一种胰高血糖素样肽-2或其类似物的口服药物组合物

摘要

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种胰高血糖素样肽‑2或其类似物的口服药物组合物，该药物组合物含有：胰高血糖素样肽‑2和/或胰高血糖素样肽‑2类似物、促小肠吸收药物组合物制备而成，其中促小肠吸收药物组合物由十二烷基硫酸钠、壳聚糖、枸橼酸钠组成；本发明所述的促进小肠吸收药物组合物具有制备成一种复合辅料，该辅料与胰高血糖素样肽‑2和/或胰高血糖素样肽‑2类似物组合物后，可以提高该有效成分在小肠内的吸收等作用。

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种胰高血糖素样肽-2或其类似物的口服药物组合物。

背景技术

胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptide 2，GLP-2)是胰高血糖素原基因在肠道内分泌L细胞特异表达翻译后处理加工的产物，进化上高度保守，不同哺乳动物之间氨基酸序列相似度大于85％。GLP-2的主要生物学作用是调控能量吸收，维护小肠粘膜形态、功能和完整性。研究认为，GLP-2能促进正常小肠黏膜生长，增强肠道屏障功能，并在动物模型中发现它能促进几种慢性肠病、肠外营养、肠道炎症引起的肠黏膜损伤的修复和愈合。研究证实GLP-2可促进移植小肠结构和吸收功能的恢复，其机制通过促进移植肠上皮细胞增殖抑制细胞凋亡实现。

2012年12月21日美国FDA批准由NPS制药公司开发的替度鲁肽(teduglutide，商品名为Gattex)在美国上市，该药为注射液，用于成人依赖肠外营养的短肠综合征的治疗，是一种GLP-2(胰高血糖素样肽-2)重组类似物。

人胰高血糖素样肽-2均不能口服，这造成患者依从性较差，因此，改变胰高血糖素样肽-2及其类似物给药途径具有重要意义。

发明内容

基于上述原因，申请人经过多次创造性研究，得到一种新的促进小肠吸收药物组合物，该组合物是由十二烷基硫酸钠、壳聚糖、枸橼酸钠组成，研究表明，本发明所述的促进小肠吸收药物组合物具有制备成一种复合辅料，该辅料与胰高血糖素样肽-2和/或胰高血糖素样肽-2类似物组合物后，可以提高该有效成分在小肠内的吸收等作用。

本发明是通过下述技术方案实现的。

一种药物组合物，该药物组合物含有：胰高血糖素样肽-2和/或胰高血糖素样肽-2类似物、促小肠吸收药物组合物制备而成，其中促小肠吸收药物组合物由十二烷基硫酸钠、壳聚糖、枸橼酸钠组成。

所述的药物组合物制备成口服制剂。

所述的胰高血糖素样肽-2类似物包括：替度鲁肽、中国专利申请号200680015213.5、201080047813.6、201210124331.7、201380029907.4等等包括的产品。

本发明所述促小肠吸收药物组合物用于保障胰高血糖素样肽-2和/或胰高血糖素样肽-2类似物在小肠吸收。

本发明所述促小肠吸收药物组合物用于促进胰高血糖素样肽-2和/或胰高血糖素样肽-2类似物在小肠内吸收。

其中十二烷基硫酸钠、壳聚糖、枸橼酸钠的重量比为15-25：5-8：50-80。

其中胰高血糖素样肽-2和/或胰高血糖素样肽-2类似物与促小肠吸收药物组合物的重量比为：1:5-860。

一种口服制剂，该口服制剂是由胰高血糖素样肽-2和/或胰高血糖素样肽-2类似物、十二烷基硫酸钠、壳聚糖、枸橼酸钠制备而成。

其中十二烷基硫酸钠、壳聚糖、枸橼酸钠的重量比为15-25：5-8：50-80。

其中胰高血糖素样肽-2和/或胰高血糖素样肽-2类似物与促小肠吸收药物组合物的重量比为：1:5-860。

本发明的促小肠吸收药物组合物，获得一种新型辅料，该辅料可以用于：不能口服只能注射的药物(有效成分或活性成分)可以通过口服给药，从而改变药物(有效成分或活性成分)的给药方式。

本发明的促小肠吸收药物组合物能够促进在胃肠道内易于分解的药物(有效成分或活性成分)在肠内的吸收。

本发明的促小肠吸收药物组合物能够促进在胃肠道不易于吸收的药物(有效成分或活性成分)在肠内的吸收。

由于本发明促小肠吸收药物组合物是促进药物(有效成分或活性成分)在小肠吸收，要求在小肠内释放才能发挥其功效，因此在进行药效试验和药代试验时，啮齿类动物采用小肠导管给药，哺乳动物采用肠溶胶囊口服给药。

本发明将促小肠吸收药物组合物和药物(有效成分或活性成分)逐一搭配在啮齿类动物上进行生物利用度检测，同时会选择部分多肽在不同动物上进行药效和药代动力学的检测。

具体试验例

以下以具体试验例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。

本说明书试验例所述的内容仅仅是对发明构思的实现形式的列举，本发明的保护范围不应当被视为仅限于试验例所陈述的具体形式，本发明的保护范围也及于本领域技术人员根据本发明构思所能够想到的等同技术手段。尽管以下本发明的实施方案进行了描述，但本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，下述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本发明保护之列。

本发明下述试验，是在多次创造性试验的基础上，以本发明所要保护的技术方案为基础，总结的研发人员的结论性试验。以下试验例中的定量试验，均设置三次重复实验，数据为三次重复实验的平均值或平均值±标准差。

试验1显著提高小肠给入Exenatide(Exendin4，EXE4)的药效

药物组合物为：表面活性剂为十二烷基硫酸钠，甲壳素及其衍生物为壳聚糖，金属离子螯合剂为枸橼酸钠，重量比为20：6.5：65。

将Exenatide与上述药物组合物按照重量比1：5充分混匀，待用；

试验动物：SD雄性大鼠，腹腔注射45mg/kg STZ构建高血糖模型；

小肠药效试验：皮下注射(sc)或经小肠导管(ei)给药，于0h和9h采集血样检测血糖情况。

结果显示，小肠给入的Exenatide在没有添加上述药物组合物的情况下，其降糖效果很微弱，剂量达到1mg/kg时，其9h后的降糖效率也只有70％左右，远低于其皮下1μg/kg的剂量所能达到的50％左右。而添加本发明药物组合物后，给药剂量50μg/kg即可达到皮下1μg/kg的降糖效果。(如下表1)。

表1

试验2显著提高小肠给入Exenatide的生物利用度

将Exenatide与试验1药物组合物组按照重量比1：5充分混匀，待用；

试验动物：成年雄性SD大鼠；

小肠PK试验：在空腹状态的成年SD大鼠上，按1ml/kg给药体积经小肠导管给药，使Exenatide剂量为200μg/kg，另分一组，小肠导管注射(ei)添加本发明试验1药物组合物的Exenatide 200μg/kg，给药后0h，0.5h，1h，1.5h，2h，2.5h和3h，尾部采血，血样经10mM EDTA抗凝，4℃3000rpm离心5min，收集血浆速冻。

为避免动物出现低血糖，在给药前，先给入1g/kg的葡萄糖。

ELISA检测方法：用抗目标多肽的小鼠单抗包被，1％BSA封闭，再加入血样或0.1％BSA稀释的标准品孵育，Biotin标记的抗目标多肽的兔多抗捕获，HRP偶联的strepavidin孵育，最后TMB显色，HCl终止，450nm读数。根据标准品得到的标准曲线，计算血浆内目标多肽的浓度。

根据PK曲线计算AUC，以静脉注射(iv)的生物利用度为100％，计算小肠给药的生物利用度。

结果显示，Exenatide经iv注射1μg/kg后的PK曲线的AUC为0.93ng/ml.h，经小肠注射200μg/kg，血内浓度已低于ELISA检测下限。而添加试验1药物组合物后，PK曲线的AUC可以达到1.33ng/ml.h，小肠给入的生物利用度约为0.71％。试验结果见表2。

表2

试验3显著提高口服Exenatide的生物利用度

将Exenatide 0.7mg与试验1药物组合物200mg充分混匀，并冻干，装入3号肠溶胶囊，备用；

将Exenatide 0.7mg与试验1药物组合物400mg充分混匀，并冻干，装入0号肠溶胶囊，备用；

将Exenatide 0.7mg与试验1药物组合物600mg充分混匀，并冻干，装入00号肠溶胶囊，备用；

将Exenatide 0.7mg与试验1药物组合物200mg充分混匀，并冻干，装入3号普通胶囊，备用；

将Exenatide 0.7mg与甘露醇200mg充分混匀，并冻干，装入3号肠溶胶囊，备用；

试验动物：成年雄性比格犬

口服PK试验：动物空腹状态，口服肠溶胶囊后，于0.5，1，1.5，2，2.5，3h采集血样。血样经10mM EDTA抗凝，4℃、3000rpm离心5min，收集血浆速冻。

静脉PK试验：动物空腹状态，静脉注射0.3μg/kg Exenatide，于5，15，30，60，90，120min采集血样。血样经10mM EDTA抗凝，4℃、3000rpm离心5min，收集血浆速冻。

为避免动物出现低血糖，在给药前，先给入1g/kg的葡萄糖。

ELISA检测方法：用抗目标多肽的小鼠单抗包被，1％BSA封闭，再加入血样或0.1％BSA稀释的标准品孵育，Biotin标记的抗目标多肽的兔多抗捕获，HRP偶联的strepavidin孵育，最后TMB显色，HCl终止，450nm读数。根据标准品得到的标准曲线，计算血浆内目标多肽的浓度。

根据PK曲线计算AUC，以静脉注射(iv)的生物利用度为100％，计算小肠给药的生物利用度。

比格犬的PK数据显示，静脉注射0.3μg/kg的Exenatide的AUC约为0.82ng/ml.hour，口服Exenatide/试验1药物组合物0.7mg的AUC约为1.37ng/ml.hour。口服Exenatide/试验1药物组合物的生物利用度约为0.76％。试验结果见表3。

表3

Exenatide在没有本发明药物组合物的协助下，无法成功进入血液内，而加入本发明药物组合物后，入血效率得到显著改善。虽然Exenatide的入血效率随着试验1药物组合物重量的增加而略有增加，但增加的幅度有限(如下表4)。综合口服的便利性和药物有效性两方面的考虑，3号胶囊量比较合适。

表4

试验4Exenatide/试验1药物组合物可以明显抑制Alloxan比格犬餐后血糖的升高

将Exenatide 0.7mg与试验1药物组合物200mg充分混匀，并冻干，装入3号肠溶胶囊，备用；

试验动物：成年雄性比格犬；

动物体检与适应：采集动物空腹血样检测血生化指标，确定一切正常后，将动物放在较安静的房间适应1周，要求每天喂食时间和喂食量保持一致；

造模前数据采集：每天采集2个时间点血样(喂食前、喂食后6h)，连续采集5天；

造模试验：空腹状态，静脉推注60mg/kg Alloxan溶液，一周后，每天采集2个时间点血样(喂食前、喂食后6h)，连续采集5天；根据采集的数据，判断模型是否合格。若合格开始药效试验；

药效试验：喂食前吞服测试胶囊，采集2个时间点血样(喂食前、喂食后6h)。

结果显示，Exenatide/试验1药物组合物在Alloxan造模的比格犬上可以明显抑制餐后血糖的上升。试验结果见表5。

表5

试验例5本发明药物组合物可以显著提高小肠给入替度鲁肽(Teduglutide)的生物利用度

本发明药物组合物：吐温80、羧甲基壳聚糖与酒石酸钠的重量比为：25：8：80。

将Teduglutide与本发明药物组合物按照重量比1:5充分混匀，待用；

试验动物：成年雄性SD大鼠；

小肠PK试验：在空腹状态的成年SD大鼠上，按1ml/kg给药体积经小肠导管给药，使Teduglutide剂量为200μg/kg，另分一组，小肠导管注射(ei)添加本发明药物组合物的Teduglutide 200μg/kg，给药后0h，0.5h，1h，1.5h，2h，2.5h和3h，尾部采血，血样经10mMEDTA抗凝，4℃、3000rpm离心5min，收集血浆速冻。

静脉PK试验：动物空腹状态，静脉注射1μg/kg Teduglutide，于5，15，30，60，90，120min采集血样。血样经10mM EDTA抗凝，4℃、3000rpm离心5min，收集血浆速冻。

ELISA检测方法为用抗目标多肽的小鼠单抗包被，1％BSA封闭，再加入血样或0.1％BSA稀释的标准品孵育，Biotin标记的抗目标多肽的兔多抗捕获，HRP偶联的strepavidin孵育，最后TMB显色，HCl终止，450nm读数。根据标准品得到的标准曲线，计算血浆内目标多肽的浓度。

根据PK曲线计算AUC，以静脉注射(iv)的生物利用度为100％，计算小肠给药的生物利用度。

结果显示，Teduglutide经小肠给药200μg/kg，血内浓度低于ELISA检测下限。而添加本发明药物组合物后，小肠给入的生物利用度可以达到1.92％。

试验6本发明促小肠吸收药物组合物可以显著提高小肠给入胰高血糖素样肽-2类似物的生物利用度(专利201380029907.4中化合物1)

促小肠吸收药物组合物：十二烷基硫酸钠、壳聚糖、枸橼酸钠重量比为：20：6.5：68。

将化合物1与本发明药物组合物按照重量比1:5充分混匀，待用；

试验动物：成年雄性SD大鼠；

小肠PK试验：在空腹状态的成年SD大鼠上，按1ml/kg给药体积经小肠导管给药，使化合物1剂量为200μg/kg，另分一组，小肠导管注射(ei)200μg/kg的化合物1或添加本发明促小肠吸收的药物组合物的化合物1(化合物1为200μg/kg)，给药后0h，0.5h，1h，1.5h，2h，2.5h和3h，尾部采血，血样经10mM EDTA抗凝，4℃、3000rpm离心5min，收集血浆速冻。

静脉PK试验：动物空腹状态，静脉注射1μg/kg化合物1，于5，15，30，60，90，120min采集血样。血样经10mM EDTA抗凝，4℃、3000rpm离心5min，收集血浆速冻。

ELISA检测方法为用抗目标多肽的小鼠单抗包被，1％BSA封闭，再加入血样或0.1％BSA稀释的标准品孵育，Biotin标记的抗目标多肽的兔多抗捕获，HRP偶联的strepavidin孵育，最后TMB显色，HCl终止，450nm读数。根据标准品得到的标准曲线，计算血浆内目标多肽的浓度。

根据PK曲线计算AUC，以静脉注射(iv)的生物利用度为100％，计算小肠给药的生物利用度。

结果显示，化合物1经小肠注射200μg/kg，血内浓度低于ELISA检测下限。而添加本发明促小肠吸收药物组合物后，化合物1小肠给入的生物利用度可以达到1.78％。

试验7本发明促小肠吸收药物组合物可以显著提高胰高血糖素样肽-2类似物的生物利用度(专利201380029907.4中化合物4)

本发明促小肠吸收药物组合物：十二烷基硫酸钠、壳聚糖、枸橼酸钠重量比为：3：1：10。

将化合物4与本发明促小肠吸收药物组合物按照重量比1:5充分混匀，待用；

试验动物：成年雄性SD大鼠；

小肠PK试验：在空腹状态的成年SD大鼠上，按1ml/kg给药体积经小肠导管给药，使化合物4剂量为200μg/kg，另分一组，小肠导管注射(ei)200μg/kg的化合物4或添加本发明促小肠吸收药物组合物的化合物4，给药后0h，0.5h，1h，1.5h，2h，2.5h和3h，尾部采血，血样经10mM EDTA抗凝，4℃、3000rpm离心5min，收集血浆速冻。

静脉PK试验：动物空腹状态，静脉注射1μg/kg化合物4，于5，15，30，60，90，120min采集血样。血样经10mM EDTA抗凝，4℃、3000rpm离心5min，收集血浆速冻。

ELISA检测方法为用抗目标多肽的小鼠单抗包被，1％BSA封闭，再加入血样或0.1％BSA稀释的标准品孵育，Biotin标记的抗目标多肽的兔多抗捕获，HRP偶联的strepavidin孵育，最后TMB显色，HCl终止，450nm读数。根据标准品得到的标准曲线，计算血浆内目标多肽的浓度。

根据PK曲线计算AUC，以静脉注射(iv)的生物利用度为100％，计算小肠给药的生物利用度。

结果显示，化合物4经小肠注射200μg/kg，血内浓度低于ELISA检测下限。而添加本发明促小肠吸收药物组合物后，化合物4小肠给入的生物利用度可以达到1.85％。

试验8本发明促小肠吸收药物组合物可以显著提高胰高血糖素样肽-2类似物的生物利用度(专利201380029907.4中化合物11)

本发明促小肠吸收药物组合物：十二烷基硫酸钠、壳聚糖、枸橼酸钠重量比为：25：8：80。

将化合物11与本发明促小肠吸收药物组合物按照重量比1:5充分混匀，待用；

试验动物：成年雄性SD大鼠；

小肠PK试验：在空腹状态的成年SD大鼠上，按1ml/kg给药体积经小肠导管给药，使化合物11剂量为200μg/kg，另分一组，小肠导管注射(ei)200μg/kg的化合物11或添加本发明促小肠吸收药物组合物的化合物11，给药后0h，0.5h，1h，1.5h，2h，2.5h和3h，尾部采血，血样经10mM EDTA抗凝，4℃、3000rpm离心5min，收集血浆速冻。

静脉PK试验：动物空腹状态，静脉注射1μg/kg化合物11，于5，15，30，60，90，120min采集血样。血样经10mM EDTA抗凝，4℃、3000rpm离心5min，收集血浆速冻。

ELISA检测方法为用抗目标多肽的小鼠单抗包被，1％BSA封闭，再加入血样或0.1％BSA稀释的标准品孵育，Biotin标记的抗目标多肽的兔多抗捕获，HRP偶联的strepavidin孵育，最后TMB显色，HCl终止，450nm读数。根据标准品得到的标准曲线，计算血浆内目标多肽的浓度。

根据PK曲线计算AUC，以静脉注射(iv)的生物利用度为100％，计算小肠给药的生物利用度。

结果显示，化合物11经小肠注射200μg/kg，血内浓度低于ELISA检测下限。而添加本发明促小肠药物组合物后，化合物11小肠给入的生物利用度可以达到1.98％。