一种动物输尿管结石模型的构建方法

摘要

本发明公开了一种动物输尿管结石模型的构建方法，该方法为：选取大白兔，以乌拉坦溶液耳缘静脉注射；仰卧位于手术台上，左下腹部备毛，碘伏消毒皮肤，取腹部正中左侧切口，逐层进入腹腔；进入腹腔后游离左侧结肠旁沟，推开降结肠及小肠系膜，暴露出左侧输尿管，用注射器于游离输尿管上端注入流动树脂，予光固化灯照射固定；确保无尿漏发生后将左侧结肠及小肠系膜归位，逐层关闭腹腔，以碘伏消毒创口并用纱布覆盖伤口；术后三天，每日青霉素U肌注。本发明构建的输尿管结石动物模型，流动树脂材料具有凝固时间快、对平滑肌组织损伤小等特点，且该模型具有成石效果好、成石时间短、经济性、时效性、可复制性及可控性强等优势。

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物输尿管结石模型的构建方法，属于输尿管结石模型技术领域。

背景技术

泌尿系结石是泌尿外科常见疾病之一，在泌尿外科住院患者中占据首位。近年来，我国泌尿系结石的发病率有增加趋势，是世界上3大结石高发区之一，泌尿系结石患者经治疗后70％以上的患者会出现结石复发，且复发率随术后的推移而增加。动物结石模型对研究结石的发生发展机制的过程中起到了重要的作用,目前构建动物模型的方法主要有草酸钙前体法、外科手术法等，不仅有助于疾病机制的研究，还可以对防治结石药物疗效进行筛选、评价等。输尿管结石模型的建立是研究输尿管结石疾病的基础。草酸钙前体法为常见的饮食诱导泌尿系结石的构建方法。早在1966年Lyon等人确立了采用乙二醇法构建泌尿系结石模型。Liu等通过对国内外常用的诱导成石方法进行比较得出结论，通过1％乙二醇饮水和0.5ug1x(OH)VitD3隔天灌胃(4周)与1％乙二醇饮水和2％氯化铵2ml每天灌胃(4周)诱导大鼠肾草酸钙结石形成效果更显著、简便和稳定。此方法所形成的结石大多数存在于肾脏，是目前可靠的肾结石模型，但是报道中很少见输尿管结石的形成。

外科手术法也是常见制作结石模型的方法。Vermeulen等最早提出向大鼠膀胱植入异物诱导膀胱结石的产生，通过实验推荐应用3～6mm直径，重约15～50mg的锌片植入大鼠膀胱，4～6周可在异物上形成六水磷酸镁铵结石。也有研究者通过植入已消毒的人体膀胱结石圆形碎块，同样成功制造了大鼠膀胱结石的模型。此法常用于泌尿系膀胱结石模型的构建。

此外，还有近交传代、基因敲除、纳米细菌注射、对苯二甲酸和对苯二酸二甲酯、饲喂在高钙状态下辅以维生素D饮食等方法可形成泌尿系石。

输尿管结石的病因及其机制复杂，但目前已知构建结石动物模型方法所形成泌尿系结石大都是肾和膀胱结石，并没有可在输尿管中形成稳定结石的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种动物输尿管结石模型的构建方法，以解决上述现有技术中存在的问题。

本发明采取的技术方案为：一种动物输尿管结石模型的构建方法，该方法为：选取大白兔，以20％乌拉坦溶液5ml/kg耳缘静脉注射，达成全身麻醉；仰卧位于手术台上，左下腹部备毛，碘伏消毒皮肤，取腹部正中左侧3cm切口，逐层进入腹腔；进入腹腔后游离左侧结肠旁沟，推开降结肠及小肠系膜，暴露出左侧输尿管，用1ml注射器于游离输尿管上端(平肾脏下极)注入0.02ml流动树脂，予光固化灯照射40秒固定；确保无尿漏发生后将左侧结肠及小肠系膜归位，逐层关闭腹腔，以碘伏消毒创口并用纱布覆盖伤口；术后三天，每日青霉素80万U肌注，预防感染。

本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明创新性的使用了异体置入流动树脂构建了单纯输尿管结石动物模型，流动树脂材料具有凝固时间快、对平滑肌组织损伤小等特点，且该模型方式可根据研究目的的不同而选择不同的位置进行动物模型构建，具有成石效果好、成石时间短、经济性、时效性、可复制性及可控性强等优势。

附图说明

图1为大白兔影像图，(a)为术前(正常)，(b)为术后(c)为梗阻1周；

图2为病理图。

具体实施方式

下面结合附图及具体的实施例对本发明进行进一步介绍。

实施例1：一种动物输尿管结石模型的构建方法，该方法为：选取大白兔，以20％乌拉坦溶液5ml/kg耳缘静脉注射，达成全身麻醉；仰卧位于手术台上，左下腹部备毛，碘伏消毒皮肤，取腹部正中左侧3cm切口，逐层进入腹腔；进入腹腔后游离左侧结肠旁沟，推开降结肠及小肠系膜，暴露出左侧输尿管，用1ml注射器于游离输尿管上端(平肾脏下极)注入0.02ml流动树脂，予光固化灯照射40秒固定；确保无尿漏发生后将左侧结肠及小肠系膜归位，逐层关闭腹腔，以碘伏消毒创口并用纱布覆盖伤口；术后三天，每日青霉素80万U肌注，预防感染。

为了说明本发明的效果，进行如下实验：

1.材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物

(4±0.5)月龄雌性新西兰大白兔24只，体质量(2.5±0.5)kg，由贵州医科大学动物实验中心提供，许可证号：SCXK(黔)2015-001。

1.1.2实验试剂及仪器

牙科流动树脂(Filtek

1.2造模

24只新西兰大白兔随机分为2组。实验组：12只手术组的新西兰大白兔，每只均予以20％乌拉坦溶液5ml/kg耳缘静脉注射，达成全身麻醉；仰卧位于手术台上，左下腹部备毛，碘伏消毒皮肤，取腹部正中左侧3cm切口，逐层进入腹腔；进入腹腔后游离左侧结肠旁沟，推开降结肠及小肠系膜，暴露出左侧输尿管，用1ml注射器于游离输尿管上端(平肾脏下极)注入0.02ml流动树脂，予光固化灯照射40秒固定；确保无尿漏发生后将左侧结肠及小肠系膜归位，逐层关闭腹腔，以碘伏消毒创口并用纱布覆盖伤口；术后三天，每日青霉素80万U肌注，预防感染。

对照组12只，不做任何处理。

所有兔子均以相同条件单笼喂养。造模过程中死亡4只新西兰大白兔。

1.3观察指标及检测方法

(1)生化指标

在术前、术后3/5/7天，所有新西兰家兔均于耳缘静脉取血行血常规及肾功能检测。

(2)影像学检测

术前、术后3/5/5天，所有新西兰家兔予20％乌拉坦5ml/kg耳缘静脉注射，达到全身麻醉的状态后，行X线或CT断层扫描检查。

(3)解剖对比

病理生理数据分析实验中，术后2周时实验组、对照组及假实验组分别行空气栓塞处死5只，迅速完整游离肾脏及输尿管组织，测量肾脏大小、皮质厚度、观察肾盂扩张情况及输尿管成石头情况，记录数据并拍照。

(4)输尿管组织病理学检查

甲醛固定，常规石蜡制片。苏木精-伊红染色法：苏木精染色5min，1％盐酸乙醇30s，0.5％伊红液染色3min，清洗后脱水封固。Masson染色法：苏木精染色5min，盐酸乙醇30s分化，Masson丽春红酸性复红液5min，2％冰醋酸浸片片刻，1％磷钼酸水溶液分化3-5min，苯胺蓝染液染色3-5min，清洗后脱水封固。

1.4统计学处理应用SPSS26统计软件。计量资料以(x±s)表示，采用X

2.结果：

2.1各组新西兰家兔白细胞、血肌酐、尿素氮比较，见表1。实验组与对照组在造模前一天、术后3、7天的肌酐、尿素氮比较，未见明显差异(P＞0.05)。实验组与对照组在造模前白细胞未见明显差异(P＞0.05)，造模后3、7天白细胞的量两组有统计学意义(P＜0.01)，但均在正常范围之内。

表1.实验组与对照组肌酐、尿素氮、白细胞比较(x±s)

2.2影像学结果，见图1造模前取正常新西兰家兔行正位X线片图1(a)，可见新西兰家兔腹腔正常，未见明显异常高密度影。造模后3天再次行正位X线片图1(b)，可见在家兔腹腔左侧有一高密度影。造模后1周行CT图1(c)，可见腹腔左侧有一高密度影，并可见肾盂明显、肾脏明显积水。

2.3解剖结果，造模后1周将新西兰家兔用空气栓塞法处死，迅速进入腹腔并游离家兔双侧肾脏、输尿管组织，可见结石上段输尿管明显扩张，肾脏积水明显。

2.4病理学结果，见附图2，病理说明：肾脏明显积水，远端小管及近端小管明显积水扩张，提示肾脏水肿。

本发明的优点：输尿管结石的病因及其机制复杂，但目前已知构建结石动物模型方法所形成泌尿系结石大都是肾和膀胱结石，并没有可在输尿管中形成稳定结石的方法。我们创新性的使用了异体置入流动树脂构建了单纯输尿管结石动物模型，流动树脂材料具有凝固时间快、对平滑肌组织损伤小等特点，且该模型方式可根据研究目的的不同而选择不同的位置进行动物模型构建，具有成石效果好、成石时间短、经济性、时效性、可复制性及可控性强等优势。本发明为单纯输尿管结石的研究提供了一种新的模型构建方式。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内，因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。