一种用HPLC法检测愈美素口服液体制剂中多种杂质含量的方法

摘要

本发明公开了一种用HPLC法检测愈美素口服液体制剂中多种杂质含量的方法，色谱柱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲溶液‑甲醇‑乙腈为流动相A，以磷酸盐缓冲溶液‑甲醇‑乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为每分钟0.9～1.1ml，柱温为28～32℃，检测波长为217～225nm。本发明所述方法能够同时检测愈美素口服液体制剂中的12中杂质含量，该方法具有1、操作简单、重复性好、具有较好的专属性和较高的准确度；2采用本发明所述检测方法，分离度好，无拖尾现象，并且对不同色谱柱均有很好的耐受性；3、本发明不采用三乙胺等有害溶剂，避免了对色谱柱的损伤。

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及用一种用HPLC法检测愈美素口服液体制剂中多种杂质含量的方法。

背景技术

愈美素口服液体制剂是由活性成分愈创木酚甘油醚、盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬和辅料组成，具有止咳祛痰缓解鼻塞等功效，用于(1)帮助痰液(粘液)和细支气管分泌物放松，消除支气管通道的粘液，使咳嗽更有效；(2)暂时缓解：由于轻微的喉咙和支气管刺激而引起的咳嗽，可能是普通感冒或吸入刺激物引起的、咳嗽的强度、咳嗽的冲动帮助您的孩子入睡、感冒引起的鼻充血、鼻塞。是一种更适合儿童服用的口服液体制剂。

任何影响药物纯度的物质统称为杂质。愈美素口服液体制剂为化学药品，所共知的是化学药品在合成或制备成制剂过程中，难免会带来或多或少的杂质。杂质的存在，一方面影响药品的疗效，另一方面可能增加药品的不良反应，有的杂质可与药品相互作用，影响药品的安全性，甚至产生毒性作用。因此，研究制定杂质种类或数量的检测方法，对保证药品的质量及其临床疗效具有重要的意义。特别是对于儿童用化学药品，对于杂质的控制应该有更高的要求，有利于提高儿童用药的安全性和可靠性。

现有技术中也存在同时检测多种杂质的方法，但是检测的种类和数量较少，并且存在准确度低的问题，利用现有技术还没有用一种检测方法对含有愈创木酚甘油醚、盐酸去氧肾上腺素、氢溴酸右美沙芬的口服液体制剂中的杂质种类和数量进行检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用HPLC法检测愈美素口服液体制剂中多种杂质含量的方法，本发明通过下述技术方案实现：

一种用HPLC法检测愈美素口服液体制剂中多种杂质含量的方法，色谱柱条件如下：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈为流动相A，以磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为每分钟0.9～1.1ml，柱温为28～32℃，检测波长为215～225nm。

所述流动相A中磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈的体积比为89～91∶2.8～3.2∶6.8～7.2。

进一步地，所述流动相A中磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈的体积比为90∶3∶7。

所述流动相B中磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈的体积比为24～26∶33.25～34.25∶40.75～41.75。

进一步地，所述流动相B中磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈的体积比为25∶33.75∶41.25。

进一步地，所述流速为每分钟1.0ml，柱温为30℃，检测波长为220nm。

所述梯度洗脱的条件为：

0-18分钟，流动相A 100-80％、流动相B 0-20％；18-42分钟，流动相A 80％、流动相B 20％；42-45分钟流动相A 80-45％、流动相B 20-55％；45-55分钟，流动相A 45-40％、流动相B 55-60％；55-60分钟，流动相A 40-45％、流动相B 60-65％；60-70分钟时，流动相A35％；流动相B 65％；70-75分钟，流动相A 35-32％、流动相B 65-68％；75-77分钟，流动相A32-20％、流动相B 68-80％；77-79分钟，流动相A 20-100％、流动相B 80-0％；79-92分钟，流动相A 100％、流动相B 0％；

所述磷酸盐缓冲溶液为含磷酸二氢钠30mmol/L、辛烷磺酸钠2.50g/L，用磷酸调节pH至3.0缓冲液。

检测方法包括以下步骤：

1、对照品溶液的制备：以流动相A为溶剂分别制成每1ml中含愈创木酚甘油醚杂质A0.008mg、愈创木酚甘油醚杂质B0.008mg、愈创木酚甘油醚杂质C 0.008mg、愈创木酚甘油醚杂质D 0.008mg、盐酸去氧肾上腺素杂质A 0.0005mg、盐酸去氧肾上腺素杂质C0.0005mg、盐酸去氧肾上腺素杂质D 0.0005mg、盐酸去氧肾上腺素杂质E 0.0005mg、氢溴酸右美沙芬杂质A 0.001mg、氢溴酸右美沙芬杂质B 0.001mg、氢溴酸右美沙芬杂质C0.001mg、氢溴酸右美沙芬N-O杂质0.001mg的溶液，滤过，取续滤液，作为对照品溶液；

2、供试品溶液的制备：以流动相A为溶剂将愈美素口服液体制剂制备成每10ml中含有2ml愈美素口服液体制剂的供试品溶液；

3、检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，连续进样5针，注入液相色谱仪获得色谱图。

愈美素口服液的具体配方如下：

活性成分：愈创木酚甘油醚15-25g、盐酸去氧肾上腺素0.4-0.6g、氢溴酸右美沙芬0.8-1.2g；

其他辅助组分：助溶剂400-600g、矫味剂60-100g，增稠剂0.5-1.5g，PH调节剂4-6g，络合剂0.5-1.5g，色素50-150mg，芳香剂3-5ml以及防腐剂，加溶剂至总量为1000ml。

所述助溶剂为甘油和丙二醇混合物；

所述矫味剂为山梨醇和三氯蔗糖的混合物；

所述增稠剂为黄原胶；

所述PH调解剂为无水枸橼酸和枸橼酸钠的混合物；

所述防腐剂为苯甲酸钠，所述络合剂为依地酸二钠；

所述芳香剂为草莓香精；

所述色素为诱惑红色素；

所述溶剂为纯化水。

有益效果

本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：

1、本发明所述方法能够同时检测愈美素口服液体制剂中的12种杂质含量，并且该方法操作简单、重复性好、具有较好的专属性和较高的准确度。

2采用本发明所述检测方法，分离度好，无拖尾现象，并且对不同色谱柱均有很好的耐受性。

3、本发明不采用三乙胺等有害溶剂，避免了对色谱柱的损伤。

附图说明：

图1：实施例1色谱图，其中1.愈创木酚甘油醚杂质B；2.愈创木酚甘油醚；3.愈创木酚甘油醚杂质A；4.盐酸去氧肾上腺素杂质A；5.盐酸去氧肾上腺素；6.苯甲酸钠；7.盐酸去氧肾上腺素杂质C；8.盐酸去氧肾上腺素杂质D；9.氢溴酸右美沙芬杂质B；10.为盐酸去氧肾上腺素杂质E；11.氢溴酸右美沙芬杂质C；12.愈创木酚甘油醚杂质C；13.氢溴酸右美沙芬；14.氢溴酸右美沙芬杂质A；15.氢溴酸右美沙芬N-O杂质；16.愈创木酚甘油醚杂质D。

图2：实施例2色谱图，1.愈创木酚甘油醚杂质B；2.愈创木酚甘油醚杂质A；3.盐酸去氧肾上腺素杂质A；4.盐酸去氧肾上腺素杂质C；5.盐酸去氧肾上腺素杂质D；6.氢溴酸右美沙芬杂质B；7.为盐酸去氧肾上腺素杂质E；8.氢溴酸右美沙芬杂质C；9.愈创木酚甘油醚杂质C；10.氢溴酸右美沙芬杂质A；11.氢溴酸右美沙芬N-O杂质；12.愈创木酚甘油醚杂质D。图3：实施例3色谱图，其中1.愈创木酚甘油醚杂质B；2.愈创木酚甘油醚杂质A；3.盐酸去氧肾上腺素杂质A；4.盐酸去氧肾上腺素杂质C；5.盐酸去氧肾上腺素杂质D；6.氢溴酸右美沙芬杂质B；7.为盐酸去氧肾上腺素杂质E；8.溶剂峰；9.氢溴酸右美沙芬杂质C；10.愈刨木酚甘油醚杂质C；11.氢溴酸右美沙芬杂质A；12.氢溴酸右美沙芬N-O杂质；13.愈创木酚甘油醚杂质D。

具体实施方式

为使本发明的技术方案更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。

实施例1：

采用本发明的色谱条件，用HPLC法检测愈美素口服液体制剂中多种杂质含量的方法如下：

色谱柱条件如下：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(ACE Excel C18，4.6mm×250mm，5μm)，以磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈为流动相A，以磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为每分钟1.0ml，柱温为30℃，检测波长为220nm。

在本实施例中，流动相A中磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈的体积比为90∶3∶7，流动相B中磷酸盐缓冲溶液、甲醇和乙腈的体积比为25∶33.75∶41.25，梯度洗脱条件见表1，

表1

所述磷酸盐缓冲溶液为含磷酸二氢钠30mmol/L、辛烷磺酸钠2.50g/L，用磷酸调节pH至3.0缓冲液。

检测过程如下：

供试品溶液的制备：

精密量取愈美素口服溶液2ml，置10ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：

以流动相A为溶剂制成每1ml中约含愈创木酚甘油醚杂质A 0.008mg、愈创木酚甘油醚杂质B 0.008mg、愈创木酚甘油醚杂质C 0.008mg、愈创木酚甘油醚杂质D 0.008mg、盐酸去氧肾上腺素杂质A 0.0005mg、盐酸去氧肾上腺素杂质C 0.0005mg、盐酸去氧肾上腺素杂质D 0.0005mg、盐酸去氧肾上腺素杂质E 0.0005mg、氢溴酸有美沙芬杂质A 0.001mg、氢溴酸右美沙芬杂质B 0.001mg、氢溴酸右美沙芬杂质C 0.001mg、氢溴酸右美沙芬N-O杂质0.001mg的溶液，滤过，取续滤液，作为对照品溶液；

检测方法：

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，连续20μl，进样5针，注入液相色谱仪，按照外标法以峰面积分别计算，记录色谱图(见图1)，即得。

由图1可以看出，采用本实施例所述的HPLC条件，HPLC图谱中在各已知杂质及主药之间出峰时间处没有明显干扰，特别对各待检测的杂质峰均具有较好的分离度。

采用部分方法学研究实验对上述实施方法进行验证：

1、系统适应性试验

样品制备：

以流动相A为溶剂制成每1ml中约含氢溴酸右美沙芬、愈创木酚甘油醚、盐酸去氧肾上腺素、苯甲酸钠分别为200.0μg、4.0mg、100μg、380μg，已知杂质愈创木酚甘油醚杂质A0.00gmg、愈创木酚甘油醚杂B 0.008mg、愈创木酚甘油醚杂C 0.008mg、愈创木酚甘油醚杂D0.008mg、盐酸去氧肾上腺素杂质A 0.0005mg、盐酸去氧肾上腺素杂质C 0.0005mg、盐酸去氧肾上腺素杂质D 0.0005mg、盐酸去氧肾上腺素杂质E 0.0005mg、氢溴酸右美沙芬杂质A0.001mg、氢溴酸右美沙芬杂质B 0.001mg、氢溴酸右美沙芬杂质C 0.001mg、氢溴酸右美沙芬N-O杂质0.001mg的溶液，滤过，取续滤液，连续20μl进样5针，检测结果如表2所示：

表2

结论：RSD＜2％，符合设计要求。

2、稳定性试验：

取按制备方法制备的愈美素口服液体制剂，照有关物质方法配制，在第0、12、24、48、72、96小时后测定有关物质，考察溶液的稳定性。

结论：样品溶液在12小时内的面积基本无变化说明本品有关物质溶液稳定较好，适合常规分析.

3、重复性试验：

取按制备方法制备的愈美素口服液体制剂，照有关物质方法配制，测定有关物质，考察该测定有关物质方法的重复性，结果如表3所示：

表3

在上述的液相色谱条件下，按仪器噪音的三倍响应值测定其最小检测限，按仪器噪音的十倍响应值测定其最小定量限，以流动相制成适宜浓度，定量限和检测线的结果分别如表4、表5所示：

表4

表5

4、耐用性：

对全部杂质和原料药进行190-400nm波长扫描，确定在220nm下各成分均有较好吸收。耐结果如表8所示：

表8

检测结果：

RSD(％)值：愈创木酚甘油醚杂质A 1.49、愈创木酚甘油醚杂质B 0.29、愈创木酚甘油醚杂质C 0.18、愈创木酚甘油醚杂质D 0.79、盐酸去氧肾上腺素杂质A1.31、盐酸去氧肾上腺素杂质C 4.15、盐酸去氧肾上腺素杂质D 1.07、盐酸去氧肾上腺素杂质E 1.58、氢溴酸右美沙芬杂质A 1.72、氢溴酸右美沙芬杂质B 1.88、氢溴酸右美沙芬杂质C 3.46、氢溴酸右美沙芬N-O 0.56，全部＜6％，符合研究要求。

实施例2

考察流动相比例不同，洗脱梯度也不同，其他条件与检测方法与实施例1相同，采用HPLC方法进行检测。

在本实施例中，流动相A中磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈的体积比为90∶3.5∶6.5，流动相B中磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈的体积比为25∶26.25∶48.75，洗脱梯度如表9所示：

表9

结果表明：6号峰氢溴酸右美沙芬杂质B与7号峰盐酸去氧肾上腺素杂质E分离度不合格；11号峰氢溴酸右美沙芬N-O与12号峰愈创木酚甘油醚杂质D分离度不合格；见附图2。

实施例3

考察洗脱梯度不同，其他条件和检测方法与实施例1相同，采用HPLC方法进行检测。

在本实施例中，洗脱梯度如表10所示：

表10

结果表明：6号峰氢溴酸右美沙芬杂质B与7号峰盐酸去氧肾上腺素杂质E分离度不合格；7号峰盐酸去氧肾上腺素杂质E与8号峰溶剂峰分离度不合格，见附图3。

以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。