一种重组hEGF在毕赤酵母中的生产方法

摘要

本发明公开了一种重组hEGF在毕赤酵母中的生产方法，包括如下步骤：步骤S1：重组质粒构建；步骤S2：感受态细胞制备；步骤S3：质粒的线性化；步骤S4：电转化；步骤S5：阳性克隆的菌落PCR鉴定及克隆的小量转接；步骤S6：阳性克隆的诱导及小量表达测试；步骤S7：放大纯化；在基因合成的过程中对hEGF的基因进行了密码子的优化，且后期的表达小试进行了最优克隆的筛选及最优表达时间的优化，因此极大地提高了该蛋白的表达量，缩短了蛋白质纯化时间至2h，极大地保障了蛋白活性；通过将重组hEGF质粒转化至毕赤酵母GS115宿主细胞中，利用甲醇诱导，最终通过离子交化层析得到高纯度的目的蛋白。