将核酸递送至耳蜗和前庭细胞的组合物和方法

摘要

本文提供将核酸有效地递送至耳蜗和前庭细胞的材料和方法，以及治疗与基因缺陷相关的感觉转导障碍的方法。

说明书

相关申请的交叉引用

本申请主张2018年3月5日提交的下述美国临时申请62/638,697的权益，该临时申请的整体内容通过引用并入本文。

背景技术

遗传性听力损失是一个显著的问题，且鲜有除耳蜗植入以外的治疗选择。先天性听力问题往往由单基因缺陷造成。每500个婴儿中就诊断出1例语前聋，其中大约50％具有遗传病因。乌谢尔综合征(Usher syndrome)与大量不同的临床亚型相关，每一种亚型均可由大量不同基因中任一个的突变造成，乌谢尔综合征是3％至6％的儿童早期耳聋的原因。一种更普遍的基因缺陷出现在TMC1基因中，估计占所有遗传性耳聋的1％至2％。最严重的乌谢尔综合征形式，USH1，与下述六种基因的缺陷相关：USH1、MYO7A(肌球蛋白(myosin)7a)、USH1C(harmonin)、CDH23(钙粘蛋白(cadherin 23)、PCDH15(原钙粘蛋白(protocadherin)15)、SANS(sans；也称为USH1G)和CIB2(钙整合素结合蛋白2)。

内耳，例如耳蜗，尤其是耳蜗中的内毛细胞和外毛细胞(IHC和OHC)，对于用以干预多种病因的听力损失和耳聋、最直接的单基因形式的先天性耳聋的多核苷酸治疗途径来说，是有吸引力的目标。但是，有效地以IHC和OHC及其它可能与基因治疗途径相关的内耳细胞为靶标并转导这些细胞是一个挑战。

发明内容

本发明提供AAV9-php.b载体，该载体包含编码所关注的多肽(例如，TMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C(例如，harmonin-a、harmonin-b、或harmonin-c)、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4和FAM65B)的转基因，以及将该载体给药至听力和/或前庭机械感受中具有基因缺陷的受试者的内耳从而治疗该受试者的方法。

本发明至少部分地基于下述发现：AAV9-php.b-CMV-GFP(也称为AAV-php.b-CMV-GFP)在体内有效且特异性地以内耳的感觉细胞包括内毛细胞和外毛细胞为靶标。

一方面，本发明提供AAV9-php.b载体，其中该载体含有编码肌球蛋白7a、harmonin(例如，harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c)、钙粘蛋白23、原钙粘蛋白15、USH2A、ADGRV1/VLGR1/GPR98、WHRN、CLRN1、HARS、SANS和钙整合素结合蛋白2的多核苷酸或本文所述的任何其它多肽。

另一方面，本发明提供AAV9-php.b载体，其中该载体编码与AAV9-php.b具有至少约85％序列一致性的衣壳，且含有引导人TMC1多核苷酸的表达的启动子。

另一方面，本发明提供AAV9-php.b载体，其中该载体含有引导下游多核苷酸的表达的启动子，该启动子为Espin启动子、PCDH15启动子、PTPRQ启动子、Myo6启动子、KCNQ4启动子、Myo7a启动子、突触蛋白启动子、GFAP启动子、CMV启动子、CAG启动子、CBH启动子、CBA启动子、U6启动子或TMHS(LHFPL5)启动子。

另一方面，本发明提供含有前述方面的AAV9-php.b载体的细胞。

另一方面，本发明提供表达受试者的内耳中的多肽的方法，该方法涉及令内耳细胞与编码所关注多肽的AAV9-php.b载体接触，其中该AAV9-php.b载体转染至少约85％、90％、95％或更多的内毛细胞或外毛细胞。

另一方面，本发明提供表达受试者的内耳中的多肽的方法，该方法涉及令内耳细胞与编码所关注的人多肽的AAV9-php.b载体接触。

另一方面，本发明提供治疗受试者的与基因缺陷相关的内耳病变的方法，该方法牵涉令该受试者的细胞与AAV9-php.b载体接触，其中该载体含有编码肌球蛋白7a、harmonin、钙粘蛋白23、原钙粘蛋白15、USH2A、ADGRV1/VLGR1/GPR98、WHRN、CLRN1、HARS、SANS和钙整合素结合蛋白2中任一者或多者的多核苷酸。

另一方面，本发明提供治疗受试者的与基因缺陷相关的内耳病变的方法，该方法牵涉令该受试者的细胞与AAV9-php.b载体接触，其中该载体含有启动子，该启动子为Espin启动子、PCDH15启动子、PTPRQ启动子、Myo6启动子、KCNQ4启动子、Myo7a启动子、突触蛋白启动子、GFAP启动子、CMV启动子、CAG启动子、CBH启动子、CBA启动子、U6启动子和TMHS(LHFPL5)启动子中的任一者。

另一方面，本发明提供治疗受试者的与基因缺陷相关的内耳病变的方法，该方法牵涉令该受试者的细胞与AAV9-php.b载体接触，其中该载体编码与AAV9-php.b具有至少约85％序列一致性的衣壳并且含有可操作地链接至编码UDH1多肽的多核苷酸的启动子，该USH1多肽为肌球蛋白7a、harmonin、钙粘蛋白23、原钙粘蛋白15、USH2A、ADGRV1/VLGR1/GPR98、WHRN、CLRN1、HARS、SANS或钙整合素结合蛋白2。

在本文所述的本发明的上述方面或任何其它方面的多个实施方案中，该内耳缺陷为与在内耳中被表达的多肽中的基因改变相关的遗传性障碍。在其它实施方案中，基因缺陷与部分听力损失、完全耳聋、或部分或完全前庭功能障碍有关。在上述方面的其它实施方案中，启动子为下列中的任一者或多者：Espin启动子、PCDH15启动子、PTPRQ启动子、Myo6启动子、KCNQ4启动子、Myo7a启动子、突触蛋白启动子、GFAP启动子、CMV启动子、CAG启动子、CBH启动子、CBA启动子、U6启动子和TMHS(LHFPL5)启动子。在上述方面的其它实施方案中，该载体以至少约70％或更高的效率转导内毛细胞、外毛细胞、前庭毛细胞、螺旋神经节或前庭神经节。在上述方面的其它实施方案中，该harmonin多肽是harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c。在上述方面的其它实施方案中，该细胞是外毛细胞、内毛细胞、前庭毛细胞、螺旋神经节或前庭神经节。在上述方面的其它实施方案中，载体含有引导下游多核苷酸的表达的启动子，该启动子为下列中的任一者或多者：Espin启动子、PCDH15启动子、PTPRQ启动子、Myo6启动子、KCNQ4启动子、Myo7a启动子、突触蛋白启动子、GFAP启动子、CMV启动子、CAG启动子、CBH启动子、CBA启动子、U6启动子或TMHS(LHFPL5)启动子。在上述方面的其它实施方案中，该下游多核苷酸是TMC1、TMC2或USH1多肽，且该USH1多肽是肌球蛋白7a、harmonin、钙粘蛋白23、原钙粘蛋白15、USH2A、ADGRV1/VLGR1/GPR98、WHRN、CLRN1、HARS、SANS和钙整合素结合蛋白2。在上述方面的特定实施方案中，该harmonin多肽是harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c。在上述方面的其它实施方案中，该AAV9-php.b载体以内毛细胞和外毛细胞为靶标，靶向效率为至少约70％、80％、90％、95％或更高，甚至高达100％。在上述方面的其它实施方案中，该人类多肽是TMC2、harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c。在上述方面的其它实施方案中，该内耳缺陷是听力障碍或前庭障碍。在其它实施方案中，给药该载体增加、改善或维持所述受试者的听力和/或前庭功能。在其它实施方案中，得以改善或维持的听觉和/或前庭功能与纤毛束形态的保持和/或机械转导的复原有关。在上述方面的其它实施方案中，该内耳病变为乌谢尔综合征。

定义

除非另做定义，否则本文中使用的所有科技术语均具有本发明所属领域技术人员所一般理解的意义。下述参考文献对技术人员提供本发明中使用的多个术语的一般性定义：Singleton等人所著《微生物学和分子生物学词典(第二版)》(Singleton et al.,Dictionary of Microbiology and Molecular Biology(2nd ed.1994))；《剑桥科技词典》(The Cambridge Dictionary of Science and Technology(Walker ed.,1988))；Rieger等人编撰的《遗传性术语表(第五版)》(The Glossary of Genetics,5th Ed.,R.Rieger etal.(eds.),Springer Verlag(1991))；以及Hale和Marham所著《哈珀·柯林斯生物学词典》(Hale&Marham,The Harper Collins Dictionary of Biology(1991)).如本文中所用，除非明确排除，否则下述术语具有归于其下方的意义。

“AAV9-php.b载体”意为转染内耳细胞的包含AAV9-php.b多核苷酸或其片段的病毒载体。在一个实施方案中，AAV9-php.b载体在给药至受试者的内耳或与源自内耳的细胞进行体外接触后，转染至少70％的内毛细胞和70％的外毛细胞。在其它实施方案中，至少85％、90％、95％或几乎100％的内毛细胞和/或85％、90％、95％或几乎100％的外毛细胞被转染。可使用编码GFP的基因在小鼠模型内评估转染效率。示例性AAV9-php.b载体的序列提供于下。

AAV9-php.b

CCAATGATACGCGTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGCGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGTACATCGACGGTATCGGGGGAGCTCGCAGGGTCTCCATTTTGAAGCGGGAGGTTTGAACGCGCAGCCGCCATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCTCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTGGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAATATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCGGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGACTGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGTGTCAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCACATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCTTGCGACCTGGTCAATGTGGACTTGGATGACTGTGTTTCTGAACAATAAATGACTTAAACCAGGTATGAGTCGGCTGGATAAATCTAAAGTCATAAACGGCGCTCTGGAATTACTCAATGAAGTCGGTATCGAAGGCCTGACGACAAGGAAACTCGCTCAAAAGCTGGGAGTTGAGCAGCCTACCCTGTACTGGCACGTGAAGAACAAGCGGGCCCTGCTCGATGCCCTGGCCATCGAGATGCTGGACAGGCATCATACCCACTTCTGCCCCCTGGAAGGCGAGTCATGGCAAGACTTTCTGCGGAACAACGCCAAGTCATTCCGCTGTGCTCTCCTCTCACATCGCGACGGGGCTAAAGTGCATCTCGGCACCCGCCCAACAGAGAAACAGTACGAAACCCTGGAAAATCAGCTCGCGTTCCTGTGTCAGCAAGGCTTCTCCCTGGAGAACGCACTGTACGCTCTGTCCGCCGTGGGCCACTTTACACTGGGCTGCGTATTGGAGGAACAGGAGCATCAAGTAGCAAAAGAGGAAAGAGAGACACCTACCACCGATTCTATGCCCCCACTTCTGAGACAAGCAATTGAGCTGTTCGACCGGCAGGGAGCCGAACCTGCCTTCCTTTTCGGCCTGGAACTAATCATATGTGGCCTGGAGAAACAGCTAAAGTGCGAAAGCGGCGGGCCGGCCGACGCCCTTGACGATTTTGACTTAGACATGCTCCCAGCCGATGCCCTTGACGACTTTGACCTTGATATGCTGCCTGCTGACGCTCTTGACGATTTTGACCTTGACATGCTCCCCGGGTAAATGCATGAATTCGATCTAGAGGGCCCTATTCTATAGTGTCACCTAAATGCTAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGCTTCTGAGGCGGAAAGAACCAGCTGGGGCTCGAATCAAGCTATCAAGTGCCACCTGACGTCTCCCTATCAGTGATAGAGAAGTCGACACGTCTCGAGCTCCCTATCAGTGATAGAGAAGGTACGTCTAGAACGTCTCCCTATCAGTGATAGAGAAGTCGACACGTCTCGAGCTCCCTATCAGTGATAGAGAAGGTACGTCTAGAACGTCTCCCTATCAGTGATAGAGAAGTCGACACGTCTCGAGCTCCCTATCAGTGATAGAGAAGGTACGTCTAGAACGTCTCCCTATCAGTGATAGAGAAGTCGACACGTCTCGAGCTCCCTATCAGTGATAGAGAAGGTACCCCCTATATAAGCAGAGAGATCTGTTCAAATTTGAACTGACTAAGCGGCTCCCGCCAGATTTTGGCAAGATTACTAAGCAGGAAGTCAAGGACTTTTTTGCTTGGGCAAAGGTCAATCAGGTGCCGGTGACTCACGAGTTTAAAGTTCCCAGGGAATTGGCGGGAACTAAAGGGGCGGAGAAATCTCTAAAACGCCCACTGGGTGACGTCACCAATACTAGCTATAAAAGTCTGGAGAAGCGGGCCAGGCTCTCATTTGTTCCCGAGACGCCTCGCAGTTCAGACGTGACTGTTGATCCCGCTCCTCTGCGACCGCTAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAGTGTTCTCGTCACGTGGGCATTAATCTGATTCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAACTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGACTTAAGCCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACAACCTTAGTGAAGGAATTCGCGAGTGGTGGGCTTTGAAACCTGGAGCCCCTCAACCCAAGGCAAATCAACAACATCAAGACAACGCTAGAGGTCTTGTGCTTCCGGGTTACAAATACCTTGGACCCGGCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCGGTCAACGCAGCAGACGCGGCGGCCCTCGAGCACGACAAAGCCTACGACCAGCAGCTCAAGGCCGGAGACAACCCGTACCTCAAGTACAACCACGCCGACGCCGAGTTCCAGGAGCGGCTCAAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGAGGCTTCTTGAACCTCTTGGTCTGGTTGAGGAAGCGGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGGCCTGTAGAGCAGTCTCCTCAGGAACCGGACTCCTCCGCGGGTATTGGCAAATCGGGTGCACAGCCCGCTAAAAAGAGACTCAATTTCGGTCAGACTGGCGACACAGAGTCAGTCCCAGACCCTCAACCAATCGGAGAACCTCCCGCAGCCCCCTCAGGTGTGGGATCTCTTACAATGGCTTCAGGTGGTGGCGCACCAGTGGCAGACAATAACGAAGGTGCCGATGGAGTGGGTAGTTCCTCGGGAAATTGGCATTGCGATTCCCAATGGCTGGGGGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAATCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACAGCACATCTGGAGGATCTTCAAATGACAACGCCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCTAAGCGACTCAACTTCAAGCTCTTTAACATTCAGGTCAAAGAGGTTACGGACAACAATGGAGTCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTCCAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAGCTCCCGTACGTGCTCGGGTCGGCTCACGAGGGCTGCCTCCCGCCGTTCCCAGCGGACGTTTTCATGATTCCTCAGTACGGGTATCTGACGCTTAATGATGGAAGCCAGGCCGTGGGTCGTTCGTCCTTTTACTGCCTGGAATATTTCCCGTCGCAAATGCTAAGAACGGGTAACAACTTCCAGTTCAGCTACGAGTTTGAGAACGTACCTTTCCATAGCAGCTACGCTCACAGCCAAAGCCTGGACCGACTAATGAATCCACTCATCGACCAATACTTGTACTATCTCTCTAGAACTATTAACGGTTCTGGACAGAATCAACAAACGCTAAAATTCAGTGTGGCCGGACCCAGCAACATGGCTGTCCAGGGAAGAAACTACATACCTGGACCCAGCTACCGACAACAACGTGTCTCAACCACTGTGACTCAAAACAACAACAGCGAATTTGCTTGGCCTGGAGCTTCTTCTTGGGCTCTCAATGGACGTAATAGCTTGATGAATCCTGGACCTGCTATGGCCTCTCACAAAGAAGGAGAGGACCGTTTCTTTCCTTTGTCTGGATCTTTAATTTTTGGCAAACAAGGTACTGGCAGAGACAACGTGGATGCGGACAAAGTCATGATAACCAACGAAGAAGAAATTAAAACTACTAACCCGGTAGCAACGGAGTCCTATGGACAAGTGGCCACAAACCACCAGAGTGCCCAAACTTTGGCGGTGCCTTTTAAGGCACAGGCGCAGACCGGTTGGGTTCAAAACCAAGGAATACTTCCGGGTATGGTTTGGCAGGACAGAGATGTGTACCTGCAAGGACCCATTTGGGCCAAAATTCCTCACACGGACGGCAACTTTCACCCTTCTCCGCTGATGGGAGGGTTTGGAATGAAGCACCCGCCTCCTCAGATCCTCATCAAAAACACACCTGTACCTGCGGATCCTCCAACGGCCTTCAACAAGGACAAGCTGAACTCTTTCATCACCCAGTATTCTACTGGTCAAGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAAAACAGCAAGCGCTGGAACCCGGAGATCCAGTACACTTCCAACTATTACAAGTCTAATAATGTTGAATTTGCTGTTAATACTGAAGGTGTATATAGTGAACCCCGCCCCATTGGCACCAGATACCTGACTCGTAATCTGTAAGTCGACTTGCTTGTTAATCAATAAACCGTTTAATTCGTTTCAGTTGAACTTTGGTCTCTGCGAAGGGCAATTCGTTTAAACCTGCAGGACTAGAGGTCCTGTATTAGAGGTCACGTGAGTGTTTTGCGACATTTTGCGACACCATGTGGTCACGCTGGGTATTTAAGCCCGAGTGAGCACGCAGGGTCTCCATTTTGAAGCGGGAGGTTTGAACGCGCAGCCGCCAAGCCGAATTCTGCAGATATCACATGTCCTAGGAACTATCGATCCATCACACTGGCGGCCGCTCGACTAGAGCGGCCGCCACCGCGGTGGAGCTCCAGCTTTTGCGGACCGAATCGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGACGTC

“机械感受(mechanosensation)”意为对机械刺激的反应。触觉、听觉和平衡是将机械刺激转化为神经元信号的示例。机械感受输入被转化为通过名为“机械转导(mechanotransduction)”的过程进行的对机械刺激的反应。

“肌球蛋白6(Myo6)启动子”意为包含核酸序列或由核酸序列组成的调节性多核苷酸序列，该核酸序列足以引导下游多核苷酸在外毛细胞、内毛细胞、前庭细胞、螺旋神经节或前庭神经节中的表达并且与下述核苷酸序列具有至少约85％的测序一致性：

TGCAAGAACCCTCACTGGCTGAACTATCTTGCCAGCCCCTTATTTTGTTTTCATATTAACCTCTTTTTTCTAGTAAAGGAGATGTTTGCTCTCAAATTTGCATAGGAATGTAATATTTAATTTAAAAAGATGACCCACATATGACCTTATAAGGACAGTAAAATTAAACAACCGGAAAGATAAAGCGGGCCAGTTGGCTCAGTTCTATAAAACCAGCCCACAAGGATTGTCACTATTCTTAGGCTTGCGCGGGCTACATGATGAGTTCCAGGACTGCCTGGTTACAGACCGAGACTCTCTCAAGAGTCCAGATAAACAACAACAAAGGGGGCGAGGTGGAAATACAGGGGCTGTAAGAAGTAAATATGATATCTGCATGGGAGGCTAGCCAGAGAAGAAAAAATTTTCTTCCGTGGTTCAATCCTCCAAGGGCTGAACAGGAAGTTGACGCAGGCAGGTGAGGAGCACGAGCCTAGATGGGCTGCGGTGCCACCCTTAATCCCCACAAGCGAGTTCCTCCGCAATTCGCCTGTCCCACTCTCAACTTTTCTTCAACTGACTCTTTGCTGTGGTCCCTCGCTGTGGCAGTGGAAACAACTACCACTGCGAGGTAGGGAATGTCATGAGGGGCTACCTGCAGCCCTTGGCTTGCAGGGATGCAGGGATGCGGTCGGAACCTGAGGCCCCGCCCTTCTCTTGCCCCACGCCATTAGGCCACGCCCCTACCCAGCACTCCTTCAACCACCCCCTTCCCCGGCGCCTCATGAGGTCCCGCCCCTCTCAACCCTAGCTCTTGAGGCCTCCCCTTCACAGCCGCCCCGGCGTTCCTTGACTTGAGGCCACGTCCCTCTGCTCCTTCATTCCCAAGACCCTACGCTTTGCGAGTCCTCCCTGTCCTGCTGCCTAGGACCCCGCCCCTCTCAGCCCTTCTGCCCCAAGACCCCGCCCCTTAGGCTGTTCCCGCCCACTGGCCAATGAAGACCCGCCCTTTCTTTAGCCGCCCCGCCCCGGTCCCACAAAATCCCGCCTCCGGCCCCGCCTCCCGCCCCCTTGGGCGCTCCGTAGCAGTGACGTGCGCAGGCTGGGCACTCTGCAGGGCTCTCTGGCCGGCGGGTGGAGACCGATCCGGGATCTGTCCCAGCAGGAAGCGTATCCCGGCCGCCGTCGTGCTGTCGTCTCCGGTGCTCGCTCTCGGCCGCGGTGTCGCGCTTGCCCTTCGCGCCCGCAGCCCGGCAGCCTCTC

“肌球蛋白1A(Myo7A)启动子”意为包含核酸序列或由核酸序列组成的调节性多核苷酸序列，该核酸序列足以引导下游多核苷酸在外毛细胞、内毛细胞、前庭细胞、螺旋神经节或前庭神经节中的表达并且与下述核苷酸序列具有至少约85％的序列一致性：

AGACACCCCAGTTATGGGGGCTAGGGACCCAAAAGAGACATCCTTCTGCCACCCAGAGCTGCCCTGGCGAGGTGCACTATGGGGCCGCCGACAGCTGCGTGGCTGCCGAGGGCGGAAAGGAGAAACTGTCATGTCCCGATAGGGCCGCGCGAGGTCTCCATCCTCGACAACGCTAATAACAAAGACGTGTGCTCCTCTTTGCTTGGTTCCCCCCACTCCTTTAAATCACAGATTTCACTTCAGTTTATCTGTGTCGCTGTCACACGTGGGGTGGCTCCCAGTCAGCTGGTTTGGCAAAGTTTCTGGATGATTACGGAATAACATGTGTCCCCAACCCGCAGAGCAGGTTGTGGGGGCAATGTTGCATTGACCAGCGTCAGAGAACACACATCAGAGGCAAGGGTGGGTGTGCAGGAGGGAGAAGGCGCAGAAGGCAGGGCTTTAGCTCAGCACTCTCCCTCCTGCCATGCTCTGCCTGACCGTTCCCTCTCTGAGTCCCAAACAGCCAGGTAGAGGAGGAAGAAATGGGGCTGAGACCCCAGCACATCAGTGATTAAGTCAGGATCAGGTGCGGTTTCCTGCTCAGGTGCTGAGACAGCAGGCGGTGTCCTGCAAACAACAGGAGGCACCTGAAGCTAGCCTGGGGGGCCCACGCCCAGGTGCGGTGCATTCAGCAGCACAGCCAGAGACAGACCCCAATGACCCCGCCTCCCTGTCGGCAGCCAGTGCTCTGCACAGAGCCCTGAGCAGCCTCTGGACATTAGTCCCAGCCCCAGCACGGCCCGTCCCCCACGCTGATGTCACCGCACCCAGACCTTGGAGGCCCCCTCCGGCTCCGCCTCCTGGGAGAAGGCTCTGGAGTGAGGAGGGGAGGGCAGCAGTGCTGGCTGGACAGCTGCTCTGGGCAGGAGAGAGAGGGAGAGACAAGAGACACACACAGAGAGACGGCGAGGAAGGGAAAGACCCAGAGGGACGCCTAGAACGAGACTTGGAGCCAGACAGAGGAAGAGGGGACGTGTGTTTGCAGACTGGCTGGGCCCGTGACCCAGCTTCCTGAGTCCTCCGTGCAGGTGGCAGCTGTACCAGGCTGGCAGGTCACTGAGAGTGGGCAGCTGGGCCCCAGGTAAGGATGGGCTGCCCACTGTCCTGGGCATTGGGAGGGGTTTGGATGTGGAGGAGTCATGGACTTGAGCTACCTCTAGAGCCTCTGCCCCACAGCCACTTGCTCCTGGGACTGGGCTTCCTGCCACCCTTGAGGGCTCAGCCACCACAGCCACTGAATGAAACTGTCCCGAGCCTGGGAAGATGGATGTGTGTCCCCTGGAGGAGGGAAGAGCCAAGGAGCATGTTGTCCATCGAATCTTCTCTGAGCTGGGGCTGGGGTTAGTGGCATCCTGGGGCCAGGGGAATAGACATGCTGTGGTGGCAGAGAGAAGAGTCCGTTCTCTCTGTCTCCTTTGCTTTCTCTCTGACACTCTTTATCTCCGTTTTTGGATAAGTCACTTCCTTCCTCTATGCCCCAAATATCCCATCTGTGAAATGGGAGTATGAAGCCCCAACAGCCAGGGTTGTAGTGGGGAAGAGGTAAAATCAGGTATAGACATAGAAATACAAATACAGTCTATGCCCCCTGTTGTCAGTTGGAAAAGAAATTAACTTGAAGGTGGTCTAGTTCTCATTTTTAGAAATGAAATGTCTGTCTGGTCATTTTAAAATGTGGCCCTTAAATTTCACGCCCTCACCGCTCTCCCCCATCCCTTGGAGCCCCATGTCTCTAGTGAAAGCACTGGCTCTGCCCCCAGCCCTCATGGCTCATGCTGGCATAGGGCGCCTGCTCCACAGCCTGGGCACCATCTTCAGACAAGTGCCCGGTGGCAACTGCCTGCTGGCCCTGTTGAATCCACATCTCCACCAGGCATCCAGACTAGTTCAGGTCTCTGGAAGGACCGTGGGTTTGCTGTGTCCCAGAGCTCCAGGGCAGGGGTCAGGGCTCGGATGTCGGGCAGTGTCATGGGCAGAGGATCGAATGCCCCGGCGGCTCTGAATGGGCCCTTGTGAAAAATTGATGCGCATTCTAGGAGACAGGTTGGGAGCCAGAGGGGCCTCATACCAGGGTCTGTAGGCTGGGGCTGCCTTTTAAGCTCCTTCCTGAGGCCGTCTCTGGGTCTGGCCCTGTGCTGGACAAGGCTGGAGACAAGGCAATGTCTCAGACCCTCTCCCATTGGCCACATCCTGCCCTGGATCAACTCGCCAACTTTGGGGGCAGAGGTGGGACTGACCCTTACCCTGACAACATAATGCATATAGTCAAAATGGGATAAAGGGGAATATAGAGGCTCTTGGCAGCTTGGGAGTGGTCAGGGAAGGCTTCCTGGAGGAGGTATCATCTGAACTGAGCCATGAACCATAAGTGGAAATTCACTAGTCAAAATTTCAGGTAGAAGGGCCAGTGTGTGAAGGCCAGGAGATGGCAAGAGCTGGCGTATTTCAGGAACAGTGAGTCACTGAGGATGTCCAAGTATAAGGGTAGGAAAGGGAGTGAGCAGTGAGAGAAAAGACCGAGGCATCAGCAGGGGCCAGATTGTGCTGGGCCTAGCGGGGCGGGCCCGGGCCCGGGCCCAGGCCCAGGTGCGGTGCATTCAGCAGCACAGCCAGAGACAGACCCCAATGACCCTGCCTCCCCGTCAGCAGCCAGTGCTCTGCACAGAGCCATCCTGAGGGCAGTGGGTGCTCTTGAGAGGTTTCAGGCAGGGTGTGCTGTGAGCAGGTCATGCCCAGCCCTTGACCTTCTGCTCAGTCAGGCTTGTCCTTGTCACCCACATTCCTGGGGCAGTCCCTAAGCTGAGTGCCGGAGATTAAGTCCTAGTCCTAAATTTGCTCTGGCTAGCTGTGTGACCCTGGGCAAGTCTTGGTCCCTCTCTGGGCCCCTTTGCCGTAGGTCCCTGGTGGGGCCAGACTTGCTACTTTCTAGGAGCCCTTTGGGAATCTCTGAATGACAGTGGCTGAGAGAAGAATTCAGCTGCTCTGGGCAGTGGTGCTGGTGACAGTGGCTGAGGCTCAGGTCACACAGGCTGGGCAGTGGTCAGAGGGAGAGAAGCCAAGGAGGGTTCCCTTGAGGGAGGAGGAGCTGGGGCTTTGGGAGGAGCCCAGGTGACCCCAGCCAGGCTCAAGGCTTCCAGGGCTGGCCTGCCCAGAAGCATGACATGGTCTCTCTCCCTGCA

“TMC1多肽”意为具有机械转导通道活性的多肽或其片段，该多肽与NCBI参考序列：NP_619636.2的氨基酸序列一致性为至少约85％或更大。示例性的TMC1氨基酸序列提供于下：

1 mspkkvqikv eekedetees sseeeeeved klprreslrp krkrtrdvin eddpepeped61 eetrkareke rrrrlkrgae eeeideeele rlkaeldekr qiiatvkckp wkmekkievl 121keakkfvsen egalgkgkgk rwfafkmmma kkwakflrdf enfkaacvpw enkikaiesq 181fgssvasyfl flrwmygvnm vlfiltfsli mlpeylwglp ygslprktvp raeeasaanf 241gvlydfngla qysvlfygyy dnkrtigwmn frlplsyflv gimcigysfl vvlkamtkni 301gddgggddnt fnfswkvfts wdylignpet adnkfnsitm nfkeaiteek aaqveenvhl 361irflrflanf fvfltlggsg ylifwavkrs qefaqqdpdt lgwweknemn mvmsllgmfc 421ptlfdlfael edyhplialk wllgrifall lgnlyvfila lmdeinnkie eeklvkanit 481lweanmikay nasfsenstg ppffvhpadv prgpcwetmv gqefvrltvs dvlttyvtil 541igdflracfv rfcnycwcwd leygypsyte fdisgnvlal ifnqgmiwmg sffapslpgi 601nilrlhtsmy fqcwavmccn vpearvfkas rsnnfylgml llilflstmp vlymivslpp 661sfdcgpfsgk nrmfeviget lehdfpswma kilrqlsnpg lviavilvmv laiyylnata 721kgqkaanldl kkkmkmqale nkmrnkkmaa araaaaagrq

“TMC1多核苷酸”意为编码TMC1多肽的多核苷酸。例示性的TMC1多核苷酸的序列提供为NCBI参考序列：NM_138691.2，其转载于下：

1 cagaaactat gagggcagaa cccagcaatc tgtgctttct ttcacaagcc ctccaggagt61 tgctgaaatt taggaatcat tgccccaaaa agtggccctc ataatgatgc cagatgggat 121cttactctgt tgcccaggct ggagtgcagt ggtgcgatct cggctctctg caacctccgc 181ctcccaggtt caagtgattc tcctgcctcg gcctcctgag tagctgggat ttcaggccat 241gaaagatcac tgttttagtc tgcgtggtgc agtggaacag atagacctcg gtttgaatct 301cagctctact gtttactaga catgaaatgg ggaaatctaa aatgagatgc cagaagcctc 361aaaaatggaa aaccccctgt gcttcacatc tgaaaatctc tgctgggggc agcaactttg 421agcctgtggg gaaggaactg tccacgtgga gtggtctggt gaatgcttaa ggagctgcag 481aagggaagtc cctctccaaa ctagccagcc actgagacct tctgacagga cacccccagg 541atgtcaccca aaaaagtaca aatcaaagtg gaggaaaaag aagacgagac tgaggaaagc 601tcaagtgaag aggaagagga ggtggaagat aagctacctc gaagagagag cttgagacca 661aagaggaaac ggaccagaga tgttatcaat gaggatgacc cagaacctga accagaggat 721gaagaaacaa ggaaggcaag agaaaaagag aggaggagga ggctaaagag aggagcagaa 781gaagaagaaa ttgatgaaga ggaattggaa agattgaagg cagagttaga tgagaaaaga 841caaataattg ctactgtcaa atgcaaacca tggaagatgg agaagaaaat tgaagttctc 901aaggaggcaa aaaaatttgt gagtgaaaat gaaggggctc ttgggaaagg aaaaggaaaa 961cggtggtttg catttaagat gatgatggcc aagaaatggg caaaattcct ccgtgatttt 1021gagaacttca aagctgcgtg tgtcccatgg gaaaataaaa tcaaggctat tgaaagtcag 1081tttggctcct cagtggcctc atacttcctc ttcttgagat ggatgtatgg agtcaatatg 1141gttctcttta tcctgacatt tagcctcatc atgttgccag agtacctctg gggtttgcca 1201tatggcagtt tacctaggaa aaccgttccc agagccgaag aggcatcggc agcaaacttt 1261ggtgtgttgt acgacttcaa tggtttggca caatattccg ttctctttta tggctattat 1321gacaataaac gaacaattgg atggatgaat ttcaggttgc cgctctccta ttttctagtg 1381gggattatgt gcattggata cagctttctg gttgtcctca aagcaatgac caaaaacatt 1441ggtgatgatg gaggtggaga tgacaacact ttcaatttca gctggaaggt ctttaccagc 1501tgggactacc tgatcggcaa tcctgaaaca gcagacaaca aatttaattc tatcacaatg 1561aactttaagg aagctatcac agaagaaaaa gcagcccaag tagaagaaaa cgtccacttg 1621atcagattcc tgaggtttct ggctaacttc ttcgtgtttc taacacttgg agggagtgga 1681tacctcatct tttgggctgt gaagcgatcc caggaatttg cacagcaaga tcctgacacc 1741cttgggtggt gggaaaaaaa tgaaatgaac atggttatgt ccctcctagg gatgttctgt 1801ccaacattgt ttgacttatt tgctgaatta gaagactacc atcctctcat cgctttgaaa 1861tggctactgg gacgcatttt tgctcttctt ttaggcaatt tatacgtatt tattcttgca 1921ttaatggatg agattaacaa caagattgaa gaggagaagc tagtaaaggc caatattacc 1981ctttgggaag ccaatatgat caaggcctac aatgcatcat tctctgaaaa tagcactgga 2041ccaccctttt ttgttcaccc tgcagatgta cctcgaggac cttgctggga aacaatggtg 2101ggacaggagt ttgtgaggct gacagtctct gatgttctga ccacctacgt cacaatcctc 2161attggggact ttctaagggc atgttttgtg aggttttgca attattgctg gtgctgggac 2221ttggagtatg gatatccttc atacaccgaa ttcgacatca gtggcaacgt cctcgctctg 2281atcttcaacc aaggcatgat ctggatgggc tccttctttg ctcccagcct cccaggcatc 2341aatatccttc gactccatac atccatgtac ttccagtgct gggccgttat gtgctgcaat 2401gttcctgagg ccagggtctt caaagcttcc agatcaaata acttctacct gggcatgcta 2461ctgctcatcc tcttcctgtc cacaatgcct gtcttgtaca tgatcgtgtc cctcccacca 2521tcttttgatt gtggtccatt cagtggcaaa aatagaatgt ttgaagtcat tggagagacc 2581ctggagcacg atttcccaag ctggatggcg aagatcttga gacagctttc aaaccctggg 2641ctggtcattg ctgtcatttt ggtgatggtt ttggccatct attatctcaa tgctactgcc 2701aagggccaga aggcagcgaa tctggatctc aaaaagaaga tgaaaatgca agctttggag 2761aacaaaatgc gaaacaagaa aatggcagct gcacgagcag ctgcagctgc tggtcgccag 2821taataagtat cctgagagcc cagaaaaggt acactttgcc ttgctgttta aaagtaatgc 2881aatatgtgaa cgcccagaga acaagcactg tggaactgct attttcctgt tctacccttg 2941atggattttc aaggtcatgc tggccaatta aggcatcatc agtcctacct gagcaacaag 3001aatctaaact ttattccaag tcagaaactg tttctgcaga gccactctct cccctgctcc 3061atttcgtgac tttttttttt tttttaacaa attgagttta gaagtgagtg taatccagca 3121atacagttta ctggtttagt tggtgggtta attaaaaaaa atttgctcat atgaactttc 3181attttatatg tttcttttgc c

“TMC2多肽”意为在机械转导中发挥作用的多肽或其片段，该多肽与NCBI参考序列：NP_542789的氨基酸序列一致性为至少约85％或更大。例示性的TMC2氨基酸序列提供于下：

1 mshqvkglke earggvkgrv ksgsphtgdr lgrrssskra lkaegtpgrr gaqrsqkera61 ggspspgspr rkqtgrrrhr eelgeqerge aertcegrrk rderasfqer taapkrekei 121prreekskrq kkprssslas sasggeslse eelaqileqv eekkkliatm rskpwpmakk 181ltelreaqef vekyegalgk gkgkqlyayk mlmakkwvkf krdfdnfktq cipwemkikd 241ieshfgssva syfiflrwmy gvnlvlfgli fglviipevl mgmpygsipr ktvpraeeek 301amdfsvlwdf egyikysalf ygyynnqrti gwlryrlpma yfmvgvsvfg ysliivirsm 361asntqgstge gesdnftfsf kmftswdyli gnsetadnky asittsfkes ivdeqesnke 421enihltrflr vlanfliicc lcgsgyliyf vvkrsqqfsk mqnvswyern eveivmsllg 481mfcpplfeti aalenyhprt glkwqlgrif alflgnlytf llalmddvhl klaneetikn 541ithwtlfnyy nssgwnesvp rpplhpadvp rgscwetavg iefmrltvsd mlvtyitill 601gdflracfvr fmnycwcwdl eagfpsyaef disgnvlgli fnqgmiwmgs fyapglvgin 661vlrlltsmyf qcwavmssnv phervfkasr snnfymglll lvlflsllpv aytimslpps 721fdcgpfsgkn rmydvlqeti endfptflgk ifaflanpgl iipaillmfl aiyylnsvsk 781slsranaqlr kkiqvlreve kshksvkgka tardsedtpk sssknatqlq ltkeettpps 841asqsqamdkk aqgpgtsnsa srttlpasgh lpisrppgig pdsghapsqt hpwrsasgks 901 aqrpph

“TMC2多核苷酸”意为编码TMC2多肽的多核苷酸。例示性的多核苷酸序列提供于下：

1 gcagtgctgc tgaccatgag ccaccaggta aagggcctga aagaggaagc acgaggcgga61 gtgaaagggc gggtgaagag cggctctcca cacacaggtg acaggctggg aaggagatcc 121tcaagcaagc gggctctcaa agccgagggg accccaggca ggcgcggagc tcagcgaagc 181cagaaggagc gcgccggggg cagcccaagc ccggggtctc cccggaggaa gcaaacaggg 241cgcaggagac acagagaaga gctgggggag caggagcggg gcgaggcaga gaggacctgc 301gagggcagga gaaagcgcga cgagagggcc tccttccagg agcggacagc agccccaaag 361agggaaaagg agattccgag gagggaggag aagtcgaagc ggcagaagaa acccaggtca 421tcctccttgg cctccagtgc ctctggtggg gagtccctgt ccgaggagga actggcccag 481atcctggagc aggtggaaga aaaaaagaag ctcattgcca ccatgcggag caagccctgg 541cccatggcga agaagctgac agagctcagg gaggcccagg aatttgtgga gaagtatgaa 601ggtgccttgg gaaaggggaa aggcaagcaa ctatatgcct acaagatgct gatggccaag 661aaatgggtca aatttaagag agactttgat aatttcaaga ctcaatgtat cccctgggaa 721atgaagatca aggacattga aagtcacttt ggttcttcag tggcatcgta tttcatcttt 781ctccgatgga tgtatggagt taaccttgtc ctttttggct taatatttgg tctagtcata 841atcccagagg tactgatggg catgccctat gggagtattc ccagaaagac agtgcctcgg 901gctgaggaag aaaaggccat ggatttttct gtcctttggg attttgaggg ctatatcaag 961tactctgcac tcttctatgg ctactacaac aaccagagga ccatcgggtg gctgaggtac 1021cggctgccta tggcttactt tatggtgggg gtcagcgtgt tcggctacag cctgattatt 1081gtcattcgat cgatggccag caatacccaa ggaagcacag gcgaagggga gagtgacaac 1141ttcacattca gcttcaagat gttcaccagc tgggactacc tgatcgggaa ttcagagaca 1201gctgataaca aatatgcatc catcaccacc agcttcaagg aatcaatagt ggatgaacaa 1261gagagtaaca aagaagaaaa tatccatctg acaagatttc ttcgtgtcct ggccaacttt 1321ctcatcatct gctgtttgtg tggaagtggg tacctcattt actttgtggt taagcgatct 1381cagcaattct ccaaaatgca gaatgtcagc tggtatgaaa ggaatgaggt agagatcgtg 1441atgtccctgc ttggaatgtt ttgtccccct ctgtttgaaa ccatcgctgc cctggagaat 1501taccacccac gcactggact gaagtggcag ctgggacgca tctttgcact cttcctgggg 1561aacctctaca catttctctt ggccctgatg gatgacgtcc acctcaagct tgctaatgaa 1621gagacaataa agaacatcac tcactggact ctgtttaact attacaactc ttctggttgg 1681aacgagagtg tcccccgacc acccctgcac cctgcagatg tgccccgggg ttcttgctgg 1741gagacagctg tgggcattga attcatgagg ctgacggtgt ctgacatgct ggtaacgtac 1801atcaccatcc tgctggggga cttcctacgg gcttgttttg tgcggttcat gaactactgc 1861tggtgctggg acttggaggc tggatttcct tcatatgctg agtttgatat tagtggaaat 1921gtgctgggtt tgatcttcaa ccaaggaatg atctggatgg gctccttcta tgctccaggc 1981ctggtgggca ttaatgtgct gcgcctgctg acctccatgt acttccagtg ctgggcggtg 2041atgagcagca acgtacccca tgaacgcgtg ttcaaagcct cccgatccaa caacttctac 2101atgggcctcc tgctgctggt gctcttcctc agcctcctgc cggtggccta caccatcatg 2161tccctcccac cctcctttga ctgcgggccg ttcagtggga aaaacagaat gtacgatgtc 2221ctccaagaga ccattgaaaa cgatttccca accttcctgg gcaagatctt tgctttcctc 2281gccaatccag gcctgatcat cccagccatc ctgctgatgt tcttggccat ttactacctg 2341aactcagttt ccaaaagcct ttcccgagct aatgcccagc tgaggaagaa aatccaagtg 2401ctccgtgaag ttgagaagag tcacaaatct gtaaaaggca aagccacagc cagagattca 2461gaggacacac ctaaaagcag ctccaaaaat gccacccagc tccaactcac caaggaagag 2521accactcctc cctctgccag ccaaagccag gccatggaca agaaggcgca gggccctggg 2581acctccaatt ctgccagcag gaccacactg cctgcctctg gacaccttcc tatatctcgg 2641ccccctggaa tcggaccaga ttctggccac gccccatctc agactcatcc gtggaggtca 2701gcctctggaa agagtgctca gagacctccc cactgatggc taggactcca gggagcctcg 2761accctagggc tgatcctcaa gtaccccagt ttcacacata ccaaaccaag gttctctccc 2821ctctttcctc tcacatacat gctctgtctc ctctcttgga atgcatgaac tttgattcct 2881tcaggccctt gtcagctacc gaaggaggaa gacagtggct tcacctgtcc tttagggaag 2941ctggagccat ctctgcacta actgccctcc caaatatctt ggttcagaca gctctgaacc 3001ccacgctcac agtggtcgac cttgcctccc gattttcgga gttggggaag ggccatgacc 3061accctcgtag actttttcca tgggatacag tttaggacac gggtttctgc cagcttccct 3121aaccaggagg gggatggaga agggcctaca tttctcaatc cagaggaag

“harmonin”多肽意为在机械感受中发挥作用或与USH1C、USH1G、CDH23和MYO7A中的任一者或多者相互作用的多肽或其片段，该多肽与Q9Y6N9-1(异形体1)、Q9Y6N9-2、Q9Y6N9-3、Q9Y6N9-4、Q9Y6N9-5的氨基酸序列一致性为至少约85％。例示性的harmonin-a多肽(异形体1)的序列提供于下：

>sp|Q9Y6N9|USH1C_HUMAN Harmonin OS＝智人(Homo sapiens)GN＝USH1C PE＝1SV＝3

MDRKVAREFRHKVDFLIENDAEKDYLYDVLRMYHQTMDVAVLVGDLKLVINEPSRLPLFDAIRPLIPLKHQVEYDQLTPRRSRKLKEVRLDRLHPEGLGLSVRGGLEFGCGLFISHLIKGGQADSVGLQVGDEIVRINGYSISSCTHEEVINLIRTKKTVSIKVRHIGLIPVKSSPDEPLTWQYVDQFVSESGGVRGSLGSPGNRENKEKKVFISLVGSRGLGCSISSGPIQKPGIFISHVKPGSLSAEVGLEIGDQIVEVNGVDFSNLDHKEAVNVLKSSRSLTISIVAAAGRELFMTDRERLAEARQRELQRQELLMQKRLAMESNKILQEQQEMERQRRKEIAQKAAEENERYRKEMEQIVEEEEKFKKQWEEDWGSKEQLLLPKTITAEVHPVPLRKPKYDQGVEPELEPADDLDGGTEEQGEQDFRKYEEGFDPYSMFTPEQIMGKDVRLLRIKKEGSLDLALEGGVDSPIGKVVVSAVYERGAAERHGGIVKGDEIMAINGKIVTDYTLAEAEAALQKAWNQGGDWIDLVVAVCPPKEYDDELTFF

“Ush1C多核苷酸”意为编码harmonin多肽的核酸分子。例示性的Ush1C多核苷酸NM_005709的序列提供于下：

1 agctccgagg gcggctggcc cggtcgcggt cgcggctctt tccagctcct ggcagccggg61 cacccgaagg aacgggtcgt gcaacgacgc agctggacct ggcccagcca tggaccgaaa 121agtggcccga gaattccggc ataaggtgga ttttctgatt gaaaatgatg cagagaagga 181ctatctctat gatgtgctgc gaatgtacca ccagaccatg gacgtggccg tgctcgtggg 241agacctgaag ctggtcatca atgaacccag ccgtctgcct ctgtttgatg ccattcggcc 301gctgatccca ctgaagcacc aggtggaata tgatcagctg accccccggc gctccaggaa 361gctgaaggag gtgcgtctgg accgtctgca ccccgaaggc ctcggcctga gtgtgcgtgg 421tggcctggag tttggctgtg ggctcttcat ctcccacctc atcaaaggcg gtcaggcaga 481cagcgtcggg ctccaggtag gggacgagat cgtccggatc aatggatatt ccatctcctc 541ctgtacccat gaggaggtca tcaacctcat tcgaaccaag aaaactgtgt ccatcaaagt 601gagacacatc ggcctgatcc ccgtgaaaag ctctcctgat gagcccctca cttggcagta 661tgtggatcag tttgtgtcgg aatctggggg cgtgcgaggc agcctgggct cccctggaaa 721tcgggaaaac aaggagaaga aggtcttcat cagcctggta ggctcccgag gccttggctg 781cagcatttcc agcggcccca tccagaagcc tggcatcttt atcagccatg tgaaacctgg 841ctccctgtct gctgaggtgg gattggagat aggggaccag attgtcgaag tcaatggcgt 901cgacttctct aacctggatc acaaggaggc tgtaaatgtg ctgaagagta gccgcagcct 961gaccatctcc attgtagctg cagctggccg ggagctgttc atgacagacc gggagcggct 1021ggcagaggcg cggcagcgtg agctgcagcg gcaggagctt ctcatgcaga agcggctggc 1081gatggagtcc aacaagatcc tccaggagca gcaggagatg gagcggcaaa ggagaaaaga 1141aattgcccag aaggcagcag aggaaaatga gagataccgg aaggagatgg aacagattgt 1201agaggaggaa gagaagttta agaagcaatg ggaagaagac tggggctcaa aggaacagct 1261actcttgcct aaaaccatca ctgctgaggt acacccagta ccccttcgca agccaaagta 1321tgatcaggga gtggaacctg agctcgagcc cgcagatgac ctggatggag gcacggagga 1381gcagggagag caggatttcc ggaaatatga ggaaggcttt gacccctact ctatgttcac 1441cccagagcag atcatgggga aggatgtccg gctcctacgc atcaagaagg agggatcctt 1501agacctggcc ctggaaggcg gtgtggactc ccccattggg aaggtggtcg tttctgctgt 1561gtatgagcgg ggagctgctg agcggcatgg tggcattgtg aaaggggacg agatcatggc 1621aatcaacggc aagattgtga cagactacac cctggctgag gctgaggctg ccctgcagaa 1681ggcctggaat cagggcgggg actggatcga ccttgtggtt gccgtctgcc ccccaaagga 1741gtatgacgat gagctgacct tcttctgaag tccaaaaggg gaaaccaaat tcaccgttag 1801gaaacagtga gctccggccc cacctcgtga acacaaagcc tcggatcagc cttgagagag 1861gccacactac acacaccaga tggcatcctt gggacctgaa tctatcaccc aggaatctca 1921aactcccttt ggccctgaac cagggccaga taaggaacag ctcgggccac tcttctgaag 1981gccaacgtgg aggaaaggga gcagccagcc atttgggaga agatctcaag gatccagact 2041ctcattcctt tcctctggcc cagtgaattt ggtctctccc agctctgggg gactccttcc 2101ttgaacccta ataagacccc actggagtct ctctctctcc atccctctcc tctgccctct 2161gctctaattg ctgccaggat tgtcactcca aaccttactc tgagctcatt aataaaatag 2221atttattttc cagctta

其它例示性的harmonin序列提供于下：

Harmonin-B

预测的>XM_011519832.2：智人USH1蛋白网络组分harmonin(USH1C)，转录变异体X3，mRNA

AGCTCCGAGGGCGGCTGGCCCGGTCGCGGTCGCGGCTCTTTCCAGCTCCTGGCAGCCGGGCACCCGAAGGAACGGGTCGTGCAACGACGCAGCTGGACCTGGCCCAGCCATGGACCGAAAAGTGGCCCGAGAATTCCGGCATAAGGTGGATTTTCTGATTGAAAATGATGCAGAGAAGGACTATCTCTATGATGTGCTGCGAATGTACCACCAGACCATGGACGTGGCCGTGCTCGTGGGAGACCTGAAGCTGGTCATCAATGAACCCAGCCGTCTGCCTCTGTTTGATGCCATTCGGCCGCTGATCCCACTGAAGCACCAGGTGGAATATGATCAGCTGACCCCCCGGCGCTCCAGGAAGCTGAAGGAGGTGCGTCTGGACCGTCTGCACCCCGAAGGCCTCGGCCTGAGTGTGCGTGGTGGCCTGGAGTTTGGCTGTGGGCTCTTCATCTCCCACCTCATCAAAGGCGGTCAGGCAGACAGCGTCGGGCTCCAGGTAGGGGACGAGATCGTCCGGATCAATGGATATTCCATCTCCTCCTGTACCCATGAGGAGGTCATCAACCTCATTCGAACCAAGAAAACTGTGTCCATCAAAGTGAGACACATCGGCCTGATCCCCGTGAAAAGCTCTCCTGATGAGCCCCTCACTTGGCAGTATGTGGATCAGTTTGTGTCGGAATCTGGGGGCGTGCGAGGCAGCCTGGGCTCCCCTGGAAATCGGGAAAACAAGGAGAAGAAGGTCTTCATCAGCCTGGTAGGCTCCCGAGGCCTTGGCTGCAGCATTTCCAGCGGCCCCATCCAGAAGCCTGGCATCTTTATCAGCCATGTGAAACCTGGCTCCCTGTCTGCTGAGGTGGGATTGGAGATAGGGGACCAGATTGTCGAAGTCAATGGCGTCGACTTCTCTAACCTGGATCACAAGGAGGCTGTAAATGTGCTGAAGAGTAGCCGCAGCCTGACCATCTCCATTGTAGCTGCAGCTGGCCGGGAGCTGTTCATGACAGACCGGGAGCGGCTGGCAGAGGCGCGGCAGCGTGAGCTGCAGCGGCAGGAGCTTCTCATGCAGAAGCGGCTGGCGATGGAGTCCAACAAGATCCTCCAGGAGCAGCAGGAGATGGAGCGGCAAAGGAGAAAAGAAATTGCCCAGAAGGCAGCAGAGGAAAATGAGAGATACCGGAAGGAGATGGAACAGATTGTAGAGGAGGAAGAGAAGTTTAAGAAGCAATGGGAAGAAGACTGGGGCTCAAAGGAACAGCTACTCTTGCCTAAAACCATCACTGCTGAGGTACACCCAGTACCCCTTCGCAAGCCAAAGTATGATCAGGGAGTGGAACCTGAGCTCGAGCCCGCAGATGACCTGGATGGAGGCACGGAGGAGCAGGGAGAGCAGAAAGGAAAAGATAAGAAGAAAGCCAAGTATGGCAGCCTGCAGGACTTGAGAAAGAATAAGAAAGAACTGGAGTTTGAGCAAAAGCTTTACAAAGAGAAAGAGGAAATGCTGGAGAAGGAAAAGCAGCTAAAGATCAACCGGCTGGCCCAGGAGGATTTCCGGAAATATGAGGAAGGCTTTGACCCCTACTCTATGTTCACCCCAGAGCAGATCATGGGGAAGGATGTCCGGCTCCTACGCATCAAGAAGGAGGGATCCTTAGACCTGGCCCTGGAAGGCGGTGTGGACTCCCCCATTGGGAAGGTGGTCGTTTCTGCTGTGTATGAGCGGGGAGCTGCTGAGCGGCATGGTGGCATTGTGAAAGGGGACGAGATCATGGCAATCAACGGCAAGATTGTGACAGACTACACCCTGGCTGAGGCTGAGGCTGCCCTGCAGAAGGCCTGGAATCAGGGCGGGGACTGGATCGACCTTGTGGTTGCCGTCTGCCCCCCAAAGGAGTATGACGATGAGCTGACCTTCTTCTGAAGTCCAAAAGGGGAAACCAAATTCACCGTTAGGAAACAGTGAGCTCCGGCCCCACCTCGTGAACACAAAGCCTCGGATCAGCCTTGAGAGAGGCCACACTACACACACCAGATGGCATCCTTGGGACCTGAATCTATCACCCAGGAATCTCAAACTCCCTTTGGCCCTGAACCAGGGCCAGATAAGGAACAGCTCGGGCCACTCTTCTGAAGGCCAACGTGGAGGAAAGGGAGCAGCCAGCCATTTGGGAGAAGATCTCAAGGATCCAGACTCTCATTCCTTTCCTCTGGCCCAGTGAATTTGGTCTCTCCCAGCTCTGGGGGACTCCTTCCTTGAACCCTAATAAGACCCCACTGGAGTCTCTCTCTCTCCATCCCTCTCCTCTGCCCTCTGCTCTAATTGCTGCCAGGATTGTCACTCCAAACCTTACTCTGAGCTCATTAATAAAATAGATTTATTTTCCA

Harmonin-B多肽

MDRKVAREFRHKVDFLIENDAEKDYLYDVLRMYHQTMDVAVLVGDLKLVINEPSRLPLFDAIRPLIPLKHQVEYDQLTPRRSRKLKEVRLDRLHPEGLGLSVRGGLEFGCGLFISHLIKGGQADSVGLQVGDEIVRINGYSISSCTHEEVINLIRTKKTVSIKVRHIGLIPVKSSPDEPLTWQYVDQFVSESGGVRGSLGSPGNRENKEKKVFISLVGSRGLGCSISSGPIQKPGIFISHVKPGSLSAEVGLEIGDQIVEVNGVDFSNLDHKEAVNVLKSSRSLTISIVAAAGRELFMTDRERLAEARQRELQRQELLMQKRLAMESNKILQEQQEMERQRRKEIAQKAAEENERYRKEMEQIVEEEEKFKKQWEEDWGSKEQLLLPKTITAEVHPVPLRKPKSFGWFYRYDGKFPTIRKKGKDKKKAKYGSLQDLRKNKKELEFEQKLYKEKEEMLEKEKQLKINRLAQEVSETEREDLEESEKIQYWVERLCQTRLEQISSADNEISEMTTGPPPPPPSVSPLAPPLRRFAGGLHLHTTDLDDIPLDMFYYPPKTPSALPVMPHPPPSNPPHKVPAPPVLPLSGHVSASSSPWVQRTPPPIPIPPPPSVPTQDLTPTRPLPSALEEALSNHPFRTGDTGNPVEDWEAKNHSGKPTNSPVPEQSFPPTPKTFCPSPQPPRGPGVSTISKPVMVHQEPNFIYRPAVKSEVLPQEMLKRMVVYQTAFRQDFRKYEEGFDPYSMFTPEQIMGKDVRLLRIKKEGSLDLALEGGVDSPIGKVVVSAVYERGAAERHGGIVKGDEIMAINGKIVTDYTLAEAEAALQKAWNQGGDWIDLVVAVCPPKEYDDELASLPSSVAESPQPVRKLLEDRAAVHRHGFLLQLEPTDLLLKSKRGNQIHR

Harmonin-C

>NM_001297764.1智人USH1蛋白网络组分harmonin(USH1C)，转录变异体3，mRNA

AGCTCCGAGGGCGGCTGGCCCGGTCGCGGTCGCGGCTCTTTCCAGCTCCTGGCAGCCGGGCACCCGAAGGAACGGGTCGTGCAACGACGCAGCTGGACCTGGCCCAGCCATGGACCGAAAAGTGGCCCGAGAATTCCGGCATAAGGTGGATTTTCTGATTGAAAATGATGCAGAGAAGGACTATCTCTATGATGTGCTGCGAATGTACCACCAGACCATGGACGTGGCCGTGCTCGTGGGAGACCTGAAGCTGGTCATCAATGAACCCAGCCGTCTGCCTCTGTTTGATGCCATTCGGCCGCTGATCCCACTGAAGCACCAGGTGGAATATGATCAGCTGACCCCCCGGCGCTCCAGGAAGCTGAAGGAGGTGCGTCTGGACCGTCTGCACCCCGAAGGCCTCGGCCTGAGTGTGCGTGGTGGCCTGGAGTTTGGCTGTGGGCTCTTCATCTCCCACCTCATCAAAGGCGGTCAGGCAGACAGCGTCGGGCTCCAGGTAGGGGACGAGATCGTCCGGATCAATGGATATTCCATCTCCTCCTGTACCCATGAGGAGGTCATCAACCTCATTCGAACCAAGAAAACTGTGTCCATCAAAGTGAGACACATCGGCCTGATCCCCGTGAAAAGCTCTCCTGATGAGCCCCTCACTTGGCAGTATGTGGATCAGTTTGTGTCGGAATCTGGGGGCGTGCGAGGCAGCCTGGGCTCCCCTGGAAATCGGGAAAACAAGGAGAAGAAGGTCTTCATCAGCCTGGTAGGCTCCCGAGGCCTTGGCTGCAGCATTTCCAGCGGCCCCATCCAGAAGCCTGGCATCTTTATCAGCCATGTGAAACCTGGCTCCCTGTCTGCTGAGGTGGGATTGGAGATAGGGGACCAGATTGTCGAAGTCAATGGCGTCGACTTCTCTAACCTGGATCACAAGGAGGGCCGGGAGCTGTTCATGACAGACCGGGAGCGGCTGGCAGAGGCGCGGCAGCGTGAGCTGCAGCGGCAGGAGCTTCTCATGCAGAAGCGGCTGGCGATGGAGTCCAACAAGATCCTCCAGGAGCAGCAGGAGATGGAGCGGCAAAGGAGAAAAGAAATTGCCCAGAAGGCAGCAGAGGAAAATGAGAGATACCGGAAGGAGATGGAACAGATTGTAGAGGAGGAAGAGAAGTTTAAGAAGCAATGGGAAGAAGACTGGGGCTCAAAGGAACAGCTACTCTTGCCTAAAACCATCACTGCTGAGGTACACCCAGTACCCCTTCGCAAGCCAAAGTATGATCAGGGAGTGGAACCTGAGCTCGAGCCCGCAGATGACCTGGATGGAGGCACGGAGGAGCAGGGAGAGCAGGATTTCCGGAAATATGAGGAAGGCTTTGACCCCTACTCTATGTTCACCCCAGAGCAGATCATGGGGAAGGATGTCCGGCTCCTACGCATCAAGAAGGAGGGATCCTTAGACCTGGCCCTGGAAGGCGGTGTGGACTCCCCCATTGGGAAGGTGGTCGTTTCTGCTGTGTATGAGCGGGGAGCTGCTGAGCGGCATGGTGGCATTGTGAAAGGGGACGAGATCATGGCAATCAACGGCAAGATTGTGACAGACTACACCCTGGCTGAGGCTGAGGCTGCCCTGCAGAAGGCCTGGAATCAGGGCGGGGACTGGATCGACCTTGTGGTTGCCGTCTGCCCCCCAAAGGAGTATGACGATGAGCTGACCTTCTTCTGAAGTCCAAAAGGGGAAACCAAATTCACCGTTAGGAAACAGTGAGCTCCGGCCCCACCTCGTGAACACAAAGCCTCGGATCAGCCTTGAGAGAGGCCACACTACACACACCAGATGGCATCCTTGGGACCTGAATCTATCACCCAGGAATCTCAAACTCCCTTTGGCCCTGAACCAGGGCCAGATAAGGAACAGCTCGGGCCACTCTTCTGAAGGCCAACGTGGAGGAAAGGGAGCAGCCAGCCATTTGGGAGAAGATCTCAAGGATCCAGACTCTCATTCCTTTCCTCTGGCCCAGTGAATTTGGTCTCTCCCAGCTCTGGGGGACTCCTTCCTTGAACCCTAATAAGACCCCACTGGAGTCTCTCTCTCTCCATCCCTCTCCTCTGCCCTCTGCTCTAATTGCTGCCAGGATTGTCACTCCAAACCTTACTCTGAGCTCATTAATAAAATAGATTTATTTTCCAGCTTA

Harmonin-C多肽

MDRKVAREFRHKVDFLIENDAEKDYLYDVLRMYHQTMDVAVLVGDLKLVINEPSRLPLFDAIRPLIPLKHQVEYDQLTPRRSRKLKEVRLDRLHPEGLGLSVRGGLEFGCGLFISHLIKGGQADSVGLQVGDEIVRINGYSISSCTHEEVINLIRTKKTVSIKVRHIGLIPVKSSPDEPLTWQYVDQFVSESGGVRGSLGSPGNRENKEKKVFISLVGSRGLGCSISSGPIQKPGIFISHVKPGSLSAEVGLEIGDQIVEVNGVDFSNLDHKEGRELFMTDRERLAEARQRELQRQELLMQKRLAMESNKILQEQQEMERQRRKEIAQKAAEENERYRKEMEQIVEEEEKFKKQWEEDWGSKEQLLLPKTITAEVHPVPLRKPKYDQGVEPELEPADDLDGGTEEQGEQDFRKYEEGFDPYSMFTPEQIMGKDVRLLRIKKEGSLDLALEGGVDSPIGKVVVSAVYERGAAERHGGIVKGDEIMAINGKIVTDYTLAEAEAALQKAWNQGGDWIDLVVAVCPPKEYDDELTFF

“KCNQ4多肽”意为一种多肽，其与NP_004691.2或其片段具有至少约85％的一致性并且具有钾电压门控通道活性。示例性氨基酸序列提供于NP_004691.2，其序列如下：

1 MAEAPPRRLG LGPPPGDAPR AELVALTAVQ SEQGEAGGGG SPRRLGLLGS PLPPGAPLPG61 PGSGSGSACG QRSSAAHKRY RRLQNWVYNV LERPRGWAFV YHVFIFLLVF SCLVLSVLST 121IQEHQELANE CLLILEFVMI VVFGLEYIVR VWSAGCCCRY RGWQGRFRFA RKPFCVIDFI 181VFVASVAVIA AGTQGNIFAT SALRSMRFLQ ILRMVRMDRR GGTWKLLGSV VYAHSKELIT 241AWYIGFLVLI FASFLVYLAE KDANSDFSSY ADSLWWGTIT LTTIGYGDKT PHTWLGRVLA 301AGFALLGISF FALPAGILGS GFALKVQEQH RQKHFEKRRM PAANLIQAAW RLYSTDMSRA 361YLTATWYYYD SILPSFRELA LLFEHVQRAR NGGLRPLEVR RAPVPDGAPS RYPPVATCHR 421PGSTSFCPGE SSRMGIKDRI RMGSSQRRTG PSKQHLAPPT MPTSPSSEQV GEATSPTKVQ 481KSWSFNDRTR FRASLRLKPR TSAEDAPSEE VAEEKSYQCE LTVDDIMPAV KTVIRSIRIL 541KFLVAKRKFK ETLRPYDVKD VIEQYSAGHL DMLGRIKSLQ TRVDQIVGRG PGDRKAREKG 601DKGPSDAEVV DEISMMGRVV KVEKQVQSIE HKLDLLLGFY SRCLRSGTSA SLGAVQVPLF 661DPDITSDYHS PVDHEDISVS AQTLSISRSV STNMD

“KCNQ4多核苷酸”意为编码KCNQ4多肽的多核苷酸。示例性KCNQ4多肽序列提供于NM_004700，其转载于下。

1 agccatgcgt ctctgagcgc cccgagcgcg cccccgcccc ggaccgtgcc cgggccccgg61 cgcccccagc ccggcgccgc ccatggccga ggcccccccg cgccgcctcg gcctgggtcc 121cccgcccggg gacgcccccc gcgcggagct agtggcgctc acggccgtgc agagcgaaca 181gggcgaggcg ggcgggggcg gctccccgcg ccgcctcggc ctcctgggca gccccctgcc 241gccgggcgcg cccctccctg ggccgggctc cggctcgggc tccgcctgcg gccagcgctc 301ctcggccgcg cacaagcgct accgccgcct gcagaactgg gtctacaacg tgctggagcg 361gccccgcggc tgggccttcg tctaccacgt cttcatattt ttgctggtct tcagctgcct 421ggtgctgtct gtgctgtcca ctatccagga gcaccaggaa cttgccaacg agtgtctcct 481catcttggaa ttcgtgatga tcgtggtttt cggcttggag tacatcgtcc gggtctggtc 541cgccggatgc tgctgccgct accgaggatg gcagggtcgc ttccgctttg ccagaaagcc 601cttctgtgtc atcgacttca tcgtgttcgt ggcctcggtg gccgtcatcg ccgcgggtac 661ccagggcaac atcttcgcca cgtccgcgct gcgcagcatg cgcttcctgc agatcctgcg 721catggtgcgc atggaccgcc gcggcggcac ctggaagctg ctgggctcag tggtctacgc 781gcatagcaag gagctgatca ccgcctggta catcgggttc ctggtgctca tcttcgcctc 841cttcctggtc tacctggctg agaaggacgc caactccgac ttctcctcct acgccgactc 901gctctggtgg gggacgatta cattgacaac catcggctat ggtgacaaga caccgcacac 961atggctgggc agggtcctgg ctgctggctt cgccttactg ggcatctctt tctttgccct 1021gcctgccggc atcctaggct ccggctttgc cctgaaggtc caggagcagc accggcagaa 1081gcacttcgag aagcggagga tgccggcagc caacctcatc caggctgcct ggcgcctgta 1141ctccaccgat atgagccggg cctacctgac agccacctgg tactactatg acagtatcct 1201cccatccttc agagagctgg ccctcttgtt tgagcacgtg caacgggccc gcaatggggg 1261cctacggccc ctggaggtgc ggcgggcgcc ggtacccgac ggagcaccct cccgttaccc 1321gcccgttgcc acctgccacc ggccgggcag cacctccttc tgccctgggg aaagcagccg 1381gatgggcatc aaagaccgca tccgcatggg cagctcccag cggcggacgg gtccttccaa 1441gcagcatctg gcacctccaa caatgcccac ctccccaagc agcgagcagg tgggtgaggc 1501caccagcccc accaaggtgc aaaagagctg gagcttcaat gaccgcaccc gcttccgggc 1561atctctgaga ctcaaacccc gcacctctgc tgaggatgcc ccctcagagg aagtagcaga 1621ggagaagagc taccagtgtg agctcacggt ggacgacatc atgcctgctg tgaagacagt 1681catccgctcc atcaggattc tcaagttcct ggtggccaaa aggaaattca aggagacact 1741gcgaccgtac gacgtgaagg acgtcattga gcagtactca gcaggccacc tggacatgct 1801gggccggatc aagagcctgc aaactcgggt ggaccaaatt gtgggtcggg ggcccgggga 1861caggaaggcc cgggagaagg gcgacaaggg gccctccgac gcggaggtgg tggatgaaat 1921cagcatgatg ggacgcgtgg tcaaggtgga gaagcaggtg cagtccatcg agcacaagct 1981ggacctgctg ttgggcttct attcgcgctg cctgcgctct ggcacctcgg ccagcctggg 2041cgccgtgcaa gtgccgctgt tcgaccccga catcacctcc gactaccaca gccctgtgga 2101ccacgaggac atctccgtct ccgcacagac gctcagcatc tcccgctcgg tcagcaccaa 2161catggactga gggacttctc agaggcaggg cagcacacgg ccagccccgc ggcctggcgc 2221tccgactgcc ctctgaggcc tccggactcc tctcgtactt gaactcactc cctcacgggg 2281agagagacca cacgcagtat tgagctgcct gagtgggcgt ggtacctgct gtgggtgcca 2341gcgccccttc cccacctcag gagcgtgaga tgccaggtcg cacagagggc agcagcagcg 2401gccgtcccgc ggcctctggg ccccccagtg ccctgcccac tccatcaagg ccctatgtgg 2461cccacctggc aggggcacag ccccgggagt gggagcgggc gctggggccc tgggccctga 2521cccagcttcc agctatgcaa ggtgaggtct ctggcccacc cttcggacac agcagggaag 2581ccctcccgcc aagtccccgc cccacttggg ggtgggccaa ggtgccccca caggtaccca 2641caaagcacag gaccctgcca caaggcaggt ggacaccata tatgcaaacc atgttaaata 2701tgcaactttg gggaccccca tggggtctct ctgtccctcc cccattggga gctgggcccc 2761cagcagtagc tggtctcagg ctgcttggcc accaccctgt ccctattctt tggcttatca 2821ctccttcccc tcccagcatg gggcctgttt ctcccctgcc ctctcctaag ggcaatgcct 2881gggcctttct tcccatttgc aagtgtcagc tcccaggggc tccctcctcc tgctgggtgg 2941ccactcccct ccttggccct ccagacacca ctcatagtca gcacaggttt ctgtatcctc 3001cccaaaactc ccagacagtg cttcgtggac gatcgcacaa acatagcctt ttagtttctc 3061cagacaggaa gaaagcctct cacacttaaa catgcaatga cgtgacacac ttggagacat 3121gagtgcagag ccactcagcc gctcctgggc ctctgcagca gatgccagtg gactggcctt 3181gcagggtgac gaccactaag aggaagaccc ccaactccat ctgagcagga gaaggagctt 3241tgaagtaacc cgagagctct ccaggcccca cccagacctt tacccgctcc ccttcttcaa 3301gaagatctcc tcctctctgg tccaggagcc ctaacccact gcctctgcct gtccccaagg 3361gcccgcctcc gtgtctccac agcacaactc gggcccaggc ctgacaccac tggagagacc 3421ccaggcccac ttctagccag gcctgtgcct tcctagtcac tctaactccc agagagaata 3481agaatgcatg taatagctat accaaccgcg catccggctt tcacatgcac tgtctcccct 3541ccctccacac cccacttctt cacttcaatt ggcagcgcca catccaggcg tcagccccca 3601ttcactccag gaacactttc ttatccccac ccctttgctc ctcttctgca aagccaatgc 3661aggtggcagg aaggtgaggg gtagtggacc aatggcaacc ctctgtggga acaaggggcc 3721gaggccacgc tgcctgcatc tcgtgctggg gacctgcatg cgccagcacc agggcttgga 3781ctggatctta ctcagtccat ggtgcccagc ctctgcccca acatgccctc tgcatgtgac 3841cgtcatgccc tggatggagc cactcctggc tcaccccacc tgcactgcac tgtccccaga 3901gagccacccc tccacccact cagagacagc tgtggagagg gccaggagaa tgggattacc 3961ctatgaccaa ggagacatgg gaagaagccc tccttccttc cacgatcgag gttccgccat 4021caactcggtt ctcggatatg caagtacctc actttgttaa cttattaact tattggtttc 4081attaaagttt tcaagaggaa aaaaaaaaaa aaaaaa

“KCNQ4启动子”意为包含核酸序列或由核酸序列组成的调节性多核苷酸序列，该核酸序列足以引导下游多核苷酸在外毛细胞、内毛细胞、前庭细胞、螺旋神经节或前庭神经节中的表达并且与下述核苷酸序列具有至少约85％的序列一致性：

ACGCGTCCGGCTTCCCGGCCCCGCGCGCTGCCCCCGCCACGCGGTTCGGCCCAGGCACCAACTCGGCCGCCCGTGCGCCCTGCCCCGCCGCCTGCTCCGCGCGTTCCCTCCCTCCGCCTCGCCTCGCTTGCTCGCTCGCTCCCTCCCGATTTGGGAAGGCGGCCGCGGGGCGGGCGGGGGAGGGGCGGGGCGGGGGAGGGTGACATGTGAGCGGCGCGCGCCGGTGGCAGGTGGAAAGGCGAGCGGCATGGAGCGCGTAATAAGAGAGTTGGAGTCGGAAAGAGCAGCCCCAGTCGCCGGGGAAGCGGGAGGTCAGTGCGGGCTCCGGCGGCCCCCAGGCTCCGAGCGCCCGCCCGCGGCCCCGGCCCGGCCCCTAGCCCCCGCCGCCCGCGCCCGCCCCGGGTCGCCCCTCTGGCCCCGGGTCCGAGCCATGCGTCTCTGAGCGCCCCGAGCGCGCCCCCGCCCCGGACCGTGCCCGGGCCCCGGCGCCCCCAGCCCGGCGCCGCCc

“TMPRSS3多肽”意为一种蛋白质，其与NP_001243246或其具有蛋白酶活性的片段具有至少约85％的氨基酸序列一致性。示例性TMPRSS3序列如下：

跨膜蛋白酶丝氨酸3异形体4[智人]

NCBI参考序列：NP_001243246.1

>NP_001243246.1跨膜蛋白酶丝氨酸3异形体4[智人]

MGENDPPAVEAPFSFRSLFGLDDLKISPVAPDADAVAAQILSLLPLKFFPIIVIGIIALILALAIGLGIHFDCSGKYRCRSSFKCIELIARCDGVSDCKDGEDEYRCVRVGGQNAVLQVFTAASWKTMCSDDWKGHYANVACAQLGFPSYVSSDNLRVSSLEGQFREEFVSIDHLLPDDKVTALHHSVYVREGCASGHVVTLQCTACGHRRGYSSRIVGGNMSLLSQWPWQASLQFQGYHLCGGSVITPLWIITAAHCVYDLYLPKSWTIQVGLVSLLDNPAPSHLVEKIVYHSKYKPKRLGNDIALMKLAGPLTFNEMIQPVCLPNSEENFPDGKVCWTSGWGATEDGGDASPVLNHAAVPLISNKICNHRDVYGGIISPSMLCAGYLTGGVDSCQGDSGGPLVCQERRLWKLVGATSFGIGCAEVNKPGVYTRVTSFLDWIHEQMERDLKT

“TMPRSS3多核苷酸”意为编码TMPRSS3多肽的多核苷酸。示例性TMPRSS3多肽序列提供于NCBI NM_001256317，其转载于下：

>NM_001256317.1智人跨膜丝氨酸蛋白酶3(TMPRSS3)，转录物变种F，mRNA

ACCGGGCACCGGACGGCTCGGGTACTTTCGTTCTTAATTAGGTCATGCCCGTGTGAGCCAGGAAAGGGCTGTGTTTATGGGAAGCCAGTAACACTGTGGCCTACTATCTCTTCCGTGGTGCCATCTACATTTTTGGGACTCGGGAATTATGAGGTAGAGGTGGAGGCGGAGCCGGATGTCAGAGGTCCTGAAATAGTCACCATGGGGGAAAATGATCCGCCTGCTGTTGAAGCCCCCTTCTCATTCCGATCGCTTTTTGGCCTTGATGATTTGAAAATAAGTCCTGTTGCACCAGATGCAGATGCTGTTGCTGCACAGATCCTGTCACTGCTGCCATTGAAGTTTTTTCCAATCATCGTCATTGGGATCATTGCATTGATATTAGCACTGGCCATTGGTCTGGGCATCCACTTCGACTGCTCAGGGAAGTACAGATGTCGCTCATCCTTTAAGTGTATCGAGCTGATAGCTCGATGTGACGGAGTCTCGGATTGCAAAGACGGGGAGGACGAGTACCGCTGTGTCCGGGTGGGTGGTCAGAATGCCGTGCTCCAGGTGTTCACAGCTGCTTCGTGGAAGACCATGTGCTCCGATGACTGGAAGGGTCACTACGCAAATGTTGCCTGTGCCCAACTGGGTTTCCCAAGCTATGTGAGTTCAGATAACCTCAGAGTGAGCTCGCTGGAGGGGCAGTTCCGGGAGGAGTTTGTGTCCATCGATCACCTCTTGCCAGATGACAAGGTGACTGCATTACACCACTCAGTATATGTGAGGGAGGGATGTGCCTCTGGCCACGTGGTTACCTTGCAGTGCACAGCCTGTGGTCATAGAAGGGGCTACAGCTCACGCATCGTGGGTGGAAACATGTCCTTGCTCTCGCAGTGGCCCTGGCAGGCCAGCCTTCAGTTCCAGGGCTACCACCTGTGCGGGGGCTCTGTCATCACGCCCCTGTGGATCATCACTGCTGCACACTGTGTTTATGACTTGTACCTCCCCAAGTCATGGACCATCCAGGTGGGTCTAGTTTCCCTGTTGGACAATCCAGCCCCATCCCACTTGGTGGAGAAGATTGTCTACCACAGCAAGTACAAGCCAAAGAGGCTGGGCAATGACATCGCCCTTATGAAGCTGGCCGGGCCACTCACGTTCAATGAAATGATCCAGCCTGTGTGCCTGCCCAACTCTGAAGAGAACTTCCCCGATGGAAAAGTGTGCTGGACGTCAGGATGGGGGGCCACAGAGGATGGAGGTGACGCCTCCCCTGTCCTGAACCACGCGGCCGTCCCTTTGATTTCCAACAAGATCTGCAACCACAGGGACGTGTACGGTGGCATCATCTCCCCCTCCATGCTCTGCGCGGGCTACCTGACGGGTGGCGTGGACAGCTGCCAGGGGGACAGCGGGGGGCCCCTGGTGTGTCAAGAGAGGAGGCTGTGGAAGTTAGTGGGAGCGACCAGCTTTGGCATCGGCTGCGCAGAGGTGAACAAGCCTGGGGTGTACACCCGTGTCACCTCCTTCCTGGACTGGATCCACGAGCAGATGGAGAGAGACCTAAAAACCTGAAGAGGAAGGGGACAAGTAGCCACCTGAGTTCCTGAGGTGATGAAGACAGCCCGATCCTCCCCTGGACTCCCGTGTAGGAACCTGCACACGAGCAGACACCCTTGGAGCTCTGAGTTCCGGCACCAGTAGCAGGCCCGAAAGAGGCACCCTTCCATCTGATTCCAGCACAACCTTCAAGCTGCTTTTTGTTTTTTGTTTTTTTGAGATGGAGTCTCGCTCTGTTGCCCAGGCTGGAGTGCAGTGGCGAAATCCCTGCTCACTGCAGCCTCCGCTTCCCTGGTTCAAGCGATTCTCTTGCCTCAGCTTCCCCAGTAGCTGGGACCACAGGTGCCCGCCACCACACCCAACTAATTTTTGTATTTTTAGTAGAGACAGGGTTTCACCATGTTGGCCAGGCTGCTCTCAAACCCCTGACCTCAAATGATGTGCCTGCTTCAGCCTCCCACAGTGCTGGGATTACAGGCATGGGCCACCACGCCTAGCCTCACGCTCCTTTCTGATCTTCACTAAGAACAAAAGAAGCAGCAACTTGCAAGGGCGGCCTTTCCCACTGGTCCATCTGGTTTTCTCTCCAGGGGTCTTGCAAAATTCCTGACGAGATAAGCAGTTATGTGACCTCACGTGCAAAGCCACCAACAGCCACTCAGAAAAGACGCACCAGCCCAGAAGTGCAGAACTGCAGTCACTGCACGTTTTCATCTCTAGGGACCAGAACCAAACCCACCCTTTCTACTTCCAAGACTTATTTTCACATGTGGGGAGGTTAATCTAGGAATGACTCGTTTAAGGCCTATTTTCATGATTTCTTTGTAGCATTTGGTGCTTGACGTATTATTGTCCTTTGATTCCAAATAATATGTTTCCTTCCCTCATTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

“STRC多肽”意为一种蛋白质，其与NP_714544或其片段具有至少约85％的氨基酸序列一致性，其与内耳中的纤毛束关联。示例性STRC氨基酸序列如下：

MALSLWPLLLLLLLLLLLSFAVTLAPTGPHSLDPGLSFLKSLLSTLDQAPQGSLSRSRFFTFLANISSSFEPGRMGEGPVGEPPPLQPPALRLHDFLVTLRGSPDWEPMLGLLGDMLALLGQEQTPRDFLVHQAGVLGGLVEVLLGALVPGGPPTPTRPPCTRDGPSDCVLAADWLPSLLLLLEGTRWQALVQVQPSVDPTNATGLDGREAAPHFLQGLLGLLTPTGELGSKEALWGGLLRTVGAPLYAAFQEGLLRVTHSLQDEVFSILGQPEPDTNGQCQGGNLQQLLLWGVRHNLSWDVQALGFLSGSPPPPPALLHCLSTGVPLPRASQPSAHISPRQRRAITVEALCENHLGPAPPYSISNFSIHLLCQHTKPATPQPHPSTTAICQTAVWYAVSWAPGAQGWLQACHDQFPDEFLDAICSNLSFSALSGSNRRLVKRLCAGLLPPPTSCPEGLPPVPLTPDIFWGCFLENETLWAERLCGEASLQAVPPSNQAWVQHVCQGPTPDVTASPPCHIGPCGERCPDGGSFLVMVCANDTMYEVLVPFWPWLAGQCRISRGGNDTCFLEGLLGPLLPSLPPLGPSPLCLTPGPFLLGMLSQLPRCQSSVPALAHPTRLHYLLRLLTFLLGPGAGGAEAQGMLGRALLLSSLPDNCSFWDAFRPEGRRSVLRTIGEYLEQDEEQPTPSGFEPTVNPSSGISKMELLACFSPVLWDLLQREKSVWALQILVQAYLHMPPENLQQLVLSAEREAAQGFLTLMLQGKLQGKLQVPPSEEQALGRLTALLLQRYPRLTSQLFIDLSPLIPFLAVSDLMRFPPSLLANDSVLAAIRDYSPGMRPEQKEALAKRLLAPELFGEVPAWPQELLWAVLPLLPHLPLENFLQLSPHQIQALEDSWPAAGLGPGHARHVLRSLVNQSVQDGEEQVRRLGPLACFLSPEELQSLVPLSDPTGPVERGLLECAANGTLSPEGRVAYELLGVLRSSGGAVLSPRELRVWAPLFSQLGLRFLQELSEPQLRAMLPVLQGTSVTPAQAVLLLGRLLPRHDLSLEELCSLHLLLPGLSPQTLQAIPRRVLVGACSCLAPELSRLSACQTAALLQTFRVKDGVKNMGTTGAGPAVCIPGQPIPTTWPDCLLPLLPLKLLQLDSLALLANRRRYWELPWSEQQAQFLWKKMQVPTNLTLRNLQALGTLAGGMSCEFLQQINSMVDFLEVVHMIYQLPTRVRGSLRACIWAELQRRMAMPEPEWTTVGPELNGLDSKLLLDLPIQLMDRLSNESIMLVVELVQRAPEQLLALTPLHQAALAERALQNLAPKETPVSGEVLETLGPLVGFLGTESTRQIPLQILLSHLSQLQGFCLGETFATELGWLLLQESVLGKPELWSQDEVEQAGRLVFTLSTEAISLIPREALGPETLERLLEKQQSWEQSRVGQLCREPQLAAKKAALVAGVVRPAAEDLPEPVPNCADVRGTFPAAWSATQIAEMELSDFEDCLTLFAGDPGLGPEELRAAMGKAKQLWGPPRGFRPEQILQLGRLLIGLGDRELQELILVDWGVLSTLGQIDGWSTTQLRIVVSSFLRQSGRHVSHLDFVHLTALGYTLCGLRPEELQHISSWEFSQAALFLGTLHLQCSEEQLEVLAHLLVLPGGFGPISNWGPEIFTEIGTIAAGIPDLALSALLRGQIQGVTPLAISVIPPPKFAVVFSPIQLSSLTSAQAVAVTPEQMAFLSPEQRRAVAWAQHEGKESPEQQGRSTAWGLQDWSRPSWSLVLTISFLGHLL"

“STRC多核苷酸”意为编码STRC多肽的核酸分子。示例性STRC多核苷酸序列如下：

>NM_153700.2智人静纤毛(STRC)，mRNA

GCCCTGCCCTCACCTGGCTATCCCACACAGGTGAGAATAACCAGAACTCACCTCCGGTACCAGTGTTCACTTGGAAACATGGCTCTCAGCCTCTGGCCCCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCCTTTGCAGTGACTCTGGCCCCTACTGGGCCTCATTCCCTGGACCCTGGTCTCTCCTTCCTGAAGTCATTGCTCTCCACTCTGGACCAGGCTCCCCAGGGCTCCCTGAGCCGCTCACGGTTCTTTACATTCCTGGCCAACATTTCTTCTTCCTTTGAGCCTGGGAGAATGGGGGAAGGACCAGTAGGAGAGCCCCCACCTCTCCAGCCGCCTGCTCTGCGGCTCCATGATTTTCTAGTGACACTGAGAGGTAGCCCCGACTGGGAGCCAATGCTAGGGCTGCTAGGGGATATGCTGGCACTGCTGGGACAGGAGCAGACTCCCCGAGATTTCCTGGTGCACCAGGCAGGGGTGCTGGGTGGACTTGTGGAGGTGCTGCTGGGAGCCTTAGTTCCTGGGGGCCCCCCTACCCCAACTCGGCCCCCATGCACCCGTGATGGGCCGTCTGACTGTGTCCTGGCTGCTGACTGGTTGCCTTCTCTGCTGCTGTTGTTAGAGGGCACACGCTGGCAAGCTCTGGTGCAGGTGCAGCCCAGTGTGGACCCCACCAATGCCACAGGCCTCGATGGGAGGGAGGCAGCTCCTCACTTTTTGCAGGGTCTGTTGGGTTTGCTTACCCCAACAGGGGAGCTAGGCTCCAAGGAGGCTCTTTGGGGCGGTCTGCTACGCACAGTGGGGGCCCCCCTCTATGCTGCCTTTCAGGAGGGGCTGCTCCGTGTCACTCACTCCCTGCAGGATGAGGTCTTCTCCATTTTGGGGCAGCCAGAGCCTGATACCAATGGGCAGTGCCAGGGAGGTAACCTTCAACAGCTGCTCTTATGGGGCGTCCGGCACAACCTTTCCTGGGATGTCCAGGCGCTGGGCTTTCTGTCTGGATCACCACCCCCACCCCCTGCCCTCCTTCACTGCCTGAGCACGGGCGTGCCTCTGCCCAGAGCTTCTCAGCCGTCAGCCCACATCAGCCCACGCCAACGGCGAGCCATCACTGTGGAGGCCCTCTGTGAGAACCACTTAGGCCCAGCACCACCCTACAGCATTTCCAACTTCTCCATCCACTTGCTCTGCCAGCACACCAAGCCTGCCACTCCACAGCCCCATCCCAGCACCACTGCCATCTGCCAGACAGCTGTGTGGTATGCAGTGTCCTGGGCACCAGGTGCCCAAGGCTGGCTACAGGCCTGCCACGACCAGTTTCCTGATGAGTTTTTGGATGCGATCTGCAGTAACCTCTCCTTTTCAGCCCTGTCTGGCTCCAACCGCCGCCTGGTGAAGCGGCTCTGTGCTGGCCTGCTCCCACCCCCTACCAGCTGCCCTGAAGGCCTGCCCCCTGTTCCCCTCACCCCAGACATCTTTTGGGGCTGCTTCTTGGAGAATGAGACTCTGTGGGCTGAGCGACTGTGTGGGGAGGCAAGTCTACAGGCTGTGCCCCCCAGCAACCAGGCTTGGGTCCAGCATGTGTGCCAGGGCCCCACCCCAGATGTCACTGCCTCCCCACCATGCCACATTGGACCCTGTGGGGAACGCTGCCCGGATGGGGGCAGCTTCCTGGTGATGGTCTGTGCCAATGACACCATGTATGAGGTCCTGGTGCCCTTCTGGCCTTGGCTAGCAGGCCAATGCAGGATAAGTCGTGGGGGCAATGACACTTGCTTCCTAGAAGGGCTGCTGGGCCCCCTTCTGCCCTCTCTGCCACCACTGGGACCATCCCCACTCTGTCTGACCCCTGGCCCCTTCCTCCTTGGCATGCTATCCCAGTTGCCACGCTGTCAGTCCTCTGTCCCAGCTCTTGCTCACCCCACACGCCTACACTATCTCCTCCGCCTGCTGACCTTCCTCTTGGGTCCAGGGGCTGGGGGCGCTGAGGCCCAGGGGATGCTGGGTCGGGCCCTACTGCTCTCCAGTCTCCCAGACAACTGCTCCTTCTGGGATGCCTTTCGCCCAGAGGGCCGGCGCAGTGTGCTACGGACGATTGGGGAATACCTGGAACAAGATGAGGAGCAGCCAACCCCATCAGGCTTTGAACCCACTGTCAACCCCAGCTCTGGTATAAGCAAGATGGAGCTGCTGGCCTGCTTTAGTCCTGTGCTGTGGGATCTGCTCCAGAGGGAAAAGAGTGTTTGGGCCCTGCAGATTCTAGTGCAGGCGTACCTGCATATGCCCCCAGAAAACCTCCAGCAGCTGGTGCTTTCAGCAGAGAGGGAGGCTGCACAGGGCTTCCTGACACTCATGCTGCAGGGGAAGCTGCAGGGGAAGCTGCAGGTACCACCATCCGAGGAGCAGGCCCTGGGTCGCCTGACAGCCCTGCTGCTCCAGCGGTACCCACGCCTCACCTCCCAGCTCTTCATTGACCTGTCACCACTCATCCCTTTCTTGGCTGTCTCTGACCTGATGCGCTTCCCACCATCCCTGTTAGCCAACGACAGTGTCCTGGCTGCCATCCGGGATTACAGCCCAGGAATGAGGCCTGAACAGAAGGAGGCTCTGGCAAAGCGACTGCTGGCCCCTGAACTGTTTGGGGAAGTGCCTGCCTGGCCCCAGGAGCTGCTGTGGGCAGTGCTGCCCCTGCTCCCCCACCTCCCTCTGGAGAACTTTTTGCAGCTCAGCCCTCACCAGATCCAGGCCCTGGAGGATAGCTGGCCAGCAGCAGGTCTGGGGCCAGGGCATGCCCGCCATGTGCTGCGCAGCCTGGTAAACCAGAGTGTCCAGGATGGTGAGGAGCAGGTACGCAGGCTTGGGCCCCTCGCCTGTTTCCTGAGCCCTGAGGAGCTGCAGAGCCTAGTGCCCCTGAGTGATCCAACGGGGCCAGTAGAACGGGGGCTGCTGGAATGTGCAGCCAATGGGACCCTCAGCCCAGAAGGACGGGTGGCATATGAACTTCTGGGTGTGTTGCGCTCATCTGGAGGAGCGGTGCTGAGCCCCCGGGAGCTGCGGGTCTGGGCCCCTCTCTTCTCTCAGCTGGGCCTCCGCTTCCTTCAGGAGCTGTCAGAGCCCCAGCTTAGAGCCATGCTTCCTGTCCTGCAGGGAACTAGTGTTACACCTGCTCAGGCTGTCCTGCTGCTTGGACGGCTCCTTCCTAGGCACGATCTATCCCTGGAGGAACTCTGCTCCTTGCACCTTCTGCTACCAGGCCTCAGCCCCCAGACACTCCAGGCCATCCCTAGGCGAGTCCTGGTCGGGGCTTGTTCCTGCCTGGCCCCTGAACTGTCACGCCTCTCAGCCTGCCAGACCGCAGCACTGCTGCAGACCTTTCGGGTTAAAGATGGTGTTAAAAATATGGGTACAACAGGTGCTGGTCCAGCTGTGTGTATCCCTGGTCAGCCTATTCCCACCACCTGGCCAGACTGCCTGCTTCCCCTGCTCCCATTAAAGCTGCTACAACTGGATTCCTTGGCTCTTCTGGCAAATCGAAGACGCTACTGGGAGCTGCCCTGGTCTGAGCAGCAGGCACAGTTTCTCTGGAAGAAGATGCAAGTACCCACCAACCTTACCCTCAGGAATCTGCAGGCTCTGGGCACCCTGGCAGGAGGCATGTCCTGTGAGTTTCTGCAGCAGATCAACTCCATGGTAGACTTCCTTGAAGTGGTGCACATGATCTATCAGCTGCCCACTAGAGTTCGAGGGAGCCTGAGGGCCTGTATCTGGGCAGAGCTACAGCGGAGGATGGCAATGCCAGAACCAGAATGGACAACTGTAGGGCCAGAACTGAACGGGCTGGATAGCAAGCTACTCCTGGACTTACCGATCCAGTTGATGGACAGACTATCCAATGAATCCATTATGTTGGTGGTGGAGCTGGTGCAAAGAGCTCCAGAGCAGCTGCTGGCACTGACCCCCCTCCACCAGGCAGCCCTGGCAGAGAGGGCACTACAAAACCTGGCTCCAAAGGAGACTCCAGTCTCAGGGGAAGTGCTGGAGACCTTAGGCCCTTTGGTTGGATTCCTGGGGACAGAGAGCACACGACAGATCCCCCTACAGATCCTGCTGTCCCATCTCAGTCAGCTGCAAGGCTTCTGCCTAGGAGAGACATTTGCCACAGAGCTGGGATGGCTGCTATTGCAGGAGTCTGTTCTTGGGAAACCAGAGTTGTGGAGCCAGGATGAAGTAGAGCAAGCTGGACGCCTAGTATTCACTCTGTCTACTGAGGCAATTTCCTTGATCCCCAGGGAGGCCTTGGGTCCAGAGACCCTGGAGCGGCTTCTAGAAAAGCAGCAGAGCTGGGAGCAGAGCAGAGTTGGACAGCTGTGTAGGGAGCCACAGCTTGCTGCCAAGAAAGCAGCCCTGGTAGCAGGGGTGGTGCGACCAGCTGCTGAGGATCTTCCAGAACCTGTGCCAAATTGTGCAGATGTACGAGGGACATTCCCAGCAGCCTGGTCTGCAACCCAGATTGCAGAGATGGAGCTCTCAGACTTTGAGGACTGCCTGACATTATTTGCAGGAGACCCAGGACTTGGGCCTGAGGAACTGCGGGCAGCCATGGGCAAAGCAAAACAGTTGTGGGGTCCCCCCCGGGGATTTCGTCCTGAGCAGATCCTGCAGCTTGGTAGGCTCTTAATAGGTCTAGGAGATCGGGAACTACAGGAGCTGATCCTAGTGGACTGGGGAGTGCTGAGCACCCTGGGGCAGATAGATGGCTGGAGCACCACTCAGCTCCGCATTGTGGTCTCCAGTTTCCTACGGCAGAGTGGTCGGCATGTGAGCCACCTGGACTTCGTTCATCTGACAGCGCTGGGTTATACTCTCTGTGGACTGCGGCCAGAGGAGCTCCAGCACATCAGCAGTTGGGAGTTCAGCCAAGCAGCTCTCTTCCTCGGCACCCTGCATCTCCAGTGCTCTGAGGAACAACTGGAGGTTCTGGCCCACCTACTTGTACTGCCTGGTGGGTTTGGCCCAATCAGTAACTGGGGGCCTGAGATCTTCACTGAAATTGGCACCATAGCAGCTGGGATCCCAGACCTGGCTCTTTCAGCACTGCTGCGGGGACAGATCCAGGGCGTTACTCCTCTTGCCATTTCTGTCATCCCTCCTCCTAAATTTGCTGTGGTGTTTAGTCCCATCCAACTATCTAGTCTCACCAGTGCTCAGGCTGTGGCTGTCACTCCTGAGCAAATGGCCTTTCTGAGTCCTGAGCAGCGACGAGCAGTTGCATGGGCCCAACATGAGGGAAAGGAGAGCCCAGAACAGCAAGGTCGAAGTACAGCCTGGGGCCTCCAGGACTGGTCACGACCTTCCTGGTCCCTGGTATTGACTATCAGCTTCCTTGGCCACCTGCTATGAGCCTGTCTCTACAGTAGAAGGAGATTGTGGGGAGAGAAATCTTAAGTCATAATGAATAAAGTGCAAACAGAAGTGCATCCTGATTATTTTCAGAAGCTGATGAGGAATA

“EYA4多肽”意为一种蛋白质，其与NP_001287941.1或其具有转录调控活性的片段具有至少约85％的氨基酸序列一致性。

>NP_001287941.1无眼同源物4异形体e[智人]

MEDSQDLNEQSVKKTCTESDVSQSQNSRSMEMQDLASPHTLVGGGDTPGSSKLEKSNLSSTSVTTNGTGVITSSGYSPRSAHQYSPQLYPSKPYPHILSTPAAQTMSAYAGQTQYSGMQQPAVYTAYSQTGQPYSLPTYDLGVMLPAIKTESGLSQTQSPLQSGCLSYSPGFSTPQPGQTPYSYQMPGSSFAPSSTIYANNSVSNSTNFSGSQQDYPSYTAFGQNQYAQYYSASTYGAYMTSNNTADGTPSSTSTYQLQESLPGLTNQPGEFDTMQSPSTPIKDLDERTCRSSGSKSRGRGRKNNPSPPPDSDLERVFVWDLDETIIVFHSLLTGSYAQKYGKDPPMAVTLGLRMEEMIFNLADTHLFFNDLEECDQVHIDDVSSDDNGQDLSTYSFATDGFHAAASSANLCLPTGVRGGVDWMRKLAFRYRRVKELYNTYKNNVGGLLGPAKRDAWLQLRAEIEGLTDSWLTNALKSLSIISTRSNCINVLVTTTQLIPALAKVLLYSLGGAFPIENIYSATKIGKESCFERIVSRFGTNITYVVIGDGRDEEHAANQHNMPFWRISSHSDLLALHQALELEYL

“EYA4多核苷酸”意为编码EYA4多肽的核酸分子。例示性的EYA4多核苷酸序列提供于NCBI参考：NM_001301012.1，其转载于下:

>NM_001301012.1智人EYA转录共活化因子和磷酸酶4(EYA4)，转录变异体5，mRNA

TCCGGAGTTTTGGCTCCTCTCCTTTCCTCCTCCCCCTCGGAGCCGGCTTCTCCCTCCGCCCCGCTTCTCCCCCGCTTGTGTACGCTATTTGTTGTGGGGTGGCCGAAGGGGATGTCCTGTTTTCACCAGAGGCACAGCGCGAAGGGGAAACTTCGACACTGGAAGGAACGAGAATAAATACTTAATTACGGACGCACTGAACCGCGGCTGGGACAGACACTTCGGGAACCCGAGGCGGACCGGGCGACGAGATAGTCATTTTTACTTGAAGGAAGCTGCTTCTACTTGGGAGTGGCAGGAGAAGTGAGAAAACCACATGGAAGACTCCCAGGATTTAAATGAACAATCAGTAAAGAAAACGTGCACAGAATCAGATGTTTCACAATCTCAGAATTCCAGGTCTATGGAAATGCAGGACCTAGCAAGTCCTCATACTCTTGTTGGAGGTGGTGATACTCCAGGTAGCTCCAAACTGGAAAAATCTAATCTCAGCAGCACATCAGTTACTACAAATGGGACAGGAGTAATTACAAGTAGTGGCTACAGCCCCAGATCAGCACATCAGTATTCCCCACAGCTGTATCCTTCCAAGCCCTATCCACACATTCTTTCTACACCAGCAGCTCAAACAATGTCTGCCTATGCAGGCCAGACTCAGTATTCGGGGATGCAGCAGCCAGCCGTCTACACAGCCTACTCACAGACAGGACAGCCCTACAGCTTGCCCACTTACGATTTGGGTGTGATGTTGCCAGCCATCAAGACAGAGAGTGGACTTTCCCAAACTCAGTCCCCATTACAGAGTGGCTGCCTCAGTTACAGCCCAGGGTTCTCTACCCCACAGCCAGGCCAGACACCTTATTCTTACCAAATGCCAGGTTCTAGTTTTGCACCATCATCTACTATTTATGCAAATAATTCAGTTTCCAATTCAACGAATTTCAGTGGTTCACAACAGGATTATCCATCCTATACAGCCTTTGGCCAAAACCAGTATGCACAGTATTATTCAGCATCAACGTATGGAGCGTATATGACATCGAATAACACAGCCGATGGCACACCCTCTTCAACCTCTACTTATCAGTTGCAGGAATCTCTCCCAGGACTGACTAACCAACCAGGAGAGTTCGATACCATGCAGAGTCCCTCCACACCCATCAAAGATCTTGATGAGAGAACCTGTAGGAGTTCTGGGTCAAAGTCCAGAGGAAGAGGCCGGAAAAATAATCCCTCCCCGCCTCCTGATAGTGACCTGGAGCGTGTGTTTGTCTGGGATTTGGATGAAACCATCATTGTTTTTCACTCACTGCTCACCGGGTCTTATGCACAGAAGTATGGCAAGGATCCCCCCATGGCTGTAACCCTTGGACTCCGCATGGAAGAAATGATTTTTAATCTTGCTGATACTCATTTGTTTTTTAATGATTTAGAGGAGTGTGATCAAGTTCATATAGATGATGTTTCCTCTGATGATAATGGGCAGGACTTAAGTACCTACAGTTTTGCAACTGATGGCTTCCATGCAGCTGCAAGTAGTGCAAACCTTTGTTTGCCAACAGGTGTAAGAGGAGGGGTTGACTGGATGAGGAAGTTGGCTTTTCGTTACAGAAGAGTAAAAGAATTATATAACACCTACAAGAACAACGTTGGAGGACTCCTTGGCCCTGCCAAGAGGGATGCCTGGCTACAGTTAAGGGCAGAGATTGAAGGTCTGACAGATTCCTGGCTAACAAATGCACTTAAGTCTTTATCAATTATTAGCACTAGGAGTAACTGCATAAATGTCTTGGTAACGACAACTCAACTGATCCCAGCACTTGCGAAGGTTCTACTCTATAGTTTAGGAGGTGCTTTCCCCATTGAGAATATTTACAGTGCAACTAAAATAGGCAAGGAAAGCTGTTTTGAGCGTATAGTGTCCAGATTTGGCACTAACATAACTTATGTTGTGATTGGAGATGGCCGAGATGAGGAGCATGCCGCTAACCAGCACAACATGCCCTTCTGGAGGATATCCAGTCACTCAGACCTCCTGGCTCTCCACCAAGCACTGGAATTAGAGTATTTGTAACTGTGTTCTTTAGCCGGAGATCCATTTTTTATATTTCAAGTACACTGAATTTTTATGTGTGATTCAATGCCTCTGGCTCTACACATATAAATTGTCTTAATGGATGAAATCATATTTGGAATAAAAATTCCAGAATGAAGAATTCAGATTGCTGAATGGAGTTAAACTTTAGTGCTACAGAAAAGAAACTCTATGGTCTTATATTTACAACACTTTAATGGGTTTTTTAAAAATCTGTGGAGGTTGCTGGTACACACCAAATGAGTCCAAACTGGAATGAGCAGCTTTAGCAAAGAACTCTTACCCTGGCAAAGCAGCAACACACATGCTCCGTCTGACAAGGTGGTCAACAACATTCCTCAAAATGGGAGATCTTCTCAGCCCTGAGGTTTGAATCTGACTTTAGCCTACCTAACCCAGAAAATCTGAATTGGAATGCACTCAGACTGTATAAGGACAGTCCTATTTAGACATGTAATTTGTGTAAATTATTGATGAAAATAATTTACTGTGACTTTATTAGCAGCTGACTTTCAAAGTGGATGCAATTTTTCTTTCTTTTGTTGGGGAGGGGAATGGGAGGGGAAATGGGAATATAATATTGTCTCTTTTTTAAGTTTGGCAAACAGAATGTTCATACTGATGTGTTGTGCCTTAAAGACAAGACAGCATTTGTGTGTTACAATGTAACTTTGGTTAAAATCTCTGTAGATAATGAAAAAAAACAAAAAAAAAAACCTTTGTGATGATTCTTAACATGACCAAATTTAAAAGTCAAGCTCTCAGAGCTTAATTACCGCATCAGCAAGAAACTGAGTATTTTTTGCAATAAGAAAACAACAATAATAAAGGAAAGCTTGTGTTTCATTTGGGTTCTTAATAATTCCAATAATTGTATGAGGCAACTATTTGCGCATCCAACCATGAGTGGAAGGTTTGGGAAAGACTGTGGGACCTTTACTTAGAAAGTGAAATGTATGTAGAAGTCTCAAGTACCCCTTCTACAGTTTTACTGGAGAAAACTAAGAGCCATATTCATGACAACTTGCACAGTTTTGAGGTTGAGACTTTTGATATGTGTAAGTTGCATAGAGGAGGATATTATCATGCAAATCATGAGCAATTATCACATAAACTTTTTTAGAATGTGCCATGAACATGGCATAAAATTCACATTGAGTGCACAGGGCTTAAAATAAAGCTAAGTATGTTTATTCCCAATGCCATGGCAAAAATGATAATATCATCAGAAATGGAAGGCAGTTCTCCCAGATGGTGTCTAATGAAAGCAATGAGTCTATGAAAATTTTACCTAGAATATCATCATAAATTAAATTAGCAAGTGCGCTGGATCTTGGCAGCGCTGCTGAAATGACAACAGTAAAATAATACCTGGTTCTCCATCTGAATACATCAATGCAGGTTCTCCTCGTAACAGACTTGCATATGTTTGTTAGTTTCTGCCTGTATTGTCACTGCGCAACGGATGGCATTCATTACAAGAAGAGCCCATCATCGTTGTGTTTGCATGGTTTTTTTCCTTGTGTGTAGCCCATGTTGGGAACACGATACAGGTTCTCCTCTTATTTCCTATGACACGATTTCCCTTGTGGAAATTTAAGACTTTAAGAACTAGAGTATTTTTATGGTGTCTGCACCTGCAGTTCTGTGTTTAAAATGTCATAATGTGGATCCTGGAGTCAGGCTACTAGTCAGTGCCCCTAGCCAGAGGCTGGTTCATGAGTTCATCAACTGAGGCCTCTGTGGCTTCAATAAAGTCTACATTTTGCTCACAGATCACAACATTCACTGTGGAAATATGATTTCATTTCTTTAGGCTACAAACCTGTATTTCTTTACTGAATGCTAAGGCCATGTTTATATTGGGTAGAAAGATATTGAGATCCCAATTTTGTACAAGATTGTGATTTCATTATCTAAACCTTAAACTTAATCCTTTAAATTTTGTAGCTTTTGGCTGCATCTGCCCCAAGTACTATTCCAGGCAAATTAAAGTTGGAATACCTTTAATAATATAAAAATAATGATAGTAAATCTTATACTTCTGTTGGCCCTTAGCTTGAAAATAGCAGTTAAAAAAATTTAAATGTTGCCTTGATTATCAGTACTTAATTATGTTGTGCACTAAAACCTTAAATATTTATTACTGTGAATAAAAACAAATTATCTTTACTGTATAGCTGGTTTCTTTAAATGTTGATAGAATTGTGGCATTACATCTAAATTTGTAAGTCTTTTCATATCAAACAAGCAAGGCTTTTTATGCTGCTAAGTCTGTGGGTGCAGAAAGAAACACCCCTTGGAAGGGCAAAGAGAAGCCGGCTGGTTGCATCACCCCGTGCAGTTTCTCACACACATCTCTTTTTCTGATTCTGTGTTCAGAAGAGGCTGCCGGCATAAAACCTAAATGCAAGGTTGACGGAGAACAGCTTGTCTGGCACAACAATGGTGCAGGCCCACGAGCCAGCATCACAGCTTGGCCATGGGACGTTGAGTATGCACAAACTAGAACTCTTCCCTTCCCACCTTAGGAATAGAAAATCCTCTTCCTTTCTAATCTGAAAAACGAAAACTGAACAAACACAAAACCAACCCCTTGGCAGTTCCCACCTCCTATTGACATATGGAATATTGTGCCTTATTGTAAACCAGTTTGAAAAATGTTCTGTAACTAAAGTGGGTTTTCGGCTATTATGTATACAGCTTGGTATATTACTACGAAAGATAACCACCTTGTGTTGCACCTTAAAAATATCAAGACCATGTAATTTCCATAACAAAATAGGTGGCCTGGCTATGGTATTATAGCATACAATTAGGACACTATGCCCCTGCAAAATTTTGTAAATCAAATTCAGAGGCAAAAACATATTTTAGAATCATACAGTTTGCACACGACAAGTAGGTAATAACTGTCTCTAAAAATGTTTTCTCCTTAGTCCGCAATGAGCTAAGATTCAGAATAGTGTCAACAGCATGCTCCTATATGAAGTTGTTTTTTTTAAAGCACATTTGTTTATGACAAGCCTACATTCTCAGTGAATATGGCATTTAGTATTTCTTTTGAAAACAAACTTAAGCATCATGAGCCAAAGTTGCACTTTGACTCCCAACTACGGTAGCATTATGGACATCTCACAATGTCAAGGGTTTCTGTTATGTATTAGTAAAGTATAGATTATTGGGGCCTACATAATTTAAAAGAAATGTAAATTAATATTAAAAGCTTGTAAAAATATGTATATCTTTACTATTTCTCAATAAATACCTTTGCAATTGTTTTCATTTCCTTCAAAAA

“Espin启动子”意为源自NCBI参考序列：NG_015866.1，其足以引导下游多核苷酸在外毛细胞或内毛细胞、前庭毛细胞、螺旋神经节或前庭神经节中的表达。在一种实施方案中，Espin启动子包含位于Espin编码序列上游的至少约350、500、1000、2000、3000、4000、5000或更多个碱基对或由这些碱基对组成。

“原钙粘蛋白相关15(PCDH15)启动子”意为源自NCBI参考序列：NG_009191，其足以引导下游多核苷酸在外毛细胞或内毛细胞、前庭毛细胞、螺旋神经节或前庭神经节中的表达。在一种实施方案中，PCDH15启动子包含位于PCDH15编码序列上游的至少约350、500、1000、2000、3000、4000、5000或更多个碱基对。在一些实施方案中，PCDH15启动子包含与下列核苷酸序列具有至少约85％序列一致性的核酸序列或由该核酸序列组成：

TCTTCACCTGTCATTTTCAACCAGCCTCAGCCTATCTGCTCTGTCACAATCACTACTAAAATATGTTCCTAAATTGCTTGTTTCTAGATCCTTCCTTCTCATATGCTCAGGTGAACACATGGGTGAAATTTAATATGGAATTGAAATATGTACTATGCAAGATAGATTCCTTAAGAAATGTTTCTCTGATTTATATGACATAATTGTATTTTACTAGTTTACCTGTCCATCTGTAAAACTTTGTTTTGGAGATTTCATATATTACAATGTTTAAGAAATATGCTATAATGTTTTGTATAGTATATTTCTTCGTGATAACCTTATATACTACCAGTCACACGTGTTTGTAAAAATCTAAAGAGTACTTTTGGCTCCTACAGAATGTGTGAAGTTGTGAAATTGTTTTTTTGTTTTGTTTTGTTTTGTTTTTATGCCCCAAAGATGTGGAGGGCTTCATATAAGAGGGTAGATTTAATGAGAGAGAGAGGGAGAGACAGAGAGAATGATAAAAGAAGCTTAAGAGATTATTTTATCTTGTCAACGACATTGTTATTGAATGTAAGCTGCTAAACTTCTTAGATAAAGTAAAACAGTAAAAACAAACACACAAAACAGAACAGAGAATCATCAGACAGGCTGACGAACACAGTACAATAAAGCAGCCAGTACCGATGATCAGTGGACATCAATTTGTCTTTTGGGCTGTAGCACCTGCTACTAATTGGTGCAAAGCGCTCACCAGTCAGTGCGTGGTTTAGCGCACTCAGCTGTCTCCTGTATGTGCTGCGAGAAGCAAGATAGCTAATTGCTGTTGCTTCAGTGCCAGTGAAATCAACGTGCTGAGCTAATAGCGACAGATAGAGGGCAGACAGATTCCTGCTAGCAGCTTAGTGTTAGTTGCTTGTGGTAACTAAGGCAGGTGGCATACATCTCAGAACGTGGAGAATGATGGTATGCTTTCTGA

“蛋白酪氨酸磷酸酶Q型受体(PTPRQ)启动子”意为源自GeneID：374462，其足以引导下游多核苷酸在外毛细胞或内毛细胞、前庭毛细胞、螺旋神经节或前庭神经节中的表达。在一种实施方案中，PTPRQ启动子包含位于PTPRQ编码序列上游的至少约350、500、1000、2000、3000、4000、5000或更多个碱基对。在一些实施方案中，PTPRQ启动子包含与下列核苷酸序列具有至少约85％序列一致性的核酸序列或由该核酸序列组成：

TGGTAGCCTCCCTAGAGACACAGAGCTGGGCCGGATGAGTCCAGGCACTGACGTGATCCATTATCTTTCACCTTAAAGAGTAAAAGGGAAACTAAAGTTAATTACCTCCACGAAACAAAAAGGTGCCTTCTTGTGCTTCAATTACATGGATATATTCTACTAGTCTAAAAGTATCTTCTCACTTCTTTCTGTCACTGTGAGGACTTGAGTCAGAAGAAAGTTTAAATACAGTCATTGAGCTGGAAAGAGTGGAAAGAGAAGCAAAGAGGGGGAAGCTGTAGGAAGGACGAAGTCACCCCCAAGATACATGGTTACTGCTTACACCAAGCAAGCTGCCTTGGGAACGCTTCCCCCGAGCAGCCAGAATGCTCAGCAGTGGAAGACACCTCTATTCCTGTAGGCGAGTCCTGGGAAGCTGGTCAATCTGCAAATGCCAATTCCCAGCAGTGAGCTCGGTCCACGTGTAAATCAAGATTTGGGGAAAGAGTAGGGTGGGTGGCATGGTTGACAATGTCATCAGCTCCCTCCTCTGACTCCTGTGGTCGTGCCCCCATCTACTCTCACTCAGCTACACCCCACCTTCGGATTTGTGATGGACGCTGGGTCCCTAGTAACCACAGCAAGTGTCTCCCCCGCACTTCCCCCTTCCCCACCCCCACCCCCACCCCCAACCACCACCCCAGCGATGGAGCCTACTCTGCTCCAAGCCGCCGCTAAGACCCGGAGAAGCGGAATTTCACTTTGAAATTCCCTTGCCTCGTGAGGGCCGGCGCTGGGCATGCTCAGTAGCCGCGGCGCTGCTGCTGGGCTGCTGGGCTGGCGCGGAGTCCACCCTGCCGTCTCCGCCTTGGCTTCTGGGCGTCCAGAAGGCCAGGCATTTGCCGCCTCTGAGCGCTTCTGTTCCCCTTACCCGCAACCTCCTACTGCTCTTCCTCTCTCCCTCTCTTAGGGAGGTTGAAGCTGGTGCTGGTTTCTGTCGGCGCCACAGACTGACTGCTCTGCAAACCCCAGCCGAGGACCTGAATCCCGGAGACTAGAAG

“脂肪瘤HMGIC融合伴侣样5(LHFPL5)启动子”也称“TMHS”启动子，意为源自NCBI参考序列：GeneID：222662，其足以引导下游多核苷酸在外毛细胞或内毛细胞、前庭毛细胞、螺旋神经节或前庭神经节中的表达。在一种实施方案中，TMHS启动子包含位于PCDH15编码序列上游的至少约350、500、1000、2000、3000、4000、5000或更多个碱基对。在一些实施方案中，TMHS启动子包含与下列核苷酸序列具有至少约85％序列一致性的核酸序列或由该核酸序列组成：

GCCCAGTGGAATTTTCCTAGTTCTTTACACTAGCCATGTATTTACCTATAAAATCAGGAGAAATATGTATATATATAATATATTAAAACATATATATATTTAAATGGGGAAATATGTAACAAACAAATAGAAACAAGGGGAGAAAGGCATTGTATTTGACAAAACACATATGTTCAGGTCTGAGAAGGCTCATAAAGAATGTTGTCTGCTATACTTTGTAGTTGCTTCTGTTATCACACAATCAGTCTGCATATACAGGCGTTTTATATATATATTTATATAGACTACATATATACGTATATTATATATGTAAATATTTCACTGTCTTTGAGGACGGGGGCCCTGTCTTTTTTATCTGTGGTTTTGCTTAGATGTCCTCCAACATAATCTTAACACATAGTATGCTTTTAGAAATCGTTGACTGAATGCTAAGGACGAAAAACCGGTGACCAGAAGGCAACCAGGAAAGGCTTTGCTGACCTCCGGAGTGGTGGAGTTGGAGGTTCTGGGAAGGCGACTAGGGAGCCAGGCAGGGGCGGGGTGGGATGGGATGTGGACAGCGCTTTTGCGGGGGGAAAGCGTTTTTGCTGCTGGAATTGAGCAGTAGGAATGTGTCAGTCACATCCCCACCTTCCCAATTCTTGTCATCTCGGTTCAGGAAGGTGAACGGTGTTCCGATTCCCCGCGGCGGGGGCCTGTAGTGGGAGCTCTGCCCCTTCCCCGCCTCTGCTGCAGGCCCCGCCCCTCGCCCGGAACCCCGGGGCGCTGGCCGCGGTGCTGAAACGGCGCCCTCCGCGGACGGAGGAGGGGGCGGGGCTCTCGGGAGCCGTGAGCCGGGAAGAGGGAGACGGGCAGGGCGGCGCCAGCAGGCCCTGGTGGGCTTGGGAGGAGGCAGGAGACTGGAGACAGCCTCGGCTAGAGCGGACACAGGCACCTGGCAAGCTTTCCTTGACCAAATCAAGGT

“突触蛋白启动子”也称为“Syn启动子”，意为包含核酸序列或由核酸序列组成的调节性多核苷酸序列，该核酸序列足以引导下游多核苷酸在外毛细胞、内毛细胞、前庭细胞、螺旋神经节或前庭神经节中的表达并且与下述核苷酸序列具有至少约85％的序列一致性：

tctagactgcagagggccctgcgtatgagtgcaagtgggttttaggaccaggatgaggcggggtgggggtgcctacctgacgaccgaccccgacccactggacaagcacccaacccccattccccaaattgcgcatcccctatcagagagggggaggggaaacaggatgcggcgaggcgcgtgcgcactgccagcttcagcaccgcggacagtgccttcgcccccgcctggcggcgcgcgccaccgccgcctcagcactgaaggcgcgctgacgtcactcgccggtcccccgcaaactccccttcccggccaccttggtcgcgtccgcgccgccgccggcccagccggaccgcaccacgcgaggcgcgagatagggggGcacgggcgcgaccatctgcgctgcggcgccggcgactcagcgctgcctcagtctgcggtgggcagcggaggagtcgtgtcgtgcctgagagcgcagtc

“剂”意为多肽、多核苷酸或小化合物。

“缓解”意为减少、阻抑、衰减、缩减、迟滞或稳定化疾病或病变的发展或进展。

“改变”意为基因或多肽的表达水平或活性的变化(增加或减少)，如通过该领域已知的方法如本文所述的那些方法所检测。如本文中所用，改变包括表达水平变化至少10％，优选变化25％，更优选变化40％，且最优选表达水平变化50％或更高。

本公开中，“包含”、“含有”和“具有”等可具有美国专利法中规定的属于它们的意义，且可意为“包括”等；“主要由...组成”等具有美国专利法中规定的属于它们的意义，且该术语是开放性的，允许超过其所引述者的存在，只要其所引述的基本或新颖特征没有被超过其所引述者的存在改变即可，但不包括先前技术实施方案。

“检测”指的是证实待检测的被分析物的存在、不存在或量。

“疾病”意为损害或干扰细胞、组织或器官的正常功能的任何病症或病变。疾病的示例包括遗传障碍，其以在例如受试者的内耳中被表达且在机械感觉转导中发挥作用的蛋白质功能的损失为特征。在另一实施方案中，该疾病是乌谢尔综合征(例如，USH1)或老年性听力损失。在一个实施方案中，疾病是与基因缺陷诸如TMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C(例如，harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c)、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4和FAM65B中的缺陷相关的听觉障碍。

“有效量”意为相对于未治疗患者缓解疾病症状所需的剂的量。用来实践本发明的用于治疗性处理疾病的活性化合物的有效量可变，取决于给药模式以及受试者的年龄、体重和一般健康情况。基本上，主治医生或兽医将决定适宜的量和给药方案。这一量被称为“有效”量。

“片段”意为多肽或核酸分子的一部分。这一部分优选地含有参考核酸分子或多肽总长度的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。片段可包含10、20、30、40、50、60、70、80、90、或100、200、300、400、500、600、700、800、900、或1000核苷酸或氨基酸。

“杂交”意为互补核酸碱基之间的氢键键合，其可以是沃森-克里克(Watson-Crick)、胡斯坦(Hoogsteen)和反向胡斯坦氢键键合。举例而言，腺嘌呤和胸腺嘧啶是通过形成氢键而配对的互补核酸碱基。

术语“分离的”、“纯化的”或“生物学纯的”指的是材料没有不同程度的在其天然状态下发现的正常伴生组分。“分离”表示与原始来源或周围物质分隔的程度。“纯化”表示高于“分离”的分隔程度。“纯化的”或“生物学纯的”蛋白质足够不含其它材料，使得任何杂质均不在材料上影响该蛋白质的生物学性质或不造成其它负面后果。换言之，如果本发明的核酸或肽基本上在通过重组DNA技术生产时不含细胞材料、病毒材料或培养基，或者当化学合成时不含化学前体或其它化学品，则该核酸或肽是纯化的。典型使用分析化学技术例如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱来测定纯度和均质性。术语“纯化的”可表示核酸或蛋白质在电泳凝胶中给出实质上的一条谱带。对于可进行修饰如磷酸化或糖基化的蛋白质，不同的修饰可给出不同的分离的蛋白，它们可独立纯化。

“分离的多核苷酸”意为一种核酸(例如，DNA)，其不含在本发明的核酸分子所源自的有机体的天然出现的基因组中位于该基因侧翼的基因。该术语因此包括，举例而言，重组DNA，其被并入载体内、并入自主复制质粒或病毒内、或并入原核生物或真核生物的基因组DNA内，或作为独立于其它序列的单独分子而存在(举例而言，通过PCR或限制性内切酶消化制备的cDNA或基因组或cDNA片段)。此外，该术语包括从DNA分子转录的RNA分子，以及作为编码附加多肽序列的杂交基因的一部分的重组DNA。

“分离的多肽”意为已经与其天然伴随组分分离的本发明的多肽。典型地，以重量计，当多肽的至少60％不含其天然关联的蛋白质和天然出现的有机分子时，则该多肽是分离的。优选该制剂含有至少75重量％、更优选至少90重量％、最优选99重量％的本发明的多肽。可通过例如从天然来源提取、编码多肽的重组核酸的表达、或化学合成蛋白质来获得本发明的分离的多肽。可通过任何适宜的方法例如柱层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳或HPLC分析来测量纯度。

“标记物”意为任意蛋白质或多核苷酸，其在表达水平或活性上有与疾病或病变相关的改变。

如本文中所用，如“获得一剂”中的“获得”包括合成、购买或以其它方法取得该剂。

“启动子”意为足以引导下游多核苷酸的转录的多核苷酸。

“降低”或“增加”意为至少10％、25％、50％、75％或100％的负向或正向改变。

“参考”意为标准或对照条件。

“参考序列”是用作序列比对基础的定义序列。参考序列可以是特定序列的一部分或整体；例如，全长度cDNA或基因序列的链段、或完整的cDNA或基因序列。对于多肽，参考多肽序列的长度将通常为至少约16个氨基酸，优选至少约20个氨基酸，更优选至少约25个氨基酸，且甚至更优选约35个氨基酸、约50个氨基酸或约100个氨基酸。对于核酸，参考核酸序列的长度将通常为至少约50个核苷酸，优选至少约60个核苷酸，更优选至少约75个核苷酸，且甚至更优选约100个核苷酸或约300个核苷酸或与之接近或之间的任何整数。

可用于本发明方法的核酸分子包括编码本发明的多肽或其片段的任何核酸分子。此类核酸分子无须与内源性核酸序列100％一致，但典型将会展现基本一致性。具有与内源性序列“基本一致性”的多核苷酸典型能与双链核酸分子的至少一条链杂交。可用于本发明方法的核酸分子包括编码本发明的多肽或其片段的任何核酸分子。此类核酸分子无须与内源性核酸序列100％一致，但典型将会展现基本一致性。具有与内源性序列“基本一致性”的多核苷酸典型能与双链核酸分子的至少一条链杂交。

“杂交”意为在互补多核苷酸序列(例如，本文所述的基因)或其部分在多种严格条件下配对以形成双链分子。(见，例如，Wahl,G.M.and S.L.Berger(1987)MethodsEnzymol.152:399；Kimmel,A.R.(1987)Methods Enzymol.152:507)。

举例而言，严格的盐浓度一般为少于约750mM NaCl和75mM柠檬酸三钠，优选少于约500mM NaCl和50mM柠檬酸三钠，且更优选少于约250mM NaCl和25mM柠檬酸三钠。低严格度杂交可在不存在有机溶剂如甲酰胺的情况下获得，而高严格度杂交可在存在至少约35％甲酰胺且更优选至少约50％甲酰胺的情况下获得。严格的温度条件一般将包括至少约30℃，更优选至少约37℃，且最优选至少约42℃的温度。可变的附加因素，如杂交时间、洗涤剂如十二烷基硫酸钠(SDS)的浓度、以及包含或不饱和载体DNA，是该领域技术人员所周知的。通过按需要组合这些多种条件来实施各种水平的严格度。在优选的实施方案中，杂交将出现在30℃的750mM NaCl、75mM柠檬酸三钠和1％SDS中。在更优选的实施方案中，杂交将出现在37℃的500mM NaCl、50mM柠檬酸三钠、1％SDS、35％甲酰胺和100μg/ml变性鲑鱼精DNA(ssDNA)中。在最优选的实施方案中，杂交将出现在42℃的250mM NaCl、25mM柠檬酸三钠、1％SDS、50％甲酰胺和200μg/ml ssDNA中。对这些条件的有用改变对于该领域技术人员是显而易见的。

对于大多数应用，杂交后的洗涤步骤的严格度也将改变。可通过盐浓度和温度来界定洗涤严格度条件。如上，可通过降低盐浓度或增加温度来增加洗涤严格度。举例而言，洗涤步骤的严格的盐浓度优选为少于约30mM NaCl和3mM柠檬酸三钠，且最优选少于约15mMNaCl和1.5mM柠檬酸三钠。用于洗涤步骤的严格的温度条件一般将包括至少约25℃，更优选至少约42℃，且甚至更优选至少约68℃的温度。在优选的实施方式中，洗涤步骤将出现在25℃的30mM NaCl、3mM柠檬酸三钠和0.1％SDS中。在更优选的实施方式中，洗涤步骤将出现在42℃的15mM NaCl、1.5mM柠檬酸三钠和0.1％SDS中。在更优选的实施方式中，洗涤步骤将出现在68℃的15mM NaCl、1.5mM柠檬酸三钠和0.1％SDS中。对这些条件的额外改变对于该领域技术人员是显而易见的。杂交技术是该领域技术人员所周知的，且揭示在例如Bentonand Davis(Science 196:180,1977)；Grunstein and Hogness(Proc.Natl.Acad.Sci.,USA72:3961,1975)；Ausubel et al.(Current Protocols in Molecular Biology,WileyInterscience,New York,2001)；Berger and Kimmel(Guide to Molecular CloningTechniques,1987,Academic Press,New York)；以及Sambrook et al.,MolecularCloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,New York中。

“基本相同”意为多肽或核酸分子表现出与参考氨基酸序列(例如，任何一种本文所述的氨基酸序列)或核酸序列(例如，任何一种本文所述的核酸序列)的至少50％一致性。优选的，此序列在氨基酸水平或核酸水平上与用于比较的序列的一致性为至少60％，更优选80％或85％，且更优选90％、95％或甚至99％。

通常使用序列分析软件(例如，威斯康星大学生物技术中心的遗传学计算机公司(Genetics Computer Group,University of Wisconsin Biotechnology Center,1710University Avenue,Madison,Wis.53705)的序列分析软件包BLAST、BESTFIT、GAP、或PILEUP/PRETTYBOX程序)测量序列一致性。该软件通过设定多种替换、删除、及/或其它修饰的同源性程度来匹配一致或相似的序列。保守替换典型包括下述各组的组内替换：甘氨酸、丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸；天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺；丝氨酸、苏氨酸；赖氨酸、精氨酸；以及苯丙氨酸、酪氨酸。在例示性的测定一致性程度的途径中，可使用BLAST程序，其中介于e

“受试者”意为哺乳动物，包括但不限于人类和非人哺乳动物，诸如牛、马、犬、羊或猫科动物。

“转基因”意为被人工插入细胞内并变为从该细胞发展而来的有机体基因组的一部分。此类转基因可包括与转基因有机体部分上或整体上异源(即，异质)的基因，或可表示与该有机体的内源基因同源的基因。

本文中提供的范围理解为该范围内所有值的略写。例如，1至50的范围理解为包括来自由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50所组成的组的任意数字、数字组合或子范围。

如本文中所用，“治疗”等指的是减轻或缓解与其相关的病变和/或症状。应知晓，尽管未排除，但治疗病症或症状并不需要完全消除与该病症或症状相关的病症、症状或症候。

除非明确指出或从语境中明显可见，否则如本文中所用，术语“或”理解为包含的。除非明确指出或从语境中明显可见，否则如本文中所用，术语“一”和“该”理解为单数或复数。

除非明确指出或从语境中明显可见，否则本文中使用的术语“约”理解为处于该领域正常公差范围内，例如，处于均值的2标准偏差内。“约”可理解为处于所指出值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％内。除非从语境中明确排除，否则本文中提供的所有数值均以术语“约”修饰。

本文中，对任何变量定义中一系列化学基团的描述包括该变量作为任何单一基团或作为所列基团的组合的定义。对本文中变量或方面的实施方案的描述包括该实施方案作为任何单一输送方案或作为与任何其它实施方案或其部分的组合。

本文中提供的任何组合物或方法可与本文中提供的一种或多种任何其它组合物和方法组合。

除非另做定义，否则本文中使用的所有科技术语均具有与该方法和物质组合物所属领域技术人员所一般理解的相同的意义。尽管与本文所述者类似或等效的方法和材料可用于实践或测试该方法和物质组合物，但适当的方法和材料揭示如下。此外，材料、方法和实施例仅做例示性说明之用，而非试图限制。本文中提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献通过引用而以其整体并入本文。

附图说明

图1显示使用AAV9-PHP.B CMV-GFP转导的感觉毛细胞。左图为使用AAV9-PHP.BCMV-GFP转导并使用鬼笔环肽红染色的感觉毛细胞图像。右图为使用AAV9-PHP.B CMV-GFP转导的感觉毛细胞图像，显示100％的内毛细胞吸收该载体并且对于绿色荧光蛋白(GFP)是阳性的。

图2为来自不同小鼠和注射的使用AAV9-PHP.B CMV-GFP转导的感觉毛细胞图像。100％的内毛细胞和100％的外毛细胞被转导并且是GFP阳性的。非常少的其它细胞表达GFP。我们注射了四只小鼠的内耳。四只小鼠中的三只显示类似于下文所述的表达，其100％的感觉毛细胞被转导。第四只显示在图1中。

图3显示来自不同小鼠的高倍放大图。在这种情况下，使用Myo7a将组织染色以照亮毛细胞的细胞体(蓝)，并使用鬼笔环肽将该纤毛束染色(红)。上图显示全部三种颜色通道的合并。中图显示具有100％的被转导内毛细胞和100％的被转导外毛细胞的GFP(绿)表达。下同显示Myo7a和鬼笔环肽。

图4为内耳的例示，其显示用以转导小鼠的注射位点。“P0-P4”和“>P5”分别指在后听力阶段P0至P4注射和在晚于阶段P5的后听力阶段注射。

图5A至5D比较Anc80-Cmv-eGFP的椭圆囊注射和圆窗膜(RWM)注射。图5A为在P1经椭圆囊注射使用AAV2/Anc80L65-GFP转导的耳蜗顶点的共焦图像。图5B为在P1经RWM注射使用AAV2/Anc80L65-GFP转导的耳蜗顶点的共焦图像。图5A的比例尺应用于图5B，并且表示0.2μm。图5C为来自在P1经椭圆囊注射和RWM注射使用Anc80-GFP转导的耳蜗的顶点区(最上行)、中部区(中间行)和基底区(最下行)的一系列高倍放大(630x)共焦图像。最上行中显示的比例尺表示20μm。图5D为来自椭圆囊注射(左)和RWM注射(右)后的图像区段的eGFP阳性内毛细胞(IHC)和外毛细胞(OHC)百分比的图解比较。

图6A至图6D比较PHP.B-Cmv-eGFP的椭圆囊注射和RWM注射。图6A为在P1使用在洛桑联邦理工学院(

图7A至图7C比较使用PHP.B和Anc80以相同滴度(3.5E+12病毒基因组/mL)转导毛细胞的效率。图7A为使用PHP.B腺相关病毒载体(AAV)进行椭圆囊注射后的耳蜗顶点的共焦图像。比例尺应用于图7A和图7B，并且表示0.2μm。图7B为使用Anc80 AAV进行椭圆囊注射后的耳蜗顶点的共焦图像。图7C为使用PHP.B AAV(左)和Anc80 AAV(右)进行椭圆囊注射后的eGFP阳性内毛细胞(IHC)和外毛细胞(OHC)百分比的图解比较。

图8A和图8B显示，AAV9.PHP.B具有比Anc80高的特异性。图8A为在P1经由椭圆囊注射Anc80-Cmv-eGFP-WPRE并在P15收获的小鼠耳蜗的一系列共焦图像。图8A的比例尺应用于图8B，并且表示100μm。图8B为在P1经由椭圆囊注射PHP.B-Cmv-eGFP并在P15收获的小鼠耳蜗的一系列共焦图像。

图9A和图9B例示，PHP.B-Cmv-eGFP以出生后阶段和成熟阶段的内耳毛细胞为靶标。图9A为在P7和P16使用PHP.B-GFP进行椭圆囊注射后耳蜗的顶点区、中部区和基底区的一系列100μm共焦图像(63x)。存在于图9A最上行图像中的比例尺应用至图9A中的全部图像并且表示20μm。图9B为从图9A的图像计数的eGFP阳性内毛细胞和外毛细胞百分比的图解比较。

图10A至图10C例示，野生型小鼠体内的毛细胞转导没有受到在P1注射AAV9-Php.b-CMV-GFP的影响。图10A为例示被纤毛束的机械位移引起的感觉转导电流的代表性电流家族的一系列图，分别来自P7的GFP阳性外毛细胞(左图)、P7的GFP阳性内毛细胞(中图)和P29的GFP阳性内毛细胞(右图)。图10B为来自GFP阴性细胞和GFP阳性细胞的P7外毛细胞(OHC)的转导电流的电流-位移图。图10C为显示来自GFP阳性细胞的峰值转导电流的图，其幅度类似于WT细胞(Landegger et al.,Nat.Biotech,2017)。

图11A至图11C例示，听觉脑干记录(ABR)阈值和畸变产物耳声发射(DPOAE)阈值没有受到在P1、P7和P16注射PHP.B-Cmv-eGFP的影响。图11显示几组图，例示对未注射的WT小鼠(黑色虚线)和在P1(图11A)、P7(图11B)或P16(图11C)注射Anc80-Cmv-eGFP(浅灰色)或AAV9-Php.b-Cmv-eGFP(深灰色)后的小鼠在约P30测量的ABR阈值和DPOAE阈值。图12A和图12B例示，与Anc80-Cmv-eGFP相比，在P1、P7和P16注射的PHP.B-Cmv-eGFP在前庭毛细胞内具有更高的转导率。图8A为在P1、P7和P16经椭圆囊注射PHP.B-Cmv-eGFP(上面一行)和Anc80-Cmv-eGFP(下面一行)后的椭圆囊以及水平嵴和前嵴的一系列共焦图像。图8B为在P1、P7和P16经椭圆囊注射PHP.B-Cmv-eGFP(上面一行)和Anc80-Cmv-eGFP(下面一行)后的球囊的一系列共焦图像。图8A的比例尺应用于全部图像，并且表示100μm。

图13为一系列图像，比较在P1、P7和P16经椭圆囊注射PHP.B-Cmv-eGFP(上面一行)和Anc80-Cmv-eGFP(下面一行)后的前庭转导。第一组的比例尺应用于全部图像，并且表示100μm。

图14为一系列共焦图像，例示经由椭圆囊注射驱动eGFP表达的载体的小鼠的前庭冷冻切片。第一组的比例尺应用于全部图像，并且表示200μm。

图15为在P1经椭圆囊注射PHP.B-Syn-eGFP的C57小鼠的耳蜗冷冻切片(最上行，比例尺表示100μm)、前庭冷冻切片(中间行，比例尺表示200μm)和全封固解剖物(最下行，比例尺表示100μm)的一系列共焦图像。

图16A和图16B显示，AAV9-PHP.B-Cmv-TMC1恢复了TMC1突变小鼠的听觉功能。图16A为例示听觉脑干反应(ABR)阈值优于AAV1-CMV-TMC1或Anc80-CMV-TMC1的听觉脑干反应阈值的图。单道(无误差条)为使用PHP.B-CMV-TMC1转导，并且具有类似于野生型(WT)的阈值。图16B为例示五只注射AAV9-PHP.B-Cmv-Tmc1的小鼠的畸变产物耳声发射(DPOAE)阈值的图。

图17A至图17D例示不同启动子驱动转基因在内耳中表达的能力。图17A为一系列共焦图像，例示Pcdh15启动子驱动在内毛细胞和外毛细胞内的转基因表达的能力。图17B为共焦图像，表明Myo6启动子驱动在内毛细胞和外毛细胞内的转基因表达的能力。图17C为显示Myo7a启动子驱动在内毛细胞和外毛细胞内的转基因表达的能力的图像。图17D为一系列共焦图像，显示KCNQ4启动子特异性地驱动在外毛细胞内的转基因表达的能力。

具体实施方式

本发明提供将包括听力和/或前庭功能在内的机械感受所需的蛋白质(例如，MC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C(例如，harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c)、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4和FAM65B)递送至受试者的内耳细胞诸如耳蜗细胞(例如，内毛细胞或外毛细胞)并令其在该细胞内表达的组合物和方法，其中该受试者体内的该蛋白质活性水平有所损失或下降。

本发明至少部分地基于下述发现：腺相关病毒载体AAV-PHP.B，其编码包含7-mer序列TLAVPFK的衣壳，对于在内耳的内毛细胞和外毛细胞中表达所关注蛋白质是极有效且特异性的。

AAV-PHP.B

使用Cre重组依赖途径来选择性地恢复转导预定义的Cre表达靶标细胞群体的衣壳(也称为CREATE)，从而生成AAV-PHP.B载体。可用于本发明方法中的这一途径和载体由Deverman等人在题为“Cre-dependent selection yields AAV variants for widespreadgene transfer to the adult brain”的Nat Biotechnol.2016 February；34(2):204–209中以及美国专利公布号20170166926中有所描述，其各自通过引用而以其整体并入本文。通过将7个氨基酸的随机序列(7-mer)插入到AAV9衣壳的AA588至589之间(VP1位置)，生成AAV变体库。AAV-PHP.B编码7-mer序列TLAVPFK，并测试其能否将有效地转基因递送至耳蜗，若它显示明显的特异性以及在内毛细胞和外毛细胞中的稳健表达，则为有效的递送。

乌谢尔综合征(Usher Syndrome)

人类乌谢尔综合征(USH)是导致又聋又盲的罕见基因状况。作为常染色体隐性性状遗传，其在美国影响16,000至20,000人，且是3％至6％的儿童早期耳聋的原因。根据症状的严重性，乌谢尔综合征分为三个临床亚型(USH-1、USH-2和USH-3)。USH1是最严重的形式。受USH1影响的患者苦于先天性双侧深感神经性听力损失、前庭反射消失和青春期前色素性视网膜炎(视网膜视杆视锥细胞功能的进行性的、双侧的、对称性的退化)。除非配备人工耳蜗，否则个体通常无法发育出说话的能力。尽管目前尚无针对乌谢尔综合征患者的生物学治疗手段，但早期重新引入有缺陷基因的野生型形式可能使疾病逆转。

6个Usher基因与USH1有关：MYO7A(myosin 7a)、USH1C(harmonin)、CDH23(钙粘蛋白23)、PCDH15(原钙粘蛋白15)、SANS(sans)和CIB2(钙整合素结合蛋白2)。这些基因编码内耳中纤毛束形态发生所牵涉的且作为相互作用组的一部分的蛋白质(见，例如，Mathur&Yang,2015,Biochim.Biophys.Acta,1852:406-20)。Harmonin停留在USH1相互作用组的中心，在该处，其结合至其它Usher 1蛋白。因为它的PDZ(PSD-59 95/Dlg/ZO-1)相互作用域，harmonin已经被提出发挥支架蛋白的功能。体外结合研究已经显示，和两种USH2蛋白即usherin和VLGR1一样，所有其它已知的USH1蛋白均结合至harmonin的PDZ域。USH1C基因由28个外显子组成，其编码10个交替剪接形式的harmonin，并依据蛋白质的域组成而分为三个不同的子类(a、b和c)。三种异形体的区别在于PDZ蛋白质-蛋白质相互作用域、卷曲螺旋(CC)域、和富含脯氨酸-丝氨酸-苏氨酸(PST)的域的数目。

USH1蛋白质也定位在毛细胞顶部的机械感觉纤毛束中，该纤毛束由数百个通过大量细胞外链接而互相连接的静纤毛构成。钙粘蛋白23和原钙粘蛋白15分别是Usher基因为USH1D和USH1E的产物，形成位于静纤毛远端的尖端链接。Harmonin-b结合至CDH23、PCDH15、F-肌动蛋白和它本身。其可见于接近毛细胞内尖端链接插入点的静纤毛的尖端，且被认为在毛细胞的转导和适应中扮演功能性角色。Harmonin-b在出生后早期阶段被表达，但其在耳蜗和前庭两者中的表达在出生后30天(P30)左右减少。Harmonin-a也结合至钙粘蛋白23，且见于静纤毛中。近期的报导透露了harmonin-a在突触处的额外角色，在该处，harmonin-a与Cav1.3 Ca

在过去10年间，已经认定并工程化了若干种用于乌谢尔综合征的小鼠模型，其中的7种影响harmonin。这些模型中，仅一种即Ush1c c.216G>A模型再次产生了作为人类乌谢尔综合征特征的听觉缺陷和视网膜缺陷。Ush1c c.216G>A是敲入小鼠模型，由于点突变类似于在French-Acadian USH1C患者队列中所见者，该模型影响所有传统harmonin异形体的表达。该突变引入了位于Ush1c基因的外显子3末端的隐蔽剪接位点。使用这一隐蔽剪接位点产生了具有35bp删除的框移转录物，并导致缺乏PDZ域、PST域和CC域的严重截短的蛋白质的转译。纯合c.216AA敲入小鼠在1月龄时苦于严重的听力损失，而杂合c.216GA小鼠不存在任何异常的表型。c.216AA小鼠的耳蜗组织学显示，在P30的中回和基底回中的纤毛束紊乱、异常细胞行、以及内毛细胞和外毛细胞两者的损失。

本文表明，AAV9-PHP.B载体成功地转导毛细胞并驱动所关注的蛋白质(即，GFP)在毛细胞内的表达。据此，这一载体可用来将所关注的其它蛋白质递送至毛细胞，用于治疗乌谢尔综合征以及其它听觉障碍。

TMC1/TMC2

在造成耳聋的TMC1中已经鉴别出超过40种截然不同的突变。它们被分为35种隐性突变和5种显性突变。大多数隐性突变造成严重的先天性听力损失(例如，DFNB7/11)，但一些也造成迟发性的中度至重度听力损失。所有显性突变均造成进行性听力损失(例如，DFNA36)，并且在青少年时期的中段发作。特别地，可使用如本文所述的AAV9-PHP.B载体递送非突变(例如，野生型)TMC1序列或TMC2序列，从而预防听力损失(例如，进一步的听力损失)和/或恢复听力功能。

用于治疗听力损失的治疗性策略

由于成年哺乳动物耳蜗的感觉细胞缺乏自我修正的能力，当前的治疗性策略(取决于损伤的水平和确切位置)依靠放大(助听器)、更好的声音传播(中耳假体/活性移植物)、或直接的神经刺激(人工耳蜗)来补偿原代感觉毛细胞或螺旋神经节神经元的永久性损害，这些细胞形成听觉神经且将声学信息传达至脑部。尽管这些途径已经是变革性的，但它们在复原对于现代生活非常重要的复杂的人类听力功能来说仍远非最优。具体而言，主要问题仍包括频率选择度有限、声音听起来不正常、以及在嘈杂环境中语音识别受限。

转移至耳蜗的治疗性基因已经被视为相对于当前从老年性和环境诱发的听力损失到遗传形式的耳聋范围内的护理标准而进一步改善。超过300个基因座已经被关联至遗传性听力损失，且对超过70个致病基因有所描述(Parker&Bitner-Glindzicz,2015,Arch.Dis.Childhood,100:271-8)。这些途径在治疗上的成功显著依赖于将外源基因构造体安全有效地递送至耳蜗中Corti氏器官中的治疗性细胞靶点。

Corti氏器官包括两类感觉毛细胞：内毛细胞，其将声音所携带的机械信息转变为传播至神经元结构的电信号；和外毛细胞，其用来放大并调谐耳蜗反应，这是复杂听力功能所需的过程。内耳中的其它潜在靶点包括螺旋神经节神经元、螺旋缘的柱状细胞，这些细胞对于维持相邻的盖膜或支持细胞来说是重要的，这些细胞具有保护功能且可被触发以转-分化为毛细胞直到新生儿早期阶段为止。

对充满高钾内淋巴液的耳蜗管进行注射，可提供对毛细胞的直接抵达。但是，这一微妙液体环境的改变可扰乱耳蜗内电位，提高了注射相关毒性的风险。环绕耳蜗管、鼓阶和前庭阶的充满外淋巴的空间，可从中耳抵达，或通过卵圆窗膜圆窗膜抵达。圆窗膜是进入内耳的唯一非骨性开口，在多种动物模型中可相对早的抵达，且使用这一路径进行的病毒载体给药耐受良好。在人体内，人工耳蜗的安放通常依赖于通过RWM插入手术电极。

先前在器官型耳蜗外植体以及体内的内耳注射中评估AAV表型的研究已经表明，仅在先天性耳聋小鼠模型中导致部分修复。出乎意料的是，AAV9-PHP.B载体以高效率转导毛细胞。这一发现克服了低转导速率，而该低转导速率限制了使用传统AAV血清型的耳蜗基因疗法的成功发展。如本文所述的AAV9-PHP.B载体提供了一种用于将内耳基因递送至内毛细胞和外毛细胞以及其它被遗传性听力和平衡障碍连累的内耳细胞类型阵列的有价值的平台。

AAV9-PHP.B载体提供了编码所关注蛋白质的核酸的高效递送。具体地，本发明提供AAV9-PHP.B载体，其包含下列启动子中的一者：Espin启动子、PCDH15启动子、PTPRQ启动子、Myo6启动子、KCNQ4启动子、Myo7a启动子、突触蛋白启动子、GFAP启动子、CMV启动子、CAG启动子、CBH启动子、CBA启动子、U6启动子和TMHS(LHFPL5)启动子。在具体实施方案中，启动子引导编码TMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C(例如，harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c)、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4和FAM65B中一者或多者的多核苷酸在细胞特别是内耳中例如耳蜗中的细胞(或耳蜗的细胞或耳蜗细胞)内的表达。如本文中所用，内耳细胞是指而非限于，内毛细胞(IHC)、外毛细胞(OHC)、螺旋神经节神经元、血管纹、前庭毛细胞、前庭神经节神经元、和支持细胞。支持细胞是指耳内的不兴奋的细胞，例如，除毛细胞或神经元以外的细胞。支持细胞的示例为许旺细胞(Schwann cell)。

将本文所述的一种或多种核酸递送至内耳细胞可用来治疗任何先天性或后天性听力障碍，这些听力障碍典型由部分听力损失或完全耳聋定义。本文所述的方法可用来治疗听力障碍，诸如而不限于，隐性耳聋、显性耳聋、乌谢尔综合征、和其它有症状的耳聋，以及由于创伤或老龄化造成的听力损失。

制作携带特异性转基因的病毒的方法

如本文所述，AAV-PHP.B在将核酸(例如，转基因，包括但不限于，编码TMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C(例如，harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c)中的一者或多者的多核苷酸)递送至内耳细胞中特别有效。AAV-PHP.B载体有利地转导超过约60％、70％、80％、90％、95％、或甚至100％的内毛细胞或外毛细胞。

在具体实施方案中，AAV-PHP.B载体具有天然的或经工程化的毛细胞趋向性。在一些实施方案中，AAV9-php.b将转基因(例如，编码TMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C(例如，harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c)、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4和FAM65B中的一者或多者的多核苷酸)递送至受试者的内耳。

在一个实施方案中，使用包含引导编码TMC1、TMC2、MYO7A、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C(例如，harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c)、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4和FAM65B中的一者或多者的多核苷酸表达的启动子(例如，Espin启动子、PCDH15启动子、PTPRQ启动子、Myo6启动子、KCNQ4启动子、Myo7a启动子、突触蛋白启动子、GFAP启动子、CMV启动子、CAG启动子、CBH启动子、CBA启动子、U6启动子和TMHS(LHFPL5)启动子)的AAV-PHP.B载体来治疗听力障碍。用于表达目的而被递送至细胞的核酸序列时常被称为转基因。可被递送至内耳细胞并在该细胞内表达的代表性转基因包括而不限于，编码在听觉和/或前庭机械感受中发挥功能的多肽(例如，TMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7(例如，harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c)、OTOF、GPR98、MYO6,、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4和FAM65B)的转基因、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、编码神经营养因子(例如，GDNV、BDNF或HSP70)的转基因。

转基因的表达可由该转基因的天然启动子(即，使用该转基因编码序列天然地发现的启动子)引导，或者转基因的表达可由杂合启动子(例如，Espin启动子、PCDH15启动子、PTPRQ启动子、Myo6启动子、KCNQ4启动子、Myo7a启动子、突触蛋白启动子、GFAP启动子、CMV启动子、CAG启动子、CBH启动子、CBA启动子、U6启动子和TMHS(LHFPL5)启动子)引导。例如，本文所述的任何转基因可与其天然启动子合用。或者，本文所述的任何转基因可与异种启动子合用。如本文中所用，异种启动子是指并非天然地引导该序列表达(即，未天然见于该序列中)的启动子。可用以引导本文所指任何转基因的表达的代表性异种启动子包括，例如，CMV启动子、CBA启动子、CASI启动子、P启动子、EF-1启动子、alpha9烟碱受体启动子、prestin启动子、Gfi1启动子、和Vglut3启动子。此外，天然地引导上述转基因之一的表达的启动子(例如，KCNQ4启动子、Myo7a启动子、Myo6启动子、或Atoh1启动子)可用作异种启动子以引导转基因的表达。在其它实施方案中，启动子为Espin启动子、PCDH15启动子、PTPRQ启动子、Myo6启动子、KCNQ4启动子、Myo7a启动子、突触蛋白启动子、GFAP启动子、CMV启动子、CAG启动子、CBH启动子、CBA启动子、U6启动子或TMHS(LHFPL5)启动子。

制作用于封装在含有AAV-PHP.B载体内的转基因(例如，TMC1、TMC2、USH1C(例如，harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c)、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4)的方法是该领域中已知的，并使用传统分子生物学技术和重组核酸技术。

可使用例如封装宿主细胞而将转基因封装在含有AAV-PHP.B载体内。可使用一种或多种如本文所述的构造体将病毒颗粒的成分(例如，rep序列、cap序列、反向末端重复(ITR)序列)短暂地或稳定地引入封装宿主细胞内。

通常，如本文中所使用，“核酸”可包括DNA和RNA，且也可包括含有一种或多种核酸类似物或骨架修饰的核酸。核酸可以是单链的或双链的，一般取决于其用途。可用于本文所述方法的核酸可与已知核酸序列一致，或可用于本文所述方法的核酸可在序列上不同于已知序列。举例来说，核酸(或所编码的多肽)与已知序列的序列一致性可为至少75％(例如，至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列一致性)。

在计算序列一致性百分比时，将两个序列对齐，并确定两个序列的核苷酸或氨基酸残基之间一致匹配的数目。一致匹配的数目除以对齐区域的长度(即，对齐的核苷酸或氨基酸残基的数目)再乘以100即为序列一致性百分比的值。应知悉，对齐区域的长度可以是一个序列或两个序列的一部分至最短序列的全长度大小。也应知悉，单个序列可与超过一个其它序列对齐，并因此可具有在不同对齐区域内的不同序列一致性百分比的值。

使用计算机程序ClustalW和缺省参数实施用以确定序列一致性百分比的两个或多个序列的对齐，该程序允许在待实施核酸或多肽序列的整个长度上进行对齐(全局对齐)。Chenna et al.,2003,Nucleic Acids Res.,31(13):3497-500。ClustalW计算查询序列与一个或多个受试序列之间的最佳匹配，并将它们对齐，从而确定一致性、相似性和差异性。可将一个或多个残基的空位插入查询序列、受试序列或两者中，以最大化序列对齐。对于核苷酸序列的成对地对齐，使用缺省参数(即，字长：2；窗口长：4；评分方法：百分比；顶对角线数：4；空位罚分：5)；对于多个核酸序列的对齐，使用下列参数：空位开启罚分：10.0；空位延伸罚分：5.0；权重转移：是。对于多肽序列的成对地对齐，使用下列参数：字长：1；窗口长：5；评分方法：百分比；顶对角线数：5；空位罚分：3。对于多肽序列的多次对齐，使用下列参数：权重矩阵：BLOSUM(模块替换矩阵)；空位开启罚分：10.0；空位延伸罚分：0.05；亲水性空位：开；亲水性残基：Gly、Pro、Ser、Asn、Asp、Gln、Glu、Arg和Lys；以及，残基特异性空位罚分：开。例如，ClustalW可在互联网的贝勒医学院搜索载入器(Baylor College ofMedicine Search Launcher)网站上或在欧洲生物信息研究中心(EuropeanBioinformatics Institute)网站上运行。

可将改变引入核酸序列中，如果该核酸是编码序列，则可导致所编码的多肽的氨基酸序列的改变。例如，可使用诱变(例如，定点诱变、PCR介导的诱变)或通过化学合成具有此类改变的核酸分子而将改变引入核酸编码序列中。此类核酸改变可导致在一个或多个氨基酸残基处的保守的和/或非保守的氨基酸替换。“保守氨基酸替换”是将一个氨基酸残基替代为具有相似侧链的不同氨基酸残基的氨基酸替换(见，例如，Dayhoff et al.(1978，《蛋白质序列和结构图谱》(Atlas of Protein Sequence and Structure,5(Suppl.3):345-352))，其提供氨基酸替换的密码表)，而非保守替换是将一个氨基酸残基替代为不具有相似侧链的氨基酸残基。

核酸可包含在亦可称为载体或质粒的构造体中。构造体可商购，或可通过该领域的常规重组技术生产。含有核酸的构造体可具有引导和/或调节此核酸表达的表达元件，也可包括序列诸如用于维持该构造体的那些序列(例如，复制起点、可选择的标记物)。表达元件是该领域中已知的且包括，例如，启动子序列、内含子序列、增强子序列、反应元件、或诱导元件。

药物组合物

包含启动子(例如，Espin启动子、PCDH15启动子、PTPRQ启动子、Myo6启动子、KCNO4启动子、Myo7a启动子、突触蛋白启动子、GFAP启动子、CMV启动子、CAG启动子、CBH启动子、CBA启动子、U6启动子和TMHS(LHFPL5)启动子)以及多核苷酸(其为USH1、MYO7A、USH1C(harmonin-a、harmonin-b、harmonin-c)、CDH23、PCDH15、SANS和CIB2中的一种或多种)的AAV-PHP.B载体，通常悬浮在生理上相容的赋形剂中，可通过经由圆窗或椭圆囊注射入受试者(例如，人类或非人哺乳动物)内耳中而给药至该受试者。合适的载剂包括盐水，其可使用多种缓冲溶液(例如，磷酸盐缓冲盐水)、乳糖、蔗糖、磷酸钙、明胶、葡聚糖、琼脂、果胶和水配制。以足够的量给药AAV-PHP.B载体，以转导或感染该细胞并提供足够的基因转移水平和表达水平，从而提供治疗性有益效果而没有过度的副作用。

给药至受试者的AAV-PHP.B载体的剂量将主要取决于以下因素：诸如待治疗的病症以及该受试者的年龄、体重和健康状况。例如，待给药至人类受试者的AAV-PHP.B载体的治疗有效剂量通常在约0.1ml至10ml溶液的范围内，其中该溶液含有约1x10'至1x10

将核酸递送至内耳细胞的方法

将核酸递送至细胞的方法通常是该领域中已知的，而将含有转基因的病毒(其也被称为病毒颗粒)在体内递送至内耳细胞的方法在本文中描述。如本文所述，可将约10

可使用任何手段将如本文所述的含有启动子(Espin启动子、PCDH15启动子、PTPRQ启动子、Myo6启动子、KCNQ4启动子、Myo7a启动子、突触蛋白启动子、GFAP启动子、CMV启动子、CAG启动子、CBH启动子、CBA启动子、U6启动子和TMHS(LHFPL5)启动子)和转基因(例如，TMC1、TMC2、USH1C(例如，harmonin-a、harmonin-b或harmonin-c)、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4和FAM65B)的病毒递送至内耳细胞(例如，耳蜗中的细胞)。例如，可通过圆窗或卵圆窗或椭圆囊典型以相对简单(例如，门诊)的过程注射治疗有效量的包括含有一种或多种不同类型的本文所述转基因的病毒的组合物。在一些实施方案中，可在外科手术(例如，耳蜗造口术或耳道造口术)过程中，将如本文所述的包含治疗有效量的含有转基因的病毒颗粒或含有一组或多组不同病毒颗粒的组合物递送至耳部的适当位置，其中，一组病毒颗粒中的每个颗粒可含有相同类型的转基因，但各组颗粒含有与其它组不同类型的转基因。

在一些实施方案中，将包含启动子(例如，Espin启动子、PCDH15启动子、PTPRQ启动子、Myo6启动子、KCNO4启动子、Myo7a启动子、突触蛋白启动子、GFAP启动子、CMV启动子、CAG启动子、CBH启动子、CBA启动子、U6启动子或TMHS(LHFPL5)启动子)以及多核苷酸(其为USH1、MYO7A、USH1C(harmonin-a、harmonin-b、harmonin-c)、CDH23、PCDH15、SANS和CIB2中的一种或多种)的AAV-PHP.B载体通过圆窗或团圆囊注射至有此需要的受试者体内。

此外，促进将剂转移跨过鼓膜和/或通过圆窗或椭圆囊的递送媒介(例如，聚合物)是可获得的，且任何此类递送介质可用来递送本文所述的病毒。见，例如，Arnold et al.,2005,Audiol.Neurootol.,10:53-63。

本文所述的组合物和方法令将核酸高效递送至内耳细胞如耳蜗细胞成为可能。例如，本文所述的组合物和方法能够将转基因递送至并表达在至少80％(例如，至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)的内毛细胞中，或递送至并表达在至少80％(例如，至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)的外毛细胞中。

如本文所证明，使用AAV-PHP.B载体递送的转基因的表达可导致内毛细胞(IHC)、外毛细胞(OHC)、螺旋神经节神经元、血管纹、前庭毛细胞、和/或前庭神经节神经元(例如，Atoh1、NF2)的再生，使得听力或前庭功能得以长时间(例如，几个月、几年、几十年或余生)复原。

试剂盒

本发明也提供药物包装物或试剂盒，其包含一个或多个填充有本发明的药物组合物成分(例如，包含启动子(例如，CMV、Espin、PCDH15、PTPRQ、TMHS(LHFPL5))和多核苷酸的内耳毛细胞靶向的AAV(例如，KCNQ4载体)，其中该多核苷酸为USH1、MYO7A、USH1C(harmonin-a、harmonin-b、harmonin-c)、CDH23、PCDH15、SANS和CIB2中的一者或多者)中的一种或多种的容器。与此类容器关联的可以是由政府机构规定的调节药物或生物产品的制造、使用或规格形式的注意事项，该注意事项反映了该机构批准的用于人类给药的制造、使用或规格。

本发明也提供用于治疗或预防与听觉和/或前庭机械感受中的缺陷相关的疾病或其病变(或症状)。在一个实施方案中，试剂盒包括有效量的单位剂型的包含启动子(例如，Espin启动子、PCDH15启动子、PTPRQ启动子、Myo6启动子、KCNO4启动子、Myo7a启动子、突触蛋白启动子、GFAP启动子、CMV启动子、CAG启动子、CBH启动子、CBA启动子、U6启动子和TMHS(LHFPL5)启动子)以及多核苷酸(其为USH1、MYO7A、USH1C(harmonin-a、harmonin-b、harmonin-c)、CDH23、PCDH15、SANS和CIB2中的一种或多种)的AAV-PHP.B载体，以及将该AAV-PHP.B载体给药至罹患或易患与听力障碍相关的疾病或病变或其症状的受试者的使用说明书。在优选的实施方案中，该试剂盒包含容纳AAV-PHP.B载体的无菌容器；此类容器可为盒、安瓿、瓶、小瓶、管、袋、包、或其它该领域中已知的适合的容器形式。此类容器可由塑料、玻璃、层压纸、金属箔或其它适用于容纳药物的材料制作。使用说明书通常将会包括关于AAV-PHP.B载体用于治疗与听力障碍相关的疾病或病变或其症状的用途的信息。使用说明书可直接印在容器(当存在时)上，或作为用于该容器的标签，或作为独立的页、册、卡或折叠式印刷品提供在给容器内或与该容器一起提供。

可根据本公开使用该领域中熟悉的传统分子生物学、微生物学、生物化学和重组DNA技术。此类技术在文献中完整地诠释。在下述实施例中将进一步描述本发明，这些实施例并不限制权利要求书中描述的方法和物质组合物的范畴。

[实施例]

实施例1：AAV-PHP.B载体引导外毛细胞和内毛细胞中的转基因表达

体内注射

使用坡口玻璃显微注射穿刺针经由圆窗膜对幼鼠(P0至P2)注射AAV-PHP.B载体CMV GF。在P-2000穿刺针拉制仪(Sutter Instruments,Novato,CA)上从毛细玻璃管(WPI)拉出穿刺针，并使用微穿刺针坡口机(Sutter Instrument,Novato,CA)切出坡口(～20μm尖端直径，28°角)。使用无菌拭子在外部施加用于镇痛的EMLA乳霜(2.5％利多卡因和2.5％丙胺卡因)，以覆盖手术部位(左侧乳突状突出)。手术前，在38℃取暖垫上维持体温。通过将幼鼠在冰/水中快速降低体温2至3分钟而麻醉直至失去意识为止，并在手术过程中在冷却平台上将这一状态维持5至10分钟。使用碘伏(Betadine)刷洗并使用70％乙醇擦拭，重复三次，将手术部位消毒。作出耳后切口以暴露透明的耳泡，手动操纵微穿刺针前行通过耳泡和上覆筋膜，并借由微穿刺针的尖端穿透RWM。在1分钟内，手动将大约1μL的病毒单侧注射入C57BL/6动物的左耳内。注射后，使用6-0黑色单丝缝线(Surgical Specialties,Wyomissing,PA)闭合皮肤切口。然后将幼鼠送回38℃取暖垫上，放置5至10分钟，随后放回其母亲处饲养。

AAV-PHP.B载体以高特异性转导了接近100％的IHC和100％的OHC(图1至图3)，即，非常少的非毛细胞被转导。

接着，将经AAV-PHP.B CMV GFP载体转导的样本固定，用鬼笔环肽或Myo7染色，并且通过共焦显微镜成像。外毛细胞和内毛细胞靶向例示了有效的转导。

实施例2：毛细胞电生理学

在使用包含编码所关注基因的转基因的AAV-PHP.B载体转导之后，分析毛细胞的电生理学。切除耳蜗，将其封固在盖玻片上，并使用配备63x水浸物镜和微分干涉相称光学系统的Axio Examiner.A1直立式显微镜(Carl Zeiss,Oberkochen,Germany)观察。在室温(22℃至24℃)下，在含有下列(以mM计)的标准溶液中实施电生理记录：137NaCl、5.8KCl、10HEPES、0.7NaH

实施例3：听力测试

在具有遗传性听觉缺陷的小鼠体内转导之后，也评估了听力。收集听性脑干反应(ABR)和畸变产物耳声发射(DPOAE)数据。DPOAE是进行适宜耳蜗放大和调谐的试验，且是外毛细胞生存能力的灵敏测量方法。在被麻醉小鼠体内测试的刺激以5.6、8、11.3、16、22.6和32kHz的频率在10至90dB声压级之间变动。绘出了引起ABR所需的最小声音阈值。

实施例4：转棒测试

在转棒装置上测试小鼠的平衡行为。已知前庭功能受损的小鼠极难完成转棒测试。先前的研究突出了这一转棒测试检测当一只耳朵受影响时的平衡功能障碍的能力。在P1注射的小鼠在P36测试，而未注射的对照小鼠在P79测试。使用下述转棒方案测试所有小鼠。第一天，在以四RPM转动的转棒上对小鼠进行五分钟的平衡训练。第二天，对小鼠进行五次试验，每两次试验之间间隔五分钟。对于每次试验，棒的转速均从最初的2RPM速率增加1RPM。记录到小鼠从装置上摔落为止的时间(秒)。

由于耳蜗的外淋巴液与前庭迷路的外淋巴液是连续的，评估经由耳蜗RWM注射的表达所关注蛋白质的AAV-PHP.B载体是否会转导前庭感觉器官。因此，为了解决AAV-PHP.B载体转导可能影响平衡性的安全问题，对前庭表达已经得以证实的经注射小鼠实施相对于未注射的对照小鼠的前庭功能转棒测试。

实施例5：Usher综合征的小鼠模型

组织制备

在出生后0至8天(P0至P8)，从Ush1c c.216G>A杂合或纯合突变小鼠采集椭圆囊和Corti氏器官进行电生理学研究。通过快速斩首杀死出生后的幼鼠。切除颞骨并将其浸泡在以10mM HEPES(pH 7.4)补充的MEM(Invitrogen,Carlsbad,CA)中。如先前所述，不使用酶而切掉Corti氏器官(53)。在以0.1mg/ml的蛋白酶(蛋白酶XXIV，西格玛公司(Sigma))处理10分钟后，移除椭圆囊。将切除的器官封固在圆形盖玻片上。将事先用胶水粘在该盖玻片上的一对薄玻璃纤维置于组织边缘上以将其稳定在平坦位置。组织很快被使用，或在1％胎牛血清的存在下保存在培养物中。将培养物维持7至8天，每2至3天更换培养基一次，以便进行牵涉体外病毒载体感染的实验。

动物

从路易斯安那州立大学健康科学中心获得Ush1c c.216G>A敲入小鼠。事先将在C57BL6背景上引入的种系培育出造成老年性听力损失的Cdh23(Ahl)突变(48、49)。如先前所述，使用趾夹(P8之前)或耳标(P8之后)将小鼠基因分型，并实施PCR(32)。对于全部研究，均大约以相等的比例使用雄性和雌性小鼠。没有另外应用的随机范式。

圆窗膜(RWM)注射

生成在所选择的启动子下表达所关注基因的AAV-PHP.B载体。将0.8μl至1μl的AAV载体注射到P0至P1和P10至P12的新生小鼠体内。首先使用低温暴露来麻醉P0至P1小鼠，而P10至P12小鼠使用异氟烷麻醉。麻醉后，作出耳廓后切口以暴露鼓泡并令耳蜗可见。使用由显微操控器控制的玻璃微穿刺针通过RWM进行注射(Askew et al.2015)。将所注射材料的体积控制为大约0.02μl/min，注射10min。应用标准术后护理。在持续的基础上确定用于体内研究的样本尺寸，以优化该样本尺寸并降低方差。

电生理学记录

在含有下列(以mM计)的标准人工外淋巴液中实施记录：144NaCl、0.7NaH

实施例6：听觉吃惊反应

使用吃惊监控器(Kinder Scientific)测量听觉吃惊反应(ASR)。将小鼠放置在固定在压电/有机玻璃感应组件上的小尺寸的、非限制性的、立方有机玻璃记录室(27cm×10cm×652 12.5cm)内，并令其在60dB SPL背景白噪声下适应5分钟。每个环节由35次试验组成，在此期间，递送强度为60至120db SPL的10dB SPL范围内的单个噪声脉冲，每次试验间隔平均为30秒(25至35秒范围)。脉冲以伪随机顺序布置，背景噪声为恒定的60dB SPL，以限制外部噪声干扰。吃惊监控系统将对每一脉冲的反应还原为第一N、max N和反应的最大时间(ms)，以便计算峰值吃惊反应(ASR幅度)以及从刺激到峰值吃惊反应的时间(ASR延迟)。ASR全部为盲测。

为了评估ABR/DPOAE恢复是否导致行为上相关的听觉功能恢复，测量了单独注射AAV-PHP.B载体并且表达所关注蛋白质的小鼠和注射两种载体的小鼠的声学吃惊反应。通过对白噪声的吃惊反应分析评估6周龄小鼠的反应修复。

实施例7：免疫荧光

实施免疫染色来确定通过AAV-PHP.B载体递送的转基因的表达分布。为了做到这一点，对新鲜切除并在室温使用稀释于PBS中的4％多聚甲醛浸没固定1h的Corti氏器官实施免疫染色。随后将该组织在PBS中冲洗，在0.01％至0.1％Triton X-100中透化处理30分钟，使用AlexaFluor546-鬼笔环肽(Molecular Probes，1:200稀释)复染1h以标记丝状肌动蛋白。

对于外源性表达的TMC::FLAG融合蛋白的定位，使用2％BSA和5％正常山羊血清将该组织封闭1小时，使用FLAG基序抗体(BD Biosciences，1:200稀释)在4℃温育过夜。对于毛细胞计数，将组织在正常山羊血清中封闭1小时，使用兔抗-Myosin VIIa一级抗体(Proteus Biosciences，1:1000稀释)在4℃染色过夜，并使用偶联到AlexaFluor488的山羊抗兔抗体(Life Technologies，1:200稀释)标记1h。使用Vectashield封固剂(VectorLaboratories)将样品封固在盖玻片上，并使用Zeiss LSM700共聚焦显微镜以10X至63X放大成像。

实施例8：椭圆囊注射

研发新颖的注射方法以将治疗性载体递送至内耳。现有的注射方法通过圆窗膜、卵圆窗或后半规管递送载体。这些方法尽管有一定的效果，但全部存在明显的退步，包括手术难以抵达靶标、病毒分布不均匀、以及靶向外淋巴隙或内淋巴隙中的显著差异。为了规避这些局限性，涉及了允许有效递送至内耳空间而不造成听觉或前庭功能障碍的新颖方法。

这一方法包括以前庭器官之一的椭圆囊为靶向进行注射。注射进入内淋巴隙内。基于小鼠的年龄，使用两种不同的途径递送。如下文例示，在P0和P5之间，椭圆囊接近外骨半规管和后半规管之间。在晚于P5的阶段，在圆窗和卵圆窗之间注射椭圆囊(图4)。因为填充椭圆窗空间的流体与其它前庭器官和耳蜗是连续的，所以观察到了病毒在整个内耳中明显改善的分布。

为了将这一新方法与现有注射入圆窗膜(RWM)的方法比较，对P1小鼠在椭圆囊内或RWM内注射AAV2-Anc80L65-GFP。在4周龄时收获颞骨进行成像。使用抗肌球蛋白VIIa抗体将毛细胞染色。参照图5A和图5B，检测分别接受椭圆囊注射和RWM注射的小鼠耳蜗顶点内的表达。耳蜗的顶点、中部和基底区域的高分辨率图像显示，椭圆囊注射给药的小鼠体内的GFP表达与接受RWM注射的小鼠想不有所提升(图5C和图5D)。

为了确定PHB.B-Cmv-eGFP是否有效且特异性地地经由椭圆囊或RWM注射转导小鼠，在P1经椭圆囊或RWM对小鼠注射AAV9.PHP.B-Cmv-eGFP。参考图6A和图6B，小鼠在P1分别接受椭圆囊注射在洛桑联邦理工学院(

AAV9-PHP.B载体对小鼠的转导率高于Anc80载体。

在P1对小鼠经椭圆囊注射AAV9.PHP.B-Cmv-eGFP或AAV-Anc80-Cmv-eGFP。在P14收获颞骨，观察到了在耳蜗内(图7A和图7B)以及耳蜗的顶点、中部和基底区域内(图7C)，PHP.B的转导率相对于Anc80有所增加，其通过荧光检测而确定。

为了确定PHP.B是否具有高于Anc80的特异性，对P1小鼠经椭圆囊注射给药Anc80-Cmv-eGFP-EPRE或PHP.B-Cmv-eGFP。在P15收获小鼠的耳蜗，并制备横截面。参考图8A和图8B，观察到PHP.B的特异性增加，其通过在下中图中观察到的绿色荧光指示。

为了确定PHP.B-Cmv-eGFP以哪个发育阶段的内毛细胞和外毛细胞为靶标，在P7和P16对小鼠经椭圆囊注射给药PHP.B载体。参考图9A，相对于在P16接受注射的小鼠，在P7接受注射的小鼠体内观察到了增加的eGFP阳性细胞。然而，PHP.B-Cmv-eGFP以产后和成熟两个阶段的内耳毛细胞为靶标(图9B)。

在野生型小鼠体内，评估了AAV9-PHP.B-Cmv-GFP注射对于毛细胞转导的效果。在P1对小鼠经椭圆囊注射给药该载体。图10A例示，来自GFP阳性细胞的由纤毛束的机械位移引起的感觉转导电流的代表性电流家族。图10B显示，在P7 GFP阳性和GFP阴性外毛细胞之间不存在敏感性的差异。此前，没有观察到GFP阳性和GFP阴性的内毛细胞和外毛细胞的电流幅度之间的差异(图10C)。

评估了听性脑干记录(ABR)和畸变产物耳声发射(DPOAE)阈值。图11A示出所观察到的在P28至P31测试的四只未注射C57小鼠的ABR和DPOAE阈值(黑色虚线)、在P1经椭圆囊注射给药Anc80-eGFP并在P30测试的四只C57小鼠的ABR和DPOAE阈值(浅灰色)、以及在P1经椭圆囊注射给药由BCH制备的AAV9.PHP.B-Cmv-eGFP并在P29测试的四只C57小鼠的ABR和DPOAE阈值(深灰色)。参考图11B，观察下列小鼠的ABR阈值(左)和DPOAE阈值(右)：在P28至P31测试的四只未注射C57小鼠(黑色虚线)、在P7经椭圆囊注射给药Anc80-eGFP并在P30测试的四只C57小鼠(浅灰色)、以及在P7经椭圆囊注射给药PHP.B-eGFP(EPFL)并在P27至P28测试的九只C57小鼠(深灰色)。参考图11C，也观察下列小鼠的ABR阈值(左)和DPOAE阈值(右)：在P28至P31测试的四只未注射C57小鼠(黑色虚线)、在P16经椭圆囊注射给药Anc80-eGFP并在P31测试的四只C57小鼠(浅灰色)、以及在P16经椭圆囊注射给药PHP.B-eGFP(EPFL)并在P28测试的四只C57小鼠(深灰色)。总体来看，这些数据表明，ABR阈值和DPOAE阈值并未受到在P1、P7或P16注射AAV9.PHP.B-Cmv-eGFP的影响。

比较了注射时机对于PHP.B和Anc80转导的效果。在P1、P7和P16对小鼠经椭圆囊注射AAV9.PHP.B-Cmv-eGFP或Anc80-Cmv-eGFP。参考图12A和图12B，PHP.B-Cmv-eGFP在椭圆囊和球囊中的转导率分别高于使用Anc80构造体获得的转导率。与接受Anc80-Cmv-eGFP的小鼠相比，接受PHP.B-Cmv-eGFP的小鼠的后半规管毛细胞的eGFP表达在质量上也更为稳健和特异(图13)。

评估了由不同实体制备的病毒载体。在P1对C57小鼠经椭圆囊注射Anc80-Cmv-eGFP、在BCH制备的PHP.B-Cmv-eGFP、或在EPFL制备的PHP.B-Cmv-eGFP。在P15收获组织。参考图14，PHP.B-Cmv-eGFP(尤其是在BCH制备的载体)在前庭毛细胞中具有高于Anc80载体的转导率。

实施例9：神经元转导

为了确定耳蜗和前庭神经元能否被有效转导，将AAV9-PHP.B改性为包含突触蛋白启动子。在P1对C57小鼠给药椭圆囊注射的PHP.B-Syn-eGFP。在P15收获组织，并制备横截面和全封固解剖体。参照图15，耳蜗和前庭横截面以及全封固解剖体表明，AAV-PHP.B-Syn-eGFP对于转导螺旋神经节和前庭神经元具有高特异性和效率。

实施例10：恢复听觉功能

在纯合Tmc1突变小鼠体内，评估PHP.B载体驱动治疗性多肽的表达的能力。在P1对小鼠进行注射，并且在P30测量听觉功能。如通过ABR和DPOAE阈值所测，AAV9-PHP.B-Cmv-Tmc1载体恢复了突变小鼠的听觉功能(图16A和图16B)。这一载体胜过AAV1-Cmv-Tmc1和Anc80-Cmv-Tmc1，并且一只被给药AAV9-PHP.B-Cmv-Tmc1载体的小鼠的表现与野生型类似(图16A)。

实施例11：用于在内毛细胞和外毛细胞中表达转基因的启动子

驱动在特异性细胞和组织内的表达的启动子对于治疗性转基因的靶向递送和最小化脱靶表达特别有价值。探究了几种启动子的特异性地在前庭细胞中驱动表达的能力。参照图17A至图17C，Pcdh15、肌球蛋白6和肌球蛋白7a启动子驱动在内毛细胞和外毛细胞内的表达。KCNQ4启动子特异性地驱动在外毛细胞中的表达(图17D)。

其它实施方案

应理解，尽管本位中已经联合大量不同方面描述了方法和物质的组合物，但前述对多个方面的说明旨在示出而非限制该方法和物质的组合物的范畴。其它方面、优点和修饰处于后附权利要求书的范畴内。

本文中，对任何变量定义中一系列元件的描述包括该变量作为任何单一元件或作为所列元件的组合(或亚组合)的定义。对本文中实施方案的描述包括该实施方案作为任何单一实施方案或作为与任何其它实施方案或其部分的组合。

本说明书中提及的全部专利和出版物通过引用并入本文，其并入程度与各独立的专利和出版物具体且独立地指明以待通过引用并入相同。

公开了可用于、可用于制备所公开的方法和组合物或可与之合用或作为其产物的方法和组合物。本文中公开了这些和其它材料，应理解，也公开了这些方法和组合物的组合、子集、相互作用、组等。换句话说，尽管这些组合物和方法的每一个体以及集合性的组合和排列可不被明确地公开，但其各自在本文中被特异性地关注和描述。例如，如果特定的物质组合物或特定的方法被公开并谈论且大量组合物或方法被讨论，则除非另有特别指示，否则该组合物和方法的每一种组合和排列均被特异性地关注。同样，这些的任何子集或组合也被特异性地关注和公开。