一种保健食品中3-羟丙基去甲基他达拉非含量的检测方法

摘要

本发明公开了一种保健食品中3‑羟丙基去甲基他达拉非含量的检测方法，属于保健食品质量检测技术领域。本发明以甲醇、甲酸和水的混合溶液作为保健食品中3‑羟丙基去甲基他达拉非的提取溶剂，体积比为60:20:20的0.5%甲酸‑甲醇‑乙腈为流动相A，体积比为10:45:45的0.5%甲酸‑甲醇‑乙腈为流动相B，高效液相色谱法检测保健食品中3‑羟丙基去甲基他达拉非的含量，该方法操作简单，重复性好、加样回收率良好，可以实现对3‑羟丙基去甲基他达拉非的准确定量，为打击该成分在保健食品中的非法添加，为保障保健食品安全提供了技术支持。

说明书

技术领域

本发明属于保健食品质量检测技术领域，具体涉及一种保健食品中3-羟丙基去甲基他达拉非含量的检测方法。

背景技术

目前，保健食品中非法添加5型磷酸二酯酶（PDE5）抑制剂的现象层出不穷。非法添加的化学药品成分对消费者的危害很大，主要在于3个方面：一是不法生产者随意添加，导致剂量不规范；二是脱离了医生的专业指导，非法添加的化学药物成分被不规范使用，对不宜人群尤其危害严重；三是非法添加的化学物质一般来源于化工产品，没有GMP认证，有可能带有各种杂质。这些杂质未能通过有效的方法加以检出、控制，也将给使用者造成直接或潜在的危害。因此，必须严格控制保健食品的质量，严厉打击保健食品中非法添加化学物质的违法行为。

国家食品药品监督管理局颁布的现行检验标准能够检测包括西地那非、伐地那非和他达拉非在内的11种PDE

通过对缓解体力疲劳类保健食品进行非法添加物筛查时发现，有1个未知结构的他达拉非类似物，结合高分辨质谱、核磁共振氢谱数据及文献资料，经与对照品对比确认，最终确定了目标物为3-羟基丙基去甲他达拉非（结构式如下所示）。

中国专利CN110940755A公开了一种食品中4种他达拉非类物质的检测方法，以乙腈为提取溶剂，流动相A为乙腈溶液、流动相B为三氟乙酸水溶液，梯度洗脱，采用高效液相色谱法同时检测4种他达拉非类（甲基他达拉非、N-3羟丙基去甲基他达拉非、2-羟丙基去甲基他达拉非和2-羟乙基去甲基他达拉非）物质。通过对该方法进行研究，采用高效液相色谱法检测N-3羟丙基去甲基他达拉非含量时，检测出的N-3羟丙基去甲基他达拉非浓度偏低，易被其它成分干扰，不能对N-3羟丙基去甲基他达拉非的含量进行准确定量。

发明内容

针对现有技术中存在的3-羟丙基去甲基他达拉非无法准确定量的问题，本发明提供了一种保健食品中3-羟丙基去甲基他达拉非含量的检测方法，该方法操作简单，重复性好、加样回收率良好，可以实现对保健食品中3-羟丙基去甲基他达拉非的准确定量。

本发明通过以下技术方案实现：

一种保健食品中3-羟丙基去甲基他达拉非含量的检测方法，包括以下步骤：

（1）标准溶液的配制：配制甲醇-甲酸-水的标准溶液；

（2）对照品溶液的制备：称取3-羟丙基去甲基他达拉非标准品，加标准溶液溶解，配制成不同浓度的对照品溶液；

（3）供试品溶液的制备：称取供试品样品，研细，加标准溶液超声溶解，制成供试品溶液；

（4）高效液相色谱法检测：取不同浓度的对照品溶液分别注入高效液相色谱仪中，依照色谱条件进行测定，记录色谱图，以对照品溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算线性方程；取供试品溶液注入高效液相色谱仪中，依照色谱条件进行测定，记录色谱图，峰面积带入线性方程中，计算出待测样品中3-羟丙基去甲基他达拉非的含量。

进一步地，步骤（1）中所述的标准溶液中甲醇、甲酸、水的体积比为75:1:24。

进一步地，进一步地，步骤（4）中所述的色谱条件为：色谱柱Shim-pack GIST C18色谱柱，4.6mm×250mm，5 µm，柱温：35℃，流速：1.0mL/min，进样量：10µL，柱温：35℃，检测波长：230nm，二极管阵列检测器，流动相：A：0.5wt%甲酸-甲醇-乙腈，体积比为60:20:20，流动相B为0.5 wt %甲酸-甲醇-乙腈，体积比为10:45:45，梯度洗脱程序为0-12min，100%A；12-25min 100%A →100%B，25-30min，100%B；30-31min，100%B→100%A；31-36min，100%A。

进一步地，步骤（2）中对照品溶液的浓度为11.53 - 92.24μg/mL。

进一步地，步骤（3）中供试品溶液的浓度为0.02g/mL。

进一步地，步骤（3）中的超声时间为5-15min。

有益效果

本发明以甲醇、甲酸和水的混合溶液作为保健食品中3-羟丙基去甲基他达拉非的提取溶剂，体积比为60:20:20的0.5%甲酸-甲醇-乙腈为流动相A，体积比为10:45:45的0.5%甲酸-甲醇-乙腈为流动相B，高效液相色谱法检测保健食品中3-羟丙基去甲基他达拉非的含量，该方法操作简单，重复性好、加样回收率良好，可以实现对3-羟丙基去甲基他达拉非的准确定量，为打击该成分在保健食品中的非法添加，为保障保健食品安全提供了技术支持。

附图说明

图1为空白样品高效液相色谱图；

图2为对照品高效液相色谱图；

图3为供试品高效液相色谱图。

具体实施方式

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是进一步说明本发明的特征及优点，而不是对本发明进行限制。

高效液相色谱仪（Ultimate3000型，美国Thermo）；超声波清洗器（KQ-700VDE型，昆山市超声仪器有限公司）；电子天平（XSE-205DU型，METTLER TOLEDO公司）。

纯净水（哇哈哈），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），甲酸（国药集团化学试剂有限公司），3-羟丙基去甲基他达拉非对照品（加拿大TLC药物标准品有限公司，商品名为Tadalafil Impurity 37，纯度为99.4%）。保健食品（批号为20190425）一批，为潍坊市奎文区市场监督管理局提供的样品，作为下列实施例中的供试品样品。

色谱条件：Ultimate3000 型 Thermo 高效液相色谱仪，色谱柱：岛津 Shim-packGIST C18 色谱柱（4.6mm×250mm，5 µm）；进样量：10μL；柱温：35℃；检测波长：230nm，二极管阵列检测器；流动相A为0.5wt%甲酸-甲醇-乙腈（60:20:20），流动相B为0.5 wt %甲酸-甲醇-乙腈（10:45:45），梯度洗脱(具体见表1)；流速：1.0mL/min。

表1 梯度洗脱表

实施例1

（1）标准溶液的配制：配制甲醇-甲酸-水的标准溶液，甲醇、甲酸和水的体积比为75:1:24。

（2）对照品溶液制备

精密称取3-羟丙基去甲基他达拉非对照品9.28 mg（纯度为99.4%），于100mL 容量瓶中，加标准溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为92.24μg/mL 的对照品溶液。

（3）供试品溶液制备

精密称取1g供试品样品，研细，置于50mL容量瓶中，加标准溶液适量，超声处理15分钟，冷至室温，用标准溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

（4）线性关系

精密吸取步骤（2）中制备的对照品溶液2.5ml、5ml、10ml、15ml、20ml，分别至20ml容量瓶中，加标准溶液定容至刻度，按色谱条件进行测定，以各对照品浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，计算得线性方程为Y= 33.677X+14.4，r>0.9990，结果表明3-羟丙基去甲基他达拉非浓度在11.53 ～ 92.24μg/mL 范围内与峰面积呈良好线性关系，结果见表2，空白样品的高效液相色谱图如图1所示，对照品高效液相色谱图如图2所示，图3为供试品高效液相色谱图。

表2 线性关系考察结果

（5）稳定性试验

取批号为20190425的保健食品供试品，按照步骤（3）方法制备供试品溶液，分别于0、4、8、12、24h 按色谱条件进行测定，结果3-羟丙基去甲基他达拉非含量的RSD为0.5%。

（6）精密度试验

取同批号为20190425的保健食品得供试品，按照步骤（3）方法制备供试品溶液，在色谱条件下连续进样6次，结果3-羟丙基去甲基他达拉非含量的RSD为0.3%。

（7）重复性试验

取批号为20190425的保健食品得供试品，按照步骤（3）方法制备6份供试品溶液，在色谱条件进行测定，结果3-羟丙基去甲基他达拉非含量的均值为2.22 mg/g ，RSD为1.2%。

（8）加样回收率试验

取已知含量的同一批保健食品（20190425）6 份各0.5g，精密称定，分别加入3-羟丙基去甲基他达拉非对照品溶液10mL（浓度为0.1153mg/mL）按步骤（2）方法制备供试品溶液，在色谱条件进行测定，进行加样回收率考察，平均回收率为99.08%，RSD 为1.01%（n=6），表明本方法测定3-羟丙基去甲基他达拉非准确率较高，回收率结果见表3。

表3 供试品中3-羟丙基去甲基他达拉非加样回收率试验（n=6）

（9）样品含量测定

取3个批次的供试品样品，按步骤（3）方法制备供试品溶液，在色谱条件下高效液相色谱测定，计算3-羟丙基去甲基他达拉非的含量，结果见表4，待测样品高效液相色谱图如图3所示。

表4 供试品中3-羟丙基去甲基他达拉非含量测定结果

实施例2

考察提取溶剂对阳性样品（目标物浓度：2.28 mg/g）的提取效果，结果如表5所示。

表5 不同溶剂的提取效果