一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法

摘要

本发公开了一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法，包括育菌培养基的制备，育菌培养基包括生土豆、葡萄糖、琼脂、杨树根添加剂，按照重量组分计，包括杨树根添加剂5%~15%，生土豆25%~40%，葡萄糖10%~15%，琼脂20%~30%，其余为水，采用此类培养基，能够更好的育种育菌，特别是针对于羊肚菌的菌种，具有易培养、生长快、菌落好的特点，而且，该种培养基具有成本低、材料来源广泛的特点，并且有针对性的对羊肚菌的习性进行育种，得到的菌落更好、菌丝更发达、更利于下一步的移种的进行。

说明书

技术领域

本属于生物工程技术领域，具体为生物种植培养技术领域，特别是针对于羊肚菌的种植与育种，涉及的培养基的制备及其使用方法。

背景技术

羊肚菌是一种珍贵的食用菌和药用菌，羊肚菌含粗蛋白20％、粗脂肪26％、碳水化合物38.1％，还含有多种氨基酸和维生素，特别是谷氨酸含量高达1.76％。现代医学临床研究表明羊肚菌具有提高免疫力、抗肿瘤、抗衰老作用，具有较高的应用价值。

现阶段，因羊肚菌的经济价值较大，适宜推广，所以很多农户开始种植羊肚菌，但是，羊肚菌的菌种选择非常重要，而且在羊肚菌的育种方面，羊肚菌育种培育的产量一直不高，以此制约了羊肚菌的人工种植，且育种成活率低、杂菌多等情况始终存在，也成为了制约羊肚菌种植技术的推广的条件。

发明内容

为解决上述背景技术中提出的问题，本提供了一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法，通过研究羊肚菌的生长习性和环境，开发出了育种的培养基，通过此方法制备的培养基育种，能够有效的提高菌种量，以及菌核的优异性，并对于杂菌的剔除也提供了较好的解决方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法，包括育菌培养基的制备，育菌培养基包括生土豆、葡萄糖、琼脂、杨树根添加剂，按照重量组分计，包括杨树根添加剂5%~15%，生土豆25%~40%，葡萄糖10%~15%，琼脂20%~30%，其余为水。

作为一种优选的技术方案，上述的生土豆为未发育的土豆，杨树根添加剂的制作工艺为采用杨树根放入水中，煮沸，煮沸后将杨树根过滤掉，取水，放凉。

作为一种优选的技术方案，上述的育菌培养基的制备流程包括如下步骤：

A.取杨树根若干克，洗净、粉碎，将粉碎后的杨树根倒入水中，煮沸，保持一段时间后，冷却，并将杨树根过滤掉，得到的汤汁为杨树根添加剂；

B.取水，将生土豆粉碎，放入水中，并加入琼脂条，煮沸并文火温煮一段时间，至琼脂条完全融化，且土豆煮至腻而不烂的状态，加入葡萄糖，搅拌，完全溶解后，得到中间体，冷却备用；

C.取A步骤制备的杨树根添加剂、B步骤制备的中间体，按比例混合后，充分煮沸，并充分搅拌混合，得到培养基；

D.将C步骤制备的培养基分装入清洗干净的试管内，使用无菌棉封口，然后，统一放入高压灭菌锅内，高压灭菌，灭菌一段时间后，断电等待高压灭菌锅压力为零，取出试管，得到待成型培养基；

E.将D步骤制备的待成型培养基呈7°~10°倾斜摆放，以试管内培养基斜面不触碰无菌棉塞为止，将试管置入保温箱，保持7天，使之凝固，得到培养基试管；

F.观察E步骤制备的培养基试管，颜色为淡黄色~金黄色为准，得到育菌培养基。

作为一种优选的技术方案，上述的D步骤中无菌棉封口距离应大于试管长度的1/10并小于1/5。

作为一种优选的技术方案，上述的D步骤中灭菌时间应大于2.5H并小于3H。

作为一种优选的技术方案，上述的E步骤中保温箱温度范围为25℃~30℃。

作为一种优选的技术方案，上述的杨树根粉末与水的重量组分计比例为1:2.5~1:3，煮沸后，过滤掉的杨树根重量与得到的汤汁的重量比例为1:2~1:2.5。

与现有技术相比，本的有益效果是：通过对羊肚菌习性的研究，发现羊肚菌具有喜阴的特性，而且，结合了陕西、甘肃、广西、云南、吉林、湖北以及安徽宿州的羊肚菌生长环境，研制出了此项技术，能够有效的提高菌种量，以及菌核的优异性，提高了菌种单位数量，减少了成本，为羊肚菌规模养殖提供了有效的方法和依据。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1为本发明的制备流程示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

育菌培养基的制备流程包括如下步骤：

A.取杨树根若干克，洗净、粉碎，将粉碎后的杨树根倒入水中，煮沸，保持一段时间后，冷却，并将杨树根过滤掉，得到的汤汁为杨树根添加剂；

B.取水，将生土豆粉碎，放入水中，并加入琼脂条，煮沸并文火温煮一段时间，至琼脂条完全融化，且土豆煮至腻而不烂的状态，加入葡萄糖，搅拌，完全溶解后，得到中间体，冷却备用；

C.取A步骤制备的杨树根添加剂、B步骤制备的中间体，按比例混合后，充分煮沸，并充分搅拌混合，得到培养基；

D.将C步骤制备的培养基分装入清洗干净的试管内，使用无菌棉封口，然后，统一放入高压灭菌锅内，高压灭菌，灭菌一段时间后，断电等待高压灭菌锅压力为零，取出试管，得到待成型培养基；

E.将D步骤制备的待成型培养基呈7°~10°倾斜摆放，以试管内培养基斜面不触碰无菌棉塞为止，将试管置入保温箱，保持7天，使之凝固，得到培养基试管；

F.观察E步骤制备的培养基试管，颜色为淡黄色~金黄色为准，得到育菌培养基。

具体的，上述的D步骤中无菌棉封口距离应大于试管长度的1/10并小于1/5。

具体的，上述的D步骤中灭菌时间应大于2.5H并小于3H。

具体的，上述的E步骤中保温箱温度范围为25℃~30℃。

具体的，上述的杨树根粉末与水的重量组分计比例为1:2.5~1:3，煮沸后，过滤掉的杨树根重量与得到的汤汁的重量比例为1:2~1:2.5。

实施例1

一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法，包括育菌培养基的制备，育菌培养基包括生土豆、葡萄糖、琼脂、杨树根添加剂，按照重量组分计，包括杨树根添加剂5%，生土豆25%，葡萄糖15%，琼脂25%，其余为水。（70）

实施例2

一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法，包括育菌培养基的制备，育菌培养基包括生土豆、葡萄糖、琼脂、杨树根添加剂，按照重量组分计，包括杨树根添加剂10%，生土豆25%，葡萄糖15%，琼脂25%，其余为水。（75）

实施例3

一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法，包括育菌培养基的制备，育菌培养基包括生土豆、葡萄糖、琼脂、杨树根添加剂，按照重量组分计，包括杨树根添加剂15%，生土豆25%，葡萄糖15%，琼脂25%，其余为水。（80）

实施例4

一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法，包括育菌培养基的制备，育菌培养基包括生土豆、葡萄糖、琼脂、杨树根添加剂，按照重量组分计，包括杨树根添加剂10%，生土豆40%，葡萄糖10%，琼脂20%，其余为水。（80）

实施例5

一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法，包括育菌培养基的制备，育菌培养基包括生土豆、葡萄糖、琼脂、杨树根添加剂，按照重量组分计，包括杨树根添加剂10%，生土豆30%，葡萄糖10%，琼脂20%，其余为水。（70）

实施例6

一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法，包括育菌培养基的制备，育菌培养基包括生土豆、葡萄糖、琼脂、杨树根添加剂，按照重量组分计，包括杨树根添加剂10%，生土豆25%，葡萄糖10%，琼脂30%，其余为水。（75）

实施例7

一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法，包括育菌培养基的制备，育菌培养基包括生土豆、葡萄糖、琼脂、杨树根添加剂，按照重量组分计，包括杨树根添加剂15%，生土豆30%，葡萄糖10%，琼脂30%，其余为水。（85）

实施例8

一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法，包括育菌培养基的制备，育菌培养基包括生土豆、葡萄糖、琼脂、杨树根添加剂，按照重量组分计，包括杨树根添加剂15%，生土豆30%，葡萄糖15%，琼脂30%，其余为水。（90）

实施例9

一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法，包括育菌培养基的制备，育菌培养基包括生土豆、葡萄糖、琼脂、杨树根添加剂，按照重量组分计，包括杨树根添加剂15%，生土豆30%，葡萄糖15%，琼脂25%，其余为水。（85）

实施例10

一种适用于羊肚菌育菌的培养基的制备及使用方法，包括育菌培养基的制备，育菌培养基包括生土豆、葡萄糖、琼脂、杨树根添加剂，按照重量组分计，包括杨树根添加剂15%，生土豆30%，葡萄糖15%，琼脂20%，其余为水。（80）

实施例11

取发青的生土豆，煮成腻而不烂的状态，制备培养基；标记为样式1；

实施例12

取发芽的生土豆，煮成腻而不烂的状态，制备培养基；标记为样式2；

实施例13

取正常的生土豆，煮成腻而不烂的状态，制备培养基；标记为样式3；

实施例14

取新鲜杨树叶，粉碎煮熟，制备培养基，其他条件与实施例3相同；标记为样式4；

实施例15

取新鲜杨树枝干，粉碎煮熟，制备培养基，其他条件与实施例3相同；标记为样式5；

实施例16

取杨树下土壤，充分搅拌并泡水沉淀，取水，替换杨树根添加剂；制备培养基，其他条件与实施例3相同；标记为样式6；

分别对上述不同类别培养基进行培育羊肚菌孢子，并制备每份各5份，得出如下列表所示：

注：可以发现，按照实施例3进行的配比，较为优异。

注：可以发现，按照实施例13进行的配比，较为优异。

注：可以发现，按照实施例3进行的配比，较为优异，其他实施例14、实施例15、实施例16均不好，特别是杨树叶替代的，用于培养羊肚菌效果最差，使用杨树根土替代的效果较好，但易出现杂菌，且其他方面均不及实施例3。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。