一种重组限制性内切酶在大肠杆菌中的生产方法

摘要

本发明公开了一种重组限制性内切酶在大肠杆菌中的生产方法，本发明通过重组方式将带有SUMO标签的Sac I限制性内切酶与甲基化酶克隆到含His标签的pCreat Duet共表达载体中，在低温条件下表达量达到25％，通过Ni柱亲和层析、Superdex200凝胶过滤层析得到高活力的重组Sac I限制性内切酶，比活较商业化酶更高，通过Superdex200分子筛层析对蛋白进行提纯，经纯化工艺摸索及条件优化，整个纯化过程仅需6‑7h，极大简化了纯化过程及时间，从而保证了酶活性，有利于酶产量的提高，为研发及生产其他Ⅱ型限制性内切酶奠定了基础。