保护细胞免受氧化和线粒体应激影响的组合物

摘要

本发明描述了一种组合物，所述组合物包含有效量的两种或更多种组分的组合，所述组分选自金合欢素、ACT1肽、α‑硫辛酸、前列地尔、茴香霉素、芹黄素、抗坏血酸、黄芪、小檗碱、β‑拉帕醌、β‑羟基‑β‑甲基丁酸酯、假马齿苋、儿茶素、儿茶酚、洋甘菊、白杨素、香豆雌酚、姜黄素、二硝基苯酚、地诺前列素、鞣花酸、(‑)‑表没食子儿茶素没食子酸酯、绿茶提取物、非瑟酮、金雀异黄酮、人参皂苷RE、光甘草定、18‑α‑甘草次酸、18‑β‑甘草次酸、甘草甜素、氢醌、异槲皮苷(EMIQ)、山柰酚、黑豆花青素、亮氨酸、锂、木犀草素、木犀草素、木犀草定、褪黑素、甲萘醌、1‑甲基烟酰胺(MNA)、水杨酸甲酯、杨梅酮、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、烟酸(维生素B3)、烟酰胺(NAM)、烟酰胺单核苷酸(NMN)、烟酰胺核糖核苷(NR)、烟酸腺嘌呤二核苷酸(NaAD)、烟酸单核苷酸(NaMN)、欧芹、苯肾上腺素、商陆有丝分裂原、15‑Δ前列腺素J2、嘌呤霉素、槲皮素、喹啉酸、视黄酸、曲古抑菌素A、曲克芦丁、芦丁、色氨酸、维生素D3、醉茄素A、渥曼青霉素和锌(包括其盐)。

说明书

技术领域

本发明涉及通常用于口服或局部施用以减轻衰老的影响的新型组合物。

具体地，本发明涉及增强细胞对DNA损伤、氧化应激、线粒体功能障碍的耐受性或提高DNA修复能力的组合物和方法。

背景技术

DNA保护和修复能力下降是基因组不稳定的重要原因。基因组不稳定继而可能导致多种疾病诸如癌症，这些疾病的风险会随着年龄的增长而呈指数级增加。

保护DNA和其他重要的细胞机制不受损伤并在发生损伤时进行修复对于高功能细胞至关重要。这种细胞的保护和修复通常与青春和健康相关联。此外，随着年龄的增长，这些保护和修复功能在体细胞中下降，并且是大部分细胞和组织功能下降的原因。

发明内容

目前我们已经发现了包含某些活性组分的新型组合物，所述活性组分尤其适用于增强细胞对DNA损伤、氧化应激、线粒体功能障碍的耐受性或者提高DNA修复能力。

因此，根据本发明的第一方面，提供了一种组合物，该组合物包含有效量的两种或更多种组分的组合，所述组分选自金合欢素、ACT1肽、α-硫辛酸、前列地尔、茴香霉素、芹黄素、抗坏血酸、黄芪、小檗碱、β-拉帕醌、β-羟基-β-甲基丁酸酯、假马齿苋(bacopamonnieri)、儿茶素、儿茶酚、洋甘菊、白杨素、香豆雌酚、姜黄素、二硝基苯酚、地诺前列素、鞣花酸、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯、绿茶提取物、非瑟酮、金雀异黄酮、人参皂苷RE、光甘草定、18-α-甘草次酸、18-β-甘草次酸、甘草甜素、氢醌、异槲皮苷(EMIQ)、山柰酚、黑豆花青素(kuromanin)、亮氨酸、锂、木犀草素、木犀草素、木犀草定、褪黑素、甲萘醌、1-甲基烟酰胺(MNA)、水杨酸甲酯、杨梅酮、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nadide)、烟酸(维生素B

根据本发明的该方面的组合物中的活性组分的量可根据活性组分的性质、施用方式等而变化。可存在于组合物中的活性组分的示例性量为约1mg至约1000mg；或约50mg至约900mg；或约100mg至约800mg；或约150mg至约700mg；或约200mg至约600mg；或约250mg至约500mg。

希望通过增强细胞的DNA保护和修复能力，并且通过增强它们承受氧化应激和线粒体应激和功能障碍的能力，来增强细胞、尤其是皮肤细胞对DNA损伤的耐受性。

根据本发明的该方面，提供了一种用于增强细胞对DNA损伤、氧化应激、线粒体功能障碍的耐受性或者提高DNA修复能力的组合物。

在本发明的另一方面，该组合物用于增强细胞对DNA损伤的耐受性，例如增强皮肤细胞对DNA损伤的耐受性。

在本发明的另一方面，该组合物用于增强细胞对氧化应激的耐受性，例如增强皮肤细胞对氧化应激的耐受性。

在本发明的另一方面，该组合物用于增强细胞对线粒体功能障碍的耐受性，例如增强细胞对线粒体功能障碍的耐受性。

在本发明的另一方面，该组合物用于提高细胞的DNA修复能力，例如提高皮肤细胞的DNA修复能力。

在本发明的一个方面，该组合物用于增强细胞对DNA损伤、氧化应激、线粒体功能障碍的耐受性，并且提高DNA修复能力。

因此，根据本发明的该方面，提供了一种组合物，该组合物包含有效量的一种或多种组分，所述组分选自金合欢素、ACT1肽、α-硫辛酸、前列地尔、茴香霉素、芹黄素、抗坏血酸、黄芪、小檗碱、β-拉帕醌、β-羟基-β-甲基丁酸酯、假马齿苋、儿茶素、儿茶酚、洋甘菊、白杨素、香豆雌酚、姜黄素、二硝基苯酚、地诺前列素、鞣花酸、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯、绿茶提取物、非瑟酮、金雀异黄酮、人参皂苷RE、光甘草定、18-α-甘草次酸、18-β-甘草次酸、甘草甜素、氢醌、异槲皮苷(EMIQ)、山柰酚、黑豆花青素、亮氨酸、锂、木犀草素、木犀草素、木犀草定、褪黑素、甲萘醌、1-甲基烟酰胺(MNA)、水杨酸甲酯、杨梅酮、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、烟酸(维生素B

因此，根据本发明的另一方面，提供了一种组合物，该组合物包含有效量的一种或多种组分，所述组分选自金合欢素、ACT1肽、α-硫辛酸、前列地尔、茴香霉素、芹黄素、抗坏血酸、黄芪、小檗碱、β-拉帕醌、β-羟基-β-甲基丁酸酯、假马齿苋、儿茶素、儿茶酚、洋甘菊、白杨素、香豆雌酚、姜黄素、二硝基苯酚、地诺前列素、鞣花酸、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯、绿茶提取物、非瑟酮、金雀异黄酮、人参皂苷RE、光甘草定、18-α-甘草次酸、18-β-甘草次酸、甘草甜素、氢醌、异槲皮苷(EMIQ)、山柰酚、黑豆花青素、亮氨酸、锂、木犀草素、木犀草素、木犀草定、褪黑素、甲萘醌、1-甲基烟酰胺(MNA)、水杨酸甲酯、杨梅酮、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、烟酸(维生素B

根据本发明的该方面，提供了一种如本文所述的组合物，该组合物用于增强细胞对DNA损伤、氧化应激、线粒体功能障碍的耐受性或者提高DNA修复能力。

根据本发明的该方面的组合物中的活性组分的量可根据活性组分的性质、施用方式等而变化。可存在于组合物中的活性组分的示例性量为每天约1mg至约1000mg；或约50mg至约900mg；或约100mg至约800mg；或约150mg至约700mg；或约200mg至约600mg；或约250mg至约500mg。

根据本发明的另一方面，提供了一种如本文所述的组合物，该组合物用于增强细胞例如皮肤细胞对DNA损伤、氧化应激、线粒体功能障碍的耐受性或者提高DNA修复能力，包括将有效量的组合物局部施用于个体皮肤。

根据本发明的另一方面，提供了一种如本文所述的组合物，该组合物用于通过增强细胞例如皮肤细胞对DNA损伤、氧化应激、线粒体功能障碍的耐受性或者提高DNA修复能力来减轻、缓解或改善衰老的影响。

根据本发明的该方面，提供了一种如本文所述的组合物，该组合物用于如本文所述减轻、缓解或改善衰老的影响。

衰老的影响可包括与年龄相关的皮肤状况、与日照相关的皮肤状况、与污染暴露相关的皮肤状况、与氧化应激相关的皮肤状况以及与生活方式选择诸如饮食、酒精和/或吸烟相关的皮肤状况。另外，本发明的组合物在减轻、缓解或改善与炎症性皮肤病相关的皮肤状况和与自身免疫性疾病皮肤病相关的皮肤状况方面可以是有利的。本发明的组合物在减轻、缓解或改善其他与年龄相关的状况诸如但不限于衰弱增加、失去弹性、肌肉力量丧失、肌肉耐力丧失、乏力、认知敏锐性丧失、记忆力衰退等方面可以是有利的。更具体地，本发明的组合物在减轻、缓解或改善其他与年龄相关的状况诸如但不限于动脉粥样硬化和心血管疾病、癌症、关节炎、白内障、骨质疏松症、2型糖尿病、高血压和阿尔茨海默病方面可以是有利的；这些状况的发生率随年龄的增长而增加。

可减轻、缓解或改善的与年龄相关的皮肤状况应当包括但不应限于下垂、皱纹、皮肤弹性、皮肤老化、皮肤水分、创伤、痤疮、皮肤变黑、皮肤变白、色素沉着、老年斑、失去光泽、浮肿、肤色不均、发红、酒渣鼻、屏障功能丧失、皮肤弹性丧失、松弛、妊娠纹、脂肪团和干燥中的一种或多种。

可减轻、缓解或改善的与日晒相关的皮肤状况包括但不应限于光化性角化病、雀斑、雀斑样痣或老年斑、痣、光敏性、多形性日光疹、脂溢性角化病、皮肤癌症(诸如黑素瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌)、日光性弹性组织变性或皱纹和晒伤中的一种或多种。

可减轻、缓解或改善的与炎症性皮肤病相关的皮肤状况包括但不应限于痤疮、乏脂性湿疹、特应性皮炎、接触性皮炎、盘状湿疹、湿疹型药疹、多形性红斑、红皮病、重力性/静脉曲张性湿疹、手部湿疹、慢性苔藓样角化病、光泽苔藓、扁平苔癣、单纯性苔藓、条纹状苔藓、蕈样真菌病、苔藓样糠疹、牛皮癣、脂溢性皮炎、史蒂芬斯–强森综合征、中毒性表皮坏死松解症和血管炎中的一种或多种。

可减轻、缓解或改善的与自身免疫性疾病皮肤病相关的皮肤状况包括但不应限于斑秃、大疱性类天疱疮、皮肌炎、营养不良性大疱性表皮松解症、嗜酸性筋膜炎、寻常型天疱疮、牛皮癣、坏疽性脓皮病、硬皮病、全身性红斑狼疮和白癜风中的一种或多种。

根据本发明的另一方面，提供了一种如本文所述的组合物，该组合物用于通过改善细胞例如皮肤细胞对DNA损伤的耐受性并且/或者增强皮肤细胞的DNA修复能力来减轻、缓解或改善自身免疫性疾病的影响。

此类自身免疫性疾病和相关的免疫疾病应当包括但不应限于全身性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、非肾小球性肾病、牛皮癣、慢性活动性肝炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病、白塞氏病、慢性肾小球肾炎、慢性血小板减少性紫癜和自身免疫性溶血性贫血。

本发明的组合物可以局部、口服或肠胃外施用；或者可包含含有适当减轻量的所需活性组分的控释、缓释或延释的制剂，其形式为粉剂、颗粒剂、无菌肠胃外溶液剂或混悬剂、口服溶液剂或混悬剂、油水乳剂以及植入物和微囊化递送系统。

肠胃外施用

因此，根据本发明的一个方面，提供了如本文所述的用于肠胃外施用的组合物。

当肠胃外施用本发明的组合物时，可以是肌内、静脉内、皮下、腹膜内、局部或经皮注射的形式。

局部施用

优选地，本发明的组合物可以局部或经皮施用。因此，根据本发明的该方面，提供了如本文所述的用于局部施用的组合物。根据本发明的另一方面，提供了如本文所述的用于经皮施用的组合物。

用于局部或经皮施用的合适制剂包括有效量的本发明的组合物，该组合物包含如本文所定义的具有一种或多种载体的活性组分。载体包括可吸收的药学上可接受的溶剂，以帮助进入宿主的皮肤。

用于局部施用于例如皮肤和眼睛的合适制剂包括水溶液剂、混悬剂、软膏、乳膏、凝胶、可喷雾制剂、经皮贴剂或绷带例如以通过气雾剂等递送。此类局部递送系统将特别适于皮肤应用，适于防晒霜、洗剂、喷雾剂等中的预防性使用。因此，它们特别适合用于本领域熟知的局部用制剂，包括化妆品制剂中。此类制剂可包含增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。

经皮装置可以是绷带的形式，其包括背衬构件、含有任选地具有载体的本发明组合物的贮存器、任选地速率控制屏障以及用于将该装置固定到皮肤上的装置，所述速率控制屏障用于在很长一段时间内以受控和预定的速率将本发明的组合物递送至宿主的皮肤。

本发明的组合物还可包含化妆品可接受的载体。载体的量可在1％至99.9％、优选地70％至95％、最佳地80％至90％的范围内。可用的载体包括水、润肤剂、脂肪酸、脂肪醇、增稠剂以及它们的组合。载体可以是水性的、无水的或乳剂。优选地，组合物是水性的，尤其是油包水或水包油型的水和油乳剂，或者水包油包水或油包水包油种类的复合型乳剂。当存在时，水的量可在5重量％至95重量％、优选地约20重量％至约70重量％、最佳地35重量％至60重量％的范围内。

润肤剂材料可用作化妆品可接受的载体。这些润肤剂材料可以是硅油、天然或合成酯、烃、醇和脂肪酸的形式。润肤剂的量可为组合物的0.1重量％至95重量％、优选地介于1重量％和50重量％之间的范围内的任何值。

硅油可以分为挥发性和非挥发性种类。如本文所用，术语“挥发性”是指在环境温度下具有可测量的蒸气压的那些材料。挥发性硅油优选地选自含有3至9个、优选地5至6个硅原子的环状(环甲硅油)或直链聚二甲基硅氧烷。可用作润肤剂材料的非挥发性硅油包括聚烷基硅氧烷、聚烷基芳基硅氧烷和聚醚硅氧烷共聚物。本文可用的基本上非挥发性的聚烷基硅氧烷包括例如在25℃处粘度为5×10-6至0.1m

酯类润肤剂包括：

a)具有10至24个碳原子的饱和脂肪酸的烷基酯。其示例包括新戊酸山嵛酯、异壬酸异壬酯、肉豆蔻酸异丙酯和硬脂酸辛酯。

b)醚酯，诸如乙氧基化饱和脂肪醇的脂肪酸酯。

c)多元醇酯。乙二醇单脂肪酸酯和二脂肪酸酯、乙二醇单脂肪酸酯和二脂肪酸酯、聚乙二醇(200-6000)单脂肪酸酯和二脂肪酸酯、丙二醇单脂肪酸酯和二脂肪酸酯、聚丙二醇2000单硬脂酸酯、乙氧基化丙二醇单硬脂酸酯、甘油单脂肪酸酯和二脂肪酸酯、聚甘油多脂肪酸酯、乙氧基化甘油单硬脂酸酯、1,3-丁二醇单硬脂酸酯、1,3-丁二醇二硬脂酸酯、聚氧乙烯多元醇脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯和聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯是令人满意的多元醇酯。特别有用的是C1-C30醇的季戊四醇、三羟甲基丙烷和新戊二醇酯。

d)蜡酯，诸如蜂蜡、鲸蜡和三山嵛精蜡。

e)脂肪酸的糖酯，诸如蔗糖多山嵛酸酯和蔗糖多棉籽油酸酯。

天然酯类润肤剂主要基于甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯。代表性甘油酯包括葵花籽油、棉籽油、琉璃苣油、琉璃苣籽油、月见草油、蓖麻油和氢化蓖麻油、米糠油、大豆油、橄榄油、红花油、乳木果油、霍霍巴油以及它们的组合。动物来源的润肤剂以羊毛脂油和羊毛脂衍生物为代表。天然酯的量可在组合物的0.1重量％至20重量％的范围内。

作为合适的化妆品可接受的载体的烃包括凡士林、矿物油、C11-C13异链烷烃、聚丁烯，尤其是可从Presperse Inc.以商品名Permethyl 101A购得的异十六烷。

具有10至30个碳原子的脂肪酸也可以适合作为化妆品可接受的载体。该类别的示例包括壬酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、羟基硬脂酸和山嵛酸，以及它们的混合物。

具有10至30个碳原子的脂肪醇是另一可用类别的化妆品可接受的载体。该类别的示例是硬脂醇、月桂醇、肉豆蔻醇、油醇和鲸蜡醇，以及它们的混合物。

增稠剂或流变改性剂可用作根据本发明的组合物的化妆品可接受的载体的一部分。典型的增稠剂包括交联的丙烯酸酯(例如

尤其可用于旨在施用于面部的产品以改善感官性能的润肤剂选自聚丙二醇-14丁基醚(也称为Tegosoft PBE)、或PPG15硬脂基醚(诸如Tegosoft E)、其他油诸如酯，尤其是肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯，其他油可包括蓖麻油及其衍生物。

多元醇类型的湿润剂可用作化妆品可接受的载体。典型的多元醇包括甘油、聚亚烷基二醇以及更优选地亚烷基多元醇及其衍生物，包括丙二醇、二丙二醇、聚丙二醇、聚乙二醇及其衍生物、山梨糖醇、羟丙基山梨糖醇、己二醇、1,3-丁二醇、异戊二醇、1,2,6-己三醇、乙氧基化甘油、丙氧基化甘油以及它们的混合物。湿润剂的量可为组合物的0.5重量％至50重量％、优选地介于1重量％和15重量％之间的范围内的任何值。

皮肤保湿剂例如透明质酸和/或其前体N-乙酰葡糖胺可包含在内。N-乙酰葡糖胺可存在于鲨鱼软骨或香菇中，并且可从Maypro Industries,Inc.,New York商购获得。其他保湿剂包括羟丙基三(C1-C3烷基)铵盐。这些盐可通过多种合成方法获得，最特别地通过水解氯羟丙基三(C1-C3烷基)铵盐获得。具体物质为1,2-二羟丙基三甲基氯化铵，其中C1-C3烷基为甲基基团。盐的量可在局部用组合物的0.2重量％至30重量％、优选地0.5重量％至20重量％、最佳地1重量％至12重量％的范围内，包括其中包含的所有范围。

通常，季铵基团上的C1-C3烷基成分将为甲基、乙基、正丙基、异丙基或羟乙基，以及它们的混合物。特别优选的是通过INCI命名法命名为“三甲铵”基团的三甲基铵基团。季铵盐中可以使用任何阴离子。阴离子可以是有机或无机的，条件是该材料是化妆品可接受的。典型的无机阴离子是卤离子、硫酸根、磷酸根、硝酸根和硼酸根。最优选的是卤离子，尤其是氯离子。有机阴离子抗衡离子包括甲基硫酸根、甲苯酰硫酸根、乙酸根、柠檬酸根、酒石酸根、乳酸根、葡萄糖酸根和苯磺酸根。

尤其可与上述铵盐结合使用的其他保湿剂包括取代的脲，如羟甲基脲、羟乙基脲、羟丙基脲；双-(羟甲基)脲；双(羟乙基)脲；双(羟丙基)脲；N,N’-二羟甲基脲；N,N’-二羟乙基脲；N,N’-二羟丙基脲；N,N,N’-三羟乙基脲；四(羟甲基)脲；四(羟乙基)脲；四(羟丙基)脲；N-甲基-N’-羟乙基脲；N-乙基-N’-羟乙基脲；N-羟丙基-N’-羟乙基脲和N,N’-二甲基-N-羟乙基脲。在出现术语羟丙基的情况下，该含义对于3-羟基-正丙基、2-羟基-正丙基、3-羟基-异丙基或2-羟基-异丙基基团是通用的。最优选的是羟乙基脲。后者可作为50％的水性液体获得。可用于本发明的局部用组合物中的取代的脲的量在0.01％至20％、或0.5％至15％、或2％至10％的范围内。

当使用铵盐和取代的脲时，在最特别优选的实施方案中，使用至少0.01％至25％、或0.2％至20％、或1％至15％的湿润剂，如甘油。用于本文的其他保湿剂包括凡士林和/或各种水通道蛋白操纵活性物质和/或燕麦仁粉。

在一个实施方案中，局部用组合物的pH介于3.5和8.5之间。在一些实施方案中，局部用组合物的pH介于pH 3.5和pH 8之间。在一些实施方案中，局部用组合物的pH介于pH 5至pH 7.8之间。在一些实施方案中，局部用组合物的pH介于5和7.5之间。

在一些实施方案中，本发明的局部用组合物包含防晒剂。这些通常是有机防晒剂和无机防晒剂的组合。特别希望同时包含UV-A和UV-B辐射防晒剂。

UV-B防晒油可选自肉桂酸、水杨酸、二苯基丙烯酸或它们的衍生物。UV-B防晒油可包含水杨酸辛酯、2-羟基苯甲酸3,3,5-三甲基环己酯、水杨酸乙基己酯、2-氰基-3,3-二苯基-2-丙烯酸2-乙基己酯或4-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯(也称为甲氧基肉桂酸辛酯或“OMC”)中的一种或多种。此类UV-B防晒油通常可商购获得，诸如Octisalate

局部用组合物还可包含水溶性的UV-B防晒剂。水溶性UV-B防晒剂还可包含苯基苯并咪唑磺酸(也称为恩索利唑)、4-氨基苯甲酸(也称为对氨基苯甲酸或“PABA”)或这两者。

上述实施方案中任一项的局部用组合物还可包含0.1重量％至10重量％的UV-A防晒油。UV-A防晒油可包含4-叔丁基-4’-甲氧基二苯甲酰基甲烷(“阿伏苯宗”)、2-甲基二苯甲酰基甲烷、4-甲基-二苯甲酰基-乙烷、4-异丙基二苯甲酰基-甲烷、4-叔丁基二苯甲酰基甲烷、2,4-二甲基二苯甲酰基甲烷、2,5-二甲基二苯甲酰基甲烷、4,4’-二异丙基二苯甲酰基甲烷、2-甲基-5-异丙基-4’-甲氧基-二苯甲酰基甲烷、2-甲基-5-叔丁基-4’-甲氧基-二苯甲酰基甲烷、2,4-二甲基-4’-甲氧基二苯甲酰基甲烷、2,6-二甲基-4-叔丁基-4’甲氧基-二苯甲酰基甲烷、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯、依莰舒或邻氨基苯甲酸甲酯中的一种或多种。局部用组合物中的UV-A防晒油的量可为0.5重量％至7重量％、或1重量％至5重量％。

适用于该局部用组合物中的其他合适的防晒油包括可从BASF公司商购获得的那些：Uvinul T-150(乙基己基三嗪酮；UV-B防晒油)、Uvinul A Plus(二乙氨基羟基苯甲酰基己基苯甲酸酯；UV-A防晒油)、Tinosorb S(双乙基己氧基苯酚甲氧基苯基三嗪；UV-A和UV-B防晒油)、Tinosorb M(亚甲基双苯并三唑基四甲基丁基苯酚；UV-A和UV-B防晒油)。苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠(Bisdisulizone disodium)也可以包含在局部用组合物中。

UV-A防晒油和UV-B防晒油的特定组合是阿伏苯宗和4-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯。

在一些实施方案中，防晒剂是无机防晒剂。适用于本发明的皮肤护理组合物中的无机防晒剂的示例包括但不限于超细二氧化钛、氧化锌、聚乙烯和各种其他聚合物。所谓术语“超细”是指平均粒度在10nm至200nm、或者20nm至100nm的范围内的颗粒。当存在于根据本发明的一些实施方案的皮肤护理制剂中时，防晒剂的量可在0.1％至30％、或者2％至20％、或者4％至10％的范围内。

除了本文包括的烟酰胺之外，本发明的组合物还可包含亮肤化合物，从而以最佳成本获得最佳亮肤性能。示例性物质是胎盘提取物、乳酸、间苯二酚(4-取代的、2,5-二取代的、4,5-二取代的和4,6-二取代的，特别是4-己基、4-甲基、4-丁基、4-异丙基、苯乙基间苯二酚)、熊果素、曲酸、阿魏酸、氢醌、间苯二酚衍生物(包括二取代间苯二酚)以及它们的组合。在一个实施方案中，此类亮肤化合物是酪氨酸酶抑制剂，最优选地是选自由曲酸、氢醌和4-取代的间苯二酚组成的组的化合物。此外，由式HOOC-(CxHy)-COOH表示的二羧酸，其中x＝4至20并且y＝6至40，诸如壬二酸、癸二酸、草酸、琥珀酸、延胡索酸、十八烯二酸(例如Arlatone DC)或它们的盐或它们的混合物，最优选延胡索酸或其盐，尤其是二钠盐。已发现，12HSA与延胡索酸或其盐的组合是特别优选的，尤其是对于亮肤制剂而言。这些试剂的量可在组合物的0.1重量％至10重量％、优选地0.5重量％至2重量％的范围内。优选的是，根据本发明的亮肤共活性剂为4-烷基间苯二酚和/或12-羟基硬脂酸。

本发明组合物的另一种优选成分是类维生素A。如本文所用，“类维生素A”包括维生素A或类视黄醇化合物的在皮肤中具有维生素A的生物活性的所有天然和/或合成类似物，以及这些化合物的几何异构体和立体异构体。类维生素A优选地为视黄醇、视黄醇酯(例如，视黄醇的C2-C22烷基酯，包括棕榈酸视黄酯、乙酸视黄酯、丙酸视黄酯)、视黄醛和/或视黄酸(包括全反式视黄酸和/或13-顺式-视黄酸)，更优选除视黄酸之外的类维生素A。这些化合物是本领域众所周知的，并且可以从许多来源商购获得，例如Sigma ChemicalCompany(St.Louis,Mo.)和Boerhinger Mannheim(Indianapolis,Ind.)。可用于本文的其他类维生素A描述于美国专利号4,677,120、美国专利号4,885,311、美国专利号5,049,584、美国专利号5,124,356中。其他合适的类视黄醇是视黄酸生育酚酯(视黄酸(反式或顺式)的生育酚酯、阿达帕林{6-[3-(1-金刚烷基)-4-甲氧基苯基]-2-萘甲酸}和他扎罗汀(6-[2-(4,4-二甲基硫代苯并二氢吡喃-6-基)-乙炔基]烟酸乙酯)。优选的类维生素A类维生素是视黄醇、棕榈酸视黄酯、乙酸视黄酯、丙酸视黄酯、视黄醛以及它们的组合。类维生素A优选地是大体上纯的，更优选地是基本上纯的。本发明的组合物可包含安全有效量的类维生素A，使得所得组合物对于调节角质组织状况、优选地对于调节皮肤的可见和/或可触知的不连续、更优选地对于调节皮肤老化的症状、甚至更优选地对于调节与皮肤老化相关联的皮肤质地的可见和/或可触知的不连续是安全且有效的。所述组合物优选地包含0.005％至2％、或0.01％至2％的类维生素A。视黄醇优选地以0.01％至0.15％的量使用；视黄醇酯优选地以0.01％至2％的量(例如，1％)使用；视黄酸优选地以0.01％至0.25％的量使用；视黄酸生育酚酯、阿达帕林和他扎罗汀优选地以0.01％至2％的量使用。

多种草药提取物可任选地包含在本发明的组合物中。示例性的草药提取物为石榴、白桦(Betula Alba)、绿茶、洋甘菊、甘草以及它们的提取物组合。提取物可以是分别携带在亲水性或疏水性溶剂中的水溶性或水不溶性的物质。水和乙醇是优选的提取溶剂。

局部用组合物还可包含约0.1重量％至约8重量％的成膜聚合物。此类成膜聚合物包括但不限于聚亚烷基氧基封端的聚酰胺(例如，INCI名称：聚酰胺-3、聚酰胺-4)、聚醚聚酰胺(例如，INCI名称：聚酰胺-6)、混合酸封端的聚酰胺(例如，INCI名称：聚酰胺-7)和酯封端的聚(酯酰胺)(例如，INCI名称：聚酰胺-8)。此类成膜聚合物可以是合成的或可商购获得的，诸如Arizona Chemical Company,LLC的Sylvaclear

防腐剂可理想地掺入本发明的组合物中以防止潜在有害微生物的生长。适用于本发明的组合物的传统防腐剂是对羟基苯甲酸的烷基酯。最近开始使用的其他防腐剂包括乙内酰脲衍生物、丙酸盐和各种季铵化合物。化妆品化学家熟悉适当的防腐剂，并且按惯例对其进行选择以满足防腐剂挑战性测试并提供产品稳定性。特别的防腐剂是丁基氨基甲酸碘代丙炔酯、苯氧乙醇、辛甘醇、C1-6对羟基苯甲酸酯(尤其是对羟基苯甲酸甲酯和/或对羟基苯甲酸丙酯)、咪唑烷基脲、脱氢乙酸钠和苄醇。选择防腐剂应考虑组合物的用途以及防腐剂与乳剂中其他成分之间可能的不相容性。防腐剂可以0.01％至2％范围内的量使用。一种特定的组合是八辛烯和辛甘醇，因为已公开辛甘醇能增强UVA和UVB保护。

适于包含在局部用组合物中的抗真菌剂是本领域技术人员所熟知的。示例包括但不限于氯咪巴唑、酮康唑、氟康唑、克霉唑、咪康唑、益康唑、乙环唑、特比萘芬、这些中的任一种或多种的盐(例如，盐酸盐)、吡啶硫酮锌、二硫化硒以及它们中的两种或更多种的组合。

在一些实施方案中，本发明的局部用组合物包含维生素。示例性维生素是维生素A(视黄醇)、维生素B2、维生素B3(烟酸)、维生素B6、维生素B12、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K和生物素。也可以使用维生素的衍生物。例如，维生素C衍生物包括抗坏血酸四异棕榈酸酯、抗坏血酸磷酸酯镁和抗坏血酸糖苷。维生素E的衍生物包括乙酸生育酚酯、棕榈酸生育酚酯和亚油酸生育酚酯。也可以使用DL-泛醇及其衍生物。在一些实施方案中，维生素B3衍生物是烟酰胺核糖核苷。在一些实施方案中，维生素B6衍生物是吡哆醇棕榈酸酯。类黄酮也可为可用的，特别是葡糖基橙皮苷、芦丁和大豆异黄酮(包括金雀异黄酮、黄豆苷元、雌马酚和它们的葡糖基衍生物)以及它们的混合物。当存在时，维生素或类黄酮的总量可在0.0001％至10％、或者0.001％至10％、或者0.01％至10％、或者0.1％至10％、或者1％至10％、或者0.01％至1％、或者0.1％至0.5％的范围内。

在一些实施方案中，本发明的局部用组合物包含酶，诸如氧化酶、蛋白酶、脂肪酶以及它们的组合。在一些实施方案中，本发明的局部用组合物包含可以Biocell SOho aD从Brooks Company,USA商购获得的超氧化物歧化酶。

在一些实施方案中，本发明的局部用组合物包含脱屑促进剂。在一些实施方案中，本发明的局部用组合物包含浓度为0.01％至15％、或者0.05％至15％、或者0.1％至15％、或者0.5％至15％的脱屑促进剂。

示例性脱屑促进剂包括一元羧酸。一元羧酸可以被取代或未被取代，并且碳链长度为最大16。在一些实施方案中，羧酸是α-羟基羧酸、β-羟基羧酸或多羟基羧酸。术语“酸”意指不仅包括游离酸，而且还包括其盐和C1-C30烷基酯或芳基酯，以及通过去除水以形成环状或直链内酯结构而生成的内酯。代表性酸包括乙醇酸、乳酸、苹果酸和酒石酸。在一些实施方案中，盐是乳酸铵。在一些实施方案中，β-羟基羧酸是水杨酸。在一些实施方案中，酚酸包括阿魏酸、水杨酸、曲酸以及它们的盐。

在一些实施方案中，至少一种另外的组分可以组合物的0.000001重量％至10重量％、或者0.00001重量％至10重量％、或者0.0001重量％至10重量％、或者0.001重量％至10重量％、或者0.01重量％至10重量％、或者0.1重量％至10重量％、或者0.0001重量％至1重量％存在。着色剂、遮光剂或研磨剂也可包含在本发明的组合物中。着色剂、遮光剂或研磨剂可以组合物的0.05重量％至5重量％、或者介于0.1重量％和3重量％之间的浓度包含在内。

在一些实施方案中，本发明的个人护理产品还可包含肽，诸如可从Sederma,France商购获得的五肽衍生物-Matrixyl

本发明的组合物可包含多种其他任选组分。CTFA Cosmetic IngredientHandbook(CTFA化妆品成分手册)(第二版，1992年)描述了适用于本发明组合物中的通常用于局部化妆品皮肤护理行业的各种非限制性化妆品和药物成分，该文献的全部内容以引用方式并入本文。示例包括：抗氧化剂、粘结剂、生物添加剂、缓冲剂、着色剂、增稠剂、聚合物、收敛剂、芳香剂、湿润剂、遮光剂、调理剂、去角质剂、pH调节剂、防腐剂、天然提取物、精油、皮肤感觉剂、皮肤舒缓剂和皮肤愈合剂。

本发明的局部用组合物优选地为非固体的。本发明的组合物优选地为免洗型组合物。本发明的组合物优选地为将被施用以保留在皮肤上的免洗型组合物。这些免洗型组合物区别于被施用于皮肤上并随后在产品施用之后或期间通过洗涤、冲洗、擦拭等去除的组合物。通常用于冲洗型组合物的表面活性剂具有使得它们能够在使用时产生易于冲洗的泡沫/肥皂泡的物理化学特性；它们可以由阴离子、阳离子、两性和非离子的混合物组成。另一方面，用于免洗型组合物中的表面活性剂不需要具有此类特性。相反，由于免洗型组合物并不打算被冲洗掉，它们需要不刺激，因此需要使免洗型组合物中表面活性剂的总含量和阴离子表面活性剂的总含量最小化。本发明组合物中的表面活性剂的总含量优选地为1％至不超过10％，更优选地为低于8％，最优选地为至多5％，最佳地为至多3％。

在一些实施方案中，阴离子表面活性剂以组合物的0.01重量％至至多5重量％、或者组合物的0.01重量％至4重量％、或者组合物的0.01重量％至3重量％、或者组合物的0.01重量％至2重量％的量存在于免洗型皮肤护理组合物中，或者基本上不存在(小于1％，或小于0.1％，或小于0.01％)。在一些实施方案中，皮肤护理组合物中的表面活性剂的总含量不超过10％，或者低于8％，或者至多5％。

在一些实施方案中，表面活性剂选自由阴离子、非离子、阳离子和两性活性物质组成的组。

在一些实施方案中，非离子表面活性剂是具有以下的那些：C10-C20脂肪醇或酸疏水物，其与每摩尔疏水物2至100摩尔氧化乙烯或氧化丙烯缩合；与2至20摩尔氧化烯缩合的C2-C10烷基酚；乙二醇的单脂肪酸酯和二脂肪酸酯；脂肪酸甘油单酯；脱水山梨糖醇单-和二-C8-C20脂肪酸；和聚氧乙烯脱水山梨糖醇，以及它们的组合。在一些实施方案中，非离子表面活性剂选自由烷基多糖苷、糖脂肪酰胺(例如甲基葡糖酰胺)和三烷基胺氧化物组成的组。

根据本发明的一些实施方案，适用于皮肤护理组合物中的两性表面活性剂包括椰油酰胺基丙基甜菜碱、C12-C20三烷基甜菜碱、月桂酰两性基乙酸钠和月桂酰双两性基乙酸钠。

根据本发明的一些实施方案，适用于皮肤护理组合物中的阴离子表面活性剂包括皂、烷基醚硫酸盐和烷基醚磺酸盐、烷基硫酸盐和烷基磺酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基磺基琥珀酸盐和二烷基磺基琥珀酸盐、C8-C20酰基羟乙基磺酸盐、C8-C20烷基醚磷酸盐、C8-C20肌氨酸盐、C8-C20酰基乳酸盐、磺基乙酸盐以及它们的组合。

本发明的组合物通常为水包油或油包水的乳剂形式。在一些实施方案中，局部用组合物是雪花膏和基于水包油乳剂的乳膏或洗剂。雪花膏基料是一种包含5％至40％的脂肪酸和0.1％至20％的皂的基料。在这种乳膏中，脂肪酸优选地基本上是硬脂酸和棕榈酸的混合物，皂优选地是脂肪酸混合物的钾盐，但也可使用其他抗衡离子及其混合物。雪花膏基料中的脂肪酸通常使用基本上(通常约90％至95％)为硬脂酸和棕榈酸的混合物的西斯特利酸(hysteric acid)来制备。在总棕榈酸-硬脂酸混合物中，典型的西斯特利酸(hystericacid)包含约52％至55％的棕榈酸和45％至48％的硬脂酸。因此，包含西斯特利酸(hysteric acid)及其皂以制备雪花膏基料在本发明的范围内。特别优选的是，所述组合物包含高于7％、优选地高于10％、更优选地高于12％的脂肪酸。典型的雪花膏基料由结晶网络构成，并且对各种成分的添加敏感。

在一个实施方案中，局部用组合物被配制为其中胱氨酸基本上溶解于水相中的油包水乳剂。在一个实施方案中，局部用组合物被配制为在水性液滴中具有胱氨酸的油包水乳剂，其中至少90％的液滴的直径在100nm至20微米、或在替代方案中200nm至20微米或至10微米的范围内。

在一些实施方案中，局部用组合物被配制为面膜。在一些实施方案中，根据美国专利号5,139,771中所述的配方将局部用组合物配制为面膜。在一些实施方案中，根据美国专利号4,933,177中所述的配方将局部用组合物配制为面膜。在一些实施方案中，根据美国专利号6,001,367中所述的配方将局部用组合物配制为面膜。

口服施用

因此，根据本发明的一个方面，提供了如本文所述的用于口服施用的组合物。

当口服施用本发明的组合物时，它可以是片剂或胶囊剂的形式。

本发明的组合物可制成固体形式，包括胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、块状食品或糖食；或者液体形式，包括溶液剂、混悬剂或乳剂，或者糖浆剂、甜浆剂、酏剂、液体饮料(诸如酸奶饮料)或食品(诸如酸奶)的形式。

该组合物可进行常规操作，诸如灭菌，并且/或者可包含常规惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂，以及佐剂，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。

通常，当组合物为片剂或胶囊剂例如明胶胶囊的形式时，该组合物可包含一种或多种活性组分；

以及

a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘氨酸；

b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；(也用于片剂)；

c)粘结剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；(如果需要)；

d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐、或泡腾混合物；和/或

e)吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂。

根据本领域已知的方法，片剂可为薄膜包衣的或肠溶包衣的。

用于口服施用的合适组合物包括有效量的本文所述活性组分，其形式为片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散的粉剂或颗粒剂、块状食品、糖食、溶液剂、乳剂、硬或软胶囊剂、糖浆剂、甜浆剂、酏剂、液体饮料或食品。

旨在用于口服的组合物可根据本领域已知的任何用于制造有效组合物的方法来制备；并且此类组合物可包含一种或多种选自由甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂组成的组的附加试剂，以提供美观且可口的制剂。

片剂含有与适于制造片剂的无毒的口服可接受的赋形剂混合的包含本文所述活性组分的组合物。这些赋形剂为例如惰性稀释剂，诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘结剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯树胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以不包衣或通过已知技术进行包衣，以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而在更长的时间内提供持续的作用。例如，可以使用延时材料，诸如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。

用于口服使用的制剂可以硬明胶胶囊形式存在，其中包含活性组分的组合物与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合；或者以软明胶胶囊形式存在，其中包含活性组分的组合物与水或油介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。

软胶囊可使用本领域熟知的技术来制备。例如，软胶囊通常使用旋转模头封装工艺来制备。将活性剂制剂通过重力进料到封装机中。在一个实施方案中，该制剂包含药物赋形剂，诸如橄榄油、明胶、甘油、纯净水、黄蜂蜡、向日葵卵磷脂、二氧化硅、二氧化钛、F.D.&C蓝1和F.D.&C红4、微晶纤维素、羟丙甲纤维素、植物硬脂酸镁和/或二氧化硅。

胶囊壳可包含一种或多种增塑剂，诸如甘油、山梨糖醇、脱水山梨糖醇、麦芽糖醇、甘油、聚乙二醇、具有3至6个碳原子的多元醇、柠檬酸、柠檬酸酯、柠檬酸三乙酯以及它们的组合。在一个实施方案中，增塑剂是甘油。

除增塑剂之外，胶囊壳还可包含其他合适的壳添加剂，诸如遮光剂、着色剂、湿润剂、防腐剂、调味剂以及缓冲盐和酸。

当封装的活性剂对光敏感时，使用遮光剂使胶囊壳不透明。合适的遮光剂包括但不限于二氧化钛、氧化锌、碳酸钙以及它们的组合。在一个实施方案中，遮光剂是二氧化钛。

着色剂可用于营销和产品识别和/或区分目的。合适的着色剂包括合成和天然染料以及它们的组合。

湿润剂可用于抑制软凝胶的水分活度。合适的湿润剂包括甘油和山梨糖醇，它们通常是增塑剂组合物的组分。由于干燥的适当储存的软胶囊的水分活度低，因此最大的微生物风险来自霉菌和酵母菌。为此，可将防腐剂掺入胶囊壳中。合适的防腐剂包括对羟基苯甲酸的烷基酯诸如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯和对羟基苯甲酸庚酯(统称为“对羟基苯甲酸酯”)或它们的组合。

根据本发明的另一方面，提供了一种改善细胞对DNA损伤的耐受性的方法，所述方法包括施用有效量的组合物，该组合物包含有效量的一种或多种组分，所述组分选自金合欢素、ACT1肽、α-硫辛酸、前列地尔、茴香霉素、芹黄素、抗坏血酸、黄芪、小檗碱、β-拉帕醌、β-羟基-β-甲基丁酸酯、假马齿苋、儿茶素、儿茶酚、洋甘菊、白杨素、香豆雌酚、姜黄素、二硝基苯酚、地诺前列素、鞣花酸、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯、绿茶提取物、非瑟酮、金雀异黄酮、人参皂苷RE、光甘草定、18-α-甘草次酸、18-β-甘草次酸、甘草甜素、氢醌、异槲皮苷(EMIQ)、山柰酚、黑豆花青素、亮氨酸、锂、木犀草素、木犀草素、木犀草定、褪黑素、甲萘醌、1-甲基烟酰胺(MNA)、水杨酸甲酯、杨梅酮、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、烟酸(维生素B

根据本发明的另一方面，提供了一种改善细胞的DNA修复能力的方法，所述方法包括施用有效量的组合物，该组合物包含有效量的一种或多种组分，所述组分选自金合欢素、ACT1肽、α-硫辛酸、前列地尔、茴香霉素、芹黄素、抗坏血酸、黄芪、小檗碱、β-拉帕醌、β-羟基-β-甲基丁酸酯、假马齿苋、儿茶素、儿茶酚、洋甘菊、白杨素、香豆雌酚、姜黄素、二硝基苯酚、地诺前列素、鞣花酸、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯、绿茶提取物、非瑟酮、金雀异黄酮、人参皂苷RE、光甘草定、18-α-甘草次酸、18-β-甘草次酸、甘草甜素、氢醌、异槲皮苷(EMIQ)、山柰酚、黑豆花青素、亮氨酸、锂、木犀草素、木犀草素、木犀草定、褪黑素、甲萘醌、1-甲基烟酰胺(MNA)、水杨酸甲酯、杨梅酮、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、烟酸(维生素B

根据本发明的该方面，提供了一种如本文所述的增强细胞对DNA损伤、氧化应激、线粒体功能障碍的耐受性或者提高DNA修复能力的方法。

在根据本发明的该方面的方法中施用的活性组分的量可根据活性组分的性质、施用方式等而变化。可在该方法中施用的活性组分的示例性量为约1mg至约1000mg；或约50mg至约900mg；或约100mg至约800mg；或约150mg至约700mg；或约200mg至约600mg；或约250mg至约500mg。前述剂量可以每天一次、每天两次或每天最多三次或四次施用。

根据本发明的另一方面，提供了一种如本文所述的方法，该方法包括减轻、缓解或改善宿主的衰老的影响。

根据本发明的该方面，提供了一种通过改善细胞对DNA损伤的耐受性并且/或者增强细胞的DNA修复能力来减轻、缓解或改善宿主的衰老的影响的方法。

根据本发明的该方面的方法可包括减轻、缓解或改善与年龄相关的皮肤状况、与日照相关的皮肤状况、与污染暴露相关的皮肤状况、与氧化应激相关的皮肤状况以及与生活方式选择诸如饮食、酒精和/或吸烟相关的皮肤状况。另外，本发明的方法在通过改善细胞对DNA损伤的耐受性并且/或者增强细胞的DNA修复能力来减轻、缓解或改善与炎症性皮肤病相关的皮肤状况和与自身免疫性疾病皮肤病相关的皮肤状况方面可以是有利的。

具体地，根据本发明的该方面，提供了一种改善皮肤细胞对DNA损伤的耐受性并且/或者增强皮肤细胞的DNA修复能力的方法，该方法包括将有效量的本文所述的组合物局部施用于皮肤。

特定有效剂量的选择可以由本领域技术人员基于对本领域技术人员已知的若干因素的考虑来确定(例如，经由临床试验)，诸如待减轻、缓解或改善的皮肤病；所治疗的皮肤病的性质和严重程度、宿主的体重；等等。减轻、缓解或改善皮肤病所采用的确切剂量也可取决于施用途径。可从体外或动物模型测试系统得出的剂量反应曲线推断有效剂量。

然而，一般而言，本发明的组合物以约0.1mg/kg体重至约500mg/kg体重、或约1mg/kg至约400mg/kg、或约1mg/kg至约300mg/kg、或约1mg/kg至约200mg/kg、或约1mg/kg至约100mg/kg、或约10mg/kg至约50mg/kg的日剂量，例如以每天最多三次或四次(例如每天两次)的分剂量或以持释形式施用，可获得令人满意的结果。

通常可行的是，在一天的多个小时处施用本发明的组合物的日剂量。所施用的活性组合物的量可取决于诸如活性组合物的溶解度、所用的制剂、受试者状况(诸如体重)和/或施用途径的因素。

现在将仅通过举例的方式并参考附图来描述本发明，其中：

图1示出了在暴露于组合的条件下16天内的临床试验中，来自血液样本的人PBMC中SIRT1表达的增强。

图2示出了针对氧化应激的保护的HDF结果；并且

图3(a)和图3(b)示出了针对线粒体应激的保护的HDF结果。

实验

DNA损伤的测量使用“碱性DNA解旋荧光分析(FADU)”方法[Birnboim HC,JevcakJJ.Cancer Res(癌症研究)(1981)41:1889–1892]来进行。这是定量DNA链断裂的灵敏方法，该方法基于在受控的碱性条件下双链DNA的部分变性(“解旋”)。简而言之，在通过辐照导致DNA损伤后，进行细胞裂解。然后在受控的pH和温度条件下进行DNA的受控解旋。DNA链断裂处是易于解旋的位点，因此，更多的DNA损伤将导致更多的DNA解旋。为了终止解旋，添加中和溶液。为了定量在碱温育后保留双链的DNA的数量，添加荧光探针，该荧光探针与双链DNA特异性结合。低荧光强度表明裂解时存在大量DNA链断裂。通过使细胞在辐照后(1小时)恢复，然后测量荧光强度来测量DNA修复。

在进行FADU分析之前，用包含烟酰胺、槲皮素、柠檬酸锌、抗坏血酸、芹黄素和α-硫辛酸的组合的组合物对人皮肤成纤维细胞处理24小时，然后测量DNA损伤和修复水平并将其与未处理(对照)细胞的值进行比较。结果如下：

对于每种条件，值为至少3次重复的平均值(并且以％表示的变异系数)。结果以％表示，并且示出：

DNA损伤(％)＝5Gy辐照后损失的荧光信号强度

DNA修复(％)＝在37℃下进行1h修复后恢复的损伤％

结果显示，与对照细胞的28％损失相比，用我们的组合物处理过的细胞的荧光强度没有损失，这表明我们的组合物可以保护细胞免受DNA损伤。

实施例1

SIRT1表达

使用蛋白质印迹分析对临床参与者的PBMC(外周血单核细胞)的SIRT1表达变化进行分析。在暴露于我们的组合物的16天内，SIRT1表达显著增加。SIRT1表达增加表明我们的组合物激活了与增强的DNA修复相关联的有益下游途径。

参见图1。

临床结果：蛋白质组学

使用质谱确定与衰老相关联的蛋白质的含量随组合物的变化。

在志愿者样本中检测到丰度增加的线粒体蛋白质，包括：

延胡索酸水合酶：在三羧酸(TCA)循环中催化延胡索酸水合为L-苹果酸，以促进NADH形式的能量生产中的过渡步骤。

天冬氨酸转氨酶：催化L-色氨酸代谢产物L-犬尿氨酸的氨基转移反应以形成犬尿酸(KA)，作为NAD合成的从头途径的一部分

VDAC2：线粒体膜通道

复合物IV亚基：具体地，COX5A被证明会随着年龄的增长而在皮肤中减少，从而降低线粒体功能

复合物V亚基：也被发现随着年龄的增长而减少，导致线粒体功能障碍。

在志愿者样本中检测到丰度增加的蛋白酶体蛋白质，包括：

19S和20S蛋白酶体亚基：这些亚基复合在一起形成26S蛋白酶体，该蛋白酶体能降解已知会随着年龄的增长而积聚的受损和未折叠的蛋白质。

蛋白酶体在线粒体生物发生中也很重要。这是因为许多线粒体蛋白质在细胞质中合成，然后需要跨线粒体膜运输(未折叠)。蛋白酶体可确保在此过程中清除所有受损的蛋白质。20S亚基具体地涉及线粒体未折叠前体蛋白在线粒体输入之前的降解，这表明我们的组合物增加了线粒体的生物发生。

在志愿者样本中检测到丰度增加的端粒相关蛋白，包括：

RIF1：端粒相关蛋白RIF-1已被证明参与端粒长度的维持和端粒DNA损伤的协调修复。

我们针对多种细胞应激物在人皮肤成纤维细胞(HDF)中测试了联合干预措施。

实施例2

HDF结果：针对氧化应激的保护

用NAM或组合进行预处理

随后暴露于氧化应激(tbh7ox)

测量细胞活力以评估针对氧化应激的保护

我们的组合物提供了比烟酰胺更好的保护作用

如系统药理学所预测，需要该组合物来产生这种增强的保护作用

该组合物是α硫辛酸、芹黄素、抗坏血酸、柠檬酸锌、烟酰胺和槲皮素。结果示于图2中。

实施例3

HDF结果：针对线粒体应激的保护

实施例3(a)

用NAM或我们的组合物进行预处理

随后暴露于线粒体应激(鱼藤酮–复合物I抑制剂)

测量细胞活力以评估针对线粒体功能障碍的保护

我们的组合物提供了比烟酰胺更好的保护作用

该组合物是α硫辛酸、芹黄素、抗坏血酸、柠檬酸锌和烟酰胺。

结果示于图3(a)中。

实施例3(b)

用NAM或我们的组合物进行预处理

随后暴露于线粒体应激(NaN

测量细胞活力以评估针对线粒体功能障碍的保护

我们的组合物提供了比烟酰胺更好的保护作用

该组合物是α硫辛酸、芹黄素、抗坏血酸、柠檬酸锌和烟酰胺。

结果示于图3(b)中。