一种改善阿奇霉素胶囊溶出曲线的测定方法

摘要

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种改善阿奇霉素胶囊溶出曲线的测定方法，所述的方法是在缓冲盐溶液中加入一定浓度的蛋白酶作为溶出介质，溶出度方法采用中国药典第二法，检测方法为高效液相色谱法，从而测得阿奇霉素胶囊的溶出曲线。该方法操作简单，准确度高，能够消除阿奇霉素胶囊溶出曲线测定中因为胶囊壳交联造成的溶出慢、溶出不均匀现象，适用于制剂工艺的开发和上市后样品的质量检测。

说明书

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种改善阿奇霉素胶囊溶出曲线的测定方法。

背景技术

阿奇霉素胶囊的主要成份为阿奇霉素(azithromycin)，化学名称为(2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S，14R)-13-[(2，6-二脱氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核-已吡喃糖基)氧]-2-乙基-3，4，10-三羟基-3，5，6，8，10，12，14-七甲基-11-[[3，4，6-三脱氧-3-(二甲氨基)-β-D-木-已吡喃糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15酮，其结构式如下：

阿奇霉素胶囊是一种由明胶胶囊壳装填阿奇霉素结晶性粉末内容物而成的胶囊制剂，英文名为Azithromycin capsule，原研厂家为克罗地亚普利瓦公司(PLIVA CroatiaLtd.)，主要适用于敏感细菌所引起的上下呼吸道感染、皮肤软组织感染、性传播疾病等，是一种半合成的十五元大环内酯类抗生素。它的抗菌谱比较广，广泛用于各种感染性疾病，疗效相对比较确切，是一种常见的抗菌药物。国内外对该药物的仿制研究比较多，尤其是近年国内兴起的仿制药一致性评价，作为国家医保基本药物的阿奇霉素胶囊更是成为热门研究药物。

在医药领域，特别是仿制药一致性评价过程中，溶出度试验的重要性毋庸置疑，既能体外模拟研究制剂在体内的动力学释放，体现制剂的内在优良品质，又能剖析口服固体制剂的不同处方工艺特点，便于制剂处方工艺的筛选，而且对于药品上市后的质量监督检查也具有重要的意义。

阿奇霉素胶囊是由明胶胶囊壳和内容物组成，胶囊制剂的溶出释放需要经过胶囊壳在溶出介质中溶解，然后释放内容物的过程，故胶囊壳的种类和性质对药物溶出度测定的影响非常大。明胶是一系列水溶性胶原蛋白衍生物的混合物，在光、热、氧、温度、湿度的条件下容易发生交联反应，从而导致胶囊壳在溶出介质中的溶解变慢、溶解不均匀，直接影响了胶囊制剂溶出度测定的准确性。目前的阿奇霉素胶囊溶出曲线的检测方法中，没有具体提供一种简单、准确、可靠的解决因胶囊壳交联造成溶出释放变慢、溶出度RSD值偏大的确切方法。因此，开发一种能解决该问题的溶出方法是非常有意义的。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种改善阿奇霉素胶囊溶出曲线的测定方法，能够有效解决因为明胶胶囊壳交联造成的溶出释放变慢、溶出度RSD值偏大的问题。

术语定义

本发明中，除另有说明外，“％”均指质量百分比。

本发明中，除另有说明外，无论在具体数值前是否有“约”，都表示该数值可以在本领域的范围内波动，具体请参考中国药典凡例。

本发明中，除另有说明外，溶出介质缓冲液配制所需用水均指分析领域常用的分析用水，包括但不限于纯化水、超纯水、去离子水等，液相色谱分析所需用水包括但不限于超纯水等。

本发明中，除另有说明外，溶出介质缓冲液包括但不限于磷酸盐缓冲液等。

本发明中，除另有说明外，溶出介质所需蛋白酶包括但不限于胰蛋白酶。

本发明中，除另有说明外，溶出介质缓冲盐和流动相中缓冲盐的pH值的绝对值可以在±0.05内波动。

发明详述

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种改善阿奇霉素胶囊溶出曲线的测定方法，所述方法遵循《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》和中国药典中溶出度的要求，采用溶出度测定法(中国药典2015版四部0931第二法)，浆法+沉降篮。

本发明提供的溶出度测定方法中，溶出介质是加有一定浓度蛋白酶的缓冲盐溶液。具体地，所述的缓冲盐溶液可以是pH2.2～10.0的邻苯二甲酸、硼酸、柠檬酸、醋酸、磷酸的钾盐或钠盐缓冲溶液，蛋白酶可以是胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶或胃蛋白酶的一种或多种。根据本分析领域的公知常识，本领域的普通分析人员可以根据胶囊制剂的实际类型，在本发明的技术方案的基础上，为了更好的满足实际的工作需要和获得更好的实验效果，选用其他的无机、有机盐和蛋白酶或其他类型的酶作为溶出介质，或其他的模拟肠液、胃液等，以实现本发明的发明目的。

更具体地，本发明提供一种改善阿奇霉素胶囊溶出曲线的测定方法，所述方法采用溶出度测定法(中国药典2015版四部0931第二法)，浆法+沉降篮，以一定浓度的蛋白酶缓冲盐溶液900ml为溶出介质，转速为每分钟75转，温度37℃，依法操作，经10、15、20、30min取样，取液5ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液，同时补加等温同体积溶出介质。另取阿奇霉素对照品28mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加乙醇14ml使溶解，再用溶出介质定量稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各50μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算每粒胶囊各取样点的溶出度值。

在本发明中，相对于传统的以缓冲盐溶液作为溶出介质，胶囊制剂容易出现因胶囊壳交联结块造成溶出释放慢、不均匀，测量结果不准确的现象，向缓冲盐溶液中加入蛋白酶可以很好的改善胶囊壳的交联问题，提高测量准确度，更真实的反映胶囊制剂的溶出释放行为，从而更好的指导药品的质量研究。

在一些实施案例中，本发明所述的一种改善阿奇霉素胶囊溶出曲线的测定方法，包括：

溶出度方法：中国药典第二法，浆法+沉降篮

溶出介质：pH6.8 Na

溶出体积：900ml

转速：75rpm

溶出介质温度：37℃

样品检测方法：HPLC法

在一些实施案例中，本发明所述的一种改善阿奇霉素胶囊溶出曲线的测定方法，包括：

溶出度方法：中国药典第二法，浆法+沉降篮

溶出介质：pH6.8 Na

溶出体积：900ml

转速：75rpm

溶出介质温度：37℃

样品检测方法：HPLC法

在一些实施案例中，本发明所述的一种阿奇霉素胶囊溶出曲线的测定方法，包括：

溶出度方法：中国药典第二法，浆法+沉降篮

溶出介质：pH6.8 Na

溶出体积：900ml

转速：75rpm

溶出介质温度：37℃

样品检测方法：HPLC法

在一些实施案例中，本发明所述的一种阿奇霉素胶囊溶出曲线的测定方法，包括：

溶出度方法：中国药典第二法，浆法+沉降篮

溶出介质：pH6.8 Na

溶出体积：900ml

转速：75rpm

溶出介质温度：37℃

样品检测方法：HPLC法

在一些实施案例中，本发明所述的一种阿奇霉素胶囊溶出曲线的测定方法，包括：

溶出度方法：中国药典第二法，浆法+沉降篮

溶出介质：pH6.8 Na

溶出体积：900ml

转速：75rpm

溶出介质温度：37℃

样品检测方法：HPLC法

在一些实施案例中，本发明所述的一种奇霉素胶囊溶出曲线的测定方法，包括：

溶出度方法：中国药典第二法，浆法+沉降篮

溶出介质：pH6.8 Na

溶出体积：900ml

转速：75rpm

溶出介质温度：37℃

样品检测方法：HPLC法

其中，样品检测方法为HPLC法。

色谱柱：Waters

流动相：乙腈-0.05M K

柱温：30℃；

波长：210nm；

进样量：50μl；

流速：1ml/min；

运行时间:15min。

其中，计算方法：外标法。

样品浓度

其中：

C

C

A

A

其中：

Q：第n个时间取样点时供试品中阿奇霉素胶囊总的溶出度(％)；

Cn：:第n个时间取样点时供试品中阿奇霉素的浓度(mg/ml)。

蛋白酶的生物活性与环境的pH值息息相关，所以我们在选择适合的溶出介质时，还要考虑缓冲盐溶液pH值对蛋白酶活性的影响，根据pH值选择适合的蛋白酶。

经过多次的实验研究，本发明人发现阿奇霉素胶囊在以pH6.8 Na

本发明所述的方法简便、准确，能够极大的减小因胶囊壳交联造成的溶出释放过慢、溶出不均匀的问题，为研发阶段工艺筛选以及商业化生产样品质量检测提供一种准确便利的方法。特别地，但不限于，适用于检测阿奇霉素胶囊制剂。

附图说明

图1为阿奇霉素胶囊在加有不同浓度胰蛋白酶的pH6.8缓冲液中的溶出曲线；

图2为阿奇霉素胶囊在加有不同浓度胰蛋白酶的pH6.8缓冲液中的溶出度RSD值-时间曲线；

图3为阿奇霉素胶囊在不加和加有0.05g/L胰蛋白酶的pH6.8缓冲液中的溶出度RSD值-时间曲线。

具体实施方式

为了使本研究领域的技术人员能够更好的理解本发明的技术方案，下面进一步披露一些非限制实施案例对本发明作进一步的详细说明。

本发明所使用的乙腈为色谱纯试剂，胰蛋白酶为阿拉丁公司生产的牛胰蛋白酶(批号J1730028)，样品为克罗地亚普利瓦公司生产的阿奇霉素胶囊(批号950056)，供试品过滤所用滤膜为天津富城达的混合纤维素膜(直径25mm，孔径0.45um)，对照品为阿奇霉素工作对照品(自制)，其他试剂均为分析纯试剂。液相色谱分析的流动相用水为超纯水，其他均为纯化水。

实施例1

色谱条件

美国Agilent 1260 II型高效液相色谱系统及工作站；色谱柱为Waters

0.05M K

流动相：乙腈-0.05M K

溶出条件：

溶出仪为天大天发溶出试验仪(型号RC8MD)

溶出度方法：中国药典第二法，浆法+沉降篮

溶出介质：pH6.8 Na

pH6.8 Na

溶出体积：900ml×6杯

转速：75rpm

溶出介质温度：37℃

取样时间点：10min、15min、20min、30min

取样体积：5ml

补液体积：5ml

溶液配制：

稀释液：溶出介质

空白溶液：于100ml容量瓶中，加乙醇14ml，再用稀释液定量稀释至刻度，摇匀。

供试品溶液：于溶出度试验的各具体取样时间点取样5ml，滤过，弃掉2ml初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

对照品溶液：取阿奇霉素对照品28mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加乙醇14ml使溶解，再用稀释液定量稀释至刻度，摇匀，即得。

分别取空白溶液、对照品溶液和供试品溶液，按照上述色谱条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。按照对照品外标法计算各溶出取样点的溶出度值，再根据各时间点的溶出度值作溶出度-时间曲线，即得阿奇霉素胶囊的溶出度曲线。根据《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》，第1个取样时间点溶出度的RSD值不得过20％，自第2个时间点至最后时间点溶出度的RSD值不得过10％。表1表明阿奇霉素胶囊第1个取样时间点的溶出度RSD值超过了20％，第2个取样时间点的溶出度RSD值超过了10％，故需要对溶出度方法进行改善使其满足要求。

表1阿奇霉素胶囊在pH6.8溶出介质中的溶出曲线

实施例2

仪器与色谱条件同实施例1

溶出条件：

溶出介质：pH6.8 Na

pH6.8 Na

pH6.8 Na

其他溶出条件和溶液配制方法以及样品进样方法同实施例1。

结果如表2，加有0.02g/L胰蛋白酶的pH6.8缓冲盐溶液作为溶出介质，溶出度RSD值并没有改善，原因可能是酶的浓度不够。对于本胶囊，当酶的浓度达到合适的浓度后才能较好地改善胶囊壳交联造成的溶出释放慢、溶出不均匀的问题。

表2阿奇霉素胶囊在pH6.8+0.02g/L胰蛋白酶溶出介质中的溶出曲线

实施例3

仪器与色谱条件同实施例1

溶出条件：

溶出介质：pH6.8 Na

pH6.8 Na

pH6.8 Na

其他溶出条件和溶液配制方法以及样品进样方法同实施例1。

结果如表3，相对于未加酶的条件，加有0.05g/L胰蛋白酶的pH6.8缓冲盐溶液作为溶出介质，溶出曲线基本没变化，但是溶出度RSD值明显减小，能够满足溶出指导原则中用于比较溶出曲线相似性的条件。可见，加入一定浓度的胰蛋白酶至缓冲盐溶液中作为溶出介质，阿奇霉素胶囊的溶出度RSD值减小、溶出曲线准确，可用于制剂工艺中溶出相似性的比较，以便进行较好的制剂剖析和工艺筛选。

表3阿奇霉素胶囊在pH6.8+0.05g/L胰蛋白酶溶出介质中的溶出曲线

实施例4

仪器与色谱条件同实施例1

溶出条件：

溶出介质：pH6.8 Na

pH6.8 Na

pH6.8 Na

其他溶出条件和溶液配制方法以及样品进样方法同实施例1。

结果如表4，与实施例3相似，相对于未加酶的条件，加有0.1g/L胰蛋白酶的溶出介质在各取样点的溶出度RSD值减小，符合溶出指导原则中对于溶出度的要求。可见，加入0.1g/L胰蛋白酶到缓冲盐溶液中作为溶出介质，可以改善阿奇霉素胶囊的溶出释放行为，对于解决胶囊制剂的交联问题具有重要意义。根据溶出介质中添加剂浓度添加的一般原则，浓度由低到高进行添加，再考虑到成本的问题，故当0.05g/L和0.1g/L浓度都适合时，优先选择胰蛋白酶的浓度为0.05g/L。

表4阿奇霉素胶囊在pH6.8+0.1g/L胰蛋白酶溶出介质中的溶出曲线

实施例5

仪器与色谱条件同实施例1

溶出条件：

溶出介质：pH6.8 Na

pH6.8 Na

pH6.8 Na

其他溶出条件和溶液配制方法以及样品进样方法同实施例1。

结果如表5，发现增大缓冲盐溶液中胰蛋白酶的浓度，溶出度的RSD值反而相对于加入0.05g/L和0.1g/L胰蛋白酶的溶出介质中的值增大，而且相对于不加胰蛋白酶的溶出介质，阿奇霉素胶囊的溶出释放变快，可能会影响样品真实的溶出释放行为，不利于检测结果的判定。故胰蛋白酶的浓度并非越大越好，一定pH值的溶出介质中的酶浓度有一个适合的浓度范围。

表5阿奇霉素胶囊在pH6.8+0.2g/L胰蛋白酶溶出介质中的溶出曲线

实施例6

仪器与色谱条件同实施例1

溶出条件：

溶出介质：pH6.8 Na

pH6.8 Na

pH6.8 Na

其他溶出条件和溶液配制方法以及样品进样方法同实施例1。

结果如表6，发现加有0.5g/L胰蛋白酶的缓冲液溶液中，阿奇霉素胶囊溶出度的RSD值相对于加0.05g/L和0.1g/L胰蛋白酶的溶出介质偏高，不符合溶出指导原则对于溶出度RSD值的要求。说明加入的胰蛋白酶浓度过高，使得该浓度下的溶出介质不适用于本胶囊溶出曲线的测定。对于本发明中阿奇霉素胶囊溶出曲线的测定，加入胰蛋白酶的适合浓度为0.05g/L和0.1g/L。故溶出介质中胰蛋白酶的浓度对于胶囊溶出曲线的测定十分重要。

表6阿奇霉素胶囊在pH6.8+0.5g/L胰蛋白酶溶出介质中的溶出曲线

表1-6中溶出介质名称代表的含义如下：

综上实施案例所述，

图1、图2显示向缓冲盐溶液中加入一定浓度的蛋白酶作为溶出介质，溶出曲线变化不大，当加入的蛋白酶浓度为0.05g/L和0.1g/L时，溶出度的RSD值在溶出指导原则的范围之内。再综合考虑添加剂的添加原则、成本以及对溶出度RSD的改善程度，认为最优蛋白酶浓度为0.05g/L，其与未添加蛋白酶的溶出介质测得溶出度RSD值的结果对比如图3，添加有0.05g/L胰蛋白酶的pH6.8缓冲盐溶液的溶出度RSD值明显降低。根据实施案例1～6的实验结果，可见本发明所提供的一种改善阿奇霉素胶囊溶出曲线的测定方法能够有效的改善阿奇霉素胶囊在溶出度测定中由于明胶交联造成的药物包裹、溶出释放变慢、溶出不均匀的问题。要想使蛋白酶发挥最佳效果，需要根据胶囊制剂的性质配制适合的蛋白酶浓度。该方法简便、准确、可靠，适用于胶囊制剂研发阶段的质量剖析和工艺筛选以及工业生产中控制产品的质量。

本发明的方法已经通过具体实施案例进行了描述，相关领域的技术研究人员能够在本发明的内容和范围内对本文所述的方法进行适当调整与组合，来实现和应用本发明技术。所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。

本领域的技术人员可以借鉴本文内容，适当改进方法参数，特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域的技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明之内。