一种用于血浆游离DNA基因甲基化检测的超灵敏检测方法

摘要

本发明公开了一种用于血浆游离DNA基因甲基化检测的超灵敏检测方法，包括设计目标基因甲基化检测引物，目标基因检测探针和封闭引物，并利用引物和探针对DNA样品进行扩增检测，其中，目标基因甲基化引物包括正向引物和反向引物，每个引物均分布2‑3个CpG位点；目标基因检测探针增加MGB修饰，且探针与甲基化目标基因的结合自由能和与非甲基化目标基因的结合自由能差值为20～25kcal mol‑1；封闭引物与野生目标基因的结合自由能ΔGWT，大于与突变型目标基因的结合自由能ΔGVar。上述引物和探针能够相互协同作用达到严格控制非特异性条带扩增的效果，使检测灵敏度更高、特异性更好，操作简单，结果易于判读。