 120 125

Phe Val Val Ala Ser Glu Thr Ser Asp Cys Val Val Ser Ser Thr Leu

130 135 140

Ser Pro Glu Lys Asp Ser Arg Val Ser Val Thr Lys Pro Phe Met Leu

145 150 155 160

Pro Pro Val Ala Ala Ser Ser Leu Arg Asn Asp Ser Ser Ser Ser Asn

165 170 175

Arg Lys Ala Lys Asn Pro Pro Gly Asp Ser Ser Leu His Trp Ala Ala

180 185 190

Met Ala Leu Pro Ala Leu Phe Ser Leu Ile Ile Gly Phe Ala Phe Gly

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Ala Leu Tyr Trp Lys Lys Arg Gln Pro Ser Leu Thr Arg Ala Val Glu

210 215 220

Asn Ile Gln Ile Asn Glu Glu Asp Asn Glu Ile Ser Met Leu Gln Glu

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Lys Glu Arg Glu Phe Gln Glu Val

245

<210> 47

<211> 209

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性FLT3L”

<400> 47

Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln His Ser Pro Ile Ser Ser Asp Phe Ala

1 5 10 15

Val Lys Ile Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val

20 25 30

Thr Val Ala Ser Asn Leu Gln Asp Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp

35 40 45

Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala

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Gly Ser Lys Met Gln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu Ile His

65 70 75 80

Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe

85 90 95

Val Gln Thr Asn Ile Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu

100 105 110

Val Ala Leu Lys Pro Trp Ile Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu

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Glu Leu Gln Cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu Pro Pro Pro Trp Ser

130 135 140

Pro Arg Pro Leu Glu Ala Thr Ala Pro Thr Ala Pro Gln Pro Pro Leu

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Leu Leu Leu Leu Leu Leu Pro Val Gly Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala

165 170 175

Trp Cys Leu His Trp Gln Arg Thr Arg Arg Arg Thr Pro Arg Pro Gly

180 185 190

Glu Gln Val Pro Pro Val Pro Ser Pro Gln Asp Leu Leu Leu Val Glu

195 200 205

His

<210> 48

<211> 360

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性云母”

<400> 48

Glu Pro His Ser Leu Arg Tyr Asn Leu Thr Val Leu Ser Trp Asp Gly

1 5 10 15

Ser Val Gln Ser Gly Phe Leu Thr Glu Val His Leu Asp Gly Gln Pro

20 25 30

Phe Leu Arg Cys Asp Arg Gln Lys Cys Arg Ala Lys Pro Gln Gly Gln

35 40 45

Trp Ala Glu Asp Val Leu Gly Asn Lys Thr Trp Asp Arg Glu Thr Arg

50 55 60

Asp Leu Thr Gly Asn Gly Lys Asp Leu Arg Met Thr Leu Ala His Ile

65 70 75 80

Lys Asp Gln Lys Glu Gly Leu His Ser Leu Gln Glu Ile Arg Val Cys

85 90 95

Glu Ile His Glu Asp Asn Ser Thr Arg Ser Ser Gln His Phe Tyr Tyr

100 105 110

Asp Gly Glu Leu Phe Leu Ser Gln Asn Leu Glu Thr Lys Glu Trp Thr

115 120 125

Met Pro Gln Ser Ser Arg Ala Gln Thr Leu Ala Met Asn Val Arg Asn

130 135 140

Phe Leu Lys Glu Asp Ala Met Lys Thr Lys Thr His Tyr His Ala Met

145 150 155 160

His Ala Asp Cys Leu Gln Glu Leu Arg Arg Tyr Leu Lys Ser Gly Val

165 170 175

Val Leu Arg Arg Thr Val Pro Pro Met Val Asn Val Thr Arg Ser Glu

180 185 190

Ala Ser Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gly Phe Tyr

195 200 205

Pro Trp Asn Ile Thr Leu Ser Trp Arg Gln Asp Gly Val Ser Leu Ser

210 215 220

His Asp Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu Pro Asp Gly Asn Gly Thr

225 230 235 240

Tyr Gln Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Cys Gln Gly Glu Glu Gln Arg

245 250 255

Phe Thr Cys Tyr Met Glu His Ser Gly Asn His Ser Thr His Pro Val

260 265 270

Pro Ser Gly Lys Val Leu Val Leu Gln Ser His Trp Gln Thr Phe His

275 280 285

Val Ser Ala Val Ala Ala Ala Ala Ile Phe Val Ile Ile Ile Phe Tyr

290 295 300

Val Arg Cys Cys Lys Lys Lys Thr Ser Ala Ala Glu Gly Pro Glu Leu

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Val Ser Leu Gln Val Leu Asp Gln His Pro Val Gly Thr Ser Asp His

325 330 335

Arg Asp Ala Thr Gln Leu Gly Phe Gln Pro Leu Met Ser Asp Leu Gly

340 345 350

Ser Thr Gly Ser Thr Glu Gly Ala

355 360

<210> 49

<211> 361

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性MICB”

<400> 49

Ala Glu Pro His Ser Leu Arg Tyr Asn Leu Met Val Leu Ser Gln Asp

1 5 10 15

Glu Ser Val Gln Ser Gly Phe Leu Ala Glu Gly His Leu Asp Gly Gln

20 25 30

Pro Phe Leu Arg Tyr Asp Arg Gln Lys Arg Arg Ala Lys Pro Gln Gly

35 40 45

Gln Trp Ala Glu Asp Val Leu Gly Ala Lys Thr Trp Asp Thr Glu Thr

50 55 60

Glu Asp Leu Thr Glu Asn Gly Gln Asp Leu Arg Arg Thr Leu Thr His

65 70 75 80

Ile Lys Asp Gln Lys Gly Gly Leu His Ser Leu Gln Glu Ile Arg Val

85 90 95

Cys Glu Ile His Glu Asp Ser Ser Thr Arg Gly Ser Arg His Phe Tyr

100 105 110

Tyr Asp Gly Glu Leu Phe Leu Ser Gln Asn Leu Glu Thr Gln Glu Ser

115 120 125

Thr Val Pro Gln Ser Ser Arg Ala Gln Thr Leu Ala Met Asn Val Thr

130 135 140

Asn Phe Trp Lys Glu Asp Ala Met Lys Thr Lys Thr His Tyr Arg Ala

145 150 155 160

Met Gln Ala Asp Cys Leu Gln Lys Leu Gln Arg Tyr Leu Lys Ser Gly

165 170 175

Val Ala Ile Arg Arg Thr Val Pro Pro Met Val Asn Val Thr Cys Ser

180 185 190

Glu Val Ser Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Ser Phe

195 200 205

Tyr Pro Arg Asn Ile Thr Leu Thr Trp Arg Gln Asp Gly Val Ser Leu

210 215 220

Ser His Asn Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu Pro Asp Gly Asn Gly

225 230 235 240

Thr Tyr Gln Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Arg Gln Gly Glu Glu Gln

245 250 255

Arg Phe Thr Cys Tyr Met Glu His Ser Gly Asn His Gly Thr His Pro

260 265 270

Val Pro Ser Gly Lys Val Leu Val Leu Gln Ser Gln Arg Thr Asp Phe

275 280 285

Pro Tyr Val Ser Ala Ala Met Pro Cys Phe Val Ile Ile Ile Ile Leu

290 295 300

Cys Val Pro Cys Cys Lys Lys Lys Thr Ser Ala Ala Glu Gly Pro Glu

305 310 315 320

Leu Val Ser Leu Gln Val Leu Asp Gln His Pro Val Gly Thr Gly Asp

325 330 335

His Arg Asp Ala Ala Gln Leu Gly Phe Gln Pro Leu Met Ser Ala Thr

340 345 350

Gly Ser Thr Gly Ser Thr Glu Gly Ala

355 360

<210> 50

<211> 190

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性ULBP1”

<400> 50

Trp Val Asp Thr His Cys Leu Cys Tyr Asp Phe Ile Ile Thr Pro Lys

1 5 10 15

Ser Arg Pro Glu Pro Gln Trp Cys Glu Val Gln Gly Leu Val Asp Glu

20 25 30

Arg Pro Phe Leu His Tyr Asp Cys Val Asn His Lys Ala Lys Ala Phe

35 40 45

Ala Ser Leu Gly Lys Lys Val Asn Val Thr Lys Thr Trp Glu Glu Gln

50 55 60

Thr Glu Thr Leu Arg Asp Val Val Asp Phe Leu Lys Gly Gln Leu Leu

65 70 75 80

Asp Ile Gln Val Glu Asn Leu Ile Pro Ile Glu Pro Leu Thr Leu Gln

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Ala Arg Met Ser Cys Glu His Glu Ala His Gly His Gly Arg Gly Ser

100 105 110

Trp Gln Phe Leu Phe Asn Gly Gln Lys Phe Leu Leu Phe Asp Ser Asn

115 120 125

Asn Arg Lys Trp Thr Ala Leu His Pro Gly Ala Lys Lys Met Thr Glu

130 135 140

Lys Trp Glu Lys Asn Arg Asp Val Thr Met Phe Phe Gln Lys Ile Ser

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Leu Gly Asp Cys Lys Met Trp Leu Glu Glu Phe Leu Met Tyr Trp Glu

165 170 175

Gln Met Leu Asp Pro Thr Lys Pro Pro Ser Leu Ala Pro Gly

180 185 190

<210> 51

<211> 191

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性ULBP2”

<400> 51

Gly Arg Ala Asp Pro His Ser Leu Cys Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro

1 5 10 15

Lys Phe Arg Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp

20 25 30

Glu Lys Thr Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro

35 40 45

Val Ser Pro Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala

50 55 60

Gln Asn Pro Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu

65 70 75 80

Arg Asp Ile Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu

85 90 95

Gln Ala Arg Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly

100 105 110

Ser Trp Gln Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser

115 120 125

Glu Lys Arg Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys

130 135 140

Glu Lys Trp Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Met Ser Phe His Tyr Phe

145 150 155 160

Ser Met Gly Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met

165 170 175

Asp Ser Thr Leu Glu Pro Ser Ala Gly Ala Pro Leu Ala Met Ser

180 185 190

<210> 52

<211> 188

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性ULBP3”

<400> 52

Asp Ala His Ser Leu Trp Tyr Asn Phe Thr Ile Ile His Leu Pro Arg

1 5 10 15

His Gly Gln Gln Trp Cys Glu Val Gln Ser Gln Val Asp Gln Lys Asn

20 25 30

Phe Leu Ser Tyr Asp Cys Gly Ser Asp Lys Val Leu Ser Met Gly His

35 40 45

Leu Glu Glu Gln Leu Tyr Ala Thr Asp Ala Trp Gly Lys Gln Leu Glu

50 55 60

Met Leu Arg Glu Val Gly Gln Arg Leu Arg Leu Glu Leu Ala Asp Thr

65 70 75 80

Glu Leu Glu Asp Phe Thr Pro Ser Gly Pro Leu Thr Leu Gln Val Arg

85 90 95

Met Ser Cys Glu Cys Glu Ala Asp Gly Tyr Ile Arg Gly Ser Trp Gln

100 105 110

Phe Ser Phe Asp Gly Arg Lys Phe Leu Leu Phe Asp Ser Asn Asn Arg

115 120 125

Lys Trp Thr Val Val His Ala Gly Ala Arg Arg Met Lys Glu Lys Trp

130 135 140

Glu Lys Asp Ser Gly Leu Thr Thr Phe Phe Lys Met Val Ser Met Arg

145 150 155 160

Asp Cys Lys Ser Trp Leu Arg Asp Phe Leu Met His Arg Lys Lys Arg

165 170 175

Leu Glu Pro Thr Ala Pro Pro Thr Met Ala Pro Gly

180 185

<210> 53

<211> 233

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性ULBP4”

<400> 53

His Ser Leu Cys Phe Asn Phe Thr Ile Lys Ser Leu Ser Arg Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Trp Cys Glu Ala Gln Val Phe Leu Asn Lys Asn Leu Phe Leu

20 25 30

Gln Tyr Asn Ser Asp Asn Asn Met Val Lys Pro Leu Gly Leu Leu Gly

35 40 45

Lys Lys Val Tyr Ala Thr Ser Thr Trp Gly Glu Leu Thr Gln Thr Leu

50 55 60

Gly Glu Val Gly Arg Asp Leu Arg Met Leu Leu Cys Asp Ile Lys Pro

65 70 75 80

Gln Ile Lys Thr Ser Asp Pro Ser Thr Leu Gln Val Glu Met Phe Cys

85 90 95

Gln Arg Glu Ala Glu Arg Cys Thr Gly Ala Ser Trp Gln Phe Ala Thr

100 105 110

Asn Gly Glu Lys Ser Leu Leu Phe Asp Ala Met Asn Met Thr Trp Thr

115 120 125

Val Ile Asn His Glu Ala Ser Lys Ile Lys Glu Thr Trp Lys Lys Asp

130 135 140

Arg Gly Leu Glu Lys Tyr Phe Arg Lys Leu Ser Lys Gly Asp Cys Asp

145 150 155 160

His Trp Leu Arg Glu Phe Leu Gly His Trp Glu Ala Met Pro Glu Pro

165 170 175

Thr Val Ser Pro Val Asn Ala Ser Asp Ile His Trp Ser Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Pro Asp Arg Trp Ile Ile Leu Gly Ala Phe Ile Leu Leu Val Leu

195 200 205

Met Gly Ile Val Leu Ile Cys Val Trp Trp Gln Asn Gly Glu Trp Gln

210 215 220

Ala Gly Leu Trp Pro Leu Arg Thr Ser

225 230

<210> 54

<211> 193

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性ULBP5”

<400> 54

Gly Leu Ala Asp Pro His Ser Leu Cys Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro

1 5 10 15

Lys Phe Arg Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp

20 25 30

Glu Lys Thr Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Ser Lys Thr Val Thr Pro

35 40 45

Val Ser Pro Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala

50 55 60

Gln Asn Pro Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu

65 70 75 80

Leu Asp Ile Gln Leu Glu Asn Tyr Ile Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu

85 90 95

Gln Ala Arg Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Gly Ser Gly

100 105 110

Ser Trp Gln Leu Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser

115 120 125

Glu Asn Arg Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys

130 135 140

Glu Lys Trp Glu Asn Asp Lys Asp Met Thr Met Ser Phe His Tyr Ile

145 150 155 160

Ser Met Gly Asp Cys Thr Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met

165 170 175

Asp Ser Thr Leu Glu Pro Ser Ala Gly Ala Pro Pro Thr Met Ser Ser

180 185 190

Gly

<210> 55

<211> 193

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人可溶性ULBP6”

<400> 55

Arg Arg Asp Asp Pro His Ser Leu Cys Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro

1 5 10 15

Lys Phe Arg Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp

20 25 30

Glu Lys Thr Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro

35 40 45

Val Ser Pro Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Met Ala Trp Lys Ala

50 55 60

Gln Asn Pro Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu

65 70 75 80

Leu Asp Ile Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu

85 90 95

Gln Ala Arg Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly

100 105 110

Ser Trp Gln Phe Ser Ile Asp Gly Gln Thr Phe Leu Leu Phe Asp Ser

115 120 125

Glu Lys Arg Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys

130 135 140

Glu Lys Trp Glu Asn Asp Lys Asp Val Ala Met Ser Phe His Tyr Ile

145 150 155 160

Ser Met Gly Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met

165 170 175

Asp Ser Thr Leu Glu Pro Ser Ala Gly Ala Pro Leu Ala Met Ser Ser

180 185 190

Gly

<210> 56

<211> 136

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“可溶性TGFβRII受体”

<400> 56

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp

130 135

<210> 57

<211> 408

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“可溶性TGFβRII受体”

<400> 57

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

cagaagtcct gcatgtccaa ctgcacgatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

aacgacaaca tcatcttcag cgaagagtac aacaccagca accctgat 408

<210> 58

<400> 58

000

<210> 59

<400> 59

000

<210> 60

<211> 287

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“可溶性TGFβRII受体”

<400> 60

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

145 150 155 160

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

180 185 190

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

195 200 205

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

210 215 220

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

225 230 235 240

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

245 250 255

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

260 265 270

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp

275 280 285

<210> 61

<211> 861

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“可溶性TGFβRII受体”

<400> 61

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

cagaagtcct gcatgtccaa ctgcacgatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

aacgacaaca tcatcttcag cgaagagtac aacaccagca accctgatgg aggtggcgga 420

tccggaggtg gaggttctgg tggaggtggg agtattcctc cccacgtgca gaagagcgtg 480

aataatgaca tgatcgtgac cgataacaat ggcgccgtga aatttcccca gctgtgcaaa 540

ttctgcgatg tgaggttttc cacctgcgac aaccagaagt cctgtatgag caactgcaca 600

atcacctcca tctgtgagaa gcctcaggag gtgtgcgtgg ctgtctggcg gaagaatgac 660

gagaatatca ccctggaaac cgtctgccac gatcccaagc tgccctacca cgatttcatc 720

ctggaagacg ccgccagccc taagtgcatc atgaaagaga aaaagaagcc tggcgagacc 780

tttttcatgt gctcctgcag cagcgacgaa tgcaacgaca atatcatctt tagcgaggaa 840

tacaatacca gcaaccccga c 861

<210> 62

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 62

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser

<210> 63

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 63

atgaaatggg tgacctttat ttctttactg ttcctcttta gcagcgccta ctcc 54

<210> 64

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 64

atgaagtggg tcacatttat ctctttactg ttcctcttct ccagcgccta cagc 54

<210> 65

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 65

atgaaatggg tgacctttat ttctttactg ttcctcttta gcagcgccta ctcc 54

<210> 66

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 66

Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Leu Gly Val Asn Cys

1 5 10 15

<210> 67

<211> 58

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 67

Met Gly Gln Ile Val Thr Met Phe Glu Ala Leu Pro His Ile Ile Asp

1 5 10 15

Glu Val Ile Asn Ile Val Ile Ile Val Leu Ile Ile Ile Thr Ser Ile

20 25 30

Lys Ala Val Tyr Asn Phe Ala Thr Cys Gly Ile Leu Ala Leu Val Ser

35 40 45

Phe Leu Phe Leu Ala Gly Arg Ser Cys Gly

50 55

<210> 68

<211> 97

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 68

Met Pro Asn His Gln Ser Gly Ser Pro Thr Gly Ser Ser Asp Leu Leu

1 5 10 15

Leu Ser Gly Lys Lys Gln Arg Pro His Leu Ala Leu Arg Arg Lys Arg

20 25 30

Arg Arg Glu Met Arg Lys Ile Asn Arg Lys Val Arg Arg Met Asn Leu

35 40 45

Ala Pro Ile Lys Glu Lys Thr Ala Trp Gln His Leu Gln Ala Leu Ile

50 55 60

Ser Glu Ala Glu Glu Val Leu Lys Thr Ser Gln Thr Pro Gln Asn Ser

65 70 75 80

Leu Thr Leu Phe Leu Ala Leu Leu Ser Val Leu Gly Pro Pro Val Thr

85 90 95

Gly

<210> 69

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 69

Met Asp Ser Lys Gly Ser Ser Gln Lys Gly Ser Arg Leu Leu Leu Leu

1 5 10 15

Leu Val Val Ser Asn Leu Leu Leu Cys Gln Gly Val Val Ser

20 25 30

<210> 70

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成AviTag序列”

<400> 70

Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

1 5 10 15

<210> 71

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成钙调蛋白标签序列”

<400> 71

Lys Arg Arg Trp Lys Lys Asn Phe Ile Ala Val Ser Ala Ala Asn Arg

1 5 10 15

Phe Lys Lys Ile Ser Ser Ser Gly Ala Leu

20 25

<210> 72

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成多谷氨酸盐标签序列”

<400> 72

Glu Glu Glu Glu Glu Glu

1 5

<210> 73

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成E标签序列”

<400> 73

Gly Ala Pro Val Pro Tyr Pro Asp Pro Leu Glu Pro Arg

1 5 10

<210> 74

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成FLAG标签序列”

<400> 74

Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys

1 5

<210> 75

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成HA标签序列”

<400> 75

Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala

1 5

<210> 76

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成his标签序列”

<400> 76

His His His His His

1 5

<210> 77

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成his标签序列”

<400> 77

His His His His His His

1 5

<210> 78

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成his标签序列”

<400> 78

His His His His His His His

1 5

<210> 79

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成his标签序列”

<400> 79

His His His His His His His His

1 5

<210> 80

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成his标签序列”

<400> 80

His His His His His His His His His

1 5

<210> 81

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成his标签序列”

<400> 81

His His His His His His His His His His

1 5 10

<210> 82

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成myc标签序列”

<400> 82

Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu

1 5 10

<210> 83

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成NE标签序列”

<400> 83

Thr Lys Glu Asn Pro Arg Ser Asn Gln Glu Glu Ser Tyr Asp Asp Asn

1 5 10 15

Glu Ser

<210> 84

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成S标签序列”

<400> 84

Lys Glu Thr Ala Ala Ala Lys Phe Glu Arg Gln His Met Asp Ser

1 5 10 15

<210> 85

<211> 38

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成SBP标签序列”

<400> 85

Met Asp Glu Lys Thr Thr Gly Trp Arg Gly Gly His Val Val Glu Gly

1 5 10 15

Leu Ala Gly Glu Leu Glu Gln Leu Arg Ala Arg Leu Glu His His Pro

20 25 30

Gln Gly Gln Arg Glu Pro

35

<210> 86

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成Softag 1序列”

<400> 86

Ser Leu Ala Glu Leu Leu Asn Ala Gly Leu Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 87

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成Softag 3序列”

<400> 87

Thr Gln Asp Pro Ser Arg Val Gly

1 5

<210> 88

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成Spot标签序列”

<400> 88

Pro Asp Arg Val Arg Ala Val Ser His Trp Ser Ser

1 5 10

<210> 89

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成Strep标签序列”

<400> 89

Trp Ser His Pro Gln Phe Glu Lys

1 5

<210> 90

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TC标签序列”

<400> 90

Cys Cys Pro Gly Cys Cys

1 5

<210> 91

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成Ty标签序列”

<400> 91

Glu Val His Thr Asn Gln Asp Pro Leu Asp

1 5 10

<210> 92

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成V5标签序列”

<400> 92

Gly Lys Pro Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr

1 5 10

<210> 93

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成VSV标签序列”

<400> 93

Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys

1 5 10

<210> 94

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成Xpress标签序列”

<400> 94

Asp Leu Tyr Asp Asp Asp Asp Lys

1 5

<210> 95

<400> 95

000

<210> 96

<211> 220

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“野生型人IgG1 Fc区”

<400> 96

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

1 5 10 15

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

20 25 30

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

35 40 45

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

50 55 60

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

65 70 75 80

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

85 90 95

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

100 105 110

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

115 120 125

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

130 135 140

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

145 150 155 160

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

165 170 175

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

180 185 190

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

195 200 205

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

210 215 220

<210> 97

<211> 216

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“野生型人IgG2 Fc区”

<400> 97

Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

1 5 10 15

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

20 25 30

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val

35 40 45

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

50 55 60

Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln

65 70 75 80

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly

85 90 95

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro

100 105 110

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

115 120 125

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

130 135 140

Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

145 150 155 160

Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

165 170 175

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

180 185 190

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

195 200 205

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

210 215

<210> 98

<211> 217

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“野生型人IgG3 Fc”

<400> 98

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

1 5 10 15

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

20 25 30

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr

35 40 45

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

50 55 60

Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

65 70 75 80

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

85 90 95

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln

100 105 110

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

115 120 125

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

130 135 140

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn

145 150 155 160

Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

165 170 175

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile

180 185 190

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln

195 200 205

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

210 215

<210> 99

<211> 217

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“野生型人IgG4 Fc”

<400> 99

Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

1 5 10 15

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

20 25 30

Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr

35 40 45

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

50 55 60

Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

65 70 75 80

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

85 90 95

Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

100 105 110

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met

115 120 125

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

130 135 140

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

145 150 155 160

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

165 170 175

Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val

180 185 190

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

195 200 205

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

210 215

<210> 100

<211> 696

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成抗CD3scFv/TF/抗CD28scFv序列”

<400> 100

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln

115 120 125

Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys

130 135 140

Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys

145 150 155 160

Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser

165 170 175

Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu

180 185 190

Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu

195 200 205

Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp

210 215 220

His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser

225 230 235 240

Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys

245 250 255

Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn

260 265 270

Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser

275 280 285

Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile

290 295 300

Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro

305 310 315 320

Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu

325 330 335

Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro

340 345 350

Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val

355 360 365

Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu

370 375 380

Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys

385 390 395 400

Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe

405 410 415

Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala

420 425 430

Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val

435 440 445

Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Val Gln Leu Gln

450 455 460

Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser

465 470 475 480

Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val Ile Gln Trp Val

485 490 495

Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Asn Pro

500 505 510

Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr

515 520 525

Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ile Thr Ala Tyr Met Glu Phe Ser Ser

530 535 540

Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Asp

545 550 555 560

Gly Asn Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly

565 570 575

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu

580 585 590

Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val

595 600 605

Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Phe His

610 615 620

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Cys Ile Tyr Ser

625 630 635 640

Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly

645 650 655

Ser Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala

660 665 670

Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro Thr Phe Gly Gly

675 680 685

Gly Thr Lys Leu Glu Thr Lys Arg

690 695

<210> 101

<211> 2088

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成抗CD3scFv/TF/抗CD28scFv序列”

<400> 101

cagatcgtgc tgacccaaag ccccgccatc atgagcgcta gccccggtga gaaggtgacc 60

atgacatgct ccgcttccag ctccgtgtcc tacatgaact ggtatcagca gaaaagcgga 120

accagcccca aaaggtggat ctacgacacc agcaagctgg cctccggagt gcccgctcat 180

ttccggggct ctggatccgg caccagctac tctttaacca tttccggcat ggaagctgaa 240

gacgctgcca cctactattg ccagcaatgg agcagcaacc ccttcacatt cggatctggc 300

accaagctcg aaatcaatcg tggaggaggt ggcagcggcg gcggtggatc cggcggagga 360

ggaagccaag ttcaactcca gcagagcggc gctgaactgg cccggcccgg cgcctccgtc 420

aagatgagct gcaaggcttc cggctataca tttactcgtt acacaatgca ttgggtcaag 480

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aactataacc aaaagttcaa ggataaagcc actttaacca ctgacaagag ctcctccacc 600

gcctacatgc agctgtcctc tttaaccagc gaggactccg ctgtttacta ctgcgctagg 660

tattacgacg accactactg tttagactat tggggacaag gtaccacttt aaccgtcagc 720

agctccggca ccaccaatac cgtggccgct tataacctca catggaagag caccaacttc 780

aagacaattc tggaatggga acccaagccc gtcaatcaag tttacaccgt gcagatctcc 840

accaaatccg gagactggaa gagcaagtgc ttctacacaa cagacaccga gtgtgattta 900

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gctggcaatg tcgagtccac cggctccgct ggcgagcctc tctacgagaa ttcccccgaa 1020

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ggcaccaagg tgaacgtcac cgtcgaggat gaaaggactt tagtgcggcg gaataacaca 1140

tttttatccc tccgggatgt gttcggcaaa gacctcatct acacactgta ctattggaag 1200

tccagctcct ccggcaaaaa gaccgctaag accaacacca acgagttttt aattgacgtg 1260

gacaaaggcg agaactactg cttcagcgtg caagccgtga tcccttctcg taccgtcaac 1320

cggaagagca cagattcccc cgttgagtgc atgggccaag aaaagggcga gttccgggag 1380

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tgtaaggcca gcggatacac cttcacctcc tatgtgatcc agtgggtcaa acagaagccc 1500

ggacaaggtc tcgagtggat cggcagcatc aacccttaca acgactatac caaatacaac 1560

gagaagttta agggaaaggc tactttaacc tccgacaaaa gctccatcac agcctacatg 1620

gagttcagct ctttaacatc cgaggacagc gctctgtact attgcgcccg gtggggcgac 1680

ggcaattact ggggacgggg cacaacactg accgtgagca gcggaggcgg aggctccggc 1740

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tctttaacca tctcctccat ggaggctgag gatgccgcca cctacttttg tcaccagtac 2040

caccggtccc ccaccttcgg aggcggcacc aaactggaga caaagagg 2088

<210> 102

<211> 714

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成抗CD3scFv/TF/抗CD28scFv序列”

<400> 102

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser

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Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser

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Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp

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65 70 75 80

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu

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Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro

100 105 110

Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu

130 135 140

Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met

145 150 155 160

Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp

165 170 175

Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn

180 185 190

Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala

195 200 205

Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser

210 215 220

Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr

225 230 235 240

Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr

245 250 255

Val Ser Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr

260 265 270

Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro

275 280 285

Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp

290 295 300

Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp

305 310 315 320

Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser

325 330 335

Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu

340 345 350

Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly

355 360 365

Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val

370 375 380

Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu

385 390 395 400

Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr

405 410 415

Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn

420 425 430

Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val

435 440 445

Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser

450 455 460

Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Val Gln

465 470 475 480

Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys

485 490 495

Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val Ile Gln

500 505 510

Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile

515 520 525

Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys

530 535 540

Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ile Thr Ala Tyr Met Glu Phe

545 550 555 560

Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp

565 570 575

Gly Asp Gly Asn Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

580 585 590

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp

595 600 605

Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly Glu

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Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr

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Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Cys Ile

645 650 655

Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly

660 665 670

Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

675 680 685

Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro Thr Phe

690 695 700

Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Thr Lys Arg

705 710

<210> 103

<211> 2142

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成抗CD3scFv/TF/抗CD28scFv序列”

<400> 103

atgaagtggg tgaccttcat cagcttatta tttttattca gctccgccta ttcccagatc 60

gtgctgaccc aaagccccgc catcatgagc gctagccccg gtgagaaggt gaccatgaca 120

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gacgaccact actgtttaga ctattgggga caaggtacca ctttaaccgt cagcagctcc 780

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<210> 104

<211> 399

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“ IL-2”

<400> 104

gcacctactt caagttctac aaagaaaaca cagctacaac tggagcattt actgctggat 60

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agacccaggg acttaatcag caatatcaac gtaatagttc tggaactaaa gggatctgaa 300

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<210> 105

<211> 399

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“ IL-2”

<400> 105

gcccccacct cctcctccac caagaagacc cagctgcagc tggagcattt actgctggat 60

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accaccttca tgtgcgagta cgccgacgag accgccacca tcgtggagtt tttaaatcgt 360

tggatcacct tctgccagtc catcatctcc actttaacc 399

<210> 106

<211> 485

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-2/TF/IL-2序列”

<400> 106

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

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Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

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Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

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Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

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Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn

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Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro

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Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly

165 170 175

Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu

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Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val

195 200 205

Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu

210 215 220

Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn

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Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val

245 250 255

Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr

260 265 270

Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu

275 280 285

Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn

290 295 300

Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe

305 310 315 320

Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr

325 330 335

Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

340 345 350

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

355 360 365

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

370 375 380

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

385 390 395 400

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

405 410 415

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

420 425 430

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

435 440 445

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

450 455 460

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

465 470 475 480

Ile Ser Thr Leu Thr

485

<210> 107

<211> 1455

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-2/TF/IL-2序列”

<400> 107

gcccccacct cctcctccac caagaagacc cagctgcagc tggagcattt actgctggat 60

ttacagatga ttttaaacgg catcaacaac tacaagaacc ccaagctgac tcgtatgctg 120

accttcaagt tctacatgcc caagaaggcc accgagctga agcatttaca gtgtttagag 180

gaggagctga agcccctcga ggaggtgctg aatttagccc agtccaagaa tttccattta 240

aggccccggg atttaatcag caacatcaac gtgatcgttt tagagctgaa gggctccgag 300

accaccttca tgtgcgagta cgccgacgag accgccacca tcgtggagtt tttaaatcgt 360

tggatcacct tctgccagtc catcatctcc actttaacca gcggcacaac caacacagtc 420

gctgcctata acctcacttg gaagagcacc aacttcaaaa ccatcctcga atgggaaccc 480

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aaacagacct acctcgcccg ggtgtttagc taccccgccg gcaatgtgga gagcactggt 660

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ttaggacagc ccaccatcca aagctttgag caagttggca caaaggtgaa tgtgacagtg 780

gaggacgagc ggactttagt gcggcggaac aacacctttc tcagcctccg ggatgtgttc 840

ggcaaagatt taatctacac actgtattac tggaagtcct cttcctccgg caagaagaca 900

gctaaaacca acacaaacga gtttttaatc gacgtggata aaggcgaaaa ctactgtttc 960

agcgtgcaag ctgtgatccc ctcccggacc gtgaatagga aaagcaccga tagccccgtt 1020

gagtgcatgg gccaagaaaa gggcgagttc cgggaggcac ctacttcaag ttctacaaag 1080

aaaacacagc tacaactgga gcatttactg ctggatttac agatgatttt gaatggaatt 1140

aataattaca agaatcccaa actcaccagg atgctcacat ttaagtttta catgcccaag 1200

aaggccacag aactgaaaca tcttcagtgt ctagaagaag aactcaaacc tctggaggaa 1260

gtgctaaatt tagctcaaag caaaaacttt cacttaagac ccagggactt aatcagcaat 1320

atcaacgtaa tagttctgga actaaaggga tctgaaacaa cattcatgtg tgaatatgct 1380

gatgagacag caaccattgt agaatttctg aacagatgga ttaccttttg tcaaagcatc 1440

atctcaacac taact 1455

<210> 108

<211> 503

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-2/TF/IL-2序列”

<400> 108

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu

20 25 30

Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn

35 40 45

Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met

50 55 60

Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu

65 70 75 80

Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe

85 90 95

His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu

100 105 110

Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu

115 120 125

Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln

130 135 140

Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala

145 150 155 160

Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp

165 170 175

Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys

180 185 190

Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys

195 200 205

Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala

210 215 220

Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala

225 230 235 240

Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu

245 250 255

Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr

260 265 270

Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn

275 280 285

Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr

290 295 300

Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys

305 310 315 320

Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr

325 330 335

Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys

340 345 350

Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe

355 360 365

Arg Glu Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu

370 375 380

Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn

385 390 395 400

Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met

405 410 415

Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu

420 425 430

Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe

435 440 445

His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu

450 455 460

Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu

465 470 475 480

Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln

485 490 495

Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

500

<210> 109

<211> 1509

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-2/TF/IL-2序列”

<400> 109

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccgccccc 60

acctcctcct ccaccaagaa gacccagctg cagctggagc atttactgct ggatttacag 120

atgattttaa acggcatcaa caactacaag aaccccaagc tgactcgtat gctgaccttc 180

aagttctaca tgcccaagaa ggccaccgag ctgaagcatt tacagtgttt agaggaggag 240

ctgaagcccc tcgaggaggt gctgaattta gcccagtcca agaatttcca tttaaggccc 300

cgggatttaa tcagcaacat caacgtgatc gttttagagc tgaagggctc cgagaccacc 360

ttcatgtgcg agtacgccga cgagaccgcc accatcgtgg agtttttaaa tcgttggatc 420

accttctgcc agtccatcat ctccacttta accagcggca caaccaacac agtcgctgcc 480

tataacctca cttggaagag caccaacttc aaaaccatcc tcgaatggga acccaaaccc 540

gttaaccaag tttacaccgt gcagatcagc accaagtccg gcgactggaa gtccaaatgt 600

ttctatacca ccgacaccga gtgcgatctc accgatgaga tcgtgaaaga tgtgaaacag 660

acctacctcg cccgggtgtt tagctacccc gccggcaatg tggagagcac tggttccgct 720

ggcgagcctt tatacgagaa cagccccgaa tttacccctt acctcgagac caatttagga 780

cagcccacca tccaaagctt tgagcaagtt ggcacaaagg tgaatgtgac agtggaggac 840

gagcggactt tagtgcggcg gaacaacacc tttctcagcc tccgggatgt gttcggcaaa 900

gatttaatct acacactgta ttactggaag tcctcttcct ccggcaagaa gacagctaaa 960

accaacacaa acgagttttt aatcgacgtg gataaaggcg aaaactactg tttcagcgtg 1020

caagctgtga tcccctcccg gaccgtgaat aggaaaagca ccgatagccc cgttgagtgc 1080

atgggccaag aaaagggcga gttccgggag gcacctactt caagttctac aaagaaaaca 1140

cagctacaac tggagcattt actgctggat ttacagatga ttttgaatgg aattaataat 1200

tacaagaatc ccaaactcac caggatgctc acatttaagt tttacatgcc caagaaggcc 1260

acagaactga aacatcttca gtgtctagaa gaagaactca aacctctgga ggaagtgcta 1320

aatttagctc aaagcaaaaa ctttcactta agacccaggg acttaatcag caatatcaac 1380

gtaatagttc tggaactaaa gggatctgaa acaacattca tgtgtgaata tgctgatgag 1440

acagcaacca ttgtagaatt tctgaacaga tggattacct tttgtcaaag catcatctca 1500

acactaact 1509

<210> 110

<211> 342

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“ IL-15”

<400> 110

aactgggtga acgtcatcag cgatttaaag aagatcgaag atttaattca gtccatgcat 60

atcgacgcca ctttatacac agaatccgac gtgcacccct cttgtaaggt gaccgccatg 120

aaatgttttt tactggagct gcaagttatc tctttagaga gcggagacgc tagcatccac 180

gacaccgtgg agaatttaat cattttagcc aataactctt tatccagcaa cggcaacgtg 240

acagagtccg gctgcaagga gtgcgaagag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300

caatcctttg tgcacattgt ccagatgttc atcaatacct cc 342

<210> 111

<211> 342

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“ IL-15”

<400> 111

aactgggtga acgtgatcag cgatttaaag aagatcgagg atttaatcca gagcatgcac 60

atcgacgcca ctctgtacac tgagagcgac gtgcacccta gctgcaaggt gactgccatg 120

aagtgctttt tactggagct gcaagttatc tctttagaga gcggcgatgc cagcatccac 180

gacactgtgg agaatttaat cattttagcc aacaactctt taagcagcaa cggcaacgtg 240

acagagagcg gctgcaagga gtgcgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagttttta 300

cagagcttcg tgcacatcgt gcagatgttc atcaacacta gc 342

<210> 112

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-15/TF/IL-15序列”

<400> 112

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp

115 120 125

Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val

130 135 140

Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys

145 150 155 160

Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu

165 170 175

Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr

180 185 190

Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr

195 200 205

Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln

210 215 220

Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr

225 230 235 240

Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser

245 250 255

Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp

260 265 270

Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu

275 280 285

Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln

290 295 300

Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro

305 310 315 320

Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val

325 330 335

Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met

340 345 350

His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys

355 360 365

Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser

370 375 380

Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile

385 390 395 400

Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser

405 410 415

Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe

420 425 430

Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

435 440 445

<210> 113

<211> 1341

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-15/TF/IL-15序列”

<400> 113

aactgggtga acgtgatcag cgatttaaag aagatcgagg atttaatcca gagcatgcac 60

atcgacgcca ctctgtacac tgagagcgac gtgcacccta gctgcaaggt gactgccatg 120

aagtgctttt tactggagct gcaagttatc tctttagaga gcggcgatgc cagcatccac 180

gacactgtgg agaatttaat cattttagcc aacaactctt taagcagcaa cggcaacgtg 240

acagagagcg gctgcaagga gtgcgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagttttta 300

cagagcttcg tgcacatcgt gcagatgttc atcaacacta gcagcggcac aaccaacaca 360

gtcgctgcct ataacctcac ttggaagagc accaacttca aaaccatcct cgaatgggaa 420

cccaaacccg ttaaccaagt ttacaccgtg cagatcagca ccaagtccgg cgactggaag 480

tccaaatgtt tctataccac cgacaccgag tgcgatctca ccgatgagat cgtgaaagat 540

gtgaaacaga cctacctcgc ccgggtgttt agctaccccg ccggcaatgt ggagagcact 600

ggttccgctg gcgagccttt atacgagaac agccccgaat ttacccctta cctcgagacc 660

aatttaggac agcccaccat ccaaagcttt gagcaagttg gcacaaaggt gaatgtgaca 720

gtggaggacg agcggacttt agtgcggcgg aacaacacct ttctcagcct ccgggatgtg 780

ttcggcaaag atttaatcta cacactgtat tactggaagt cctcttcctc cggcaagaag 840

acagctaaaa ccaacacaaa cgagttttta atcgacgtgg ataaaggcga aaactactgt 900

ttcagcgtgc aagctgtgat cccctcccgg accgtgaata ggaaaagcac cgatagcccc 960

gttgagtgca tgggccaaga aaagggcgag ttccgggaga actgggtgaa cgtcatcagc 1020

gatttaaaga agatcgaaga tttaattcag tccatgcata tcgacgccac tttatacaca 1080

gaatccgacg tgcacccctc ttgtaaggtg accgccatga aatgtttttt actggagctg 1140

caagttatct ctttagagag cggagacgct agcatccacg acaccgtgga gaatttaatc 1200

attttagcca ataactcttt atccagcaac ggcaacgtga cagagtccgg ctgcaaggag 1260

tgcgaagagc tggaggagaa gaacatcaag gagtttctgc aatcctttgt gcacattgtc 1320

cagatgttca tcaatacctc c 1341

<210> 114

<211> 465

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-15/TF/IL-15序列”

<400> 114

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp

20 25 30

Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp

35 40 45

Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu

50 55 60

Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr

65 70 75 80

Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly

85 90 95

Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys

100 105 110

Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe

115 120 125

Ile Asn Thr Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu

130 135 140

Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys

145 150 155 160

Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp

165 170 175

Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr

180 185 190

Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe

195 200 205

Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro

210 215 220

Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu

225 230 235 240

Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn

245 250 255

Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe

260 265 270

Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr

275 280 285

Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr

290 295 300

Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser

305 310 315 320

Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp

325 330 335

Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn

340 345 350

Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln

355 360 365

Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro

370 375 380

Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val

385 390 395 400

Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn

405 410 415

Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr

420 425 430

Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys

435 440 445

Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr

450 455 460

Ser

465

<210> 115

<211> 1395

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-15/TF/IL-15序列”

<400> 115

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccaactgg 60

gtgaacgtga tcagcgattt aaagaagatc gaggatttaa tccagagcat gcacatcgac 120

gccactctgt acactgagag cgacgtgcac cctagctgca aggtgactgc catgaagtgc 180

tttttactgg agctgcaagt tatctcttta gagagcggcg atgccagcat ccacgacact 240

gtggagaatt taatcatttt agccaacaac tctttaagca gcaacggcaa cgtgacagag 300

agcggctgca aggagtgcga ggagctggag gagaagaaca tcaaggagtt tttacagagc 360

ttcgtgcaca tcgtgcagat gttcatcaac actagcagcg gcacaaccaa cacagtcgct 420

gcctataacc tcacttggaa gagcaccaac ttcaaaacca tcctcgaatg ggaacccaaa 480

cccgttaacc aagtttacac cgtgcagatc agcaccaagt ccggcgactg gaagtccaaa 540

tgtttctata ccaccgacac cgagtgcgat ctcaccgatg agatcgtgaa agatgtgaaa 600

cagacctacc tcgcccgggt gtttagctac cccgccggca atgtggagag cactggttcc 660

gctggcgagc ctttatacga gaacagcccc gaatttaccc cttacctcga gaccaattta 720

ggacagccca ccatccaaag ctttgagcaa gttggcacaa aggtgaatgt gacagtggag 780

gacgagcgga ctttagtgcg gcggaacaac acctttctca gcctccggga tgtgttcggc 840

aaagatttaa tctacacact gtattactgg aagtcctctt cctccggcaa gaagacagct 900

aaaaccaaca caaacgagtt tttaatcgac gtggataaag gcgaaaacta ctgtttcagc 960

gtgcaagctg tgatcccctc ccggaccgtg aataggaaaa gcaccgatag ccccgttgag 1020

tgcatgggcc aagaaaaggg cgagttccgg gagaactggg tgaacgtcat cagcgattta 1080

aagaagatcg aagatttaat tcagtccatg catatcgacg ccactttata cacagaatcc 1140

gacgtgcacc cctcttgtaa ggtgaccgcc atgaaatgtt ttttactgga gctgcaagtt 1200

atctctttag agagcggaga cgctagcatc cacgacaccg tggagaattt aatcatttta 1260

gccaataact ctttatccag caacggcaac gtgacagagt ccggctgcaa ggagtgcgaa 1320

gagctggagg agaagaacat caaggagttt ctgcaatcct ttgtgcacat tgtccagatg 1380

ttcatcaata cctcc 1395

<210> 116

<211> 490

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-18/TF/IL-15：

IL-12/IL-15RalphaSu序列”

<400> 116

Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn

1 5 10 15

Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp

20 25 30

Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile

35 40 45

Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val Thr Ile

50 55 60

Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile

65 70 75 80

Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys

85 90 95

Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys

100 105 110

Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu

115 120 125

Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu

130 135 140

Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp Ser Gly Thr

145 150 155 160

Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe

165 170 175

Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr

180 185 190

Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr

195 200 205

Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val

210 215 220

Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val

225 230 235 240

Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu

245 250 255

Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser

260 265 270

Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg

275 280 285

Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe

290 295 300

Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser

305 310 315 320

Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val

325 330 335

Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser

340 345 350

Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly

355 360 365

Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp

370 375 380

Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr

385 390 395 400

Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met

405 410 415

Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp

420 425 430

Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn

435 440 445

Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys

450 455 460

Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val

465 470 475 480

His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

485 490

<210> 117

<211> 1470

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-18/TF/IL-15：

IL-12/IL-15RalphaSu序列”

<400> 117

tacttcggca aactggaatc caagctgagc gtgatccgga atttaaacga ccaagttctg 60

tttatcgatc aaggtaaccg gcctctgttc gaggacatga ccgactccga ttgccgggac 120

aatgcccccc ggaccatctt cattatctcc atgtacaagg acagccagcc ccggggcatg 180

gctgtgacaa ttagcgtgaa gtgtgagaaa atcagcactt tatcttgtga gaacaagatc 240

atctccttta aggaaatgaa cccccccgat aacatcaagg acaccaagtc cgatatcatc 300

ttcttccagc ggtccgtgcc cggtcacgat aacaagatgc agttcgaatc ctcctcctac 360

gagggctact ttttagcttg tgaaaaggag agggatttat tcaagctgat cctcaagaag 420

gaggacgagc tgggcgatcg ttccatcatg ttcaccgtcc aaaacgagga tagcggcaca 480

accaacacag tcgctgccta taacctcact tggaagagca ccaacttcaa aaccatcctc 540

gaatgggaac ccaaacccgt taaccaagtt tacaccgtgc agatcagcac caagtccggc 600

gactggaagt ccaaatgttt ctataccacc gacaccgagt gcgatctcac cgatgagatc 660

gtgaaagatg tgaaacagac ctacctcgcc cgggtgttta gctaccccgc cggcaatgtg 720

gagagcactg gttccgctgg cgagccttta tacgagaaca gccccgaatt taccccttac 780

ctcgagacca atttaggaca gcccaccatc caaagctttg agcaagttgg cacaaaggtg 840

aatgtgacag tggaggacga gcggacttta gtgcggcgga acaacacctt tctcagcctc 900

cgggatgtgt tcggcaaaga tttaatctac acactgtatt actggaagtc ctcttcctcc 960

ggcaagaaga cagctaaaac caacacaaac gagtttttaa tcgacgtgga taaaggcgaa 1020

aactactgtt tcagcgtgca agctgtgatc ccctcccgga ccgtgaatag gaaaagcacc 1080

gatagccccg ttgagtgcat gggccaagaa aagggcgagt tccgggagaa ctgggtgaac 1140

gtcatcagcg atttaaagaa gatcgaagat ttaattcagt ccatgcatat cgacgccact 1200

ttatacacag aatccgacgt gcacccctct tgtaaggtga ccgccatgaa atgtttttta 1260

ctggagctgc aagttatctc tttagagagc ggagacgcta gcatccacga caccgtggag 1320

aatttaatca ttttagccaa taactcttta tccagcaacg gcaacgtgac agagtccggc 1380

tgcaaggagt gcgaagagct ggaggagaag aacatcaagg agtttctgca atcctttgtg 1440

cacattgtcc agatgttcat caatacctcc 1470

<210> 118

<211> 508

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-18/TF/IL-15：

IL-12/IL-15RalphaSu序列”

<400> 118

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn

20 25 30

Leu Asn Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe

35 40 45

Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile

50 55 60

Phe Ile Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val

65 70 75 80

Thr Ile Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn

85 90 95

Lys Ile Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp

100 105 110

Thr Lys Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp

115 120 125

Asn Lys Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala

130 135 140

Cys Glu Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp

145 150 155 160

Glu Leu Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp Ser

165 170 175

Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr

180 185 190

Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val

195 200 205

Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys

210 215 220

Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys

225 230 235 240

Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly

245 250 255

Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser

260 265 270

Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile

275 280 285

Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp

290 295 300

Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp

305 310 315 320

Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser

325 330 335

Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile

340 345 350

Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile

355 360 365

Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys

370 375 380

Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile

385 390 395 400

Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp

405 410 415

Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr

420 425 430

Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser

435 440 445

Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala

450 455 460

Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys

465 470 475 480

Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser

485 490 495

Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

500 505

<210> 119

<211> 1524

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-18/TF/IL-15：IL-12/IL-15RαSu序列”

<400> 119

atgaagtggg tcacatttat ctctttactg ttcctcttct ccagcgccta cagctacttc 60

ggcaaactgg aatccaagct gagcgtgatc cggaatttaa acgaccaagt tctgtttatc 120

gatcaaggta accggcctct gttcgaggac atgaccgact ccgattgccg ggacaatgcc 180

ccccggacca tcttcattat ctccatgtac aaggacagcc agccccgggg catggctgtg 240

acaattagcg tgaagtgtga gaaaatcagc actttatctt gtgagaacaa gatcatctcc 300

tttaaggaaa tgaacccccc cgataacatc aaggacacca agtccgatat catcttcttc 360

cagcggtccg tgcccggtca cgataacaag atgcagttcg aatcctcctc ctacgagggc 420

tactttttag cttgtgaaaa ggagagggat ttattcaagc tgatcctcaa gaaggaggac 480

gagctgggcg atcgttccat catgttcacc gtccaaaacg aggatagcgg cacaaccaac 540

acagtcgctg cctataacct cacttggaag agcaccaact tcaaaaccat cctcgaatgg 600

gaacccaaac ccgttaacca agtttacacc gtgcagatca gcaccaagtc cggcgactgg 660

aagtccaaat gtttctatac caccgacacc gagtgcgatc tcaccgatga gatcgtgaaa 720

gatgtgaaac agacctacct cgcccgggtg tttagctacc ccgccggcaa tgtggagagc 780

actggttccg ctggcgagcc tttatacgag aacagccccg aatttacccc ttacctcgag 840

accaatttag gacagcccac catccaaagc tttgagcaag ttggcacaaa ggtgaatgtg 900

acagtggagg acgagcggac tttagtgcgg cggaacaaca cctttctcag cctccgggat 960

gtgttcggca aagatttaat ctacacactg tattactgga agtcctcttc ctccggcaag 1020

aagacagcta aaaccaacac aaacgagttt ttaatcgacg tggataaagg cgaaaactac 1080

tgtttcagcg tgcaagctgt gatcccctcc cggaccgtga ataggaaaag caccgatagc 1140

cccgttgagt gcatgggcca agaaaagggc gagttccggg agaactgggt gaacgtcatc 1200

agcgatttaa agaagatcga agatttaatt cagtccatgc atatcgacgc cactttatac 1260

acagaatccg acgtgcaccc ctcttgtaag gtgaccgcca tgaaatgttt tttactggag 1320

ctgcaagtta tctctttaga gagcggagac gctagcatcc acgacaccgt ggagaattta 1380

atcattttag ccaataactc tttatccagc aacggcaacg tgacagagtc cggctgcaag 1440

gagtgcgaag agctggagga gaagaacatc aaggagtttc tgcaatcctt tgtgcacatt 1500

gtccagatgt tcatcaatac ctcc 1524

<210> 120

<211> 583

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-12/IL-15RαSu序列”

<400> 120

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

325 330 335

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

340 345 350

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

355 360 365

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

370 375 380

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

385 390 395 400

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

405 410 415

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

420 425 430

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

435 440 445

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

450 455 460

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

465 470 475 480

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

485 490 495

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

500 505 510

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu

515 520 525

His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg

530 535 540

Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu

545 550 555 560

Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr

565 570 575

Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

580

<210> 121

<211> 1749

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-12/IL-15RαSu序列”

<400> 121

atttgggaac tgaagaagga cgtctacgtg gtcgaactgg actggtatcc cgatgctccc 60

ggcgaaatgg tggtgctcac ttgtgacacc cccgaagaag acggcatcac ttggaccctc 120

gatcagagca gcgaggtgct gggctccgga aagaccctca caatccaagt taaggagttc 180

ggagacgctg gccaatacac atgccacaag ggaggcgagg tgctcagcca ttccttatta 240

ttattacaca agaaggaaga cggaatctgg tccaccgaca ttttaaaaga tcagaaggag 300

cccaagaata agaccttttt aaggtgtgag gccaaaaact acagcggtcg tttcacttgt 360

tggtggctga ccaccatttc caccgattta accttctccg tgaaaagcag ccggggaagc 420

tccgaccctc aaggtgtgac atgtggagcc gctaccctca gcgctgagag ggttcgtggc 480

gataacaagg aatacgagta cagcgtggag tgccaagaag atagcgcttg tcccgctgcc 540

gaagaatctt tacccattga ggtgatggtg gacgccgtgc acaaactcaa gtacgagaac 600

tacacctcct ccttctttat ccgggacatc attaagcccg atcctcctaa gaatttacag 660

ctgaagcctc tcaaaaatag ccggcaagtt gaggtctctt gggaatatcc cgacacttgg 720

agcacacccc acagctactt ctctttaacc ttttgtgtgc aagttcaagg taaaagcaag 780

cgggagaaga aagaccgggt gtttaccgac aaaaccagcg ccaccgtcat ctgtcggaag 840

aacgcctcca tcagcgtgag ggctcaagat cgttattact ccagcagctg gtccgagtgg 900

gccagcgtgc cttgttccgg cggtggagga tccggaggag gtggctccgg cggcggagga 960

tctcgtaacc tccccgtggc tacccccgat cccggaatgt tcccttgttt acaccacagc 1020

cagaatttac tgagggccgt gagcaacatg ctgcagaaag ctaggcagac tttagaattt 1080

tacccttgca ccagcgagga gatcgaccat gaagatatca ccaaggacaa gacatccacc 1140

gtggaggctt gtttacctct ggagctgaca aagaacgagt cttgtctcaa ctctcgtgaa 1200

accagcttca tcacaaatgg ctcttgttta gcttcccgga agacctcctt tatgatggct 1260

ttatgcctca gctccatcta cgaggattta aagatgtacc aagtggagtt caagaccatg 1320

aacgccaagc tgctcatgga ccctaaacgg cagatctttt tagaccagaa catgctggct 1380

gtgattgatg agctgatgca agctttaaac ttcaactccg agaccgtccc tcagaagtcc 1440

tccctcgagg agcccgattt ttacaagaca aagatcaaac tgtgcatttt actccacgcc 1500

tttaggatcc gggccgtgac cattgaccgg gtcatgagct atttaaacgc cagcattaca 1560

tgcccccctc ccatgagcgt ggagcacgcc gacatctggg tgaagagcta tagcctctac 1620

agccgggaga ggtatatctg taacagcggc ttcaagagga aggccggcac cagcagcctc 1680

accgagtgcg tgctgaataa ggctaccaac gtggctcact ggacaacacc ctctttaaag 1740

tgcatccgg 1749

<210> 122

<211> 601

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-12/IL-15RαSu序列”

<400> 122

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp

20 25 30

Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr

35 40 45

Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val

50 55 60

Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp

65 70 75 80

Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser

85 90 95

Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile

100 105 110

Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu

115 120 125

Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile

130 135 140

Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val

165 170 175

Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp

180 185 190

Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val

195 200 205

Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe

210 215 220

Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys

225 230 235 240

Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp

245 250 255

Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln

260 265 270

Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp

275 280 285

Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val

290 295 300

Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser

305 310 315 320

Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

325 330 335

Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe

340 345 350

Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met

355 360 365

Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu

370 375 380

Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu

385 390 395 400

Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser

405 410 415

Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys

420 425 430

Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu

435 440 445

Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met

450 455 460

Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile

465 470 475 480

Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln

485 490 495

Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu

500 505 510

Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg

515 520 525

Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser

530 535 540

Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg

545 550 555 560

Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser

565 570 575

Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp

580 585 590

Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

595 600

<210> 123

<211> 1803

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-12/IL-15RαSu序列”

<400> 123

atgaaatggg tgacctttat ttctttactg ttcctcttta gcagcgccta ctccatttgg 60

gaactgaaga aggacgtcta cgtggtcgaa ctggactggt atcccgatgc tcccggcgaa 120

atggtggtgc tcacttgtga cacccccgaa gaagacggca tcacttggac cctcgatcag 180

agcagcgagg tgctgggctc cggaaagacc ctcacaatcc aagttaagga gttcggagac 240

gctggccaat acacatgcca caagggaggc gaggtgctca gccattcctt attattatta 300

cacaagaagg aagacggaat ctggtccacc gacattttaa aagatcagaa ggagcccaag 360

aataagacct ttttaaggtg tgaggccaaa aactacagcg gtcgtttcac ttgttggtgg 420

ctgaccacca tttccaccga tttaaccttc tccgtgaaaa gcagccgggg aagctccgac 480

cctcaaggtg tgacatgtgg agccgctacc ctcagcgctg agagggttcg tggcgataac 540

aaggaatacg agtacagcgt ggagtgccaa gaagatagcg cttgtcccgc tgccgaagaa 600

tctttaccca ttgaggtgat ggtggacgcc gtgcacaaac tcaagtacga gaactacacc 660

tcctccttct ttatccggga catcattaag cccgatcctc ctaagaattt acagctgaag 720

cctctcaaaa atagccggca agttgaggtc tcttgggaat atcccgacac ttggagcaca 780

ccccacagct acttctcttt aaccttttgt gtgcaagttc aaggtaaaag caagcgggag 840

aagaaagacc gggtgtttac cgacaaaacc agcgccaccg tcatctgtcg gaagaacgcc 900

tccatcagcg tgagggctca agatcgttat tactccagca gctggtccga gtgggccagc 960

gtgccttgtt ccggcggtgg aggatccgga ggaggtggct ccggcggcgg aggatctcgt 1020

aacctccccg tggctacccc cgatcccgga atgttccctt gtttacacca cagccagaat 1080

ttactgaggg ccgtgagcaa catgctgcag aaagctaggc agactttaga attttaccct 1140

tgcaccagcg aggagatcga ccatgaagat atcaccaagg acaagacatc caccgtggag 1200

gcttgtttac ctctggagct gacaaagaac gagtcttgtc tcaactctcg tgaaaccagc 1260

ttcatcacaa atggctcttg tttagcttcc cggaagacct cctttatgat ggctttatgc 1320

ctcagctcca tctacgagga tttaaagatg taccaagtgg agttcaagac catgaacgcc 1380

aagctgctca tggaccctaa acggcagatc tttttagacc agaacatgct ggctgtgatt 1440

gatgagctga tgcaagcttt aaacttcaac tccgagaccg tccctcagaa gtcctccctc 1500

gaggagcccg atttttacaa gacaaagatc aaactgtgca ttttactcca cgcctttagg 1560

atccgggccg tgaccattga ccgggtcatg agctatttaa acgccagcat tacatgcccc 1620

cctcccatga gcgtggagca cgccgacatc tgggtgaaga gctatagcct ctacagccgg 1680

gagaggtata tctgtaacag cggcttcaag aggaaggccg gcaccagcag cctcaccgag 1740

tgcgtgctga ataaggctac caacgtggct cactggacaa caccctcttt aaagtgcatc 1800

cgg 1803

<210> 124

<211> 133

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“ IL-21”

<400> 124

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

1 5 10 15

Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

20 25 30

Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

35 40 45

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

50 55 60

Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

65 70 75 80

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

100 105 110

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser

130

<210> 125

<211> 399

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“ IL-21”

<400> 125

cagggccagg acaggcacat gatccggatg aggcagctca tcgacatcgt cgaccagctg 60

aagaactacg tgaacgacct ggtgcccgag tttctgcctg cccccgagga cgtggagacc 120

aactgcgagt ggtccgcctt ctcctgcttt cagaaggccc agctgaagtc cgccaacacc 180

ggcaacaacg agcggatcat caacgtgagc atcaagaagc tgaagcggaa gcctccctcc 240

acaaacgccg gcaggaggca gaagcacagg ctgacctgcc ccagctgtga ctcctacgag 300

aagaagcccc ccaaggagtt cctggagagg ttcaagtccc tgctgcagaa gatgatccat 360

cagcacctgt cctccaggac ccacggctcc gaggactcc 399

<210> 126

<211> 466

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15序列”

<400> 126

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

1 5 10 15

Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

20 25 30

Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

35 40 45

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

50 55 60

Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

65 70 75 80

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

100 105 110

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn

130 135 140

Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro

145 150 155 160

Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly

165 170 175

Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu

180 185 190

Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val

195 200 205

Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu

210 215 220

Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn

225 230 235 240

Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val

245 250 255

Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr

260 265 270

Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu

275 280 285

Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn

290 295 300

Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe

305 310 315 320

Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr

325 330 335

Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

340 345 350

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

355 360 365

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

370 375 380

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

385 390 395 400

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

405 410 415

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

420 425 430

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

435 440 445

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

450 455 460

Thr Ser

465

<210> 127

<211> 1398

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15序列”

<400> 127

cagggccagg acaggcacat gatccggatg aggcagctca tcgacatcgt cgaccagctg 60

aagaactacg tgaacgacct ggtgcccgag tttctgcctg cccccgagga cgtggagacc 120

aactgcgagt ggtccgcctt ctcctgcttt cagaaggccc agctgaagtc cgccaacacc 180

ggcaacaacg agcggatcat caacgtgagc atcaagaagc tgaagcggaa gcctccctcc 240

acaaacgccg gcaggaggca gaagcacagg ctgacctgcc ccagctgtga ctcctacgag 300

aagaagcccc ccaaggagtt cctggagagg ttcaagtccc tgctgcagaa gatgatccat 360

cagcacctgt cctccaggac ccacggctcc gaggactcct ccggcaccac caataccgtg 420

gccgcttata acctcacatg gaagagcacc aacttcaaga caattctgga atgggaaccc 480

aagcccgtca atcaagttta caccgtgcag atctccacca aatccggaga ctggaagagc 540

aagtgcttct acacaacaga caccgagtgt gatttaaccg acgaaatcgt caaggacgtc 600

aagcaaacct atctggctcg ggtcttttcc taccccgctg gcaatgtcga gtccaccggc 660

tccgctggcg agcctctcta cgagaattcc cccgaattca ccccttattt agagaccaat 720

ttaggccagc ctaccatcca gagcttcgag caagttggca ccaaggtgaa cgtcaccgtc 780

gaggatgaaa ggactttagt gcggcggaat aacacatttt tatccctccg ggatgtgttc 840

ggcaaagacc tcatctacac actgtactat tggaagtcca gctcctccgg caaaaagacc 900

gctaagacca acaccaacga gtttttaatt gacgtggaca aaggcgagaa ctactgcttc 960

agcgtgcaag ccgtgatccc ttctcgtacc gtcaaccgga agagcacaga ttcccccgtt 1020

gagtgcatgg gccaagaaaa gggcgagttc cgggagaact gggtgaacgt catcagcgat 1080

ttaaagaaga tcgaagattt aattcagtcc atgcatatcg acgccacttt atacacagaa 1140

tccgacgtgc acccctcttg taaggtgacc gccatgaaat gttttttact ggagctgcaa 1200

gttatctctt tagagagcgg agacgctagc atccacgaca ccgtggagaa tttaatcatt 1260

ttagccaata actctttatc cagcaacggc aacgtgacag agtccggctg caaggagtgc 1320

gaagagctgg aggagaagaa catcaaggag tttctgcaat cctttgtgca cattgtccag 1380

atgttcatca atacctcc 1398

<210> 128

<211> 484

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15序列”

<400> 128

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile

20 25 30

Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

35 40 45

Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

50 55 60

Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

65 70 75 80

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

85 90 95

Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro

100 105 110

Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

115 120 125

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

130 135 140

Thr His Gly Ser Glu Asp Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala

145 150 155 160

Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp

165 170 175

Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys

180 185 190

Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys

195 200 205

Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala

210 215 220

Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala

225 230 235 240

Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu

245 250 255

Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr

260 265 270

Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn

275 280 285

Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr

290 295 300

Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys

305 310 315 320

Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr

325 330 335

Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys

340 345 350

Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe

355 360 365

Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp

370 375 380

Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp

385 390 395 400

Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu

405 410 415

Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr

420 425 430

Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly

435 440 445

Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys

450 455 460

Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe

465 470 475 480

Ile Asn Thr Ser

<210> 129

<211> 1452

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15序列”

<400> 129

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcccagggc 60

caggacaggc acatgatccg gatgaggcag ctcatcgaca tcgtcgacca gctgaagaac 120

tacgtgaacg acctggtgcc cgagtttctg cctgcccccg aggacgtgga gaccaactgc 180

gagtggtccg ccttctcctg ctttcagaag gcccagctga agtccgccaa caccggcaac 240

aacgagcgga tcatcaacgt gagcatcaag aagctgaagc ggaagcctcc ctccacaaac 300

gccggcagga ggcagaagca caggctgacc tgccccagct gtgactccta cgagaagaag 360

ccccccaagg agttcctgga gaggttcaag tccctgctgc agaagatgat ccatcagcac 420

ctgtcctcca ggacccacgg ctccgaggac tcctccggca ccaccaatac cgtggccgct 480

tataacctca catggaagag caccaacttc aagacaattc tggaatggga acccaagccc 540

gtcaatcaag tttacaccgt gcagatctcc accaaatccg gagactggaa gagcaagtgc 600

ttctacacaa cagacaccga gtgtgattta accgacgaaa tcgtcaagga cgtcaagcaa 660

acctatctgg ctcgggtctt ttcctacccc gctggcaatg tcgagtccac cggctccgct 720

ggcgagcctc tctacgagaa ttcccccgaa ttcacccctt atttagagac caatttaggc 780

cagcctacca tccagagctt cgagcaagtt ggcaccaagg tgaacgtcac cgtcgaggat 840

gaaaggactt tagtgcggcg gaataacaca tttttatccc tccgggatgt gttcggcaaa 900

gacctcatct acacactgta ctattggaag tccagctcct ccggcaaaaa gaccgctaag 960

accaacacca acgagttttt aattgacgtg gacaaaggcg agaactactg cttcagcgtg 1020

caagccgtga tcccttctcg taccgtcaac cggaagagca cagattcccc cgttgagtgc 1080

atgggccaag aaaagggcga gttccgggag aactgggtga acgtcatcag cgatttaaag 1140

aagatcgaag atttaattca gtccatgcat atcgacgcca ctttatacac agaatccgac 1200

gtgcacccct cttgtaaggt gaccgccatg aaatgttttt tactggagct gcaagttatc 1260

tctttagaga gcggagacgc tagcatccac gacaccgtgg agaatttaat cattttagcc 1320

aataactctt tatccagcaa cggcaacgtg acagagtccg gctgcaagga gtgcgaagag 1380

ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg caatcctttg tgcacattgt ccagatgttc 1440

atcaatacct cc 1452

<210> 130

<211> 352

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs序列”

<400> 130

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

145 150 155 160

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

180 185 190

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

195 200 205

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

210 215 220

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

225 230 235 240

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

245 250 255

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

260 265 270

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ile

275 280 285

Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys

290 295 300

Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe

305 310 315 320

Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys

325 330 335

Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

340 345 350

<210> 131

<211> 1056

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs序列”

<400> 131

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

cagaagtcct gcatgtccaa ctgcacgatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

aacgacaaca tcatcttcag cgaagagtac aacaccagca accctgatgg aggtggcgga 420

tccggaggtg gaggttctgg tggaggtggg agtattcctc cccacgtgca gaagagcgtg 480

aataatgaca tgatcgtgac cgataacaat ggcgccgtga aatttcccca gctgtgcaaa 540

ttctgcgatg tgaggttttc cacctgcgac aaccagaagt cctgtatgag caactgcaca 600

atcacctcca tctgtgagaa gcctcaggag gtgtgcgtgg ctgtctggcg gaagaatgac 660

gagaatatca ccctggaaac cgtctgccac gatcccaagc tgccctacca cgatttcatc 720

ctggaagacg ccgccagccc taagtgcatc atgaaagaga aaaagaagcc tggcgagacc 780

tttttcatgt gctcctgcag cagcgacgaa tgcaacgaca atatcatctt tagcgaggaa 840

tacaatacca gcaaccccga catcacgtgt cctcctccta tgtccgtgga acacgcagac 900

atctgggtca agagctacag cttgtactcc agggagcggt acatttgtaa ctctggtttc 960

aagcgtaaag ccggcacgtc cagcctgacg gagtgcgtgt tgaacaaggc cacgaatgtc 1020

gcccactgga caacccccag tctcaaatgt attaga 1056

<210> 132

<211> 370

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs序列”

<400> 132

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile

20 25 30

Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe

35 40 45

Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser

50 55 60

Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val

65 70 75 80

Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys

85 90 95

His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala

100 105 110

Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe

115 120 125

Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe

130 135 140

Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly

145 150 155 160

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys

165 170 175

Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys

180 185 190

Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp

195 200 205

Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu

210 215 220

Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn

225 230 235 240

Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp

245 250 255

Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys

260 265 270

Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu

275 280 285

Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro

290 295 300

Asp Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp

305 310 315 320

Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser

325 330 335

Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu

340 345 350

Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys

355 360 365

Ile Arg

370

<210> 133

<211> 1110

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs序列”

<400> 133

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccatcccc 60

ccccatgtgc aaaagagcgt gaacaacgat atgatcgtga ccgacaacaa cggcgccgtg 120

aagtttcccc agctctgcaa gttctgcgat gtcaggttca gcacctgcga taatcagaag 180

tcctgcatgt ccaactgcac gatcacctcc atctgcgaga agccccaaga agtgtgcgtg 240

gccgtgtggc ggaaaaatga cgagaacatc accctggaga ccgtgtgtca cgaccccaag 300

ctcccttatc acgacttcat tctggaggac gctgcctccc ccaaatgcat catgaaggag 360

aagaagaagc ccggagagac cttctttatg tgttcctgta gcagcgacga gtgtaacgac 420

aacatcatct tcagcgaaga gtacaacacc agcaaccctg atggaggtgg cggatccgga 480

ggtggaggtt ctggtggagg tgggagtatt cctccccacg tgcagaagag cgtgaataat 540

gacatgatcg tgaccgataa caatggcgcc gtgaaatttc cccagctgtg caaattctgc 600

gatgtgaggt tttccacctg cgacaaccag aagtcctgta tgagcaactg cacaatcacc 660

tccatctgtg agaagcctca ggaggtgtgc gtggctgtct ggcggaagaa tgacgagaat 720

atcaccctgg aaaccgtctg ccacgatccc aagctgccct accacgattt catcctggaa 780

gacgccgcca gccctaagtg catcatgaaa gagaaaaaga agcctggcga gacctttttc 840

atgtgctcct gcagcagcga cgaatgcaac gacaatatca tctttagcga ggaatacaat 900

accagcaacc ccgacatcac gtgtcctcct cctatgtccg tggaacacgc agacatctgg 960

gtcaagagct acagcttgta ctccagggag cggtacattt gtaactctgg tttcaagcgt 1020

aaagccggca cgtccagcct gacggagtgc gtgttgaaca aggccacgaa tgtcgcccac 1080

tggacaaccc ccagtctcaa atgtattaga 1110

<210> 134

<211> 399

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“ IL-21”

<400> 134

caaggtcaag atcgccacat gattagaatg cgtcaactta tagatattgt tgatcagctg 60

aaaaattatg tgaatgactt ggtccctgaa tttctgccag ctccagaaga tgtagagaca 120

aactgtgagt ggtcagcttt ttcctgtttt cagaaggccc aactaaagtc agcaaataca 180

ggaaacaatg aaaggataat caatgtatca attaaaaagc tgaagaggaa accaccttcc 240

acaaatgcag ggagaagaca gaaacacaga ctaacatgcc cttcatgtga ttcttatgag 300

aaaaaaccac ccaaagaatt cctagaaaga ttcaaatcac ttctccaaaa gatgattcat 360

cagcatctgt cctctagaac acacggaagt gaagattcc 399

<210> 135

<211> 152

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“ IL-7”

<400> 135

Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu

1 5 10 15

Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser

20 25 30

Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp

35 40 45

Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg

50 55 60

Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu

65 70 75 80

Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val

85 90 95

Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser

100 105 110

Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu

115 120 125

Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys

130 135 140

Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His

145 150

<210> 136

<211> 456

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“ IL-7”

<400> 136

gattgtgata ttgaaggtaa agatggcaaa caatatgaga gtgttctaat ggtcagcatc 60

gatcaattat tggacagcat gaaagaaatt ggtagcaatt gcctgaataa tgaatttaac 120

ttttttaaaa gacatatctg tgatgctaat aaggaaggta tgtttttatt ccgtgctgct 180

cgcaagttga ggcaatttct taaaatgaat agcactggtg attttgatct ccacttatta 240

aaagtttcag aaggcacaac aatactgttg aactgcactg gccaggttaa aggaagaaaa 300

ccagctgccc tgggtgaagc ccaaccaaca aagagtttgg aagaaaataa atctttaaag 360

gaacagaaaa aactgaatga cttgtgtttc ctaaagagac tattacaaga gataaaaact 420

tgttggaata aaattttgat gggcactaaa gaacac 456

<210> 137

<211> 217

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7s序列”

<400> 137

Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu

1 5 10 15

Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser

20 25 30

Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp

35 40 45

Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg

50 55 60

Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu

65 70 75 80

Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val

85 90 95

Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser

100 105 110

Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu

115 120 125

Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys

130 135 140

Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser

145 150 155 160

Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg

165 170 175

Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser

180 185 190

Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp

195 200 205

Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

210 215

<210> 138

<211> 651

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7s序列”

<400> 138

gattgtgata ttgaaggtaa agatggcaaa caatatgaga gtgttctaat ggtcagcatc 60

gatcaattat tggacagcat gaaagaaatt ggtagcaatt gcctgaataa tgaatttaac 120

ttttttaaaa gacatatctg tgatgctaat aaggaaggta tgtttttatt ccgtgctgct 180

cgcaagttga ggcaatttct taaaatgaat agcactggtg attttgatct ccacttatta 240

aaagtttcag aaggcacaac aatactgttg aactgcactg gccaggttaa aggaagaaaa 300

ccagctgccc tgggtgaagc ccaaccaaca aagagtttgg aagaaaataa atctttaaag 360

gaacagaaaa aactgaatga cttgtgtttc ctaaagagac tattacaaga gataaaaact 420

tgttggaata aaattttgat gggcactaaa gaacacatca cgtgccctcc ccccatgtcc 480

gtggaacacg cagacatctg ggtcaagagc tacagcttgt actccaggga gcggtacatt 540

tgtaactctg gtttcaagcg taaagccggc acgtccagcc tgacggagtg cgtgttgaac 600

aaggccacga atgtcgccca ctggacaacc cccagtctca aatgcattag a 651

<210> 139

<211> 234

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7s序列”

<400> 139

Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu

1 5 10 15

Ala Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val

20 25 30

Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly

35 40 45

Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys

50 55 60

Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu

65 70 75 80

Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu

85 90 95

Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln

100 105 110

Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys

115 120 125

Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp

130 135 140

Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn

145 150 155 160

Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met

165 170 175

Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser

180 185 190

Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr

195 200 205

Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His

210 215 220

Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

225 230

<210> 140

<211> 702

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7s序列”

<400> 140

atgggagtga aagttctttt tgcccttatt tgtattgctg tggccgaggc cgattgtgat 60

attgaaggta aagatggcaa acaatatgag agtgttctaa tggtcagcat cgatcaatta 120

ttggacagca tgaaagaaat tggtagcaat tgcctgaata atgaatttaa cttttttaaa 180

agacatatct gtgatgctaa taaggaaggt atgtttttat tccgtgctgc tcgcaagttg 240

aggcaatttc ttaaaatgaa tagcactggt gattttgatc tccacttatt aaaagtttca 300

gaaggcacaa caatactgtt gaactgcact ggccaggtta aaggaagaaa accagctgcc 360

ctgggtgaag cccaaccaac aaagagtttg gaagaaaata aatctttaaa ggaacagaaa 420

aaactgaatg acttgtgttt cctaaagaga ctattacaag agataaaaac ttgttggaat 480

aaaattttga tgggcactaa agaacacatc acgtgccctc cccccatgtc cgtggaacac 540

gcagacatct gggtcaagag ctacagcttg tactccaggg agcggtacat ttgtaactct 600

ggtttcaagc gtaaagccgg cacgtccagc ctgacggagt gcgtgttgaa caaggccacg 660

aatgtcgccc actggacaac ccccagtctc aaatgcatta ga 702

<210> 141

<211> 485

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15序列”

<400> 141

Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu

1 5 10 15

Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser

20 25 30

Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp

35 40 45

Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg

50 55 60

Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu

65 70 75 80

Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val

85 90 95

Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser

100 105 110

Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu

115 120 125

Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys

130 135 140

Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala

145 150 155 160

Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu

165 170 175

Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr

180 185 190

Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu

195 200 205

Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu

210 215 220

Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser

225 230 235 240

Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu

245 250 255

Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly

260 265 270

Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg

275 280 285

Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile

290 295 300

Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala

305 310 315 320

Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn

325 330 335

Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg

340 345 350

Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu

355 360 365

Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu

370 375 380

Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser

385 390 395 400

Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu

405 410 415

Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp

420 425 430

Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn

435 440 445

Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu

450 455 460

Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met

465 470 475 480

Phe Ile Asn Thr Ser

485

<210> 142

<211> 1455

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15序列”

<400> 142

gattgcgaca tcgagggcaa ggacggcaag cagtacgaga gcgtgctgat ggtgtccatc 60

gaccagctgc tggacagcat gaaggagatc ggctccaact gcctcaacaa cgagttcaac 120

ttcttcaagc ggcacatctg cgacgccaac aaggagggca tgttcctgtt cagggccgcc 180

aggaaactgc ggcagttcct gaagatgaac tccaccggcg acttcgacct gcacctgctg 240

aaggtgtccg agggcaccac catcctgctg aactgcaccg gacaggtgaa gggccggaaa 300

cctgctgctc tgggagaggc ccaacccacc aagagcctgg aggagaacaa gtccctgaag 360

gagcagaaga agctgaacga cctgtgcttc ctgaagaggc tgctgcagga gatcaagacc 420

tgctggaaca agatcctgat gggcaccaag gagcatagcg gcacaaccaa cacagtcgct 480

gcctataacc tcacttggaa gagcaccaac ttcaaaacca tcctcgaatg ggaacccaaa 540

cccgttaacc aagtttacac cgtgcagatc agcaccaagt ccggcgactg gaagtccaaa 600

tgtttctata ccaccgacac cgagtgcgat ctcaccgatg agatcgtgaa agatgtgaaa 660

cagacctacc tcgcccgggt gtttagctac cccgccggca atgtggagag cactggttcc 720

gctggcgagc ctttatacga gaacagcccc gaatttaccc cttacctcga gaccaattta 780

ggacagccca ccatccaaag ctttgagcaa gttggcacaa aggtgaatgt gacagtggag 840

gacgagcgga ctttagtgcg gcggaacaac acctttctca gcctccggga tgtgttcggc 900

aaagatttaa tctacacact gtattactgg aagtcctctt cctccggcaa gaagacagct 960

aaaaccaaca caaacgagtt tttaatcgac gtggataaag gcgaaaacta ctgtttcagc 1020

gtgcaagctg tgatcccctc ccggaccgtg aataggaaaa gcaccgatag ccccgttgag 1080

tgcatgggcc aagaaaaggg cgagttccgg gagaactggg tgaacgtcat cagcgattta 1140

aagaagatcg aagatttaat tcagtccatg catatcgacg ccactttata cacagaatcc 1200

gacgtgcacc cctcttgtaa ggtgaccgcc atgaaatgtt ttttactgga gctgcaagtt 1260

atctctttag agagcggaga cgctagcatc cacgacaccg tggagaattt aatcatttta 1320

gccaataact ctttatccag caacggcaac gtgacagagt ccggctgcaa ggagtgcgaa 1380

gagctggagg agaagaacat caaggagttt ctgcaatcct ttgtgcacat tgtccagatg 1440

ttcatcaata cctcc 1455

<210> 143

<211> 503

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15序列”

<400> 143

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser

20 25 30

Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile

35 40 45

Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile

50 55 60

Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys

65 70 75 80

Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His

85 90 95

Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly

100 105 110

Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr

115 120 125

Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn

130 135 140

Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp

145 150 155 160

Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ser Gly Thr Thr Asn Thr

165 170 175

Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile

180 185 190

Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile

195 200 205

Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp

210 215 220

Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr

225 230 235 240

Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr

245 250 255

Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro

260 265 270

Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln

275 280 285

Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val

290 295 300

Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp

305 310 315 320

Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys

325 330 335

Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly

340 345 350

Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val

355 360 365

Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys

370 375 380

Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys

385 390 395 400

Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr

405 410 415

Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe

420 425 430

Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile

435 440 445

His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser

450 455 460

Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu

465 470 475 480

Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val

485 490 495

Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

500

<210> 144

<211> 1509

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15序列”

<400> 144

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccgattgc 60

gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac gagagcgtgc tgatggtgtc catcgaccag 120

ctgctggaca gcatgaagga gatcggctcc aactgcctca acaacgagtt caacttcttc 180

aagcggcaca tctgcgacgc caacaaggag ggcatgttcc tgttcagggc cgccaggaaa 240

ctgcggcagt tcctgaagat gaactccacc ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg 300

tccgagggca ccaccatcct gctgaactgc accggacagg tgaagggccg gaaacctgct 360

gctctgggag aggcccaacc caccaagagc ctggaggaga acaagtccct gaaggagcag 420

aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag aggctgctgc aggagatcaa gacctgctgg 480

aacaagatcc tgatgggcac caaggagcat agcggcacaa ccaacacagt cgctgcctat 540

aacctcactt ggaagagcac caacttcaaa accatcctcg aatgggaacc caaacccgtt 600

aaccaagttt acaccgtgca gatcagcacc aagtccggcg actggaagtc caaatgtttc 660

tataccaccg acaccgagtg cgatctcacc gatgagatcg tgaaagatgt gaaacagacc 720

tacctcgccc gggtgtttag ctaccccgcc ggcaatgtgg agagcactgg ttccgctggc 780

gagcctttat acgagaacag ccccgaattt accccttacc tcgagaccaa tttaggacag 840

cccaccatcc aaagctttga gcaagttggc acaaaggtga atgtgacagt ggaggacgag 900

cggactttag tgcggcggaa caacaccttt ctcagcctcc gggatgtgtt cggcaaagat 960

ttaatctaca cactgtatta ctggaagtcc tcttcctccg gcaagaagac agctaaaacc 1020

aacacaaacg agtttttaat cgacgtggat aaaggcgaaa actactgttt cagcgtgcaa 1080

gctgtgatcc cctcccggac cgtgaatagg aaaagcaccg atagccccgt tgagtgcatg 1140

ggccaagaaa agggcgagtt ccgggagaac tgggtgaacg tcatcagcga tttaaagaag 1200

atcgaagatt taattcagtc catgcatatc gacgccactt tatacacaga atccgacgtg 1260

cacccctctt gtaaggtgac cgccatgaaa tgttttttac tggagctgca agttatctct 1320

ttagagagcg gagacgctag catccacgac accgtggaga atttaatcat tttagccaat 1380

aactctttat ccagcaacgg caacgtgaca gagtccggct gcaaggagtg cgaagagctg 1440

gaggagaaga acatcaagga gtttctgcaa tcctttgtgc acattgtcca gatgttcatc 1500

aatacctcc 1509

<210> 145

<211> 198

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21s序列”

<400> 145

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

1 5 10 15

Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

20 25 30

Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

35 40 45

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

50 55 60

Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

65 70 75 80

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

100 105 110

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His

130 135 140

Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr

145 150 155 160

Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr

165 170 175

Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro

180 185 190

Ser Leu Lys Cys Ile Arg

195

<210> 146

<211> 594

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21s序列”

<400> 146

cagggccagg acaggcacat gatccggatg aggcagctca tcgacatcgt cgaccagctg 60

aagaactacg tgaacgacct ggtgcccgag tttctgcctg cccccgagga cgtggagacc 120

aactgcgagt ggtccgcctt ctcctgcttt cagaaggccc agctgaagtc cgccaacacc 180

ggcaacaacg agcggatcat caacgtgagc atcaagaagc tgaagcggaa gcctccctcc 240

acaaacgccg gcaggaggca gaagcacagg ctgacctgcc ccagctgtga ctcctacgag 300

aagaagcccc ccaaggagtt cctggagagg ttcaagtccc tgctgcagaa gatgatccat 360

cagcacctgt cctccaggac ccacggctcc gaggactcca ttacatgccc ccctcccatg 420

agcgtggagc acgccgacat ctgggtgaag agctatagcc tctacagccg ggagaggtat 480

atctgtaaca gcggcttcaa gaggaaggcc ggcaccagca gcctcaccga gtgcgtgctg 540

aataaggcta ccaacgtggc tcactggaca acaccctctt taaagtgcat ccgg 594

<210> 147

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21s序列”

<400> 147

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile

20 25 30

Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

35 40 45

Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

50 55 60

Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

65 70 75 80

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

85 90 95

Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro

100 105 110

Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

115 120 125

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

130 135 140

Thr His Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val

145 150 155 160

Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu

165 170 175

Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser

180 185 190

Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr

195 200 205

Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

210 215

<210> 148

<211> 648

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21s序列”

<400> 148

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcccagggc 60

caggacaggc acatgatccg gatgaggcag ctcatcgaca tcgtcgacca gctgaagaac 120

tacgtgaacg acctggtgcc cgagtttctg cctgcccccg aggacgtgga gaccaactgc 180

gagtggtccg ccttctcctg ctttcagaag gcccagctga agtccgccaa caccggcaac 240

aacgagcgga tcatcaacgt gagcatcaag aagctgaagc ggaagcctcc ctccacaaac 300

gccggcagga ggcagaagca caggctgacc tgccccagct gtgactccta cgagaagaag 360

ccccccaagg agttcctgga gaggttcaag tccctgctgc agaagatgat ccatcagcac 420

ctgtcctcca ggacccacgg ctccgaggac tccattacat gcccccctcc catgagcgtg 480

gagcacgccg acatctgggt gaagagctat agcctctaca gccgggagag gtatatctgt 540

aacagcggct tcaagaggaa ggccggcacc agcagcctca ccgagtgcgt gctgaataag 600

gctaccaacg tggctcactg gacaacaccc tctttaaagt gcatccgg 648

<210> 149

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成CD16 scfv轻链可变结构域序列”

<400> 149

Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr

1 5 10 15

Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser

20 25 30

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly

35 40 45

Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser

50 55 60

Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp

65 70 75 80

Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val

85 90 95

Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gly His

100 105

<210> 150

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成CD16 scfv轻链可变结构域序列”

<400> 150

tccgagctga cccaggaccc tgctgtgtcc gtggctctgg gccagaccgt gaggatcacc 60

tgccagggcg actccctgag gtcctactac gcctcctggt accagcagaa gcccggccag 120

gctcctgtgc tggtgatcta cggcaagaac aacaggccct ccggcatccc tgacaggttc 180

tccggatcct cctccggcaa caccgcctcc ctgaccatca caggcgctca ggccgaggac 240

gaggctgact actactgcaa ctccagggac tcctccggca accatgtggt gttcggcggc 300

ggcaccaagc tgaccgtggg ccat 324

<210> 151

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成CD16 scfv重链可变结构域序列”

<400> 151

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Arg Ser Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Arg

115

<210> 152

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成CD16 scfv重链可变结构域序列”

<400> 152

gaggtgcagc tggtggagtc cggaggagga gtggtgaggc ctggaggctc cctgaggctg 60

agctgtgctg cctccggctt caccttcgac gactacggca tgtcctgggt gaggcaggct 120

cctggaaagg gcctggagtg ggtgtccggc atcaactgga acggcggatc caccggctac 180

gccgattccg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa ctccctgtac 240

ctgcagatga actccctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caggggcagg 300

tccctgctgt tcgactactg gggacagggc accctggtga ccgtgtccag g 351

<210> 153

<211> 823

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成12s16序列”

<400> 153

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

325 330 335

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

340 345 350

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

355 360 365

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

370 375 380

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

385 390 395 400

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

405 410 415

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

420 425 430

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

435 440 445

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

450 455 460

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

465 470 475 480

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

485 490 495

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

500 505 510

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu

515 520 525

His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg

530 535 540

Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu

545 550 555 560

Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr

565 570 575

Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val

580 585 590

Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser

595 600 605

Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

610 615 620

Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro

625 630 635 640

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile

645 650 655

Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg

660 665 670

Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr

675 680 685

Val Gly His Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

690 695 700

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro

705 710 715 720

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp

725 730 735

Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

740 745 750

Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp

755 760 765

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser

770 775 780

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

785 790 795 800

Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Ser Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

805 810 815

Thr Leu Val Thr Val Ser Arg

820

<210> 154

<211> 2469

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成12s16序列”

<400> 154

atttgggaac tgaagaagga cgtctacgtg gtcgaactgg actggtatcc cgatgctccc 60

ggcgaaatgg tggtgctcac ttgtgacacc cccgaagaag acggcatcac ttggaccctc 120

gatcagagca gcgaggtgct gggctccgga aagaccctca caatccaagt taaggagttc 180

ggagacgctg gccaatacac atgccacaag ggaggcgagg tgctcagcca ttccttatta 240

ttattacaca agaaggaaga cggaatctgg tccaccgaca ttttaaaaga tcagaaggag 300

cccaagaata agaccttttt aaggtgtgag gccaaaaact acagcggtcg tttcacttgt 360

tggtggctga ccaccatttc caccgattta accttctccg tgaaaagcag ccggggaagc 420

tccgaccctc aaggtgtgac atgtggagcc gctaccctca gcgctgagag ggttcgtggc 480

gataacaagg aatacgagta cagcgtggag tgccaagaag atagcgcttg tcccgctgcc 540

gaagaatctt tacccattga ggtgatggtg gacgccgtgc acaaactcaa gtacgagaac 600

tacacctcct ccttctttat ccgggacatc attaagcccg atcctcctaa gaatttacag 660

ctgaagcctc tcaaaaatag ccggcaagtt gaggtctctt gggaatatcc cgacacttgg 720

agcacacccc acagctactt ctctttaacc ttttgtgtgc aagttcaagg taaaagcaag 780

cgggagaaga aagaccgggt gtttaccgac aaaaccagcg ccaccgtcat ctgtcggaag 840

aacgcctcca tcagcgtgag ggctcaagat cgttattact ccagcagctg gtccgagtgg 900

gccagcgtgc cttgttccgg cggtggagga tccggaggag gtggctccgg cggcggagga 960

tctcgtaacc tccccgtggc tacccccgat cccggaatgt tcccttgttt acaccacagc 1020

cagaatttac tgagggccgt gagcaacatg ctgcagaaag ctaggcagac tttagaattt 1080

tacccttgca ccagcgagga gatcgaccat gaagatatca ccaaggacaa gacatccacc 1140

gtggaggctt gtttacctct ggagctgaca aagaacgagt cttgtctcaa ctctcgtgaa 1200

accagcttca tcacaaatgg ctcttgttta gcttcccgga agacctcctt tatgatggct 1260

ttatgcctca gctccatcta cgaggattta aagatgtacc aagtggagtt caagaccatg 1320

aacgccaagc tgctcatgga ccctaaacgg cagatctttt tagaccagaa catgctggct 1380

gtgattgatg agctgatgca agctttaaac ttcaactccg agaccgtccc tcagaagtcc 1440

tccctcgagg agcccgattt ttacaagaca aagatcaaac tgtgcatttt actccacgcc 1500

tttaggatcc gggccgtgac cattgaccgg gtcatgagct atttaaacgc cagcattaca 1560

tgcccccctc ccatgagcgt ggagcacgcc gacatctggg tgaagagcta tagcctctac 1620

agccgggaga ggtatatctg taacagcggc ttcaagagga aggccggcac cagcagcctc 1680

accgagtgcg tgctgaataa ggctaccaac gtggctcact ggacaacacc ctctttaaag 1740

tgcatccggt ccgagctgac ccaggaccct gctgtgtccg tggctctggg ccagaccgtg 1800

aggatcacct gccagggcga ctccctgagg tcctactacg cctcctggta ccagcagaag 1860

cccggccagg ctcctgtgct ggtgatctac ggcaagaaca acaggccctc cggcatccct 1920

gacaggttct ccggatcctc ctccggcaac accgcctccc tgaccatcac aggcgctcag 1980

gccgaggacg aggctgacta ctactgcaac tccagggact cctccggcaa ccatgtggtg 2040

ttcggcggcg gcaccaagct gaccgtgggc catggcggcg gcggctccgg aggcggcggc 2100

agcggcggag gaggatccga ggtgcagctg gtggagtccg gaggaggagt ggtgaggcct 2160

ggaggctccc tgaggctgag ctgtgctgcc tccggcttca ccttcgacga ctacggcatg 2220

tcctgggtga ggcaggctcc tggaaagggc ctggagtggg tgtccggcat caactggaac 2280

ggcggatcca ccggctacgc cgattccgtg aagggcaggt tcaccatcag cagggacaac 2340

gccaagaact ccctgtacct gcagatgaac tccctgaggg ccgaggacac cgccgtgtac 2400

tactgcgcca ggggcaggtc cctgctgttc gactactggg gacagggcac cctggtgacc 2460

gtgtccagg 2469

<210> 155

<211> 841

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成12s16序列”

<400> 155

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp

20 25 30

Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr

35 40 45

Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val

50 55 60

Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp

65 70 75 80

Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser

85 90 95

Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile

100 105 110

Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu

115 120 125

Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile

130 135 140

Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val

165 170 175

Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp

180 185 190

Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val

195 200 205

Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe

210 215 220

Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys

225 230 235 240

Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp

245 250 255

Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln

260 265 270

Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp

275 280 285

Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val

290 295 300

Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser

305 310 315 320

Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

325 330 335

Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe

340 345 350

Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met

355 360 365

Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu

370 375 380

Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu

385 390 395 400

Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser

405 410 415

Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys

420 425 430

Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu

435 440 445

Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met

450 455 460

Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile

465 470 475 480

Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln

485 490 495

Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu

500 505 510

Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg

515 520 525

Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser

530 535 540

Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg

545 550 555 560

Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser

565 570 575

Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp

580 585 590

Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro

595 600 605

Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly

610 615 620

Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

625 630 635 640

Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly

645 650 655

Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu

660 665 670

Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn

675 680 685

Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys

690 695 700

Leu Thr Val Gly His Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

705 710 715 720

Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val

725 730 735

Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr

740 745 750

Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

755 760 765

Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr

770 775 780

Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys

785 790 795 800

Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala

805 810 815

Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Ser Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

820 825 830

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Arg

835 840

<210> 156

<211> 2523

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成12s16序列”

<400> 156

atgaaatggg tgacctttat ttctttactg ttcctcttta gcagcgccta ctccatttgg 60

gaactgaaga aggacgtcta cgtggtcgaa ctggactggt atcccgatgc tcccggcgaa 120

atggtggtgc tcacttgtga cacccccgaa gaagacggca tcacttggac cctcgatcag 180

agcagcgagg tgctgggctc cggaaagacc ctcacaatcc aagttaagga gttcggagac 240

gctggccaat acacatgcca caagggaggc gaggtgctca gccattcctt attattatta 300

cacaagaagg aagacggaat ctggtccacc gacattttaa aagatcagaa ggagcccaag 360

aataagacct ttttaaggtg tgaggccaaa aactacagcg gtcgtttcac ttgttggtgg 420

ctgaccacca tttccaccga tttaaccttc tccgtgaaaa gcagccgggg aagctccgac 480

cctcaaggtg tgacatgtgg agccgctacc ctcagcgctg agagggttcg tggcgataac 540

aaggaatacg agtacagcgt ggagtgccaa gaagatagcg cttgtcccgc tgccgaagaa 600

tctttaccca ttgaggtgat ggtggacgcc gtgcacaaac tcaagtacga gaactacacc 660

tcctccttct ttatccggga catcattaag cccgatcctc ctaagaattt acagctgaag 720

cctctcaaaa atagccggca agttgaggtc tcttgggaat atcccgacac ttggagcaca 780

ccccacagct acttctcttt aaccttttgt gtgcaagttc aaggtaaaag caagcgggag 840

aagaaagacc gggtgtttac cgacaaaacc agcgccaccg tcatctgtcg gaagaacgcc 900

tccatcagcg tgagggctca agatcgttat tactccagca gctggtccga gtgggccagc 960

gtgccttgtt ccggcggtgg aggatccgga ggaggtggct ccggcggcgg aggatctcgt 1020

aacctccccg tggctacccc cgatcccgga atgttccctt gtttacacca cagccagaat 1080

ttactgaggg ccgtgagcaa catgctgcag aaagctaggc agactttaga attttaccct 1140

tgcaccagcg aggagatcga ccatgaagat atcaccaagg acaagacatc caccgtggag 1200

gcttgtttac ctctggagct gacaaagaac gagtcttgtc tcaactctcg tgaaaccagc 1260

ttcatcacaa atggctcttg tttagcttcc cggaagacct cctttatgat ggctttatgc 1320

ctcagctcca tctacgagga tttaaagatg taccaagtgg agttcaagac catgaacgcc 1380

aagctgctca tggaccctaa acggcagatc tttttagacc agaacatgct ggctgtgatt 1440

gatgagctga tgcaagcttt aaacttcaac tccgagaccg tccctcagaa gtcctccctc 1500

gaggagcccg atttttacaa gacaaagatc aaactgtgca ttttactcca cgcctttagg 1560

atccgggccg tgaccattga ccgggtcatg agctatttaa acgccagcat tacatgcccc 1620

cctcccatga gcgtggagca cgccgacatc tgggtgaaga gctatagcct ctacagccgg 1680

gagaggtata tctgtaacag cggcttcaag aggaaggccg gcaccagcag cctcaccgag 1740

tgcgtgctga ataaggctac caacgtggct cactggacaa caccctcttt aaagtgcatc 1800

cggtccgagc tgacccagga ccctgctgtg tccgtggctc tgggccagac cgtgaggatc 1860

acctgccagg gcgactccct gaggtcctac tacgcctcct ggtaccagca gaagcccggc 1920

caggctcctg tgctggtgat ctacggcaag aacaacaggc cctccggcat ccctgacagg 1980

ttctccggat cctcctccgg caacaccgcc tccctgacca tcacaggcgc tcaggccgag 2040

gacgaggctg actactactg caactccagg gactcctccg gcaaccatgt ggtgttcggc 2100

ggcggcacca agctgaccgt gggccatggc ggcggcggct ccggaggcgg cggcagcggc 2160

ggaggaggat ccgaggtgca gctggtggag tccggaggag gagtggtgag gcctggaggc 2220

tccctgaggc tgagctgtgc tgcctccggc ttcaccttcg acgactacgg catgtcctgg 2280

gtgaggcagg ctcctggaaa gggcctggag tgggtgtccg gcatcaactg gaacggcgga 2340

tccaccggct acgccgattc cgtgaagggc aggttcacca tcagcaggga caacgccaag 2400

aactccctgt acctgcagat gaactccctg agggccgagg acaccgccgt gtactactgc 2460

gccaggggca ggtccctgct gttcgactac tggggacagg gcaccctggt gaccgtgtcc 2520

agg 2523

<210> 157

<211> 438

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成16s21序列”

<400> 157

Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr

1 5 10 15

Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser

20 25 30

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly

35 40 45

Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser

50 55 60

Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp

65 70 75 80

Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val

85 90 95

Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gly His Gly Gly Gly Gly

100 105 110

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val

115 120 125

Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser

130 135 140

Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val

145 150 155 160

Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp

165 170 175

Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr

180 185 190

Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser

195 200 205

Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Ser

210 215 220

Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Arg

225 230 235 240

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

245 250 255

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

260 265 270

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

275 280 285

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

290 295 300

Arg Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp

305 310 315 320

Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe

325 330 335

Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe

340 345 350

Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn

355 360 365

Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro

370 375 380

Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser

385 390 395 400

Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe

405 410 415

Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr

420 425 430

His Gly Ser Glu Asp Ser

435

<210> 158

<211> 1314

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成16s21序列”

<400> 158

tccgagctga cccaggaccc tgctgtgtcc gtggctctgg gccagaccgt gaggatcacc 60

tgccagggcg actccctgag gtcctactac gcctcctggt accagcagaa gcccggccag 120

gctcctgtgc tggtgatcta cggcaagaac aacaggccct ccggcatccc tgacaggttc 180

tccggatcct cctccggcaa caccgcctcc ctgaccatca caggcgctca ggccgaggac 240

gaggctgact actactgcaa ctccagggac tcctccggca accatgtggt gttcggcggc 300

ggcaccaagc tgaccgtggg ccatggcggc ggcggctccg gaggcggcgg cagcggcgga 360

ggaggatccg aggtgcagct ggtggagtcc ggaggaggag tggtgaggcc tggaggctcc 420

ctgaggctga gctgtgctgc ctccggcttc accttcgacg actacggcat gtcctgggtg 480

aggcaggctc ctggaaaggg cctggagtgg gtgtccggca tcaactggaa cggcggatcc 540

accggctacg ccgattccgt gaagggcagg ttcaccatca gcagggacaa cgccaagaac 600

tccctgtacc tgcagatgaa ctccctgagg gccgaggaca ccgccgtgta ctactgcgcc 660

aggggcaggt ccctgctgtt cgactactgg ggacagggca ccctggtgac cgtgtccagg 720

attacatgcc cccctcccat gagcgtggag cacgccgaca tctgggtgaa gagctatagc 780

ctctacagcc gggagaggta tatctgtaac agcggcttca agaggaaggc cggcaccagc 840

agcctcaccg agtgcgtgct gaataaggct accaacgtgg ctcactggac aacaccctct 900

ttaaagtgca tccggcaggg ccaggacagg cacatgatcc ggatgaggca gctcatcgac 960

atcgtcgacc agctgaagaa ctacgtgaac gacctggtgc ccgagtttct gcctgccccc 1020

gaggacgtgg agaccaactg cgagtggtcc gccttctcct gctttcagaa ggcccagctg 1080

aagtccgcca acaccggcaa caacgagcgg atcatcaacg tgagcatcaa gaagctgaag 1140

cggaagcctc cctccacaaa cgccggcagg aggcagaagc acaggctgac ctgccccagc 1200

tgtgactcct acgagaagaa gccccccaag gagttcctgg agaggttcaa gtccctgctg 1260

cagaagatga tccatcagca cctgtcctcc aggacccacg gctccgagga ctcc 1314

<210> 159

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成16s21序列”

<400> 159

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly

20 25 30

Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr

35 40 45

Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile

50 55 60

Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

65 70 75 80

Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala

85 90 95

Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn

100 105 110

His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gly His Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln

130 135 140

Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg

145 150 155 160

Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser

165 170 175

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile

180 185 190

Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg

195 200 205

Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met

210 215 220

Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly

225 230 235 240

Arg Ser Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

245 250 255

Ser Arg Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile

260 265 270

Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn

275 280 285

Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val

290 295 300

Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys

305 310 315 320

Cys Ile Arg Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu

325 330 335

Ile Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro

340 345 350

Glu Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser

355 360 365

Ala Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly

370 375 380

Asn Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys

385 390 395 400

Pro Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys

405 410 415

Pro Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu

420 425 430

Arg Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser

435 440 445

Arg Thr His Gly Ser Glu Asp Ser

450 455

<210> 160

<211> 1368

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成16s21序列”

<400> 160

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcctccgag 60

ctgacccagg accctgctgt gtccgtggct ctgggccaga ccgtgaggat cacctgccag 120

ggcgactccc tgaggtccta ctacgcctcc tggtaccagc agaagcccgg ccaggctcct 180

gtgctggtga tctacggcaa gaacaacagg ccctccggca tccctgacag gttctccgga 240

tcctcctccg gcaacaccgc ctccctgacc atcacaggcg ctcaggccga ggacgaggct 300

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tccgaggtgc agctggtgga gtccggagga ggagtggtga ggcctggagg ctccctgagg 480

ctgagctgtg ctgcctccgg cttcaccttc gacgactacg gcatgtcctg ggtgaggcag 540

gctcctggaa agggcctgga gtgggtgtcc ggcatcaact ggaacggcgg atccaccggc 600

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tacctgcaga tgaactccct gagggccgag gacaccgccg tgtactactg cgccaggggc 720

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accgagtgcg tgctgaataa ggctaccaac gtggctcact ggacaacacc ctctttaaag 960

tgcatccggc agggccagga caggcacatg atccggatga ggcagctcat cgacatcgtc 1020

gaccagctga agaactacgt gaacgacctg gtgcccgagt ttctgcctgc ccccgaggac 1080

gtggagacca actgcgagtg gtccgccttc tcctgctttc agaaggccca gctgaagtcc 1140

gccaacaccg gcaacaacga gcggatcatc aacgtgagca tcaagaagct gaagcggaag 1200

cctccctcca caaacgccgg caggaggcag aagcacaggc tgacctgccc cagctgtgac 1260

tcctacgaga agaagccccc caaggagttc ctggagaggt tcaagtccct gctgcagaag 1320

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<210> 161

<211> 620

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15序列”

<400> 161

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

145 150 155 160

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

180 185 190

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

195 200 205

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

210 215 220

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

225 230 235 240

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

245 250 255

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

260 265 270

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ser

275 280 285

Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr

290 295 300

Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val

305 310 315 320

Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys

325 330 335

Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys

340 345 350

Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly

355 360 365

Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser

370 375 380

Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile

385 390 395 400

Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp

405 410 415

Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp

420 425 430

Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser

435 440 445

Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile

450 455 460

Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile

465 470 475 480

Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys

485 490 495

Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile

500 505 510

Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp

515 520 525

Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr

530 535 540

Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser

545 550 555 560

Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala

565 570 575

Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys

580 585 590

Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser

595 600 605

Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

610 615 620

<210> 162

<211> 1860

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15序列”

<400> 162

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

cagaagtcct gcatgtccaa ctgcagcatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

aacgacaaca tcatcttcag cgaagagtac aacaccagca accctgatgg aggtggcgga 420

tccggaggtg gaggttctgg tggaggtggg agtattcctc cccacgtgca gaagagcgtg 480

aataatgaca tgatcgtgac cgataacaat ggcgccgtga aatttcccca gctgtgcaaa 540

ttctgcgatg tgaggttttc cacctgcgac aaccagaagt cctgtatgag caactgctcc 600

atcacctcca tctgtgagaa gcctcaggag gtgtgcgtgg ctgtctggcg gaagaatgac 660

gagaatatca ccctggaaac cgtctgccac gatcccaagc tgccctacca cgatttcatc 720

ctggaagacg ccgccagccc taagtgcatc atgaaagaga aaaagaagcc tggcgagacc 780

tttttcatgt gctcctgcag cagcgacgaa tgcaacgaca atatcatctt tagcgaggaa 840

tacaatacca gcaaccccga cagcggcaca accaacacag tcgctgccta taacctcact 900

tggaagagca ccaacttcaa aaccatcctc gaatgggaac ccaaacccgt taaccaagtt 960

tacaccgtgc agatcagcac caagtccggc gactggaagt ccaaatgttt ctataccacc 1020

gacaccgagt gcgatctcac cgatgagatc gtgaaagatg tgaaacagac ctacctcgcc 1080

cgggtgttta gctaccccgc cggcaatgtg gagagcactg gttccgctgg cgagccttta 1140

tacgagaaca gccccgaatt taccccttac ctcgagacca atttaggaca gcccaccatc 1200

caaagctttg agcaagttgg cacaaaggtg aatgtgacag tggaggacga gcggacttta 1260

gtgcggcgga acaacacctt tctcagcctc cgggatgtgt tcggcaaaga tttaatctac 1320

acactgtatt actggaagtc ctcttcctcc ggcaagaaga cagctaaaac caacacaaac 1380

gagtttttaa tcgacgtgga taaaggcgaa aactactgtt tcagcgtgca agctgtgatc 1440

ccctcccgga ccgtgaatag gaaaagcacc gatagccccg ttgagtgcat gggccaagaa 1500

aagggcgagt tccgggagaa ctgggtgaac gtcatcagcg atttaaagaa gatcgaagat 1560

ttaattcagt ccatgcatat cgacgccact ttatacacag aatccgacgt gcacccctct 1620

tgtaaggtga ccgccatgaa atgtttttta ctggagctgc aagttatctc tttagagagc 1680

ggagacgcta gcatccacga caccgtggag aatttaatca ttttagccaa taactcttta 1740

tccagcaacg gcaacgtgac agagtccggc tgcaaggagt gcgaagagct ggaggagaag 1800

aacatcaagg agtttctgca atcctttgtg cacattgtcc agatgttcat caatacctcc 1860

<210> 163

<211> 638

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15序列”

<400> 163

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile

20 25 30

Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe

35 40 45

Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser

50 55 60

Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val

65 70 75 80

Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys

85 90 95

His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala

100 105 110

Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe

115 120 125

Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe

130 135 140

Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly

145 150 155 160

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys

165 170 175

Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys

180 185 190

Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp

195 200 205

Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu

210 215 220

Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn

225 230 235 240

Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp

245 250 255

Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys

260 265 270

Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu

275 280 285

Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro

290 295 300

Asp Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys

305 310 315 320

Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn

325 330 335

Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser

340 345 350

Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile

355 360 365

Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro

370 375 380

Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu

385 390 395 400

Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro

405 410 415

Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val

420 425 430

Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu

435 440 445

Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys

450 455 460

Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe

465 470 475 480

Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala

485 490 495

Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val

500 505 510

Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn

515 520 525

Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His

530 535 540

Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys

545 550 555 560

Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu

565 570 575

Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile

580 585 590

Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly

595 600 605

Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu

610 615 620

Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

625 630 635

<210> 164

<211> 1914

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15序列”

<400> 164

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccatcccc 60

ccccatgtgc aaaagagcgt gaacaacgat atgatcgtga ccgacaacaa cggcgccgtg 120

aagtttcccc agctctgcaa gttctgcgat gtcaggttca gcacctgcga taatcagaag 180

tcctgcatgt ccaactgcag catcacctcc atctgcgaga agccccaaga agtgtgcgtg 240

gccgtgtggc ggaaaaatga cgagaacatc accctggaga ccgtgtgtca cgaccccaag 300

ctcccttatc acgacttcat tctggaggac gctgcctccc ccaaatgcat catgaaggag 360

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aacatcatct tcagcgaaga gtacaacacc agcaaccctg atggaggtgg cggatccgga 480

ggtggaggtt ctggtggagg tgggagtatt cctccccacg tgcagaagag cgtgaataat 540

gacatgatcg tgaccgataa caatggcgcc gtgaaatttc cccagctgtg caaattctgc 600

gatgtgaggt tttccacctg cgacaaccag aagtcctgta tgagcaactg ctccatcacc 660

tccatctgtg agaagcctca ggaggtgtgc gtggctgtct ggcggaagaa tgacgagaat 720

atcaccctgg aaaccgtctg ccacgatccc aagctgccct accacgattt catcctggaa 780

gacgccgcca gccctaagtg catcatgaaa gagaaaaaga agcctggcga gacctttttc 840

atgtgctcct gcagcagcga cgaatgcaac gacaatatca tctttagcga ggaatacaat 900

accagcaacc ccgacagcgg cacaaccaac acagtcgctg cctataacct cacttggaag 960

agcaccaact tcaaaaccat cctcgaatgg gaacccaaac ccgttaacca agtttacacc 1020

gtgcagatca gcaccaagtc cggcgactgg aagtccaaat gtttctatac caccgacacc 1080

gagtgcgatc tcaccgatga gatcgtgaaa gatgtgaaac agacctacct cgcccgggtg 1140

tttagctacc ccgccggcaa tgtggagagc actggttccg ctggcgagcc tttatacgag 1200

aacagccccg aatttacccc ttacctcgag accaatttag gacagcccac catccaaagc 1260

tttgagcaag ttggcacaaa ggtgaatgtg acagtggagg acgagcggac tttagtgcgg 1320

cggaacaaca cctttctcag cctccgggat gtgttcggca aagatttaat ctacacactg 1380

tattactgga agtcctcttc ctccggcaag aagacagcta aaaccaacac aaacgagttt 1440

ttaatcgacg tggataaagg cgaaaactac tgtttcagcg tgcaagctgt gatcccctcc 1500

cggaccgtga ataggaaaag caccgatagc cccgttgagt gcatgggcca agaaaagggc 1560

gagttccggg agaactgggt gaacgtcatc agcgatttaa agaagatcga agatttaatt 1620

cagtccatgc atatcgacgc cactttatac acagaatccg acgtgcaccc ctcttgtaag 1680

gtgaccgcca tgaaatgttt tttactggag ctgcaagtta tctctttaga gagcggagac 1740

gctagcatcc acgacaccgt ggagaattta atcattttag ccaataactc tttatccagc 1800

aacggcaacg tgacagagtc cggctgcaag gagtgcgaag agctggagga gaagaacatc 1860

aaggagtttc tgcaatcctt tgtgcacatt gtccagatgt tcatcaatac ctcc 1914

<210> 165

<211> 184

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成CD137L序列”

<400> 165

Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp

1 5 10 15

Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu

20 25 30

Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val

35 40 45

Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val

50 55 60

Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg

65 70 75 80

Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His

85 90 95

Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr

100 105 110

Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly

115 120 125

Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val

130 135 140

His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln

145 150 155 160

Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala

165 170 175

Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu

180

<210> 166

<211> 552

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成CD137L序列”

<400> 166

cgcgagggtc ccgagctttc gcccgacgat cccgccggcc tcttggacct gcggcagggc 60

atgtttgcgc agctggtggc ccaaaatgtt ctgctgatcg atgggcccct gagctggtac 120

agtgacccag gcctggcagg cgtgtccctg acggggggcc tgagctacaa agaggacacg 180

aaggagctgg tggtggccaa ggctggagtc tactatgtct tctttcaact agagctgcgg 240

cgcgtggtgg ccggcgaggg ctcaggctcc gtttcacttg cgctgcacct gcagccactg 300

cgctctgctg ctggggccgc cgccctggct ttgaccgtgg acctgccacc cgcctcctcc 360

gaggctcgga actcggcctt cggtttccag ggccgcttgc tgcacctgag tgccggccag 420

cgcctgggcg tccatcttca cactgaggcc agggcacgcc atgcctggca gcttacccag 480

ggcgccacag tcttgggact cttccgggtg acccccgaaa tcccagccgg actcccttca 540

ccgaggtcgg aa 552

<210> 167

<211> 165

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成CD137L（短版）序列

<400> 167

Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu

1 5 10 15

Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser

20 25 30

Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys

35 40 45

Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val

50 55 60

Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly

65 70 75 80

Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly

85 90 95

Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu

100 105 110

Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser

115 120 125

Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg

130 135 140

His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg

145 150 155 160

Val Thr Pro Glu Ile

165

<210> 168

<211> 495

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成CD137L（短版）序列

<400> 168

gatcccgccg gcctcttgga cctgcggcag ggcatgtttg cgcagctggt ggcccaaaat 60

gttctgctga tcgatgggcc cctgagctgg tacagtgacc caggcctggc aggcgtgtcc 120

ctgacggggg gcctgagcta caaagaggac acgaaggagc tggtggtggc caaggctgga 180

gtctactatg tcttctttca actagagctg cggcgcgtgg tggccggcga gggctcaggc 240

tccgtttcac ttgcgctgca cctgcagcca ctgcgctctg ctgctggggc cgccgccctg 300

gctttgaccg tggacctgcc acccgcctcc tccgaggctc ggaactcggc cttcggtttc 360

cagggccgct tgctgcacct gagtgccggc cagcgcctgg gcgtccatct tcacactgag 420

gccagggcac gccatgcctg gcagcttacc cagggcgcca cagtcttggg actcttccgg 480

gtgacccccg aaatc 495

<210> 169

<211> 397

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21s137L序列”

<400> 169

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

1 5 10 15

Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

20 25 30

Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

35 40 45

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

50 55 60

Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

65 70 75 80

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

100 105 110

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His

130 135 140

Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr

145 150 155 160

Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr

165 170 175

Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro

180 185 190

Ser Leu Lys Cys Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

195 200 205

Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro

210 215 220

Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala

225 230 235 240

Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro

245 250 255

Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp

260 265 270

Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe

275 280 285

Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val

290 295 300

Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala

305 310 315 320

Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg

325 330 335

Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly

340 345 350

Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala

355 360 365

Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr

370 375 380

Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu

385 390 395

<210> 170

<211> 1191

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21s137L序列”

<400> 170

cagggccagg acaggcacat gatccggatg aggcagctca tcgacatcgt cgaccagctg 60

aagaactacg tgaacgacct ggtgcccgag tttctgcctg cccccgagga cgtggagacc 120

aactgcgagt ggtccgcctt ctcctgcttt cagaaggccc agctgaagtc cgccaacacc 180

ggcaacaacg agcggatcat caacgtgagc atcaagaagc tgaagcggaa gcctccctcc 240

acaaacgccg gcaggaggca gaagcacagg ctgacctgcc ccagctgtga ctcctacgag 300

aagaagcccc ccaaggagtt cctggagagg ttcaagtccc tgctgcagaa gatgatccat 360

cagcacctgt cctccaggac ccacggctcc gaggactcca ttacatgccc ccctcccatg 420

agcgtggagc acgccgacat ctgggtgaag agctatagcc tctacagccg ggagaggtat 480

atctgtaaca gcggcttcaa gaggaaggcc ggcaccagca gcctcaccga gtgcgtgctg 540

aataaggcta ccaacgtggc tcactggaca acaccctctt taaagtgcat ccggggcggt 600

ggaggatccg gaggaggtgg ctccggcggc ggaggatctc gcgagggtcc cgagctttcg 660

cccgacgatc ccgccggcct cttggacctg cggcagggca tgtttgcgca gctggtggcc 720

caaaatgttc tgctgatcga tgggcccctg agctggtaca gtgacccagg cctggcaggc 780

gtgtccctga cggggggcct gagctacaaa gaggacacga aggagctggt ggtggccaag 840

gctggagtct actatgtctt ctttcaacta gagctgcggc gcgtggtggc cggcgagggc 900

tcaggctccg tttcacttgc gctgcacctg cagccactgc gctctgctgc tggggccgcc 960

gccctggctt tgaccgtgga cctgccaccc gcctcctccg aggctcggaa ctcggccttc 1020

ggtttccagg gccgcttgct gcacctgagt gccggccagc gcctgggcgt ccatcttcac 1080

actgaggcca gggcacgcca tgcctggcag cttacccagg gcgccacagt cttgggactc 1140

ttccgggtga cccccgaaat cccagccgga ctcccttcac cgaggtcgga a 1191

<210> 171

<211> 415

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21s137L序列”

<400> 171

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile

20 25 30

Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

35 40 45

Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

50 55 60

Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

65 70 75 80

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

85 90 95

Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro

100 105 110

Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

115 120 125

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

130 135 140

Thr His Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val

145 150 155 160

Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu

165 170 175

Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser

180 185 190

Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr

195 200 205

Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

210 215 220

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp

225 230 235 240

Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu

245 250 255

Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser

260 265 270

Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys

275 280 285

Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val

290 295 300

Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly

305 310 315 320

Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly

325 330 335

Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu

340 345 350

Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser

355 360 365

Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg

370 375 380

His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg

385 390 395 400

Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu

405 410 415

<210> 172

<211> 1245

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21s137L序列”

<400> 172

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcccagggc 60

caggacaggc acatgatccg gatgaggcag ctcatcgaca tcgtcgacca gctgaagaac 120

tacgtgaacg acctggtgcc cgagtttctg cctgcccccg aggacgtgga gaccaactgc 180

gagtggtccg ccttctcctg ctttcagaag gcccagctga agtccgccaa caccggcaac 240

aacgagcgga tcatcaacgt gagcatcaag aagctgaagc ggaagcctcc ctccacaaac 300

gccggcagga ggcagaagca caggctgacc tgccccagct gtgactccta cgagaagaag 360

ccccccaagg agttcctgga gaggttcaag tccctgctgc agaagatgat ccatcagcac 420

ctgtcctcca ggacccacgg ctccgaggac tccattacat gcccccctcc catgagcgtg 480

gagcacgccg acatctgggt gaagagctat agcctctaca gccgggagag gtatatctgt 540

aacagcggct tcaagaggaa ggccggcacc agcagcctca ccgagtgcgt gctgaataag 600

gctaccaacg tggctcactg gacaacaccc tctttaaagt gcatccgggg cggtggagga 660

tccggaggag gtggctccgg cggcggagga tctcgcgagg gtcccgagct ttcgcccgac 720

gatcccgccg gcctcttgga cctgcggcag ggcatgtttg cgcagctggt ggcccaaaat 780

gttctgctga tcgatgggcc cctgagctgg tacagtgacc caggcctggc aggcgtgtcc 840

ctgacggggg gcctgagcta caaagaggac acgaaggagc tggtggtggc caaggctgga 900

gtctactatg tcttctttca actagagctg cggcgcgtgg tggccggcga gggctcaggc 960

tccgtttcac ttgcgctgca cctgcagcca ctgcgctctg ctgctggggc cgccgccctg 1020

gctttgaccg tggacctgcc acccgcctcc tccgaggctc ggaactcggc cttcggtttc 1080

cagggccgct tgctgcacct gagtgccggc cagcgcctgg gcgtccatct tcacactgag 1140

gccagggcac gccatgcctg gcagcttacc cagggcgcca cagtcttggg actcttccgg 1200

gtgacccccg aaatcccagc cggactccct tcaccgaggt cggaa 1245

<210> 173

<211> 378

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成“21s137L（短版）序列”

<400> 173

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

1 5 10 15

Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

20 25 30

Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

35 40 45

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

50 55 60

Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

65 70 75 80

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

100 105 110

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His

130 135 140

Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr

145 150 155 160

Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr

165 170 175

Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro

180 185 190

Ser Leu Lys Cys Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

195 200 205

Gly Gly Gly Gly Ser Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly

210 215 220

Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro

225 230 235 240

Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly

245 250 255

Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala

260 265 270

Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala

275 280 285

Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu

290 295 300

Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro

305 310 315 320

Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg

325 330 335

Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr

340 345 350

Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val

355 360 365

Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile

370 375

<210> 174

<211> 1134

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成“21s137L（短版）序列”

<400> 174

cagggccagg acaggcacat gatccggatg aggcagctca tcgacatcgt cgaccagctg 60

aagaactacg tgaacgacct ggtgcccgag tttctgcctg cccccgagga cgtggagacc 120

aactgcgagt ggtccgcctt ctcctgcttt cagaaggccc agctgaagtc cgccaacacc 180

ggcaacaacg agcggatcat caacgtgagc atcaagaagc tgaagcggaa gcctccctcc 240

acaaacgccg gcaggaggca gaagcacagg ctgacctgcc ccagctgtga ctcctacgag 300

aagaagcccc ccaaggagtt cctggagagg ttcaagtccc tgctgcagaa gatgatccat 360

cagcacctgt cctccaggac ccacggctcc gaggactcca ttacatgccc ccctcccatg 420

agcgtggagc acgccgacat ctgggtgaag agctatagcc tctacagccg ggagaggtat 480

atctgtaaca gcggcttcaa gaggaaggcc ggcaccagca gcctcaccga gtgcgtgctg 540

aataaggcta ccaacgtggc tcactggaca acaccctctt taaagtgcat ccggggcggt 600

ggaggatccg gaggaggtgg ctccggcggc ggaggatctg atcccgccgg cctcttggac 660

ctgcggcagg gcatgtttgc gcagctggtg gcccaaaatg ttctgctgat cgatgggccc 720

ctgagctggt acagtgaccc aggcctggca ggcgtgtccc tgacgggggg cctgagctac 780

aaagaggaca cgaaggagct ggtggtggcc aaggctggag tctactatgt cttctttcaa 840

ctagagctgc ggcgcgtggt ggccggcgag ggctcaggct ccgtttcact tgcgctgcac 900

ctgcagccac tgcgctctgc tgctggggcc gccgccctgg ctttgaccgt ggacctgcca 960

cccgcctcct ccgaggctcg gaactcggcc ttcggtttcc agggccgctt gctgcacctg 1020

agtgccggcc agcgcctggg cgtccatctt cacactgagg ccagggcacg ccatgcctgg 1080

cagcttaccc agggcgccac agtcttggga ctcttccggg tgacccccga aatc 1134

<210> 175

<211> 396

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成“21s137L（短版）序列”

<400> 175

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile

20 25 30

Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

35 40 45

Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

50 55 60

Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

65 70 75 80

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

85 90 95

Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro

100 105 110

Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

115 120 125

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

130 135 140

Thr His Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val

145 150 155 160

Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu

165 170 175

Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser

180 185 190

Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr

195 200 205

Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

210 215 220

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg

225 230 235 240

Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp

245 250 255

Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu

260 265 270

Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala

275 280 285

Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val

290 295 300

Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln

305 310 315 320

Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp

325 330 335

Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln

340 345 350

Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu

355 360 365

His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala

370 375 380

Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile

385 390 395

<210> 176

<211> 1188

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成“21s137L（短版）序列”

<400> 176

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcccagggc 60

caggacaggc acatgatccg gatgaggcag ctcatcgaca tcgtcgacca gctgaagaac 120

tacgtgaacg acctggtgcc cgagtttctg cctgcccccg aggacgtgga gaccaactgc 180

gagtggtccg ccttctcctg ctttcagaag gcccagctga agtccgccaa caccggcaac 240

aacgagcgga tcatcaacgt gagcatcaag aagctgaagc ggaagcctcc ctccacaaac 300

gccggcagga ggcagaagca caggctgacc tgccccagct gtgactccta cgagaagaag 360

ccccccaagg agttcctgga gaggttcaag tccctgctgc agaagatgat ccatcagcac 420

ctgtcctcca ggacccacgg ctccgaggac tccattacat gcccccctcc catgagcgtg 480

gagcacgccg acatctgggt gaagagctat agcctctaca gccgggagag gtatatctgt 540

aacagcggct tcaagaggaa ggccggcacc agcagcctca ccgagtgcgt gctgaataag 600

gctaccaacg tggctcactg gacaacaccc tctttaaagt gcatccgggg cggtggagga 660

tccggaggag gtggctccgg cggcggagga tctgatcccg ccggcctctt ggacctgcgg 720

cagggcatgt ttgcgcagct ggtggcccaa aatgttctgc tgatcgatgg gcccctgagc 780

tggtacagtg acccaggcct ggcaggcgtg tccctgacgg ggggcctgag ctacaaagag 840

gacacgaagg agctggtggt ggccaaggct ggagtctact atgtcttctt tcaactagag 900

ctgcggcgcg tggtggccgg cgagggctca ggctccgttt cacttgcgct gcacctgcag 960

ccactgcgct ctgctgctgg ggccgccgcc ctggctttga ccgtggacct gccacccgcc 1020

tcctccgagg ctcggaactc ggccttcggt ttccagggcc gcttgctgca cctgagtgcc 1080

ggccagcgcc tgggcgtcca tcttcacact gaggccaggg cacgccatgc ctggcagctt 1140

acccagggcg ccacagtctt gggactcttc cgggtgaccc ccgaaatc 1188

<210> 177

<211> 485

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs21序列”

<400> 177

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

145 150 155 160

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

180 185 190

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

195 200 205

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

210 215 220

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

225 230 235 240

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

245 250 255

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

260 265 270

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ile

275 280 285

Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys

290 295 300

Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe

305 310 315 320

Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys

325 330 335

Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

340 345 350

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

355 360 365

Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

370 375 380

Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

385 390 395 400

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

405 410 415

Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

420 425 430

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

435 440 445

Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

450 455 460

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

465 470 475 480

Gly Ser Glu Asp Ser

485

<210> 178

<211> 1455

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs21序列”

<400> 178

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

cagaagtcct gcatgtccaa ctgcagcatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

aacgacaaca tcatcttcag cgaagagtac aacaccagca accctgatgg aggtggcgga 420

tccggaggtg gaggttctgg tggaggtggg agtattcctc cccacgtgca gaagagcgtg 480

aataatgaca tgatcgtgac cgataacaat ggcgccgtga aatttcccca gctgtgcaaa 540

ttctgcgatg tgaggttttc cacctgcgac aaccagaagt cctgtatgag caactgctcc 600

atcacctcca tctgtgagaa gcctcaggag gtgtgcgtgg ctgtctggcg gaagaatgac 660

gagaatatca ccctggaaac cgtctgccac gatcccaagc tgccctacca cgatttcatc 720

ctggaagacg ccgccagccc taagtgcatc atgaaagaga aaaagaagcc tggcgagacc 780

tttttcatgt gctcctgcag cagcgacgaa tgcaacgaca atatcatctt tagcgaggaa 840

tacaatacca gcaaccccga cattacatgc ccccctccca tgagcgtgga gcacgccgac 900

atctgggtga agagctatag cctctacagc cgggagaggt atatctgtaa cagcggcttc 960

aagaggaagg ccggcaccag cagcctcacc gagtgcgtgc tgaataaggc taccaacgtg 1020

gctcactgga caacaccctc tttaaagtgc atccggcagg gccaggacag gcacatgatc 1080

cggatgaggc agctcatcga catcgtcgac cagctgaaga actacgtgaa cgacctggtg 1140

cccgagtttc tgcctgcccc cgaggacgtg gagaccaact gcgagtggtc cgccttctcc 1200

tgctttcaga aggcccagct gaagtccgcc aacaccggca acaacgagcg gatcatcaac 1260

gtgagcatca agaagctgaa gcggaagcct ccctccacaa acgccggcag gaggcagaag 1320

cacaggctga cctgccccag ctgtgactcc tacgagaaga agccccccaa ggagttcctg 1380

gagaggttca agtccctgct gcagaagatg atccatcagc acctgtcctc caggacccac 1440

ggctccgagg actcc 1455

<210> 179

<211> 503

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs21序列”

<400> 179

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile

20 25 30

Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe

35 40 45

Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser

50 55 60

Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val

65 70 75 80

Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys

85 90 95

His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala

100 105 110

Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe

115 120 125

Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe

130 135 140

Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly

145 150 155 160

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys

165 170 175

Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys

180 185 190

Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp

195 200 205

Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu

210 215 220

Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn

225 230 235 240

Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp

245 250 255

Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys

260 265 270

Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu

275 280 285

Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro

290 295 300

Asp Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp

305 310 315 320

Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser

325 330 335

Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu

340 345 350

Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys

355 360 365

Ile Arg Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile

370 375 380

Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

385 390 395 400

Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

405 410 415

Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

420 425 430

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

435 440 445

Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro

450 455 460

Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

465 470 475 480

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

485 490 495

Thr His Gly Ser Glu Asp Ser

500

<210> 180

<211> 1509

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs21序列”

<400> 180

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccatcccc 60

ccccatgtgc aaaagagcgt gaacaacgat atgatcgtga ccgacaacaa cggcgccgtg 120

aagtttcccc agctctgcaa gttctgcgat gtcaggttca gcacctgcga taatcagaag 180

tcctgcatgt ccaactgcag catcacctcc atctgcgaga agccccaaga agtgtgcgtg 240

gccgtgtggc ggaaaaatga cgagaacatc accctggaga ccgtgtgtca cgaccccaag 300

ctcccttatc acgacttcat tctggaggac gctgcctccc ccaaatgcat catgaaggag 360

aagaagaagc ccggagagac cttctttatg tgttcctgta gcagcgacga gtgtaacgac 420

aacatcatct tcagcgaaga gtacaacacc agcaaccctg atggaggtgg cggatccgga 480

ggtggaggtt ctggtggagg tgggagtatt cctccccacg tgcagaagag cgtgaataat 540

gacatgatcg tgaccgataa caatggcgcc gtgaaatttc cccagctgtg caaattctgc 600

gatgtgaggt tttccacctg cgacaaccag aagtcctgta tgagcaactg ctccatcacc 660

tccatctgtg agaagcctca ggaggtgtgc gtggctgtct ggcggaagaa tgacgagaat 720

atcaccctgg aaaccgtctg ccacgatccc aagctgccct accacgattt catcctggaa 780

gacgccgcca gccctaagtg catcatgaaa gagaaaaaga agcctggcga gacctttttc 840

atgtgctcct gcagcagcga cgaatgcaac gacaatatca tctttagcga ggaatacaat 900

accagcaacc ccgacattac atgcccccct cccatgagcg tggagcacgc cgacatctgg 960

gtgaagagct atagcctcta cagccgggag aggtatatct gtaacagcgg cttcaagagg 1020

aaggccggca ccagcagcct caccgagtgc gtgctgaata aggctaccaa cgtggctcac 1080

tggacaacac cctctttaaa gtgcatccgg cagggccagg acaggcacat gatccggatg 1140

aggcagctca tcgacatcgt cgaccagctg aagaactacg tgaacgacct ggtgcccgag 1200

tttctgcctg cccccgagga cgtggagacc aactgcgagt ggtccgcctt ctcctgcttt 1260

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ttcaagtccc tgctgcagaa gatgatccat cagcacctgt cctccaggac ccacggctcc 1500

gaggactcc 1509

<210> 181

<211> 592

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs16序列”

<400> 181

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

145 150 155 160

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

180 185 190

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

195 200 205

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

210 215 220

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

225 230 235 240

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

245 250 255

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

260 265 270

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ile

275 280 285

Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys

290 295 300

Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe

305 310 315 320

Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys

325 330 335

Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

340 345 350

Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr

355 360 365

Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser

370 375 380

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly

385 390 395 400

Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser

405 410 415

Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp

420 425 430

Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val

435 440 445

Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gly His Gly Gly Gly Gly

450 455 460

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val

465 470 475 480

Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser

485 490 495

Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val

500 505 510

Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp

515 520 525

Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr

530 535 540

Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser

545 550 555 560

Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Ser

565 570 575

Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Arg

580 585 590

<210> 182

<211> 1776

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs16序列”

<400> 182

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

cagaagtcct gcatgtccaa ctgcagcatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

aacgacaaca tcatcttcag cgaagagtac aacaccagca accctgatgg aggtggcgga 420

tccggaggtg gaggttctgg tggaggtggg agtattcctc cccacgtgca gaagagcgtg 480

aataatgaca tgatcgtgac cgataacaat ggcgccgtga aatttcccca gctgtgcaaa 540

ttctgcgatg tgaggttttc cacctgcgac aaccagaagt cctgtatgag caactgctcc 600

atcacctcca tctgtgagaa gcctcaggag gtgtgcgtgg ctgtctggcg gaagaatgac 660

gagaatatca ccctggaaac cgtctgccac gatcccaagc tgccctacca cgatttcatc 720

ctggaagacg ccgccagccc taagtgcatc atgaaagaga aaaagaagcc tggcgagacc 780

tttttcatgt gctcctgcag cagcgacgaa tgcaacgaca atatcatctt tagcgaggaa 840

tacaatacca gcaaccccga cattacatgc ccccctccca tgagcgtgga gcacgccgac 900

atctgggtga agagctatag cctctacagc cgggagaggt atatctgtaa cagcggcttc 960

aagaggaagg ccggcaccag cagcctcacc gagtgcgtgc tgaataaggc taccaacgtg 1020

gctcactgga caacaccctc tttaaagtgc atccggtccg agctgaccca ggaccctgct 1080

gtgtccgtgg ctctgggcca gaccgtgagg atcacctgcc agggcgactc cctgaggtcc 1140

tactacgcct cctggtacca gcagaagccc ggccaggctc ctgtgctggt gatctacggc 1200

aagaacaaca ggccctccgg catccctgac aggttctccg gatcctcctc cggcaacacc 1260

gcctccctga ccatcacagg cgctcaggcc gaggacgagg ctgactacta ctgcaactcc 1320

agggactcct ccggcaacca tgtggtgttc ggcggcggca ccaagctgac cgtgggccat 1380

ggcggcggcg gctccggagg cggcggcagc ggcggaggag gatccgaggt gcagctggtg 1440

gagtccggag gaggagtggt gaggcctgga ggctccctga ggctgagctg tgctgcctcc 1500

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gagtgggtgt ccggcatcaa ctggaacggc ggatccaccg gctacgccga ttccgtgaag 1620

ggcaggttca ccatcagcag ggacaacgcc aagaactccc tgtacctgca gatgaactcc 1680

ctgagggccg aggacaccgc cgtgtactac tgcgccaggg gcaggtccct gctgttcgac 1740

tactggggac agggcaccct ggtgaccgtg tccagg 1776

<210> 183

<211> 610

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs16序列”

<400> 183

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile

20 25 30

Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe

35 40 45

Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser

50 55 60

Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val

65 70 75 80

Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys

85 90 95

His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala

100 105 110

Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe

115 120 125

Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe

130 135 140

Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly

145 150 155 160

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys

165 170 175

Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys

180 185 190

Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp

195 200 205

Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu

210 215 220

Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn

225 230 235 240

Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp

245 250 255

Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys

260 265 270

Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu

275 280 285

Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro

290 295 300

Asp Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp

305 310 315 320

Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser

325 330 335

Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu

340 345 350

Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys

355 360 365

Ile Arg Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly

370 375 380

Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr

385 390 395 400

Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile

405 410 415

Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

420 425 430

Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala

435 440 445

Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn

450 455 460

His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gly His Gly Gly

465 470 475 480

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln

485 490 495

Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg

500 505 510

Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser

515 520 525

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile

530 535 540

Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg

545 550 555 560

Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met

565 570 575

Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly

580 585 590

Arg Ser Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

595 600 605

Ser Arg

610

<210> 184

<211> 1830

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs16序列”

<400> 184

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccatcccc 60

ccccatgtgc aaaagagcgt gaacaacgat atgatcgtga ccgacaacaa cggcgccgtg 120

aagtttcccc agctctgcaa gttctgcgat gtcaggttca gcacctgcga taatcagaag 180

tcctgcatgt ccaactgcag catcacctcc atctgcgaga agccccaaga agtgtgcgtg 240

gccgtgtggc ggaaaaatga cgagaacatc accctggaga ccgtgtgtca cgaccccaag 300

ctcccttatc acgacttcat tctggaggac gctgcctccc ccaaatgcat catgaaggag 360

aagaagaagc ccggagagac cttctttatg tgttcctgta gcagcgacga gtgtaacgac 420

aacatcatct tcagcgaaga gtacaacacc agcaaccctg atggaggtgg cggatccgga 480

ggtggaggtt ctggtggagg tgggagtatt cctccccacg tgcagaagag cgtgaataat 540

gacatgatcg tgaccgataa caatggcgcc gtgaaatttc cccagctgtg caaattctgc 600

gatgtgaggt tttccacctg cgacaaccag aagtcctgta tgagcaactg ctccatcacc 660

tccatctgtg agaagcctca ggaggtgtgc gtggctgtct ggcggaagaa tgacgagaat 720

atcaccctgg aaaccgtctg ccacgatccc aagctgccct accacgattt catcctggaa 780

gacgccgcca gccctaagtg catcatgaaa gagaaaaaga agcctggcga gacctttttc 840

atgtgctcct gcagcagcga cgaatgcaac gacaatatca tctttagcga ggaatacaat 900

accagcaacc ccgacattac atgcccccct cccatgagcg tggagcacgc cgacatctgg 960

gtgaagagct atagcctcta cagccgggag aggtatatct gtaacagcgg cttcaagagg 1020

aaggccggca ccagcagcct caccgagtgc gtgctgaata aggctaccaa cgtggctcac 1080

tggacaacac cctctttaaa gtgcatccgg tccgagctga cccaggaccc tgctgtgtcc 1140

gtggctctgg gccagaccgt gaggatcacc tgccagggcg actccctgag gtcctactac 1200

gcctcctggt accagcagaa gcccggccag gctcctgtgc tggtgatcta cggcaagaac 1260

aacaggccct ccggcatccc tgacaggttc tccggatcct cctccggcaa caccgcctcc 1320

ctgaccatca caggcgctca ggccgaggac gaggctgact actactgcaa ctccagggac 1380

tcctccggca accatgtggt gttcggcggc ggcaccaagc tgaccgtggg ccatggcggc 1440

ggcggctccg gaggcggcgg cagcggcgga ggaggatccg aggtgcagct ggtggagtcc 1500

ggaggaggag tggtgaggcc tggaggctcc ctgaggctga gctgtgctgc ctccggcttc 1560

accttcgacg actacggcat gtcctgggtg aggcaggctc ctggaaaggg cctggagtgg 1620

gtgtccggca tcaactggaa cggcggatcc accggctacg ccgattccgt gaagggcagg 1680

ttcaccatca gcagggacaa cgccaagaac tccctgtacc tgcagatgaa ctccctgagg 1740

gccgaggaca ccgccgtgta ctactgcgcc aggggcaggt ccctgctgtt cgactactgg 1800

ggacagggca ccctggtgac cgtgtccagg 1830

<210> 185

<211> 551

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs137L序列”

<400> 185

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

145 150 155 160

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

180 185 190

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

195 200 205

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

210 215 220

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

225 230 235 240

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

245 250 255

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

260 265 270

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ile

275 280 285

Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys

290 295 300

Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe

305 310 315 320

Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys

325 330 335

Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

340 345 350

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg

355 360 365

Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu

370 375 380

Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile

385 390 395 400

Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser

405 410 415

Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val

420 425 430

Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg

435 440 445

Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu

450 455 460

Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val

465 470 475 480

Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe

485 490 495

Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His

500 505 510

Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly

515 520 525

Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly

530 535 540

Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu

545 550

<210> 186

<211> 1653

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs137L序列”

<400> 186

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

cagaagtcct gcatgtccaa ctgcagcatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

aacgacaaca tcatcttcag cgaagagtac aacaccagca accctgatgg aggtggcgga 420

tccggaggtg gaggttctgg tggaggtggg agtattcctc cccacgtgca gaagagcgtg 480

aataatgaca tgatcgtgac cgataacaat ggcgccgtga aatttcccca gctgtgcaaa 540

ttctgcgatg tgaggttttc cacctgcgac aaccagaagt cctgtatgag caactgctcc 600

atcacctcca tctgtgagaa gcctcaggag gtgtgcgtgg ctgtctggcg gaagaatgac 660

gagaatatca ccctggaaac cgtctgccac gatcccaagc tgccctacca cgatttcatc 720

ctggaagacg ccgccagccc taagtgcatc atgaaagaga aaaagaagcc tggcgagacc 780

tttttcatgt gctcctgcag cagcgacgaa tgcaacgaca atatcatctt tagcgaggaa 840

tacaatacca gcaaccccga cattacatgc ccccctccca tgagcgtgga gcacgccgac 900

atctgggtga agagctatag cctctacagc cgggagaggt atatctgtaa cagcggcttc 960

aagaggaagg ccggcaccag cagcctcacc gagtgcgtgc tgaataaggc taccaacgtg 1020

gctcactgga caacaccctc tttaaagtgc atccggggcg gtggaggatc cggaggaggt 1080

ggctccggcg gcggaggatc tcgcgagggt cccgagcttt cgcccgacga tcccgccggc 1140

ctcttggacc tgcggcaggg catgtttgcg cagctggtgg cccaaaatgt tctgctgatc 1200

gatgggcccc tgagctggta cagtgaccca ggcctggcag gcgtgtccct gacggggggc 1260

ctgagctaca aagaggacac gaaggagctg gtggtggcca aggctggagt ctactatgtc 1320

ttctttcaac tagagctgcg gcgcgtggtg gccggcgagg gctcaggctc cgtttcactt 1380

gcgctgcacc tgcagccact gcgctctgct gctggggccg ccgccctggc tttgaccgtg 1440

gacctgccac ccgcctcctc cgaggctcgg aactcggcct tcggtttcca gggccgcttg 1500

ctgcacctga gtgccggcca gcgcctgggc gtccatcttc acactgaggc cagggcacgc 1560

catgcctggc agcttaccca gggcgccaca gtcttgggac tcttccgggt gacccccgaa 1620

atcccagccg gactcccttc accgaggtcg gaa 1653

<210> 187

<211> 569

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs137L序列”

<400> 187

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile

20 25 30

Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe

35 40 45

Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser

50 55 60

Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val

65 70 75 80

Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys

85 90 95

His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala

100 105 110

Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe

115 120 125

Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe

130 135 140

Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly

145 150 155 160

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys

165 170 175

Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys

180 185 190

Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp

195 200 205

Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu

210 215 220

Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn

225 230 235 240

Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp

245 250 255

Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys

260 265 270

Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu

275 280 285

Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro

290 295 300

Asp Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp

305 310 315 320

Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser

325 330 335

Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu

340 345 350

Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys

355 360 365

Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

370 375 380

Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu

385 390 395 400

Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu

405 410 415

Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly

420 425 430

Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu

435 440 445

Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu

450 455 460

Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu

465 470 475 480

His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu

485 490 495

Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe

500 505 510

Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly

515 520 525

Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr

530 535 540

Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro

545 550 555 560

Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu

565

<210> 188

<211> 1707

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRs137L序列”

<400> 188

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccatcccc 60

ccccatgtgc aaaagagcgt gaacaacgat atgatcgtga ccgacaacaa cggcgccgtg 120

aagtttcccc agctctgcaa gttctgcgat gtcaggttca gcacctgcga taatcagaag 180

tcctgcatgt ccaactgcag catcacctcc atctgcgaga agccccaaga agtgtgcgtg 240

gccgtgtggc ggaaaaatga cgagaacatc accctggaga ccgtgtgtca cgaccccaag 300

ctcccttatc acgacttcat tctggaggac gctgcctccc ccaaatgcat catgaaggag 360

aagaagaagc ccggagagac cttctttatg tgttcctgta gcagcgacga gtgtaacgac 420

aacatcatct tcagcgaaga gtacaacacc agcaaccctg atggaggtgg cggatccgga 480

ggtggaggtt ctggtggagg tgggagtatt cctccccacg tgcagaagag cgtgaataat 540

gacatgatcg tgaccgataa caatggcgcc gtgaaatttc cccagctgtg caaattctgc 600

gatgtgaggt tttccacctg cgacaaccag aagtcctgta tgagcaactg ctccatcacc 660

tccatctgtg agaagcctca ggaggtgtgc gtggctgtct ggcggaagaa tgacgagaat 720

atcaccctgg aaaccgtctg ccacgatccc aagctgccct accacgattt catcctggaa 780

gacgccgcca gccctaagtg catcatgaaa gagaaaaaga agcctggcga gacctttttc 840

atgtgctcct gcagcagcga cgaatgcaac gacaatatca tctttagcga ggaatacaat 900

accagcaacc ccgacattac atgcccccct cccatgagcg tggagcacgc cgacatctgg 960

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tggacaacac cctctttaaa gtgcatccgg ggcggtggag gatccggagg aggtggctcc 1140

ggcggcggag gatctcgcga gggtcccgag ctttcgcccg acgatcccgc cggcctcttg 1200

gacctgcggc agggcatgtt tgcgcagctg gtggcccaaa atgttctgct gatcgatggg 1260

cccctgagct ggtacagtga cccaggcctg gcaggcgtgt ccctgacggg gggcctgagc 1320

tacaaagagg acacgaagga gctggtggtg gccaaggctg gagtctacta tgtcttcttt 1380

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ccacccgcct cctccgaggc tcggaactcg gccttcggtt tccagggccg cttgctgcac 1560

ctgagtgccg gccagcgcct gggcgtccat cttcacactg aggccagggc acgccatgcc 1620

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gccggactcc cttcaccgag gtcggaa 1707

<210> 189

<211> 720

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18s序列”

<400> 189

atgaagtggg tcacatttat ctctttactg ttcctcttct ccagcgccta cagctacttc 60

ggcaaactgg aatccaagct gagcgtgatc cggaatttaa acgaccaagt tctgtttatc 120

gatcaaggta accggcctct gttcgaggac atgaccgact ccgattgccg ggacaatgcc 180

ccccggacca tcttcattat ctccatgtac aaggacagcc agccccgggg catggctgtg 240

acaattagcg tgaagtgtga gaaaatcagc actttatctt gtgagaacaa gatcatctcc 300

tttaaggaaa tgaacccccc cgataacatc aaggacacca agtccgatat catcttcttc 360

cagcggtccg tgcccggtca cgataacaag atgcagttcg aatcctcctc ctacgagggc 420

tactttttag cttgtgaaaa ggagagggat ttattcaagc tgatcctcaa gaaggaggac 480

gagctgggcg atcgttccat catgttcacc gtccaaaacg aggatattac atgcccccct 540

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gtgctgaata aggctaccaa cgtggctcac tggacaacac cctctttaaa gtgcatccgg 720

<210> 190

<211> 2607

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成12t15序列”

<400> 190

atgaaatggg tgacctttat ttctttactg ttcctcttta gcagcgccta ctccatttgg 60

gaactgaaga aggacgtcta cgtggtcgaa ctggactggt atcccgatgc tcccggcgaa 120

atggtggtgc tcacttgtga cacccccgaa gaagacggca tcacttggac cctcgatcag 180

agcagcgagg tgctgggctc cggaaagacc ctcacaatcc aagttaagga gttcggagac 240

gctggccaat acacatgcca caagggaggc gaggtgctca gccattcctt attattatta 300

cacaagaagg aagacggaat ctggtccacc gacattttaa aagatcagaa ggagcccaag 360

aataagacct ttttaaggtg tgaggccaaa aactacagcg gtcgtttcac ttgttggtgg 420

ctgaccacca tttccaccga tttaaccttc tccgtgaaaa gcagccgggg aagctccgac 480

cctcaaggtg tgacatgtgg agccgctacc ctcagcgctg agagggttcg tggcgataac 540

aaggaatacg agtacagcgt ggagtgccaa gaagatagcg cttgtcccgc tgccgaagaa 600

tctttaccca ttgaggtgat ggtggacgcc gtgcacaaac tcaagtacga gaactacacc 660

tcctccttct ttatccggga catcattaag cccgatcctc ctaagaattt acagctgaag 720

cctctcaaaa atagccggca agttgaggtc tcttgggaat atcccgacac ttggagcaca 780

ccccacagct acttctcttt aaccttttgt gtgcaagttc aaggtaaaag caagcgggag 840

aagaaagacc gggtgtttac cgacaaaacc agcgccaccg tcatctgtcg gaagaacgcc 900

tccatcagcg tgagggctca agatcgttat tactccagca gctggtccga gtgggccagc 960

gtgccttgtt ccggcggtgg aggatccgga ggaggtggct ccggcggcgg aggatctcgt 1020

aacctccccg tggctacccc cgatcccgga atgttccctt gtttacacca cagccagaat 1080

ttactgaggg ccgtgagcaa catgctgcag aaagctaggc agactttaga attttaccct 1140

tgcaccagcg aggagatcga ccatgaagat atcaccaagg acaagacatc caccgtggag 1200

gcttgtttac ctctggagct gacaaagaac gagtcttgtc tcaactctcg tgaaaccagc 1260

ttcatcacaa atggctcttg tttagcttcc cggaagacct cctttatgat ggctttatgc 1320

ctcagctcca tctacgagga tttaaagatg taccaagtgg agttcaagac catgaacgcc 1380

aagctgctca tggaccctaa acggcagatc tttttagacc agaacatgct ggctgtgatt 1440

gatgagctga tgcaagcttt aaacttcaac tccgagaccg tccctcagaa gtcctccctc 1500

gaggagcccg atttttacaa gacaaagatc aaactgtgca ttttactcca cgcctttagg 1560

atccgggccg tgaccattga ccgggtcatg agctatttaa acgccagcag cggcacaacc 1620

aacacagtcg ctgcctataa cctcacttgg aagagcacca acttcaaaac catcctcgaa 1680

tgggaaccca aacccgttaa ccaagtttac accgtgcaga tcagcaccaa gtccggcgac 1740

tggaagtcca aatgtttcta taccaccgac accgagtgcg atctcaccga tgagatcgtg 1800

aaagatgtga aacagaccta cctcgcccgg gtgtttagct accccgccgg caatgtggag 1860

agcactggtt ccgctggcga gcctttatac gagaacagcc ccgaatttac cccttacctc 1920

gagaccaatt taggacagcc caccatccaa agctttgagc aagttggcac aaaggtgaat 1980

gtgacagtgg aggacgagcg gactttagtg cggcggaaca acacctttct cagcctccgg 2040

gatgtgttcg gcaaagattt aatctacaca ctgtattact ggaagtcctc ttcctccggc 2100

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atcagcgatt taaagaagat cgaagattta attcagtcca tgcatatcga cgccacttta 2340

tacacagaat ccgacgtgca cccctcttgt aaggtgaccg ccatgaaatg ttttttactg 2400

gagctgcaag ttatctcttt agagagcgga gacgctagca tccacgacac cgtggagaat 2460

ttaatcattt tagccaataa ctctttatcc agcaacggca acgtgacaga gtccggctgc 2520

aaggagtgcg aagagctgga ggagaagaac atcaaggagt ttctgcaatc ctttgtgcac 2580

attgtccaga tgttcatcaa tacctcc 2607

<210> 191

<211> 240

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18s序列”

<400> 191

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn

20 25 30

Leu Asn Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe

35 40 45

Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile

50 55 60

Phe Ile Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val

65 70 75 80

Thr Ile Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn

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Lys Ile Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp

100 105 110

Thr Lys Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp

115 120 125

Asn Lys Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala

130 135 140

Cys Glu Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp

145 150 155 160

Glu Leu Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp Ile

165 170 175

Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys

180 185 190

Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe

195 200 205

Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys

210 215 220

Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

225 230 235 240

<210> 192

<211> 869

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成12t15序列”

<400> 192

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp

20 25 30

Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr

35 40 45

Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val

50 55 60

Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp

65 70 75 80

Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser

85 90 95

Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile

100 105 110

Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu

115 120 125

Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile

130 135 140

Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val

165 170 175

Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp

180 185 190

Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val

195 200 205

Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe

210 215 220

Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys

225 230 235 240

Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp

245 250 255

Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln

260 265 270

Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp

275 280 285

Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val

290 295 300

Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser

305 310 315 320

Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

325 330 335

Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe

340 345 350

Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met

355 360 365

Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu

370 375 380

Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu

385 390 395 400

Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser

405 410 415

Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys

420 425 430

Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu

435 440 445

Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met

450 455 460

Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile

465 470 475 480

Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln

485 490 495

Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu

500 505 510

Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg

515 520 525

Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala

530 535 540

Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu

545 550 555 560

Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr

565 570 575

Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu

580 585 590

Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu

595 600 605

Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser

610 615 620

Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu

625 630 635 640

Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly

645 650 655

Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg

660 665 670

Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile

675 680 685

Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala

690 695 700

Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn

705 710 715 720

Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg

725 730 735

Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu

740 745 750

Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu

755 760 765

Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser

770 775 780

Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu

785 790 795 800

Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp

805 810 815

Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn

820 825 830

Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu

835 840 845

Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met

850 855 860

Phe Ile Asn Thr Ser

865

<210> 193

<211> 1452

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-21/TF突变体/IL-15构建体序列”

<400> 193

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcccagggc 60

caggacaggc acatgatccg gatgaggcag ctcatcgaca tcgtcgacca gctgaagaac 120

tacgtgaacg acctggtgcc cgagtttctg cctgcccccg aggacgtgga gaccaactgc 180

gagtggtccg ccttctcctg ctttcagaag gcccagctga agtccgccaa caccggcaac 240

aacgagcgga tcatcaacgt gagcatcaag aagctgaagc ggaagcctcc ctccacaaac 300

gccggcagga ggcagaagca caggctgacc tgccccagct gtgactccta cgagaagaag 360

ccccccaagg agttcctgga gaggttcaag tccctgctgc agaagatgat ccatcagcac 420

ctgtcctcca ggacccacgg ctccgaggac tcctccggca ccaccaatac cgtggccgct 480

tataacctca catggaagag caccaacttc gcgacagctc tggaatggga acccaagccc 540

gtcaatcaag tttacaccgt gcagatctcc accaaatccg gagactggaa gagcaagtgc 600

ttctacacaa cagacaccga gtgtgcttta accgacgaaa tcgtcaagga cgtcaagcaa 660

acctatctgg ctcgggtctt ttcctacccc gctggcaatg tcgagtccac cggctccgct 720

ggcgagcctc tctacgagaa ttcccccgaa ttcacccctt atttagagac caatttaggc 780

cagcctacca tccagagctt cgagcaagtt ggcaccaagg tgaacgtcac cgtcgaggat 840

gaaaggactt tagtggcgcg gaataacaca gctttatccc tccgggatgt gttcggcaaa 900

gacctcatct acacactgta ctattggaag tccagctcct ccggcaaaaa gaccgctaag 960

accaacacca acgagttttt aattgacgtg gacaaaggcg agaactactg cttcagcgtg 1020

caagccgtga tcccttctcg taccgtcaac cggaagagca cagattcccc cgttgagtgc 1080

atgggccaag aaaagggcga gttccgggag aactgggtga acgtcatcag cgatttaaag 1140

aagatcgaag atttaattca gtccatgcat atcgacgcca ctttatacac agaatccgac 1200

gtgcacccct cttgtaaggt gaccgccatg aaatgttttt tactggagct gcaagttatc 1260

tctttagaga gcggagacgc tagcatccac gacaccgtgg agaatttaat cattttagcc 1320

aataactctt tatccagcaa cggcaacgtg acagagtccg gctgcaagga gtgcgaagag 1380

ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg caatcctttg tgcacattgt ccagatgttc 1440

atcaatacct cc 1452

<210> 194

<211> 484

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-21/TF突变体/IL-15构建体序列”

<400> 194

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile

20 25 30

Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

35 40 45

Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

50 55 60

Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

65 70 75 80

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

85 90 95

Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro

100 105 110

Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

115 120 125

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

130 135 140

Thr His Gly Ser Glu Asp Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala

145 150 155 160

Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Ala Thr Ala Leu Glu Trp

165 170 175

Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys

180 185 190

Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys

195 200 205

Ala Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala

210 215 220

Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala

225 230 235 240

Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu

245 250 255

Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr

260 265 270

Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Ala Arg Asn

275 280 285

Asn Thr Ala Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr

290 295 300

Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys

305 310 315 320

Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr

325 330 335

Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys

340 345 350

Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe

355 360 365

Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp

370 375 380

Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp

385 390 395 400

Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu

405 410 415

Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr

420 425 430

Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly

435 440 445

Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys

450 455 460

Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe

465 470 475 480

Ile Asn Thr Ser

<210> 195

<211> 2142

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成αCD28scFv/TF/αCD3scFv序列”

<400> 195

atgaaatggg tcaccttcat ctctttactg tttttattta gcagcgccta cagcgtgcag 60

ctgcagcagt ccggacccga actggtcaag cccggtgcct ccgtgaaaat gtcttgtaag 120

gcttctggct acacctttac ctcctacgtc atccaatggg tgaagcagaa gcccggtcaa 180

ggtctcgagt ggatcggcag catcaatccc tacaacgatt acaccaagta taacgaaaag 240

tttaagggca aggccactct gacaagcgac aagagctcca ttaccgccta catggagttt 300

tcctctttaa cttctgagga ctccgcttta tactattgcg ctcgttgggg cgatggcaat 360

tattggggcc ggggaactac tttaacagtg agctccggcg gcggcggaag cggaggtgga 420

ggatctggcg gtggaggcag cgacatcgag atgacacagt cccccgctat catgagcgcc 480

tctttaggag aacgtgtgac catgacttgt acagcttcct ccagcgtgag cagctcctat 540

ttccactggt accagcagaa acccggctcc tcccctaaac tgtgtatcta ctccacaagc 600

aatttagcta gcggcgtgcc tcctcgtttt agcggctccg gcagcacctc ttactcttta 660

accattagct ctatggaggc cgaagatgcc gccacatact tttgccatca gtaccaccgg 720

tcccctacct ttggcggagg cacaaagctg gagaccaagc ggagcggcac caccaacaca 780

gtggccgcct acaatctgac ttggaaatcc accaacttca agaccatcct cgagtgggag 840

cccaagcccg ttaatcaagt ttataccgtg cagatttcca ccaagagcgg cgactggaaa 900

tccaagtgct tctataccac agacaccgag tgcgatctca ccgacgagat cgtcaaagac 960

gtgaagcaga catatttagc tagggtgttc tcctaccccg ctggaaacgt ggagagcacc 1020

ggatccgctg gagagccttt atacgagaac tcccccgaat tcacccccta tctggaaacc 1080

aatttaggcc agcccaccat ccagagcttc gaacaagttg gcacaaaggt gaacgtcacc 1140

gtcgaagatg agaggacttt agtgcggagg aacaatacat ttttatcctt acgtgacgtc 1200

ttcggcaagg atttaatcta cacactgtat tactggaagt ctagctcctc cggcaagaag 1260

accgccaaga ccaataccaa cgaattttta attgacgtgg acaagggcga gaactactgc 1320

ttctccgtgc aagctgtgat cccctcccgg acagtgaacc ggaagtccac cgactccccc 1380

gtggagtgca tgggccaaga gaagggagag tttcgtgagc agatcgtgct gacccagtcc 1440

cccgctatta tgagcgctag ccccggtgaa aaggtgacta tgacatgcag cgccagctct 1500

tccgtgagct acatgaactg gtatcagcag aagtccggca ccagccctaa aaggtggatc 1560

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ggaggcggag gtagcggagg aggcggatcc ggcggtggag gtagccaagt tcagctccag 1800

caaagcggcg ccgaactcgc tcggcccggc gcttccgtga agatgtcttg taaggcctcc 1860

ggctatacct tcacccggta cacaatgcac tgggtcaagc aacggcccgg tcaaggttta 1920

gagtggattg gctatatcaa cccctcccgg ggctatacca actacaacca gaagttcaag 1980

gacaaagcca ccctcaccac cgacaagtcc agcagcaccg cttacatgca gctgagctct 2040

ttaacatccg aggattccgc cgtgtactac tgcgctcggt actacgacga tcattactgc 2100

ctcgattact ggggccaagg taccacctta acagtctcct cc 2142

<210> 196

<211> 714

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成αCD28scFv/TFαCD3scFv序列”

<400> 196

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly

20 25 30

Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser

35 40 45

Tyr Val Ile Gln Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp

50 55 60

Ile Gly Ser Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys

65 70 75 80

Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ile Thr Ala

85 90 95

Tyr Met Glu Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr

100 105 110

Cys Ala Arg Trp Gly Asp Gly Asn Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Thr Leu

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala

145 150 155 160

Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val

165 170 175

Ser Ser Ser Tyr Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro

180 185 190

Lys Leu Cys Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Pro

195 200 205

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser

210 215 220

Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr His Arg

225 230 235 240

Ser Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Thr Lys Arg Ser Gly

245 250 255

Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn

260 265 270

Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr

275 280 285

Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe

290 295 300

Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp

305 310 315 320

Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn

325 330 335

Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro

340 345 350

Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln

355 360 365

Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu

370 375 380

Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val

385 390 395 400

Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser

405 410 415

Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp

420 425 430

Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro

435 440 445

Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met

450 455 460

Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser

465 470 475 480

Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys

485 490 495

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser

500 505 510

Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

515 520 525

Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser

530 535 540

Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

545 550 555 560

Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu

565 570 575

Glu Ile Asn Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

580 585 590

Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg

595 600 605

Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

610 615 620

Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu

625 630 635 640

Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn

645 650 655

Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser

660 665 670

Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val

675 680 685

Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp

690 695 700

Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

705 710

<210> 197

<211> 456

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-7序列”

<400> 197

gattgcgaca tcgagggcaa ggacggcaag cagtacgaga gcgtgctgat ggtgtccatc 60

gaccagctgc tggacagcat gaaggagatc ggctccaact gcctcaacaa cgagttcaac 120

ttcttcaagc ggcacatctg cgacgccaac aaggagggca tgttcctgtt cagggccgcc 180

aggaaactgc ggcagttcct gaagatgaac tccaccggcg acttcgacct gcacctgctg 240

aaggtgtccg agggcaccac catcctgctg aactgcaccg gacaggtgaa gggccggaaa 300

cctgctgctc tgggagaggc ccaacccacc aagagcctgg aggagaacaa gtccctgaag 360

gagcagaaga agctgaacga cctgtgcttc ctgaagaggc tgctgcagga gatcaagacc 420

tgctggaaca agatcctgat gggcaccaag gagcat 456

<210> 198

<211> 861

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFβRII受体序列”

<400> 198

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

cagaagtcct gcatgtccaa ctgcagcatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

aacgacaaca tcatcttcag cgaagagtac aacaccagca accctgatgg aggtggcgga 420

tccggaggtg gaggttctgg tggaggtggg agtattcctc cccacgtgca gaagagcgtg 480

aataatgaca tgatcgtgac cgataacaat ggcgccgtga aatttcccca gctgtgcaaa 540

ttctgcgatg tgaggttttc cacctgcgac aaccagaagt cctgtatgag caactgctcc 600

atcacctcca tctgtgagaa gcctcaggag gtgtgcgtgg ctgtctggcg gaagaatgac 660

gagaatatca ccctggaaac cgtctgccac gatcccaagc tgccctacca cgatttcatc 720

ctggaagacg ccgccagccc taagtgcatc atgaaagaga aaaagaagcc tggcgagacc 780

tttttcatgt gctcctgcag cagcgacgaa tgcaacgaca atatcatctt tagcgaggaa 840

tacaatacca gcaaccccga c 861