水稻矮化多分蘖突变体dmt1及其应用

摘要

本发明属于农业生物技术工程，具体涉及一种水稻矮化多分蘖基因DMT1及其在水稻育种中的应用。本发明公开了一种水稻矮化多分蘖突变体dmt1的基因，其cDNA序列如SEQ IDNO:2所述。本发明还同时公开了水稻矮化多分蘖突变体dmt1基因在水稻育种中的应用：使水稻的株高变矮，叶型改变，分蘖数增加。

说明书

技术领域

本发明属于农业生物技术工程，具体涉及一种水稻矮化多分蘖基因DMT1及其在水稻育种中的应用。

背景技术

水稻(Oryza sativa L.)作为常见的一种粮食作物，全世界50％以上的人口以水稻为主食，随着人口的不断增加、可耕地面积的逐渐减少和环境污染程度的恶化，人们对水稻产量及质量的要求也呈现出上升趋势。水稻矮化育种和推广杂交育种为标志的水稻绿色革命对世界性的粮食生产做出了巨大的贡献。水稻的株高是水稻重要的农艺性状之一，它直接影响水稻的株型和产量。分蘖是水稻与小麦等主要农作物的重要农艺性状之一，它直接影响农作物穗数的多少，从而影响单位面积的产量。一般认为，分蘖是水稻在生长发育过程中由主茎上形成的腋芽发育起来的一种特殊分枝。孟德旋等

近来通过对豌豆、拟南芥和水稻多分枝突变体的研究，揭示出独角金内酯及其生物合成的前体，作为一类新发现的植物激素，在抑制植物侧生分支生长的过程中扮演着重要的角色。DWARF14(D14)抑制水稻分蘖的发生，日本学者证明其是独角金内酯依赖型的抑制侧枝生长途径中的一个新成员。d14突变体表现出侧枝增加、植株矮化的表型，这与之前鉴定到的独角金内酯合成缺陷型突变体d10以及独角金内酯不敏感型突变体d3的表型是类似的。d10-1d14-1双突变表型不能和d10-1、d14-1的表型区分，这与D10与D14处于同一条通路上的推测是一致的。但是和d10不同，d14多侧枝的表型不能被外源独角金内酯恢复。此外，与野生型相比d14突变体中积累了较高浓度的5-脱氧独角金醇(2'-epi-5-deoxystrigol)

上文中涉及的参考文献如下：

1.Tomotsugu Arite；Mikihisa Umehara；Shinji Ishikawa；Atsushi Hanada；Masahiko Maekawa；Shinjiro Yamaguchi；Junko Kyozuka d14,a Strigolactone-Insensitive Mutant of Rice,Shows an Accelerated Outgrowth of Tillers.Plantand Cell Physiology,2009,50(8):1416-1424(Tomotsugu Arite；Mikihisa Umehara；Shinji Ishikawa；Atsushi Hanada；Masahiko Maekawa；Shinjiro Yamaguchi；JunkoKyozuka d-14，水稻的一个独脚金内酯不敏感突变体，表现出分蘖的加速生长.植物与细胞生理学2009,50(8):1416-1424)；

2.Zhongming Fang；Yuanyuan Ji；Jie Hu；Renkang Guo；Shiyong Sun；XueluWang.Strigolactones and Brassinosteroids Antagonistically Regulate theStability of the D53–OsBZR1 Complex to DetermineFC1Expression in RiceTillering Molecular Plant,2020,13(4):586-597(Zhongming Fang；Yuanyuan Ji；JieHu；Renkang Guo；Shiyong Sun；Xuelu Wang.独脚金内酯和油菜花内酯对抗性调节D53-OsBZR1复合体的稳定性以决定FC1在水稻分蘖中的表达.分子植物.Molecular Plant,2020,13(4):586-597)；

3.Fang Wang；Tongwen Han；Qingxin Song；Wenxue Ye；Xiaoguang Song；JinfangChu；Jiayang Li；Z.Jeffrey Chen The Rice Circadian Clock Regulates TillerGrowth and Panicle Development Through Strigolactone Signaling and SugarSensing The Plant Cell,2020,32(10):3124-3138(Fang Wang；Tongwen Han；QingxinSong；Wenxue Ye；Xiaoguang Song；Jinfang Chu；Jiayang Li；Z.Jeffrey Chen.水稻昼夜节律钟通过独脚金内酯信号和糖感应调节分蘖生长和穗部发育.植物细胞.The PlantCell,2020,32(10):3124-3138)。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种水稻矮化多分蘖突变体基因DMT1及其在水稻育种中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种水稻矮化多分蘖突变体dmt1，其cDNA序列如SEQ ID NO:2所述，氨基酸序列如SEQ ID NO:4所述。

本发明还同时提供了上述水稻矮化多分蘖突变体dmt1在水稻育种中的应用：使水稻的株高变矮，叶型改变，分蘖数增加。

作为本发明的水稻矮化多分蘖突变体dmt1在水稻育种中的应用的改进：使水稻的叶长、叶宽、叶面积均降低。

萘乙酸可用于促进水稻生长，增加有效分蘖，提高成穗率，促进籽粒饱满，增产显著；在本发明中，设定NAA浓度为0，0.01μg/ml，0.02μg/ml。

分蘖与植物激素有关，如生长素，独脚金内酯等，缺少相关激素可能会导致植物株高分蘖产生变化；在本发明中，与生长素和独脚金内酯相关基因为：YUC1、YUC2、YUC5、YUC7、YUC8、TAR1、TAR2、TAR3、TAR4、D3、D10、D14、D17、D27、D53、OsTB1。

本发明的水稻矮化小穗突变体dmt1是从粳稻品种中花11的EMS诱变体库中筛选得到的。从苗期一直到成熟期都表现出矮化的表型，到分蘖盛期时突变体的分蘖数可达野生型的2-3倍。本发明采用图位克隆的方法克隆了矮化小穗突变体基因DMT1。DMT1基因是由LOC_Os04g52479基因发生了单碱基插入而来的，即SEQ ID NO.1的第10171位核苷酸A的插入。Blast分析发现DMT1基因(LOC_Os04g52479)与前人报道的NAL1是等位基因。DMT1突变位点与前人报道的的NAL1等位基因的突变位点不一致，DMT1中的突变位点位于编码区的第四个外显子上的第403号碱基A的插入，并导致了蛋白质翻译提前终止，生物信息学分析显示DMT1编码一个植物特有的蛋白，其功能目前未知。

本发明的水稻矮化多分蘖突变体dmt1表型与其他nal1等位突变体(qFLW4、LSCHL4、NAL5)有所差别，主要体现在：株高变矮，叶长、叶宽、叶面积与野生型相比显著降低，并且分蘖数为野生型的2-3倍。而其他nal1等位突变体(qFLW4、LSCHL4、NAL5)表现出水稻旗叶的叶宽减小，叶绿素含量增大，光合速率提高等特征。

本发明的水稻矮化多分蘖突变体dmt1基因可以用基因工程或遗传工程方法增强作物对不良环境的抗性，如提高作物的抗倒伏能力提高产量等。DMT1基因的深入功能解读，进一步阐明了水稻矮化和分蘖遗传机制及其作用机理，为生产实践打下了基础。随着我国人口的不断增长、耕地面积持续减少形势下，高产育种一直是水稻研究的主题。研究水稻分蘖数和成穗率的遗传机制，可为创制分蘖较多、成穗率较高的育种材料或品种奠定较好的理论基础，对水稻的高产育种具有重要指导意义，也是当前超高产水稻育种关注的重点。因而，本发明对水稻的产量和品质的改良具有重要的意义。另外，本发明可利用基因工程方法改变植株的形状，这在园艺观赏植物中有重要的利用价值。

本发明采用转基因实验证明了本发明的水稻矮化多分蘖突变体dmt1基因确实有如上所述的性能。

综上，为了挖掘新的矮化相关基因，本发明从粳稻品种中花11为背景的EMS诱变体库中筛选到一份矮化多分蘖的突变体，将其命名为dmt1(dwarf and multiple tillers1)。对dmt1进行表型分析以及激素响应。本发明的DMT1基因在影响水稻株高方面和调控水稻分蘖方面具有广阔的应用前景。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1是野生型中花11与突变体dmt1的苗期表型。

图2是野生型中花11与突变体dmt1在分蘖期的表型。

图3是野生型中花11与突变体dmt1的叶长、叶宽、叶面积、SPAD值、光和色素含量对比图。

图4是DMT1基因的定位图：DMT1基因的精细定位，利用dmt1/华丝占的F

图5是DMT1基因在中花11中的峰值和DMT1基因在dmt1中的峰值。

图6是突变体dmt1地上部分和地下部分对不同浓度NAA敏感性反应。

图7是与生长素和独脚金内酯生物合成或者信号传导途径的相关基因的表达情况分析。

具体实施方式

为了更充分的解释本发明的实施，下面提供了水稻矮化多分蘖突变体dmt1基因的实施实例。这些实施实例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。其中所用的原料均有市售。

实施例1、突变体材料的获得

通过EMS化学诱变粳稻品种中花11：清水浸种8小时。然后沥出水分，倒入已经配比好的1％EMS溶液浸泡诱变8小时，期间用小木棍搅拌多次确保混合均匀。诱变完成后用流动水冲洗净有毒的EMS缓冲液，25℃催芽后播种，单株插秧单株收种，生长时期按常规大田管理。通过筛选到一份矮化多分蘖突变体dmt1。(如图1，图2)

该突变体的性状经过多代自交已稳定遗传，在大田条件下观察和比较突变体与野生型整个生长周期，发现突变体相对于野生型而言植株形态都表现出矮化的表型。所有水稻材料种植于浙江省金华市浙江师范大学生化学院试验田，常规管理。

实施例2、植株的表型分析

dmt1突变体从苗期到成熟期一直表现出矮化的表型。在成熟期，dmt1主要特点为分蘖数远多于野生型，株高相比于野生型降低43％。还发现突变体dmt1的叶片长度、宽度、叶面积都与野生型中花11有极显著差异，且叶片颜色深于野生型中花11。通过测量叶片SPAD值和叶绿素a、叶绿素b、和类胡萝卜素的含量发现dmt1的SPAD值与中花11相比有显著性升高，叶绿素b和类胡萝卜素也有显著升高(如图3)。

实施例3、群体构建和遗传分析

将突变体dmt1和常规籼稻华丝占进行正反交，F

表1、矮化多分蘖突变体dmt1的遗传分析

实施例4、DMT1基因的精细定位

利用本实验室保存的均匀分布于水稻12条染色体的SSR引物对突变体与中花11、华丝占进行多态性筛选。然后用21个dmt1/华丝占中F

①、称取0.1g的水稻叶片用液氮研磨成粉状，然后加入600μl的CTAB溶液(2％(m/V)CTAB，100mmol/L Tris-Cl，20mmol/L EDTA，1.4mol/L NaCl；pH8.0)配制的DNA提取缓冲液，65℃水浴40分钟。再加600μl的氯仿:异戊醇(24:1的体积比)，并混匀。10,000rpm离心5分钟，将上清液转移到新的离心管中。

②、在上述步骤①离心后所得的上清液中加2/3～1倍体积预冷(至4℃)的异丙醇，轻轻混匀至DNA沉淀。13,000rpm离心8分钟，倒出上清液。

③、再用70％(体积浓度)的已醇200μl洗涤上述步骤②所得的DNA沉淀物。

④、将上述洗涤后的DNA晾干并溶于100μl TE缓冲液或纯水中。

⑤、紫外分光光度法检测上述步骤④所得的DNA样品的浓度，0.7％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性。完整合适的DNA用于PCR扩增，不完整的DNA则重新提取，直至获得完整的DNA。

PCR反应体系采用10μL体系：DNA模板1μL，10×PCR缓冲液1μL，正反向引物(10μmol/L)各0.5Μl,dNTPs 1μL，rTaq酶0.2μL，加ddH

PCR产物用4％琼脂糖凝胶电泳，电泳结束后在凝胶成像仪拍照并读胶。利用上述筛选到的120对SSR引物进行DMT1基因连锁分析发现在第4号染色体的末尾附近处表现出连锁现象。在连锁标记上下游设计新的Indel标记，用这21个单株(表现出矮化多分蘖的单株)将目的基因区间锁定在分子标记M1与M6之间。在此区间再次设计新的分子标记，用678个F

表2、精细定位所用分子标记

根据水稻基因组数据库(http://rice.plantbiology.msu.edu/)数据信息，登陆号为LOC_Os04g52479(Nal1)，预示该基因为候选基因。利用覆盖该基因区域的引物分别扩增野生型和突变体的DNA，测序结果表明，dmt1基因第四个外显子的第403号插入一个碱基A，导致移码突变，引起蛋白质翻译提前终止(如图4，图5)。

水稻矮化多分蘖突变体dmt1的cDNA序列如SEQ ID NO:2所述，氨基酸序列如SEQID NO:4所述。

说明：在dmt中由于插入了一个碱基，产生了移码突变，使得第1258位产生了终止密码子，翻译提前终止。

中花11中DMT1的cDNA序列如SEQ ID NO:1所述，氨基酸序列如SEQ ID NO:3所述。

本发明所获得的dmt1基因上的碱基插入导致的蛋白质翻译提前终止造成了水稻植株变矮，分蘖明显增多的表型。如上述实施例2所述，具体表现为：株高变矮、分蘖数增加、叶长变短、叶宽变窄、叶面积变小。

而其他Nal1等位材料主要表现出叶宽变宽、分蘖数没有明显变化。

因此，本发明的dmt1基因突变体的性能与其余Nal1存在本质区别。

实施例5、dmt1对外源活性激素NAA处理的响应

将野生型和突变体的成熟种子dmt1机械去壳，用70％的乙醇溶液消毒2min，再用30％的次氯酸钠溶液消毒30min，之后接种在含0(作为CK)，0.01μg/mL，0.02μg/mL浓度的NAA培养基上，放在人工气候培养箱中培养14天后统计根长和株高并拍照。培养箱设置条件为光照14h，黑暗10h，温度为28℃。

所得结果如图6所述，根据图6可得知：中花11的茎长在0.01μg/mLNAA、0.02μg/mlNAA中表现出不同的生长趋势；而在dmt1中，不论是0.01μg/mlNAA还是0.02μg/mlNAA均表现出促进，说明dmt1茎对于NAA的敏感程度要小于中花11。同理可得在0.01μg/mlNAA的作用下中花11根的抑制程度要大于dmt1，所以中花11根的敏感程度要大于dmt1。

实施例6、与生长素和独脚金内酯相关基因的表达分析

生长素和独脚金内酯是两大重要植物生长促进型激素，有文献报道窄叶矮杆突变体与生长素相关，而水稻分蘖通常与独脚金内酯有关。为了分析突变体dmt1是否影响生长素和独脚金内酯的合成或者信号传导途径，本发明利用了qRT-PCR方法对这些途径的相关基因进行了表达分析。

RNA的提取按照总RNA提取试剂盒RNeasy Plant Mini Kit(QIAGEN)的方法步骤分离突变体和野生型分蘖期叶片样本总RNA，再按照逆转录试剂盒ReverTra

根据图7，可得知：DMT1的突变可能会引起生长素和独脚金内酯合成障碍，进而引起植物体内该激素缺乏，同时植物体通过负反馈增强激素信号传递相关途径基因的表达加强，使得植物体适应缺乏相关激素的环境。

表3、实时荧光定量PCR的引物序列

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

序列表

<110> 浙江师范大学

<120> 水稻矮化多分蘖突变体dmt1及其应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1749

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa L.)

<400> 1

atgaagcctt cggacgataa ggcgcagctc tccggtttgg cgcaatcaga agaatcgtca 60

cttgatgtgg atcaccagtc atttccttgt tctccatcaa tccaaccggt tgcttctggg 120

tgcacacaca cagagaacag cgcagcatac ttcttatggc cgacatccaa cctacagcat 180

tgtgcagccg agggacgtgc aaactacttt ggaaaccttc agaaaggatt gttgccaagg 240

caccctggtc ggttgcccaa aggtcagcaa gcaaatagct tgcttgactt gatgactata 300

agagctttcc atagcaagat attgcggcgt tttagcctcg ggacagcagt gggattccgc 360

atcaggaaag gggatctaac agatatccct gcaatccttg tctttgttgc tcgcaaggtt 420

cataagaagt ggcttaatcc agcacaatgt cttcctgcta ttcttgaggg tccaggaggt 480

gtttggtgtg atgttgatgt tgttgaattt tcgtactacg gtgcaccggc tcaaacacct 540

aaagagcaaa tgttcagtga gcttgttgat aagttatgtg gcagtgacga atgtattggt 600

tcaggctctc aggttgcaag ccatgaaact tttggtactt tgggtgcaat tgtgaaacgg 660

cgcactggca acaagcaggt tggtttcctc actaaccatc atgtcgcggt tgacttggac 720

taccctaatc agaagatgtt tcatccatta ccacccaatc ttgggcctgg cgtttatctt 780

ggagctgttg aaagagcaac ttctttcatc acagatgacg tttggtatgg aatctatgct 840

ggaacaaacc cagagacatt tgtacgagct gacggtgcat ttatcccatt tgctgatgac 900

tttgacattt ccaccgtcac gactgtagtt aggggagtcg gtgacattgg ggatgtcaag 960

gttatagatc tgcagtgtcc gctcaatagc ctcataggga ggcaagtatg caaagttggc 1020

agaagctctg gtcacacaac tgggactgtg atggcctatg cccttgagta caatgacgag 1080

aaaggaatat gcttcttcac agacatcctt gttgttggtg agaaccgcca aacatttgat 1140

ttggaaggtg atagcggaag ccttattatc ctgactagcc aagatggtga gaagccgcgt 1200

ccaattggaa ttatatgggg tggcacagca aatcgtggga ggttgaagct tacaagtgat 1260

catggccctg aaaactggac tagtggggtt gatcttggcc gtctactcga ccgtctggaa 1320

cttgatatta tcattaccaa tgaatcactc caagatgccg tgcagcagca aagatttgct 1380

ttggtggccg ccgttacctc agctgttggg gagtcttccg gggtgcctgt cgccatcccg 1440

gaagagaaga tcgaagagat cttcgagcca ttggggatcc aaatccagca actgcctcgc 1500

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gaagagcacc agttcatctc aaacttcgtc ggtatgtcgc ccgtgcgcga cgaccaagac 1620

gctccgagga gcatcaccaa cctgaacaac ccctccgagg aagaactcgc catgtcgctc 1680

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gagaaatga 1749

<210> 2

<211> 1750

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa L.)

<400> 2

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cttgatgtgg atcaccagtc atttccttgt tctccatcaa tccaaccggt tgcttctggg 120

tgcacacaca cagagaacag cgcagcatac ttcttatggc cgacatccaa cctacagcat 180

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caccctggtc ggttgcccaa aggtcagcaa gcaaatagct tgcttgactt gatgactata 300

agagctttcc atagcaagat attgcggcgt tttagcctcg ggacagcagt gggattccgc 360

atcaggaaag gggatctaac agatatccct gcaatccttg tctttgttgc tcgcaaggtt 420

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gtttggtgtg atgttgatgt tgttgaattt tcgtactacg gtgcaccggc tcaaacacct 540

aaagagcaaa tgttcagtga gcttgttgat aagttatgtg gcagtgacga atgtattggt 600

tcaggctctc aggttgcaag ccatgaaact tttggtactt tgggtgcaat tgtgaaacgg 660

cgcactggca acaagcaggt tggtttcctc actaaccatc atgtcgcggt tgacttggac 720

taccctaatc agaagatgtt tcatccatta ccacccaatc ttgggcctgg cgtttatctt 780

ggagctgttg aaagagcaac ttctttcatc acagatgacg tttggtatgg aatctatgct 840

ggaacaaacc cagagacatt tgtacgagct gacggtgcat ttatcccatt tgctgatgac 900

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gttatagatc tgcagtgtcc gctcaatagc ctcataggga ggcaagtatg caaagttggc 1020

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ggaagagcac cagttcatct caaacttcgt cggtatgtcg cccgtgcgcg acgaccaaga 1620

cgctccgagg agcatcacca acctgaacaa cccctccgag gaagaactcg ccatgtcgct 1680

ccatctgggt gaccgagagc ccaagcggct ccgttcggac tccggatcaa gccttgacct 1740

ggagaaatga 1750

<210> 3

<211> 582

<212> PRT

<213> 水稻(Oryza sativa L.)

<400> 3

Met Lys Pro Ser Asp Asp Lys Ala Gln Leu Ser Gly Leu Ala Gln Ser

1 5 10 15

Glu Glu Ser Ser Leu Asp Val Asp His Gln Ser Phe Pro Cys Ser Pro

20 25 30

Ser Ile Gln Pro Val Ala Ser Gly Cys Thr His Thr Glu Asn Ser Ala

35 40 45

Ala Tyr Phe Leu Trp Pro Thr Ser Asn Leu Gln His Cys Ala Ala Glu

50 55 60

Gly Arg Ala Asn Tyr Phe Gly Asn Leu Gln Lys Gly Leu Leu Pro Arg

65 70 75 80

His Pro Gly Arg Leu Pro Lys Gly Gln Gln Ala Asn Ser Leu Leu Asp

85 90 95

Leu Met Thr Ile Arg Ala Phe His Ser Lys Ile Leu Arg Arg Phe Ser

100 105 110

Leu Gly Thr Ala Val Gly Phe Arg Ile Arg Lys Gly Asp Leu Thr Asp

115 120 125

Ile Pro Ala Ile Leu Val Phe Val Ala Arg Lys Val His Lys Lys Trp

130 135 140

Leu Asn Pro Ala Gln Cys Leu Pro Ala Ile Leu Glu Gly Pro Gly Gly

145 150 155 160

Val Trp Cys Asp Val Asp Val Val Glu Phe Ser Tyr Tyr Gly Ala Pro

165 170 175

Ala Gln Thr Pro Lys Glu Gln Met Phe Ser Glu Leu Val Asp Lys Leu

180 185 190

Cys Gly Ser Asp Glu Cys Ile Gly Ser Gly Ser Gln Val Ala Ser His

195 200 205

Glu Thr Phe Gly Thr Leu Gly Ala Ile Val Lys Arg Arg Thr Gly Asn

210 215 220

Lys Gln Val Gly Phe Leu Thr Asn His His Val Ala Val Asp Leu Asp

225 230 235 240

Tyr Pro Asn Gln Lys Met Phe His Pro Leu Pro Pro Asn Leu Gly Pro

245 250 255

Gly Val Tyr Leu Gly Ala Val Glu Arg Ala Thr Ser Phe Ile Thr Asp

260 265 270

Asp Val Trp Tyr Gly Ile Tyr Ala Gly Thr Asn Pro Glu Thr Phe Val

275 280 285

Arg Ala Asp Gly Ala Phe Ile Pro Phe Ala Asp Asp Phe Asp Ile Ser

290 295 300

Thr Val Thr Thr Val Val Arg Gly Val Gly Asp Ile Gly Asp Val Lys

305 310 315 320

Val Ile Asp Leu Gln Cys Pro Leu Asn Ser Leu Ile Gly Arg Gln Val

325 330 335

Cys Lys Val Gly Arg Ser Ser Gly His Thr Thr Gly Thr Val Met Ala

340 345 350

Tyr Ala Leu Glu Tyr Asn Asp Glu Lys Gly Ile Cys Phe Phe Thr Asp

355 360 365

Ile Leu Val Val Gly Glu Asn Arg Gln Thr Phe Asp Leu Glu Gly Asp

370 375 380

Ser Gly Ser Leu Ile Ile Leu Thr Ser Gln Asp Gly Glu Lys Pro Arg

385 390 395 400

Pro Ile Gly Ile Ile Trp Gly Gly Thr Ala Asn Arg Gly Arg Leu Lys

405 410 415

Leu Thr Ser Asp His Gly Pro Glu Asn Trp Thr Ser Gly Val Asp Leu

420 425 430

Gly Arg Leu Leu Asp Arg Leu Glu Leu Asp Ile Ile Ile Thr Asn Glu

435 440 445

Ser Leu Gln Asp Ala Val Gln Gln Gln Arg Phe Ala Leu Val Ala Ala

450 455 460

Val Thr Ser Ala Val Gly Glu Ser Ser Gly Val Pro Val Ala Ile Pro

465 470 475 480

Glu Glu Lys Ile Glu Glu Ile Phe Glu Pro Leu Gly Ile Gln Ile Gln

485 490 495

Gln Leu Pro Arg His Asp Val Ala Ala Ser Gly Thr Glu Gly Glu Glu

500 505 510

Ala Ser Asn Thr Val Val Asn Val Glu Glu His Gln Phe Ile Ser Asn

515 520 525

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530 535 540

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His Leu Gly Asp Arg Glu Pro Lys Arg Leu Arg Ser Asp Ser Gly Ser

565 570 575

Ser Leu Asp Leu Glu Lys

580

<210> 4

<211> 419

<212> PRT

<213> 水稻(Oryza sativa L.)

<400> 4

Met Lys Pro Ser Asp Asp Lys Ala Gln Leu Ser Gly Leu Ala Gln Ser

1 5 10 15

Glu Glu Ser Ser Leu Asp Val Asp His Gln Ser Phe Pro Cys Ser Pro

20 25 30

Ser Ile Gln Pro Val Ala Ser Gly Cys Thr His Thr Glu Asn Ser Ala

35 40 45

Ala Tyr Phe Leu Trp Pro Thr Ser Asn Leu Gln His Cys Ala Ala Glu

50 55 60

Gly Arg Ala Asn Tyr Phe Gly Asn Leu Gln Lys Gly Leu Leu Pro Arg

65 70 75 80

His Pro Gly Arg Leu Pro Lys Gly Gln Gln Ala Asn Ser Leu Leu Asp

85 90 95

Leu Met Thr Ile Arg Ala Phe His Ser Lys Ile Leu Arg Arg Phe Ser

100 105 110

Leu Gly Thr Ala Val Gly Phe Arg Ile Arg Lys Gly Asp Leu Thr Asp

115 120 125

Ile Pro Ala Ile Leu Val Phe Val Ala Arg Lys Val His Lys Lys Trp

130 135 140

Leu Asn Pro Ala Gln Cys Leu Pro Ala Ile Leu Glu Gly Pro Gly Gly

145 150 155 160

Val Trp Cys Asp Val Asp Val Val Glu Phe Ser Tyr Tyr Gly Ala Pro

165 170 175

Ala Gln Thr Pro Lys Glu Gln Met Phe Ser Glu Leu Val Asp Lys Leu

180 185 190

Cys Gly Ser Asp Glu Cys Ile Gly Ser Gly Ser Gln Val Ala Ser His

195 200 205

Glu Thr Phe Gly Thr Leu Gly Ala Ile Val Lys Arg Arg Thr Gly Asn

210 215 220

Lys Gln Val Gly Phe Leu Thr Asn His His Val Ala Val Asp Leu Asp

225 230 235 240

Tyr Pro Asn Gln Lys Met Phe His Pro Leu Pro Pro Asn Leu Gly Pro

245 250 255

Gly Val Tyr Leu Gly Ala Val Glu Arg Ala Thr Ser Phe Ile Thr Asp

260 265 270

Asp Val Trp Tyr Gly Ile Tyr Ala Gly Thr Asn Pro Glu Thr Phe Val

275 280 285

Arg Ala Asp Gly Ala Phe Ile Pro Phe Ala Asp Asp Phe Asp Ile Ser

290 295 300

Thr Val Thr Thr Val Val Arg Gly Val Gly Asp Ile Gly Asp Val Lys

305 310 315 320

Val Ile Asp Leu Gln Cys Pro Leu Asn Ser Leu Ile Gly Arg Gln Val

325 330 335

Cys Lys Val Gly Arg Ser Ser Gly His Thr Thr Gly Thr Val Met Ala

340 345 350

Tyr Ala Leu Glu Tyr Asn Asp Glu Lys Gly Ile Cys Phe Phe Thr Asp

355 360 365

Ile Leu Val Val Gly Glu Asn Arg Gln Thr Phe Asp Leu Glu Gly Asp

370 375 380

Ser Gly Ser Leu Ile Ile Leu Thr Ser Gln Asp Gly Glu Lys Pro Arg

385 390 395 400

Pro Ile Gly Ile Ile Trp Gly Gly Thr Ala Asn Arg Gly Arg Leu Lys

405 410 415

Leu Thr Lys