获得低三萜烯/三萜类化合物含量的天然橡胶乳胶的方法

摘要

本发明提供一种降低或消除来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，包括基因修饰所述产胶植物或其部分分，从而使得与相应的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。本发明还提供一种经基因修饰的产胶植物或其部分，使得与相应的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性降低或消除；以及提供一种特异性地针对至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物的RNAi，用于降低或消除来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物的含量。

说明书

发明领域

本发明提供了一种降低或消除来自产胶植物或其部分(laticiferous plant orpart thereof)的乳胶或橡胶中的三萜烯(triterpenes)和/或三萜类化合物(triterpenoids)含量的方法，包括基因修饰产胶植物或其部分，使得至少一种氧化角鲨烯环化酶(oxidosqualene cyclase)的活性降低或消除。此外，本发明提供了基因修饰的产胶植物或其部分，使得与各自的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性降低或消除。另外，本发明还包括一种RNAi，其特异性地针对至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物，其用于所述降低或消除来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法。

背景技术

由甲羟戊酸(MVA)途径提供氧化角鲨烯环化酶(OSCs)催化2、3-氧喹啉的环化(Abe，2007；Thimmappa et al.，2014)化。这导致产生三萜烯，30-碳化合物，其包含植物中近200种不同的支链(Xu et al.，2004)。剪裁酶可以通过乙酰化、氧化或加入糖链进一步修饰三萜，导致巨大的多样性，具有超过20000种已知的三萜类化合物(Xu et al.，2004；Thimmappa et al.，2014)。

由于环化反应类型，两类三萜类化合物之间存在不同：第一类椅-船-椅构象中发生，并且最初导致环阿屯醇的产生，其是植物甾醇的中间体(Abe，2007；Thimmappa等人，2014年)。所得甾醇的功能例如为作为膜化合物或信号分子。因此，它们对于植物的生长发育至关重要(Hartmann，1998；Clouse，2002)。在第二类椅-椅-椅构象中，包括形成了五环三萜烯，例如羽扇豆醇和β-香树脂醇(Thimmappa等人，2014)。大量的五环三萜显示出抗菌和抗真菌特性，并在植物防御中发挥作用。

由于这种特点，它们在食品、化妆品和制药行业的广泛应用中引起兴趣(Augustin等，2011；Osbourn等人，2011；Moses等人，2014)。在蒲公英中，大量的五环三萜烯主要在根中，更确切地讲，在乳化细胞中，一种特殊的细胞类型，其产生含有高浓度次生代谢产物的乳状液(Furuno等，1993；Akashi等，1994)。这种细胞类型也是聚(顺式-1、4-异戊二烯)生物合成的场所，这是天然橡胶(NR)的主要成分(Hagel等，2008)。NR是一种重要的生物聚合物，可用于生产40000多种消耗品，包括例如轮胎和医疗器械(Davis,1997；Mooibroek和Cornish，2000；Hagel等人，2008)。用于商业用途的高质量NR通常来自橡胶树巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)；但是，也可以从俄罗斯蒲公英T.koksaghyz的根中提取。源自蒲公英的NR掺入了少量添加剂，例如脂肪酸、蛋白质和三萜烯，这些添加剂会影响NR的特性(Norand Ebdon，1998；Sakdapipanich，2007；Schulze Gronover等人，2011)。

由于T.koksaghyz是一种自交不亲和的有性生殖植物，它产生异源后代(Krotkov，1945；Schulze Gronover等，2011)。因此，五环三萜烯的量在单个植物之间变化，这对于工业应用而言是不希望的。

此外，Jungkong和Ikeda等人已经表明，诸如三萜烯的物质通常对天然橡胶或胶乳的性能具有重要影响。

因此，不仅需要稳定水平的三萜烯和/或三萜类化合物，而且还需要减少乳胶或来自产胶植物的橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量。本发明旨在解决这个问题。

发明内容

本发明的问题通过权利要求中定义的和本文定义的主题解决。

在一个实施方案中，本发明提供了一种降低或消除来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，包括基因修饰该产胶植物或其部分，使得与相应的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性降低或消除。产胶植物或其部分也可以是相应产胶植物的后代。

在一个优选的实施方案中，产胶植物或其部分通过至少一种异源核苷酸序列基因修饰，所述异源核苷酸序列能够降低或消除所述至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性，和/或通过使所述产胶植物或其部分与能够降低或消除所述至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的试剂接触和/或与试剂孵育而对其进行基因修饰。与相应的野生型或未处理的产胶植物、其后代或其部分相比，还应考虑术语“能够降低或消除”。

在另一个实施方案中，至少一种异源核苷酸序列编码至少一种RNAi，所述的RNAi干扰编码至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA，条件是至少一种RNAi能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。与相应的野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分相比，还应考虑术语“能够降低或消除”。

在本发明方法的一个实施方案中，至少一种RNAi特异性地针对至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物，优选地，其中至少一种RNAi包括或由如SEQ ID NO：1的核苷酸序列组成，和/或包括或由如SEQ ID NO：2的核苷酸序列组成，和/或包含或由与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列组成。

在本发明方法的另一个实施方案中，产胶植物或其部分选自下组的植物家族：夹竹桃科(Apocynaceae)、菊科(Asteraceae)、大戟科(Euphorbiaceae)和桑科(Moraceae)。产胶植物或其部分也可以是相应的产胶植物的后代。

在本发明方法的一个具体实施方案中，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自下组：如SEQ ID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1、如SEQ ID NO：6的氧化角鲨烯环化酶2、如SEQ ID NO：8的氧化角鲨烯环化酶3、如SEQ ID NO：10的氧化角鲨烯环化酶4、如SEQ ID NO：12的氧化角鲨烯环化酶5、如SEQ ID NO：14的氧化角鲨烯环化酶6、如SEQ ID NO：16的氧化角鲨烯环化酶7、如SEQ ID NO：18的氧化角鲨烯环化酶8、如SEQ ID NO：20的羽扇豆醇合成酶(lupeolsynthase)和与SEQ ID NO：4、6、8、10、12、14、16、18或20具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列。

在本发明方法的一个实施方案中，产胶植物的部分选自下组：细胞、组织、器官、根、茎、枝、叶、渗出物、胶乳及其混合物。

本发明还包括经基因修饰的产胶植物或其部分，使得与相应的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性降低或消除。与相应的野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分相比，还应考虑术语“能够降低或消除”。

在一个实施方案中，所述产胶植物或其部分是通过至少一种异源核苷酸序列基因修饰的，所述异源核苷酸序列能够降低或消除所述至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性，或通过使所述产胶植物或其部分与能够降低或消除所述至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的试剂接触和/或与之孵育而对其进行基因修饰。与相应的野生型或未处理的产胶植物、其后代或其部分相比，还应考虑术语“能够降低或消除”。

在另一个实施方案中，在本发明的产胶植物或其部分中，至少一种异源核苷酸序列编码至少一种RNAi，所述的RNAi特异干扰编码至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA，条件是至少一种RNAi能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。产胶植物或其部分也可以是各种产胶植物的后代。与各自的野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分相比，还应考虑术语“能够降低或消除”。

在本发明方法的另一实施方案中，在本发明的产胶植物或其部分中，至少一种RNAi性地针对至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物，优选地，其中至少一种RNAi包括或由如SEQ ID NO：1的核苷酸序列组成，和/或包括或由如SEQ ID NO：2的核苷酸序列组成，和/或包含或由与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2具有至少60％，70％，80％，90％，95％或99％同一性的核苷酸序列组成。

在另一个实施方案中，所述产胶植物或其部分选自下组的植物家族：夹竹桃科(Apocynaceae)、菊科(Asteraceae)、大戟科(Euphorbiaceae)、桑科(Moraceae)或其杂交。优选地，所述产胶植物或其部分选自下组：姬松茸(姬松茸(Agoserisglauca))、罗布麻(Apocynum venetum)、沙棘(Chrysothamnus graveolens)、一枝黄(Chrysothamnusnauseosus)、黄花蛇舌草(Chrysothamnus viscidiflorus)、丝胶树(Funtumia elastica)、银胶菊(Parthenium argentatum)、刺枝野丁香(Scorzonera acanthoclada)、华北鸦葱(Scorzonera albicaulis)、叉枝鸦葱(Scorzonera divaricate)、高架鸦葱(Scorzonerahissaricata)、果榕鸦葱(Scorzonera racemosa)、山胶(Scorzonera tau-saghyz)、苦苣菜(Scorzonera tragapogonoides)、土耳其鸦葱(Scorzonera turkestania)、帚状鸦葱(Scorzonera virgate)、加拿大一枝黄花(Solidago canadensis scabra)、香蜂一枝黄(Solidagofistulosa)、利文沃思一枝黄(Solidago leavenworthii)、硬枝一枝黄(Solidago rigida)、苦麻菜(Sonchus oleraceus)、短角蒲公英(Taraxacumbrevicorniculatum)、克里木橡胶草(Taraxacum hybernum)、橡胶草(Taraxacumkoksaghyz)、Taraxacum megalorrhizon、西洋蒲公英(Taraxacum officinale)或其杂交。在另一个实施方案中，产胶植物或其部分选自下组的植物家族：夹竹桃科(Apocynaceae)、菊科(Asteraceae)、大戟科(Euphorbiaceae)、桑科(Moraceae)，优选地，产胶植物或其部分选自下组：姬松茸(Agoseris glauca)、罗布麻(Apocynum venetum)、沙棘(Chrysothamnusgraveolens)、一枝黄(一枝黄(Chrysothamnus nauseosus))、黄花蛇舌草(Chrysothamnusviscidiflorus)、菊苣(Cichorium intybusL.)、丝胶树(丝胶树(Funtumia elastica))、银胶菊(Parthenium argentatum)、刺枝野丁香(Scorzonera acanthoclada)、华北鸦葱(Scorzonera albicaulis)、叉枝鸦葱(Scorzonera divaricate)、高架鸦葱(Scorzonerahissaricata)、果榕鸦葱(Scorzonera racemosa)、(山胶(Scorzonera tau-saghyz)、苦苣菜(Scorzonera tragapogonoides)、土耳其鸦葱(土耳其鸦葱(Scorzoneraturkestania))、帚状鸦葱(Scorzonera virgate)、加拿大一枝黄花(Solidago canadensisscabra)、香蜂一枝黄(Solidagofistulosa)、利文沃思一枝黄(Solidago leavenworthii)、(硬枝一枝黄(Solidago rigida)、苦麻菜(Sonchus oleraceus)、短角蒲公英(Taraxacumbrevicorniculatum)、克里木橡胶草(Taraxacum hybernum)、橡胶草(Taraxacumkoksaghyz)、Taraxacum megalorrhizon、西洋蒲公英(Taraxacum officinale)或其杂交。在更优选的实施方案中，产胶植物或其部分为菊苣(Cichorium intybusL.)

在本发明的另一个实施方案中，在产胶植物或其部分中，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自下组：如SEQ ID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1、如SEQ ID NO：6的氧化角鲨烯环化酶2、如SEQ ID NO：8的氧化角鲨烯环化酶3、如SEQ ID NO：10的氧化角鲨烯环化酶4、如SEQ IDNO：12的氧化角鲨烯环化酶5、如SEQ ID NO：14的氧化角鲨烯环化酶6、如SEQ ID NO：16的氧化角鲨烯环化酶7、如SEQ ID NO：18的氧化角鲨烯环化酶8、如SEQ ID NO：20的羽扇豆醇合成酶(lupeolsynthase)和与SEQ ID NO：4、6、8、10、12、14、16、18或20具有至少60％，70％，80％，90％，95％或99％同一性的核苷酸序列。

本发明还涉及一种特异性地针对至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物的RNAi，优选地，所述RNAi包括或由如SEQ ID NO：1的核苷酸序列组成，和/或包括或由如SEQID NO：2的核苷酸序列组成，和/或包含或由与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列组成，用于降低或消除来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物的含量。

结合附图、非限制性示例和所附权利要求书，参考详细描述将更好地理解本发明。

附图的简要说明

图1：TKOSC1和TKOSC-RNAi品系分析。图1(a)显示9至16周龄野生型(空白盒，n＝4)、TkOSC1-RNAi(斜条纹盒，n＝7)和TkOSC-RNAi植物(水平条纹盒，n＝12)的归一化TKOSC1的表达，通过组成性表达的基因延伸因子1a(TkEF1a)和来自T.koksaghyz的核糖体蛋白L27(TkRP)的qRT-PCR测定。图1(b)显示TkOSC2-3、TkOSC5-6和TkLUP的表达分析，图1(c)显示其中TkSQS1和TkSQE2。因此，测定了每组的三株植物。通过GC/MS对5至7月龄收获的冻干根材料中的三萜提取物进行了单五环三萜烯(图1(d))和三萜烯亚类(图1(e))的定量分析。前体＝角鲨烯和2，3-氧化角鲨烯；甾醇中间体＝环烯醇和24-亚甲基环烷醇；五环三萜烯＝蒲公英赛醇(taraxerol)/n.i.(未鉴定的五环三萜)、β-香树脂醇(β-amyrin)、羽扇豆醇(lupeol)、β-香树脂醇(α-amyrin)/lup-19(21)-烯-3-醇，TkOSC3产物1，TkOSC3产物2，n.i.1和蒲公英甾醇(taraxasterol)；甾醇＝菜油甾醇(campesterol)，豆甾醇(stigmasterol)和谷固甾醇(sitosterol)；具有适当标准偏差的条形图；盒形图：盒＝25％-75％，吧(bar)＝中位数，正方形＝平均值，哈希(hash)＝离群值，须(whisker)＝1.5四分位间距；星号＝与T.koksaghyz野生型相比的统计显著性(对n＝3进行了双尾t检验，对n>3进行了Mann-Whitney U检验，*＝p<0.05，**＝p<0.01)。

图2：分析来自TkOSC1-和TkOSC-RNAi品系的NR提取物中的三萜烯。从独立的野生型(空盒，n＝3)，TkOSC1-RNAi(斜条纹盒，n＝3)和TkOSC-RNAi(水平条纹盒，n＝3)植物中提取NR，通过GC/MS测定相应的三萜烯提取物。条形图中以适当的标准差显示五环三萜烯(如图2(a)所示)，三萜烯亚类(如图2(b)所示)，总三萜类化合物和总五环三萜烯(如图2(c)所示)；星号表示根与NR之间的统计学显著性差异(两尾t检验，*＝p<0.05，**＝p<0.01，***＝p<0.001)。前体＝角鲨烯和2，3-氧化角鲨烯；甾醇中间体＝环烯醇和24-亚甲基环烷醇；五环三萜＝蒲公英赛醇、β-香树脂醇、羽扇豆醇、α-香树脂醇，lup-19(21)-烯-3-醇或蒲公英甾醇，OSC3产品和未鉴定的(n.i.)三萜烯；甾醇＝菜油甾醇(campesterol)、豆甾醇(stigmasterol)和谷固甾醇(sitosterol)；乙酸酯＝Ac。

图3：TKOSC1-8和TKLUP氨基酸序列的对准。对准是使用Clustal Omega(https://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalo/)进行的。横线代表对准序列中的缺口。保守位点包括用于确定产物的结构域(M(W/Y)CY(C/S)R-基序，虚线框)、参与底物结合和环化的区域(DCTAE-基序，实心框)和重复的涉及碳阳离子中间体的稳定化QW-基序(下划线)，都位于蛋白质的5'和3'末端附近。TkOSC1涉及SEQ ID NO：4，TkOSC2涉及SEQ ID NO：6，TkOSC3涉及SEQ ID NO：8，TkOSC4涉及SEQ ID NO：10，TkOSC5涉及SEQ ID NO：12，TkOSC6涉及SEQ IDNO：14，TkOSC7涉及SEQ ID NO：16，TkOSC8涉及SEQ ID NO：18，TkLUP涉及SEQ ID NO：20。

本发明的详细描述

本发明基于令人惊讶的发现了通过根据本发明的方法可以减少或甚至完全消除胶乳或橡胶的三萜烯和/或三萜类化合物含量。这允许提供产胶植物、其后代或其部分，其特征在于含有低甚至不存在的三萜烯和/或三萜类化合物含量。这提供从本发明的产胶植物、其后代或其部分获得的橡胶或乳胶产生的产品或材料的优点，后代例如在耐久性，坚固性和寿命方面。

实施例2显示氧化角鲨烯环化酶(OSC)的敲低可以通过RNAi(RNA干扰)介导的敲低来实现。实施例3显示OSC的敲低导致产胶植物(例如橡胶草(Taraxacum koksaghyz))的根和橡胶中五环三萜类化合物含量(三萜烯和三萜类化合)降低。例如，关于根，进行了以下观察结果：五环三萜类化合物在转基因品系中受到强烈影响(图1(d)和图1(e))。结果，总量从野生型植物中的4.6mg/g干燥根重减少到TkOSC1-RNAi植物(包含SEQ ID NO：2的核苷酸序列)中的2.8mg/g干燥根重和Tkosc-RNAi植物(包含SEQ ID NO：1的核苷酸序列)中的2.6mg/g干燥根重。特别是最丰富的三萜烯、蒲公英甾醇、β-香树脂醇和一种未识别的三萜(n.i.1)在Tkosc-RNAi植物中都在的减少具有更高的显着性。除了五环三萜烯之外，通过GC/MS测量其它化合物(图1(e)，表3)。结果发现，诸如角鲨烯和2,3-氧化角鲨烯之类的前体在转基因品系中大量积累，在TkOSC-RNAi植物中具有更高的显著性。此外，在两个转基因品系中都检测到了两种甾醇中间体环阿屯醇(cycloartenol)和24-亚甲基环阿屯醇，在TkOSC1-RNAi植物中平均为0.1mg/g干燥根重，在TkOSC-RNAi植物中平均为0.9mg/g干燥根重。在所有植物中检测到的甾醇(包括菜油甾醇、豆甾醇和谷甾醇)约为0.5mg/g干燥根重的等量，并且不受敲低的影响。总之，在TkOSC-RNAi植物中，转基因RNAi品系中的总三萜烯含量(包括前体、甾醇中间体、甾醇和五环三萜烯)显著降低至三分之二(图1(e))。总而言之，可以观察到，OSC敲低可大大减少蒲公英根和NR中的三萜烯。例如，可以观察到，在蒲公英根中，三萜烯的总含量可以减少到70％的总含量，而在蒲公英NR中，三萜烯的总含量可以减少到44％的总含量。

例如，关于NR，进行了以下观察：从野生型、TkOSC1-RNAi和TkOSC-RNAi植物的根部材料中提取橡胶后，NR提取物中的三萜烯通过丙酮提取分离并，与NR重量相比定量(图2，表4)。丙酮粗提物含有不同三萜烯的乙酸酯衍生物。与野生型植物相比，TkOSC-RNAi植物中的乙酸酯以及主要的三萜烯(蒲公英甾醇、β-香树脂醇和ni1)与TkOSC1-RNAi植物相比，在TkOSC-RNAi植物中的减少具有更高的显著性(图2(a)和2(b))。在野生型植物中五环三萜烯的平均总量为56.6mg/gNR，在TkOSC1-RNAi品系中降至33.4mg/gNR，在TkOSC-RNAi品系中甚至降至16.1mg/gNR(图2(c))。与降低的五环三萜烯含量相反，与野生型相比，在RNAi品系中再次检测到三萜烯前体和甾醇类中间体的含量增加，而在所有三组中测得的甾醇类含量均相同。但是，三萜类化合物的总量在TkOSC1-RNAiNR中仍显著降低至三分之二，而在TkOSC-RNAiNR中则降至不到一半(图2(b))。总而言之，可以说OSC敲低可大大降低蒲公英根和NR中的三萜/三萜类化合物。

本发明提供了一种降低或消除来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，包括基因修饰产胶植物或其部分，使得与各自的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，降低或消除了至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种降低来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，包括基因修饰产胶植物或其部分，使得与各自的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，降低了至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种消除来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，包括基因修饰产胶植物或其部分，使得与各自的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，消除了至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种降低或消除来自产胶植物或其部分的橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，包括基因修饰产胶植物或其部分，使得与各自的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，降低或消除了至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种降低或消除来自产胶植物或其部分的乳胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，包括基因修饰产胶植物或其部分，使得与各自的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，降低或消除了至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种降低来自产胶植物或其部分的橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，包括基因修饰产胶植物或其部分，使得与各自的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，降低了至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种降低来自产胶植物或其部分的乳胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，包括基因修饰产胶植物或其部分，使得与各自的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，降低了至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种消除来自产胶植物或其部分的橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，包括基因修饰产胶植物或其部分，使得与各自的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，消除了至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种消除来自产胶植物或其部分的乳胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，包括基因修饰产胶植物或其部分，使得与各自的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，消除了至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种降低或消除来自产胶植物、其后代或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，包括基因修饰产胶植物或其部分，使得与各自的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，降低或消除了至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

如本文所用的“三萜烯”是指由三个萜烯单元组成的一类化合物，其分子式为C

本文所用的“三萜类化合物”是指具有至少一个杂原子的三萜烯。三萜类化合物的实例包括但不限于蒲公英赛醇、β-香树脂醇、羽扇豆醇、α-香树脂醇，lup-19(21)-烯-3-醇或蒲公英甾醇。三萜烯和三萜类化合物也可以概括为产胶植物或其部分的五环三萜含量。三萜烯和三萜类化合物也可以概括为本发明方法的五环三萜含量。

如本文所用，术语“后代”以非限制性方式指子孙或后代植物。根据某些实施方案，术语“后代”是指从相应的产胶植物发育或生长或产生的植物。考虑本文所述的根据本发明的方法生长的那些植物的特征在于，乳胶或橡胶的三萜烯和/或三萜类化合物的含量减少或消除，所述乳胶或橡胶是从这些产胶植物后代获得的。

对于本发明的方法中，与相应的野生型或未处理的产胶植物、其后代或其部分相比，氧化角鲨烯环化酶的活性必须降低或消除。有许多可能的方法可以实现降低或消除氧化角鲨烯环化酶活性的方法，包括降低或消除酶的量和/或降低或消除氧化角鲨烯环化酶的活性。减少氧化角鲨烯环化酶量的方法，即降低氧化角鲨烯环化酶的表达，是本领域技术人员已知的，并且包括使用基因敲低技术，例如RNA干扰(RNAi)或调节元件的修饰。氧化角鲨烯环化酶的表达可以消除，例如，通过敲除编码氧化角鲨烯环化酶的基因。敲除基因的技术的例子包括同源重组或位点特异性核酸酶，例如锌指核酸酶、TALEN或CRISPR。

然而，在根据本发明上下文中，“降低三萜烯和/或三萜类化合物的含量”或“三萜和/或三萜的含量降低”或“能够降低三萜和/或三萜的含量”是指与野生型或未处理的产胶植物、其后代或其部分(未进行基因修饰或在进行基因修饰之前)相比，产胶植物、其后代或其部分中的三萜烯和/或三萜类化合物的含量降低了至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％或95％。

在本发明的上下文中，“消除三萜烯和/或三萜类化合物的含量”、“三萜烯和/或三萜类化合物的含量的消除”“能够消除三萜烯和/或三萜类化合物的含量”是指与野生型或未处理的产胶植物、其后代或其部分(未进行基因修饰或在进行基因修饰之前)相比，产胶植物、其后代或其部分中的三萜烯和/或三萜类化合物的含量降低了至少95.1％、95.2％、95.3％、95.4％、95.5％、95.6％、95.7％、95.8％、95.9％、96.0％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97.0％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.8％、97.9％、98.0％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％甚至100.00％。

在本发明的上下文中，“降低至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”、“至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性降低”或“能够降低至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”是指与野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分(未进行基因修饰或在进行基因修饰之前)相比，产胶植物、其后代或其部分中的至少一种氧化角鲨烯环化酶降低至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％或95％。

在本发明的上下文中，“消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”、“至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性消除”或“能够消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”是指与野生型或未处理的产胶植物、其后代或其部分(未进行基因修饰或在进行基因修饰之前)相比，产胶植物、其后代或其部分中的至少一种氧化角鲨烯环化酶降低至少95.1％、95.2％、95.3％、95.4％、95.5％、95.6％、95.7％、95.8％、95.9％、96.0％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97.0％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.8％、97.9％、98.0％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％、99.8％、99.9％甚至100.00％。

如本文所用，“乳胶”为本领域技术人员熟知的产品。它们由水不溶性聚合物的水分散体组成。这些流体系统包括在水性分散介质中作为分散相的包含由数个缠结的聚合物链组成的聚合物颗粒。分散体中的聚合物颗粒的直径可以在5nm至10μm的范围内。这些胶乳具有许多用途，特别是作为涂料配方、纸张(涂料混合物、散装纸)或拟用于建筑业的配方(粘合剂、结合剂、平滑涂料等)中的添加剂。它们凭借例如结合力和成膜能力而赋予这些配方重要的性能。

如本文所用，“橡胶”涉及天然橡胶，其为橡胶树Heveabrasiliensis和其它产胶植物的胶乳的组分。它包含聚异戊二烯，该聚异戊二烯非常细地分散在水相中，代表实际的天然橡胶，并且还包含蛋白质、糖、多糖和无机盐作为次要成分。这些次要成分尤其形成细菌的培养基，该细菌在乳胶中迅速繁殖并使其消失，最终导致凝结，即聚合物相的沉淀。在橡胶园的提取与进一步加工之间通常距离很长，并且可能会有相对较长的存储时间。如果现场没有加工成固体橡胶，通常在提取后立即用合适的试剂处理胶乳。该处理是为了防止乳胶受到细菌侵袭和稳定乳胶的理化性质。

本文上下文所用，术语“产胶的”或“产胶细胞”是指在植物的叶子和/或茎中发现的一种细长的分泌细胞，可产生乳胶和橡胶作为次生代谢产物。产胶可以分为：有节产胶细胞，即由一系列连接在一起的细胞组成，或无节产胶，由一个长的胞质细胞组成。无节的产胶细胞从胚的分生组织开始生长，称为产胶初体，并且在植物的整个生命周期中都可以表现出连续的生长。产胶管具有不规则边缘的壁，并且其内径大于周围的薄壁组织细胞。在细胞的发育中，通过核激酶发生伸长，并且没有细胞板发育，从而形成了在整个植物中延伸的表皮细胞。这些细胞的长度可达数十厘米，可以是分支的也可以是无分支的。人们认为它们在伤口愈合、防御食草以及病原体防御方面发挥作用，并且经常用于分类学。

在本发明的上下文中，术语“野生型”植物，相应的产胶植物，或“未处理的”植物是指本发明的上下文，是指植物，其用作生产本发明所述植物的起始原料。即除了导入的基因修饰之外，其遗传信息与本发明的植物的遗传信息相同的植物。在本文中，这具体地意味着“野生型”植物，相应的产胶植物，或“未处理的”植物是指未经基因修饰或在转基因前的植物。

在本发明的方法的一个实施方案中，通过至少一种能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的异源核苷酸序列对产胶植物或其部分进行基因修饰。在本发明方法的另一个实施方案中，通过至少一种能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的异源核苷酸序列对所述的产胶植物、其后代或其部分进行基因修饰。在本发明上下文中，术语“基因修饰”是指产胶植物，其后代或其部分包含一种或多种能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的异源核苷酸序列。与相应的如上所定义的野生型或未经处理的产胶植物、其后代或其部分相比，还应考虑术语“能够减少或消除”。“异源核苷酸序列”或“异源核酸”是在相应核酸中非天然存在的序列。通常，异源核酸包含编码感兴趣的多肽或非翻译的RNA(例如，用于递送至细胞或受试者)的开放阅读框架。在另一实施方案中，通过至少一个能够降低至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性的异源核苷酸序列对所述的产胶植物或其部分进行基因修饰。在进一步的实施方案中，通过至少一个能够降低至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的异源核苷酸序列对产胶植物，其后代或其部分进行基因修饰。优选地，通过至少一种能够减少或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的基因表达的异源核苷酸序列对产胶植物或其部分进行基因修饰。还优选地，通过至少一种能够减少或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的基因表达的异源核苷酸序列对所述产胶植物，其后代或其部分进行基因修饰。与如上文所定义的相应野生型或未处理的产胶植物、其后代或其部分相比，还应考虑术语“能够减少或消除”。这种异源核苷酸序列的实例包括可诱导RNA干扰的核苷酸，例如siRNA或shRNA。

因此，在本发明方法的一个实施方案中，至少一种异源核苷酸序列编码干扰编码至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA的至少一种RNAi，条件是所述至少一种RNAi能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。在这种情况下的活性可涉及降低或消除来自产胶植物、其后代或其部分的的橡胶或乳胶中三萜烯或三萜类化合物含量。在本文中，“能够降低至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”是指与没有或缺乏相应的RNAi野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分(未进行基因修饰或在进行基因修饰之前)相比，相应的RNAi使得产胶植物、其后代或其部分中的至少一种氧化角鲨烯环化酶降低了至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％或95％。在这种情况下，“能够消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”是指与没有或缺乏相应的RNAi野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分(未进行基因修饰或在进行基因修饰之前)相比，相应的RNAi使得产胶植物、其后代或其部分中的至少一种氧化角鲨烯环化酶降低了至少为95.1％、95.2％、95.3％、95.4％、95.5％、95.6％、95.7％、95.8％、95.9％、96.0％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97.0％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.7％、97.7％、97.8％、97.7％、97.8％、97.9％、98.0％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、99.0％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％、99.8％、99.9％甚至100.00％。

三萜烯或三萜类化合物的量或含量可以通过本领域技术人员已知的方法确定。这样的方法例如包括但不限于质谱、色谱，如RP-HPLC或气相色谱，或NMR。实施例1描述了用于定量天然橡胶中三萜烯和/或三萜类化合物的示例性方法。

在本发明方法的另一个实施方案中，至少一种RNAi特异性地针对至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物。优选地，至少一个RNAi包含或由如SEQ ID NO：1的核苷酸序列组成，和/或包含或由如SEQ ID NO：2的核苷酸序列组成，和/或包含或由与如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列组成。

本发明所述的SEQ ID NO：1的核苷酸序列如下：TCTCCAAGCGCCCATAGCGGAAAAGTGTTCCTATATTCTGCATAATGTAACATGCAATTCTTCATGTACACTCCTGTTATTTCCTGTTGAGGAAAGTCTCCATTATCCATTTGTCCATTTATGAGCAATTTTGCTGCCTTGTGTAATGGTGTCGGATCTCTTTCAGCCTGTCCACCACATAGAAGACCAAGCATGGCCCATGAAGTTTGCACAAAATTTGTTCTGTTCCCTTCCAAAGGTATAAATTTCTCTTGTGGGCATGACTCAAAGTTCTCTCCCCAACCACCTTCTGAGTTTTGTGTCGAGAGGAAAAACTTGACAGCTTTCCGAACTGCTTCACTATTTTCATATGTTTGTCCACAAGCTACCAATCCTTGTAACACGAAATAGGTTCCATAAAGATAACATATACCCCAATAACCATACCAAGAACCATTTTCTTGTT。

其互补序列如下所示，如果载体包含发夹结构，其也存在于包含SEQ ID NO：1的载体构建体中：

AACAAGAAAATGGTTCTTGGTATGGTTATTGGGGTATATGTTATCTTTATGGAACCTATTTCGTGTTACAAGGATTGGTAGCTTGTGGACAAACATATGAAAATAGTGAAGCAGTTCGGAAAGCTGTCAAGTTTTTCCTCTCGACACAAAACTCAGAAGGTGGTTGGGGAGAGAACTTTGAGTCATGCCCACAAGAGAAATTTATACCTTTGGAAGGGAACAGAACAAATTTTGTGCAAACTTCATGGGCCATGCTTGGTCTTCTATGTGGTGGACAGGCTGAAAGAGATCCGACACCATTACACAAGGCAGCAAAATTGCTCATAAATGGACAAATGGATAATGGAGACTTTCCTCAACAGGAAATAACAGGAGTGTACATGAAGAATTGCATGTTACATTATGCAGAATATAGGAACACTTTTCCGCTATGGGCGCTTGGAGA(SEQID NO:47)。

本发明所述的SEQ ID NO：2的核苷酸序列如下：

ATCCCAAGCTTGAATCGCACGGTTCAGTCTAACTGCCTTTCTCACGGCTGTTGTCACCGCTTCATAGTTCACATCTTCGTCGTCTCCAAGTCTCACTGGAGGTACGCTTATAAGATCAATTCCGC。

其互补序列如下所示，如果载体包含发夹结构，其也存在于包含SEQ ID NO：2的载体构建体中：

GCGGAATTGATCTTATAAGCGTACCTCCAGTGAGACTTGGAGACGACGAAGATGTGAACTATGAAGCGGTGACAACAGCCGTGAGAAAGGCAGTTAGACTGAACCGTGCGATTCAAGCTTGGGAT(SEQ ID NO:48)。

更优选地，至少一种RNAi包含或由与SEQ ID NO：1具有至少为50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％甚至100％同一性的核苷酸序列组成。

甚至更优选地，至少一种RNAi包含或由与SEQ ID NO：1具有至少为50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％甚至100％同一性的核苷酸序列组成。

更优选地，至少一种RNAi包含或由与SEQ ID NO：2具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％甚至100％同一性的核苷酸序列组成。

甚至更优选地，至少一种RNAi包含或由与SEQ ID NO：2具有至少为50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％甚至100％同一性的核苷酸序列组成。

更优选地，至少一种RNAi包括或由如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列组成，甚至更优选地，至少一种RNAi由SEQ ID NO：1所示核苷酸序列组成；更优选地至少一种RNAi包括或由如SEQ ID NO：2所示核苷酸序列组成，甚至更优选地，至少一种RNAi由如SEQ ID NO：2所示核苷酸序列组成。

如果两个序列中的氨基酸或核苷酸残基序列按如下所述进行最大比对时比对相同，则两个氨基酸或核苷酸序列在本发明的上下文中被认为是“同一的(identical)”。通常通过在片段或“比较窗口”上比较两个最佳比对序列的序列以鉴定和比较序列相似性的局部区域来进行两个(或多个)肽或多核苷酸之间的序列比较。用于比较的序列的最佳比对可以通过Smith和Waterman、Ad.App.Math2:482(1981)的局部同源性算法，Neddleman和Wunsch、J.Mol.Biol.48:443(1970)的同源性比对算法，Pearson和Lipman、Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85:2444(1988)的检索相似性方法，算法的计算机化应用(GAP、BESTFIT、FASTA、和Wisconsin Genetics软件包中的TFASTA、Genetics ComputerGroup(GCG)、575ScienceDr.、Madison、Wis.)或目视检查进行。

“序列同一性的百分比”(或“度”或“同一性”)通过比较窗口的两种最佳对齐的序列进行比较，其中比较窗口中的肽或多核苷酸序列的部分可以包括添加或缺失(即缺口)，与参考序列(不包括添加或缺失)相比，用于最佳对准两个序列。通过确定在两个序列中发生相同的氨基酸残基或核酸基质的位点数目来计算匹配位点的百分比，将配位点的总数除以对比窗口的位点总数并将结果乘以100得到序列同一性的百分比。

上文给出的序列同一性的定义是本领域技术人员使用的定义。定义本身不需要任何算法的帮助，所述算法仅利用序列的最佳比对，而不是序列同一性的计算。

根据上面给出的定义，遵循两个比较序列之间的序列同一性的良好且仅一个值，该值对应于获得最佳或最佳对准的值。

代替降低氧化角鲨烯环化酶的量，在本发明的范围内，可以通过抑制剂抑制氧化角鲨烯环化酶活性的降低或消除。因此，在本发明方法的一个实施方案中，通过使所述产胶植物或其部分与能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的试剂接触和/或与之孵育来对其进行基因修饰。此外，在本发明的方法的一个实施方案中，通过使所述产胶植物、其后代或其部分与能够使其降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的试剂接触和/或与之孵育来对其进行基因修饰。这意味着，术语“基因修饰的”或“基因修饰”还可以包括使本发明的产胶植物，其后代或其部分或本发明方法的任何实施方式中使用的产胶植物，其后代或其部分接触试剂和/或与试剂一起孵育，所述试剂能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性。与上文所述的相应野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分相比，还应考虑术语“能够减少或消除”。优选地，这种试剂是至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的抑制剂。更优选地，至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的抑制剂选自2，3-亚磺酰基角鲨烯、氧化角鲨烯的衍生物、甚至更优选10-和19-氮杂角鲨烯衍生物、4、4、10β-三甲基-反式-癸-3-β-3-醇(TMD)或其衍生物、氨基酮、氮杂癸啉和咪唑啉的衍生物、内皮素、羊毛脂素、异喹啉衍生物、4-哌啶子吡啶和4-哌啶子嘧啶，甚至更优选BIBB 515(1-(4-氯苯甲酰基)-4-((4--2-恶唑啉-2-基)亚苄基)哌啶)、乙烯基硫化物和乙烯酮二硫缩醛衍生物、伞形酮氨基烷基衍生物和二半乳糖基甘油。

在本发明的方法的另一个实施方案中，通过至少一个能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的异源核苷酸序列，对产胶植物或其部分进行了基因修饰，基因修饰能够减少或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性，优选能够减少或者消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的基因的表达，和/或通过使所述产胶植物或其部分与试剂接触和/或与试剂一起孵育而对其进行基因修饰，所述试剂能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。在本发明方法的另一个实施方案中，通过至少一个能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的异源核苷酸序列，对所述的产胶植物，其后代或其部分进行基因修饰，所述的异源核苷酸序列能够减少或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的基因的表达，和/或和通过使所述产胶植物，其后代或其部分与试剂接触和/或与试剂一起孵育而对其进行基因修饰，所述试剂能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。上面给出的定义也适用于该实施例，例如。与如上文所定义的相应的野生型或未处理的产胶植物、其后代或其部分相比，还应考虑术语“能够降低或消除”。

在本发明方法的另一个实施方案中，产胶植物或其部分选自夹竹桃科(Apocynaceae)、菊科(Asteraceae)、大戟科(Euphorbiaceae)和桑科(Moraceae)的植物家族。在本发明方法的另一个实施方案中，其产胶植物，其后代或其部分选自下组的植物家族：夹竹桃科(Apocynaceae)、菊科(Asteraceae)、大戟科(Euphorbiaceae)和Moracea。

在本发明方法的另一个实施方案中，优选产胶植物或其部分选自下组：姬松茸(Agoserisglauca)、罗布麻(Apocynum venetum)、沙棘(Chrysothamnusgraveolens)、一枝黄(Chrysothamnus nauseosus)、黄花蛇舌草(Chrysothamnus viscidiflorus)、丝胶树(Funtumia elastica)、银胶菊(Parthenium argentatum)、刺枝野丁香(Scorzoneraacanthoclada)、华北鸦葱(Scorzonera albicaulis)、叉枝鸦葱(Scorzoneradivaricate)、高架鸦葱(Scorzonera hissaricata)、果榕鸦葱(Scorzonera racemosa)、山胶(Scorzonera tau-saghyz)、苦苣菜(Scorzonera tragapogonoides)、土耳其鸦葱(Scorzonera turkestania)、帚状鸦葱(Scorzonera virgate)、加拿大一枝黄花(Solidagocanadensis scabra)、香蜂一枝黄(Solidagofistulosa)、利文沃思一枝黄(Solidagoleavenworthii)、硬枝一枝黄(Solidago rigida)、苦麻菜(Sonchus oleraceus)、短角蒲公英(Taraxacum brevicorniculatum)、克里木橡胶草(Taraxacum hybernum)、橡胶草(Taraxacum koksaghyz)、Taraxacum megalorrhizon、西洋蒲公英(Taraxacumofficinale)或其杂交。在本发明方法的另一个实施方案中，优选地，产胶植物或其部分选自下组：姬松茸(Agoseris glauca)、罗布麻(Apocynum venetum)、沙棘(Chrysothamnusgraveolens)、一枝黄(Chrysothamnus nauseosus)、黄花蛇舌草(Chrysothamnus viscidiflorus)、菊苣(Cichorium intybusL.)、丝胶树(Funtumiaelastica)、银胶菊(Parthenium argentatum)、刺枝野丁香(Scorzonera acanthoclada)、华北鸦葱(Scorzonera albicaulis)、叉枝鸦葱(Scorzonera divaricate)、高架鸦葱(Scorzonera hissaricata)、果榕鸦葱(Scorzonera racemosa)、山胶(Scorzonera tau-saghyz)、苦苣菜(Scorzonera tragapogonoides)、土耳其鸦葱(Scorzoneraturkestania)、帚状鸦葱(Scorzonera virgate)、加拿大一枝黄花(Solidago canadensisscabra)、香蜂一枝黄(Solidagofistulosa)、利文沃思一枝黄(Solidago leavenworthii)、硬枝一枝黄(Solidago rigida)、苦麻菜(Sonchus oleraceus)、短角蒲公英(Taraxacumbrevicorniculatum)、克里木橡胶草(Taraxacum hybernum)、橡胶草(Taraxacumkoksaghyz)、Taraxacum megalorrhizon、西洋蒲公英(Taraxacum officinale)或其杂交。在更优选的实施方案中，产胶植物或其部分是Cichorium intybusL。在本发明的上下文中，术语“其杂交”是指通过对近缘或远缘相关的植物物种，例如特异种或植物进行有意的杂交而产生的植物变种或品系，例如将一个品种或品系的基因引入新的遗传背景。产胶植物或其部分也可以是相应的产胶植物的后代。甚至更优选的是，该产胶植物或其部分选自下组：银胶菊(Parthenium argentatum)、一枝黄(Chrysothamnus nauseosus)、橡胶草(Taraxacum koksaghyz)、西洋蒲公英(Taraxacum officinale)和其杂交。然而，最优选地，该产胶植物或其部分是橡胶草(Taraxacum koksaghyz)。在本发明的方法的一个实施方案中，该产胶植物或其部分不是大戟科(Euphorbiaceae)家族的成员。这意味着本发明还涉及减少或消除来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，该方法包括基因修饰该产胶植物或其部分，以使与相应的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，减少或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶，其中所述产胶植物或其部分不是大戟科(Euphorbiaceae)家族的成员。在本发明的方法的另一个相关的实施方案中，所述的产胶植物或其部分不是Hevea brasiliensis。这意味着本发明还涉及减少或消除来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，该方法包括基因修饰该产胶植物或其部分，以使与相应的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，减少或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶，其中所述产胶植物或其部分不是Heveabrasiliensis。在本发明的方法的另一个相关的实施方案中，产胶植物或其部分不是来自兰道氏菌(Landolphia)属。这意味着，本发明还涉及减少或消除来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶的三萜烯和/或三萜类化合物的含量的方法，该方法包括基因修饰所述产胶植物或其部分，以使活性与相应的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，减少或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的的活性，其中所述产胶植物或其部分不是来自自兰道氏菌＝属。

在本发明方法的另一个实施方案中，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自下组：如SEQID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1、如SEQ ID NO：6的氧化角鲨烯环化酶2、如SEQ ID NO：8的氧化角鲨烯环化酶3、如SEQ ID NO：10的氧化角鲨烯环化酶4、如SEQ ID NO：12的氧化角鲨烯环化酶5、如SEQ ID NO：14的氧化角鲨烯环化酶6、如氧化角鲨烯SEQ ID NO：16的环戊烯环化酶7、如SEQ ID NO：18的氧化角鲨烯环化酶8、如SEQ ID NO：20的羽扇豆醇合成酶(lupeolsynthase)和与如SEQ ID NO：4、6、8、10、12、14、16、18或20具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的氨基酸序列。

在本发明方法的另一个实施方案中，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自下组：与如SEQ ID NO：4、6、8、10、12、14、16、18或20具有至少0％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％o或甚至100％同一性的氨基酸序列。

在本发明方法的另一个实施方案中，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自下组：如SEQID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1、如SEQ ID NO：6的氧化角鲨烯环化酶2、如SEQ ID NO：8的氧化角鲨烯环化酶3、如SEQ ID NO：12的氧化角鲨烯环化酶5，和与如SEQ ID NO：4、6、8、或12具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的氨基酸序列。

在本发明方法的另一个实施方案中，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自下组：与如SEQ ID NO：4、6、8或12具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至100％同一性的氨基酸序列。

甚至更优选地，至少一种氧化角鲨烯环化酶是如SEQ ID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1或与其具有至少60％、70％、80％、90％、95％或甚至99％同一性的氨基酸序列。

在本发明方法的另一个实施方案中，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自下组：与如SEQ ID NO：4具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至100％同一性的氨基酸序列。最优选地，至少一种氧化角鲨烯环化酶是如SEQ ID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1。

进一步地，给出了氧化角鲨烯环化酶1的核苷酸序列如SEQ ID NO：3、氧化角鲨烯环化酶2的核苷酸序列如SEQ ID NO：5、氧化角鲨烯环化酶3的核苷酸序列如SEQ ID NO：7、氧化角鲨烯环化酶4的核苷酸序列如SEQ ID NO：9、氧化角鲨烯环化酶5的核苷酸序列如SEQID NO：11、氧化角鲨烯环化酶6的核苷酸序列如SEQ ID NO：13、氧化角鲨烯环化酶7的核苷酸序列如SEQ ID NO：15、氧化角鲨烯环化酶8的核苷酸序列如SEQ ID NO：17、羽扇豆醇合成酶(lupeolsynthase)的核苷酸序列如SEQ ID NO：19。

如本文所用，“氧化角鲨烯环化酶(OSC)”是参与2、3-氧化角鲨烯的环化反应以形成甾醇或三萜的酶。可以将其区分为两种不同类型的环化反应：椅-船-构象形成环戊烯醇(一种植物甾醇中间体)，而椅-椅-椅构象导致形成三萜烯(Abe，2007；Thimmappa等人，2014年)。羽扇豆醇合成酶也属于氧化角鲨烯环化酶，其中所述羽扇豆醇合成酶催化2，3-氧化角鲨烯到羽扇豆醇的环化。

如本发明的SEQ ID NO：4、6、8、10、12、14、16、18和20的TkOSC1-8和TkLUP的多肽包含758至770个氨基酸，而与TkOSC2相比，在最新鉴定的序列中TkOSC1显示出具有最高(94％)序列同一性。氨基酸序列分析表明，报告的OSC保守结构域TkOSC4、TkOSC5、TkOSC6和TkOSC8仅存在微小修饰。这些包括确定产物的必不可少的结构域(M(W/Y)CY(C/S)R-基序)，一个涉及底物结合和多环化起始的区域(DCTAE-基序)和六个涉及碳正离子中间体稳定化，并位于蛋白质的5'和3'末端附近(见图3)的重复的QW基序。

在本发明的方法的另一个实施方案中，产胶植物的部分选自细胞、组织、器官、根、茎、枝、叶、渗出物、胶乳及其混合物。在俄罗斯蒲公英橡胶草(Taraxacum koksaghyz)中，产胶植物中乳胶浓度最高的部分是根。因此，如果该植物或其部分是橡胶草(Taraxacumkoksaghyz)，则优选其部分为根。在本发明的上下文中，术语“渗出物”包括相应植物的汁液、树胶、树脂或花蜜。

本发明还提供了经基因修饰的产胶植物或其部分，使得与相应的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，降低或消除了至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。本发明还提供了经基因修饰的产胶植物，其后代或其部分，使得与相应的野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分相比，至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

在根据本发明的产胶植物或其部分的一个实施方案中，通过至少一种能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的异源核苷酸序列对乳胶植物或其部分进行基因修饰，优选地，异源核苷酸序列能够减少或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶基因表达的环化酶。在本发明的产胶植物，其后代或其部分的一个实施方案中，通过至少一种能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的异源核苷酸序列对所述产胶植物、其后代或其部分进行了基因修饰，优选地，异源核苷酸序列能够减少或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的基因表达。与相应的野生型或未处理的产胶植物、其后代或其部分相比，还应考虑术语“能够降低或消除”。

在本发明的上下文中，“降低至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”或“至少一种氧化角鲨烯环化酶的活降低”或“能够降低至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”是指与野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分(未进行基因修饰或在进行基因修饰之前)相比，产胶植物，其后代或其部分中的至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性降低了至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％或95％。

在本发明的上下文中，“消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”或“至少一种氧化角鲨烯环化酶的活消除”或“能够消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”是指与野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分(未进行基因修饰或在进行基因修饰之前)相比，产胶植物，其后代或其部分中的至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性降低了至少95.1％、95.2％、95.3％、95.4％、95.5％、95.6％、95.7％、95.8％、95.9％、96.0％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97.0％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.8％、97.9％、98.0％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.7％、99.8％、99.9％甚至100.00％。

在另一个实施方案中，通过使本发明的产胶植物或其部分与能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的试剂接触和/或与之一起进行基因修饰。在另一个实施方案中，通过使本发明的产胶植物，其后代或其部分通过与能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的试剂接触和/或孵育来对其进行基因修饰。与如上所定义的相应的野生型或未经处理的产胶植物，其后代或其部分相比，还应考虑术语“能够减少或消除”。这样的试剂可以是至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的抑制剂，优选是2，3-亚磺酰基角鲨烯，氧化角鲨烯的衍生物，甚至更优选10-和19-氮杂角鲨烯衍生物，4，4，10β-三甲基-反式-癸-3-β-醇(TMD)或其衍生物、氨基酮、氮杂癸啉和咪唑啉的衍生物、内皮素、羊毛脂素、异喹啉衍生物、4-哌啶子吡啶和4-哌啶子嘧啶，甚至更优选BIBB 515(1-(4-氯苯甲酰基)-4-((4--2-恶唑啉-2-基)亚苄基)哌啶)、乙烯基硫化物和乙烯酮二硫缩醛衍生物、伞形酮氨基烷基衍生物和二半乳糖基甘油。在另一个实施方案中，这样的试剂可以是至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的抑制剂，并且优选地是选自下组的至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的抑制剂：2，3-亚磺酰基角鲨烯、氧化角鲨烯的衍生物、更优选10-和19-氮杂角鲨烯衍生物、4,4,10β-三甲基-反式-癸-3β--醇(TMD)或其衍生物、氨基酮、甲磺酸乙酯、氮杂癸啉和咪唑啉的衍生物、内皮素、羊毛脂素、异喹啉衍生物、4-哌啶子吡啶和4-哌啶子嘧啶，甚至更优选BIBB 515(1-(4-氯苯甲酰基)-4-((4-2-恶唑啉-2-基)亚苄基))哌啶)、乙烯基硫化物和烯酮二硫缩醛衍生物、伞形酮氨基烷基衍生物和二半乳糖基甘油。在一个优选的实施方案中，至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的抑制剂是甲磺酸乙酯。

在本发明的产胶植物或其部分的另一个实施方案中，通过至少一种能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的异源核苷酸序列对所述产胶植物或其部分进行了基因修饰，优选地，异源核苷酸序列能够减少或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的基因表达，和/或其中通过使所述产胶植物或其部分通过与能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的试剂接触和/或孵育来对其进行基因修饰。在本发明的产胶植物，其后代或其部分的另一个实施方案中，通过至少一种能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的异源核苷酸序列对所述产胶植物，其后代或其部分进行了基因修饰，优选地，异源核苷酸序列能够减少或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的基因表达，和/或其中通过使所述产胶植物，其后代或其部分通过与能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的试剂接触和/或孵育来对其进行基因修饰。在本文中，“降低至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”或“至少一种氧化角鲨烯环化酶的活降低”或“能够降低至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”是指与野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分(未进行基因修饰或在进行基因修饰之前)相比，产胶植物，其后代或其部分中的至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性降低了至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％或95％。在本发明的上下文中，“消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”或“至少一种氧化角鲨烯环化酶的活消除”或“能够消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”是指与野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分(未进行基因修饰或在进行基因修饰之前)相比，产胶植物，其后代或其部分中的至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性降低了至少95.1％、95.2％、95.3％、95.4％、95.5％、95.6％、95.7％、95.8％、95.9％、96.0％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97.0％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.8％、97.9％、98.0％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或甚至100.00％。

在本发明的一个实施方案中，产胶植物或其部分可以是转基因植物。在本发明的一个实施方案中，产胶植物，其后代或其部分可以是转基因植物。如本文所用，“转基因植物”是指含有在相同物种、变种或栽培品种的野生型植物中未发现的遗传物质的植物。遗传物质可包括转基因，诱变的产物(例如通过转座子或T-DNA插入诱变)，包括插入、缺失或取代、激活标签序列、突变序列、同源重组的产物或通过嵌合体形成术修饰的序列。通常，通过人工操作将外来遗传物质引入植物中，但是任何方法都可以用作本领域技术人员公认的方法。转基因植物可以包含表达载体或表达盒。表达盒通常包含与允许表达多肽的合适的诱导性或组成性调控序列可操作地连接(即在其调控下)的多肽编码序列。可以通过转化或通过在亲本植物转化后进行育种来将表达盒引入植物中。如本文所用，术语“植物”是指整个植物，包括幼苗和成熟植物，以及植物部分，例如种子，果实，叶或根，植物组织，植物细胞或任何其它植物材料，例如，植物外植体及其后代，以及模拟细胞生物化学或细胞成分或过程的体外系统。

在本发明的产胶植物或其部分的一个实施方案中，至少一种异源核苷酸序列编码至少一种RNAi，所述的RNAi干扰编码至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA，条件是至少一种RNAi能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。在根据本发明的产胶科植物，其后代或其部分的一个实施方案中，至少一种异源核苷酸序列编码至少一种RNAi，所述的RNAi干扰编码至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA，条件是至少一种RNAi能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。在本发明上下文中，“能够降低至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”是指与野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分(无或缺乏所述RNAi)相比，相应的RNAi可以降低产胶植物、其后代或其部分中所含的至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％或95％。在本发明上下文中，“能够消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性”是指与野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分(无或缺乏相应的RNAi)相比，相应的RNAi可以降低产胶植物、其后代或其部分中所含的至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性至少95.1％、95.2％、95.3％、95.4％、95.5％、95.6％、95.7％、95.8％、95.9％、96.0％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97.0％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.8％、97.9％、98.0％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或甚至100.00％。

在本发明的产胶植物或其部分的另一个实施方案中，所述至少一种RNAi特异性针对所述至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物，优选地，其中所述至少一种RNAi包含或由SEQ ID NO：1的核苷酸序列组成和/或包含或由SEQ ID NO：2的核苷酸序列组成和/或包含或由与如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2的核苷酸序列具有至少60％，70％，80％，90％，95％或99％同一性的核苷酸序列组成。在本发明的产胶植物，其后代或其部分的另一个实施方案中，所述至少一种RNAi是特异性针对至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物，优选地，所述至少一种RNAi包含或由SEQ ID NO：1的核苷酸序列组成和/或包含或由SEQ IDNO：2的核苷酸序列组成和/或包含或由与如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2的核苷酸序列具有至少60％，70％，80％，90％，95％或99％同一性的核苷酸序列组成。

同样对于本发明的产胶植物，其后代或其部分的所有实施方案，SEQ ID NO：1的核苷酸序列如下：

TCTCCAAGCGCCCATAGCGGAAAAGTGTTCCTATATTCTGCATAATGTAACATGCAATTCTTCATGTACACTCCTGTTATTTCCTGTTGAGGAAAGTCTCCATTATCCATTTGTCCATTTATGAGCAATTTTGCTGCCTTGTGTAATGGTGTCGGATCTCTTTCAGCCTGTCCACCACATAGAAGACCAAGCATGGCCCATGAAGTTTGCACAAAATTTGTTCTGTTCCCTTCCAAAGGTATAAATTTCTCTTGTGGGCATGACTCAAAGTTCTCTCCCCAACCACCTTCTGAGTTTTGTGTCGAGAGGAAAAACTTGACAGCTTTCCGAACTGCTTCACTATTTTCATATGTTTGTCCACAAGCTACCAATCCTTGTAACACGAAATAGGTTCCATAAAGATAACATATACCCCAATAACCATACCAAGAACCATTTTCTTGTT。

其互补序列如下所示，如果载体包含发夹结构，其也存在于包含SEQ ID NO：1的载体构建体中：

AACAAGAAAATGGTTCTTGGTATGGTTATTGGGGTATATGTTATCTTTATGGAACCTATTTCGTGTTACAAGGATTGGTAGCTTGTGGACAAACATATGAAAATAGTGAAGCAGTTCGGAAAGCTGTCAAGTTTTTCCTCTCGACACAAAACTCAGAAGGTGGTTGGGGAGAGAACTTTGAGTCATGCCCACAAGAGAAATTTATACCTTTGGAAGGGAACAGAACAAATTTTGTGCAAACTTCATGGGCCATGCTTGGTCTTCTATGTGGTGGACAGGCTGAAAGAGATCCGACACCATTACACAAGGCAGCAAAATTGCTCATAAATGGACAAATGGATAATGGAGACTTTCCTCAACAGGAAATAACAGGAGTGTACATGAAGAATTGCATGTTACATTATGCAGAATATAGGAACACTTTTCCGCTATGGGCGCTTGGAGA(SEQID NO:47)。

同样对于本发明的产胶植物，其后代或其部分的所有实施方案，SEQ ID NO：2的核苷酸序列如下：

ATCCCAAGCTTGAATCGCACGGTTCAGTCTAACTGCCTTTCTCACGGCTGTTGTCACCGCTTCATAGTTCACATCTTCGTCGTCTCCAAGTCTCACTGGAGGTACGCTTATAAGATCAATTCCGC。

其互补序列如下所示，如果载体包含发夹结构，其也存在于包含SEQ ID NO：2的载体构建体中：

GCGGAATTGATCTTATAAGCGTACCTCCAGTGAGACTTGGAGACGACGAAGATGTGAACTATGAAGCGGTGACAACAGCCGTGAGAAAGGCAGTTAGACTGAACCGTGCGATTCAAGCTTGGGAT(SEQ ID NO:48)。

更优选地，至少一种RNAi包含或由与SEQ ID NO：1具有至少为50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％甚至100％同一性的核苷酸序列组成。

甚至更优选地，至少一种RNAi包含或由与SEQ ID NO：1具有至少为50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％甚至100％同一性的核苷酸序列组成。

更优选地，至少一种RNAi包含或由与SEQ ID NO：2具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％甚至100％同一性的核苷酸序列组成。

甚至更优选地，至少一种RNAi包含或由与SEQ ID NO：2具有至少为50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％甚至100％同一性的核苷酸序列组成。

更优选地，至少一种RNAi包括或由如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列组成，甚至更优选地，所述至少一种RNAi由SEQ ID NO：1所示核苷酸序列组成；更优选地，至少一种RNAi包括或由如SEQ ID NO：2所示核苷酸序列组成，甚至更优选地，所述至少一种RNAi由SEQ IDNO：2所示核苷酸序列组成。

在根据本发明的产胶植物或其部分的另一个实施方案中，该产胶植物或其部分选自下组的植物家族：夹竹桃科(Apocynaceae)、菊科(Asteraceae)、大戟科(Euphorbiaceae)和桑科(Moraceae)。优选地，本发明的产胶植物或其部分选自下组：姬松茸(Agoserisglauca)、罗布麻(Apocynum venetum)、沙棘(Chrysothamnusgraveolens)、一枝黄(Chrysothamnus nauseosus)、黄花蛇舌草(Chrysothamnus viscidiflorus)、丝胶树(Funtumia elastica)、银胶菊(Parthenium argentatum)、刺枝野丁香(Scorzoneraacanthoclada)、华北鸦葱(Scorzonera albicaulis)、叉枝鸦葱(Scorzoneradivaricate)、高架鸦葱(Scorzonera hissaricata)、果榕鸦葱(Scorzonera racemosa)、山胶(Scorzonera tau-saghyz)、苦苣菜(Scorzonera tragapogonoides)、土耳其鸦葱(Scorzonera turkestania)、帚状鸦葱(Scorzonera virgate)、加拿大一枝黄花(Solidagocanadensis scabra)、香蜂一枝黄(Solidagofistulosa)、利文沃思一枝黄(Solidagoleavenworthii)、硬枝一枝黄(Solidago rigida)、苦麻菜(Sonchus oleraceus)、短角蒲公英(Taraxacum brevicorniculatum)、克里木橡胶草(Taraxacum hybernum)、橡胶草(Taraxacum koksaghyz)、Taraxacum megalorrhizon、西洋蒲公英(Taraxacumofficinale)，或其杂交。在根据本发明的产胶植物或其部分的另一个实施方案中，该产胶植物或其部分选自下组的植物家族：夹竹桃科(Apocynaceae)、菊科(Asteraceae)、大戟科(Euphorbiaceae)和桑科(Moraceae)。夹竹桃科(Apocynaceae)菊科(Asteraceae)大戟科(Euphorbiaceae)桑科(Moraceae)优选地，本发明的产胶植物或其部分选自姬松茸(Agoseris glauca)、罗布麻(Apocynum venetum)、沙棘(Chrysothamnus graveolens)、一枝黄(Chrysothamnus nauseosus)、黄花蛇舌草(Chrysothamnus viscidiflorus)、菊苣(Cichorium intybusL.)、丝胶树(Funtumia elastica)、银胶菊(Partheniumargentatum)、刺枝野丁香(Scorzonera acanthoclada)、华北鸦葱(Scorzoneraalbicaulis)、叉枝鸦葱(Scorzonera divaricate)、高架鸦葱(Scorzonera hissaricata)、果榕鸦葱(Scorzonera racemosa)、山胶(Scorzonera tau-saghyz)、苦苣菜(Scorzoneratragapogonoides)、土耳其鸦葱(Scorzonera turkestania)、帚状鸦葱(Scorzoneravirgate)、加拿大一枝黄花(Solidago canadensis scabra)、香蜂一枝黄(Solidagofistulosa)、利文沃思一枝黄(Solidago leavenworthii)、硬枝一枝黄(Solidago rigida)、苦麻菜(Sonchus oleraceus)、短角蒲公英(Taraxacumbrevicorniculatum)、克里木橡胶草(Taraxacum hybernum)、橡胶草(Taraxacumkoksaghyz)、Taraxacum megalorrhizon、西洋蒲公英(Taraxacum officinale)，或其杂交。在一个更优选的实施方案中，产胶植物或其部分是Cichorium intybus L。在一个更优选的实施方案中，所述产胶植物或其部分选自下组：银胶菊(Parthenium argentatum)、一枝黄(Chrysothamnus nauseosus)、橡胶草(Taraxacum koksaghyz)、西洋蒲公英(Taraxacumofficinale)或其杂交。最优选地，该产胶植物或其部分是橡胶草(Taraxacum koksaghyz)。在根据本发明的产胶植物或其部分的一个实施方案中，该产胶植物或其部分不是大戟科(Euphorbiaceae)家族的成员。这意味着本发明还提供了经基因修饰的产胶植物或其部分，使得与相应的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性降低或消除，其中所述产胶植物或其部分不是大戟科(Euphorbiaceae)家族的成员。在本发明的产胶植物或其部分的另一个相关的实施方案中，所述的产胶植物或其部分不是Hevea brasiliensis。这意味着，本发明还提供了经基因修饰的产胶植物或其部分，使得与相应的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性降低或消除，其中所述产胶植物或其部分不是Heveabrasiliensis。在本发明的方法的另一个相关的实施方案中，产胶植物或其部分不是来自兰道氏菌(Landolphia)属。这意味着，本发明还提供了经基因修饰的产胶植物或其部分，使得与相应的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性降低或消除，所述产胶植物或其部分不是来自自兰道氏菌属。如本段中所提及的，产胶植物或其部分也可以是相应的产胶植物的后代。

在根据本发明的产胶植物或其部分的另一个实施方案中，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自下组：如SEQ ID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1，如SEQ ID NO：6的氧化角鲨烯环化酶2，如SEQ ID NO：8的氧化角鲨烯环化酶3，如SEQ ID NO：10的氧化角鲨烯环化酶4，如SEQ IDNO：12的氧化角鲨烯环化酶5，如SEQ ID NO：14的氧化角鲨烯环化酶6，如氧化角鲨烯SEQ IDNO：16的环戊烯环化酶7，如SEQ ID NO：18的氧化角鲨烯环化酶8，如SEQ ID NO：20的羽扇豆醇合成酶(lupeolsynthase)和与如SEQ ID NO：4、6、8、10、12、14、16、18或20具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的氨基酸序列。优选地，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自下组：如SEQ ID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1，如SEQ ID NO：6的氧化角鲨烯环化酶2，如SEQ ID NO：8的氧化角鲨烯环化酶3，如SEQ ID NO：12的氧化角鲨烯环化酶5，和与如SEQ IDNO：4、6、8或12具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的氨基酸序列。更优选地，至少一种氧化角鲨烯环化酶为如SEQ ID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1。

在根据本发明的产胶植物或其部分的另一个实施方案中，所述至少一种氧化角鲨烯环化酶选自下组：与SEQ ID NO：4、6、8、10、12、14、16、18或20具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至100％同一性的氨基酸序列。

在根据本发明的产胶植物或其部分的另一个实施方案中，进一步优选地，所述至少一种氧化角鲨烯环化酶选自下组：如SEQ ID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1，如SEQ ID NO：6的氧化角鲨烯环化酶2，如SEQ ID NO：8的氧化角鲨烯环化酶3，如SEQ ID NO：12的氧化角鲨烯环化酶5和与SEQ ID NO：4、6、8或12具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的氨基酸序列。在根据本发明的产胶植物、其后代或其部分的另一个实施方案中，至少一种RNAi特异性地针对至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物，优选地，其中所述至少一种RNAi包括或由如SEQ ID NO：1的核苷酸序列组成，和/或包括或由如SEQ ID NO：2的核苷酸序列组成，和/或包含或由与如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列组成。

在根据本发明的产胶植物或其部分的另一个实施方案中，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自与SEQ ID NO：4、6、8或12具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至100％同一性的氨基酸序列。

根据本发明的产胶植物或其部分更优选的实施方案中，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自如SEQ ID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1或与SEQ ID NO：4具有至少60％，70％，80％，90％，95％或99％同一性的氨基酸序列。

在根据本发明的产胶植物或其部分的另一个实施方案中，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自下组：与SEQ ID NO：4具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至100％同一性的氨基酸序列。在最优选地实施方案中，至少一种氧化角鲨烯环化酶为如SEQ ID NO：4所示的氧化角鲨烯环化酶1。

进一步地，还给出了氧化角鲨烯环化酶1的核苷酸序列如SEQ ID NO：3，氧化角鲨烯环化酶2的核苷酸序列如SEQ ID NO：5，氧化角鲨烯环化酶3的核苷酸序列如SEQ ID NO：7，氧化角鲨烯环化酶4的核苷酸序列如SEQ ID NO：9，氧化角鲨烯环化酶5的核苷酸序列如SEQ ID NO：11，氧化角鲨烯环化酶6的核苷酸序列如SEQ ID NO：13，氧化角鲨烯环化酶7的核苷酸序列如SEQ ID NO：15，氧化角鲨烯环化酶8的核苷酸序列如SEQ ID NO：17，羽扇豆醇合成酶(lupeolsynthase)的核苷酸序列如SEQ ID NO：19。

以上提供的关于本发明方法的定义以及优选实施方案在细节上作必要修改后也适用于与本发明的产胶植物，其后代或其部分有关的实施方案。此外，本文上面提供的关于产胶植物或其部分的定义以及实施方案和优选实施方案在细节上作必要修改后也适用于各个产胶植物或其部分的后代。

本发明还提供了一种特异性针对至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物的RNAi，其用于减少或消除来自产胶植物或其部分的胶乳或橡胶的三萜烯和/或三萜类化合物的含量的方法。本发明还提供了一种特异性针对至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物的RNAi，其用于减少或消除来自产胶植物，其后代或其部分的乳胶或橡胶的三萜烯和/或三萜类的含量。如本文所用，术语“降低三萜烯和/或三萜类化合物的含量”或“三萜和/或三萜的含量降低”或“能够降低三萜和/或三萜的含量”是指与野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分(未进行基因修饰或在进行基因修饰之前)相比，产胶植物、其后代或其部分中的三萜烯和/或三萜类化合物的含量降低了至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％或95％。进一步地，术语“消除三萜烯和/或三萜类化合物的含量”、“三萜烯和/或三萜类化合物的含量的消除”“能够消除三萜烯和/或三萜类化合物的含量”是指与野生型或未处理的产胶植物，其后代或其部分(未进行基因修饰或在进行基因修饰之前)相比，产胶植物、其后代或其部分中的三萜烯和/或三萜类化合物的含量降低了至少95.1％、95.2％、95.3％、95.4％、95.5％、95.6％、95.7％、95.8％、95.9％、96.0％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97.0％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.8％、97.9％、98.0％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％甚至100.00％

优选地，本发明所述的RNAi包括或由如SEQ ID NO：1的核苷酸序列组成，和/或包括或由如SEQ ID NO：2的核苷酸序列组成，和/或包含或由与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列组成，用于降低或消除来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或橡胶的含量的方法。产胶植物或其部分也可以是本文提及的各个产胶植物的后代。

在本发明的一个实施方案中，本发明所述的RNAi包括或由如SEQ ID NO：1的核苷酸序列组成；和/或包含或由与SEQ ID NO：1具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列组成。更优选地，本发明所述的RNAi由如SEQ ID NO：1的核苷酸序列；和/或由与SEQ ID NO：1具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列组成。最优选地，本发明所述的RNAi由如SEQ ID NO：1的核苷酸序列组成。

在本发明的一个实施方案中，本发明所述的RNAi包括或由如SEQ ID NO：2的核苷酸序列组成；和/或包含或由与SEQ ID NO：2具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列组成。更优选地，本发明所述的RNAi如SEQ ID NO：2的核苷酸序列；和/或由与SEQ ID NO：2具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列组成。最优选地，本发明所述的RNAi由如SEQ ID NO：2的核苷酸序列组成。

同样对于本发明的RNAi的的所有实施方案，SEQ ID NO：1的核苷酸序列如下：

TCTCCAAGCGCCCATAGCGGAAAAGTGTTCCTATATTCTGCATAATGTAACATGCAATTCTTCATGTACACTCCTGTTATTTCCTGTTGAGGAAAGTCTCCATTATCCATTTGTCCATTTATGAGCAATTTTGCTGCCTTGTGTAATGGTGTCGGATCTCTTTCAGCCTGTCCACCACATAGAAGACCAAGCATGGCCCATGAAGTTTGCACAAAATTTGTTCTGTTCCCTTCCAAAGGTATAAATTTCTCTTGTGGGCATGACTCAAAGTTCTCTCCCCAACCACCTTCTGAGTTTTGTGTCGAGAGGAAAAACTTGACAGCTTTCCGAACTGCTTCACTATTTTCATATGTTTGTCCACAAGCTACCAATCCTTGTAACACGAAATAGGTTCCATAAAGATAACATATACCCCAATAACCATACCAAGAACCATTTTCTTGTT。

其互补序列如下所示，如果载体包含发夹结构，其也存在于包含SEQ ID NO：1的载体构建体中：

AACAAGAAAATGGTTCTTGGTATGGTTATTGGGGTATATGTTATCTTTATGGAACCTATTTCGTGTTACAAGGATTGGTAGCTTGTGGACAAACATATGAAAATAGTGAAGCAGTTCGGAAAGCTGTCAAGTTTTTCCTCTCGACACAAAACTCAGAAGGTGGTTGGGGAGAGAACTTTGAGTCATGCCCACAAGAGAAATTTATACCTTTGGAAGGGAACAGAACAAATTTTGTGCAAACTTCATGGGCCATGCTTGGTCTTCTATGTGGTGGACAGGCTGAAAGAGATCCGACACCATTACACAAGGCAGCAAAATTGCTCATAAATGGACAAATGGATAATGGAGACTTTCCTCAACAGGAAATAACAGGAGTGTACATGAAGAATTGCATGTTACATTATGCAGAATATAGGAACACTTTTCCGCTATGGGCGCTTGGAGA(SEQID NO:47)。

同样对于本发明的RNAi的的所有实施方案，SEQ ID NO：2的核苷酸序列如下：

ATCCCAAGCTTGAATCGCACGGTTCAGTCTAACTGCCTTTCTCACGGCTGTTGTCACCGCTTCATAGTTCACATCTTCGTCGTCTCCAAGTCTCACTGGAGGTACGCTTATAAGATCAATTCCGC。

其互补序列如下所示，如果载体包含发夹结构，其也存在于包含SEQ ID NO：2的载体构建体中：

GCGGAATTGATCTTATAAGCGTACCTCCAGTGAGACTTGGAGACGACGAAGATGTGAACTATGAAGCGGTGACAACAGCCGTGAGAAAGGCAGTTAGACTGAACCGTGCGATTCAAGCTTGGGAT(SEQ ID NO:48)。

更优选地，本发明所述的RNAi包含或由与SEQ ID NO：1具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％甚至100％同一性的核苷酸序列组成。

甚至更优选地，本发明所述的RNAi包含或由与SEQ ID NO：1具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％甚至100％同一性的核苷酸序列组成。

更优选地，本发明所述的RNAi包含或由与SEQ ID NO：2具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％甚至100％同一性的核苷酸序列组成。

甚至更优选地，本发明所述的RNAi包含或由与SEQ ID NO：2具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％甚至100％同一性的核苷酸序列组成。

更优选地，本发明所述的RNAi包括或由如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列组成，甚至更优选地，本发明所述的RNAi由SEQ ID NO：1所示核苷酸序列组成。

更优选地，本发明所述的RNAi包括或由如SEQ ID NO：2所示核苷酸序列组成，甚至更优选地，本发明所述的RNAi由SEQ ID NO：2所示核苷酸序列组成；

在本发明的上下文中，术语“RNA干扰”一般是指一双链RNA分子改变核酸序列的表达的过程，其中双链或短发夹的RNA分子具有基本或完全同源性。

在本发明的上下文中，术语“RNAi”通常是指引发RNA干扰的RNA序列，并且从载体转录。术语“短发夹RNA”或“shRNA”是指具有双链体区和环区的RNA结构。该术语也应理解为具体包括具有茎环或泛柄(panhandle)二级结构的RNA分子。在本发明的一些实施方案中，RNAi最初表达为shRNA。

对本发明和其优点的更好理解将从以下实施例中得到，实施例提供仅用于说明目的。这些实施例不旨在以任何方式限制本发明的范围。

本发明进一步的特征如下项所述：

1.一种降低或消除来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物含量的方法，包括基因修饰所述产胶植物或其部分分，从而使得与相应的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

2.如第1项的方法，其中产胶植物或其部分通过至少一种异源核苷酸序列基因修饰，所述异源核苷酸序列能够降低或消除所述至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性，优选能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的基因的表达；和/或通过使所述产胶植物或其部分与能够降低或消除所述至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的试剂接触和/或与试剂孵育而对其进行基因修饰。

3.如项2的方法，其中至少一种异源核苷酸序列编码至少一种RNAi，所述的RNAi干扰编码至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA，条件是至少一种RNAi能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

4.如3的方法，其中所述至少一种RNAi特异性地针对至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物，优选地，其中至少一种RNAi包括或由如SEQ ID NO：1的核苷酸序列组成，和/或包括或由如SEQ ID NO：2的核苷酸序列组成，和/或包含或由与如SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列组成。

5.根据前述项中任一项的方法，其中所述产胶植物或其部分选自下组的植物家族：夹竹桃科(Apocynaceae)、菊科(Asteraceae)、大戟科(Euphorbiaceae)和桑科(Moraceae)。

6.根据前述项中任一项的方法，其中所述产胶植物或其部分选自下组：姬松茸(Agoserisglauca)、罗布麻(Apocynum venetum)、沙棘(Chrysothamnusgraveolens)、一枝黄(Chrysothamnus nauseosus)、黄花蛇舌草(Chrysothamnus viscidiflorus)、丝胶树(Funtumia elastica)、银胶菊(Parthenium argentatum)、刺枝野丁香(Scorzoneraacanthoclada)、华北鸦葱(Scorzonera albicaulis)、叉枝鸦葱(Scorzoneradivaricate)、高架鸦葱(Scorzonera hissaricata)、果榕鸦葱(Scorzonera racemosa)、山胶(Scorzonera tau-saghyz)、苦苣菜(Scorzonera tragapogonoides)、土耳其鸦葱(Scorzonera turkestania)、帚状鸦葱(Scorzonera virgate)、加拿大一枝黄花(Solidagocanadensis scabra)、香蜂一枝黄(Solidagofistulosa)、利文沃思一枝黄(Solidagoleavenworthii)、硬枝一枝黄(Solidago rigida)、苦麻菜(Sonchus oleraceus)、短角蒲公英(Taraxacum brevicorniculatum)、克里木橡胶草(Taraxacum hybernum)、橡胶草(Taraxacum koksaghyz)、Taraxacum megalorrhizon、西洋蒲公英(Taraxacumofficinale)或其杂交；优选地，产胶植物或其部分选自下组：银胶菊(Partheniumargentatum)、一枝黄(Chrysothamnus nauseosus)、橡胶草(Taraxacum koksaghyz)、西洋蒲公英(Taraxacum officinale)或其杂交；更优选地，其中产胶植物或其部分为橡胶草(Taraxacum koksaghyz)。

7.根据前述项中任一项的方法，其中至少一种氧化角鲨烯环化酶选自如SEQ IDNO：4的氧化角鲨烯环化酶1、如SEQ ID NO：6的氧化角鲨烯环化酶2、如SEQ ID NO：8的氧化角鲨烯环化酶3、如SEQ ID NO：10的氧化角鲨烯环化酶4、如SEQ ID NO：12的氧化角鲨烯环化酶5、如SEQ ID NO：14的氧化角鲨烯环化酶6、如SEQ ID NO：16的氧化角鲨烯环化酶7、如SEQ ID NO：18的氧化角鲨烯环化酶8、如SEQ ID NO：20的羽扇豆醇合成酶(lupeolsynthase)和与SEQ ID NO：4、6、8、10、12、14、16、18或20具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列；优选地，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自如SEQ IDNO：4的氧化角鲨烯环化酶1、如SEQ ID NO：6的氧化角鲨烯环化酶2、如SEQ ID NO：8的氧化角鲨烯环化酶3、如SEQ ID NO：10的氧化角鲨烯环化酶4、如SEQ ID NO：12的氧化角鲨烯环化酶5和与SEQ ID NO：4、6、8、10或12具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列；更优选地，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自如SEQ ID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1和与SEQ ID NO：4具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列。

8.根据前述项中任一项的方法，其中产胶植物的部分选自下组：细胞、组织、器官、根、茎、枝、叶、渗出物、胶乳及其混合物。

9.一种经基因修饰的产胶植物或其部分，使得与相应的野生型或未处理的产胶植物或其部分相比，至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性降低或消除

10.根据项9的产胶植物或其部分，其中所述产胶植物或其部分通过至少一种异源核苷酸序列基因修饰，所述异源核苷酸序列能够降低或消除所述至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性，优选地，所述异源核苷酸序列能够降低或消除所述至少一种氧化角鲨烯环化酶的基因表达，和/或通过使所述产胶植物或其部分与能够降低或消除所述至少一种氧化角鲨烯环化酶活性的试剂接触和/或与试剂孵育而对其进行基因修饰，所述的试剂能够降低或消除所述至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

11.根据项9或10的产胶植物或其部分，其中至少一种异源核苷酸序列编码至少一种RNAi，所述的RNAi干扰编码至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA，条件是至少一种RNAi能够降低或消除至少一种氧化角鲨烯环化酶的活性。

12.根据项11的产胶植物或其部分，其中至少一种RNAi特异性地针对至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物，优选地，其中至少一种RNAi包括或由如SEQ ID NO：1的核苷酸序列组成，和/或包括或由如SEQ ID NO：2的核苷酸序列组成，和/或包含或由与SEQ IDNO：1或SEQ ID NO：2具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列组成。

13.根据项9至12中任一项的产胶植物或其部分，其中产胶植物或其部分选自下组的植物家族：夹竹桃科(Apocynaceae)、菊科(Asteraceae)、大戟科(Euphorbiaceae)and桑科(Moraceae)，优选地，所述的产胶植物或其部分选自下组：姬松茸(Agoserisglauca)、罗布麻(Apocynum venetum)、沙棘(Chrysothamnus graveolens)、一枝黄(Chrysothamnusnauseosus)、黄花蛇舌草(Chrysothamnus viscidiflorus)、丝胶树(Funtumia elastica)、银胶菊(Parthenium argentatum)、刺枝野丁香(Scorzonera acanthoclada)、华北鸦葱(Scorzonera albicaulis)、叉枝鸦葱(Scorzonera divaricate)、高架鸦葱(Scorzonerahissaricata)、果榕鸦葱(Scorzonera racemosa)、山胶(Scorzonera tau-saghyz)、苦苣菜(Scorzonera tragapogonoides)、土耳其鸦葱(Scorzonera turkestania)、帚状鸦葱(Scorzonera virgate)、加拿大一枝黄花(Solidago canadensis scabra)、香蜂一枝黄(Solidagofistulosa)、利文沃思一枝黄(Solidago leavenworthii)、硬枝一枝黄(Solidago rigida)、苦麻菜(Sonchus oleraceus)、短角蒲公英(Taraxacumbrevicorniculatum)、克里木橡胶草(Taraxacum hybernum)、橡胶草(Taraxacumkoksaghyz)、Taraxacum megalorrhizon、西洋蒲公英(Taraxacum officinale)或其杂交；优选地，产胶植物或其部分选自下组：银胶菊(Parthenium argentatum)、一枝黄(Chrysothamnus nauseosus)、橡胶草(Taraxacum koksaghyz)、西洋蒲公英(Taraxacumofficinale)或其杂交；更优选地，产胶植物或其部分为橡胶草(Taraxacum koksaghyz)。

14.根据项9至13中任一项的产胶植物或其部分，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自下组：如SEQ ID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1、如SEQ ID NO：6的氧化角鲨烯环化酶2、如SEQID NO：8的氧化角鲨烯环化酶3、如SEQ ID NO：10的氧化角鲨烯环化酶4、如SEQ ID NO：12的氧化角鲨烯环化酶5、如SEQ ID NO：14的氧化角鲨烯环化酶6、如SEQ ID NO：16的氧化角鲨烯环化酶7、如SEQ ID NO：18的氧化角鲨烯环化酶8、如SEQ ID NO：20的羽扇豆醇合成酶(lupeolsynthase)和与SEQ ID NO：4、6、8、10、12、14、16、18或20具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列；

优选地，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自如SEQ ID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1、如SEQ ID NO：6的氧化角鲨烯环化酶2、如SEQ ID NO：8的氧化角鲨烯环化酶3、如SEQ IDNO：12的氧化角鲨烯环化酶5和与如SEQ ID NO：4、6、8或12、具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列；更优选地，至少一种氧化角鲨烯环化酶选自如SEQID NO：4的氧化角鲨烯环化酶1和与如SEQ ID NO：4具有至少60％、70％、80％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列。

15、一种特异性地针对至少一种氧化角鲨烯环化酶的mRNA转录物的RNAi，优选地，其中RNAi包括或由如SEQ ID NO：1的核苷酸序列组成：和/或包括或由如SEQ ID NO：2的核苷酸序列组成：和/或包含或由与如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2具有至少60％，70％，80％，90％，95％或99％同一性的核苷酸序列组成，用于降低或消除来自产胶植物或其部分的乳胶或橡胶中的三萜烯和/或三萜类化合物的含量。

实施例

实施例1：材料和方法

植物材料和栽培条件

T.Koksaghyz野生型和转基因植物在标准土壤中生长(ED73Einheitserde，

总RNA提取和cDNA合成

从受伤的T.koksaghyz根在90μl REB缓冲液中收获乳胶(Schmidt等人，2010)。随后，根据制造商的说明，使用innuPREP RNA Mini Kit(AnalytikJena，德国耶拿)提取总RNA。

根据制造商的说明，使用PrimeScript RT Master Mix(TaKaRa，Clontech，Saint-Germain-en-Laye，法国)从500ng总RNA合成全长cDNA。

定量RT-PCR

如前所述进行定量RT-PCR分析(Pütter等人，2017)。在表达分析时，T.kokzaghyzTkOSC1-和TkOSC-RNAi-植物的年龄为9至16周。表1列出了用于表达分析的所有寡核苷酸序列。表2总结了引物效率和扩增因子。

表1：所用寡核苷酸的序列。

表2：qRT-PCR寡核苷酸的引物效率和扩增系数。所有数值均从T.koksaghyz mRNA合成的cDNA中获得。使用Bio-RadCFXManagerv3.1软件(Bio-RadLaboratoriesInc.，Hercules，CA，美国)和赛默飞科技(ThermoFisherScientific)提供的qPCR引物效率计算器(http://www.thermoscientificbio.com)计算值。/webtools/qpcrefficiency/)。

克隆和稳定转型程序

为了克隆用于稳定转化的RNAi载体，首先将cDNA片段插入Gateway兼容的入门载体pBluescript II KS(+)(Addgene，剑桥，马萨诸塞州，美国)中。因此，通过分别使用寡核苷酸TkOSC1-RNAi-fwd-NcoI(SEQ ID NO:21)和TkOSC1-RNAi-rev-XhoI(SEQ ID NO:22)或TkOSC-RNAi-fwd-NcoI(SEQ ID NO:23)和TkOSC-RNAi-rev-XhoI(SEQ ID NO:24)扩增了cDNA片段TkOSC1-RNAi(125bp)(SEQ ID NO:48)和TkOSC-RNAi(445bp)(SEQ ID NO:47)。通过使用pBluescript II KS(+)的NcoI/XhoI限制性酶切位点插入RNAi片段，产生了入门载体pBluescript-TkOSC1和pBluescript-TkOSC。随后，将入门载体用于重组入表达载体pLab12.5-pREF(Epping等，2015)，得到表达载体pLab12.5-pREF-TkOSC1-RNAi(SEQ ID NO：50)和pLab12.5-pREF-TkOSC-RNAi(SEQ ID NO:49)载体。如SEQ ID NO：48的片段：48(GCGGAATTGATCTTATAAGCGTACCTCCAGTGAGACTTGGAGACGACGAAGATGTGAACTATGAAGCGGTGACAACAGCCGTGAGAAAGGCAGTTAGACTGAACCGTGCGATTCAAGCTTGGGAT)用于构建pLab12.5-pREF-TkOSC1-RNAi(SEQ ID NO：50)。

如SEQ ID NO：47的片段：(AACAAGAAAATGGTTCTTGGTATGGTTATTGGGGTATATGTTATCTTTATGGAACCTATTTCGTGTTACAAGGATTGGTAGCTTGTGGACAAACATATGAAAATAGTGAAGCAGTTCGGAAAGCTGTCAAGTTTTTCCTCTCGACACAAAACTCAGAAGGTGGTTGGGGAGAGAACTTTGAGTCATGCCCACAAGAGAAATTTATACCTTTGGAAGGGAACAGAACAAATTTTGTGCAAACTTCATGGGCCATGCTTGGTCTTCTATGTGGTGGACAGGCTGAAAGAGATCCGACACCATTACACAAGGCAGCAAAATTGCTCATAAATGGACAAATGGATAATGGAGACTTTCCTCAACAGGAAATAACAGGAGTGTACATGAAGAATTGCATGTTACATTATGCAGAATATAGGAACACTTTTCCGCTATGGGCGCTTGGAGA)用于构建pLab12.5-pREF-TkOSC-RNAi(SEQ ID NO:49)。

通过测序验证所有载体序列。SEQ ID NO：50给出了pLab12.5-pREF-TkOSC1-RNAi的完整载体序列或构建体。SEQ ID NO：49给出了pLab12.5-pREF-TkOSC-RNAi的完整载体序列或构建体。寡核苷酸序列示于表1。

如前所述(Stolze等人，2017)，通过具有OE-和RNAi-构建体的根癌农杆菌菌株(A.tumefaciens strain)EHA105对T.koksaghyz进行转化。

三萜烯提取和分析

将整个T.koksaghyz根在液氮中冷冻，冷冻干燥，并研磨成细粉。从5至7个月大的RNAi品系中收获根材料。对于三萜烯的分析，通过添加20ml含6％氢氧化钾的甲醇并将其加热到80℃ 2小时，将100mg干燥的根材料用于皂化。加入100μl的桦木脑(betuline)(2.5mg/ml丙酮中的储备溶液)作为内标。用水重新填充样品至15ml的体积，并用1体积的己烷通过涡旋震荡并随后以4000rpm离心5分钟萃取3次。合并的己烷相在Rocket蒸发器4D(GenvacAerospace Inc.,Cleveland、USA)中蒸发，然后重新溶解在1ml丙酮中。

为了从根材料中提取NR，将上述2g干燥的根粉末和20ml水转移到50ml反应管中，并加入珠子(6个7g珠和9个4g珠)。将样品涡旋振荡30分钟，然后以5000g离心15分钟。除去漂浮的橡胶薄片，用淡水洗涤，并在40℃下干燥过夜。对于三萜烯提取，向100mg所得的NR加入10ml丙酮和100μl桦木脑内标准品(2.5mg/ml丙酮中的储备溶液)，并在室温下旋转孵育一周。将得到的萃取液干燥并重新溶解在1ml丙酮中。

使用配备

统计分析

对于具有三个以上样品的统计分析，应用了Mann-WhitneyU测试。该测试是NULL假设的非参数测试，不需要对正常分布的假设。相应的结果显示在Boxplots中。所有其它统计数据都是使用双尾T检验进行的。如果假设方差不相等，则采用韦尔奇校正。相应的结果显示在条形图中。

实施例2：获得包含靶向OSCs的RNAi的T.Koksaghyz植物

为了获得乳胶中具有降低的三萜烯含量的T.koksaghyz植物，将由产胶细胞占主导的REF启动子驱动的两种不同的RNAi构建体转化到T.koksaghyz植物中。用于构建plab12.5-pREF-TkOSC1-RNAi(SEQ ID NO：50)的片段(SEQ ID NO：48)(包含SEQ ID NO：2作为特异性地针对mRNA转录物的RNAi)包含125bp长的非保守区，应该仅敲低TkOSC1，而pLab12.5-pREF-TkOSC-RNAi(SEQ ID NO：49)的片段(SEQ ID NO：47)(包含SEQ ID NO：1作为特异性地针对mRNA转录物的RNAi)包含一个445bp长的序列，该序列来自一个保守性更高的区域，并有望敲低数个TkOSCs。稳定转化后，发明人获得包含七个植物的两个单独的TkOSC1-RNAi品系和包含12个植物的五个TkOSC-RNAi品系。

在9至16周龄的植物中，通过qPCR分析了乳胶中TkOSC1的表达(图1(a))。与T.koksaghyz野生型植物(TkWt；n＝4)相比，TkOSC1的表达在所有品系中均显著降低。对于TkOSC1-RNAi植物，其表达降低至七分之一。对于TkOSC-RNAi植物，其效果甚至更强，导致减少到十八分之一。

为了进一步分析与三萜烯生物合成相关的基因的表达，示例性地将三株野生型，三株TkOSC1-RNAi植物和四株TkOSC-RNAi植物用于进一步的qPCR分析(图1(b)和图1(c))。TkOSC-RNAi植物显示出TkOSC2、TkOSC3、TkOSC5和TkLUP表达的显著降低。仅TkOSC6表达略有增强。出乎意料的是，具有TkOSC1特异性构建体的植物也显示出TkOSC2、TkOSC3和TkOSC5的表达降低，但是与TkOSC-RNAi植物相比，该效果较弱。TkOSC6表达不受影响并且TkLUP表达略微上调。在任何植物的乳胶中均未检测到TkOSC4表达。早期的研究揭示了TkOSC1与上游基因TkSQS1和TkSQE1的共同调控(Unlandetal等，2018)。因此，TkSQS1和TkSQE1的表达也在RNAi品系中进行了分析(图3(c))。TkOSC1-RNAi植物中TkSQS1的平均表达减少到一半，而TkSQE1表达与野生型植物中的表达相当。在TkOSC-RNAi品系中，与野生型相比，TkSQS1的表达甚至进一步降低了四分之一，而TkSQE1的表达则降低了一半，从而证实了TkSQS1、TkSQE1和TkOSC1的共同调控。可以注意到，多种三萜烯生物合成相关基因的表达在两者RNAi品系中均受到影响，在携带TkOSC-RNAi片段的植物中具有通常更强的效果。

实施例3：氧化角鲨烯环化酶(OSC)的敲低对三萜组分的影响

为了分析表达的改变是否对RNAi品系中的三萜烯的影响，通过GC/MS测量了从5至7个月大的植物的干燥根材料的三萜烯提取物(图1)。五环三萜烯在转基因品系中受到强烈影响(图1(d)和图1(e))。结果，总量从野生型植物中的4.6mg/g降低到TkOSC1-RNAi植物中的2.8mg/g和TkOSC-RNAi植物中的2.6mg/g。尤其是在TkOSC-RNAi植物中，最丰富的三萜烯、蒲公英甾醇、β-香树脂醇和一种未鉴定的三萜烯(n.i.1)显著降低，并且具有显著的意义。

除了五环三萜烯之外，通过GC/MS测量其它化合物(图1(e)，表3)。已发现如角鲨烯和2，3-氧化角鲨烯的前体在转基因品系中大量积累，在TkOSC-RNAi植物中具有更高的显著性。此外，在两个转基因品系中都检测到了两种甾醇中间体，环戊烯醇和24-亚甲基环烷醇，在TkOSC1-RNAi植物中平均为0.1mg/g干燥根重，在TkOSC-RNAi植物中平均为0.9mg/g干燥根中。在所有植物中检测到的甾醇(包括菜油甾醇、豆甾醇和谷固甾醇)约为0.5mg/g干燥根重的等量，并且不受敲低的影响。总之，在TkOSC-RNAi植物中，转基因RNAi品系中的总三萜烯含量(包括前体、甾醇中间体、甾醇和五环三萜烯)显著降低至三分之二(图1(e))。

表3：来自T.koksaghyz TkOSC1-/TkOSC-RNAi品系的根材料中的三萜烯含量。通过GC/MS[mg/g干燥根重]鉴定并定量三萜烯化合物，并相对于C8–C40烷烃校准标准品确定了相应的保留指数(RI)。平均值代表分别来自野生型植物(n＝4)、TkOSC1-RNAi植物(n＝7)和TkOSC-RNAi植物(n＝12)的各自提取量，平行三次实验，并带有相应的标准偏差。

为了在NR中定量三萜烯，将三种野生型、TkOSC1-RNAi和TkOSC-RNAi植物的根分别用于橡胶提取。NR提取物中的三萜烯通过丙酮提取进行分离，并相对于NR重量进行定量(图2，表4)。丙酮粗提物含有不同三萜烯的乙酸酯衍生物。与野生型植物相比，乳胶中的这些乙酸酯和主要的三萜烯(蒲公英甾醇、香树脂醇和n.i.1)均显著降低，与TkOSC1-RNAi植物相比，TkOSC-RNAi植物中的降低具有更高的显著性(图2(a)和2(b))。野生型植物中五环三萜烯的平均总量56.6mg/g NR在TkOSC1-RNAi品系中降至33.4mg/gNR，在TkOSC-RNAi系中甚至降至16.1mg/gNR(图2(c))。

表4：提取自T.koksaghyz TkOSC1-/TkOSC-RNAi品系的三萜烯含量。通过GC/MS[mg/g干燥根重]鉴定并定量三萜烯化合物，并相对于C8–C40烷烃校准标准品确定了相应的保留指数(RI)。平均值代表分别来自野生型植物(n＝4)、TkOSC1-RNAi植物(n＝7)和TkOSC-RNAi植物(n＝12)的各自提取量，平行三次实验，并带有相应的标准偏差。

与降低的五环三萜含量相反，与野生型相比，在RNAi品系中再次检测到升高的三萜烯前体以及固醇中间体的量，而在所有三组中均检测到相同量的甾醇。但是，总三萜类化合物的量在TkOSC1-RNAiNR中仍显著降低至三分之二，而在TkOSC-RNAi NR中则降至不到一半(图2(b))。

总之，可以看出，OSC敲低显著降低了蒲公英根和NR中的三萜烯/三萜类化合物的含量。

在本说明书中先前公开的文件的列表或讨论不应被认为是该文件是现有技术的一部分或是公知常识。

本文说明性地描述的本发明可以在不存在本文未具体公开的任何一个或多个元素，一个或多个限制的情况下适当地实践。因此，例如，术语“包括”，“含有”，“包含”等应被广泛地且不受限制地。另外，本文所采用的术语和表达已被用作描述性而非限制性的术语，并且不打算使用这样的术语和表达来排除所示出和描述的特征或其部分的任何等同形式，但是它应当认识到，在所要求保护的本发明的范围内可以进行各种修改。因此，应当理解，尽管已经通过示例性实施方式和可选特征具体公开了本发明，但是本文公开的发明的修改和变化也被认为在本发明的范围内。

在此已经广泛地和概括地描述了本发明。落入一般公开范围内的每个较的种类和亚类分组也构成本发明的一部分。这包括对本发明的一般性描述，其附带条件或否定限制从该属中去除了任何主题，无论所切除的材料是否在本文中进行了具体叙述。

其他实施例在以下权利要求书之内。另外，在根据马库什组描述本发明的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，由此在本发明中也根据马库什组的任何单个成员或成员的子组进行描述。

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Xu R,Fazio GC,Matsuda SPT(2004)三萜类骨架多样性的起源(On the originsof triterpenoid skeletal diversity).Phytochemistry 65:261–291

*

序列表

<110> 弗劳恩霍夫应用研究促进协会

<120> 获得低三萜烯/三萜类化合物含量的天然橡胶乳胶的方法

<130> FHG16527PCT

<150> EP18205121.9

<151> 2018-11-08

<160> 50

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 445

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> TkOSC RNAi 反义序列

<400> 1

tctccaagcg cccatagcgg aaaagtgttc ctatattctg cataatgtaa catgcaattc 60

ttcatgtaca ctcctgttat ttcctgttga ggaaagtctc cattatccat ttgtccattt 120

atgagcaatt ttgctgcctt gtgtaatggt gtcggatctc tttcagcctg tccaccacat 180

agaagaccaa gcatggccca tgaagtttgc acaaaatttg ttctgttccc ttccaaaggt 240

ataaatttct cttgtgggca tgactcaaag ttctctcccc aaccaccttc tgagttttgt 300

gtcgagagga aaaacttgac agctttccga actgcttcac tattttcata tgtttgtcca 360

caagctacca atccttgtaa cacgaaatag gttccataaa gataacatat accccaataa 420

ccataccaag aaccattttc ttgtt 445

<210> 2

<211> 125

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> TkOSC1 RNAi 反义序列

<400> 2

atcccaagct tgaatcgcac ggttcagtct aactgccttt ctcacggctg ttgtcaccgc 60

ttcatagttc acatcttcgt cgtctccaag tctcactgga ggtacgctta taagatcaat 120

tccgc 125

<210> 3

<211> 2313

<212> DNA

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 3

atgtggaagc tgagaatagg tgaaaagaat ggaaagttca acattggtga tggaaacggt 60

gatgactatt tgcatagcac caacaacttt gtggggagac aaacatggga attcgaccct 120

gatgcaggca cgcagaaaga gcgtgacgaa attgaaaggc ttcgagagca atttttgatc 180

aataaaaaga agcttgacat tagatgttgc gcagacttgc taatgcgaaa tcagcttatt 240

aaggaaagcg gaattgatct tataagcgta cctccagtga gacttggaga cgacgaagat 300

gtgaactatg aagcggtgac aacagccgtg agaaaggcag ttagactgaa ccgtgcgatt 360

caagcttggg atggccattg gccagctgaa aatgccggtc cgctcttctt cactcctccc 420

ttgataattg ccctgtacat aagtggtaca ttggatacca tcctcacaca agaacacaaa 480

agggagatga ttcgttatat gtacatccat caaaatgaag acggagggtg ggggttctat 540

atatcaggca gaagcacaat gatagggact gcgctgaatt atgtgggtct aagacttctt 600

ggagaagatg ataatgatgc aattgctaaa ggccgtaaat ggatacttga ccacggtggc 660

gccacctcta ttccttcgtg gggaaaggtg tatctttcgg tgcttggagt gtacgaatgg 720

gcagggtgta accctcttcc tccagaattc tggctttttc cttccttttt gccttatcat 780

ccagcaaaaa tgtggtgtta ttgcagaacc acatacatgc caatgtcata cttgtatggt 840

acaggcttcc aagggcctat tacggacctt gttaagtctt tgagaaaaga gattcatgtc 900

attccttacc atcagattga ttggaacaaa caacgacata attgttgcaa ggaggatctt 960

tactaccctc atacctacat ccaagatctc ttatgggatg gtcttcatta ttttagtgag 1020

ccacttgtat caaaatggcc tctcaagaag ttaagagaga agggtttgaa aagagtattg 1080

gatctaatgc aatataacgc cgaggaagga cgttacataa ctctgggttg cgttgagaag 1140

tctttacaaa tgatgtgttt ttctgcccta gatccaaatg gaattgactt taaacgacac 1200

cttgctagag tccccgatta cttatgggtg gcggaggatg gtatgaaaat gcaaagtttt 1260

ggtagtcagt tatgggattg tactcttgta actcaagcaa ttatcgctag tgatatggtt 1320

gaagaatatg gagattcact taaaaaagct aacttttact taaaagaatc acagatcaaa 1380

caaaacccaa aaggcgattt cgaaaacatg tgtcgccagt ttacaaaagg ggcttggact 1440

ttctctgatc aagatcaagg ttgggtcgtc tcagattgca ctgccgaagc tgtgaagtgt 1500

ttattggcat tgtcacaaat gccacaagaa atttccggtg aaaaggtcga cgtcgagcga 1560

ttatatgatg ccattaacgt ccttctttac ctacagagtc cagaaactgg tggttttgca 1620

atttgggagg caccggttcc aaaaccatat ttagagaaat tgaatccttc agaacttttt 1680

gcagacatag tggtcgagag agagcatgtt gaatgtacgg ggtccataat tcaaacgttg 1740

caaacattta aaactctgca tccagggcat cgtcaaaaag aaatagaagt tgctattgaa 1800

aaaggcatac gctttttgga aaatagacaa caagaaaatg gttcttggta tggttattgg 1860

ggtatatgtt atctttatgg aacctatttc gtgttacaag gattggtagc ttgtggacaa 1920

acatatgaaa atagtgaagc agttcggaaa gctgtcaagt ttttcctctc gacacaaaac 1980

tcagaaggtg gttggggaga gaactttgag tcatgcccac aagagaaatt tatacctttg 2040

gaagggaaca gaacaaattt tgtgcaaact tcatgggcca tgcttggtct tctatgtggt 2100

ggacaggctg aaagagatcc gacaccatta cacaaggcag caaaattgct cataaatgga 2160

caaatggata atggagactt tcctcaacag gaaataacag gagtgtacat gaagaattgc 2220

atgttacatt atgcagaata taggaacact tttccgctat gggcgcttgg agagtaccgt 2280

aagcgtgttt ggttagcaaa acaagaaacc taa 2313

<210> 4

<211> 770

<212> PRT

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 4

Met Trp Lys Leu Arg Ile Gly Glu Lys Asn Gly Lys Phe Asn Ile Gly

1 5 10 15

Asp Gly Asn Gly Asp Asp Tyr Leu His Ser Thr Asn Asn Phe Val Gly

20 25 30

Arg Gln Thr Trp Glu Phe Asp Pro Asp Ala Gly Thr Gln Lys Glu Arg

35 40 45

Asp Glu Ile Glu Arg Leu Arg Glu Gln Phe Leu Ile Asn Lys Lys Lys

50 55 60

Leu Asp Ile Arg Cys Cys Ala Asp Leu Leu Met Arg Asn Gln Leu Ile

65 70 75 80

Lys Glu Ser Gly Ile Asp Leu Ile Ser Val Pro Pro Val Arg Leu Gly

85 90 95

Asp Asp Glu Asp Val Asn Tyr Glu Ala Val Thr Thr Ala Val Arg Lys

100 105 110

Ala Val Arg Leu Asn Arg Ala Ile Gln Ala Trp Asp Gly His Trp Pro

115 120 125

Ala Glu Asn Ala Gly Pro Leu Phe Phe Thr Pro Pro Leu Ile Ile Ala

130 135 140

Leu Tyr Ile Ser Gly Thr Leu Asp Thr Ile Leu Thr Gln Glu His Lys

145 150 155 160

Arg Glu Met Ile Arg Tyr Met Tyr Ile His Gln Asn Glu Asp Gly Gly

165 170 175

Trp Gly Phe Tyr Ile Ser Gly Arg Ser Thr Met Ile Gly Thr Ala Leu

180 185 190

Asn Tyr Val Gly Leu Arg Leu Leu Gly Glu Asp Asp Asn Asp Ala Ile

195 200 205

Ala Lys Gly Arg Lys Trp Ile Leu Asp His Gly Gly Ala Thr Ser Ile

210 215 220

Pro Ser Trp Gly Lys Val Tyr Leu Ser Val Leu Gly Val Tyr Glu Trp

225 230 235 240

Ala Gly Cys Asn Pro Leu Pro Pro Glu Phe Trp Leu Phe Pro Ser Phe

245 250 255

Leu Pro Tyr His Pro Ala Lys Met Trp Cys Tyr Cys Arg Thr Thr Tyr

260 265 270

Met Pro Met Ser Tyr Leu Tyr Gly Thr Gly Phe Gln Gly Pro Ile Thr

275 280 285

Asp Leu Val Lys Ser Leu Arg Lys Glu Ile His Val Ile Pro Tyr His

290 295 300

Gln Ile Asp Trp Asn Lys Gln Arg His Asn Cys Cys Lys Glu Asp Leu

305 310 315 320

Tyr Tyr Pro His Thr Tyr Ile Gln Asp Leu Leu Trp Asp Gly Leu His

325 330 335

Tyr Phe Ser Glu Pro Leu Val Ser Lys Trp Pro Leu Lys Lys Leu Arg

340 345 350

Glu Lys Gly Leu Lys Arg Val Leu Asp Leu Met Gln Tyr Asn Ala Glu

355 360 365

Glu Gly Arg Tyr Ile Thr Leu Gly Cys Val Glu Lys Ser Leu Gln Met

370 375 380

Met Cys Phe Ser Ala Leu Asp Pro Asn Gly Ile Asp Phe Lys Arg His

385 390 395 400

Leu Ala Arg Val Pro Asp Tyr Leu Trp Val Ala Glu Asp Gly Met Lys

405 410 415

Met Gln Ser Phe Gly Ser Gln Leu Trp Asp Cys Thr Leu Val Thr Gln

420 425 430

Ala Ile Ile Ala Ser Asp Met Val Glu Glu Tyr Gly Asp Ser Leu Lys

435 440 445

Lys Ala Asn Phe Tyr Leu Lys Glu Ser Gln Ile Lys Gln Asn Pro Lys

450 455 460

Gly Asp Phe Glu Asn Met Cys Arg Gln Phe Thr Lys Gly Ala Trp Thr

465 470 475 480

Phe Ser Asp Gln Asp Gln Gly Trp Val Val Ser Asp Cys Thr Ala Glu

485 490 495

Ala Val Lys Cys Leu Leu Ala Leu Ser Gln Met Pro Gln Glu Ile Ser

500 505 510

Gly Glu Lys Val Asp Val Glu Arg Leu Tyr Asp Ala Ile Asn Val Leu

515 520 525

Leu Tyr Leu Gln Ser Pro Glu Thr Gly Gly Phe Ala Ile Trp Glu Ala

530 535 540

Pro Val Pro Lys Pro Tyr Leu Glu Lys Leu Asn Pro Ser Glu Leu Phe

545 550 555 560

Ala Asp Ile Val Val Glu Arg Glu His Val Glu Cys Thr Gly Ser Ile

565 570 575

Ile Gln Thr Leu Gln Thr Phe Lys Thr Leu His Pro Gly His Arg Gln

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Gln Thr Ser Trp Ala Met Leu Gly Leu Leu Cys Gly Gly Gln Ala Glu

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Gln Met Asp Asn Gly Asp Phe Pro Gln Gln Glu Ile Thr Gly Val Tyr

725 730 735

Met Lys Asn Cys Met Leu His Tyr Ala Glu Tyr Arg Asn Thr Phe Pro

740 745 750

Leu Trp Ala Leu Gly Glu Tyr Arg Lys Arg Val Trp Leu Ala Lys Gln

755 760 765

Glu Thr

770

<210> 5

<211> 2313

<212> DNA

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 5

atgtggaagc tgagaatagg tgaaaagaat ggaaagttca acattggtga tggaaacggc 60

gatgaatatt tgtatagcac caacaacttt gtggggagac aaacatggga gttcgaccct 120

gatgcaggca cacaggaaga gcgtgatgaa gttgaaaggc ttcgagaaca atttctaatc 180

aataagaaga agcttgacat cagttgttgt gcagacttgc tcatgcgaaa tcagcttatt 240

aaggaaagcg gaattgatct tataagcgaa gctccagtga aacttggaca cgatgaggat 300

gtgaactata aagcggtaac aacagcagta agaaaggcag tcagactgaa ccgtgcaatc 360

caagcttggg atggtcattg gccggctgaa aatgcgggtc cgctcttttt cactcctcct 420

ttgataatcg tcttgtatat tagtggtaca ttggataatg tccttacaca agaccacaag 480

aaggagatga ttcgttatat gtacatccat caaaatgaag atggagggtg gggattctat 540

atatcaggca gaagcacaat gatagggact gcgctgaatt atgtgggtct aagacttctt 600

ggagaagatg ataatgatgc aattgctaaa ggccgtaaat ggatacttga ccacggtggc 660

gccacctcta ttccttcgtg gggaaaggtg tatctttcgg tacttggagt gtacgaatgg 720

gcaggctgta accctcttcc tccagaattc tggctttttc cttccttttt cccttatcat 780

ccagcaaaaa tgtggtgtta ttgcagaacc acatacatgc caatgtcata cttgtatggt 840

agaggcatcc aagggcctat tacggacctc gttaagtctt tgagaaaaga gatccatgtc 900

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tactaccctc atacctacat ccaagatctc ttatgggatg gtcttcatta ttttagtgag 1020

ccacttatca caaaatggcc cttcgagaag ttaagagcga agggtttgaa aagagtattg 1080

gatctaatgc aatataatgc tgaggaagga cgttacataa ccctaggttc cgttgagaag 1140

tctttacaaa tgatgtgttt ttatgcccta gatccaaatg gaattgactt taaacgacac 1200

cttgctagag tccccgatta cttatgggtg gcggaagatg gtatgaaaat gcaaagtttt 1260

ggtagtcagt tatgggattg tactcttgta actcaagcta ttatcgctag tgatatggtt 1320

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<211> 770

<212> PRT

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 6

Met Trp Lys Leu Arg Ile Gly Glu Lys Asn Gly Lys Phe Asn Ile Gly

1 5 10 15

Asp Gly Asn Gly Asp Glu Tyr Leu Tyr Ser Thr Asn Asn Phe Val Gly

20 25 30

Arg Gln Thr Trp Glu Phe Asp Pro Asp Ala Gly Thr Gln Glu Glu Arg

35 40 45

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85 90 95

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100 105 110

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130 135 140

Leu Tyr Ile Ser Gly Thr Leu Asp Asn Val Leu Thr Gln Asp His Lys

145 150 155 160

Lys Glu Met Ile Arg Tyr Met Tyr Ile His Gln Asn Glu Asp Gly Gly

165 170 175

Trp Gly Phe Tyr Ile Ser Gly Arg Ser Thr Met Ile Gly Thr Ala Leu

180 185 190

Asn Tyr Val Gly Leu Arg Leu Leu Gly Glu Asp Asp Asn Asp Ala Ile

195 200 205

Ala Lys Gly Arg Lys Trp Ile Leu Asp His Gly Gly Ala Thr Ser Ile

210 215 220

Pro Ser Trp Gly Lys Val Tyr Leu Ser Val Leu Gly Val Tyr Glu Trp

225 230 235 240

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245 250 255

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260 265 270

Met Pro Met Ser Tyr Leu Tyr Gly Arg Gly Ile Gln Gly Pro Ile Thr

275 280 285

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290 295 300

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305 310 315 320

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325 330 335

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340 345 350

Ala Lys Gly Leu Lys Arg Val Leu Asp Leu Met Gln Tyr Asn Ala Glu

355 360 365

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370 375 380

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Leu Ala Arg Val Pro Asp Tyr Leu Trp Val Ala Glu Asp Gly Met Lys

405 410 415

Met Gln Ser Phe Gly Ser Gln Leu Trp Asp Cys Thr Leu Val Thr Gln

420 425 430

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435 440 445

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465 470 475 480

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500 505 510

Gly Glu Lys Val Glu Val Glu Arg Leu Tyr Asp Ala Ile Asn Val Leu

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Leu Tyr Leu Gln Ser Pro Glu Thr Gly Gly Phe Ala Val Trp Glu Val

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Pro Val Pro Lys Pro Tyr Leu Glu Lys Leu Asn Pro Ser Glu Leu Phe

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Ala Asp Ile Thr Val Glu Arg Glu His Val Glu Cys Thr Gly Ser Ile

565 570 575

Ile Gln Ala Leu Gln Thr Phe Lys Thr Leu His Pro Gly His Arg Glu

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Lys Glu Ile Glu Val Ala Ile Glu Lys Gly Ile His Phe Leu Glu Asn

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Arg Gln Gln Glu Asn Gly Ser Trp Tyr Gly Phe Trp Gly Ile Cys Tyr

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Ile Tyr Gly Thr Tyr Phe Val Leu Gln Gly Leu Val Ala Cys Gly Lys

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Thr Tyr Glu Asn Cys Glu Ala Val Arg Lys Ala Val Lys Phe Phe Leu

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Ser Thr Gln Asn Ser Glu Gly Gly Trp Gly Glu His Phe Glu Ser Cys

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Pro Gln Glu Lys Phe Ile Pro Leu Glu Gly Asn Arg Thr His Phe Val

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His Thr Ser Trp Ala Met Leu Gly Leu Leu Tyr Gly Gly Gln Val Glu

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Arg Asp Pro Thr Pro Leu His Lys Ala Ser Lys Leu Leu Ile Asn Gly

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Gln Thr Asp Asn Gly Asp Phe Pro Gln Gln Glu Ile Thr Gly Val Tyr

725 730 735

Asn Lys Asn Cys Met Leu His Tyr Ala Glu Tyr Arg Asn Thr Phe Pro

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Leu Trp Ala Leu Gly Glu Tyr Arg Lys Arg Val Trp Leu Ala Lys Gln

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Glu Thr

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<210> 7

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<212> DNA

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

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cttccggtga gaataagtga gggcgagcaa gtaaattatg aagcaacaac aattgcagta 300

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<212> PRT

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 8

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Gln Asn Glu Asp Gly Gly Trp Gly Phe Tyr Ile Glu Gly His Ser Thr

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530 535 540

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545 550 555 560

Glu His Val Glu Thr Thr Ser Ser Ile Ile Gly Ala Leu Ile Glu Phe

565 570 575

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580 585 590

Ser Asn Gly Ile Arg Tyr Leu Glu Glu Thr Gln Trp His Asp Gly Ser

595 600 605

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Leu Arg Ala Leu Ser Thr Ala Gly Lys Thr Tyr Lys Asn Asn Glu Ala

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<212> DNA

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

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<212> PRT

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 10

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Gln Asn Glu Asp Gly Gly Trp Gly Phe His Leu Glu Gly His Ser Ile

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Met Phe Cys Thr Ala Val Asn Tyr Ile Cys Met Arg Met Leu Gly Glu

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Gly Pro Asp Gly Gly Leu Asp Gly Ala Cys Ser Arg Ala Arg Lys Trp

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Trp Leu Ser Ala Leu Gly Leu Tyr Glu Trp Ser Gly Ser Asn Pro Met

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Pro Pro Glu Phe Trp Leu Leu Pro Ser Phe Leu Pro Ile Ser Pro Gly

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Leu Gln Asp Leu Ser Trp Asp Thr Leu His Leu Ala Val Glu Pro Ile

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Leu Thr Arg Trp Pro Phe Lys Ser Met Ile Arg Glu Lys Ala Leu Lys

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Ser Gln Gln Trp Asp Ser Ser Leu Ser Val Leu Ala Leu Ile Asp Cys

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<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

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aatagccgtt atatcaccat tggttcagtg gtaaaggtgt tgtgtatgct tgcatgttgg 1140

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caaggttccg acaccactgc tgaagcattg aagtgttgtc tcctattctc aacaatgcca 1500

ccagaaattg ttggtgagaa aatgaaacct gagcaactga atgatgcggt caatgtgata 1560

ctttccctac agagcaaaaa cggcgggtta gcatcatggg aaccagcagg atcatcagaa 1620

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gttgagtgca catcatcagc aattcaggca atcgttttat ttaacaagtt atacccgcaa 1740

catagaaaaa aagagataga aacttttctt acaggtgcaa gtggatacct agagaaatta 1800

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aaagccgtta aatttctgtt ggaaacacaa ctagaagatg gcggttgggg agaaagctac 1980

aaatcctgtc cagaaaaaat atacataccc ctagaaggag gccggtcaaa tttagtgcac 2040

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atacacaaag cagccaggtt attgatcaat tcacagttag aaaacggtga ttttccacaa 2160

caggaaataa ccggagtatt catgaagaac tgcatgttac actacgcact ctacaggaac 2220

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taa 2283

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<212> PRT

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 12

Met Trp Lys Leu Lys Ile Ala Glu Gly Gly Asn Asp Pro Tyr Leu His

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Ser Thr Asn Asn Phe Ile Gly Arg Gln Ile Trp Glu Phe Asp Ser Asn

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Glu Asp Gly Gly Trp Gly Phe His Ile Glu Gly His Ser Ser Met Phe

165 170 175

Cys Thr Thr Leu Ser Tyr Ile Cys Met Arg Leu Leu Gly Glu Gly Val

180 185 190

Asp Gly Gly Leu Asn Gly Ala Cys Thr Lys Ala Arg Lys Trp Ile Leu

195 200 205

Asp His Gly Ser Val Thr Ala Ile Ala Ser Trp Gly Lys Thr Trp Leu

210 215 220

Ser Ile Leu Gly Val Cys Glu Trp Ala Gly Thr Asn Pro Met Pro Pro

225 230 235 240

Glu Phe Trp Ile Leu Pro Ser Phe Leu Pro Met Tyr Pro Ala Lys Leu

245 250 255

Trp Cys Tyr Cys Arg Leu Val Tyr Met Pro Met Ser Tyr Leu Tyr Gly

260 265 270

Lys Arg Phe Val Gly Pro Ile Thr Pro Leu Ile Leu Gln Leu Arg Asp

275 280 285

Glu Leu Tyr Leu Gln Pro Tyr Asn Glu Ile Asn Trp Lys Ser Ile Arg

290 295 300

His Leu Cys Ala Lys Glu Asp Leu Tyr Tyr Pro His Pro Leu Leu Gln

305 310 315 320

Asp Leu Met Trp Asp Ser Leu Tyr Ile Cys Ile Glu Pro Leu Leu Asn

325 330 335

Arg Trp Pro Leu Asn Lys Leu Arg Gln Lys Ala Leu Glu Thr Thr Met

340 345 350

Lys His Ile His Tyr Glu Asp Glu Asn Ser Arg Tyr Ile Thr Ile Gly

355 360 365

Ser Val Val Lys Val Leu Cys Met Leu Ala Cys Trp Val Glu Glu Pro

370 375 380

Asn Gly Val Cys Phe Lys Lys His Leu Ala Arg Ile Pro Asp Tyr Ile

385 390 395 400

Trp Ile Ala Glu Asp Gly Met Lys Met Gln Ser Phe Gly Ser Gln Gly

405 410 415

Trp Asp Ala Ser Leu Ala Ile Gln Ala Leu Leu Ala Thr Asp Leu Thr

420 425 430

Asp Glu Ile Gly Ser Thr Leu Met Lys Gly His Lys Phe Val Lys Ala

435 440 445

Ser Gln Val Lys Asp Asn Pro Ser Gly Tyr Phe Lys Asn Met His Arg

450 455 460

His Ile Ser Lys Gly Ser Trp Ser Phe Ser Asp Gln Asp His Gly Trp

465 470 475 480

Gln Gly Ser Asp Thr Thr Ala Glu Ala Leu Lys Cys Cys Leu Leu Phe

485 490 495

Ser Thr Met Pro Pro Glu Ile Val Gly Glu Lys Met Lys Pro Glu Gln

500 505 510

Leu Asn Asp Ala Val Asn Val Ile Leu Ser Leu Gln Ser Lys Asn Gly

515 520 525

Gly Leu Ala Ser Trp Glu Pro Ala Gly Ser Ser Glu Trp Leu Glu Ile

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Phe Asn Pro Thr Glu Phe Phe Ala Asp Ile Val Ile Glu His Glu Tyr

545 550 555 560

Val Glu Cys Thr Ser Ser Ala Ile Gln Ala Ile Val Leu Phe Asn Lys

565 570 575

Leu Tyr Pro Gln His Arg Lys Lys Glu Ile Glu Thr Phe Leu Thr Gly

580 585 590

Ala Ser Gly Tyr Leu Glu Lys Leu Gln Thr Lys Asp Gly Ser Trp Tyr

595 600 605

Gly Asn Trp Gly Val Cys Phe Thr Tyr Gly Thr Trp Phe Gly Ile Gly

610 615 620

Gly Leu Thr Ala Val Gly Lys Thr Phe Glu Asn Cys Gln Ala Ile Gln

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Lys Ala Val Lys Phe Leu Leu Glu Thr Gln Leu Glu Asp Gly Gly Trp

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Gly Glu Ser Tyr Lys Ser Cys Pro Glu Lys Ile Tyr Ile Pro Leu Glu

660 665 670

Gly Gly Arg Ser Asn Leu Val His Thr Ser Trp Ala Met Ile Gly Leu

675 680 685

Ile Gln Ser Gln Trp Met Glu Arg Asp Ser Thr Pro Ile His Lys Ala

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Ala Arg Leu Leu Ile Asn Ser Gln Leu Glu Asn Gly Asp Phe Pro Gln

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Gln Glu Ile Thr Gly Val Phe Met Lys Asn Cys Met Leu His Tyr Ala

725 730 735

Leu Tyr Arg Asn Ile Tyr Pro Met Trp Ala Leu Ala Asp Tyr Arg Lys

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Lys Val Leu Ser Thr Cys Lys Lys

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<210> 13

<211> 2277

<212> DNA

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 13

atgtggaaat taaagatagc cgaaggaggc aatgatccat acctccattc cacaaacaac 60

tttatcggga gacaaatatg ggagtttgac ccaaaccatg gaaccacaga agaccgagcc 120

gaggtcgaac aagctcgact cgatttctgg aaccatcgac atcaggtcaa gcctagcagt 180

gatgtccttt ggcgcatgca gtttttgaaa gagaaagaat tcaagcaaac gatagctcag 240

gtgaaaatag aggattctga agagatatcg tatgaaaaaa ctacaaccac attgaggagg 300

tgtgtgagct tttttgcagc gttgcaagcc agtgatggtc actggcctgc tgaaaatgcg 360

ggcccactgt atttcatgca gccattggtt atctgtttat atattactgg tcatcttaac 420

attgttttcc cagaagaata tcgaaaagaa attctacgtt acttatattg ccatcagaat 480

gaagacggtg gttggggatt tcacatcgag ggtcatagca ccatgtttgg gaccaccctc 540

agttacattt gtatgcggct cttaggagaa ggtccggatg gtggtctgaa tggtgcatgc 600

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aaaacatggc tttcaatact tggtgtatgt gagtgggcag gaaccaaccc aatgccccca 720

gagttctggc tccttccttc ttttcttcct atgtgtccag caaagatgtg gtgctactgt 780

cggttggtgt acatgccaat gtcctaccta tatggaaaaa gatttgtggg tcccatcact 840

cctttggttc ttcaacttag agatgaatta tacgcacagc cctacgatga gatcaactgg 900

aaaagcatac gccatttgtg tgcaaaggaa gatttatact accctcatcc gttcctacaa 960

gatttaatgt gggatagttt atatatttgc accgagcctc tattaaatcg ctggccgtta 1020

aataaattac gtcaaaaagc acttgataca acaatgaaac atattcatta tgaagatgag 1080

aatagtcgtt atatcaccat tggttcggtg gtaaagccac tgtgtatgct tgcatgttgg 1140

gttgaagatc caaatggcgt ttgtttcaaa aaacatattg cacgaatccc tgattacatc 1200

tgggttgctg aagacggaat gaaaatgcag agttttggta gtcaaaagtg ggatgctggt 1260

tttgcgatcc aagctctatt ggctgctgat cttactgaag aaaatggatc tactttgatg 1320

aaaggacatg aatttattaa agcttcacag gttaaagata atccttctgg agactttaaa 1380

agcatgcaca ggcatatttc gaaagggtca tggactttct cagatcaaga tcacggatgg 1440

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tggttggagg ttcttaatcc tacggagttc tttgctgaca ttgtaattga gcacgagtat 1680

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cagatggaag atggttcatg gtatggaaac tggggggtgt gttttacata tggtacctgg 1860

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<210> 14

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<212> PRT

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 14

Met Trp Lys Leu Lys Ile Ala Glu Gly Gly Asn Asp Pro Tyr Leu His

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Gly His Trp Pro Ala Glu Asn Ala Gly Pro Leu Tyr Phe Met Gln Pro

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Leu Val Ile Cys Leu Tyr Ile Thr Gly His Leu Asn Ile Val Phe Pro

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Glu Glu Tyr Arg Lys Glu Ile Leu Arg Tyr Leu Tyr Cys His Gln Asn

145 150 155 160

Glu Asp Gly Gly Trp Gly Phe His Ile Glu Gly His Ser Thr Met Phe

165 170 175

Gly Thr Thr Leu Ser Tyr Ile Cys Met Arg Leu Leu Gly Glu Gly Pro

180 185 190

Asp Gly Gly Leu Asn Gly Ala Cys Thr Lys Ala Arg Lys Trp Ile Leu

195 200 205

Asp His Gly Ser Val Thr Ala Ile Pro Ser Trp Gly Lys Thr Trp Leu

210 215 220

Ser Ile Leu Gly Val Cys Glu Trp Ala Gly Thr Asn Pro Met Pro Pro

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Glu Phe Trp Leu Leu Pro Ser Phe Leu Pro Met Cys Pro Ala Lys Met

245 250 255

Trp Cys Tyr Cys Arg Leu Val Tyr Met Pro Met Ser Tyr Leu Tyr Gly

260 265 270

Lys Arg Phe Val Gly Pro Ile Thr Pro Leu Val Leu Gln Leu Arg Asp

275 280 285

Glu Leu Tyr Ala Gln Pro Tyr Asp Glu Ile Asn Trp Lys Ser Ile Arg

290 295 300

His Leu Cys Ala Lys Glu Asp Leu Tyr Tyr Pro His Pro Phe Leu Gln

305 310 315 320

Asp Leu Met Trp Asp Ser Leu Tyr Ile Cys Thr Glu Pro Leu Leu Asn

325 330 335

Arg Trp Pro Leu Asn Lys Leu Arg Gln Lys Ala Leu Asp Thr Thr Met

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355 360 365

Ser Val Val Lys Pro Leu Cys Met Leu Ala Cys Trp Val Glu Asp Pro

370 375 380

Asn Gly Val Cys Phe Lys Lys His Ile Ala Arg Ile Pro Asp Tyr Ile

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Trp Val Ala Glu Asp Gly Met Lys Met Gln Ser Phe Gly Ser Gln Lys

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Trp Asp Ala Gly Phe Ala Ile Gln Ala Leu Leu Ala Ala Asp Leu Thr

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Glu Glu Asn Gly Ser Thr Leu Met Lys Gly His Glu Phe Ile Lys Ala

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Leu Thr Met Pro Ala Glu Ile Val Gly Glu His Met Lys Pro Glu Gln

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530 535 540

Leu Asn Pro Thr Glu Phe Phe Ala Asp Ile Val Ile Glu His Glu Tyr

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580 585 590

Ala Ser Gly Tyr Leu Glu Lys Ile Gln Met Glu Asp Gly Ser Trp Tyr

595 600 605

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Lys Ala Val Lys Phe Leu Leu Glu Thr Gln Leu Glu Asp Gly Gly Trp

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Ile His Ser Gln Gln Met Glu Arg Asp Pro Met Pro Leu His Lys Ala

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Ala Lys Leu Leu Ile Asn Ser Gln Leu Glu Asn Gly Asp Phe Pro Gln

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Gln Lys Ile Ala Gly Val Phe Lys Met Asn Cys Met Leu His Tyr Ala

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<210> 15

<211> 2277

<212> DNA

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 15

atgtggaagt tgaagatagc acaaggaaat gatccttatc tattttccac aaacaatttt 60

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gtagaagatg ctcgccagta ttttcgcaat aatcgaaggg agggtgttca tccatgtggt 180

gatttgctta tgcgggcaca gttgatcaaa gagagtggaa ttgatgtatc gagcatacca 240

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gatacgcatt taacgaaaga acacaagaca gaaatgatac gttacatcta caaccaccaa 480

aatgaagatg gagggtgggg attttatatc gaggggcaca gcacaatgat tggatctgca 540

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caaacttcgt gggctatgct tgggcttatg ttaggtggac aggccgaaag agatccaaca 2100

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<210> 16

<211> 758

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<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 16

Met Trp Lys Leu Lys Ile Ala Gln Gly Asn Asp Pro Tyr Leu Phe Ser

1 5 10 15

Thr Asn Asn Phe Val Gly Arg Gln Ile Trp Glu Phe Asp Pro Asp Ala

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Gly Thr Pro Ala Glu Arg Gln Glu Val Glu Asp Ala Arg Gln Tyr Phe

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Arg Asn Asn Arg Arg Glu Gly Val His Pro Cys Gly Asp Leu Leu Met

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165 170 175

Ile Gly Ser Ala Leu Ser Tyr Val Ala Leu Arg Leu Leu Gly Glu Gly

180 185 190

Pro Asn Asp Gly Asn Gly Ala Val Thr Gln Ala Arg Glu Trp Ile Leu

195 200 205

Gln His Gly Gly Ala Thr Ser Ile Pro Ser Trp Gly Lys Thr Tyr Leu

210 215 220

Ser Val Leu Gly Val Tyr Glu Trp Glu Gly Cys Asn Pro Leu Pro Pro

225 230 235 240

Glu Phe Trp Leu Phe Pro Glu Ser Leu Pro Tyr His Pro Ala Lys Met

245 250 255

Trp Cys Tyr Cys Arg Thr Thr Tyr Met Pro Met Ser Tyr Leu Tyr Gly

260 265 270

Lys Lys Tyr His Gly Pro Ile Thr Asp Leu Val Leu Gln Leu Arg Lys

275 280 285

Glu Ile His Pro Ile Pro Tyr His Lys Ile Asp Trp Asn Lys Gln Arg

290 295 300

His Asn Cys Cys Lys Asp Asp Leu Tyr Tyr Pro His Ser Thr Leu Gln

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Asp Leu Leu Trp Asp Gly Leu Asn Tyr Phe Ser Glu Pro Leu Leu Lys

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Tyr Trp Pro Phe Thr Lys Leu Arg Glu Lys Gly Leu Lys Arg Ala Val

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Trp Asp Cys Thr Leu Ala Thr Gln Ala Ile Ile Ser Thr Asp Met Val

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485 490 495

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565 570 575

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Lys Ala Val Ser Phe Leu Glu Glu Lys Gln Trp His Asp Gly Ser Trp

595 600 605

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Gly Gly Leu Ile Ser Ala Gly Lys Thr Tyr Asn Asn Ser Glu Ala Val

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Arg Arg Ala Val Asn Phe Phe Leu Ser Thr Gln Asn Glu Glu Gly Gly

645 650 655

Trp Gly Glu Ser Ile Lys Ser Cys Pro Ser Glu Val Tyr Thr Pro Leu

660 665 670

Asp Glu Asn Arg Thr Asn Leu Val Gln Thr Ser Trp Ala Met Leu Gly

675 680 685

Leu Met Leu Gly Gly Gln Ala Glu Arg Asp Pro Thr Pro Leu His Lys

690 695 700

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Lys Arg Val Trp Val Asn

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<211> 2277

<212> DNA

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 17

atgtggaagc taaagatagc agaagggaat gatccttact tgtttagcac caacaacttt 60

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gtagagaatg ctcgccaaaa ttttcttaat cgacaaaagg aaggttttca gacatgcggc 180

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cctgcgaggt tgggagaaaa agaggatgtg gattatgaag cagtgacgac atcaataaga 300

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attcgtgcca gaaaatggat acttgaccat ggtggtgcga ccaatgtacc atcttggggc 660

aaactttatc tctcggttct tggtgtatat gaatgggaag gatgcaaccc aataccacct 720

gaattttgga ttttccctga gttcttacca tttcatccag caaaaatgtg gtgctattgt 780

cgaacggcct atatgccaat gtcatacttg tacgggagaa aattccaagg cccaatcact 840

gatcttgtgt tacaactgag aaaagagatt tatcttacac catacaacga aataaattgg 900

aatgaacatc gccataaatg ttgcaaggaa gacctctatt accctcatac aatagtccaa 960

gatttgttat gggatggtct ttattacttg agtgagccac tcttcaagtt ttggcctttt 1020

accaaactaa gagaaaaagc cctcaaaaga acacttgagt tgactcgcta taatgctgaa 1080

gaaagcaggt acattaccat ggcaagtatt gaaaagggtt ttcaaatgat gtgttggtgg 1140

gcggcgaacc caaacggaga tgaattcaag catcaccttg ctagactacc agattactta 1200

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tttgcaacac aagcaataat cgcaagtaat atgcccgaag aatatgggga ttctctcaaa 1320

aaggctcatt tctttctcaa agaatctcag gttaaacaaa acccaaaggg agattttact 1380

aaaatgtgtc gacagtttag caaaggatcg tggacgttca ccgatcaaga tcatggttgg 1440

cctgtctcag attgtacagg agaagcattg aaatgcctgc ttttattatc ccaaatgccc 1500

gaagaaattt caggagaaaa agtagataat cagcggctat atgatgctgt taacttcctc 1560

cttcacgtac aaagtcctac aacaggaggt tttgctgttt gggaaaaacc gatccctcat 1620

ccatatttac agacgttaaa tccttcagaa atgttcgccg acattgttgt tgaaagagag 1680

catgttgagt gcacaacttc agtgatgcaa gctctcatcg cattccaaca cttccactcc 1740

gggcacaggg aaaaagaaat agaaaacgct attgcaaatg cagtacgtta tctagaggag 1800

atacaacggg aagatggttc atggtatggc tattggggta tatgtttcat atatggcaca 1860

ttcttttcgt taggaggctt agaatcagct ggaaaaacat ataatgattg tgaagcaatt 1920

cgaaaaggag ccaagttttt actttcgaca caaaatgaag aaggtggatg gggagagagc 1980

tataaatctt gccctagtga agtgtacaca ccgctagatg ggaataaaac taatatagtt 2040

caaacttcat gggctatgct tggtctcatg tcatcggggc aggctgaacg agatccaaca 2100

ccgttacata aagcagcaag gatcttgatt aatgcacaaa tggataatgg agattttccg 2160

caacaggaga tgactggagc tgcgatgagg aattgcatgc tacattatcc gttatatagt 2220

aatatcttcc ccttattggc tctttccaaa tatcgccaac aattttggga taaatga 2277

<210> 18

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<212> PRT

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 18

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1 5 10 15

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Gly Thr Pro Glu Glu Arg Gln Glu Val Glu Asn Ala Arg Gln Asn Phe

35 40 45

Leu Asn Arg Gln Lys Glu Gly Phe Gln Thr Cys Gly Asp Leu Leu Met

50 55 60

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65 70 75 80

Pro Ala Arg Leu Gly Glu Lys Glu Asp Val Asp Tyr Glu Ala Val Thr

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100 105 110

Asp Gly His Trp Ala Thr Glu His Gly Gly Pro Leu Phe Phe Thr Pro

115 120 125

Pro Leu Ile Ile Ile Leu Tyr Ile Ser Gly Ala Ile Asp Thr His Leu

130 135 140

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145 150 155 160

Asn Glu Asp Gly Gly Trp Gly Phe His Ile Glu Gly His Ser Thr Met

165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

Ser Val Leu Gly Val Tyr Glu Trp Glu Gly Cys Asn Pro Ile Pro Pro

225 230 235 240

Glu Phe Trp Ile Phe Pro Glu Phe Leu Pro Phe His Pro Ala Lys Met

245 250 255

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Arg Lys Phe Gln Gly Pro Ile Thr Asp Leu Val Leu Gln Leu Arg Lys

275 280 285

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290 295 300

His Lys Cys Cys Lys Glu Asp Leu Tyr Tyr Pro His Thr Ile Val Gln

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Asp Leu Leu Trp Asp Gly Leu Tyr Tyr Leu Ser Glu Pro Leu Phe Lys

325 330 335

Phe Trp Pro Phe Thr Lys Leu Arg Glu Lys Ala Leu Lys Arg Thr Leu

340 345 350

Glu Leu Thr Arg Tyr Asn Ala Glu Glu Ser Arg Tyr Ile Thr Met Ala

355 360 365

Ser Ile Glu Lys Gly Phe Gln Met Met Cys Trp Trp Ala Ala Asn Pro

370 375 380

Asn Gly Asp Glu Phe Lys His His Leu Ala Arg Leu Pro Asp Tyr Leu

385 390 395 400

Trp Leu Ala Glu Asp Gly Met Lys Ser Gln Thr Phe Gly Ser Gln Leu

405 410 415

Trp Cys Ser Ala Phe Ala Thr Gln Ala Ile Ile Ala Ser Asn Met Pro

420 425 430

Glu Glu Tyr Gly Asp Ser Leu Lys Lys Ala His Phe Phe Leu Lys Glu

435 440 445

Ser Gln Val Lys Gln Asn Pro Lys Gly Asp Phe Thr Lys Met Cys Arg

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Pro Val Ser Asp Cys Thr Gly Glu Ala Leu Lys Cys Leu Leu Leu Leu

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Ser Gln Met Pro Glu Glu Ile Ser Gly Glu Lys Val Asp Asn Gln Arg

500 505 510

Leu Tyr Asp Ala Val Asn Phe Leu Leu His Val Gln Ser Pro Thr Thr

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Asn Ala Val Arg Tyr Leu Glu Glu Ile Gln Arg Glu Asp Gly Ser Trp

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<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

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caaaaagcat gcaaatttct gttatccaaa caacttccgg atggtggatg gggagaaagt 1980

tatctttcga gctcaaataa ggtgtatacg aatttggagg gaaatcgttc gaatttagtg 2040

catacatcat gggctttaat atcacttatt aaagcgggac aggctgaaat tgatcctaca 2100

ccaatatcta atggcgtacg gcttctcatc aattcacaaa tggaagaagg ggactttcct 2160

caacaggaaa tcacaggagt gttcatgaag aactgtaacc tcaattactc atcatatcga 2220

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<210> 20

<211> 758

<212> PRT

<213> 橡胶草（Taraxacum koksaghyz）

<400> 20

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Thr Thr Asn Asn His Val Gly Arg Gln His Trp Gln Phe Asp Pro Asp

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

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<400> 22

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<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> TkOSC-RNAi-fwd-NcoI

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<220>

<223> TkOSC-RNAi-rev-XhoI

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<223> TkLUP-rv-实时

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<212> DNA

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<223> TkOSC1-rv-实时

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<212> DNA

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<220>

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<212> DNA

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<220>

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<220>

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<212> DNA

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<220>

<223> TkOSC3-rv-实时

<400> 34

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<212> DNA

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<220>

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<212> DNA

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<220>

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<212> DNA

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<220>

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<212> DNA

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<220>

<223> TkOSC5-rv-实时

<400> 38

catagcccat gaagtgtgca ct 22

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> TkOSC6-rv-实时

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

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<400> 41

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> TkOSC7-rv-实时

<400> 42

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> TkOSC8-fw-实时

<400> 43

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<210> 44

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> TkOSC8-rv-实时

<400> 44

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<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> TkRP-fw-实时

<400> 45

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<210> 46

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<212> DNA

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<220>

<223> TkRP-rv-实时

<400> 46

ggagctttga gaagaaccaa cg 22

<210> 47

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> TkOSC hpRNAi构建体中的有义序列

<400> 47

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<210> 48

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> TkOSC1 hpRNAi构建体中的有义序列

<400> 48

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> TkOSC-RNAi表达载体

<220>

<221> misc_feature

<222> (3361)..(3361)

<223> n 是 a, c, g, 或 t

<220>

<221> misc_feature

<222> (3574)..(3574)

<223> n 是 a, c, g, 或 t

<400> 49

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ttgaaaattc ataagaaaag caaacgttac atgaattgat gaaacaatac aaagacagat 180

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<210> 50

<211> 5250

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> TkOSC1-RNAi表达载体

<220>

<221> misc_feature

<222> (3041)..(3041)

<223> n 是 a, c, g, 或 t

<220>

<221> misc_feature

<222> (3254)..(3254)

<223> n 是 a, c, g, 或 t

<400> 50

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ggtgtagagc gtggagccca gtcccgtccg ctggtggcgg ggggagacgt acacggtcga 660

ctcggccgtc cagtcgtagg cgttgcgtgc cttccagggg cccgcgtagg cgatgccggc 720

gacctcgccg tccacctcgg cgacgagcca gggatagcgc tcccgcagac ggacgaggtc 780

gtccgtccac tcctgcggtt cctgcggctc ggtacggaag ttgaccgtgc ttgtctcgat 840

gtagtggttg acgatggtgc agaccgccgg catgtccgcc tcggtggcac ggcggatgtc 900

ggccgggcgt cgttctgggc tcatcgattc gatttggtgt atcgagattg gttatgaaat 960

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