公开/公告号CN112986456A
专利类型发明专利
公开/公告日2021-06-18
原文格式PDF
申请/专利权人 扬子江药业集团北京海燕药业有限公司;扬子江药业集团有限公司;
申请/专利号CN202110198282.0
申请日2021-02-22
分类号G01N30/06(20060101);G01N30/74(20060101);
代理机构11262 北京安信方达知识产权代理有限公司;
代理人牛利民;张奎燕
地址 102206 北京市昌平区生命园路16号
入库时间 2023-06-19 11:29:13
技术领域
本申请涉及但不限于药物分析技术领域,尤其涉及一种恩格列净中间体的HPLC分析检测方法。
背景技术
恩格列净为一种选择性钠-葡萄糖协同转运蛋白(SGLT)抑制剂,用于治疗成人II型糖尿病。恩格列净通过对钠-葡萄糖协同转运蛋白选择性抑制作用,限制了大部分葡萄糖在体内的重吸收,促使葡糖大量从尿中排出达到控制血糖水平的目的。
在合成恩格列净的过程中,需要控制一些关键中间体的纯度,以减少副反应的发生和杂质的生成,继而提高恩格列净的收率和纯度。
对恩格列净中间体建立有效的分离方法对恩格列净产品的制备具有重要的意义。
发明内容
以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制本申请的保护范围。
恩格列净的合成涉及下列中间体化合物:其化学名为(2S,3R,4S,5R,6R)-2-(4-氯-3-(4-(((S)-四氢呋喃-3-基)氧)苄基)苯基)-3,4,5-三((三甲基硅)氧)-6-(((三甲基硅)氧)甲基)四氢-2H-吡喃-2-醇,其结构如下式(I)所示,
式(I)中TMS为三甲基硅烷基。
在合成该化合物过程中使用及可产生的有关物质(即杂质)有4个,分别为SM1、M1Z1、M1Z2、M1Z3,结构式分别为:
SM1
(S)-3-(4-(2-氯-5-碘苄基)苯氧基)四氢呋喃
M1Z1
(S)-3-(4-((4,4’-二氯-3’-(4-((R)-四氢呋喃-3-基)氧基)苄基)-[1,1’-联苯]-3-基)甲基)苯氧基)四氢呋喃
M1Z2
(S)-3-(4-(2-氯苄基)苯氧基)四氢呋喃
M1Z3
(S)-4-氯-3-(4-((四氢呋喃-3-基)氧基)苄基)苯酚。
本发明可定量测定上述恩格列净中间体及其有关物质,为恩格列净的制备过程提供有效监测数据,继而减少反应中副产物及杂质的生成,实现恩格列净质量可控。
本发明提供了一种恩格列净中间体的分析检测方法,所述的分析检测方法包括如下步骤:
(1)制备供试品溶液:取恩格列净中间体适量,加稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg恩格列净中间体的溶液,作为供试品溶液;这里,所述的稀释剂选自乙腈、二甲基亚砜、四氢呋喃和甲醇中一种或两种以上的混合溶剂;
(2)设置色谱条件:色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂;检测波长为220nm~230nm;流动相采用流动相A和流动相B,进行梯度洗脱,这里,所述流动相A为缓冲盐水溶液,所述流动相B为乙腈;流动相的流速为0.5~1.5ml/min;柱温为25℃~35℃;
(3)测定:取步骤(1)的供试品溶液5μl~50μl,注入高效液相色谱仪,记录色谱图。
在上述的分析测定方法中,所述恩格列净中间体为(2S,3R,4S,5R,6R)-2-(4-氯-3-(4-(((S)-四氢呋喃-3-基)氧)苄基)苯基)-3,4,5-三((三甲基硅)氧)-6-(((三甲基硅)氧)甲基)四氢-2H-吡喃-2-醇,其结构如下式(I)所示,
在上述的分析测定方法中,所述的稀释剂选自乙腈、二甲基亚砜、四氢呋喃和甲醇中一种或两种以上的混合溶剂。
在上述的分析测定方法中,所述稀释剂为二甲基亚砜与乙腈的混合溶剂,任选地,所述混合溶剂中二甲基亚砜与乙腈的体积比为(10-30):(70-90),例如20:80。
在上述的分析测定方法中,所述色谱柱可选用Agilent、Welch等品牌,优选Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 4.6*100mm*3.5um。
在上述的分析测定方法中,所述缓冲盐选自乙酸盐、磷酸盐和甲酸盐中的一种,优选乙酸盐。所述的盐可以是钠盐、钾盐或铵盐。
在上述的分析测定方法中,所述缓冲盐水溶液的浓度为4mmol/L~6mmol/L;任选地,所述缓冲盐水溶液的pH为7.3~9.0。
在上述的分析测定方法中,所述缓冲盐水溶液为乙酸铵缓冲溶液,其浓度为5mmol/L,并且用氨水调节pH至7.5。
在上述的分析测定方法中,所述梯度洗脱的程序为:
在上述的分析测定方法中,所述高效液相色谱仪为Agilent 1260液相色谱仪;
色谱柱:C18(Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 4.6*100mm*3.5um);
检测波长为225nm;
流速为1.0ml/min;
柱温:30℃;
进样体积:10μl。
在上述的分析测定方法中,流动相A为5mmol/L乙酸铵缓冲溶液(用氨水调节pH至7.5);流动相B为乙腈;梯度洗脱程序为:
在上述的分析测定方法中,所述制备供试品溶液包括:取恩格列净中间体、SM1、M1Z1、M1Z2和M1Z3适量,加稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg恩格列净中间体、约30μg SM1、约20μg M1Z1和约20μg M1Z2、约20μg M1Z3的溶液,作为供试品溶液。
在一种的上述分析检测方法中,所述分析检测方法包括如下步骤:
(1)制备供试品溶液:取恩格列净中间体适量,加稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg恩格列净中间体的溶液,作为供试品溶液;这里,所述的稀释剂是体积比为20:80的二甲基亚砜与乙腈的混合溶剂;
(2)设置色谱条件:色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂;检测波长为220nm~230nm;流动相采用流动相A和流动相B,进行梯度洗脱;所述流动相B为乙腈;流动相的流速为0.5~1.5ml/min;柱温为25℃~35℃;
这里,所述流动相A为乙酸铵缓冲溶液,其浓度为5mmol/L,并且用氨水调节pH至7.5;
所述梯度洗脱的程序为:
(3)测定:取步骤(1)的供试品溶液10μl,注入高效液相色谱仪,记录色谱图。
本发明使用高效液相系统检测恩格列净中间体纯度,该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱,以缓冲盐-有机相为流动相进行梯度洗脱,可定量测定恩格列净中间体及其有关物质,为恩格列净的制备过程提供有效监测数据,继而减少反应中副产物及杂质的生成,实现恩格列净质量可控。经过完善的方法学验证,说明方法具有专属性强、准确性高以及良好的稳定性。
对本发明提供的分析测定方法进行方法学验证,结果如下:
本申请的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述,并且,部分地从说明书中变得显而易见,或者通过实施本申请而了解。本申请的其他优点可通过在说明书以及附图中所描述的方案来实现和获得。
附图说明
附图用来提供对本申请技术方案的理解,并且构成说明书的一部分,与本申请的实施例一起用于解释本申请的技术方案,并不构成对本申请技术方案的限制。
图1为实施例1时的恩格列净中间体及其有关物质的HPLC图谱;
图2为实施例2时的恩格列净中间体及其有关物质的HPLC图谱;
图3为实施例3时的恩格列净中间体及其有关物质的HPLC图谱;
图4为实施例4时的恩格列净中间体及其有关物质的HPLC图谱。
具体实施方式
为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚明白,下文中将对本发明的实施例进行详细说明。需要说明的是,在不冲突的情况下,本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互任意组合。
以下将结合实施例更详细地解释本发明,本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案,并非限定本发明的实质和范围。
实验所用的测试仪器
高效液相色谱仪:Agilent 1260液相色谱仪,DAD检测器。
实施例1
色谱条件
色谱柱:C18(Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 4.6×100mm,3.5μm)
检测波长为225nm
流速为1.0ml/min
柱温:30℃
进样体积:10μl
流动相:以5mmol/L乙酸铵缓冲溶液(用氨水调节pH至7.5)为流动相A,以乙腈为流动相B,按下表行梯度洗脱;
实验步骤
取恩格列净中间体及其有关物质适量,配制成每1ml中含有恩格列净中间体约1mg、SM1约30μg、M1Z1约20μg、M1Z2约20μg、M1Z3约20μg的溶液。按照上述色谱条件,精密量取10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。
结果见附图1,该色谱条件下恩格列净中间体及其有关物质可达到有效分离。附图1中恩格列净中间体及其有关物质的保留时间及分离度如下表所示:
该色谱条件下恩格列净中间体的检测结果如下:
实施例2
色谱条件
色谱柱:C18(Welch Ultimate C18 4.6×100mm,3μm)
检测波长为225nm
流速为1.0ml/min
柱温:30℃
进样体积:10μl
流动相:以5mmol/L乙酸铵缓冲溶液(用氨水调节pH至7.5)为流动相A,以乙腈为流动相B,按下表行梯度洗脱;
实验步骤
取恩格列净中间体及其有关物质适量,配制成每1ml中含有恩格列净中间体约1mg、SM1约30μg、M1Z1约20μg、M1Z2约20μg、M1Z3约20μg的溶液。按照上述色谱条件,精密量取10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。
结果见附图2,该色谱条件下恩格列净中间体及其有关物质可达到有效分离。附图2中恩格列净中间体及其有关物质的保留时间及分离度如下表所示:
该色谱条件下恩格列净中间体的检测结果如下:
实施例3
色谱条件
色谱柱:C18(Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 4.6×100mm,3.5μm)
检测波长为225nm
流速为1.0ml/min
柱温:30℃
进样体积:10μl
流动相:以5mmol/L乙酸铵缓冲溶液(用氨水调节pH至7.3)为流动相A,以乙腈为流动相B,按下表行梯度洗脱;
实验步骤
取恩格列净中间体及其有关物质适量,配制成每1ml中含有恩格列净中间体约1mg、SM1约30μg、M1Z1约20μg、M1Z2约20μg、M1Z3约20μg的溶液。按照上述色谱条件,精密量取10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。
结果见附图3,该色谱条件下恩格列净中间体及其有关物质可达到有效分离。附图3中恩格列净中间体及其有关物质的保留时间及分离度如下表所示:
该色谱条件下恩格列净中间体的检测结果如下:
实施例4
色谱条件
色谱柱:C18(Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 4.6×100mm,3.5μm)
检测波长为225nm
流速为1.0ml/min
柱温:35℃
进样体积:10μl
流动相:以5mmol/L乙酸铵缓冲溶液(用氨水调节pH至7.5)为流动相A,以乙腈为流动相B,按下表行梯度洗脱;
实验步骤
取恩格列净中间体及其有关物质适量,配制成每1ml中含有恩格列净中间体约1mg、SM1约30μg、M1Z1约20μg、M1Z2约20μg、M1Z3约20μg的溶液。按照上述色谱条件,精密量取10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。
结果见附图4,该色谱条件下恩格列净中间体及其有关物质可达到有效分离。附图4中恩格列净中间体及其有关物质的保留时间及分离度如下表所示:
该色谱条件下恩格列净中间体的检测结果如下:
本申请描述了多个实施例,但是该描述是示例性的,而不是限制性的,并且对于本领域的普通技术人员来说显而易见的是,在本申请所描述的实施例包含的范围内可以有更多的实施例和实现方案。
机译: 合成卡格列净和达帕格列净的中间体的制备
机译: 恩帕格列净中间体的制备和纯化方法
机译: 在超重或肥胖的患者中减缓糖尿病的进展,延迟或治疗的方法,包括施用一种或多种恩帕格列净和抗肥胖药以及包含此类药物的药物组合物。