一种何首乌中二苯乙烯苷的高效制备方法

摘要

本发明公开了一种何首乌中二苯乙烯苷的高效制备方法，包括如下步骤：将何首乌粉碎、提取、萃取、浓缩后，得到二苯乙烯苷的总提取物；将二苯乙烯苷总提取物采用高速逆流色谱分离纯化，得到顺式二苯乙烯苷和反式二苯乙烯苷单体；高速逆流色谱的溶剂系统为乙酸乙酯‑水，1:1，v/v。

说明书

技术领域

本发明涉及中药有效成分的高效制备方法，具体为一种何首乌中二苯乙烯苷的高效制备方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根，可解毒、消痈、截疟以及润肠通便，用于疮痈、瘰疬、风疹瘙痒、久疟体虚和肠燥便秘。二苯乙烯苷是何首乌中的主要活性物质，《中国药典》中规定其在生首乌中不低于1％，制首乌中不低于0.7％。二苯乙烯苷存在顺反异构体，光照条件下，何首乌中反式-二苯乙烯苷可部分转化为顺式结构，但总含量不变。在自然条件下，主要以反式-二苯乙烯苷形式存在。药理研究表明，顺式-二苯乙烯苷对正常小鼠和急性高血脂小鼠的降血脂作用与反式基本相同，但对慢性高血脂小鼠血浆中总胆固醇、甘油三酯的降低作用明显强于反式-二苯乙烯苷。但是发明人发现，由于何首乌中的顺式-二苯乙烯苷的含量较少，现有技术中的制备方法难以从何首乌中直接分离制备顺式-二苯乙烯苷，即使有些方法可以分离得到顺式-二苯乙烯苷，其收率也较低。

高速逆流色谱(HSCCC)是近30年发展起来的一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液-液分配色谱分离技术，它避免了固态支持体或载体带来的样品易被死吸附、损耗和变性等各种问题，使用其它液相色谱法进行制备型分离时，其分配效率会显著降低，溶剂消耗量大，HSCCC保证较高峰型分辨度，分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和，节约溶剂。高速逆流色谱能直接进大量粗提样品或合成混合物，分离结果能达到相当高的纯度，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。

高速逆流色谱制备何首乌中的二苯乙烯苷的现有的溶剂体系均为三元或四元体系，分离后的废液难以进行回收利用，容易造成资源的浪费，且会污染环境。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种何首乌中二苯乙烯苷的高效制备方法，该制备方法可以将顺式二苯乙烯苷和反式二苯乙烯苷顺利分离，并可以制备出高纯度的顺式二苯乙烯苷和反式二苯乙烯苷。

为解决以上技术问题，本发明的以下一个或多个实施例提供了如下技术方案：

一种何首乌中二苯乙烯苷的高效制备方法，包括如下步骤：

将何首乌粉碎、提取、萃取、浓缩后，得到二苯乙烯苷的总提取物；

将二苯乙烯苷总提取物采用高速逆流色谱分离纯化，得到顺式二苯乙烯苷和反式二苯乙烯苷单体；

高速逆流色谱的溶剂系统为乙酸乙酯-水，1:1，v/v。

与现有技术相比，本发明的以上一个或多个技术方案取得了以下有益效果：

采用乙酸乙酯/水的二元体系进行分离，分离溶剂简单，分离后的废液中的乙酸乙酯可以回收利用，绿色环保，节约资源。

采用该高速逆流色谱的溶剂系统对二苯乙烯苷总提取物进行分离纯化，可以将顺式二苯乙烯苷和反式二苯乙烯苷成功分离，可以制备出高纯度的顺式二苯乙烯苷和反式二苯乙烯苷，此外还可以有效提高顺式二苯乙烯苷的收率。

附图说明

构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。

图1为本发明实施例的工艺流程图；

图2为本发明实施例的二苯乙烯苷粗提物高速逆流色谱分离的示意图；

图3为本发明实施例的二苯乙烯苷粗提物和顺式-二苯乙烯苷和反式-二苯乙烯苷单体的高效液相色谱图。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

一种何首乌中二苯乙烯苷的高效制备方法，包括如下步骤：

将何首乌粉碎、提取、萃取、浓缩后，得到二苯乙烯苷的总提取物；

将二苯乙烯苷总提取物采用高速逆流色谱分离纯化，得到顺式二苯乙烯苷和反式二苯乙烯苷单体；

高速逆流色谱的溶剂系统为乙酸乙酯-水，1:1，v/v。

在一些实施例中，采用65％-75％的乙醇(％为体积分数)对粉碎后的何首乌进行回流提取，得到总提取液。

进一步的，乙醇的的浓度为70％。

进一步的，采用乙醇溶液超声提取。

更进一步的，采用乙醇溶液超声提取2-3次，每次提取20-40min。

在一些实施例中，所述萃取的方法为：首先采用石油醚萃取，萃取后的水相调节pH值至9-11，然后用乙酸乙酯萃取。

进一步的，将萃取后的水相调节pH值至10，再用乙酸乙酯萃取。

进一步的，还包括将总萃取液合并、浓缩、干燥的步骤。

在一些实施例中，还包括对制备的顺式二苯乙烯苷和反式二苯乙烯苷单体进行纯度检测的步骤，高效液相色谱采用Waters C

实施例

1.样品提取

何首乌药材500g，粉粹，70％乙醇超声提取2次，每次30分钟，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味。浓缩液用等体积石油醚萃取3次，萃取后水相用氨水调pH值至10，用等体积乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯相减压浓缩，得二苯乙烯苷总粗提物5.2g，冰箱中冷藏保存备用。

2.溶剂体系筛选

本实施例提供不同溶剂组分下的下的K

表1不同溶剂体系的目标化合物的K

选择合适的用于逆流色谱分离的两相溶剂系统是非常关键的步骤，而合适的两相溶剂系统可以成功完成分离实验。在本研究中，以不同比例测试了包括两种，或三种溶剂混合物在内的三种双相混合溶剂体系。良好的溶剂系统可为混合物中的目标化合物提供理想的分配系数(K

3.高速逆流色谱分离纯化

高速逆流色谱中溶剂体系为乙酸乙酯/水(1:1，v/v)，选择上相溶液作固定相，下相溶液作流动相，超声脱气。固定相以20mL/min的流速泵入逆流色谱的分离柱。顺时针调节转速为800rpm，开启控温25℃，流动相采用从头到尾的方式以2.0mL/min的流速开始平衡。当达到流体动力学平衡后，样品溶液(500mg二苯乙烯苷粗提物溶解于5mL上相和5mL下相)随手动进样圈进样，设定紫外检测器的吸光度为280nm，开启记录仪，进样后收集分离组分并采集谱图，按管收集洗脱馏分。分离过程结束后，关闭仪器，用真空泵将留存在逆流色谱分离柱中的组分顶出，根据尾吹中固定相的体积占总体积的比例得到固定相保留率。减压浓缩进行后续液相检测。

高效液相色谱采用Waters C

最终分离得到顺式-二苯乙烯苷(50mg，收率92％，纯度为98.5％)、反式-二苯乙烯苷(328mg，收率94％，纯度为99％)。

4.结构鉴定

采用紫外光谱法、红外光谱法、质谱法和核磁共振技术等方法进行结构表征。UV法测试溶剂为甲醇，扫描范围为200～400nm；MS分析采用电喷雾离子源，载气温度为300℃，载气流速为10L/min，载气为普通氮气，毛细管电压为4.0kV，扫描范围为m/z 100～1000，氘代试剂为DMSO。

对所制备的顺式-二苯乙烯苷样品进行紫外光谱分析得

对所制备的反式-二苯乙烯苷样品进行紫外光谱分析得

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。