一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物及制备方法

摘要

本发明公开了一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物及制备方法，包括红细胞质控物、白细胞质控物、口腔上皮细胞质控物、白色念珠菌质控物和乳酸杆菌质控物，对获取的红细胞、白细胞分别进行抗凝全血，并进行分离纯化后，将所述红细胞进行固化保存，得到所述红细胞质控物和所述白细胞质控物；对获取的口腔上皮细胞、白色念珠菌和乳酸杆菌分别进行传代培养，并经过离心稀释后，对稀释得到的上皮细胞悬液进行固定和保存，得到所述口腔上皮细胞质控物、所述白色念珠菌质控物和所述乳酸杆菌质控物，除了红细胞和白细胞外，另外囊括了上皮细胞和乳酸杆菌质控物，提高对阴道分泌物有形成分的检测的准确性。

说明书

技术领域

本发明涉及阴道分泌物有形成分分析技术领域，尤其涉及一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物及制备方法。

背景技术

阴道分泌物检验是现代医学阴道、产科等临床检验的常规项目之一，在疾病的诊断中起着十分重要的作用。

为了减少检验人员对阴道分泌物有形成分的镜检的负荷、改善检验流程、减少人为因素引起的误差、推动阴道分泌物有形成分检查的标准化，自动化的有形成分分析仪陆续上市。随着自动化仪器的不断应用，如何使仪器发挥最大的效用，为临床检验室提供快速、准确、及时的检验，提高工作效率，提高仪器的质控工作显得非常重要。然而，目前阴道分泌物有形成分质控仍缺乏比较全面的质控品，基本上只有红细胞和白细胞的质控品。并且现有技术对红包细胞的分离纯化和固化工艺比较复杂，且存在细胞聚集、细胞膨胀和细胞形态皱缩等情况，使得质控物的产品质量受到很大的限制，导致对阴道分泌物有形成分的检测的准确性降低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物及制备方法，提高对阴道分泌物有形成分的检测的准确性。

为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物的制备方法，所述用于阴道分泌物有形成分检测的质控物包括红细胞质控物、白细胞质控物、口腔上皮细胞质控物、白色念珠菌质控物和乳酸杆菌质控物，包括以下步骤：

对获取的红细胞进行抗凝全血，并进行分离纯化后，将所述红细胞进行固化保存，得到所述红细胞质控物；

对抗凝全血后的白细胞进行分离纯化，并将镜检合格的包细胞悬液进行固定和保存，得到所述白细胞质控物；

对获取的口腔上皮细胞进行传代培养，并经过离心稀释后，对稀释得到的上皮细胞悬液进行固定和保存，得到所述口腔上皮细胞质控物；

对获取的白色念珠菌进行培养、离心和镜检，并将稀释得到的白色念珠菌悬液进行固定和保存，得到所述白色念珠菌质控物；

对获取的乳酸杆菌进行培养、离心和洗涤，并将稀释得到的乳酸杆菌悬液进行固定和保存，得到所述乳酸杆菌质控物。

其中，对获取的红细胞进行抗凝全血，并进行分离纯化后，将所述红细胞进行固化保存，得到所述红细胞质控物，包括：

向获取的红细胞样本中加入溶血剂进行24小时的抗凝全血，并将所述抗凝全血离心后，对获取的红细胞层进行3-6次的稀释和洗涤，直至镜检合格后，得到红细胞悬液；

将所述红细胞悬液进行固化保存，得到所述红细胞质控物。

其中，将所述红细胞悬液进行固化保存，得到所述红细胞质控物，包括：

将体积比为6:1的固定液和所述红细胞悬液在36.5℃、50转/min的条件下，固定24小时，并利用生理盐水对除去所述固定液后的所述红细胞悬液洗涤三次，完成第一次固定；

重新获取所述固定液，按照所述第一次固定的方法，再次进行固定和洗涤，并向完成固定后的所述红细胞悬液中加入保存液，在2-8℃下进行保存。

其中，对获取的口腔上皮细胞进行传代培养，并经过离心稀释后，对稀释得到的上皮细胞悬液进行固定和保存，得到所述口腔上皮细胞质控物，包括：

获取口腔上皮细胞，并传代培养至三代，然后进行3-5次的离心、洗涤，直至镜检合格后，利用生理盐水进行稀释，得到上皮细胞悬液；

对所述上皮细胞悬液进行固定和保存，得到所述口腔上皮细胞质控物。

其中，对所述上皮细胞悬液进行固定和保存，得到所述口腔上皮细胞质控物，包括：

将体积比为6:1的固定液和所述上皮细胞悬液在36.5℃、50转/min的条件下，进行两次固定和洗涤；

向完成固定后的所述上皮细胞悬液中加入保存液，在2-8℃下进行保存。

其中，将体积比为6:1的固定液和所述上皮细胞悬液在36.5℃、50转/min的条件下，进行两次固定和洗涤，包括：

将体积比为6:1的固定液和所述红细胞悬液在36.5℃、50转/min的条件下，固定24小时，并利用生理盐水对除去所述固定液后的所述上皮细胞悬液洗涤三次，完成第一次固定；

重新获取所述固定液，并按照体积比为6:1的配比，与完成第一次固定后的所述上皮细胞悬液在36.5℃、50转/min的条件下，固定6小时；

利用生理盐水对除去所述固定液后的所述上皮细胞悬液洗涤三次，完成所述上皮细胞悬液的第二次固定。

第二方面，本发明提供一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物，如第一方面所述的一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物的制备方法应用于一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物，所述用于阴道分泌物有形成分检测的质控物包括红细胞质控物、白细胞质控物、口腔上皮细胞质控物、白色念珠菌质控物和乳酸杆菌质控物。

其中，所述用于阴道分泌物有形成分检测的质控物还包括溶血剂、固定液和保存液，所述溶血剂为1-2g/L枸缘酸钠、0.3-2.7％曲拉通-100与7％NaCl的混合液。

本发明的一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物及制备方法，所述用于阴道分泌物有形成分检测的质控物包括红细胞质控物、白细胞质控物、口腔上皮细胞质控物、白色念珠菌质控物和乳酸杆菌质控物，对获取的红细胞进行抗凝全血，并进行分离纯化后，将所述红细胞进行固化保存，得到所述红细胞质控物；对抗凝全血后的白细胞进行分离纯化，并将镜检合格的包细胞悬液进行固定和保存，得到所述白细胞质控物；对获取的口腔上皮细胞进行传代培养，并经过离心稀释后，对稀释得到的上皮细胞悬液进行固定和保存，得到所述口腔上皮细胞质控物；对获取的白色念珠菌进行培养、离心和镜检，并将稀释得到的白色念珠菌悬液进行固定和保存，得到所述白色念珠菌质控物；对获取的乳酸杆菌进行培养、离心和洗涤，并将稀释得到的乳酸杆菌悬液进行固定和保存，得到所述乳酸杆菌质控物，除了红细胞和白细胞外，另外囊括了上皮细胞和乳酸杆菌质控物，扩大了质控物种类，产品质量得到很大的提升，提高对阴道分泌物有形成分的检测的准确性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明提供的一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物的制备方法的步骤示意图。

图2是本发明提供的对红细胞湿法质控显微镜下的图片。

图3是本发明提供的真菌和上皮细胞湿法质控显微镜下的图片。

图4是本发明提供的白细胞和上皮细胞湿法质控显微镜下的图片。

图5是本发明提供的真菌孢子、芽生孢子和菌丝湿法质控显微镜下的图片。

图6是本发明提供的上皮细胞干法染色质控显微镜下的图片。

图7是本发明提供的白细胞和红细胞干法染色质控显微镜下的图片。

图8是本发明提供的真菌孢子和芽生孢子干法染色质控显微镜下的图片。

图9是本发明提供的乳酸杆菌干法染色质控显微镜下的图片。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。

请参阅图1，本发明提供一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物的制备方法，所述用于阴道分泌物有形成分检测的质控物包括红细胞质控物、白细胞质控物、口腔上皮细胞质控物、白色念珠菌质控物和乳酸杆菌质控物，包括以下步骤：

S101、对获取的红细胞进行抗凝全血，并进行分离纯化后，将所述红细胞进行固化保存，得到所述红细胞质控物。

具体的，红细胞样本的选择：选择动物牛血，红细胞选择无破裂、无皱缩、无细胞核的双面凹的圆饼状细胞，选择牛的枸缘酸钠抗凝全血，24小时内为佳。

红细胞的分离纯化：将抗凝全血离心，离心后，全血分为三层：从上往下依次是血浆、白细胞和红细胞层，最后留取红细胞层，加入4-7倍生理盐水进行稀释，形成细胞悬液，继续离心洗涤，只留下红细胞。重复3-6次，镜检，确认只有纯净的红细胞，用生理盐水稀释，得到红细胞悬液。

红细胞固定：将红细胞悬液加入6倍体积的细胞固定液，36.5℃恒温，50转/min低速振摇24小时，除去固定液，用生理盐水洗涤3次完成第一次固定，然后，重新获取并加入固定液，继续36.5℃恒温，50转/min低速振摇24小时，用生理盐水洗涤3次，加入细胞存储液，最终浓度为50-1800个/μL，2-8℃保存备用。

S102、对抗凝全血后的白细胞进行分离纯化，并将镜检合格的包细胞悬液进行固定和保存，得到所述白细胞质控物。

具体的，溶血剂组分为：0.1mol/L的磷酸盐缓冲液；表面活性剂为苯氧基乙醇，PH值为6.1-7.0，渗透压为230-370mmol/L。

白细胞质控物的制备过程如下：

白细胞样本的选择：向获取的白细胞样本中加入溶血剂进行24小时的抗凝全血，包括：

白细胞选择动物牛血，有细胞核，球形的细胞，选择枸缘酸钠抗凝全血，24小时为佳；

白细胞的分离纯化：将所述抗凝全血离心后，利用体积比为6:1的生理盐水对获取的白细胞层进行3-5次的稀释，并加入三倍体积的溶血剂在37℃下，进行1-2次的温育、离心，直至镜检合格后，得到白细胞悬液，具体为：

将抗凝全血离心，离心后的全血从上往下分为3层：血浆、白细胞和红细胞层，留取白细胞层，加入6倍体积的生理盐水，形成白细胞悬液；离心洗涤3-5次，稀释后，加入3倍体积的溶血剂，37℃，温育10min，离心，重复1-2次，去除多余的红细胞，镜检无红细胞，且白细胞不破算为准，获得白细胞悬液。

白细胞固定：将体积比为6:1的固定液和所述白细胞悬液在36.5℃、50转/min的条件下，进行两次固定和洗涤；并向完成固定后的所述上皮细胞悬液中加入保存液，在2-8℃下进行保存，具体为：

将白细胞悬液加入6倍体积的细胞固定液，36.5℃恒温，50转/min低速振摇24小时，除去固定液，用生理盐水洗涤3次，加入固定液，继续36.5℃恒温，50转/min低速振摇6小时，用生理盐水洗涤3次，加入细胞存储液，最终浓度为50-1800个/μL，2-8℃保存备用。

S103、对获取的口腔上皮细胞进行传代培养，并经过离心稀释后，对稀释得到的上皮细胞悬液进行固定和保存，得到所述口腔上皮细胞质控物。

具体的，从人的口腔上轻轻用牙签刮取口腔上皮细胞，进行传代培养，进行传代培养3代后，留取备用。

将培养传代的口腔上皮细胞离心后，采用生理盐水洗涤，离心，反复3-5次，镜检，直到上皮细胞洗净。采用生理盐水稀释，制成上皮细胞悬液。

口腔上皮细胞固定：将口腔上皮细胞悬液加入6倍体积的细胞固定液，36.5℃恒温，50转/min低速振摇24小时，除去固定液，用生理盐水洗涤3次，完成第一次固定；加入固定液，继续36.5℃恒温，50转/min低速振摇6小时，用生理盐水洗涤3次，完成第二次固定；加入细胞存储液，最终浓度为50-500个/μL，2-8℃保存备用。

S104、对获取的白色念珠菌进行培养、离心和镜检，并将稀释得到的白色念珠菌悬液进行固定和保存，得到所述白色念珠菌质控物。

具体的，获取白色念珠菌，并传代培养至三代，然后进行3-5次的离心、洗涤，直至镜检合格后，利用生理盐水进行稀释，得到白色念珠菌悬液，包括：

购买白色念珠菌，进行传代培养，进行传代培养3代后，留取备用。

将培养传代的白色念珠菌离心后，采用生理盐水洗涤，离心，反复3-5次，镜检，直到白色念珠菌洗净。采用生理盐水稀释，制成白色念珠菌悬液。

将体积比为6:1的固定液和所述白色念珠菌悬液在36.5℃、50转/min的条件下，进行两次固定和洗涤；向完成固定后的所述白色念珠菌悬液中加入保存液，在2-8℃下进行保存，得到所述白色念珠菌质控物，包括：

白色念珠菌固定：将白色念珠菌悬液加入6倍体积的细胞固定液，36.5℃恒温，50转/min低速振摇24小时，除去固定液，用生理盐水洗涤3次，加入固定液，继续36.5℃恒温，50转/min低速振摇6小时，用生理盐水洗涤3次，加入细胞存储液，最终浓度为50-500个/μL，2-8℃保存备用。

S105、对获取的乳酸杆菌进行培养、离心和洗涤，并将稀释得到的乳酸杆菌悬液进行固定和保存，得到所述乳酸杆菌质控物。

具体的，获取乳酸杆菌，并传代培养至三代，然后进行3-5次的离心、洗涤，直至镜检合格后，利用生理盐水进行稀释，得到乳酸杆菌悬液，包括：

购买乳酸杆菌，进行传代培养，进行传代培养3代后，留取备用。

将培养传代的乳酸杆菌离心后，采用生理盐水洗涤，离心，反复3-5次，镜检，直到乳酸杆菌洗净。采用生理盐水稀释，制成乳酸杆菌悬液。

将体积比为6:1的固定液和所述乳酸杆菌悬液在36.5℃、50转/min的条件下，进行两次固定和洗涤；向完成固定后的所述乳酸杆菌悬液中加入保存液，在2-8℃下进行保存，得到所述乳酸杆菌质控物

乳酸杆菌固定：将乳酸杆菌悬液加入6倍体积的细胞固定液，36.5℃恒温，50转/min低速振摇24小时，除去固定液，用生理盐水洗涤3次，加入固定液，继续36.5℃恒温，50转/min低速振摇6小时，用生理盐水洗涤3次，加入细胞存储液，最终浓度为50-500个/μL，2-8℃保存备用。

本发明提供一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物，所述的一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物的制备方法应用于一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物，所述用于阴道分泌物有形成分检测的质控物包括红细胞质控物、白细胞质控物、口腔上皮细胞质控物、白色念珠菌质控物和乳酸杆菌质控物。

在本实施方式中，所述用于阴道分泌物有形成分检测的质控物还包括溶血剂、固定液和保存液，所述溶血剂为1-2g/L枸缘酸钠、0.3-2.7％曲拉通-100和7％NaCl的混合液，细胞保存液组分为：细胞保存液的渗透压为300±40mOsm/kg，甲醛2.5％、0.05％P300、8g/L牛血清蛋白、氯化钠0.07％、3.9～7.8mmol/l葡萄糖、3.2％-3.8％枸缘酸钠等为基础配方配置而成。本专利中所使用的的固定液组分为：1.5％-3.5％的甲醛。本专利除了红细胞和白细胞外，另外囊括了上皮细胞和乳酸杆菌质控物，更加丰富阴道分泌物有形质控物。阴道分泌物有形成分红细胞、白细胞、上皮细胞和乳酸杆菌质控物对检测系统的质量控制和检测结果的准确性，起着至关重要的作用。

本发明不仅在湿法镜检上，质控的形态保持完整，如图2至图5所示，其中，图2为红细胞、图3为真菌和上皮细胞(真菌形态较小，上皮细胞形态较大)、图4为白细胞和上皮细胞(白细胞形态较小，上皮细胞形态较大)、图5为真菌孢子、芽生孢子和菌丝(真菌孢子基本单个存在，未进行繁殖；芽生孢子，繁殖期，常成双或成堆出现。菌丝是真菌发展到最旺盛时期，呈现出长条状)；干法染色镜检上，细胞核与细胞质区分明显，阴道分泌物有形成分能更清晰的区分，如图6至图9所示，其中，图6是上皮细胞、图7是白细胞和红细胞(红细胞偏小，颜色浅蓝色，白细胞偏大，深蓝色)、图8是真菌孢子和芽生孢子(真菌孢子基本单个存在，未进行繁殖；芽生孢子，繁殖期，常成双或成堆出现)、图9是乳酸杆菌。能满足妇科分泌物有形成分湿法和干法染色镜检的质量控制。

有益效果

1.解决了有形质控物存在细胞聚集、细胞膨胀和细胞形态皱缩等情况，使得质控物的产品质量得到很大的提升。

2.本专利不仅包括红细胞和白细胞质控物质，还包括上皮细胞、白色念珠菌和乳酸杆菌质控物质，扩大了质控物种类。

本发明的一种用于阴道分泌物有形成分检测的质控物及制备方法，所述用于阴道分泌物有形成分检测的质控物包括红细胞质控物、白细胞质控物、口腔上皮细胞质控物、白色念珠菌质控物和乳酸杆菌质控物，对获取的红细胞进行抗凝全血，并进行分离纯化后，将所述红细胞进行固化保存，得到所述红细胞质控物；对抗凝全血后的白细胞进行分离纯化，并将镜检合格的包细胞悬液进行固定和保存，得到所述白细胞质控物；对获取的口腔上皮细胞进行传代培养，并经过离心稀释后，对稀释得到的上皮细胞悬液进行固定和保存，得到所述口腔上皮细胞质控物；对获取的白色念珠菌进行培养、离心和镜检，并将稀释得到的白色念珠菌悬液进行固定和保存，得到所述白色念珠菌质控物；对获取的乳酸杆菌进行培养、离心和洗涤，并将稀释得到的乳酸杆菌悬液进行固定和保存，得到所述乳酸杆菌质控物，除了红细胞和白细胞外，另外囊括了上皮细胞和乳酸杆菌质控物，扩大了质控物种类，产品质量得到很大的提升，提高对阴道分泌物有形成分的检测的准确性。

以上所揭露的仅为本发明一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。