使用抗淀粉样蛋白单克隆抗体根除细菌生物膜

摘要

本发明的特征在于包含抗淀粉样蛋白抗体的组合物和使用所述组合物治疗微生物感染和治疗或预防微生物生物膜的方法。

说明书

相关申请的引证

本申请要求2018年5月25日提交的美国临时申请号62/676,390的优先权，该申请以其全部内容通过引证并入本文。

有关联邦政府资助的研究或开发的声明

本发明是在国立卫生研究院(NIH)提供的AI132996的政府支持下进行的。政府对本发明具有一定的权利。

背景技术

细菌生物膜具有显著相关性并且通常在医学环境中是有害的。细菌生物膜保护在致密的胞外基质内，其高度耐受抗生素、抗微生物剂和通过先天免疫细胞产生的应答(Thurlow等人,2011,J Immunol,186(11):6585-96)。根除生物膜的治疗策略是有限的。当前消除生物膜相关感染的治疗策略是通过抗生素的使用。与浮游细菌相比，需要100至1000倍大的浓度的抗生素来抵抗生物膜相关感染(Anwar和Costerton,1990,AntimicrobAgents Chemother,34(9):1666-71,Moskowitz等人,2004,J Clin Microbiol,42(5):1915-22)。在生物膜内，细菌缓慢生长或者持续使靶向细胞生物学或细菌复制的大部分抗生素无效(Keren等人,2004,FEMS Microbiol Lett,230(1):13-8；Brown等人,1988,JAntimicrob Chemother,22(6):777-80；Stewart,2002,Int J Med Microbiol,292(2):107-13；Lewis,2001,Antimicrob Agents Chemother,45(4):999-1007)。由于大于65％的感染是由细菌生物膜造成的(Larsen等人,2007,Environ Microbiol,9(12):3077-90；Costerton等人,1999,Science,284(5418):1318-22)，因此破坏细菌生物膜的新的处理是必需的。生物膜基质的破环将提高生物膜对天然免疫系统以及抗生素治疗两者的敏感性，因此促进生物膜的分解。

肠生物膜的主要蛋白组分是淀粉样蛋白淀粉样纤维(curli)。淀粉样蛋白淀粉样纤维是生物膜内所表达的鉴定最充分的细菌淀粉样蛋白(Hung等人,2013,MBio,4(5):e00645-13)。通过肠杆菌科细菌特异性表达淀粉样纤维，尽管约40％的细菌菌种作为生物膜的主要组分产生淀粉样蛋白(Larsen等人,2007,Environ Microbiol,9(12):3077-90)。通过其中β-折叠(β-sheet，β-片层)垂直于纤维轴的其标志性的β折叠结构(beta sheetstructure，β片层结构，β片状结构)的限定(Sunde等人,1997,J Mol Biol,273(3):729-39；Nelson等人,2005,Nature,435(7043):773-8；Sunde等人,1997,Adv Protein Chem,50:123-59)，通过双向淀粉样纤维特异性基因csgBAC和csgDEFG操纵子表达淀粉样纤维(Chapman等人,2002,Science,295(5556):851-5)。淀粉样纤维的产生是高度调节的过程。当在应激条件下生长时，csg基因的激活导致主要淀粉样纤维蛋白(以及其它辅助蛋白)CsgA和CsgB的产生(Chapman等人,2002,Science,295(5556):851-5；Zhou等人,2012,Methods Mol Biol,849:303-20)。借助于其它辅助蛋白，作为单体单元产生CsgA，并且它分泌至胞外，在此它纤维化为成熟的淀粉样纤维淀粉样蛋白原纤维(Robinson等人,2006,MolMicrobiol,59(3):870-81)。CsgB辅助CsgA单体成核并将CsgA连接至细胞表面(White等人,2001,J Mol Biol,311(4):735-49；Hammer等人,2007,Proc Natl Acad Sci U S A.,104(30):12494-9)。

淀粉样纤维在肠生物膜内具有多种功能。淀粉样纤维用作允许成熟的三维生物膜形成的骨架(Reisner等人,2003,Mol Microbiol,48(4):933-46；Costerton等人,1995,Annu Rev Microbiol,49:711-45)。通过形成筛网状网络，淀粉样纤维掩盖细菌，从而产生保护性包膜。通过单个细菌表达的淀粉样纤维促进生物膜内多个细菌的附着并且辅助表面连接(Kikuchi等人,2005,Microbiol Immunol,49(9):875-84)。鼠伤寒沙门氏菌(S.Typhimurium)的其它组成生物膜组分，如纤维素的产生是淀粉样纤维产生依赖性的。淀粉样蛋白高度耐受蛋白水解和化学降解。淀粉样蛋白，如淀粉样纤维(curli)需要暴露至90％的甲酸或六氟异丙醇(HFIP)以使原纤维解聚成单体亚基(Zhou等人,2013,MethodsMol Biol,966:53-75)。在不产生淀粉样纤维的情况下，鼠伤寒沙门氏菌生物膜是不稳定的并且不能形成成熟的生物膜(Kikuchi等人,2005,Microbiol Immunol,49(9):875-84)。

细菌生物膜通常与感染相关并且难以根除。此外，尚无用于清除在留置医疗装置(导管、心脏瓣膜、人造关节等)上形成的细菌生物膜的处理，从而需要以对患者来说高成本和发病率来除去和/或替换外来物。生物膜还是慢性细菌伤口感染的重要组分。

因此，在本领域中需要用于防止生物膜形成以及用于毁坏所形成的生物膜以用于治疗和预防微生物感染的方法。本发明满足了这种未满足的需要。

发明内容

在一个实施方式中，本发明涉及包含治疗性抗体的组合物，其中抗体对结合至淀粉样纤维表位特异并且进一步其中淀粉样纤维表位包括与一种或多种异源淀粉样蛋白质的抗体结合位点具有同源性的序列。

在一个实施方式中，抗体抑制一种或多种异源淀粉样蛋白质的纤维化。在实施方式中，抗体抑制淀粉样蛋白-β的纤维化。

在一个实施方式中，抗体防止生物膜形成或改变生物膜结构。在一个实施方式中，抗体对于降低生物膜质量(biofilm mass，生物膜量)有效。在一个实施方式中，生物膜质量与革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌或它们的组合有关。

在一个实施方式中，抗体为ALZ.3H3、ALZ.2C10、ALZ.4G1或ALZ.4A6。

在一个实施方式中，抗体抑制淀粉样蛋白-β纤维化并且防止生物膜形成或改变生物膜结构。在一个实施方式中，抗体是ALZ.3H3抗体。在一个实施方式中，ALZ.3H3抗体包括如SEQ ID NO:2中所示的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:35中所示的轻链氨基酸序列中的至少一种。在一个实施方式中，ALZ.3H3抗体包括如SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列所编码的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:34中所示的核苷酸序列所编码的轻链氨基酸序列中的至少一种。

在一个实施方式中，抗体防止生物膜形成或改变生物膜结构。在一个实施方式中，抗体是ALZ.4G1抗体。在一个实施方式中，ALZ.4G1抗体包括如SEQ ID NO:61中所示的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:63中所示的轻链氨基酸序列中的至少一种。在一个实施方式中，ALZ.4G1抗体包括如SEQ ID NO:60中所示的核苷酸序列所编码的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:62中所示的核苷酸序列所编码的轻链氨基酸序列中的至少一种。

在一个实施方式中，抗体抑制淀粉样蛋白-β的纤维化。在一个实施方式中，抗体是ALZ.4A6抗体。在一个实施方式中，ALZ.4A6抗体包括如SEQ ID NO:57中所示的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:59中所示的轻链氨基酸序列中的至少一种。在一个实施方式中，ALZ.4A6抗体包括如SEQ ID NO:56中所示的核苷酸序列所编码的重链氨基酸序列和如SEQID NO:58中所示的核苷酸序列所编码的轻链氨基酸序列中的至少一种。

在一个实施方式中，组合物用于向医疗装置表面施加。

在一个实施方式中，组合物包含抗生素。

在一个实施方式中，组合物包含一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。

在一个实施方式中，制剂是处于乳膏、洗剂、软膏、水凝胶、胶体、凝胶、泡沫、油、乳剂、混悬剂、擦拭剂(wipe)、海绵(sponge，纱布)、溶液、乳液、糊剂、贴片、纱布(pledget)、拭子、敷料、喷雾剂或衬垫(pad，药棉块)形式的局部制剂(topical formulation)。

在一个实施方式中，本发明涉及使微生物去定殖(decolonizing)的方法，其包括将微生物与包含治疗性抗体的组合物接触，其中抗体对结合至淀粉样纤维表位特异并且进一步其中淀粉样纤维表位包含与一种或多种异源淀粉样蛋白质的抗体结合位点具有同源性的序列。在一个实施方式中，抗体抑制一种或多种异源淀粉样蛋白质的纤维化，防止生物膜形成，改变生物膜结构或它们的任意组合。在一个实施方式中，抗体是ALZ.3H3、ALZ.4G1、ALZ.2C10或ALZ.4A6。

在一个实施方式中，抗体抑制淀粉样蛋白-β纤维化并且防止生物膜形成或改变生物膜结构。在一个实施方式中，抗体是ALZ.3H3抗体。在一个实施方式中，ALZ.3H3抗体包含如SEQ ID NO:2中所示的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:35中所示的轻链氨基酸序列中的至少一种。在一个实施方式中，ALZ.3H3抗体包含如SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列所编码的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:34中所示的核苷酸序列所编码的轻链氨基酸序列中的至少一种。

在一个实施方式中，抗体防止生物膜形成或改变生物膜结构。在一个实施方式中，抗体是ALZ.4G1抗体。在一个实施方式中，ALZ.4G1抗体包含如SEQ ID NO:61中所示的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:63中所示的轻链氨基酸序列中的至少一种。在一个实施方式中，ALZ.4G1抗体包含如SEQ ID NO:60中所示的核苷酸序列所编码的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:62中所示的核苷酸序列所编码的轻链氨基酸序列中的至少一种。

在一个实施方式中，抗体抑制淀粉样蛋白-β纤维化。在一个实施方式中，抗体是ALZ.4A6抗体。在一个实施方式中，ALZ.4A6抗体包含如SEQ ID NO:57中所示的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:59中所示的轻链氨基酸序列中的至少一种。在一个实施方式中，ALZ.4A6抗体包含如SEQ ID NO:56中所示的核苷酸序列所编码的重链氨基酸序列和如SEQID NO:58中所示的核苷酸序列所编码的轻链氨基酸序列中的至少一种。

在一个实施方式中，本发明涉及破坏或毁坏或抑制或减少微生物的生物膜形成的方法，其包括将微生物与包含治疗性抗体的组合物接触，其中抗体对结合至淀粉样纤维表位特异并且进一步其中淀粉样纤维表位包含与一种或多种异源淀粉样蛋白质的抗体结合位点具有同源性的序列。在一个实施方式中，抗体抑制一种或多种异源淀粉样蛋白质的纤维化，防止生物膜形成，改变生物膜结构或它们的任意组合。在一个实施方式中，微生物是细菌。

在一个实施方式中，本发明涉及治疗受试者中微生物感染的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的包含治疗性抗体的组合物，其中抗体对结合至淀粉样纤维表位特异并且进一步其中淀粉样纤维表位包含与一种或多种异源淀粉样蛋白质的抗体结合位点具有同源性的序列。在一个实施方式中，抗体抑制一种或多种异源淀粉样蛋白质的纤维化，防止生物膜形成，改变生物膜结构或它们的任意组合。在一个实施方式中，抗体是ALZ.3H3、ALZ.4G1、ALZ.2C10或ALZ.4A6。

在一个实施方式中，微生物感染是细菌感染。在一个实施方式中，细菌感染的特征在于细菌定殖(colonization，集群)。在一个实施方式中，细菌感染的特征在于生物膜形成。

在一个实施方式中，微生物感染是局部感染。在一个实施方式中，局部感染为伤口、溃疡或病变。

附图说明

图1A至图1C显示了表明单克隆抗体ALZ.3H3毁坏鼠伤寒沙门氏菌生物膜结构和完整性的示例性实验结果。图1A显示了表明通过不同处理改变了鼠伤寒沙门氏菌生物膜结构的示例性实验结果。图1B显示了用于定量生物膜中颗粒的示例性图像。图1C显示了表明图1A中的生物膜(距表面大于20μM)的散布部分中的颗粒数目的示例性图。

图2A至图2C显示了表明单克隆抗体ALZ.3H3改变预先建立的鼠伤寒沙门氏菌生物膜的生物膜完整性的示例性实验结果。图2A显示了表明实验设计的示意图。图2B显示了表明通过每种处理的鼠伤寒沙门氏菌生物膜结构的示例性实验结果。图2C显示了表明图2B中的生物膜(距表面大于20μM)的散布部分中的颗粒数目的示例性图。

图3显示了ALZ.3H3的结晶紫测定剂量曲线。

图4A和图4B显示了鼠伤寒沙门氏菌生物膜的分析。图4A显示了在存在(10ug/ml、25ug/ml、50ug/ml、250ug/ml、500ug/ml)或不存在(未处理的)3H3的情况下生长的鼠伤寒沙门氏菌的生物膜的共聚焦分析。用syto9(对于细菌的绿色核酸染色)和淀粉样蛋白染料刚果红(红色淀粉样纤维)对生物膜染色。以63x，使用Leica TCS共聚焦显微镜对生物膜成像。使用ImageJ 3D查看器软件创建生物膜3D重构。比例尺表示50um。图4B显示了在存在(10ug/ml、25ug/ml、50ug/ml、250ug/ml、500ug/ml)或不存在(未处理的)3H3的情况下生长的鼠伤寒沙门氏菌的生物膜厚度(um)。使用Leica TCS共聚焦显微镜软件测量厚度。

图5A至图5B显示了表明ALZ.3H3降低淀粉样纤维的纤维化的示例性实验结果。图5A显示了表明泛-淀粉样蛋白(pan-amyloid)抗体在硫磺素T测定中预防纤维化的示例性实验结果。图5A显示了表明在存在泛-淀粉样蛋白抗体的情况下，单体自结合所需的迟延时间的示例性实验结果。

图6显示了鼠伤寒沙门氏菌(STM)和大肠杆菌UTI89的结晶紫测定。将STM或UTI89在不存在或存在3H3(250ug/ml、125ug/ml、50ug/ml、25ug/ml、10ug/ml、1ug/ml)以及0.5mg/ml对照A6或抗-登革热抗体的情况下，在26C，在无菌96孔板中生长72小时。还作为阴性对照使鼠伤寒沙门氏菌淀粉样纤维突变体(csgBA)和UTI89淀粉样纤维突变体(csgBA)生长。

图7显示了表明ALZ.3H3和抗生素治疗之间的协同作用降低了鼠伤寒沙门氏菌体外生物膜形成的示例性实验结果。

图8显示了在有或没有3H3和氨比西林的情况下生长的每生物膜的集落形成单位。在不存在或存在3H3(250ug/ml、125ug/ml、50ug/ml、25ug/ml、10ug/ml、1ug/ml)下以及在使用0.5mg/ml对照A6抗体的情况下，在无菌玻璃盖玻片上，在无菌24孔培养皿中，在26C下生长72小时的鼠伤寒沙门氏菌(STM)或大肠杆菌UTI89的生物膜。还作为阴性对照使鼠伤寒沙门氏菌淀粉样纤维突变体(csgBA)和UTI89淀粉样纤维突变体(csgBA)生长。在选择条件下，将生物膜与30ug/ml氨比西林(Amp)在26C温育另外24小时。将用作生物膜在其上生长的表面的无菌玻璃盖玻片置于含有3ml无菌PBS的无菌15ml圆锥管中。使用ThermoFisher超声波粉碎仪，以设置4，将生物膜超声处理10秒。通过在无菌PBS中以1:10连续稀释，并在琼脂平板上点涂板来对细菌计数。

图9显示了在体外导管测定中表明ALZ.3H3处理降低了鼠伤寒沙门氏菌的生物膜形成的示例性实验结果。

图10显示了表明在体内导管测定中，ALZ.3H3处理降低了鼠伤寒沙门氏菌生物膜形成，并且ALZ.3H3和抗生素治疗之间的协同作用进一步降低了鼠伤寒沙门氏菌的生物膜形成的示例性实验结果。

图11显示了通过ALZ.3H3和氨比西林治疗，在鼠伤寒沙门氏菌导管插入的情况下，小鼠的存活百分比。

图12显示了通过Aβ42所产生的淀粉样蛋白β衍生可溶性配体(ADDL)，也称为球聚体的考马斯亮蓝染色的SDS:PAGE凝胶。

图13显示了通过ELISA评价的，抗淀粉样蛋白抗体与Aβ42ADDL和Aβ42单体的结合。

图14显示了结合至聚集的胰岛淀粉样肽IAPP与分离自AD脑匀浆的τ(tau)双股螺旋形细丝(τPHF(TAU PHF))的表面等离子体共振(SPR)分析。对于IAPP，在本研究中使用的抗体浓度为110nM，并且对于τ-PHF为66.7nM。

图15显示了4G1和3H3 mAb与τ40HEK-293(τ40(tau40))和HEK-293细胞系(293)的结合的示例性图像。以60X，以仅人mAb(左列)，仅τ-5(TAU-5)(中间列)或合并图像显示图像。

图16显示了表明单独的淀粉样蛋白β低聚物或在存在抗淀粉样蛋白mAb，3H3、4G1和4A6的情况下的Aβ42的纤维化的示例性实验结果。

具体实施方式

本发明部分基于以下发现：具有泛-淀粉样蛋白结合活性的抗体具有通过防止淀粉样蛋白纤维化而抑制生物膜形成的能力。因此，本发明提供了通过使用泛-淀粉样蛋白抗体靶向生物膜的淀粉样蛋白组分来防止生物膜形成的组合物和方法。在一个实施方式中，本发明提供了使用通过靶向淀粉样纤维来靶向生物膜的抗淀粉样蛋白单克隆抗体的组合物和方法。在一个方面，本发明涉及抗淀粉样蛋白抗体的使用，其中抗体对淀粉样蛋白β折叠结构特异。在一个实施方式中，抗体是ALZ.3H3或ALZ.4G1。

在一个实施方式中，本发明提供了靶向新型抗原，如淀粉样纤维并借此改变治疗深部和异物/生物膜相关感染的范式(paradigm，范例)的组合物和方法。在一个实施方式中，本发明通过靶向与现有耐药性表型非交叉抗性的抗原，为多重耐药性细菌的治疗提供了改善。

在一个实施方式中，使用可以对抗多种革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌生物膜的人单克隆抗体，本发明提供了使得能够处理生物膜产生细菌的新型治疗性靶标。在一个实施方式中，抗体可以从留置医疗装置除去生物膜。

在一个实施方式中，本发明涉及治疗被微生物物种感染的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用至少一种抗体，其中至少一种抗体特异性结合至淀粉样蛋白β折叠结构。在一个实施方式中，所述方法还包括抗生素的施用。在一个实施方式中，本发明的抗体(例如，抗淀粉样蛋白单克隆抗体)可以与抗生素组合以通过靶向淀粉样纤维来减少生物膜质量。

在另一个方面，本发明涉及处理、减少或防止生物膜形成的方法，其中组合物包含至少一种抗体，其中至少一种抗体特异性结合至淀粉样蛋白β折叠结构。在一个实施方式中，所述方法还包括抗生素的施用。

在一个实施方式中，本发明提供了用本发明的组合物涂覆医疗装置(例如，导管)表面以减少生物膜质量的方法。

在一个实施方式中，本发明还提供了本发明的组合物与靶向胞外基质其它组分的试剂(如DNA酶)组合的使用。在一个实施方式中，本发明的组合物可以用于处理与过量DNA有关的生物膜基质，如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginasa)生物膜。

除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管可以在本发明的实践或测试中使用与本文所述的那些类似或等价的任何方法和材料，但是描述了优选的方法和材料。

出于解释本说明书的目的，以下定义将适用并且在任何适当的时候，以单数使用的术语还将包括复数，反之亦然。

如本文所使用的，以下术语中的每一个具有在该部分中与之有关的含义。还应理解本文所使用的术语仅出于描述具体实施方式的目的，并且其不意欲进行限制。

冠词“一个”和“一种”在本文中用于表示一个或大于一个(即至少一个)所述冠词的语法对象。举例来说，“一个元素”表示一个元素或大于一个元素。

当表示可测量值，如量、时距等时，如本文所使用的“约”表示涵盖了与给定值±20％或±10％，更优选地±5％，甚至更优选地±1％并且更优选地±0.1％的变化，照此变化适于实施所公开的方法。

术语“类似物”或“功能类似物”是指多肽的相关修饰形式，其中已进行了至少一种氨基酸替换、缺失或添加，从而所述类似物保留了与未修饰的形式基本相同的体内和/或体外生物活性。

如本文所使用的术语“抗体”是指特异地结合抗原的免疫球蛋白分子。抗体可以是来源于天然来源或来源于重组来源的完整免疫球蛋白，并且可以是完整免疫球蛋白的免疫活性部分。本发明中的抗体可以以多种形式存在，其包括例如多克隆抗体、单克隆抗体、Fv、Fab和F(ab)2以及单链抗体和人源化抗体(Harlow等人,1999,In:Using Antibodies:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,NY；Harlow等人,1989,In:Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor,New York；Houston等人,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；Bird等人,1988,Science 242:423-426)。

将如本文所使用的术语“抗原”或“Ag”定义为引起免疫应答的分子。这种免疫应答可以包括抗体产生，或者特异性免疫-感受态细胞的激活，或者两者。技术人员将理解任何大分子，包括几乎所有蛋白或肽可以用作抗原。此外，抗原可以来源于重组或基因组DNA。技术人员将理解任何DNA包含编码引起免疫应答的蛋白的核苷酸序列或部分核苷酸序列，并因此编码如在本文中使用的术语“抗原”。此外，本领域技术人员将理解抗原不需要仅通过基因的全长核苷酸序列所编码。显而易见地，本发明包括但不限于多于一个基因的部分核苷酸序列的使用，并且这些核苷酸序列以不同组合布置以引起所期望的免疫应答。此外，技术人员将理解完全不需要通过“基因”编码抗原。显而易见地，可以合成产生抗原，或者抗原可以来源于生物样品。

如本文所使用的，术语“抗微生物的”是指具有杀死或抑制微生物生长的能力，所述微生物包括但不限于细菌、病毒、酵母、真菌和原生动物，或者降低微生物感染的严重程度的能力。本发明的抗微生物化合物或组合物是可以用于清除或灭菌的化合物或组合物，或者它们可以在疾病和感染的治疗中使用。应用可以包括体外和体内抗微生物使用两者。“应用”抗微生物组合物可以包括向人或动物受试者施用组合物。

术语“试剂”包括任何物质、代谢产物、分子、元素、化合物或它们的组合。它包括但不限于，例如，蛋白、寡肽、有机小分子、聚糖、多糖、多核苷酸等。它可以是天然产物、合成化合物、化学化合物或者两种或更多种物质的组合。除非另作说明，否则术语“试剂”、“物质”和“化合物”可以互换使用。此外，“测试试剂”或“候选试剂”通常是用于在本发明的测定中使用的受试者试剂。

术语“结合”是指由于例如共价、静电、疏水性、离子和/或氢键相互作用，至少两个分子之间的直接结合。

如本文所使用的，术语“生物膜”是指对其中散布了微生物和/或形成集落的生物或非生物表面的基质包围的微生物堆积。生物膜通常由多糖及其它大分子组成。生物膜形成代表了允许细胞在有害环境中存活的生长保护模式。

如本文所使用的，术语“生物膜形成”旨在包括包含在生物膜结构内的微生物集落的形成、生长和修饰，以及生物膜结构的多糖基质的合成和维持。在基质中不分泌多糖但是包含允许细菌形成生物膜结构的蛋白的蛋白基生物膜的形成也在该术语的范围内。

“CDR”的定义为抗体的互补决定区氨基酸序列，它是免疫球蛋白重链和轻链的高变区。参见，例如，Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第4版,U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987)。在免疫球蛋白的可变部分中存在三个重链和三个轻链CDR(或者CDR区)。因此，如本文所使用的“CDR”是指所有三个重链CDR，或者所有三个轻链CDR(或者如果有的话，所有重链和所有轻链CDR两者)。抗体的结构和蛋白折叠可以表示将其它残基考虑为抗原结合区的一部分并且技术人员也将这样理解。参见，例如，Chothia等人,(1989)Conformations ofimmunoglobulin hypervariable regions；Nature 342,p 877-883。

“嵌合抗体”是指一类工程抗体，其包含来源于供体抗体的天然存在的可变区(轻链和重链)以及来源于受体抗体的轻链和重链恒定区。

“接触”是指其中使两个或更多个分子或者相同分子或不同分子的两个或更多个组分物理靠近，从而它们能够经历相互作用的过程。术语“接触”包括但不限于浸渍、复合(compounding)、混合、整合、涂覆、摩擦、涂装、喷雾、浸没、辊压、涂片和浸入。

如本文所使用的，“组合疗法”表示与另一种试剂结合施用第一试剂。“与…结合”是指除另一种治疗方式以外的一种治疗方式的施用。照此，“与…结合”是指在向个体递送另一种治疗方式之前、期间或之后，施用一种治疗方式。这些组合被认为是单一治疗方案或方式的一部分。

如本文所使用的，术语“同时施用”表示在组合疗法中第一疗法的施用和第二疗法的施用在时间上彼此重叠。

“疾病”是动物的健康状态，其中动物不可以维持体内平衡，并且其中如果疾病未得到改善，则动物的健康持续变差。相反，动物中的“病症”是其中动物能够维持体内平衡，但是其中动物的健康状态不如不存在病症的情况下的状态良好的健康状态。如果保持不治疗，则病症不必需导致动物的健康状态进一步降低。

如本文所使用的“有效量”是指提供治疗或预防益处的量。

将如本文所使用的术语“表达”定义为通过其启动子驱动的特定核苷酸序列的转录和/或翻译。

“表达载体”是指包含重组多核苷酸的载体，所述重组多核苷酸包含可操作性地连接至要表达的核苷酸序列的表达控制序列。表达载体包含对于表达来说足够的顺式作用元件；其它用于表达的元件可以通过宿主细胞或体外表达系统提供。表达载体包括本领域中已知的所有那些载体，如粘粒、质粒(例如，裸质粒或包含在脂质体中的质粒)和病毒(例如，慢病毒、反转录病毒、腺病毒和腺病毒相关病毒)，所述载体引入了重组多核苷酸。

如本文所使用的，术语“重链抗体”或“多个重链抗体”包含通过用肽免疫和后续血清分离，或者通过编码这些抗体的核酸序列的克隆和表达，来源于骆驼科动物的免疫球蛋白分子。术语“重链抗体”或“多个重链抗体”还涵盖了分离自患有重链病的动物或者通过来自动物的VH(可变重链免疫球蛋白)基因的克隆和表达制备的免疫球蛋白分子。

“同源的”是指两个多肽之间或者两个核酸分子之间的序列相似性或序列同一性。当两个所比较的序列的两者中的位置被相同碱基或氨基酸单体亚基占据，例如，如果两个DNA分子中的每一个中的位置被腺嘌呤占据，则分子在该位置是同源的。两条序列之间的同源性百分比是两条序列共有的匹配或同源位置数目除以所比较的位置数目再乘以100。例如，如果两条序列的10个位置中有6个匹配或同源，则两条序列是60％同源的。举例来说，DNA序列ATTGCC和TATGGC共有50％的同源性。一般地，当两条序列比对时进行比较以提供最大同源性。

“人源化抗体”是指一类工程抗体，其具有来源于非人供体免疫球蛋白的CDR，分子剩余的免疫球蛋白-来源部分来源于一种(或多种)的人免疫球蛋白。另外，可以改变框架支持残基以保持结合亲合力(参见，例如，1989,Queen等人,Proc.Natl.Acad Sci USA,86:10029-10032；1991,Hodgson等人,Bio/Technology,9:421)。适合的人受体抗体可以是通过与供体抗体的核苷酸和氨基酸序列的同源性选自常规数据库，例如，KABAT数据库、LosAlamos数据库和Swiss蛋白数据库的抗体。其特征为与供体抗体的框架区的同源性(基于氨基酸)的人抗体可以适合于提供用于供体CDR插入的重链恒定区和/或重链可变框架区。可以以类似的方式选择能够提供轻链恒定或可变框架区的适合的受体抗体。应注意受体抗体重链和轻链不需要来源于相同受体抗体。现有技术描述了产生这些人源化抗体的几种方法(参见，例如，EP-A-0239400和EP-A-054951)。

将如本文所使用的术语“免疫球蛋白”或“Ig”定义为用作抗体的一类蛋白。B细胞表达的抗体有时被称为BCR(B细胞受体)或抗原受体。在该类蛋白中所包括的5个成员为IgA、IgG、IgM、IgD和IgE。IgA是存在于身体分泌物，如唾液、泪液、乳汁、胃肠分泌物以及呼吸和泌尿生殖道粘液分泌物中的第一抗体。IgG是最常见的循环抗体。IgM是在大部分受试者中的初次免疫应答中所产生的主要免疫球蛋白。它是凝集、补体结合和其它抗体反应中最有效的免疫球蛋白，并且在防御细菌和病毒中是重要的。IgD是不具有已知的抗体功能，但是可以用作抗原受体的免疫球蛋白。IgE是一旦暴露于过敏原，通过导致从肥大细胞和嗜碱细胞中释放介体来介导速发过敏性的免疫球蛋白。

如本文所使用的，术语“免疫应答”包括T细胞介导的和/或B细胞介导的免疫应答。示例性的免疫应答包括T细胞应答，例如，细胞因子产生和细胞的细胞毒性，以及B细胞应答，例如，抗体产生。另外，术语免疫应答包括间接受T细胞激活影响的免疫应答，例如，抗体产生(体液应答)和细胞因子应答性细胞的激活，例如，巨噬细胞。参与免疫应答的免疫细胞包括淋巴细胞，如B细胞和T细胞(CD4+、CD8+、Th1和Th2细胞)；抗原递呈细胞(例如，专职性抗原递呈细胞，如树突状细胞、巨噬细胞、B淋巴细胞、郎格罕氏细胞和非专职性抗原递呈细胞，如角化细胞、内皮细胞、星形胶质细胞、成纤维细胞、少突神经胶质细胞)；自然杀伤细胞；骨髓细胞，如巨噬细胞、嗜曙红细胞、肥大细胞、嗜碱细胞和粒性白细胞。

如本文所使用的，术语“微生物(microbial organism)”或“微生物(microbe)”或“微生物的”或“微生物(microorganism)”是指原核的圆形、螺旋形或杆状单细胞、多细胞或非细胞(acelled)微生物域(细菌)，其可以缺少细胞壁，或者为革兰氏阳性或革兰氏阴性或其变化(即分枝杆菌属)，如果它们具有细胞壁，则微生物通常聚集成集落或通过鞭毛运动，通常生活在土壤、水、有机物或者植物和动物体内，它们通常在营养方式上是自养的、腐生的或寄生的，并且它们以其生物化学作用和病原性著称。该术语旨在涵盖具有微小尺寸的原核或真核细胞或生物，并且包括所有物种的细菌、病毒、古细菌和真细菌以及真核微生物，如酵母和真菌。该术语还包括可以培养用于生物化学物质的生产的任何物种的细胞培养物。在一个非限制性实例中，可以通过计算微生物数目的log减少来测量微生物的活性。

如本文所使用的，术语“微生物定殖”是指相同类型的微生物的紧密群体组的形成，如当微生物细胞开始复制时出现的集落。微生物的定殖可以或可以不引起疾病症状。去定殖是指所存在的微生物数目的减少。当微生物完全去定殖时，微生物被根除并且是不可检测的。

如本文所使用的“突变”是指核酸或多肽序列相对于参考序列(其优选地为天然存在的正常或“野生型”序列)的变化，并且包括移位、缺失、插入和替换/点突变。如本文所使用的“突变体”是指包含突变的核酸或蛋白。

免疫原性组合物的“肠胃外”施用包括例如皮下(s.c.)、静脉内(i.v.)、肌内(i.m.)或皮内(i.d.)注射或输注技术。

术语“患者”、“受试者”、“个体”等在本文中是可互换使用的并且表示无论体外还是原位，对本文所述的方法起反应的任何动物或其细胞。在某些非限制性实施方式中，患者、受试者或个体是人。

如本文所使用的，术语“药学上可接受的”是指材料，如载体或稀释剂，其不消除化合物的生物活性或性质并且是相对无毒的，即材料可以施用于个体而不会导致不希望的生物作用或以有害方式与其中包含它的组合物的任何组分相互作用。

如本文所使用的，语言“药学上可接受的盐”是指从药学上可接受的无毒的酸，包括无机酸、有机酸、其溶剂化物、水合物或笼形物所制备的所施用的化合物的盐。这些无机酸的实例为盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、乙酸、六氟磷酸、柠檬酸、葡萄糖酸、苯甲酸、丙酸、丁酸、磺基水杨酸、马来酸、月桂酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、水甘草酸、双羟萘酸、对甲苯磺酸和甲磺酸。适当的有机酸可以选自例如有机酸的脂肪酸、芳香酸、羧酸和磺酸类，它们的实例为甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、樟脑磺酸、柠檬酸、富马酸、葡萄糖酸、羟乙基磺酸、乳酸、苹果酸、粘液酸、酒石酸、对甲苯磺酸、乙醇酸、葡萄糖醛酸、马来酸、糠酸、谷氨酸、苯甲酸、邻氨基苯甲酸、水杨酸、苯乙酸、扁桃酸、扑酸(双羟萘酸)、甲磺酸、乙磺酸、泛酸、苯磺酸(苯磺酸酯)、硬脂酸、磺胺酸、藻朊酸、半乳糖醛酸等。此外，通过非限制性实例，药学上可接受的盐包括碱土金属盐(例如钙或镁)、碱金属盐(例如，钠相关的或钾)和铵盐。

如本文所使用的，术语“药学上可接受的载体”是指参与在患者内或向患者携带或输送在本发明的范围内有用的化合物，从而使其可以发挥其预期作用的药学上可接受的材料、组合物或载体，如液体或固体填充剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或包封材料。通常，将这些构建体从一个器官或身体部分携带或输送至另一个器官或身体部分。每种载体必须在与制剂的其它成分(包括在本发明内有用的化合物)相容并且对患者无害的意义上是“可接受的”。可以用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉末黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油剂，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和十二烷酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；海藻酸；无热原的水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲液；和在药物制剂中使用的其它无毒相容物质。如本文所使用的，“药学上可接受的载体”还包括与在本发明的范围内有用的化合物的活性相容且对患者是生理学可接受的任何和所有涂层、抗细菌和抗真菌剂以及吸收延迟剂等。还可以将补充性活性化合物引入组合物中。“药学上可接受的载体”还可以包括在本发明的范围内有用的化合物的药学上可接受的盐。可以包括在本发明的实践中所使用的药物组合物中的其它成分在本领域中是已知的并且描述于例如Remington's Pharmaceutical Sciences(Genaro主编，MackPublishing Co.,1985,Easton,PA)，其通过引证并入本文。

如本文所使用的，术语“盐”涵盖了游离酸或游离碱的加成盐，它们是在本发明的范围内有用的化合物。可以从无机酸或从有机酸制备适合的酸加成盐。无机酸的实例包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、碳酸、硫酸、磷酸、高氯酸和四氟硼酸。适当的有机酸可以选自脂族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、羧基和磺酸基类有机酸、其实例包括甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、葡萄糖醛酸、马来酸、富马酸、丙酮酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸、邻氨基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、苯乙酸、扁桃酸、扑酸(双羟萘酸)、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、泛酸、三氟甲磺酸、2-羟乙基磺酸、对甲苯磺酸、磺胺酸、环己基氨基磺酸、硬脂酸、藻朊酸、β-羟基丁酸、水杨酸、半乳糖二酸和半乳糖醛酸。在本发明内有用的化合物的适合的碱加成盐包括例如金属盐，其包括碱金属、碱土金属和过渡金属盐，诸如，例如锂、钙、镁、钾、铵、钠和锌盐。可接受的碱加成盐还包括由碱性胺制成的有机盐，诸如，例如N,N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基-葡糖胺)和普鲁卡因。可以通过传统方法，通过将例如适当的酸或碱与相应的游离碱反应，从相应游离碱化合物制备所有这些盐。

如本文所使用的，术语“预防(prevent)”或“预防(prevention)”表示如果尚未发生，则病症或疾病不发生，或者如果病症或疾病已发生，则不再发生另外的病症或疾病。还考虑了预防与病症或疾病有关的一些或全部症状的能力。

对于抗体来说，如本文所使用的术语“特异性结合”表示识别特异性抗原，但是基本不识别或结合样品中的其它分子的抗体。例如，特异性结合至来自一个物种的抗原的抗体还可以结合至来自一个或多个物种的抗原。但是，这种物种间的反应性本身不改变抗体作为特异性的分类。在另一个实例中，特异性结合至抗原的抗体还可以结合至抗原不同的等位基因形式。然而，这种交叉反应性本身不改变抗体作为特异性的分类。在一些情况下，术语“特异性结合”或“特异性地结合”可以与抗体、蛋白或肽与第二化学物质的相互作用结合用于表示相互作用取决于化学物质上特定结构(例如，抗原决定簇或表位)的存在；例如，通常，抗体识别并结合至特异性蛋白结构，而不是蛋白。如果抗体对表位“X”特异，则在含有标记的“X”和抗体的反应中，含有表位X的分子(或者游离的未标记的A)的存在将降低结合至抗体的标记的X的量。

如本文所使用的术语“治疗性的”表示治疗和/或预防。通过抑制、减少、缓解或根除疾病状态来获得治疗效果。

如本文所使用的，术语本发明的化合物的“治疗有效量”是指将引起受试者的生物或医学反应，或者改善症状，减缓或延迟疾病发展，或者预防疾病等的本发明的化合物的量。在一个实施方式中，该术语是指抑制或减少微生物定殖或感染的量。在一个实施方式中，该术语是指抑制或减少细菌感染，或者预防或破坏细菌生物膜的形成的量。当应用于单独施用的单个活性成分时，该术语是指该单独的成分。当应用于组合时，该术语是指导致治疗效果的活性成分的合并的量，无论是组合、顺序或同时施用。

如本文所使用的，在一个实施方式中，术语任何疾病或病症的“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指改善疾病或病症(即终止或减少疾病或其至少一种临床症状的发生)。在另一个实施方式中，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指至少一种身体参数的改善，其可以不是患者可辩别的。在另一个实施方式中，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指疾病或病症的物理(例如，可辩别症状的稳定)或者生理学(例如，身体参数的稳定)或者两者的调节。在另一个实施方式中，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指预防或延迟疾病或病症的出现或发展。术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”还表示一种或多种症状的严重程度降低约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约100％。

如本文所使用的，术语“局部施用”是指通过使制剂直接接触受试者的表面或局部区域，对受试者的递送。最常见的局部递送形式是向皮肤递送，但是本文所公开的组合物还可以直接应用于身体的其它表面，例如，眼、粘膜、体腔表面或内部表面。如上所述，最常见的局部递送是向皮肤递送。该术语涵盖了几种施用途径，包括但不限于局部和透皮施用。这些施用形式通常包括对皮肤渗透屏障的渗透和向靶组织或层的有效递送。局部施用可以用作渗透表皮和真皮并最终实现组合物的全身递送的方式。

如本文所使用的，术语“局部制剂”(同义地，“局部组合物”)在本文中用于表示设计用于向对其有需要的受试者的患病区域局部或局部性应用的药物制剂，并且包括以下这些剂量形式，如凝胶、乳膏、软膏、乳液、混悬剂、溶液、滴剂、洗剂、涂剂、阴道栓剂、灌洗剂、栓剂、锭剂、喷雾剂、海绵、膜或者泡沫。优选地，局部制剂处于乳膏、凝胶或软膏的形式。

根据本发明的多肽的“变体”可以是(i)其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸残基(优选地，保守氨基酸残基)替换的变体，并且该替换的氨基酸残基可以或可以不是通过遗传密码编码的氨基酸残基，(ii)其中存在一个或多个修饰的氨基酸残基，例如，通过取代基团的连接所修饰的残基的变体，(iii)其中多肽是本发明的多肽的可变剪接变体的变体，(iv)多肽的片段和/或(v)其中多肽与另一个多肽，如前导或分泌序列或者用于纯化(例如，His标签)或者用于检测(例如，Sv5表位标签)的序列融合的变体。片段包括通过原始序列的蛋白水解切割(包括多位点蛋白水解)所产生的多肽。变体可以翻译后修饰或者化学修饰。根据本文的教导内容，这些变体被认为在本领域技术人员的范围内。

范围：在整个公开中，本发明的多个方面可以以范围格式存在。应理解以范围格式的描述仅是为了方便和简洁，并且不应将其视为对本发明范围的刻板限制。因此，对范围的描述应认为具有具体公开的所有可能的子范围以及所述范围内的各个数值。例如，对范围，如1至6的描述应认为具有具体公开的子范围，如1至3，1至4，1至5，2至4，2至6，3至6等，以及该范围内的各个数值，例如，1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。这是适用的，而无需考虑范围的宽度。

本发明部分基于对使用可以对抗多种革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌生物膜并且甚至可以从留置医疗装置上除去生物膜的人单克隆抗体能够处理生物膜产生细菌的新型治疗性靶标的鉴别。本发明使得能够产生靶向新型抗原的新型mAb药物，并且将(1)改变治疗深部和异物/生物膜相关感染的范式，(2)通过靶向与现有耐药性表型非交叉抗性的抗原，改善多重耐药性细菌的治疗，和(3)有效抵抗多种细菌。

本发明提供了具有提高的抗菌效力并且对于抑制、降低或治疗微生物感染，如细菌感染，和/或对于使微生物去定殖，和/或对于破坏、毁坏、抑制或降低细菌生物膜形成有效的组合物。本文描述了以下意外和未预见的发现：具有泛-淀粉样蛋白结合活性的抗体毁坏了来自多个微生物物种的生物膜。此外，当用于处理微生物时，本发明的抗淀粉样蛋白抗体和抗生素治疗的组合显示出对微生物定殖或感染或生物膜形成的协同作用。如本文所使用的，术语“协同”是指通过将化合物和/或试剂组合所获得的效果大于通过单独添加每种化合物所获得的效果。本发明的组合治疗已显示出对于以其常规剂量，剂量施用组合治疗的一种或其它组分可实现的协同作用，如通过例如反应程度、反应持续时间、反应速率、稳定速率、稳定持续时间、减少或清除感染的时间、根除微生物的时间所测量的。例如，本发明的组合治疗的效果是协同的，因为组合治疗在治疗上优于通过单独一种组分可达到的效果或者单独起作用的组合组分的加合效果。优良效果可以是对微生物抗药性改善的降低，这是通过组合治疗使微生物根除并变得不能检测所达到的程度。另外，例如，本发明的组合治疗的效果是协同的，因为它杀死微生物和清除感染的时间更短。另外，例如，本发明的组合治疗的效果是协同的，因为组合治疗提供了比使用单独一种组分的那些更广谱的抗微生物活性。另外，例如，本发明的组合治疗的效果是协同的，因为以其常规剂量施用本发明中所述的组合物中的组分之一并且以降低的剂量施用其它组分，并且治疗效果相当于剂量施用常规的量的组合治疗的组分可达到的效果，所述治疗效果如通过例如杀死和/或抑制微生物，如细菌的生长的程度，杀死和/或抑制微生物，如细菌的生长的时间，或者破坏或抑制微生物集落的时间，或者毁坏或抑制或减少生物膜形成或生长的时间所测量的。

本发明的组合物可以治疗、预防和/或保护与细菌活性有关的任何疾病、病症或病况。在某些实施方式中，组合物可以治疗、预防和/或保护细菌感染。在某些实施方式中，组合物可以治疗、预防和/或保护细菌生物膜形成。在某些实施方式中，本发明提供了使用可以对抗多种革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌生物膜的人单克隆抗体，使得能够治疗生物膜产生细菌的新型治疗性靶标。

在某些实施方式中，组合物可以治疗、预防和/或保护肠杆菌科、拟杆菌、蛋白菌、硬壁菌门或热脱硫菌感染。在某些实施方式中，组合物可以治疗、预防和/或保护肠杆菌科、拟杆菌、蛋白菌、硬壁菌门或热脱硫菌的生物膜形成。在某些实施方式中，组合物可以治疗、预防和/或保护鼠伤寒沙门菌(鼠伤寒沙门氏菌)感染。在某些实施方式中，组合物可以治疗、预防和/或保护鼠伤寒沙门氏菌的生物膜形成。在某些实施方式中，组合物可以治疗、预防和/或保护大肠菌(大肠杆菌)感染。在某些实施方式中，组合物可以治疗、预防和/或保护大肠杆菌的生物膜形成。在某些实施方式中，组合物可以治疗、预防和/或保护鼠疫耶尔森氏菌(Y.pestis)感染。在某些实施方式中，组合物可以治疗、预防和/或保护鼠疫耶尔森氏菌的生物膜形成。在某些实施方式中，组合物可以治疗、预防和/或保护疾病，其包括但不限于脑膜炎、肠炎、鼠疫和败血病。

在多个实施方式中，本发明包括淀粉样蛋白抑制剂组合物。在多个实施方式中，本发明的淀粉样蛋白抑制剂组合物减少或抑制淀粉样蛋白纤维化。在一个实施方式中，淀粉样蛋白抑制剂靶向肠生物膜的主要成分，淀粉样蛋白淀粉样纤维。在一个实施方式中，本发明提供了靶向导致生物膜结构、稳定性改变并且整体导致生物膜减小的生物膜内的淀粉样纤维的淀粉样蛋白抑制剂。

在一个实施方式中，本发明提供了结合至并且抑制涉及生物膜形成的细菌淀粉样蛋白淀粉样纤维的纤维化的淀粉样蛋白抑制剂。在一个实施方式中，淀粉样蛋白抑制剂是对淀粉样蛋白-β显示出反应性并且在细菌生物膜的背景内显示出抗淀粉样纤维性质的人单克隆抗体。

本领域技术人员将理解基于本文所提供的公开内容，淀粉样蛋白纤维化的降低涵盖了淀粉样蛋白表达，包括转录、翻译或两者的降低并且还涵盖了促进淀粉样蛋白降解，包括在RNA水平(例如，RNAi、shRNA等)和在蛋白水平(例如，降解等)。技术人员还将理解一旦通过本发明的教导内容所指导，淀粉样蛋白纤维化的降低包括淀粉样蛋白活性(例如，酶活性、底物结合活性、受体结合活性等)的降低。因此，淀粉样蛋白纤维化的降低包括但不限于编码淀粉样蛋白的核酸的转录、翻译或两者的降低；并且它还包括淀粉样蛋白多肽或其肽片段的任何活性的降低。本发明的淀粉样蛋白抑制剂组合物和方法可以选择性抑制淀粉样蛋白，或者可以抑制淀粉样蛋白和另一种分子两者。

可以使用多种方法评价淀粉样蛋白纤维化的抑制，包括本文所公开的那些以及本领域中已知的或未来将开发的方法。也就是说，本领域的常规技术人员将理解基于本文所提供的公开内容，可以使用评价存在于生物样品中的编码淀粉样蛋白的核酸(例如，mRNA)的水平，淀粉样蛋白多肽或其肽片段的水平，淀粉样蛋白活性水平(例如，酶活性、底物结合活性、受体结合活性等)或其组合的方法来容易地评价淀粉样蛋白水平或活性的降低。

基于本文所提供的公开内容，本领域技术人员将理解本发明在对其有需要的受试者中的疾病或病症的治疗或预防中是有用的，无论受试者是否还使用其它药物治疗或疗法进行治疗。此外，技术人员还将理解基于本文所提供的教导内容，通过本文所述的组合物和方法可治疗的疾病或病症涵盖了其中淀粉样蛋白起作用并且其中淀粉样蛋白纤维化降低将促进积极治疗结局的任何疾病或病症。本发明的降低淀粉样蛋白或淀粉样蛋白片段的水平或活性(例如，淀粉样蛋白纤维化等)的淀粉样蛋白抑制剂组合物和方法包括，但不应视为受限于化合物、蛋白、肽、拟肽、抗体、抗体片段、抗体模拟物、核糖酶、小分子化合物、短发夹RNA、RNAi、反义核酸分子(例如，siRNA、miRNA等)、编码反义核酸分子的核酸、编码蛋白的核酸序列或其组合。在一些实施方式中，抑制剂是变构抑制剂。本领域技术人员将容易地理解基于本文所提供的公开，淀粉样蛋白抑制剂组合物涵盖了降低淀粉样蛋白纤维化的任何化合物。另外，淀粉样蛋白抑制剂组合物涵盖了化学修饰的化合物和衍生物，如化学领域中的技术人员所熟知的。

此外，当配备了本公开内容和本文中举例说明的方法时，本领域技术人员将理解淀粉样蛋白抑制剂组合物包括将来将发现的，通过药学领域中的熟知标准(如本文中详细描述的和/或如本领域中已知的淀粉样蛋白抑制的生理学结果)可以鉴别的这些抑制剂。因此，本发明不以任何方式受限于如本文所举例说明或公开的任何具体的淀粉样蛋白抑制剂组合物；而是，本发明涵盖了如在本领域中已知的并且如将来将发现的，本领域的常规技术人员将理解为有用的那些抑制剂组合物。

鉴别和产生淀粉样蛋白抑制剂组合物的其它方法对于本领域那些技术人员是熟知的，其包括但不限于从天然存在的来源(例如，链霉菌属(Streptomyces sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、Stylotella aurantium等)获得抑制剂。作为另外一种选择，可以化学合成淀粉样蛋白抑制剂。此外，实践人员将理解基于本文所提供的教导内容，淀粉样蛋白抑制剂组合物可以得自重组生物。用于化学合成淀粉样蛋白抑制剂和用于从天然来源获得它们的组合物和方法在本领域中是熟知的并且在本领域中已有描述。

本领域技术人员将理解可以作为化合物、蛋白、肽、拟肽、抗体、抗体片段、抗体模拟物、核糖酶、小分子化合物、短发夹RNA、RNAi、反义核酸分子(例如，siRNA、miRNA等)、编码反义核酸分子的核酸、编码蛋白的核酸序列、淀粉样蛋白受体、淀粉样蛋白受体片段或其组合来施用抑制剂。对于向细胞或组织施用蛋白或编码蛋白的核酸构建体，多种载体及其它组合物和方法是熟知的。因此，本发明包括施用作为淀粉样蛋白抑制剂的蛋白或编码蛋白的核酸的方法。(Sambrook等人,2012,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,ColdSpring Harbor Laboratory,New York；Ausubel等人,1997,Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley&Sons,New York)。

本领域技术人员将认识到降低本身将提高淀粉样蛋白的水平或活性的分子的量或活性可以在本发明的组合物和方法中用于降低淀粉样蛋白的水平或活性。

反义寡核苷酸是与RNA分子的一些部分互补的DNA或RNA分子。当存在于细胞中时，反义寡核苷酸杂交至已有的RNA分子并抑制向基因产物的翻译。使用反义寡核苷酸抑制基因表达在本领域中是熟知的(Marcus-Sekura,1988,Anal.Biochem.172:289)，如在细胞中表达反义寡核苷酸的方法(Inoue，美国专利号5,190,931)。本发明的方法包括使用反义寡核苷酸来降低淀粉样蛋白的量或者降低导致淀粉样蛋白的量或活性升高的分子的量，借此降低淀粉样蛋白的量或活性。

在本发明中考虑了通过本领域那些技术人员熟知的方法合成并向细胞提供的反义寡核苷酸。举例来说，可以将反义寡核苷酸合成至约10至约100个，更优选地约15至约50个核苷酸长。核酸分子的合成在本领域中是熟知的，修饰的反义寡核苷酸的合成也是熟知的，从而与未修饰的反义寡核苷酸相比，改善了生物活性(Tullis，1991，美国专利号5,023,243)。

类似地，可以通过反义分子与启动子或其它基因调控元件的杂交来抑制基因的表达，借此影响基因转录。用于与所关心的基因相互作用的启动子或其它调控元件的鉴别的方法在本领域中是熟知的并且包括如酵母双杂交系统的这些方法(Bartel和Fields主编,In:The Yeast Two Hybrid System,Oxford University Press,Cary,N.C.)。

作为另外一种选择，可以通过使用核糖酶来实现表达淀粉样蛋白的基因或者表达提高淀粉样蛋白的水平或活性的蛋白的基因的抑制。核糖酶用于抑制基因表达的使用对于本领域技术人员是熟知的(参见，例如，Cech等人,1992,J.Biol.Chem.267:17479；Hampel等人,1989,Biochemistry 28:4929；Altman等人,美国专利号5,168,053)。核糖酶是具有切割其它单链RNA分子的能力的催化RNA分子。核糖酶已知是序列特异性的，并因此可以修饰以识别特异性核苷酸序列(Cech,1988,J.Amer.Med.Assn.260:3030)，从而使得能够选择性切割特异性mRNA分子。考虑到分子的核苷酸序列，通过本文中的公开内容和所引入的参考文献，本领域的技术人员可以合成反义寡核苷酸或核糖酶而无需过度实验。

作为另外一种选择，可以通过使用短发夹RNA或反义RNA，包括siRNA、miRNA和RNAi来实现表达淀粉样蛋白的基因或者表达提高淀粉样蛋白的水平或活性的蛋白的基因的抑制。考虑到分子的核苷酸序列，通过本文中的公开内容和所引入的参考文献，本领域的技术人员可以合成这种短发夹RNA或反义RNA而无需过度实验。

当通过本公开，包括本文详述的方法所提供的，本领域技术人员将理解本发明不局限于已建立的疾病或病症的治疗。具体地，疾病或病症不需要已表现出损害受试者的程度；的确，不需要在施用治疗之前在受试者中检测疾病或病症。也就是说，不必需在本发明可以提供益处之前发生明显的疾病或病症。因此，本发明包括用于预防受试者中的疾病或病症的方法，其中如本文其它处所讨论的，可以在疾病或病症发病之前向受试者施用淀粉样蛋白抑制剂组合物，借此预防疾病或病症的发生。

本发明提供了结合至淀粉样蛋白的组合物。在一个实施方式中，淀粉样蛋白结合剂抑制淀粉样蛋白的水平或活性。因此，在其中淀粉样蛋白活性降低将有益的疾病和病况中，这些抑制性淀粉样蛋白结合剂可以潜在地起到治疗剂的作用。

在某些实施方式中，本发明的抗体，包括其淀粉样蛋白结合片段包括通过任何适合的多核苷酸所编码的本文所公开的抗体氨基酸序列，或者任何分离或配制的抗体。此外，本公开的抗体包含具有本文所述的抗淀粉样蛋白抗体的结构和/或功能特征的抗体。在一个实施方式中，抗淀粉样蛋白抗体结合淀粉样蛋白并借此部分或基本改变淀粉样蛋白的至少一种生物活性(例如，淀粉样蛋白纤维化)。在一些实施方式中，淀粉样蛋白是微生物淀粉样蛋白。

在一个实施方式中，本发明的抗淀粉样蛋白抗体免疫特异性结合对淀粉样蛋白、肽、亚基、片段、部分或它们的任意组合特异的至少一种指明的表位，并且不特异性结合至除了来源于其它物种的淀粉样蛋白以外的其它多肽。至少一种表位可以包括含有淀粉样蛋白的至少一部分的至少一种抗体结合区。如本文所使用的术语“表位”是指能够结合至抗体的蛋白决定簇。表位通常由化学活性表面分子组(surface groupings of molecules)，如氨基酸或糖侧链组成，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象和非构象表位的区别在于在存在变性溶剂的情况下，与前者的结合会丧失，而后者不会。

本发明提供了包含具有泛-淀粉样蛋白结合活性的至少一种抗体的免疫学组合物。例如，在一个实施方式中，组合物包含特异性结合至淀粉样蛋白质的β折叠结构的抗体或抗体片段。示例性的抗淀粉样蛋白抗体包括但不限于ALZ.3H3、ALZ.2C10、ALZ.4G1和ALZ.4A6。

然而，不应将本发明视为仅限于包括这些抗体的方法和组合物或仅限于抗原的这些部分。而是，应将本发明视为包括抗原的其它抗体，如该术语在本文其它处所定义的，或其部分。此外，应将本发明视为涵盖了抗体，尤其是，结合至所关心的特异性抗原的抗体，并且例如，它们能够结合在免疫印迹上，酶联免疫吸附测定中的溶液中，荧光激活细胞分选(FACS)测定中，磁激活细胞分选(MACS)测定中和用编码抗原性蛋白的至少一部分的核酸瞬时转染的细胞的免疫荧光显微术中的抗原。

本领域技术人员将理解基于本文所提供的公开内容，抗体可以特异地结合抗原的任何部分，并且全长蛋白可以用于产生对其特异的抗体。然而，本发明不局限于使用全长蛋白作为免疫原。而是，本发明包括使用蛋白的免疫原性部分来产生特异地结合特异性抗原的抗体。也就是说，本发明包括使用抗原的免疫原性部分或抗原决定簇使动物免疫。

一旦提供了所关心的特异性抗原的序列以及定位蛋白的多种保守和非保守域的详细分析，则基于本文所提供的公开内容，技术人员将理解如何使用本领域熟知的或将要发展的方法来获得对抗原的多个部分特异的抗体。

基于本文所提供的公开内容，技术人员将理解本发明包括识别单个抗原性表位的单个抗体的使用，但是本发明不局限于单个抗体的使用。作为替代，本发明涵盖了至少一种抗体的使用，其中抗体可以针对相同或不同的抗原性蛋白表位。

制备和使用抗体的方法在本领域中是熟知的。例如，可以根据本领域熟知的标准免疫学技术，通过使兔免疫来产生在本发明中有用的多克隆抗体(参见，例如，Harlow等人,1988,In:Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor,NY)。这些技术包括用包含另一种蛋白的一部分，如麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽(GSH)标签多肽部分，和/或使得所关心的抗原性蛋白具有免疫原性的部分(例如，与钥孔血蓝素，KLH缀合的所关心的抗原)和包含各个抗原性蛋白氨基酸残基的部分的嵌合蛋白使动物免疫。通过将编码标志物蛋白的适当核酸克隆到适合于该目的的质粒载体中，如但不限于pMAL-2或pCMX来产生嵌合蛋白。

使用标准抗体生产方法，诸如，例如Harlow等人(1988,In:Antibodies,ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor,NY)中所述的那些，通过用抗原接种所期望的动物并从中分离特异地结合抗原的抗体来实现多克隆抗体的产生。

可以使用任何熟知的单克隆抗体制备程序，诸如，例如Harlow等人(1988,In:Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor,NY)和Tuszynski等人(1988,Blood,72:109-115)中所述的那些，制备抗全长蛋白或肽或者肽片段的单克隆抗体。还可以使用化学合成技术合成大量所期望的肽。作为另外一种选择，可以将编码所期望的肽的DNA在适合于产生大量的肽的细胞中克隆并从适当的启动子序列表达。使用如本文所参考的标准程序，从用肽免疫的小鼠产生抗所述肽的单克隆抗体。

可以使用本领域中可用且在例如Wright等人(1992,Critical Rev.Immunol.12:125-168)和其中引用的参考文献中描述的技术克隆使用本文所述的程序获得的编码单克隆抗体的核酸并测序。此外，可以使用例如Wright等人和其中引用的参考文献中，以及Gu等人(1997,Thrombosis and Hematocyst 77:755-759)中所述的技术和本领域中已知的或将开发的使抗体人源化的其它方法，使本发明的抗体“人源化”。

本发明还包括对所关心的抗原的表位具有特异反应性的人源化抗体的使用。本发明的人源化抗体具有人框架并且具有一个或多个来自与所关心的抗原具有特异反应性的抗体，通常小鼠抗体的互补决定区(CDR)。当将在本发明中使用的抗体人源化时，可以如以下文献中所述产生抗体：Queen等人(美国专利号6,180,370)，Wright等人(如上)和其中引用的参考文献或Gu等人(1997,Thrombosis and Hematocyst 77(4):755-759)。Queen等人中公开的方法部分涉及设计人源化免疫球蛋白，所述免疫球蛋白是通过表达附接至编码受体人框架区的DNA节段的编码能够结合至所期望的抗原，如所关心的抗原上的表位的来自供体免疫球蛋白的重链和轻链互补决定区(CDR)的重组DNA节段所产生的。一般而言，Queen的专利中的发明对基本上任何人源化免疫球蛋白的设计具有可应用性。Queen解释DNA节段通常将包括可操作性地连接至人源化免疫球蛋白编码序列的表达控制DNA序列，包括天然结合的或异源的启动子区。表达控制序列可以是能够转化或转染真核宿主细胞的载体中的真核启动子系统，或者表达控制序列可以是能够转化或转染原核宿主细胞的载体中的原核启动子系统。一旦将载体引入适当的宿主，则将宿主维持在适合于所引入的核苷酸序列的高水平表达的条件下，并且根据需要，随后可以进行人源化轻链、重链、轻/重链二聚体或完整抗体、结合片段或其它免疫球蛋白形式的收集和纯化(Beychok,Cells ofImmunoglobulin Synthesis,Academic Press,New York,(1979)，以上文献作为参考并入本文)。

本发明还包括本文所述的抗体的功能等价物。功能等价物具有与抗体的那些结合特征相当的结合特征，并且包括例如杂交和单链抗体及其片段。在PCT申请WO 93/21319和PCT申请WO 89/09622中公开了产生这些功能等价物的方法。

功能等价物包括具有与抗体的可变区或高变区的氨基酸序列基本相同的氨基酸序列的多肽。在本文中，将“基本相同的”氨基酸序列定义为与另一种氨基酸序列具有至少70％，优选地至少约80％，更优选地至少约90％，更优选地至少约95％，并且最优选地至少99％的同源性(或70至99之间的任何整数)的序列，如通过根据Pearson和Lipman,1988Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 85:2444-2448的FASTA搜索法所确定的。嵌合或其它杂交抗体具有基本来源于或仅来源于人抗体恒定区的恒定区和基本来源于或仅来源于来自各个稳定杂交瘤的单克隆抗体的可变区序列的可变区。

单链抗体(scFv)或Fv片段是由与轻链可变区连接的抗体的重链可变区(具有或不具有互相连接的接头)所组成的多肽。因此，Fv包含抗体结合位点。

本发明的抗体的功能等价物还包括与完整抗体的那些结合特征具有相同，或基本相同的结合特征的抗体片段。这些片段可以含有Fab片段或F(ab')2片段之一或两者。抗体片段含有完整抗体的全部6个互补决定区，尽管含有少于所有这些区域，如3、4或5个互补决定区的片段也是功能性的。功能等价物是IgG免疫球蛋白类型及其亚类的成员，但是可以是以下免疫球蛋白类型中的任一种或可以与之组合：IgM、IgA、IgD或IgE及其亚类。各个亚类，如IgG亚类的重链负责不同的效应因子功能，并因此通过选择所期望的重链恒定区，产生了具有所期望的效应因子功能的杂交抗体。示例性的恒定区为γ1(IgG1)、γ2(IgG2)、γ3(IgG3)和γ4(IgG4)。轻链恒定区可以具有κ或λ型。

本发明的免疫球蛋白可以是一价、二价或多价的。一价免疫球蛋白是由通过二硫桥键与杂交轻链结合的杂交重链所形成的二聚体(HL)。二价免疫球蛋白是由通过至少一个二硫桥键结合的两个二聚体所形成的四聚体(H2L2)。

抗体可以包含重链和轻链互补决定区(“CDR”)组，其分别插入到为CDR提供支持并且限定CDR相对于彼此的空间关系的重链和轻链框架(“FR”)组之间。CDR组可以含有重链或轻链V区的三个高变区。从重链或轻链的N-末端出发，这些区域分别表示为“CDR1”、“CDR2”和“CDR3”。因此，抗原结合位点可以包括6个CDR，其包含来自重链和轻链V区中的每一个的CDR组。

抗体可以具有在受试者内的半衰期。在一些实施方式中，可以修饰抗体以延长或缩短其在受试者内的半衰期。修饰可以存在于抗体的恒定区中。修饰可以是抗体恒定区中的一个或多个氨基酸替换，与不含一个或多个氨基酸替换的抗体的半衰期相比，替换延长了抗体的半衰期。修饰可以是抗体CH2域中的一个或多个氨基酸替换，与不含一个或多个氨基酸替换的抗体的半衰期相比，替换延长了抗体的半衰期。

在一些实施方式中，恒定区中的一个或多个氨基酸替换可以包括用酪氨酸残基替换恒定区中的蛋氨酸残基，用苏氨酸残基替换恒定区中的丝氨酸残基，用谷氨酸残基替换恒定区中的苏氨酸残基或它们的任意组合，借此延长抗体的半衰期。

在其它实施方式中，恒定区中的一个或多个氨基酸替换可以包括用酪氨酸残基替换CH2域中的蛋氨酸残基，用苏氨酸残基替换CH2域中的丝氨酸残基，用谷氨酸残基替换CH2域中的苏氨酸残基或它们的任意组合，借此延长抗体的半衰期。

抗体可以是去岩藻糖基化的。岩藻糖基化包括糖岩藻糖向分子的添加，例如，将岩藻糖连接至N-聚糖、O-聚糖和糖脂。因此，在去岩藻糖基化的抗体中，岩藻糖未连接至恒定区的碳水化合物链。可以修饰抗体以防止或抑制抗体的岩藻糖基化。修饰可以处于重链、轻链或它们的组合中。修饰可以是重链中的一个或多个氨基酸替换，轻链中的一个或多个氨基酸替换或它们的组合。

针对施用组合物的受试者中的疾病，抗淀粉样蛋白抗体可以进行治疗、预防和/或保护。抗淀粉样蛋白抗体可以促进施用组合物的受试者中的疾病存活。在一个实施方式中，相对于患有疾病，但未施用抗淀粉样蛋白抗体的受试者的预期存活，抗淀粉样蛋白抗体可以提供受试者中提高的疾病存活。在多个实施方式中，相对于不存在组合物的情况下的预期存活，抗淀粉样蛋白抗体可以提供施用组合物的受试者中的疾病存活的至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％的提高。

在一个实施方式中，相对于未施用抗淀粉样蛋白抗体的受试者的预期保护，抗淀粉样蛋白抗体可以提供针对受试者中的疾病提高的保护。在多个实施方式中，相对于不存在组合物的情况下的预期保护，抗淀粉样蛋白抗体可以在至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％的施用组合物的受试者中针对疾病进行保护。

在一个方面，本发明提供了包含与至少一种其它试剂组合的本发明的抗淀粉样蛋白抗体的组合物。在一个实施方式中，其它试剂是抗生素。在一个方面，本发明提供了包含本发明的抗淀粉样蛋白抗体和抗生素治疗的组合物。在一个实施方式中，本发明的抗淀粉样蛋白抗体和抗生素治疗之间的重量比为约10:1至约1:10。在一个实施方式中，本发明的抗淀粉样蛋白抗体和抗生素治疗之间的重量比为约4:1至约1:4。在一个实施方式中，本发明的抗淀粉样蛋白抗体和抗生素治疗之间的重量比为约2:1至约1:2。在一个实施方式中，本发明的抗淀粉样蛋白抗体和抗生素治疗之间的重量比为约1:1、约1:2、约1:3、约1:4、约1:5、约2:1、约3:1、约4:1或约5:1。在一个实施方式中，在本发明的组合物中，本发明的抗淀粉样蛋白抗体和抗生素治疗的总浓度为约1wt.％至约50wt.％。在一个实施方式中，在本发明的组合物中，本发明的抗淀粉样蛋白抗体和抗生素治疗的总浓度为约50重量百分比(wt.％)、约40wt.％、约30wt.％、约25wt.％、约20wt.％、约15wt.％、约10wt.％、约5wt.％、约3wt.％、约2wt.％、约1wt.％每单位组合物。

本发明还涵盖了包含具有泛-淀粉样蛋白活性的抗体的药物组合物。在一个实施方式中，药物组合物对于抑制细菌感染有用。在一个实施方式中，药物组合物对于克服抗菌耐受性有用。这种药物组合物可以由处于适合于向受试者施用的形式的具有泛-淀粉样蛋白活性的抗体组成。在一个实施方式中，本发明的组合物可以包含编码具有泛-淀粉样蛋白活性的抗体的核酸分子。

在一个实施方式中，可以施用用于实践本发明的方法的药物组合物以递送1ng/kg/天至100mg/kg/天的剂量。在另一个实施方式中，可以施用用于实践本发明的药物组合物以递送1ng/kg/天至500mg/kg/天的剂量。

在本发明的药物组合物中，活性成分、药学上可接受的载体和任何其它成分的相对量将基于所治疗的受试者的身份、体型和状况并且还基于施用组合物的途径而改变。举例来说，组合物可以包括0.1％至100％(w/w)之间的活性成分。

可以开发适用于口服、直肠、阴道、局部、透皮、眼科、鞘内施用或另一种施用途径的在本发明的方法中有用的药物组合物。施用途径对于技术人员来说将是显而易见的并且将取决于多种因素，其包括要治疗的疾病的类型和严重程度，要治疗的动物或人患者的类型和年龄等。

可以通过任何药学领域中已知的或此后发展的方法制备本文所述的药物组合物的制剂。一般地，这些制备方法包括使活性成分与载体或一种或多种其它辅助成分结合，并且然后，如有必要或者如果希望，将产物成形或包装成所期望的单剂量或多剂量单位。

如本文所使用的，“单位剂量”是包含预定量的活性成分的药物组合物的单个的量。活性成分的量通常等于将向受试者施用的活性成分的剂量或者该剂量的便捷的部分(convenient fraction)，诸如，例如该剂量的一半或三分之一。单位剂量形式可以用于单一日剂量或者多个日剂量(例如，每天约1至4次或更多次)之一。当使用多个日剂量时，对于每个剂量，单位剂量形式可以是相同或不同的。

尽管对本文所提供的药物组合物的描述主要涉及适合于向人伦理学施用的药物组合物，但是技术人员将理解这些组合物通常适合于向各种各样的动物施用。对适合于向人施用的药物组合物进行改变以使组合物适合于向多种动物施用是很好理解的，并且常规兽医药理学家可以仅通过常规实验(即使有的话)来设计和实施这些改变。考虑了施用本发明的药物组合物的受试者，其包括但不限于人及其它灵长类、哺乳动物，包括商业上相关的哺乳动物，如牛、猪、马、绵羊、猫和狗。

在一个实施方式中，使用一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体配制本发明的组合物。在一个实施方式中，本发明的药物组合物包含治疗有效量的具有泛-淀粉样蛋白活性的抗体和药学上可接受的载体。有用的药学上可接受的载体包括但不限于甘油、水、盐水、乙醇及其它药学上可接受的盐溶液，如磷酸盐和有机酸的盐。这些及其它药学上可接受的载体的实例描述于Remington’s Pharmaceutical Sciences(1991,Mack PublicationCo.,New Jersey)。

载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其适合的混合物和植物油的溶剂或分散媒介。可以例如通过使用涂层，如卵磷脂，就分散系来说通过维持所需的粒径和通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。可以通过多种抗细菌和抗真菌剂，例如，对羟苯甲酸、氯代丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等实现对微生物作用的防止或减小。在多数情况下，在组合物中将优选地包括等张剂，例如，糖、氯化钠或多元醇，如甘露糖醇和山梨糖醇。可以通过在组合物中包含延缓吸收的试剂，例如，单硬脂酸铝或明胶来导致可注入组合物的延长吸收。

可以与常规赋形剂混合使用制剂。药物制剂可以灭菌并且如果需要，可以与助剂，例如，润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于影响渗透压缓冲剂的盐、着色剂、调味剂和/或芳香物质等混合。当需要时，它们还可以与其它活性剂，例如，其它止痛剂混合。

如本文所使用的，“其它成分”包括但不限于以下中的一种或多种：赋形剂；表面活性剂；分散剂；惰性稀释剂；造粒剂和崩解剂；粘结剂；润滑剂；甜味剂；调味剂；着色剂；防腐剂；生理学可降解的组分，如明胶；水性媒介物和溶剂；油性媒介物和溶剂；悬浮剂；分散剂或润湿剂；乳化剂，镇痛剂；缓冲剂；盐；增稠剂；填料；乳化剂；抗氧化剂；抗生素；抗真菌剂；抗菌剂；抗病毒剂；抗凝血剂；稳定剂；和药学上可接受的聚合物或疏水性材料。可以包含在本发明的药物组合物中的其它“其它成分”在本领域中是已知的并且描述于，例如，Genaro主编，(1985,Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,PA)，以上文献作为参考并入本文。

本发明的组合物可以包含组合物总重量的约0.005％至2.0％的防腐剂。在暴露于环境中的污染物的情况下，防腐剂用于防止腐败。根据本发明有用的防腐剂的实例包括但不限于选自由苄醇、山梨酸、对羟苯甲酸、咪唑烷基脲及其组合组成的组的那些。特别优选的防腐剂是约0.5％至2.0％的苄醇和0.05％至0.5％的山梨酸的组合。

组合物优选地包括抑制化合物降解的抗氧化剂和螯合剂。对于一些化合物，优选的抗氧化剂为处于约0.01％至0.3％的优选范围内的BHT、BHA、α-生育酚和抗坏血酸，并且更优选地，处于按重量计组合物的总重量的0.03％至0.1％的范围内的BHT。优选地，螯合剂以组合物总重量的按重量计的0.01％至0.5％的量存在。特别优选的螯合剂包括处于组合物总重量的按重量计约0.01％至0.20％的重量范围内，并且更优选地按重量计0.02％至0.10％的范围内的乙二胺四乙酸盐(例如，乙二胺四乙酸二钠)和柠檬酸。螯合剂对于螯合组合物中对制剂的货架期可能有害的金属离子是有用的。尽管BHT和乙二胺四乙酸二钠分别是一些化合物的特别优选的抗氧化剂和螯合剂，但是其它适合的和等价的抗氧化剂和螯合剂因此可以替代，如本领域技术人员将已知的。

可以使用常规方法制备液体混悬液，从而在水性或油性媒介物中实现活性成分的混悬液。水性媒介物包括例如水和等渗盐水。油性媒介物包括例如杏仁油、油性酯、乙醇、植物油，如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油、分馏植物油和矿物油，如液体石蜡。液体混悬液还可以包含一种或多种其它成分，其包括但不限于悬浮剂、分散剂或润湿剂、乳化剂、镇痛剂、防腐剂、缓冲剂、盐、调味剂、着色剂和甜味剂。油性混悬液还可以包含增稠剂。已知的悬浮剂包括但不限于葡萄糖醇糖浆、氢化可食用脂、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄芪胶、阿拉伯树胶和纤维素衍生物，如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素。已知的分散剂或润湿剂包括但不限于天然存在的磷脂，如卵磷脂、环氧烷与脂肪酸、与长链脂肪醇、与来源于脂肪酸和己糖醇的偏酯或者与来源于脂肪酸和已糖醇酐的偏酯的缩合产物(分别例如，聚氧化乙烯硬脂酸酯、十七乙烯氧基鲸蜡醇、聚氧化乙烯山梨糖醇单油酸酯和聚氧化乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。已知的乳化剂包括但不限于卵磷脂和阿拉伯胶。已知的防腐剂包括但不限于对羟基苯甲酸甲、乙或正丙酯、抗坏血酸和山梨酸。已知的甜味剂包括例如甘油、丙二醇、山梨糖醇、蔗糖和糖精。已知的用于油性混悬液的增稠剂包括例如蜂蜡、固体石蜡和鲸蜡醇。

可以以与液体混悬液基本相同的方式在水性或油性溶剂中制备活性成分的液体溶液，其主要差异在于活性成分是溶解的，而不是在溶剂中混悬的。如本文所使用的，“油性”液体是包含含碳液体分子并且显示出小于水的极性性质的液体。本发明的药物组合物的液体溶液可以包含对于液体悬浮液所述的每种组分，应理解悬浮剂将不必需辅助活性成分在溶剂中的溶解。水溶剂包括例如水和等渗盐水。油性溶剂包括例如杏仁油、油性酯、乙醇、植物油，如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油、分馏植物油和矿物油，如液体石蜡。

可以在水性乳液，如乳胶、水基颜料和涂料、堵缝剂和粘合剂、接缝胶带化合物、矿物浆液、水冷系统、个人护理产品、肥皂和去污剂、消毒剂、清洁剂和卫生消毒剂、杀虫剂产品、油田水和在油田应用中使用的水基流体，包括钻井泥浆、压裂液和水压测试流体等中使用本发明的组合物。在一个实施方式中，组合物是抗微生物组合物。在一个实施方式中，组合物是抗菌剂。

在本发明内有用的组合物还可以包含至少一种其它抗微生物剂。至少一种其它抗微生物剂的非限制性实例为左氧氟沙星、多西环素、新霉素、克林霉素、米诺环素、庆大霉素、利福平、氯己定、氯二甲酚、甲基异噻唑酮、麝香草酚、α-萜品醇、氯化十六烷吡啶、六氯酚、三氯生、呋喃妥因、红霉素、萘夫西林、头孢唑啉、亚胺培南、氨曲南、庆大霉素、磺胺甲噁唑、万古霉素、环丙沙星、甲氧苄啶、利福平、甲硝唑、克林霉素、替考拉宁、莫匹罗星、阿奇霉素、克拉霉素、氧氟沙星、洛美沙星、诺氟沙星、萘啶酸、司帕沙星、培氟沙星、氨氟沙星、加替沙星、莫西沙星、吉米沙星、依诺沙星、氟罗沙星、米诺环素、利奈唑胺、替马沙星、托氟沙星、克林沙星、舒巴坦、克拉维酸、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、制霉菌素、青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类、β-内酰胺抗生素、氨基糖苷类、大环内酯、林可酰胺、糖肽、四环素、氯霉素、喹诺酮、梭链孢酸钠、磺酰胺、甲氧苄啶、利福霉素、草酰类(oxalines)、链阳性菌素、脂肽、酮内酯、多烯、唑、棘白菌素类及其任意组合。

在一个实施方式中，本发明的化合物和至少一种其它抗微生物剂协同作用以预防、降低或治疗细菌感染。例如，可以使用适合的方法计算协同作用，诸如，例如S形Emax方程(Holford&Scheiner,19981,Clin.Pharmacokinet.6:429-453)，Loewe叠加方程(Loewe&Muischnek,1926,Arch.Exp.Pathol Pharmacol.114:313-326)和中值效应方程(Chou&Talalay,1984,Adv.Enzyme Regul.22:27-55)。可以将以上提及的每个方程应用于实验数据以产生相应的图以帮助评价药物组合的效果。与以上提及的方程有关的相应的图分别为浓度-效应曲线，等效线图曲线和复合指数曲线。

根据情况，可以将本发明的组合物配制用于局部施用。因此，本发明提供了局部制剂用于治疗微生物感染，或者用于使微生物去定殖，或者用于破坏或毁坏或抑制或降低微生物的生物膜形成的使用，所述局部制剂包含本发明的抗淀粉样蛋白抗体。

在一个实施方式中，本发明的局部制剂可以采取乳膏、洗剂、软膏、水凝胶、胶体、凝胶、泡沫、油、乳剂、混悬剂、擦拭剂、海绵、溶液、乳液、糊剂、贴片、纱布、拭子、敷料、喷雾剂或衬垫的形式。

本发明的局部制剂包含一种或多种药学上可接受的载体。在本发明的上下文中可用的药学上可接受的载体的实例包括载体材料，如溶剂、稳定剂、增溶剂、填充剂、张度增强剂、结构形成剂、悬浮剂、分散剂、螯合剂、乳化剂、消泡剂、软膏基质、润肤剂、皮肤保护剂、胶凝形成剂、增稠剂、pH调节剂、防腐剂、渗透增强剂、络合剂、润滑剂、镇痛剂、增粘剂、生物粘合聚合物或它们的组合。

溶剂的实例是水或纯化水、醇(例如，乙醇、苄醇)、植物、海洋和矿物油、聚乙二醇、丙二醇、甘油和液体聚烷基硅氧烷。

惰性稀释剂或填充剂可以是蔗糖、山梨糖醇、糖、甘露糖醇、微晶纤维素、淀粉、碳酸钙、氯化钠、乳糖、磷酸钙、硫酸钙或磷酸钠。

缓冲剂的实例包括柠檬酸、乙酸、乳酸、氢磷酸(hydrogenophosphoric acid)、二乙胺、氢氧化钠和氨基丁三醇(即三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐)。

适合的悬浮剂为例如天然存在的树胶(例如，阿拉伯胶、阿拉伯树胶、黄原胶和黄蓍胶)、纤维素(例如，羧甲基-、羟乙基-、羟丙基-和羟丙基甲基-纤维素)、海藻酸盐和壳聚糖。

分散剂或润湿剂的实例为天然存在的磷脂(例如，卵磷脂或大豆磷脂)、环氧乙烷与脂肪酸或与长链脂肪醇的缩合产物(例如，聚氧化乙烯硬脂酸酯、聚氧化乙烯山梨糖醇单油酸酯和聚氧化乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。

可以将防腐剂添加至本发明的局部组合物中以防止可以影响制剂的稳定性和/或在患者中引起感染的微生物污染。适合的防腐剂的实例包括对羟苯甲酸(如苯甲酸甲基、乙基、丙基、对羟基酯、对羟基苯甲酸丁基、异丁基和异丙基酯)、山梨酸钾、山梨酸、苯甲酸、苯甲酸甲酯、苯氧乙醇、溴硝丙二醇、溴硝二噁烷(bronidox)、MDM乙内酰脲、碘丙炔基丁基氨甲酸酯、氯化苯甲烃铵、西曲溴铵和苄醇。

螯合剂的实例包括EDTA钠和柠檬酸。

凝胶基质或增粘剂的实例为液体石蜡、聚乙烯、脂肪油、胶体硅或胶体铝、甘油、丙二醇、碳酸亚丙酯、聚羧乙烯、硅酸镁铝、亲水聚合物(如，例如，淀粉或纤维素衍生物)、水-可膨胀的水胶体、角叉菜胶、透明质酸盐、海藻酸盐和丙烯酸酯。

适合在本发明的组合物中使用的软膏基质可以是疏水性的或亲水性的。软膏基质包括但不限于石蜡、羊毛脂、液体聚烷基硅氧烷、鲸蜡醇、鲸蜡醇十六酸酯、植物油、脂肪酸的脱水山梨糖醇酯、聚乙二醇和脂肪酸的脱水山梨糖醇酯、环氧乙烷之间的缩合产物(例如，聚氧化乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)、聚山梨醇酯、白凡士林和白蜡。

润湿剂的实例包括但不限于乙醇、异丙醇、甘油、丙二醇、山梨糖醇、乳酸和脲。适合的润肤剂包括胆固醇和甘油。

护肤剂的实例包括但不限于维生素E、尿囊素、甘油、氧化锌、维生素和防晒剂。

增稠剂一般用于提高药物或美容组合物的粘度和改善它们的生物粘合性。增稠剂的实例包括但不限于纤维素、聚乙二醇、聚环氧乙烷、天然存在的树胶、明胶、刺梧桐胶、果胶、海藻酸、聚维酮和

生物粘合聚合物对于使皮肤水合和提高其渗透性是有用的。生物粘合聚合物还可以用作增稠剂。生物粘合聚合物的实例包括但不限于果胶、海藻酸、壳聚糖、聚山梨醇酯、聚(乙二醇)、寡糖和多糖、纤维素酯和纤维素醚以及改性的纤维素聚合物。

透过增强剂是含有影响活性组分通过皮肤的递送的特定试剂的媒介物。通常，将透过增强剂分为两种类型：溶剂和表面活性化合物(两亲性分子)。溶剂透过增强剂的实例包括但不限于醇(例如，乙醇、异丙醇)、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、l-十二烷基偶氮环庚-2-酮、N-癸基-甲基亚砜、乳酸、N,N-二乙基-m-甲苯甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、壬烷、油酸、石蜡油、聚乙二醇、丙二醇、水杨酸、脲、萜烯和三氯乙醇。表面活性透过增强剂可以是非离子、两性、阳离子或两性离子的。适合的非离子表面活性剂包括但不限于聚(氧化乙烯)-聚(氧化丙烯)嵌段共聚物，其商品名为泊洛沙姆；乙氧基化氢化蓖麻油；聚山梨醇酯，如吐温20或吐温80。两性表面活性剂包括季铵化咪唑衍生物，阳离子表面活性剂包括氯化十六烷基吡啶，并且两性离子表面活性剂包括甜菜碱和硫代甜菜碱。适合的透过增强剂的其它实例包括十五内酯、2-吡咯烷、l-十二烷基-氮杂环庚-2-酮、硫醇乙酸钙、己醇、1,3-二噁烷的衍生物(即1,3-二氧杂环己烷)和1,3-二氧戊环的衍生物(即1,3-二氧杂环戊烷)、l-N-十二基-2-吡咯烷酮-5-羧酸、2-戊基-2-氧-吡咯烷乙酸、2-十二基-2-氧-1-吡咯烷乙酸和l-氮杂环庚-2-酮-2-十二烷基乙酸等。

本发明考虑用在本发明内有用的组合物应用至或涂覆医疗装置。医疗装置的非限制性实例包括一次性或永久导管(例如，中心静脉导管、透析导管、长期隧道式中心静脉导管、短期中心静脉导管、动脉插管、外周导入中心静脉导管、外周静脉导管、肺动脉Swan-Ganz导管、导尿管和腹膜导管、引流导管)、长期泌尿系装置、组织粘合泌尿系装置、血管移植物、血管导管端口、伤口引流管、心室导管、脑积水分流器、心脏瓣膜、心室辅助装置(例如，左心室辅助装置)、起搏器胶囊、失禁装置、阴茎植入物、小型或临时关节置换、尿道扩张器、套管、弹性体、水凝胶、手术器械、牙科器械、管(例如，静脉内管、呼吸管、牙科水管、牙科引流管和饲管)、织物、纸、指示剂条带(例如，纸指示剂条带或塑料指示剂条带)、粘合剂(例如，水凝胶粘合剂、热熔粘合剂或溶剂基粘合剂)、绷带、矫形植入物和在医学领域中使用的任何其它装置。

医疗装置还包括可以插入或植入人或其它动物中，或者置于插入或植入位点，如插入或植入位点附近的皮肤，并且包括对微生物和/或生物膜-包埋的微生物的定殖敏感的至少一个表面的任何装置。在本发明内还考虑了可以对于防止微生物和/或生物膜-包埋的微生物在医疗装置的至少一个表面上生长或增殖，或者从医疗装置的至少一个表面，如手术室、急诊室、病房、诊所或浴室中的设备的表面上除去或清除微生物和/或生物膜-包埋的微生物所期望或所必需的任何其它表面。在一个具体实施方式中，将组合物整合到粘合剂，如胶带中，借此提供可以防止或降低微生物和/或生物膜包埋-微生物在粘合剂的至少一个表面上生长或增殖的粘合剂。

可植入医疗装置包括可以使用内腔镜检查来检查微生物和/或生物膜-包埋微生物的污染或感染的矫形植入物。可插入医疗装置包括可以不使用创伤性技术，如内腔镜检查来检查的导管和分流器。医疗装置可以由本领域技术人员已知的任何适合的金属材料或非金属材料形成。金属材料的实例包括但不限于钛铝钒合金(tivanium)、钛和不锈钢及其衍生物或组合。非金属材料的实例包括但不限于热塑性或聚合物材料，如橡胶、塑料、聚酯、聚乙烯、聚氨酯、硅酮、

本发明提供了用于治疗微生物感染，或者用于使微生物去定殖，或者用于破坏或毁坏或抑制或降低微生物的生物膜形成的本发明的抗淀粉样蛋白抗体的使用。

在一个实施方式中，本文所述的组合物用于向受试者施用。在一个实施方式中，受试者患有通过微生物的微生物感染或定殖。优选地，微生物感染或定殖位点的特征在于微生物集落或者生物膜或生物膜形成。优选地，微生物感染是细菌感染。在一个实施方式中，细菌感染来自革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。在一个实施方式中，细菌感染来自选自下列的一种细菌：葡萄球菌属种(Staphylococcus spp.)，例如，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)；肠球菌属种(Enterococcus spp.)，例如，粪肠球菌(Enterococcus faecalis)；克雷伯氏菌属种(Klebsiella spp.)，例如，肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)；不动杆菌属种(Acinetobacter spp.)，例如，波美不动杆菌(Acinetobacter baumannii)；假单胞菌属种(Pseudomonas spp.)，例如，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)；肠杆菌属种(Enterobacter spp.)；酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)；利斯特氏菌属种(Listeria spp.)；假单胞菌属种(Pseudomonas spp.)；分枝杆菌属种(Mycobacteriumspp.)，例如，结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)；肠杆菌属种(Enterobacterspp.)；弯曲菌属种(Campylobacter spp.)；沙门氏菌属种(Salmonella spp.)；链球菌属种(Streptococcus spp.)，例如，A或B族链球菌(Streptococcus Group A or B)、肺炎链球菌(Streptoccocus pneumoniae)；螺杆菌属种(Helicobacter spp.)，例如，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)；奈瑟氏菌属种(Neisseria spp.)，例如，淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhea)、脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)；布氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)；志贺氏菌属种(Shigella spp.)，例如，弗氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)；大肠杆菌(Escherichia coli)；嗜血菌属种(Haemophilus spp.)，例如，流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)；衣原体属种(Chlamydia spp.)，例如，砂眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)、鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)；土拉弗朗西斯菌(Francisella fularensis)；芽孢杆菌属种(Bacillus spp.)，例如，炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)；梭状芽孢杆菌种(Clostridia spp.)，例如，肉毒梭状芽孢杆菌(Clostridium botulinum)；耶尔森氏菌属种(Yersinia spp.)，例如，鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)；密螺旋体属种(Treponemaspp.)；伯克氏菌属种(Burkholderia spp.)；例如，鼻疽假单胞菌(Burkholderia mallei)和类鼻疽伯克霍尔德菌(B pseudomallei)或其组合。还在一个实施方式中，细菌选自解纤维热酸菌(Acidothermus cellulyticus)、溶齿放线菌(Actinomyces odontolyticus)、嗜碱菌(Alkaliphilus metalliredigens)、奥利姆兰迪嗜碱菌(Alkaliphilus oremlandii)、金黄节杆菌(Arthrobacter aurescens)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、克氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、耐盐芽孢杆菌(Bacillushalodurans)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、青春双歧杆菌芽孢杆菌(Bifidobacteriumadolescentis)、长双歧杆菌(Bifidiobacterium longum)、解糖热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor saccharolyticus)、生氢氧化碳嗜热菌(Carboxydothermushydrogenoformans)、丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)、拜氏梭菌(Clostridium beijerinckii)、肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、解纤维素梭菌(Clostridium cellulolyticum)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、克氏梭菌(Clostridium kluyveri)、柔嫩梭菌(Clostridium leptum)、诺氏梭菌(Clostridiumnovyi)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、嗜热纤维梭菌(Clostridium thermocellum)、白喉棒状杆菌(Corynebacteriumdiphtheriae)、高效棒状杆菌(Corynebacterium efficiens)、谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)、杰氏棒状杆菌(Corynebacterium jeikeium)、解脲棒状杆菌(Corynebacterium urealyticum)、哈夫尼脱亚硫酸杆菌(Desulfitobacteriumhafniense)、脱硫肠(Desulfotomaculum reducens)、凸腹真杆菌(Eubacteriumventriosum)、西伯利亚微小杆菌(Exiguobacterium sibiricum)、大芬戈尔德菌(Finegoldia magna)、嗜碱地芽孢杆菌(Geobacillus kaustophilus)、热脱氮地芽孢杆菌(Geobacillus thermodenitrificans)、两面神菌属菌种(Janibacter sp.)、耐辐射动球菌(Kineococcus radiotolerans)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)、无害李斯特氏菌(Listeria innocua)、威氏李斯特氏菌(Listeria welshimeri)、热醋穆尔氏菌(Moorella thermoacetica)、鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)、牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、浅黄分枝杆菌(Mycobacterium gilvum)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、副结核分枝杆菌(Mycobacterium paratuberculosis)、垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、溃疡分枝杆菌(Mycobacterium ulcerans)、范巴伦氏分枝杆菌(Mycobacterium vanbaalenii)、诺卡氏菌菌种(Nocardioides sp.)、皮疽诺卡氏菌(Nocardia farcinica)、伊平屋桥大洋芽孢杆菌(Oceanobacillus iheyensis)、热丙酸盐暗色厌氧香肠状菌(Pelotomaculum thermopropionicum)、红球菌属菌种(Rhodococcus sp.)、红色糖多孢菌(Saccharopolyspora erythraea)、凝固酶阴性葡萄球菌属菌种(coagulase-negative Staphylococcus species)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistantStaphylococcus aureus)(MRSA)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、耐甲氧西林表皮葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus epidermidis)(MRSE)、假中间葡萄球菌(Staphylococcus pseudintermedius)、中间葡萄球菌(Staphylococcusintermedius)、海豚葡萄球菌(Staphylococcus delphini)、无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)、戈氏链球菌(Streptococcus gordonii)、缓症链球菌(Streptococcusmitis)、口腔链球菌(Streptococcus oralis)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、血链球菌(Streptococcus sanguinis)、猪链球菌(Streptococcus suis)、阿维菌素链霉菌(Streptomyces avermitilis)、天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)、乙醇热厌氧菌(Thermoanaerobacter ethanolicus)、腾冲嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobactertengcongensis)或其组合。

在一个实施方式中，生物膜形成位于装置表面上。在一个实施方式中，装置是医疗装置。在一个实施方式中，生物膜形成位于受试者的表面上或组织中。在一个实施方式中，生物膜形成位于皮肤、眼睛、粘膜、腔表面等上。

因此，本发明提供了包含用于治疗微生物感染，或者用于使微生物去定殖，或者用于破坏或毁坏或抑制或降低微生物的生物膜形成的本发明的抗淀粉样蛋白抗体的组合物的使用。在一个实施方式中，使用用于使微生物去定殖，或者用于毁坏或抑制或减少医疗装置表面上的生物膜形成。

施用方案可以影响有效量的构成。可以在病原性定殖、生物膜形成和/或患者中感染发生之前或之后向患者施用治疗性制剂。此外，可以每天或顺序施用几个划分剂量以及交错剂量，或者可以连续输注剂量，或者可以弹丸注射剂量。此外，如治疗或预防情况的紧急性所指示的，可以按比例升高或降低治疗制剂的剂量。

可以使用已知的程序，以对于预防、减少或毁坏病原性定殖、生物膜形成和/或患者中的感染有效的剂量和时间段实施本发明的组合物向患者，优选地，哺乳动物，更优选地人的施用。实现治疗效果所必需的治疗化合物的有效量可以根据以下因素而改变，如所使用的具体化合物的活性；施用时间；化合物的排泄速率；治疗持续时间；与化合物组合使用的其它药物、化合物或材料；要治疗的患者的疾病或病症的状态、年龄、性别、体重、状况、一般健康情况和先前病史以及医学领域中熟知的类似因素。可以调节剂量方案以提供最优的治疗反应。例如，可以每天施用几个划分剂量，或者可以如治疗情况的紧急性所指示的，按比例降低剂量。本发明的治疗性化合物的有效剂量范围的非限制性实例为约0.01至50mg/kg体重/天。本领域的技术人员将能够研究相关因素并对于治疗化合物的有效量做出决定而无需过度实验。

可以以每天几次的频率向动物施用化合物，或者它可以不太频繁施用，如每天一次、每周一次、每两周一次、每月一次或者更不频繁，如每几个月一次或甚至每年一次或更少。应理解在非限制性实例中，可以每天、每隔一天、每2天、每3天、每4天或每5天施用每天剂量施用的化合物的量。例如，通过每隔一天施用，可以在星期一起始5mg每天的剂量，而在星期三施用第一个后续5mg每天的剂量，在星期五施用第二个后续5mg每天的剂量，并以此类推。剂量的频率对于技术人员来说将是显而易见的并且将取决于多种因素，如但不限于要治疗的疾病的类型和严重程度，动物的类型和年龄等。

可以改变本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平以获得对于对特定患者、组合物和施用形式实现所期望的治疗反应有效，且对患者无毒的活性成分的量。

具有本领域常规技术的医生，例如，医师或兽医可以容易地确定和规定所需的药物组合物的有效量。例如，医师或兽医可以以小于实现所期望的治疗效果所需的水平的水平来起始在药物组合物中所使用的本发明的化合物的剂量，并逐渐提高剂量直至实现所期望的效果。

在具体的实施方式中，特别有利的是以剂量单位形式配制化合物以便于剂量的施用和均一性。如本文所使用的剂量单位形式是指适合作为要治疗的患者的单位剂量的物理分散单元；每个单元含有与所需的药物媒介物结合的计算以产生所期望的治疗效果的预定量的治疗化合物。通过并且直接基于(a)治疗性化合物的独特特征以及要实现的具体治疗效果，和(b)本领域中混合/配制用于患者中呼吸控制障碍的治疗的这种治疗性化合物的固有限制确定本发明的剂量单位形式。

在一个实施方式中，使用一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体配制本发明的组合物。在一个实施方式中，本发明的药物组合物包含治疗有效量的本发明的化合物和药学上可接受的载体。

载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、植物油及其适合的混合物的溶剂或分散媒介。可以例如通过使用涂层，如卵磷脂，就分散系来说通过维持所需的粒径和通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。可以通过多种抗细菌和抗真菌剂，例如，对羟苯甲酸、氯代丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等实现对微生物作用的防止。在一些实施方式中，在组合物中包括等张剂，例如，糖、氯化钠或多元醇，如甘露糖醇和山梨糖醇是有用的。可以通过在组合物中包含延缓吸收的试剂，例如，单硬脂酸铝或明胶来实现可注射组合物的延长吸收。在一个实施方式中，药学上可接受的载体是单独或与其它载体组合的DMSO。

本发明的化合物的治疗有效量或剂量将取决于患者的年龄、性别和体重，患者当前的医学病况和要治疗的患者中的疾病或感染的严重程度。技术人员能够基于这些及其它因素确定适当的剂量。

可以以单一剂量或多个剂量施用剂量，例如，每天1至4次或更多次。当使用多个剂量时，每种剂量的量可以是相同或不同的。例如，可以作为两个0.5mg的剂量，以剂量间约12小时的间隔施用1mg每天的剂量。

本发明的组合物用于施用的剂量可以在以下范围：约1μg至约10,000mg，约20μg至约9,500mg，约40μg至约9,000mg，约75μg至约8,500mg，约150μg至约7,500mg，约200μg至约7,000mg，约3050μg至约6,000mg，约500μg至约5,000mg，约750μg至约4,000mg，约1mg至约3,000mg，约10mg至约2,500mg，约20mg至约2,000mg，约25mg至约1,500mg，约30mg至约1,000mg，约40mg至约900mg，约50mg至约800mg，约60mg至约750mg，约70mg至约600mg，约80mg至约500mg，以及它们之间的任何和全部完整或部分增加。

在一些实施方式中，本发明的组合物的剂量为约1mg至约2,500mg。在一些实施方式中，在本文所述的组合物中使用的本发明的组合物的剂量为小于约10,000mg，或小于约8,000mg，或小于约6,000mg，或小于约5,000mg，或小于约3,000mg，或小于约2,000mg，或小于约1,000mg，或小于约500mg，或小于约200mg，或小于约50mg。类似地，在一些实施方式中，如在本文其它地方所述的第二组合物的剂量为小于约1,000mg，或小于约800mg，或小于约600mg，或小于约500mg，或小于约400mg，或小于约300mg，或小于约200mg，或小于约100mg，或小于约50mg，或小于约40mg，或小于约30mg，或小于约25mg，或小于约20mg，或小于约15mg，或小于约10mg，或小于约5mg，或小于约2mg，或小于约1mg，或小于约0.5mg，及其任何和全部完整或部分增加。

可以以单位剂量形式配制用于在本发明的方法中使用的组合物。术语“单位剂量形式”是指适合作为经历治疗的患者的单位剂量的物理分散单元，其中每个单元含有任选地与适合的药物载体结合的计算以产生所期望的治疗效果的预定量的活性材料。单位剂量形式可以用于单一日剂量或者多个日剂量(例如，每天约1至4次或更多次)之一。当使用多个日剂量时，对于每个剂量，单位剂量形式可以是相同或不同的。

在一个实施方式中，每天向患者施用本发明的组合物约1至约5次或更多次。在多个实施方式中，向患者施用本发明的组合物，每天1-7次，每隔一天1-7次，每3天1-7次，每周1-7次，每两周1-7次和每月1-7次。对于本领域技术人员将显而易见的是基于多种因素，包括但不限于年龄、要治疗的疾病或病症、要治疗的疾病或病症的严重程度、性别、整体健康状况和其它因素，本发明的多种组合的组合物的施用频率将在个体间是不同的。因此，本发明不应被视为受限于任何具体剂量施用方案，并且将考虑有关患者的所有其它因素，通过医学专业人员确定要施用于任何患者的确切剂量和组成。

在其中患者状态确实改善的情况下，根据医生的判断，任选地连续提供本发明的抑制剂的施用；作为另外一种选择，将要施用的药物剂量暂时降低或暂时终止一段时间(即“药物假期”)。药物假期的长度任选地在2天至1年之间改变，仅举例来说，其包括2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天或365天。药物假期期间的剂量减少包括10％-100％，仅举例来说，其包括：10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

一旦发生患者状况的改善，则如有必要，施用维持剂量。随后，可以将剂量或施用频率或两者降低至维持疾病改善的水平。在一些实施方式中，患者可能以长期的方式或者在疾病或病症的任何复发的情况下，需要间歇治疗。

任选地，在细胞培养物或实验动物中确定这些治疗方案的毒性和治疗效力，其包括但不限于LD

在一个实施方式中，本发明涉及包装的药物组合物，其包含容纳单独或与第二药剂组合的治疗有效量的本发明的组合物的容器；和用于使用组合物来治疗或预防患者中的疾病或感染的说明书。

可以与本领域已知的常规赋形剂，即适合于口服、肠胃外、鼻部、静脉内、皮下、肠内或任何其它适合的施用形式的药学上可接受的有机或无机载体物质混合使用制剂。药物制剂可以灭菌并且如果需要，可以与助剂，例如，润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于影响渗透压缓冲剂的盐、着色剂、调味剂和/或芳香物质等混合。当需要时，它们还可以与其它活性剂，例如，其它止痛剂组合。

本发明的任何组合物的施用途径包括口服、鼻部、直肠、阴道内、肠胃外、口腔、舌下或局部施用。可以将用于本发明中的组合物配制用于通过任何适合的途径施用，如用于口服或肠胃外施用，例如，透皮、经粘膜(例如，舌下、舌、(经)口腔、(经)尿道、阴道(例如，经阴道和阴道周)、鼻(内)和(经)直肠)、膀胱内、肺内、十二指肠内、胃内、鞘内、皮下、肌内、皮内、动脉内、静脉内、支气管内、吸入和局部施用。

适合的组合物和剂量形式包括例如片剂、胶囊剂、囊片剂(caplets)、丸剂、软胶囊剂、锭剂、分散剂、混悬剂、溶液、糖浆剂、颗粒剂、珠剂、透皮贴片、凝胶、粉末剂、颗粒剂、乳浆剂、糖锭、乳膏剂、糊剂、硬膏剂、洗剂、盘剂(discs)、栓剂、用于鼻部或口腔施用的液体喷雾剂、用于吸入的干粉或雾化制剂、用于膀胱内施用的组合物和制剂等。应理解将在本发明中有用的制剂和组合物不局限于本文所述的特定制剂和组合物。

本发明的任何组合物的施用途径包括口服、直肠、透皮、经粘膜(例如，舌下、舌、(经)口腔、(经)尿道、阴道(例如，经阴道和阴道周)、(经)直肠、膀胱内和局部施用。

药物局部施用的障碍是表皮的角质层。角质层是由蛋白、胆固醇、鞘脂类、游离脂肪酸和多种其它脂质组成的高耐受性层，并且角质层包括角化细胞和活细胞。限制组合物通过角质层的渗透速率(通量)的因素之一在于可以加载或应用于皮肤表面上的活性物质的量。单位皮肤面积上应用的活性物质的量越大，皮肤表面和皮肤下层之间的浓度梯度越大，并且进而，活性物质通过皮肤的扩散作用力越强。因此，在其它条件都相同的情况下，与具有较低浓度的制剂相比，含有更高浓度的活性物质的制剂更可能导致活性物质通过皮肤的渗透，并且活性物质更多且速率更均一。

适合于局部施用的制剂包括但不限于液体或半液体制剂，如擦剂、凝胶、洗剂、水包油或油包水乳液，如乳膏、软膏或糊剂，和溶液或混悬液。局部可施用的制剂可以例如在溶剂中包含约1％至约10％(w/v)的活性成分，尽管活性成分的浓度可以高达该活性成分在溶剂中的溶解度极限。用于局部施用的制剂还可以包含一种或多种本文所述的其它成分。

可以使用渗透增强剂。这些材料提高了药物穿过皮肤的渗透速率。本领域中典型的增强剂包括乙醇、单月桂酸甘油酯、PGML(聚乙二醇单月桂酸酯)、二甲亚砜(DMSO)等。其它增强剂包括油酸、油醇、乙氧基二甘醇、月桂氮酮、烷烃羧酸、二甲亚砜、极性脂或N-甲基-2-吡咯烷酮。

用于本发明的一些组合物的局部递送的一种可用的媒介物可以含有脂质体。脂质体的组成以及它们的使用在本领域中是已知的(例如，参见Constanza，美国专利号6,323,219)。

在替代性实施方式中，局部活性药物组合物可以任选地与其它成分合并，如佐剂、抗氧化剂、螯合剂、表面活性剂、起泡剂、润湿剂、乳化剂、稠化剂、缓冲剂、防腐剂等。在另一个实施方式中，在组合物中包含了透过或渗透增强剂，并且相对于缺少透过增强剂的组合物，其在改善活性成分进入并穿过角质层的经皮渗透中是有效的。多种透过增强剂是本领域技术人员已知的，包括油酸、油醇、乙氧基二甘醇、月桂氮酮、烷烃羧酸、二甲亚砜、极性脂或N-甲基-2-吡咯烷酮。在另一个方面，组合物还可以包含水溶增溶剂，其起作用以提高角质层的结构异常，并因此提高了穿过角质层的输送。多种水溶增溶剂，如异丙醇、丙二醇或二甲苯磺酸钠是本领域技术人员已知的。

应以对于实现所期望的变化有效的量应用局部活性药物组合物。如本文所使用的“有效的量”应表示足以覆盖其中期望变化的皮肤表面区域的量。活性组合物应以按重量体积计约0.0001％至约15％的组合物的量存在。更优选地，它应以约0.0005％至约5％的组合物的量存在；最优选地，它应以约0.001％到约1％的组合物的量存在。这些组合物可以是合成或天然来源的。

对于口服施用，适合的形成包括片剂、糖锭、液体、滴剂、栓剂或胶囊剂，锭剂和软明胶胶囊。可以根据本领域中已知的任何方法制备配制用于口服使用的组合物，并且这些组合物可以含有选自由适合于片剂生产的惰性、无毒药物赋形剂组成的组的一种或多种试剂。这些赋形剂包括例如惰性稀释剂，如乳糖；造粒剂和崩解剂，如玉米淀粉；粘结剂，如淀粉；和润滑剂，如硬脂酸镁。片剂可以是未涂覆的或者可以通过已知技术涂覆它们以用于活性成分的优雅(elegance)或延迟释放。用于口服使用的制剂还可以作为其中活性成分与惰性稀释剂混合的硬明胶胶囊存在。

对于口服施用，本发明的组合物可以处于使用药学上可接受的赋形剂，通过传统方法制备的片剂或胶囊剂的形式，药学上可接受的赋形剂如粘结剂(例如，聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如，玉米淀粉、乳糖、微晶纤维素或磷酸钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如，淀粉乙醇酸钠)；或者润湿剂(例如，月桂基硫酸钠)。如果需要，可以使用适合的方法和涂覆材料涂覆片剂，如得自Colorcon,West Point,Pa.的OPADRY

造粒技术在药物领域中是熟知的用于修饰活性成分的起始粉末或其它颗粒材料的技术。粉末通常与粘结剂材料混合成较大的持久自由流动结块或颗粒，其称为“造粒”。例如，使用溶剂的“湿法”造粒，通常其特征在于将粉末与粘结剂材料合并，并在导致形成湿颗粒物质的条件下，用水或有机溶剂润湿，然后必需将溶剂从湿颗粒物质中蒸发掉。

熔融造粒包括在基本不存在所添加的水或其它液体溶剂的情况下，在室温下为固体或半固体的材料(即，具有相对低的软化点或熔点范围)的使用以促进粉末或其它材料造粒。当加热至处于熔点范围的温度时，低熔点固体液化以起到粘结剂或造粒媒介的作用。液化固体本身在它所接触的粉末材料表面上展开，并且通过冷却，形成其中将初始材料结合在一起的固体颗粒物质。然后，可以将所得熔融颗粒提供至压片机或包封用于制备口服剂量形式。熔融造粒通过形成固体分散体或固体溶液改善了活性物质(即药物)的溶解速率和生物利用度。

美国专利号5,169,645公开了具有改善的流动性的含有直接可压缩蜡的颗粒。当将蜡在具有某些流动性改善添加剂的熔体中混合，随后使混合物冷却并成粒时，获得了颗粒剂。在某些实施方式中，仅蜡本身在蜡和添加剂的熔融组合中熔化，并且在其它情况下，蜡和添加剂两者均熔化。

本发明还包括多层片剂，其包含提供用于本发明的一种或多种组合物的迟释的层，和提供用于G-蛋白受体相关疾病或病症的治疗的药物的立即释放的其它层。使用蜡/pH-敏感型聚合物混合物，可以获得其中包埋了活性成分的胃不溶性组合物，从而确保其迟释。

对于肠胃外施用，可以将本发明的组合物配制用于注射或输注，例如，静脉内、肌内或皮下注射或输注，或者用于在丸剂剂量和/或连续输注中施用。可以使用处于油性或水性媒介物中的混悬液、溶液或乳液，其任选地含有其它配置试剂，如混悬剂、稳定剂和/或分散剂。

本发明的其它剂量形式包括如美国专利号6,340,475；6,488,962；6,451,808；5,972,389；5,582,837和5,007,790中所述的剂量形式。本发明的其它剂量形式还包括如美国专利申请号20030147952；20030104062；20030104053；20030044466；20030039688和20020051820中所述的剂量形式。本发明的其它剂量形式还包括如PCT申请号WO 03/35041；WO 03/35040；WO 03/35029；WO 03/35177；WO 03/35039；WO 02/96404；WO 02/32416；WO01/97783；WO 01/56544；WO 01/32217；WO 98/55107；WO 98/11879；WO 97/47285；WO 93/18755和WO 90/11757中所述的剂量形式。

在一个实施方式中，本发明的制剂可以是但不限于短期、快速补偿(rapid-offset)且受控的，例如，缓释、迟释和脉冲释放制剂。

术语缓释是指在延长的一段时间内提供药物的逐渐释放并且尽管不必需，但是导致在延长的时间段内保持基本恒定的血液药物水平的药物制剂。一段时间可以是长达一天、一周或一个月或更长时间，并且应该是比处于丸剂形式施用的相同量的药剂的释放更长的释放。在本文中以其常规含义使用术语迟释来表示在药物施用后的一定延迟之后提供药物初始释放，并且尽管不必需，但是包括约10分钟至长达约12小时的延迟的药物制剂。

对于缓释，可以将组合物与向组合物提供缓释性质的适合的聚合物或疏水材料一起配制。照此，可以以微粒形式，例如，通过注射，或者通过植入以薄片或圆盘的形式施用用于在本发明的方法中使用的组合物。

在本发明的一个实施方式中，使用缓释制剂，将本发明的组合物单独或与另一种药物试剂组合施用于患者。

术语脉冲释放是指在药物施用后以产生药物的脉冲血浆谱的方式提供药物释放的药物制剂。

术语立即释放是指在药物施用后立即提供药物释放的药物制剂。

如本文所使用的，短期是指药物施用后长达且包括约8小时、约7小时、约6小时、约5小时、约4小时、约3小时、约2小时、约1小时、约40分钟、约20分钟或约10分钟的任何一段时间，或其任何或全部的整体或部分增加。

如本文所使用的，快速补偿是指药物施用后长达且包括约8小时、约7小时、约6小时、约5小时、约4小时、约3小时、约2小时、约1小时、约40分钟、约20分钟或约10分钟的任何一段时间，及其任何或全部的整体或部分增加。

至多使用常规实验，本领域技术人员将认识到或者能够确定本文所述的具体程序、实施方式、权利要求和实施例的多种等价形式。认为这些等价形式在本发明的范围内并且被所附权利要求覆盖。例如，应理解用本领域承认的替代并且至多使用常规实验对反应条件，包括但不限于反应时间、反应规模/体积和实验试剂，如溶剂、催化剂、压力、大气条件，例如，氮气氛和还原/氧化剂的修改在本申请的范围内。

应理解无论在本文的任何位置提供值和范围，这些值和范围所涵盖的所有值和范围表示涵盖在本发明的范围内。此外，本申请还考虑了属于这些范围内的所有的值以及值的范围的上限或下限。

本发明的抗淀粉样蛋白抗体可以单独施用或与另一种疗法组合施用。例如，本发明的组合疗法可以与消毒剂、抗菌剂、抗生素或杀菌剂组合在表面，如医疗装置和留置装置，包括支架、导管、腹膜透析管、引流装置、人工关节、牙科植入物等上使用。

在一个实施方式中，本发明提供了协同组合疗法，其包括本发明的抗淀粉样蛋白抗体和可以局部施用以用于治疗微生物定殖表面或感染的抗生素治疗。

在另一个方面，本发明提供了治疗受试者中微生物感染的方法，其包括向受试者单独、同时或顺序施用治疗有效量的本发明的抗淀粉样蛋白抗体和抗生素治疗。在一个实施方式中，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的组合物，其包含本发明的抗淀粉样蛋白抗体和本文所述的抗生素治疗。在一个实施方式中，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的局部制剂，其包含本发明的抗淀粉样蛋白抗体和本文所述的抗生素治疗和一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，其中在整个说明书中，在本文中定义了局部制剂和药学上可接受的载体或赋形剂。在一个实施方式中，感染是局部感染。局部感染是受试者的表面或局部区域，包括皮肤、眼睛、粘膜、腔表面等上的感染。在一个实施方式中，局部感染是皮肤上的感染。在一个实施方式中，局部感染处于伤口、溃疡和病变的形式。在一个实施方式中，微生物是细菌。

在一个实施方式中，本发明提供了使微生物去定殖的方法，其包括使微生物单独、同时或顺序接触本发明的抗淀粉样蛋白抗体和抗生素治疗。在一个实施方式中，所述方法包括使微生物接触包含本发明的抗淀粉样蛋白抗体和本文所述的抗生素治疗的组合物。在一个实施方式中，所述方法包括使微生物接触局部制剂，局部制剂包含本发明的抗淀粉样蛋白抗体和本文所述的抗生素治疗和一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，其中在整个说明书中，在本文中定义了局部制剂和药学上可接受的载体或赋形剂。根据本文所述的任何方法，微生物是细菌。

在一个实施方式中，生物膜形成位于装置表面上。在一个实施方式中，装置是植入的导管、人工心瓣、心脏起搏器、隐形眼镜、脑脊髓液分流器、关节置换物或血管内管路(intravascular line)。在一个实施方式中，生物膜形成位于受试者的表面上或组织中。在一个实施方式中，生物膜形成位于皮肤、眼睛、粘膜、腔表面等上。

在一个实施方式中，本发明提供了破坏或毁坏或抑制或降低微生物的生物膜形成的方法，其包括使微生物单独、同时或顺序接触包含本发明的抗淀粉样蛋白抗体的组合物和包含抗生素的组合物。在一个实施方式中，所述方法包括使微生物接触包含本发明的抗淀粉样蛋白抗体和本文所述的抗生素的组合物。在一个实施方式中，所述方法包括使微生物接触局部制剂，所述局部制剂包含本发明的抗淀粉样蛋白抗体和本文所述的抗生素治疗和一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，其中在整个说明书中，在本文中定义了药学上可接受的载体或赋形剂。在一个实施方式中，微生物是细菌。

本文所述的这些方法决不是包括所有方法的，并且适合特定应用的其它方法将对常规技术人员是显而易见的。此外，可以通过与已知发挥所期望的效果的组合物的类似性，进一步估计组合物的有效量。

实验实施例

通过参考以下实验实施例进一步详细描述了本发明。除非另作说明，否则仅出于说明的目的提供了这些实施例，并且它们不意欲限制。因此，本发明决不应视为受限于以下实施例，而是应视为涵盖由于本文所提供的教导内容而变得显而易见的任何和所有改变。

来自原核和真核来源的淀粉样蛋白不共有一级序列结构，然而来自两个系谱的淀粉样蛋白共有共同的保守β折叠结构(Rapsinski等人,2013,J Biol Chem,17；288(20):14178-88)。此外，细菌和宿主淀粉样蛋白两者结合并激活TLR2。与淀粉样纤维和先天免疫细胞上的TLR2的结合类似(Tükel等人,2010,Cell Microbiol,12(10):1495-505)，淀粉样蛋白β的结合在阿尔茨海默氏病中结合(Liu等人,2012,J Immunol,188(3):1098-107；Udan等人,2008,J Neurochem,104(2):524-33)并且血清淀粉样蛋白A在动脉粥样硬化中结合(Seidl等人,2017,PLoS One,12(3):e0171711)。测试了单克隆抗体结合至并且抑制涉及生物膜形成的细菌淀粉样蛋白淀粉样纤维的纤维化的能力。使用多学科方法，鉴别了对淀粉样蛋白-β显示出反应性并且在鼠伤寒沙门氏菌生物膜的背景中显示出抗淀粉样纤维性质的多种人单克隆抗体。鼠伤寒沙门氏菌(STM)生物膜与mAb的温育改变了生物膜结构，使生物膜不稳定并且最终减少了生物量。所产生的对生物膜结构和稳定性的改变使得生物膜与未接受mAb处理的生物膜相比，对使用抗生素、DNA酶以及细菌的巨噬细胞吸收处理更敏感。整体上，已鉴别了通过使用抗淀粉样蛋白mAb靶向鼠伤寒沙门氏菌生物膜的生物膜内的淀粉样纤维导致生物膜结构、稳定性改变并且整体导致生物膜减小的新型治疗方法。

现将描述实验方法和结果。

使生物膜在存在0.5mg/ml ALZ.3H3的情况下，在28℃建立72小时。生长后，用Syto9对生物膜染色并使用CSLM成像。使用ImageJ，通过创建3D表面图来检查三维结构。单克隆抗体ALZ.3H3的温育改变了形成在显示出致密和压紧结构的野生型鼠伤寒沙门氏菌生物膜的平均厚度(20μM)以上展开的散布的生物膜形貌的生物膜结构(图1A)。还在抗-csg处理中观察到了这种疏松的基质，而用对照A6处理的生物膜保持完整且未破坏(图1A)。为了定量通过ALZ.3H3处理所产生的散布的生物膜，通过使用ImageJ，将在野生型鼠伤寒沙门氏菌厚度(20μM)以上的所有颗粒用于设置阈值，并将这些阈值参数应用于后续处理(图1B)。通过对颗粒计数，通过用ALZ.3H3处理，颗粒数目显著升高(图1C)。为此，通过将从生物膜回收的上清液涂板，从ALZ.3H3的生物膜上清液回收了显著更多的细菌。从上清液回收的细菌表示易于与生物质分离的疏松的散布的生物膜基质。整体上，该数据表明通过破坏整体生物膜基质结构，与ALZ.3H3的温育改变了生物膜结构。

为了确定ALZ.3H3是否可以降低预先建立的鼠伤寒沙门氏菌生物膜的生物膜形成，向24小时预先建立的鼠伤寒沙门氏菌生物膜中加入0.5mg/ml ALZ.3H3另外24小时，或者向48小时预先建立的生物膜加入0.5mg/ml ALZ.3H3另外24小时。然后，将这些生物膜分别与48和72小时的未暴露于ALZ.3H3的鼠伤寒沙门氏菌生物膜进行比较(图2A)。用Syto9对生物膜染色，并使用CSML成像。彻底清洗生物膜以确定ALZ.3H3对生物膜结构的影响。与48小时的野生型鼠伤寒沙门氏菌生物膜相比，尽管仍建立并且生物膜基质不完整，但是对ALZ.3H3暴露另外24小时的24小时预先建立的生物膜开始显示出更散布的基质，相比之下，48小时的生物膜更紧实(图2B)。当将48小时预先建立的生物膜与0.5mg/ml ALZ.3H3温育另外24小时时，该趋势继续，其中与未接受ALZ.3H3处理的72小时完全形成的鼠伤寒沙门氏菌生物膜相比，所述生物膜基质更分散(图2B)。使用更早描述的阈值技术，对野生型鼠伤寒沙门氏菌厚度以上的颗粒数目计数。即使早至24小时，与ALZ.3H3的温育将颗粒数目提高至野生型鼠伤寒沙门氏菌之上，并且当将48小时预先建立的鼠伤寒沙门氏菌生物膜与ALZ.3H3温育24小时时，颗粒数目也升高(图2C)。该数据表明早在添加ALZ.3H3之后24小时，ALZ.3H3影响预先建立的鼠伤寒沙门氏菌生物膜的结构。

实施在鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌MC4100、肠炎沙门氏菌和大肠杆菌UTI89的生物膜生长期间添加的3H3(0.1ug/ml、1ug/ml、10ug/ml、25ug/ml、50ug/ml、250ug/ml、500ug/ml和未处理的)的结晶紫测定剂量曲线，并且在570nm吸光度确定生物量(图3)。

对在存在(10ug/ml、25ug/ml、50ug/ml、250ug/ml、500ug/ml)或不存在(未处理的)3H3的情况下生长的鼠伤寒沙门氏菌的生物膜实施共聚焦分析。用syto9(对于细菌的绿色核酸染色)和淀粉样蛋白染料刚果红(红色淀粉样纤维)对生物膜染色，并使用Leica TCS共聚焦显微镜，以63x成像。使用ImageJ 3D查看器软件创建生物膜3D重构(图4A)。使用LeicaTCS共聚焦显微镜软件测量在存在(10ug/ml、25ug/ml、50ug/ml、250ug/ml、500ug/ml)或不存在(未处理)3H3的情况下生长的鼠伤寒沙门氏菌的生物膜厚度(um)(图4C)。

通过与硫磺素T(ThT)的温育监测单体向成熟的淀粉样纤维原纤维的形成。ThT的荧光随着它与淀粉样蛋白原纤维的结合而升高，从而使得能够通过光谱法测量淀粉样蛋白形成过程。可以通过三阶段S形曲线限定淀粉样蛋白纤维的形成(Dueholm等人,2011,Biochemistry,50(39):8281-90；Wang等人,2007,J Biol Chem,282(6):3713-9)。在第一阶段，单体亚基缓慢自结合，并且ThT荧光最小(Naiki等人,1991,Lab Invest,65(1):104-10)。反应随单体种子低聚而指数级升高，并持续伸长(Naiki等人,1991,Lab Invest,65(1):104-10)。该过程的特征在于ThT荧光快速升高(Naiki等人,1991,Lab Invest,65(1):104-10)。低聚物伸长成成熟的原纤维并且Tht荧光达到峰值(Dueholm等人,2011,Biochemistry,50(39):8281-90；Wang等人,2007,J Biol Chem,282(6):3713-9)。一旦所有单体已消耗并且原纤维伸长停止，则该反应达到平台期(Naiki等人,1991,Lab Invest,65(1):104-10)。将天然自结合和纤维化的组氨酸标签化的CsgA(His-CsgA)与0.5mg/mlALZ.3H3一起温育并且使用ThT监测纤维化反应。作为对照，将合成肽CsgAR

将STM或UTI89在不存在或存在3H3(250ug/ml、125ug/ml、50ug/ml、25ug/ml、10ug/ml、1ug/ml)以及0.5mg/ml对照A6或抗登革热抗体的情况下，在26C，在无菌96孔板中生长72小时。还作为阴性对照使鼠伤寒沙门氏菌淀粉样纤维突变体(csgBA)和UTI89淀粉样纤维突变体(csgBA)生长。与涉及STM的实验的结果更一致，而与涉及使用UTI89的实验相差更大(图6)。

生物膜提高了细菌对抗生素的抗性(Keren等人,2004,FEMS Microbiol Lett,230(1):13-8；Brown等人,1988,J Antimicrob Chemother,22(6):777-80；Stewart,2002,IntJ Med Microbiol,292(2):107-13)。为了提高细菌生物膜的清除，通过使用ALZ.3H3改变了生物膜结构，然后对生物膜进行抗生素处理以杀死散布的生物膜内的细菌。为了完成实验，在存在或不存在0.5mg/ml ALZ.3H3的情况下建立了鼠伤寒沙门氏菌生物膜，然后将生物膜对氨比西林暴露另外24小时。由于DNA酶是鼠伤寒沙门氏菌生物膜的其它组成组分，因此将野生型或ALZ.3H3温育的生物膜对X DNA酶处理暴露另外24小时。然后，用Syto9对生物膜染色，并使用CSML显影。为了检查生物膜结构，避免过量的清洗步骤。由于抗生素处理对所生长的生物膜相对无效，因此当在生物膜建立后用氨比西林或DNA酶处理野生型生物膜时，观察到整体生物膜外形无变化。然而，当在存在ALZ.3H3和抗生素处理的情况下温育鼠伤寒沙门氏菌生物膜时，生物膜的量显著降低至低于检测限的水平(图7)。

在不存在或存在3H3(250ug/ml、125ug/ml、50ug/ml、25ug/ml、10ug/ml、1ug/ml)下以及在使用0.5mg/ml对照A6抗体的情况下，在无菌玻璃盖玻片上，在无菌24孔培养皿中，在26C下生长72小时的鼠伤寒沙门氏菌(STM)或大肠杆菌UTI89的生物膜。还作为阴性对照使鼠伤寒沙门氏菌淀粉样纤维突变体(csgBA)和UTI89淀粉样纤维突变体(csgBA)生长。在选择条件下，将生物膜与30ug/ml氨比西林(Amp)在26C温育另外24小时。为了确定单位生物膜的集落形成单位数目(CFU/生物膜)，将用作生物膜在其上生长的表面的无菌玻璃盖玻片置于含有3ml无菌PBS的无菌15ml圆锥管中。使用ThermoFisher超声波粉碎仪，以设置4，将生物膜超声处理10秒。先前实验确认在先前提及的环境中的超声处理不杀死细菌。通过在无菌PBS中以1:10连续稀释，并在琼脂平板上点涂板来对细菌计数。当STM和UTI89与3H3一起生长时，观察到CFU/生物膜减小，并且当添加氨比西林另外24小时时，观察到CFU/生物膜的另外减小(尽管这种减小可以随着更长的氨比西林暴露时间而提高)(图8)。

为了研究生理学相关模型中ALZ.3H3消除生物膜生长的能力，使鼠伤寒沙门氏菌生物膜在存在或不存在ALZ.3H3的情况下在医用级导管上生长，并且研究了对导管相关生物膜结构的影响。使沙门氏菌属(Salmonella)生物膜单独或在存在ALZ3H3抗体的情况下在无菌i.v.导管上生长。使用GFP将细菌标记为绿色。将刚果红用于对淀粉样纤维淀粉样蛋白原纤维染色。当在存在0.5mg/ml ALZ3H3 mAb的情况下生长72小时时，生物膜是散布的。无明显的刚果红染色，表明在生物膜上缺少淀粉样纤维的纤维(图9)。为了研究ALZ3H3和氨比西林对生物膜生长的组合作用，在导管插入前24小时，在饮用水中向小鼠提供1mg/ml氨比西林。在插入Balb/C小鼠背侧部之前，将无菌i.v.导管与鼠伤寒沙门氏菌一起温育24小时。在导管插入后24和28小时，将100ug ALZ3H3经皮插入导管腔中。在导管插入后72小时，使小鼠安乐死并除去导管。使用GFP将细菌标记为绿色。将刚果红用于对淀粉样纤维淀粉样蛋白原纤维染色。导管自发绿色荧光。未处理的鼠伤寒沙门氏菌生物膜紧密粘附至导管壁，其在整个生物量中具有淀粉样纤维，而用ALZ3H3处理的生物膜具有散布的形态，其具有少量淀粉样纤维。ALZ3H3和氨比西林的组合处理显著降低了导管上的生物膜生长，其显示出少量至无淀粉样蛋白掺入(图10)。

导管定殖了鼠伤寒沙门氏菌(STM)生物膜，并且将一个定殖的导管插入15只C67BL/6小鼠(群组：5只小鼠仅接受STM导管，5只小鼠接受STM导管并经皮注射100ug 3H3，并且5只小鼠接受STM导管、经皮注射100ug 3H3并且在饮用水中无限制提供1mg/ml氨比西林(Amp)中的每一只中。(**在导管插入前24小时，将氨比西林加入至饮用水中)。从导管插入后24小时开始，在适当的小组中，在导管插入后每24小时，将100ug/ml 3H3经皮插入到导管腔中。每天监测小鼠存活(图11)。

细菌在自然界中并且在感染期间形成了被称为生物膜的多细胞群落以保护自身对抗损害，包括抗微生物剂和免疫系统。生物膜的胞外基质(ECM)由多糖、DNA和蛋白，包括淀粉样蛋白组成。淀粉样蛋白是通过交叉的β折叠二级结构限定的天然存在的不溶性纤维蛋白。刚果红是结合至淀粉样蛋白的特异性染料并且可以用于鉴别细菌性淀粉样蛋白。细菌利用这些蛋白来修饰它们的生物膜。研究最清楚的细菌淀粉样蛋白之一是淀粉样纤维，其具体地由肠杆菌科(Enterobacteriaceae)细菌产生。显示出泛-淀粉样蛋白结合活性的人单克隆抗体(mAb)抑制大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌的体外和体内的生物膜形成。

淀粉样蛋白β衍生可溶性配体(ADDL)，也称为球聚体，它是由Aβ42产生的(图12)。将这些ADDL用于筛选结合淀粉样蛋白-特异性表位的人mAb。从临床诊断为轻度-中度阿尔茨海默氏病的患者的B细胞产生杂交瘤，并且将三种新克隆的mAb(4G1、4A6和2C10)与ALZ.3H3相比(图13)。附着至ELISA板的单体Aβ42可以采用对构象淀粉样蛋白表位特异的mAb所识别的构象(Levites等人,2015,J Neurosci,35(16):6265–6276)。

通过表面等离子体共振(SPR)测量MAb对Aβ42构象体的结合(表1)。使用Qdat软件获得计算的亲合常数(K

通过SPR测定人mAb对于对聚集的胰岛淀粉样肽IAPP与分离自AD脑匀浆的τ双股螺旋形细丝(τPHF)的结合(图14)。对于IAPP，在本研究中使用的抗体浓度为110nM，并且对于τ-PHF为66.7nM。3H3和4G1mAb对于τPHF的结合是明显的，这与泛-淀粉样蛋白表位的识别一致。

测定了4G1和3H3 mAb对τ40HEK-293和HEK-293细胞系的结合(图15)。

测定了单独的淀粉样蛋白β低聚物或在存在抗淀粉样蛋白mAb、3H3、4G1和4A6的情况下的Aβ42的纤维化(图16)。

鼠疫耶尔森氏菌的肠杆菌科成员，它是疾病鼠疫的病因。鼠疫耶尔森氏菌主要感染啮齿类，但是它还可以感染其它哺乳动物宿主，包括人的广泛组合。病原体使用跳蚤作为载体，并且据信大部分传播事件是通过蚤咬发生的。因此，细菌的成功部分基于其适应以及对哺乳动物和跳蚤宿主中所遇到的不同的温度环境的快速反应的能力。鼠疫耶尔森氏菌在跳蚤宿主中形成生物膜，并且这种特性已与人中的致命感染有关。此外，还在感染期间所产生的肉芽瘤中观察到鼠疫耶尔森氏菌生物膜。然而，这些生物膜的性质仍有待探索。

已在鼠疫耶尔森氏菌中鉴别了一些质粒和染色体编码的病原性基因，包括参与刚果红结合(Crb+表型)中的那些，其形成了生物膜形成的基础。然而，这些研究尚未鉴别用作鼠疫耶尔森氏菌生物膜骨架的淀粉样蛋白。

使用蛋白质组学方法和已建立通过序列分析鉴别淀粉样蛋白的软件，设计实验以鉴别和验证感染期间参与生物膜形成的耶尔森氏菌属(Yersinia)淀粉样蛋白。然后，选择并验证候选蛋白。产生重组蛋白并使用功能测定，包括硫磺素T结合测定、刚果红光谱法和电子显微镜测试它们的淀粉样蛋白活性。

在淀粉样蛋白的验证之后，将产生靶向这些蛋白的抗体。使用标准生物膜测定方法，测试所产生的mAb毁坏生物膜，包括假结核性耶尔森氏菌(Y.pseudotuberculosis)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Y.enterocolitica)和大肠杆菌生物膜的能力以及它们的体外抗生物膜活性。使用导管-生物膜模型，进一步测试了显示出强抗-泛-淀粉样蛋白活性的抗体对假结核性耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌和大肠杆菌的体内活性。显示出最高活性，体外和体内活性两者的mAb是对抗鼠疫耶尔森氏菌的潜在治疗抗体。

SEQ ID NO:1：ALZ.3H3重链(核苷酸)

SEQ ID NO:2：ALZ.3H3重链(氨基酸)

SEQ ID NO:3：ALZ.3H3重链可变区(核苷酸)

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SEQ ID NO:5：ALZ.3H3重链(核苷酸)，在Met之前具有4nt

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V-区：SEQ ID NO:5的核苷酸62..357

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V-J-区

V-区

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3'V-区(SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51)

N-区SEQ ID NO:34的核苷酸289..290

5'J-区SEQ ID NO:34的核苷酸291..295

J-区(SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53)

FR4-IMGT(SEQ ID NO:54；SEQ ID NO:55)

SEQ ID NO:56ALZ.4A6重链(核苷酸)

SEQ ID NO:57ALZ.4A6重链(氨基酸)

SEQ ID NO:58ALZ.4A6轻链(核苷酸)

SEQ ID NO:59ALZ.4A6轻链(氨基酸)

SEQ ID NO:60ALZ.4G1重链(核苷酸)

SEQ ID NO:61ALZ.4G1重链(氨基酸)

SEQ ID NO:62ALZ.4G1轻链(核苷酸)

SEQ ID NO:63ALZ.4G1轻链(氨基酸)

本文所引用的每篇专利、专利申请和公开的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。尽管已参考具体实施方式公开了本发明，但是显然在不背离本发明的真正精神和范围的情况下，本领域其它技术人员可以设计本发明的其它实施方式和变化。所附权利要求旨在视为包括所有这些实施方式和等价变化。

序列表

<110> 英联邦高等教育系统天普大学（Temple University-Of the CommonwealthSystem of Higher

Education）

兰肯瑙医学研究所（Lankenau Institute of Medical Research）

卡戈拉·威尔逊（Wilson, Cagla）

斯科特·德桑（Dessain, Scott）

<120> 使用抗淀粉样蛋白单克隆抗体根除细菌生物膜

<130> 206017-0178-00WO

<150> US 62/676,390

<151> 2018-05-25

<160> 63

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 457

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.3H3重链

<400> 1

atggagtttg ggctgagctg ggtattcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcaa 60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120

tgtgcagcct ctggattctc cttcagtacc tatggcatgc actgggtccg ccaggctcca 180

ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttatt tcatatgatg gaagtaggaa atactatgca 240

gacaccggga agggccgatt caccatctcc agagacaact ccaagaacac gctgtatttg 300

gaaatgaacg gcctgagagc tgaagacacg gctgtgtatc actgtgcgaa agatcttaga 360

cgagaactcg ggtttggcaa tcgggactat cactattatg gtatggacgc ctggggccaa 420

gggaccacgg tcaccgtctc ctcagcaagc accaagg 457

<210> 2

<211> 152

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.3H3重链

<400> 2

Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln

20 25 30

Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe

35 40 45

Ser Thr Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Arg Lys Tyr Tyr Ala

65 70 75 80

Asp Thr Gly Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

85 90 95

Thr Leu Tyr Leu Glu Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr His Cys Ala Lys Asp Leu Arg Arg Glu Leu Gly Phe Gly Asn Arg

115 120 125

Asp Tyr His Tyr Tyr Gly Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

130 135 140

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

145 150

<210> 3

<211> 400

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.3H3重链可变区

<400> 3

caagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt ctccttcagt acctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atttcatatg atggaagtag gaaatactat 180

gcagacaccg ggaagggccg attcaccatc tccagagaca actccaagaa cacgctgtat 240

ttggaaatga acggcctgag agctgaagac acggctgtgt atcactgtgc gaaagatctt 300

agacgagaac tcgggtttgg caatcgggac tatcactatt atggtatgga cgcctggggc 360

caagggacca cggtcaccgt ctcctcagca agcaccaagg 400

<210> 4

<211> 133

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.3H3重链可变区

<400> 4

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Thr Gly

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Glu Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr His Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Leu Arg Arg Glu Leu Gly Phe Gly Asn Arg Asp Tyr His

100 105 110

Tyr Tyr Gly Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser Ala Ser Thr Lys

130

<210> 5

<211> 461

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，重链（核苷酸），在Met前具有4nt

<400> 5

cgccatggag tttgggctga gctgggtatt cctcgttgct cttttaagag gtgtccagtg 60

tcaagtgcag ctggtggagt ctgggggagg cgtggtccag cctgggaggt ccctgagact 120

ctcctgtgca gcctctggat tctccttcag tacctatggc atgcactggg tccgccaggc 180

tccaggcaag gggctggagt gggtggcagt tatttcatat gatggaagta ggaaatacta 240

tgcagacacc gggaagggcc gattcaccat ctccagagac aactccaaga acacgctgta 300

tttggaaatg aacggcctga gagctgaaga cacggctgtg tatcactgtg cgaaagatct 360

tagacgagaa ctcgggtttg gcaatcggga ctatcactat tatggtatgg acgcctgggg 420

ccaagggacc acggtcaccg tctcctcagc aagcaccaag g 461

<210> 6

<211> 75

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR1

<400> 6

caagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctct 75

<210> 7

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR1

<400> 7

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 8

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，CDR1

<400> 8

ggattctcct tcagtaccta tggc 24

<210> 9

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，CDR1

<400> 9

Gly Phe Ser Phe Ser Thr Tyr Gly

1 5

<210> 10

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR2

<400> 10

atgcactggg tccgccaggc tccaggcaag gggctggagt gggtggcagt t 51

<210> 11

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR2

<400> 11

Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala

1 5 10 15

Val

<210> 12

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，CDR2

<400> 12

atttcatatg atggaagtag gaaa 24

<210> 13

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，CDR2

<400> 13

Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Arg Lys

1 5

<210> 14

<211> 114

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR3

<400> 14

tactatgcag acaccgggaa gggccgattc accatctcca gagacaactc caagaacacg 60

ctgtatttgg aaatgaacgg cctgagagct gaagacacgg ctgtgtatca ctgt 114

<210> 15

<211> 38

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR3

<400> 15

Tyr Tyr Ala Asp Thr Gly Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn

1 5 10 15

Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Glu Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp

20 25 30

Thr Ala Val Tyr His Cys

35

<210> 16

<211> 66

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，CDR3

<400> 16

gcgaaagatc ttagacgaga actcgggttt ggcaatcggg actatcacta ttatggtatg 60

gacgcc 66

<210> 17

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，CDR3

<400> 17

Ala Lys Asp Leu Arg Arg Glu Leu Gly Phe Gly Asn Arg Asp Tyr His

1 5 10 15

Tyr Tyr Gly Met Asp Ala

20

<210> 18

<211> 72

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，连接

<400> 18

tgtgcgaaag atcttagacg agaactcggg tttggcaatc gggactatca ctattatggt 60

atggacgcct gg 72

<210> 19

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，连接

<400> 19

Cys Ala Lys Asp Leu Arg Arg Glu Leu Gly Phe Gly Asn Arg Asp Tyr

1 5 10 15

His Tyr Tyr Gly Met Asp Ala Trp

20

<210> 20

<211> 11

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，3'V-区

<400> 20

tgtgcgaaag a 11

<210> 21

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，3'V-区

<400> 21

Cys Ala Lys

1

<210> 22

<211> 12

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，N1-区

<400> 22

tcttagacga ga 12

<210> 23

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，N1-区

<400> 23

Leu Arg Arg

1

<210> 24

<211> 12

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，D-区

<400> 24

actcgggttt gg 12

<210> 25

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，D-区

<400> 25

Leu Gly Phe

1

<210> 26

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，N2-区

<400> 26

caatcgggac tatcactat 19

<210> 27

<211> 6

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，N2-区

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> n是a, c, g, 或t

<400> 27

nrdyhy 6

<210> 28

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，5'J-区

<400> 28

tatggtatgg acgcctgg 18

<210> 29

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，5'J-区

<400> 29

Tyr Gly Met Asp Ala Trp

1 5

<210> 30

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，J-区

<400> 30

tatggtatgg acgcctgggg ccaagggacc acggtcaccg tctcctca 48

<210> 31

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，J-区

<400> 31

Tyr Gly Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

1 5 10 15

<210> 32

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR4

<400> 32

tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc tca 33

<210> 33

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR4

<400> 33

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 34

<211> 591

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.3H3轻链

<400> 34

gctgactcag cctcgctcag tgtccgggtc tcctggacag tcagtaacca tgtcctgcac 60

tggaaccaac agtgatattg gtggttataa ttatgtctcc tggtaccaac aacacccagg 120

caaagccccc aaactcatga tttatgatgt ctataagcgg ccctcagggg tccctgatcg 180

cttctctggc tccaagtctg gcaacacggc ctccctgacc atctctgggc tccaggctga 240

ggatgaggct gattactact gctgctcata tgcaggcacc aacaatttga tattcggcgg 300

agggaccaag ctgaccgtcc taggtcagcc caaggctgcc ccctcggtca ctctgttccc 360

gccctcctct gaggagcttc aagccaacaa ggccacactg gtgtgtctca taagtgactt 420

ctacccggga gccgtgacag tggcctggaa ggcagatagc agccccgtca aggcgggagt 480

ggagaccacc acaccctcca aacaaagcaa caacaagtac gcggccagca gctatctgag 540

cctgacgcct gagcagtgga agtcccacag aagctacagc tgccaggtca c 591

<210> 35

<211> 196

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.3H3轻链

<400> 35

Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Val Thr

1 5 10 15

Met Ser Cys Thr Gly Thr Asn Ser Asp Ile Gly Gly Tyr Asn Tyr Val

20 25 30

Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr

35 40 45

Asp Val Tyr Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Thr Asn Asn Leu

85 90 95

Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala

115 120 125

Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala

130 135 140

Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val

145 150 155 160

Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser

165 170 175

Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr

180 185 190

Ser Cys Gln Val

195

<210> 36

<211> 67

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR1

<400> 36

gctgactcag cctcgctcag tgtccgggtc tcctggacag tcagtaacca tgtcctgcac 60

tggaacc 67

<210> 37

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR1

<400> 37

Ala Asp Ser Ala Ser Leu Ser Val Arg Val Ser Trp Thr Val Ser Asn

1 5 10 15

His Val Leu His Trp Asn

20

<210> 38

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，CDR1

<400> 38

aacagtgata ttggtggtta taattat 27

<210> 39

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，CDR1

<400> 39

Asn Ser Asp Ile Gly Gly Tyr Asn Tyr

1 5

<210> 40

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR2

<400> 40

gtctcctggt accaacaaca cccaggcaaa gcccccaaac tcatgattta t 51

<210> 41

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR2

<400> 41

Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile

1 5 10 15

Tyr

<210> 42

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，CDR2

<400> 42

gatgtctat 9

<210> 43

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，CDR2

<400> 43

Asp Val Tyr

1

<210> 44

<211> 108

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR3

<400> 44

aagcggccct caggggtccc tgatcgcttc tctggctcca agtctggcaa cacggcctcc 60

ctgaccatct ctgggctcca ggctgaggat gaggctgatt actactgc 108

<210> 45

<211> 36

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR3

<400> 45

Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly

1 5 10 15

Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala

20 25 30

Asp Tyr Tyr Cys

35

<210> 46

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，CDR3

<400> 46

tgctcatatg caggcaccaa caatttgata 30

<210> 47

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，CDR3

<400> 47

Cys Ser Tyr Ala Gly Thr Asn Asn Leu Ile

1 5 10

<210> 48

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，连接

<400> 48

tgctgctcat atgcaggcac caacaatttg atattc 36

<210> 49

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，连接

<400> 49

Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Thr Asn Asn Leu Ile Phe

1 5 10

<210> 50

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，3'V-区

<400> 50

tgctgctcat atgcaggcac caacaattt 29

<210> 51

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，3'V-区

<400> 51

Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Thr Asn Asn

1 5

<210> 52

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，J-区

<400> 52

tattcggcgg agggaccaag ctgaccgtcc tag 33

<210> 53

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，J-区

<400> 53

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

1 5 10

<210> 54

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR4

<400> 54

ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta g 31

<210> 55

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，FR4

<400> 55

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

1 5 10

<210> 56

<211> 381

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.4A6重链

<400> 56

caggtccaac tggtgcaatc tggggctgaa gtgaagaagc ctggggcctc aatgagagtc 60

tcctgcaagg cttctggtta cacctacacc gcctactata tacattggat gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaaccccc acattggctc cacaaattat 180

gcggagaagt ttcgcggcag ggtcaccttg accagagaca cgtccatcaa gacagcctac 240

atggatctcg acaggctgac gtctgacgac acggccatat attactgtgc gagagtccga 300

gccccccgga gtataagtgg aactctcaac tcttacggaa tggacgtctg gggccaaggg 360

accacggtcg ccgtctcttc a 381

<210> 57

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.4A6重链

<400> 57

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Met Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Tyr Thr Ala Tyr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro His Ile Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Glu Lys Phe

50 55 60

Arg Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Lys Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Asp Leu Asp Arg Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Arg Ala Pro Arg Ser Ile Ser Gly Thr Leu Asn Ser Tyr

100 105 110

Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Ala Val Ser Ser

115 120 125

<210> 58

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.4A6轻链

<400> 58

gacatcgtga tgacccagtc tccttcgtcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagggtcgtc 60

atcacttgcc gggcaagtct gagaattggc acctttttaa attggtatca gcagacacaa 120

gggagagccc ccaaactcct ggtgtcttct gcgtccactt tgcaaagtgg cgtcccatca 180

aggttcagtg gcagtggatc tgggacggat ttcactctca ccattaacag tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta ccacgtggac attcggccaa 300

gggaccaagg tggaactcaa a 321

<210> 59

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.4A6轻链

<400> 59

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Val Ile Thr Cys Arg Ala Ser Leu Arg Ile Gly Thr Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Gln Gly Arg Ala Pro Lys Leu Leu Val

35 40 45

Ser Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Thr Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys

100 105

<210> 60

<211> 387

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.4G1重链

<400> 60

gaggagcacc tggtggagtc tgggggagcc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgaag cctctggatt cacctttcgt agttattgga tgacctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggaatg gctggccaac atcaaacaag atggaagtga ctattactat 180

gtcgactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa tacactatat 240

ctgcagatga acaacctgag agccgacgac acggccgttt atttttgtgc gagagatgcg 300

agatatcggg acactacctg gccgcaatac tatttttact acttcatgga cgtctggggc 360

aaggggacca cggtcaccgt ctcctca 387

<210> 61

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.4G1重链

<400> 61

Glu Glu His Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Asp Tyr Tyr Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Ala Arg Tyr Arg Asp Thr Thr Trp Pro Gln Tyr Tyr Phe

100 105 110

Tyr Tyr Phe Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 62

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.4G1轻链

<400> 62

gacatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcct ctataggcga cagagtcacc 60

gtcacttgcc gggccagtca gagcattagt aattatttaa attggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccaatt tgcatactgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacacat tttactctca ccatcagcag tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaactg agttacaata acccgagaac tttcggccct 300

gggaccacag tggatatcag a 321

<210> 63

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的，ALZ.4G1轻链

<400> 63

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Leu Ser Tyr Asn Asn Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Thr Val Asp Ile Arg

100 105