一种利用万寿菊秸秆制备淡紫拟青霉防控烟草根结线虫的方法

摘要

本发明公开了一种利用万寿菊秸秆制备淡紫拟青霉防控烟草根结线虫的方法，其中，所述制备方法为：将淡紫拟青霉的活化菌种置于万寿菊秸秆培养料的表面后，于恒温下培养，待培养料中充满淡紫拟青霉的菌丝及孢子后，即完成培养。本发明采用万寿菊秸秆培养料来培养淡紫拟青霉，可以提高淡紫拟青霉对根结线虫病的防效。经申请人试验证明，万寿菊秸秆培养料与淡紫拟青霉具有一定的协同作用，能够提高淡紫拟青霉对烟草根结线虫的防效，防治效果可达86.90%。

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用万寿菊秸秆制备淡紫拟青霉防控烟草根结线虫的方法，属于烟草根结线虫病防治技术领域。

背景技术

烟草根结线虫病是烟草种植过程中主要的根茎病害，根结线虫(Meloidogynespp)以二龄幼虫侵染烟草根组织，并定居组织内取食，分泌酶类、生长素类物质刺激细胞畸形，造成烟草根系呈结状、导致吸收水分及养分功能下降，地上部生长受到影响，常表现为植株矮小、叶薄、有效物质含量下降，品质降低，造成严重的经济损失。

防治烟草根结线虫病主要采用化学农药，例如噻唑膦，然而，化学药剂会造成烟叶中农药残留的增加，根结线虫抗药性的增强，进而影响到烟叶生产的可持续发展。

生物防治因具有可持续、绿色、环保等特性，已逐步成为绿色、有机烟叶生产中烟草根结线虫病防控的主要手段。淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)为植物线虫寄生菌，对根结线虫具有较强的抑杀作用，常用于根结线虫病的防治。淡紫拟青霉是一种腐生菌，适宜用作物秸秆培养。例如专利201611258790公开了淡紫拟青霉及其规模化制备方法，培养基选取玉米秸秆为主要原料。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种利用万寿菊秸秆制备淡紫拟青霉防控烟草根结线虫的方法，采用万寿菊秸秆培养料来培养淡紫拟青霉，可以提高淡紫拟青霉对根结线虫病的防效。

本发明的技术方案是：一种利用万寿菊秸秆制备淡紫拟青霉防控烟草根结线虫的方法，其中，所述制备方法为：将淡紫拟青霉的活化菌种置于万寿菊秸秆培养料的表面后，于恒温下培养，培养料中充满淡紫拟青霉的菌丝及孢子后，即完成培养。

可选的，所述淡紫拟青霉菌种活化的方法为：将淡紫拟青霉接种到PDA培养基上进行活化，并置于25℃恒温培养箱内倒置培养5-6d。

可选的，所述万寿菊秸秆培养料的制备方法为：

先将粉碎后的万寿菊秸秆放入容器内，加入适量水搅拌均匀，加入水的量以捏秸秆时有水滴但不能滴落为准；

将已搅拌均匀的万寿菊秸秆装入培养瓶中，经高温灭菌并冷却，即得万寿菊秸秆培养料。

可选的，高温灭菌的温度为121℃，时间为30min。

可选的，所述恒温培养的温度为25℃。

本发明的有益效果是：本发明采用万寿菊秸秆培养料来培养淡紫拟青霉，可以提高淡紫拟青霉对根结线虫病的防效。经申请人试验证明，万寿菊秸秆培养料与淡紫拟青霉具有一定的协同作用，能够提高淡紫拟青霉对烟草根结线虫的防效，防治效果可达86.90％。

此外，本发明能够解决万寿菊秸秆的废物利用问题。万寿菊因具有观赏、药用价值，而被广泛种植，产生大量废弃的秸秆，已成为万寿菊产业发展的突出问题。本发明将万寿菊秸秆制备成培养料，不仅提高了淡紫拟青霉对根结线虫的防效，而且能够解决废弃万寿菊秸秆的利用问题，增加其经济效益和社会效益。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1供试菌种：淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)，从大方烟草根结线虫卵囊上分离获得。

1.1.2供试秸秆：万寿菊秸秆和玉米秸秆，把秸秆晒干、经粉碎机粉碎后备用。

1.1.3试剂与仪器：PDA培养基(北京奥博星生物技术有限责任公司)、培养瓶、电子天平、微波炉、水、培养皿、接种针、超净工作台、高压灭菌器、恒温培养箱、打孔器。

1.2试验方法

1.2.1菌种活化：将需要活化的淡紫拟青霉菌种接种到PDA培养基平板上进行活化，将活化好的菌转接到PDA平板上，并置于25℃恒温培养箱内，倒置培养5-6d，得到淡紫拟青霉菌饼。

1.2.2万寿菊秸秆培养料培养淡紫拟青霉：将适量已粉碎好的万寿菊秸秆放入桶内，加入适量水搅拌混匀，加入水的量以捏秸秆时有水滴但不能滴落为准。将已搅拌混匀的秸秆装入250ml培养瓶中(秸秆填充到培养瓶的9/10处)，经121℃高温灭菌30min。待冷却后，用打孔器取3个直径为2.5cm的菌饼置于已灭菌好的秸秆培养料的表面，后放入25℃的恒温培养箱下培养，定期观察，待瓶中充满淡紫拟青霉的菌丝及孢子后，即完成培养，备用。

1.2.3玉米秸秆培养料培养淡紫拟青霉：将适量已粉碎好的玉米秸秆放入桶内，加入适量水搅拌混匀，加入水的量以捏秸秆时有水滴但不能滴落为准。将已搅拌混匀的秸秆装入250ml培养瓶中(秸秆填充到培养瓶的9/10处)，经121℃高温灭菌锅灭菌30min。待冷却后，然后用打孔器取3个直径为2.5cm的菌饼置于已灭菌好的秸秆培养料的表面，后放入25℃的恒温培养箱下培养，定期观察，待瓶中充满淡紫拟青霉的菌丝及孢子后，即完成培养，备用。

1.2.4田间小区设置及施用：大田试验安排在贵州省毕节市大方县黄泥塘镇五里坝村。选取上一年度烟草根结线虫发生严重的田块，进行试验。本试验共设置4个处理、1个CK，每个处理3次重复，共15个小区，小区的大小在0.05亩左右(60株烟苗左右)，小区采用完全随机排列设计。试验处理及施用方法见表1。

表1试验处理及施用方法

1.2.5防效调查：在采收完成后进行调查，调查时，将整个小区烟株全部拔起，按照国家标准GB/23222-2008《烟草病虫害分级及调查方法》，调查各株病情严重度，计算病情指数、发病率及防效。

2结果与分析

2.1不同处理烟草根结线虫病发病率分析

表2不同处理烟草根结线虫病发病率方差分析表

注：不同大、小写字母代表不同处理在(P<0.05)、(P<0.01)水平差异显著。

2.2不同处理烟草根结线虫病的病情指数分析

表3不同处理烟草根结线虫病的病情指数方差分析表

注：不同大、小写字母代表不同处理在(P<0.05)、(P<0.01)水平差异显著。

2.3不同处理对烟草根结线虫病的防治效果分析

表4不同处理对烟草根结线虫病的防治效果方差分析表

注：不同大、小写字母代表不同处理在(P<0.05)、(P<0.01)水平差异显著，“--”代表无法计算该指标。

从表2至表4可看出，万寿菊秸秆培养料与淡紫拟青霉具有一定的协同作用，能够提高淡紫拟青霉对烟草根结线虫病的防效。

从不同处理烟草根结线虫的发病率方差分析表来看，与空白对照相比，单独施用玉米秸秆能够将发病率由CK的67.14％降低到41.17％，单独施用万寿菊秸秆能够将发病率由CK的67.14％降低到29.44％，二者发病率相差11.73个百分点。施用玉米秸秆的淡紫拟青霉培养物(常规淡紫拟青霉的制备方法)能够将发病率降低到22.48％，施用万寿菊秸秆的淡紫拟青霉培养物能够将发病率降低到6.23％，二者发病率相差16.25个百分点，明显高于单独施用玉米秸秆与单独施用万寿菊秸秆的发病率相差的11.73个百分点。

从不同处理烟草根结线虫病的病情指数方差分析表来看，与空白对照相比，单独施用玉米秸秆能够将病情指数由CK的20.54降低到12.29；单独施用万寿菊秸秆能够将病情指数由CK的20.54降低到10.48，二者病情指数相差1.81。施用玉米秸秆的淡紫拟青霉培养物能够将病情指数降低到5.72；施用万寿菊秸秆的淡紫拟青霉培养物能够将病情指数降低到2.69，二者病情指数相差3.03，明显高于单独施用玉米秸秆与单独施用万寿菊秸秆的病情指数相差的1.81。

从不同处理对烟草根结线虫病相对防治效果方差分析表来看，单独施用玉米秸秆的防治效果在40.17％左右，单独施用万寿菊秸秆的防治效果在48.98％左右，二者防治效果相差8.81个百分点。施用玉米秸秆的淡紫拟青霉培养物的防治效果在72.15％左右，施用万寿菊秸秆的淡紫拟青霉培养物的防治效果可达86.90％，二者防治效果相差14.75个百分点，明显高于单独施用玉米秸秆与单独施用万寿菊秸秆的防治效果相差的8.81个百分点。

综上可知，由于单独施用玉米秸秆与单独施用万寿菊秸秆对烟草根结线虫病的防效相差并不大，而施用万寿菊秸秆的淡紫拟青霉培养物相比施用玉米秸秆的淡紫拟青霉培养物的防效差距更大，因此，万寿菊秸秆培养料与淡紫拟青霉在防治烟草根结线虫方面具有一定的协同作用。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。