一种用于抗弧菌病的植物提取组合物及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及水产养殖领域，特别涉及一种用于抗弧菌病的植物提取组合物及其制备方法和应用。以重量份计，该植物提取组合物由益智茎叶提取物20～60份、高良姜茎叶提取物20～50份、橄榄叶提取物10～30份、芒果叶提取物10～30份组成。本发明研究发现在饲料中添加上述植物提取物组合物可显著提高凡纳滨对虾的养殖成活率，促进生长，并增强肝胰腺中的免疫酶活性和抗氧化能力，提高弧菌感染后的存活率；本发明中的原料为经济作物与中草药种植的副产品，价格低廉易得，工艺简单，绿色环保。

说明书

技术领域

本发明涉及水产养殖领域，特别涉及一种用于抗弧菌病的植物提取组合物及其制备方法和应用。

背景技术

我国养殖的虾类种类较多，主要包括凡纳滨对虾、斑节对虾、日本对虾、克氏原螯虾、红螯螯虾、罗氏沼虾、日本沼虾等。我国是虾类的主要养殖国，同时也是最大的消费国，每年需要大量从越南、泰国、厄瓜多尔等国家进口以满足国内人民日益增长的需求。

近年来，国内的养虾行业一直存在着虾苗易发病、养殖成功率低、缺乏高效的功能型配合饲料的问题。从2003年到2015年的13年间，虽然国内凡纳滨对虾的养殖产量从61万吨提升到162万吨，但国内低至10％-20％的养殖成功率不容忽视，且相比进口虾的品质，国内养殖虾存在商品虾个体小、病虾比例高、风味差等劣势，究其原因与养殖模式和日益恶化的养殖环境分不开。

近年来国内环保不断“转型升级”。作为关乎国计民生的水产养殖行业也未能例外，违规、落后的产能被大范围、大规模地取缔，违规食用抗生素及对人体有毒有害的药物明令禁止使用。最终，这将对现有的饲料行业从新洗牌，随着养殖结构的调整。顺应市场的需求，添加促进凡纳滨对虾生长性能，提高抗病免疫的植物提取物的配合饲料将成为水产行业的方向。

植物中含有众多天然的安全的抗菌抗炎成分，是开发成为水产动物替抗产品的主要资源。在一些经济作物与中草药的传统利用过程中，如茎、叶等部位常常被废弃，得不到利用，但这些部分的活性成分不亚于药用部分与食用部位，因此利用这些植物废弃物开发具有能够提高虾类免疫力与抗病力，替代抗生素的使用，同时原料易得、价格便宜的中草药提取物将成为研究的热点。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种用于抗弧菌病的植物提取组合物及其制备方法和应用。该研究表明，添加合适浓度的、由益智茎叶提取物、高良姜茎叶提取物、橄榄叶提取物、芒果叶提取物组成的植物提取物组合物，可以提高凡纳滨对虾的成活率，促进生长性能的提高、免疫力的增强。从而可以应用到凡纳滨对虾及其它水产动物的生长及弧菌病害防治上。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种用于抗弧菌病的植物提取组合物，以重量份计，该植物提取组合物由益智茎叶提取物20～60份、高良姜茎叶提取物20～50份、橄榄叶提取物10～30份、芒果叶提取物10～30份组成。

作为优选，以重量份计，该植物提取组合物由益智茎叶提取物30～60份、高良姜茎叶提取物20～50份、橄榄叶提取物10份、芒果叶提取物10份组成。

优选地，以重量份计，该植物提取组合物由益智茎叶提取物30份、高良姜茎叶提取物50份、橄榄叶提取物10份、芒果叶提取物10份组成。

优选地，以重量份计，该植物提取组合物由益智茎叶提取物60份、高良姜茎叶提取物20份、橄榄叶提取物10份、芒果叶提取物10份组成。

本发明还提供了该植物提取组合物在制备用于抗弧菌病的药物或饲料中的应用。

作为优选，弧菌病为虾类的弧菌病。

在本发明提供的具体实施例中，弧菌病为凡纳滨对虾的弧菌病。

作为优选，弧菌病为溶藻弧菌病、副溶血弧菌病、鳗弧菌病、创伤弧菌病中的一种或几种。

本发明还提供了该植物提取组合物的制备方法，包括如下步骤：

益智茎叶提取物、高良姜茎叶提取物的制备：取植物茎叶，以g/L计，按料液比1:(10～20)加入质量浓度75％～95％的乙醇水溶液，15～35℃条件下浸提2～4次，每次6～8天，所得浸提液过滤，减压浓缩，干燥；

橄榄叶提取物、芒果叶提取物的制备：取植物叶片，以g/L计，按料液比1:(5～10)加入质量浓度75％～95％的乙醇水溶液，15～35℃条件下浸提2～4次，每次4～6天，所得浸提液离心，取上清，减压浓缩，干燥；

将益智茎叶提取物、高良姜茎叶提取物、橄榄叶提取物、芒果叶提取物混合，得到植物提取组合物。

在本发明提供的具体实施例中，益智茎叶提取物、高良姜茎叶提取物的制备：取植物茎叶，以g/L计，按料液比1:10加入质量浓度95％的乙醇水溶液，室温条件下浸提3次，每次6天，所得浸提液过滤，减压浓缩，干燥。

在本发明提供的具体实施例中，橄榄叶提取物、芒果叶提取物的制备：取植物叶片，以g/L计，按料液比1:5加入质量浓度95％的乙醇水溶液，室温条件下浸提3次，每次4天，所得浸提液离心，取上清，减压浓缩，干燥。

在本发明中，植物茎叶为干燥的植物茎叶或者新鲜的植物茎叶。

在本发明中，植物叶片为干燥的植物叶片或者新鲜的植物叶片。

本发明还提供了一种配合饲料，包括基础饲料和上述植物提取组合物。

在本发明中，所述饲料可为配合饲料，也可为表面附着有植物提取组合物的颗粒饲料。

作为优选，饲料为配合饲料时，所述植物提取组合物的添加量为0.1～0.5g/kg基础饲料；

作为优选，饲料为表面附着有植物提取组合物的颗粒饲料时，所述植物提取组合物的添加量为0.3～0.8g/kg。

优选地，植物提取组合物的添加量为0.4～0.5g/kg。

配合饲料的制备：将各提取物分散于水中成悬浊液，加入原料中，搅拌均匀，制粒，烘干。

颗粒饲料的制备：将各提取物分散于水中成悬浊液，均匀喷涂在饲料表面，常温风干1～2h。

本发明提供了一种用于抗弧菌病的植物提取组合物及其制备方法和应用。以重量份计，该植物提取组合物由益智茎叶提取物20～60份、高良姜茎叶提取物20～50份、橄榄叶提取物10～30份、芒果叶提取物10～30份组成。本发明具有的技术效果如下：

本发明研究发现在饲料中添加上述植物提取物组合物可显著提高凡纳滨对虾的养殖成活率，促进生长，并增强肝胰腺中的免疫酶活性和抗氧化能力，提高弧菌感染后的存活率；

益智、高良姜茎叶中含有黄酮类、挥发油和二苯基庚烷类化合物及姜黄素等，具有杀菌、抑菌、抗氧化、清除过多自由基等作用；橄榄叶中富含橄榄苦甙，具有广谱抗菌活性和抗氧化活性；芒果叶主要含有抗坏血酸，芒果苷、莽草精、槲皮素、山奈醇等多种化学成分，具有免疫调节、抗炎、抗菌、抗病毒等作用。本发明组合物中益智茎叶提取物、高良姜茎叶提取物、橄榄叶提取物和芒果叶提取物可产生显著的协同增效作用；

本发明中的原料为经济作物与中草药种植的副产品，价格低廉易得，工艺简单，绿色环保。

具体实施方式

本发明公开了一种用于抗弧菌病的植物提取组合物及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明用于抗弧菌病的植物提取组合物及其制备方法和应用中所用原料、试剂或仪器均可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1

植物提取物组合物按照重量份数计，包括以下组分：益智茎叶提取物30份、高良姜茎叶提取物20份、橄榄叶提取物30份、芒果叶提取物20份。

益智茎叶、高良姜茎叶通过以下方法提取粗提物：取植物茎叶，清洗，切碎，烘干，按料液比1:10(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次6天，所得浸提液用纱布过滤，经减压浓缩、干燥，得提取物。

橄榄叶、芒果叶通过以下方法提取粗提物：取植物叶片，清洗，烘干，粉碎，按料液比1:5(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次4天，所得浸提液以转速8000r/min离心5min，取上清，经减压浓缩、干燥，得提取物。

组合物添加量为0.3g/kg，按重量份数取各提取物，将粗提物分散于水中成悬浊液，均匀喷涂在对虾商业配合饲料表面，常温风干2h。

实施例2

植物提取物组合物按照重量份数计，包括以下组分：益智茎叶提取物60份、高良姜茎叶提取物20份、橄榄叶提取物10份、芒果叶提取物10份。

益智茎叶、高良姜茎叶通过以下方法提取粗提物：取植物茎叶，清洗，切碎，烘干，按料液比1:10(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次6天，所得浸提液用纱布过滤，经减压浓缩、干燥，得提取物。

橄榄叶、芒果叶通过以下方法提取粗提物：取植物叶片，清洗，烘干，粉碎，按料液比1:5(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次4天，所得浸提液以转速8000r/min离心5min，取上清，经减压浓缩、干燥，得提取物。

组合物添加量为0.4g/kg，按重量份数取各提取物，将粗提物分散于水中成悬浊液，均匀喷涂在对虾商业配合饲料表面，常温风干2h。

实施例3

植物提取物组合物按照重量份数计，包括以下组分：益智茎叶提取物30份、高良姜茎叶提取物50份、橄榄叶提取物10份、芒果叶提取物10份。

益智茎叶、高良姜茎叶通过以下方法提取粗提物：取植物茎叶，清洗，切碎，烘干，按料液比1:10(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次6天，所得浸提液用纱布过滤，经减压浓缩、干燥，得提取物。

橄榄叶、芒果叶通过以下方法提取粗提物：取植物叶片，清洗，烘干，粉碎，按料液比1:5(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次4天，所得浸提液以转速8000r/min离心5min，取上清，经减压浓缩、干燥，得提取物。

组合物添加量为0.5g/kg，按重量份数取各提取物，将粗提物分散于水中成悬浊液，均匀喷涂在对虾商业配合饲料表面，常温风干2h。

实施例4

植物提取物组合物按照重量份数计，包括以下组分：益智茎叶提取物20份、高良姜茎叶提取物20份、橄榄叶提取物30份、芒果叶提取物30份。

益智茎叶、高良姜茎叶通过以下方法提取粗提物：取植物茎叶，清洗，切碎，烘干，按料液比1:10(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次6天，所得浸提液用纱布过滤，经减压浓缩、干燥，得提取物。

橄榄叶、芒果叶通过以下方法提取粗提物：取植物叶片，清洗，烘干，粉碎，按料液比1:5(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次4天，所得浸提液以转速8000r/min离心5min，取上清，经减压浓缩、干燥，得提取物。

组合物添加量为0.6g/kg，按重量份数取各提取物，将粗提物分散于水中成悬浊液，均匀喷涂在对虾商业配合饲料表面，常温风干2h。

实施例5

植物提取物组合物按照重量份数计，包括以下组分：益智茎叶提取物30份、高良姜茎叶提取物30份、橄榄叶提取物20份、芒果叶提取物20份。

益智茎叶、高良姜茎叶通过以下方法提取粗提物：取植物茎叶，清洗，切碎，烘干，按料液比1:10(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次6天，所得浸提液用纱布过滤，经减压浓缩、干燥，得提取物。

橄榄叶、芒果叶通过以下方法提取粗提物：取植物叶片，清洗，烘干，粉碎，按料液比1:5(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次4天，所得浸提液以转速8000r/min离心5min，取上清，经减压浓缩、干燥，得提取物。

组合物添加量为0.8g/kg，按重量份数取各提取物，将粗提物分散于水中成悬浊液，均匀喷涂在对虾商业配合饲料表面，常温风干2h。

对比例1

不添加植物提取物组合物的对虾商业配合饲料。

对比例2

植物提取物组合物按照重量份数计，包括以下组分：益智茎叶提取物30份、高良姜茎叶提取物50份、橄榄叶提取物10份。

益智茎叶、高良姜茎叶通过以下方法提取粗提物：取植物茎叶，清洗，切碎，烘干，按料液比1:10(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次6天，所得浸提液用纱布过滤，经减压浓缩、干燥，得提取物。

橄榄叶通过以下方法提取粗提物：取植物叶片，清洗，烘干，粉碎，按料液比1:5(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次4天，所得浸提液以转速8000r/min离心5min，取上清，经减压浓缩、干燥，得提取物。

组合物添加量为0.5g/kg，按重量份数取各提取物，将粗提物分散于水中成悬浊液，均匀喷涂在对虾商业配合饲料表面，常温风干2h。

对比例3

植物提取物组合物按照重量份数计，包括以下组分：益智茎叶提取物30份、高良姜茎叶提取物50份、芒果叶提取物10份。

益智茎叶、高良姜茎叶通过以下方法提取粗提物：取植物茎叶，清洗，切碎，烘干，按料液比1:10(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次6天，所得浸提液用纱布过滤，经减压浓缩、干燥，得提取物。

芒果叶通过以下方法提取粗提物：取植物叶片，清洗，烘干，粉碎，按料液比1:5(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次4天，所得浸提液以转速8000r/min离心5min，取上清，经减压浓缩、干燥，得提取物。

组合物添加量为0.5g/kg，按重量份数取各提取物，将粗提物分散于水中成悬浊液，均匀喷涂在对虾商业配合饲料表面，常温风干2h。

对比例4

植物提取物组合物按照重量份数计，包括以下组分：益智茎叶提取物30份、橄榄叶提取物10份、芒果叶提取物10份。

益智茎叶通过以下方法提取粗提物：取植物茎叶，清洗，切碎，烘干，按料液比1:10(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次6天，所得浸提液用纱布过滤，经减压浓缩、干燥，得提取物。

橄榄叶、芒果叶通过以下方法提取粗提物：取植物叶片，清洗，烘干，粉碎，按料液比1:5(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次4天，所得浸提液以转速8000r/min离心5min，取上清，经减压浓缩、干燥，得提取物。

组合物添加量为0.5g/kg，按重量份数取各提取物，将粗提物分散于水中成悬浊液，均匀喷涂在对虾商业配合饲料表面，常温风干2h。

对比例5

植物提取物组合物按照重量份数计，包括以下组分：高良姜茎叶提取物50份、橄榄叶提取物10份、芒果叶提取物10份。

高良姜茎叶通过以下方法提取粗提物：取植物茎叶，清洗，切碎，烘干，按料液比1:10(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次6天，所得浸提液用纱布过滤，经减压浓缩、干燥，得提取物。

橄榄叶、芒果叶通过以下方法提取粗提物：取植物叶片，清洗，烘干，粉碎，按料液比1:5(g/L)加入质量浓度95％的乙醇，室温下浸提3次，每次4天，所得浸提液以转速8000r/min离心5min，取上清，经减压浓缩、干燥，得提取物。

组合物添加量为0.5g/kg，按重量份数取各提取物，将粗提物分散于水中成悬浊液，均匀喷涂在对虾商业配合饲料表面，常温风干2h。

试验例1养殖试验：

将实施例1至5、对比例1至5的饲料在室内阴凉处风干2h，转入-20℃冰箱中备用。

凡纳滨对虾在养殖箱中饲养，养殖箱的规格为长×宽×高为50×40×40cm，水深30cm，整个饲养期间保持水质稳定，水温控制在28-33℃，溶氧6.0mg/L以上，pH 7.2-7.5，盐度16-18‰。每组三个平行，每个平行放养30尾。整个实验持续时间8周，每天上午7:00、11:00和下午15:00、19:00各投喂一次，每次投喂后40min利用虹吸管收集残饵，在烘箱中70℃烘干，记录投喂量和残饵量。每天换水，换水量为整个养殖水箱的1/3左右。试验结束后测定凡纳滨对虾的生长性能见表1，取各组的血淋巴与肝胰腺，测定免疫酶活力，结果见表2。

弧菌攻毒实验：取将经过8周的饲喂植物提取物组合物的各组凡纳滨对虾，每组三个平行，每个平行10尾虾。水温控制在28-33℃，溶氧6.0mg/L以上，pH 7.2-7.5。分别以溶藻弧菌和副溶血弧菌的菌液在对虾腹节进行注射，统计48h死亡率。结果如表3所示。

表1添加植物提取物组合物对凡纳滨对虾生长性能的影响

表2添加植物提取物组合物对凡纳滨对虾免疫酶活力的影响

表3添加植物提取物组合物对凡纳滨对虾弧菌毒性的影响(％)

从表1中可以看出，实施例1-5的凡纳滨对虾的成活率显著高于对比例组。在生长性能方面，各实施组在增重率和饵料系数方面优于对比例组，有效降低了饵料消耗，另一方面实施例组的凡纳滨对虾肥满度度增加，说明对虾的可食用部分增加。其中在实施例3组的效果最好，与对比例组差异显著，这可能是由于高良姜茎叶提取物中含有保肝护胆的功效有关，提高了养殖的成活率并改善了凡纳滨对虾的代谢功能。

从表2中可以看出，实施例1-5组的凡纳滨对虾肝胰腺中的免疫酶活性和抗氧化能力优于对比例，表明实施例的对虾机体的免疫功能提高。

从表3中可以看出，实施例1-5组的凡纳滨对虾的死亡率较对照组明显下降，表明对虾饲料中添加植物提取物组合物，能够显著提高对虾抵抗弧菌毒性的能力。

本发明中采用的是植物茎叶，是药用植物的非入药部分或果树的叶片，是农业废弃物，一方面可充分利用农业废弃物，并增加农作物的收益；另一方面本发明原料为纯天然，无化学毒害残留，且原料易得，成本低廉，工艺简单。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。