国兰原生质体瞬时表达系统及其构建方法与应用

摘要

本发明公开了一种国兰原生质体制备及基因瞬时表达的方法及其应用。本发明通过将国兰的花瓣或叶片酶解，得到的原生质体加入W5溶液中处理，MMG溶液重悬原生质体，得到纯化的原生质体与含有目的基因的重组质粒混匀，PEG‑CaCl2溶液处理，W5溶液终止反应，加入WI溶液避光培育，得到可检测基因瞬时表达水平的原生质体。本发明的方法得到的原生质体率和活性率最高可达3.32±2.21(107/g FW)和94.66±7.28(％)，瞬时转化效率最高可达76.06±4.51(％)，可运用于花器官特征决定相关基因CsAP3和CsAP3的亚细胞定位和BiFC蛋白互作研究，为国兰功能基因组学研究提供了新方法。