抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体及其组合

摘要

本发明属于生物技术领域，提供了抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体及其组合。本发明提供了组合物，其包含结合人TIGIT的第一抗体和结合人PVRIG的第二抗体。本发明还提供组合物，其包含结合人TIGIT的抗体。本发明还提供组合物，其包含抗PVRIG抗体。本发明还提供抗TIGIT抗体。本发明还提供抗原结合结构域在制备试剂中的用途，所述试剂用于活化癌症患者的T细胞和/或NK细胞的方法。本发明还提供双特异性抗体，其结合第一靶标和第二靶标，其中所述第一靶标是人TIGIT。本发明还提供抗PD‑L1抗体和抗PVRIG抗体在制备试剂中的用途，所述试剂用于活化癌症患者的T细胞和/或NK细胞的方法。

说明书

本申请是CN201780050131.2的分案申请。

本申请要求于2016年8月17日提交的美国申请序列号62/376,334，2017 年6月1日提交的美国申请序列号62/513,771，2016年8月17日提交的美国申请序列号62/376,335，2016年11月3日提交的美国申请序列号62/417,217，2017 年6月1日提交的美国申请序列号62/513,775，2017年3月28日提交的美国申请序列号62/477,974，2017年6月1日提交的美国申请序列号62/513,916和2017 年7月28日提交的美国申请序列号62/538,561的优先权，所有这些申请均通过引用整体并入本文。

本申请包含序列表，所述序列表已经以ASCII格式电子提交，并且其全部内容通过引用并入本文。在2017年8月17日创建的所述ASCII拷贝命名为 114386-5008-WO_SL.txt，大小为590,436字节。

背景技术

初始T细胞必须从抗原呈递细胞(APC)接收两个独立的信号，以便有效地活化。第一信号1是抗原特异性的，并且出现在T细胞抗原受体遇到APC上的适当抗原-MHC复合物时。免疫反应的命运由第二抗原非依赖性信号(信号 2)决定，该信号通过与其APC表达的配体接合的T细胞共刺激分子递送。该第二信号可以是刺激性的(正性共刺激)或抑制性的(负性共刺激或共抑制)。在没有共刺激信号或存在共抑制信号的情况下，T细胞活化受损或中止，这可能导致抗原特异性无反应状态(称为T细胞无反应性)，或可能导致T细胞凋亡死亡。

共刺激分子对通常由在APC上表达的配体和在T细胞上表达的它们的同源受体组成。共刺激分子的原型配体/受体对是B7/CD28和CD40/CD40L。B7家族由结构相关的细胞表面蛋白配体组成，其可以为免疫反应提供刺激性或抑制性输入。B7家族的成员在结构上相关，细胞外结构域含有至少一个可变或恒定的免疫球蛋白结构域。

正性和负性共刺激信号在细胞介导的免疫反应的调节中起关键作用，并且介导这些信号的分子已被证明是免疫调节的有效靶标。基于这一知识，已经开发了数种涉及靶向共刺激分子的治疗方法，并且显示所述治疗方法可用于通过在癌症患者中开启免疫反应或阻止免疫反应关闭来预防和治疗癌症，可用于预防和治疗自身免疫疾病和炎性疾病以及同种异体移植排斥，分别通过在具有这些病理状况的受试者中关闭不受控制的免疫反应或利用负性共刺激(或共抑制) 诱导“关闭信号”来实现。

对B7配体递送的信号的操纵已显示出治疗自身免疫性、炎性疾病和移植排斥的潜力。治疗策略包括使用针对共刺激对的配体或受体的单克隆抗体，或使用由可结合并阻断其适当配体的共刺激受体构成的可溶性融合蛋白阻断共刺激。另一种方法是使用抑制性配体的可溶性融合蛋白诱导共抑制。这些方法至少部分依赖于最终缺失自身或异体反应性T细胞(它们分别是造成自身免疫疾病或移植中的致病过程的原因)，可能是因为在没有共刺激(其诱导细胞存活基因)的情况下，T细胞变得非常容易诱导细胞凋亡。因此，能够调节共刺激信号而不损害免疫系统抵抗病原体的能力的新型药剂对于治疗和预防这种病理状况是非常有利的。

共刺激途径在肿瘤发展中起重要作用。有趣的是，肿瘤已被证明通过抑制 B7-CD28和TNF家族中的共刺激因子以及通过吸引抑制抗肿瘤T细胞反应的调节性T细胞阻止T细胞活化来逃避免疫破坏(参见Wang(2006),“癌症中肿瘤特异性CD4

在过去的十年中，已开发出用于治疗自身免疫疾病、移植物排斥、过敏和癌症的各种共刺激蛋白的激动剂和/或拮抗剂。例如，CTLA4-Ig(阿巴西普 (Abatacept)，

然而，虽然使用抗检查点抑制剂抗体的单一疗法已显示出希望，但许多调查肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的研究(Ahmadzadeh等人,《血液(Blood)》114:1537 (2009)，Matsuzaki等人,《美国科学院院报(PNAS)》107(17):7875-7880(2010)， Fourcade等人,《癌症研究(Cancer Res.)》72(4):887-896(2012)和Gros等人,《临床研究杂志(J.ClinicalInvest.)》124(5):2246(2014))已显示TIL通常表达多个检查点受体。此外，表达多个检查点的TIL可能实际上是最具肿瘤反应性的。相反，外周的非肿瘤反应性T细胞更可能表达单个检查点。使用单特异性全长抗体的检查点阻断对于肿瘤反应性TIL的去抑制与假设导致自身免疫毒性的自身抗原反应性单表达T细胞相比可能是非歧视性的。

一个所关注的靶标是PVRIG。PVRIG，也称为含有脊髓灰质炎病毒受体相关免疫球蛋白结构域的蛋白、Q6DKI7或C7orf15，是一种长度为326个氨基酸的跨膜结构域蛋白，具有信号肽(跨越氨基酸1至40)、细胞外结构域(跨越氨基酸41至171)、跨膜结构域(跨越氨基酸172至190)和细胞质结构域(跨越氨基酸191至326)。PVRIG与脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白2(PVLR2，也称为nectin-2、CD112或疱疹病毒侵入介体B(HVEB)、人质膜糖蛋白)，即PVRIG的结合配偶体结合。

另一个所关注的靶标是TIGIT。TIGIT是一种在效应和调节(Treg)CD4+ T 细胞、效应CD8+ T细胞和NK细胞上高效表达的共抑制受体。已显示TIGIT 通过(1)直接信号传导，(2)诱导配体信号传导，以及(3)竞争和破坏利用共刺激受体CD226(也称为DNAM-1)的信号传导来减弱免疫反应。TIGIT信号传导已经在NK细胞中得到最充分的研究，其中已经证明与其同源配体脊髓灰质炎病毒受体(PVR，也称为CD155)的接合通过其细胞质ITIM结构域直接抑制NK细胞的细胞毒性。TIGIT基因的敲除或TIGIT/PVR相互作用的抗体阻断已显示在体外增强NK细胞杀伤，以及加剧体内自身免疫疾病。除了对T 细胞和NK细胞的直接作用外，TIGIT还可在树突状细胞或肿瘤细胞中诱导PVR 介导的信号传导，从而导致抗炎细胞因子如IL10的产生增加。在T细胞中， TIGIT还可以通过破坏共刺激受体CD226的同二聚化，并通过与其竞争结合 PVR来抑制淋巴细胞反应。

TIGIT在淋巴细胞上高度表达，包括浸润不同类型肿瘤的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和Treg。PVR也在肿瘤中广泛表达，表明TIGIT-PVR信号轴可能是癌症的主要免疫逃逸机制。值得注意的是，TIGIT表达与另一种重要的共抑制受体PD1的表达密切相关。TIGIT和PD1在许多人和鼠肿瘤的TIL上共表达。与TIGIT和CTLA4不同，PD1对T细胞反应的抑制不涉及配体与共刺激受体结合的竞争。

因此，TIGIT是单克隆抗体疗法的有吸引力的靶标，并且另外与包括抗 PVRIG抗体的其它抗体组合。

发明内容

因此，在一个方面，本发明提供了包含结合人TIGIT(SEQ ID NO:97)的抗原结合结构域的组合物，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:160的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:165的轻链可变结构域。此外，抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:150的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:155的轻链可变结构域此外，抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:560的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:565的轻链可变结构域。

在另一方面，本发明提供了包含抗体的组合物，所述抗体包含有包含 VH-CH1-铰链-CH2-CH3的重链，其中所述VH包含SEQ ID NO:160；和包含 VL-VC的轻链，其中所述VL包含SEQ ID NO:165并且VC是κ或λ。此外，抗体可包含有包含VH-CH1-铰链-CH2-CH3的重链，其中所述VH包含SEQ ID NO:150；和包含VL-VC的轻链，其中所述VL包含SEQ ID NO:159并且VC是κ或λ。此外，抗体可包含有包含VH-CH1-铰链-CH2-CH3的重链，其中所述VH包含SEQ IDNO:560；和包含VL-VC的轻链，其中所述VL包含SEQ ID NO:565并且VC是κ或λ。

在一些方面，CH1-铰链-CH2-CH3的序列选自人IgG1、IgG2和IgG4及其变体。在一些方面，重链具有SEQ ID NO:164，轻链具有SEQ ID NO:169。

在另一个方面，组合物可以进一步包含结合人检查点受体蛋白的第二抗体，所述人检查点受体蛋白可以是人PD-1或人PVRIG。第二抗体可包含抗原结合结构域，其包含有包含SEQ ID NO:5的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:10的轻链可变结构域，或具有SEQ IDNO:9的重链和具有SEQ ID NO:14 的轻链。

在另一方面，本发明提供核酸组合物，其包含编码包含SEQ ID NO:160的重链可变结构域的第一核酸和编码包含SEQ ID NO:165的轻链可变结构域的第二核酸。或者，核酸组合物包含编码包含SEQ ID NO:150的重链可变结构域的第一核酸和编码包含SEQ ID NO:155的轻链可变结构域的第二核酸。或者，核酸组合物包含编码包含SEQ ID NO:560的重链可变结构域的第一核酸和编码包含SEQ ID NO:565的轻链可变结构域的第二核酸。

在另一方面，本发明还提供了包含这些核酸组合物的表达载体组合物，例如包含第一核酸的第一表达载体和包含第二核酸的第二表达载体，或者包含第一和第二核酸的表达载体。

在另一方面，本发明提供了包含表达载体组合物的宿主细胞，以及制备抗体的方法，包括在产生抗体的条件下培养宿主细胞并回收抗体。

在另一方面，本发明提供了抗PVRIG抗体，其包含具有SEQ ID NO:9的重链和具有SEQ ID NO:14的轻链。本发明还提供了包含具有SEQ ID NO:19的重链；和具有SEQ ID NO:24的轻链的抗体。

在另一方面，抗PVRIG抗体(CHA.7.518.1.H4(S241P)或 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与结合人检查点受体蛋白的第二抗体，例如结合PD-1 的抗体共同施用。

在另一方面，抗PVRIG抗体(CHA.7.518.1.H4(S241P)或 CHA.7.538.1.2.H4(S241P))与结合人检查点受体蛋白的第二抗体，例如结合人 TIGIT的抗体，例如CPA.9.086或CPA.9.083或CHA.9.547.13共同施用。

在另一方面，本发明提供核酸组合物，其包含分别编码CHA.7.518.1.H4(S241P)或CHA.7.538.1.2.H4(S241P))的重链的第一核酸和编码 CHA.7.518.1.H4(S241P)或CHA.7.538.1.2.H4(S241P)的轻链的第二核酸。

在另一方面，本发明还提供了包含这些核酸组合物的表达载体组合物，例如包含第一核酸的第一表达载体和包含第二核酸的第二表达载体，或者包含第一和第二核酸的表达载体。

在另一方面，本发明提供了包含表达载体组合物的宿主细胞，以及制备抗体的方法，包括在产生抗体的条件下培养宿主细胞并回收抗体。

在另一方面，本发明提供的方法包括：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)TIGIT蛋白；ii) PVR蛋白；iii)PD-1蛋白；iv)PD-L1蛋白；和v)同种型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于TIGIT、PVR、PD-1和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同种型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果所有4种受体的阳性细胞百分比≥1％，那么e)向所述患者施用针对TIGIT 和PD-1的抗体。

在另一方面，本发明提供的方法包括：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)PVRIG蛋白；ii) PVRL2蛋白；iii)PD-1蛋白；iv)PD-L1蛋白；和v)同种型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于PVRIG、PVRL2、PD-1和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同种型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果所有4种受体的阳性细胞百分比≥1％，那么e)向所述患者施用针对PVRIG和PD-1的抗体。

在另一方面，本发明提供的方法包括：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)PVRIG蛋白；ii) PVRL2蛋白；iii)TIGIT蛋白；iv)PVR蛋白；和v)同种型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于PVRIG、PVRL2、TIGIT和PVR中的每一种，确定所述群体中相对于所述同种型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果所有4种受体的阳性细胞百分比≥1％，那么e)向所述患者施用针对PVRIG和TIGIT的抗体。

附图说明

图1.描绘了人PVRIG的全长序列(示出了两个不同的甲硫胺酸起始点)。信号肽加下划线，ECD加双下划线。

图2.描绘了PVRIG的结合配偶体人脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白2 (PVLR2，也称为nectin-2、CD112或疱疹病毒侵入介体B(HVEB))的序列。 PVLR2是人质膜糖蛋白。

图3A和B.描绘了本发明所列举的CHA抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)中每一个的可变重链和轻链以及vhCDR1、vhCDR2、 vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3序列。

图4A和B.PVRIG抗体增加了MLR中的T细胞增殖。示出了来自用所指示的PVRIG抗体处理过的MLR分析的CFSE低细胞的百分比。每个图表示一个单独的CD3 T细胞供体。实验描述于USSN 15/048,967的实施例23中，所述文献以引用的方式并入本文中。

图5A和B.PVRIG杂交瘤抗体与HEK hPVRIG工程改造的细胞系、HEK 亲本细胞和Jurkat细胞的结合特征。HEK OE表示HEK hPVRIG细胞，HEK par 表示HEK亲本细胞。对于Jurkat数据，gMFIr表示PVRIG抗体染色的几何MFI 相对于其对照的倍数差异。浓度指示计算gMFIr时的浓度。无结合表明抗体不与所测试的细胞系结合。突出显示的抗体是‘前四名’所关注的抗体。

图6A和B.PVRIG杂交瘤抗体与原代人PBMC、食蟹猴过表达细胞和食蟹猴原代PBMC的结合特征。Expi cyno OE表示用cPVRIG瞬时转染的expi细胞， expi par表示expi亲本细胞。gMFIr表示PVRIG抗体染色的几何MFI相对于其对照的倍数差异。浓度指示计算gMFIr时的浓度。未测试表明由于不存在与人HEK hPVRIG、expi cPVRIG细胞的结合或不符合PBMC亚组的结合要求而未测试的抗体。突出显示的抗体是‘前四名’所关注的抗体。实验描述于USSN 15/048,967的实施例21中，所述文献以引用的方式并入本文中。

图7A和B.PVRIG抗体在基于FACS的竞争分析中的阻断能力的汇总。指出了抑制的IC

图8A和B.TIL与黑素瘤细胞624在1:1 E:T下在抗PVRIG抗体 (CPA.7.021；10ug/ml)、抗TIGIT(10A7克隆；10ug/ml)或其组合存在下共培养18小时。收集上清液并在Th1 Th2Th17细胞计数珠阵列分析中测试以检测分泌的细胞因子。检测IFNγ(A)和TNF(B)水平。通过一式三份样品的学生t检验(Student's t-test)(*P≤0.05，**P≤0.01)对各处理进行比较。

图9A至F.MART-1或209TIL与黑素瘤细胞624在1:1 E:T下在抗PVRIG 抗体(CPA.7.021；10ug/ml)、抗DNAM1(DX11克隆，BD Biosciences目录号 559787；10ug/ml)或其组合存在下共培养18小时。收集上清液并在Th1 Th2 Th17细胞计数珠阵列分析中测试以检测分泌的细胞因子。检测IFNγ(A，D) 和TNF(B，E)水平。对TIL进行染色以获得CD137的表面表达(C，F)。

图10A和B.TIL(F4)与黑素瘤细胞624在1:3 E:T下在抗PVRIG抗体 (CPA.7.021；10ug/ml)、抗TIGIT(10A7克隆；10ug/ml)、抗PD1(mAb 1B8， Merck；10ug/ml)或其组合存在下共培养18小时。收集上清液并在Th1 Th2 Th17 细胞计数珠阵列分析中测试以检测分泌的细胞因子。检测IFNγ(A)和TNF(B) 水平。

图11A至E.描绘了CHA.7.518、CHA.7.524、CHA.7.530、CHA.7.538_1 和CHA.7.538_2中每一个的四个人源化序列。所有人源化抗体均包含H4(S241P) 取代。请注意，CHA.7.538_2的轻链与CHA.7.538_1的轻链相同。每一个的“H1”是不改变人类框架的“CDR交换”。后续序列改变了以较大的粗体字显示的框架改变。CDR序列以粗体表示。CDR定义是网站www.bioinf.org.uk/abs/的 AbM。人类种系和连接序列来自

图12A至C.描绘了三种CHA抗体的人源化序列的归类：CHA.7.518、 CHA.7.538.1和CHA.7.538.2。

图13.描绘了用于组合人源化VH和VL CHA抗体的方案。“chimVH”和“chimVL”是连接到人IgG恒定结构域的小鼠可变重链和轻链序列。

图14.PVRIG杂交瘤抗体与原代人PBMC、食蟹猴过表达细胞和食蟹猴原代PBMC的结合特征。Expi cyno OE表示用cPVRIG瞬时转染的expi细胞，expi par表示expi亲本细胞。gMFIr表示PVRIG抗体染色的几何MFI相对于其对照的倍数差异。浓度指示计算gMFIr时的浓度。未测试表明由于不存在与人HEK hPVRIG、expi cPVRIG细胞的结合或不符合PBMC亚组的结合要求而未测试的抗体。突出显示的抗体是完成人源化的四种抗体(参见图24)。实验描述于USSN 15/048,967的实施例21中，所述文献以引用的方式并入本文中。

图15.PVRIG抗体在基于FACS的竞争分析中的阻断能力的汇总。指出了抑制的IC50。无IC50表明这些抗体是非阻断剂。突出显示的抗体是完成人源化的四种抗体(参见图24)。

图16.所选PVRIG抗体在针对Reh和MOLM-13细胞的NK细胞细胞毒性分析中的活性的汇总。通过将PVRIG抗体条件下的绝对杀伤水平(％)除以对照抗体情况下的绝对杀伤水平(％)来计算相对于对照的细胞毒性的倍数变化。由5:1的效应物与靶标比计算倍数变化。

图17.PVRIG直系同源物的序列比对。比对人、食蟹猴、狨猴以及恒河猴 PVRIG胞外结构域的序列。人与食蟹猴之间的差异用黄色突出显示。

图18.抗人PVRIG抗体与食蟹猴、人、食蟹猴/人杂合PVRIG变体的结合。示出了抗体与野生型食蟹猴PVRIG(●)、H61R食蟹猴PVRIG(■)、P67S食蟹猴PVRIG

图19.抗人PVRIG抗体的表位组与食蟹猴交叉反应性的相关性。

图20A至B.(A)CHA.7.518.1.H4(S241P)对经过工程改造以过表达PVRIG 的HEK细胞和HEK亲本细胞的特异性。数据显示随抗体浓度增加而变化的绝对几何MFI(gMFI)测量值。(B)CHA.7.538.1.2.H4(S241P)对经过工程改造以过表达PVRIG的HEK细胞和HEK亲本细胞的特异性。数据显示随抗体浓度增加而变化的绝对几何MFI(gMFI)测量值。

图21A至B.示出了CHA.7.518.1.H4(S241P)(A)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)(B)与通过RNA表达证实内源性表达PVRIG的Jurkat 细胞结合的能力。(A)CHA.7.518.1.H4(S241P)与Jurkat细胞的结合。数据显示随抗体浓度增加而变化的绝对几何MFI(gMFI)测量值。同种型染色显示为阴性对照。(B)CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与Jurkat细胞的结合。数据显示随抗体浓度增加而变化的绝对几何MFI(gMFI)测量值。同种型染色显示为阴性对照。两种抗体都能够以与HEK hPVRIG细胞相当的亲和力结合Jurkat细胞。

图22.示出了CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与通过暴露于CMV肽(494-503，NLVPMVATV)扩增并且通过RNA表达证实内源性表达PVRIG的CD8 T细胞结合的能力。CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与CMV肽扩增的CD8 T细胞的结合。数据显示随抗体浓度增加而变化的绝对几何MFI(gMFI)测量值。同种型染色显示为阴性对照。

图23A至B.(A)CHA.7.518.1.H4(S241P)对经过工程改造以过表达食蟹猴PVRIG的expi细胞和expi亲本细胞的特异性。数据显示随抗体浓度增加而变化的绝对几何MFI(gMFI)测量值。CHA.7.538.1.2.H4(S241P)对经过工程改造以过表达食蟹猴PVRIG的expi细胞和expi亲本细胞的特异性。数据显示随抗体浓度增加而变化的绝对几何MFI(gMFI)测量值。

图24A至B.(A)通过CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P) 阻断PVRIG Fc与HEK细胞结合。数据显示PVRIG Fc与HEK细胞结合的百分比随相对于最大PVRIGFc诱导信号和仅次级背景增加的抗体浓度而变化。 (B)CHA.7.544对PVRIG Fc与HEK细胞结合的影响。数据显示在递增的 CHA.7.544浓度存在下，由PVRIG Fc与HEK细胞结合推导出的绝对gMFI。通过与Alexa 647缀合的抗小鼠Fc二级检测PVRIG Fc结合的量。

图25A至B.(A)通过CHA.7.518.1.H4(S241P)、CHA.7.538.1.2.H4(S241P) 和CHA.7.530.3阻断PVRL2 Fc与HEK hPVRIG细胞结合。数据显示PVRL2 Fc 与HEK hPVRIG细胞结合的百分比随相对于最大PVRL2 Fc诱导信号和仅次级背景增加的抗体浓度而变化。(B)CHA.7.544对PVRL2 Fc与HEK hPVRIG细胞结合的影响。数据显示PVRL2 Fc与HEK hPVRIG细胞结合的百分比随相对于最大PVRL2 Fc诱导信号和仅次级背景增加的抗体浓度而变化。

图26.显示Alexa 647缀合的CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)结合相对于其在Jurkat细胞与未缀合的 CHA.7.518.1.H4(S241P)、CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和同种型对照预孵育后的最大信号的百分比。

图27A至B.A)人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)增加CD4+ T细胞增殖。代表性数据(n≥2)显示当与 CHO-S OKT3 hPVRL2细胞在抗DNAM-1抗体或不同抗PVRIG抗体或IgG同种型对照存在下共培养时，来自单个人CD4+ T细胞供体的CFSE低、增殖CD4+ T细胞的百分比(平均值加标准差)。虚线表示在用人IgG4同种型对照抗体处理后增殖的CFSE低CD4+ T细胞的基线百分比。数字分别指与相关同种型对照抗体相比，抗PVRIG或抗DNAM-1抗体处理的增殖增加或减少的百分比。(B) 人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)以 hPVRL2依赖性方式增加CD4+ T细胞增殖。代表性数据(n≥2)显示响应与 CHO-S OKT3亲本或CHO-S OKT3 hPVRL2细胞在抗DNAM-1抗体或不同抗 PVRIG抗体或IgG同种型对照存在下共培养的单个人CD4+ T细胞供体的CFSE 低、增殖CD4+ T细胞的百分比(平均值加标准差)。虚线表示在用人IgG4或小鼠IgG1同种型抗体处理后增殖的CFSE低CD4+ T细胞的基线百分比。数字分别指与相关同种型对照抗体相比，抗PVRIG或抗DNAM-1抗体处理的增殖增加或减少的百分比。

图28A至C.(A)人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)增加CD8+ T细胞增殖。代表性数据(n≥2)显示当与 CHO-S OKT3 hPVRL2细胞在抗DNAM-1抗体或不同抗PVRIG抗体或IgG同种型对照存在下共培养时，来自单个人CD8+ T细胞供体(供体232)的CFSE 低、增殖CD8+ T细胞的百分比(平均值加标准差)。虚线表示在用小鼠IgG1 或人IgG4同种型抗体处理后增殖的CFSE低CD8+ T细胞的基线百分比。数字分别指与相关同种型对照抗体相比，抗PVRIG或抗DNAM-1抗体处理的增殖增加或减少的百分比。(B)人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)增加CD8+ T细胞增殖。代表性数据(n≥2)显示当与 CHO-S OKT3 hPVRL2细胞在抗DNAM-1抗体或不同抗PVRIG抗体或IgG同种型对照存在下共培养时，来自单个人CD8+ T细胞供体(供体234)的CFSE 低、增殖CD8+ T细胞的百分比(平均值加标准差)。虚线表示在用小鼠IgG1 或人IgG4同种型抗体处理后增殖的CFSE低CD8+ T细胞的基线百分比。数字分别指与相关同种型对照抗体相比，抗PVRIG或抗DNAM-1抗体处理的增殖增加或减少的百分比。(C)人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)增加CD8+ T细胞的IFNγ分泌。代表性数据(n≥2) 显示当与CHO-S OKT3 hPVRL2细胞在抗DNAM-1抗体或不同抗PVRIG抗体或IgG同种型对照存在下共培养时，由三个不同的人CD8+ T细胞供体(供体 231、232和234)产生的IFNγ的pg/ml(平均值加标准差)。虚线表示在用人 IgG4同种型抗体处理后的基线IFNγ产生。数字是指与IgG4同种型对照相比，抗PVRIG抗体处理的IFNγ分泌增加百分比。

图29.人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)在多个供体中持续增加CD4+ T细胞增殖，而 CHA.7.530.3和CHA.7.544不增加。相对于同种型对照的增殖百分比通过将 PVRIG抗体处理后CFSE低、CD4+ T细胞的百分比除以每个供体的同种型抗体处理来计算。同种型抗体处理的增殖百分比设定为零。图中的每个符号代表不同的供体。

图30A至D.(A)人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)对CD4+ T细胞增殖的剂量依赖性作用。2个不同人供体的代表性数据(n≥2)显示用人IgG4同种型CHA.7.518.1.H4(S241P)或 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)抗体剂量滴定66nM至0.726nM后增殖的CD4+ T细胞的平均百分比。估计的EC50在个位数nM范围内。(B)人源化PVRIG抗体 CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)对CD8+ T细胞增殖的剂量依赖性作用。2个不同人供体的代表性数据(n≥2)显示用人IgG4同种型 CHA.7.518.1.H4(S241P)、CHA.7.38.1.2或CHA.7.544抗体剂量滴定66nM至0.264nM后增殖的CD8+ T细胞的平均百分比。估计的EC50在个位数nM范围内。

图31A至C.(A)流式细胞术分析TIGIT和PVRIG在TIL和PVR上的表达，PVRL2在624黑素瘤细胞系上的表达。值代表相对于同种型对照的平均荧光强度(MFI)比率。(B-C)显示在与黑素瘤细胞624在1:3 E:T下在同种型对照、抗TIGIT(30μg/ml)或抗PVRIG抗体(10ug/ml)作为单一处理(蓝色直方图)或与抗TIGIT(绿色直方图)组合存在下共培养18小时后由TIL分泌的IFNγ(B)和TNF(C)的代表性实验。将抗体单一处理作用的百分比与同种型对照处理mIgG1进行比较，并将抗体组合处理作用的百分比与抗TIGIT单一处理进行比较。

图32A至H.TIL(209-gp100/463-F4-gp100)与黑素瘤细胞624在1:3 E:T 中在与或不与抗TIGIT(aTIGIT)组合的抗PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P) 或CHA.7.538存在下共培养18小时，并测试细胞因子分泌。将抗体处理作用的百分比与同种型对照处理进行比较，并绘制5次实验(F4)或6次实验(209) 的平均值。与同种型或组合相比，计算每种处理的配对的双尾T检验-与单独的抗TIGIT相比，指示p值。

图33A至B.(A)与单一抗体处理相比，人源化PVRIG抗体 CHA.7.518.1.H4(S241P)和抗TIGIT抗体增加CD4+ T细胞增殖。代表性数据 (n≥2)显示当与CHO-S OKT3 hPVRL2细胞共培养时，来自单个人CD3+ T细胞供体(供体143)的CFSE低、增殖CD4+ T细胞的百分比(平均值加标准差)。虚线表示在用人IgG4同种型对照抗体处理后增殖的CFSE低CD4+ T细胞的基线百分比。(B)与单一抗体处理相比，人源化PVRIG抗体 CHA.7.518.1.H4(S241P)和抗TIGIT抗体增加CD4+ T细胞增殖。代表性数据 (n≥2)显示当与CHO-S OKT3 hPVRL2细胞共培养时，来自单个人CD4+ T细胞供体(供体201)的CFSE低、增殖CD4+ T细胞的百分比(平均值加标准差)。虚线表示在用人IgG4同种型对照抗体处理后增殖的CFSE低CD4+ T细胞的基线百分比。数字分别指与相关同种型对照抗体相比，抗PVRIG或抗DNAM-1 抗体处理的增殖增加或减少的百分比。

图34A至B.(A)：人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)与抗TIGIT 抗体的组合增加CD8+ T细胞增殖。代表性数据(n≥2)显示当与CHO-S OKT3 hPVRL2细胞共培养时，来自代表性人CD8+ T细胞供体(供体232)的CFSE 低、增殖CD8+ T细胞的百分比(平均值加标准差)。虚线表示在用人IgG4同种型抗体处理后增殖的CFSE低CD8+ T细胞的基线百分比。数字分别指与相关同种型对照抗体相比，抗PVRIG或抗DNAM-1抗体处理的增殖增加或减少的百分比。(B)人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)与抗TIGIT抗体的组合增加CD8+ T细胞的IFNγ分泌。代表性数据(n≥2)显示当与CHO-S OKT3 hPVRL2细胞共培养时，由代表性人CD8+ T细胞供体(供体232)产生的IFNγ的pg/ml(平均值加标准差)。虚线表示在用人IgG4同种型抗体处理后的基线 IFNγ产生。数字分别指与相关同种型对照抗体相比，抗PVRIG或抗DNAM-1 抗体处理的IFNγ分泌增加或减少的百分比。

图35.描绘了实施例2(3)的实验系统设计。

图36A至C.示出了描绘TIL中PVRIG(使用抗人PVRIG CHA.7.538.AF647)、TIGIT(使用抗人TIGIT目录号17-9500-41 eBioscience) 和DNAM-1(使用抗人CD226-APC目录号338312 biolegend)表达水平的直方图。将表达的倍数与同种型(Iso)对照进行比较。

图37.汇总了抗PVRIG抗体对TIL分泌IFNγ的影响的绘图。TIL与过表达PVRL2的CHO-S HLA-A2/B2M细胞以1:3的E:T比在抗PVRIG抗体(c518， c538和544)或抗TIGIT抗体存在下共培养18小时。每个点代表来自不同实验的相同TIL的IFNγ分泌的平均数据。指示的百分比是每种抗体治疗与同种型对照之间的差异。与544或组合相比，计算每种处理的配对的双尾T检验，与单独的抗TIGIT相比，指示p值。每个TIL进行的实验数量；209(N＝3)，F4 (N＝2)，F5(N＝3)和MART1(N＝2)。

图38.汇总了c518和c538剂量反应对TIL分泌TNF-α的影响的绘图。TIL 与过表达PVRL2的CHO-S HLA-A2/B2M细胞以1:3的效应物与靶标比在抗 PVRIG抗体(c518、c538或同型对照)存在下共培养18小时，如实施例2(3) 中所述。

图39A至C.TIL与过表达PVRL2的CHO-S HLA-A2/B2M靶细胞以1:3的 E:T比在抗PVRIG抗体(c518，c538和544)或抗TIGIT抗体存在下共培养18 小时。上表中指出的百分比是每种抗体处理剂与其同种型对照相比对TIL分泌细胞因子的影响的差异。第一个实验在图A和B中表示，第二个实验在图C中表示。

图40.CHO-S OKT3共培养分析设计。CFSE标记的CD3+ T细胞与 CHO-S-OKT3-PVRL2或模拟转染的细胞共培养5天。分析抗PVRIG抗体对T 细胞增殖和细胞因子分泌的影响。

图41.抗PVRIG抗体对反应者与无反应者供体中CHO-OKT3 PVRL2细胞的IFNγ分泌的影响。来自2个不同供体的CD3+细胞与CHO-S-PVRL2细胞以 5:1 E:T在抗PVRIG抗体存在下共培养5天，并测试细胞因子分泌和T细胞增殖。(A)我们观察到抗PVRIG抗体作用的‘反应者供体’。(B)我们没有观察到抗体处理作用的‘无反应者供体’。

图42.抗PVRIG抗体对反应者供体CD4和CD8增殖的影响。CFSE标记的CD3+ T细胞与CHO-S-PVRL2细胞以5:1 E:T在抗PVRIG抗体或抗TIGIT 抗体存在下共培养5天。通过流式细胞术评估对CD4或CD8上的T细胞增殖门控的影响。提供增殖细胞(CFSE低)的百分比(A)或CD4+CFSE低或 CD8+CFSE低的总细胞数(B)。

图43.显示抗PVRIG抗体对反应者供体的IFNγ分泌或CD8增殖的影响。CD3+细胞与CHO-S-PVRL2细胞以5:1 E:T在抗PVRIG抗体存在下共培养5 天，并测试(A)细胞因子分泌和(B)T细胞增殖。将抗体处理作用的百分比与同种型对照治疗进行比较，并给出5个‘反应者’供体(反应者)的平均值。 (C)在用同种型与抗PVRIG抗体处理后，如A部分和B部分所述，在与 CHOS-OKT3 PVRL2共培养后来自相同的5个供体的IFNγ分泌水平。p值代表配对T检验的比率。

图44.是测试供体(n＝10)中抗体处理作用的汇总表。指示的百分比表示与相关同种型对照相比，抗体处理对特定读数(在列标题中指示)的影响。‘反应者’供体(供体#3、72、226、345和ES_001)被认为是‘反应者’，其中一些抗PVRIG抗体(主要是CHA.7.518)与同种型对照相比增强IFNγ或增殖。

图45A至B.描绘了使用数种抗体的实验结果。亲和力(nM)显示在A中，其中HEKhPVRIG细胞是用本文所述的hPVRIG转化的HEK细胞和表达内源性hPVRIG的Jurkat细胞。(B)描绘了使用针对供体1原代CD8 T细胞和(C) 供体2原代CD8 T细胞的4种不同抗体的gMFI。

图46A至B.描绘了TIGIT与CHO细胞的相互作用。(A)人TIGIT Fc蛋白与CHO细胞结合。在基于FACS的结合分析中评定分级浓度的人TIGIT Fc 和synagis IgG1对照与CHO细胞结合的能力。(B)人PVR在活化的CD4 T细胞上表达。CD4 T细胞与表达OKT3抗体的scFv的CHO细胞共培养并活化5 天。在第5天，分析CD4 T细胞的PVR表达和CFSE的稀释。

图47A至C.描绘了抗mPVRIg和抗PDL-1抗体在CT26肿瘤模型中的抗肿瘤反应。A-B.向各组10只BALB/c小鼠皮下注射5×10

图48A至C.描绘了抗PVRIG与抗PDL-1抗体组合在CT26肿瘤模型中的抗肿瘤反应。A-B.向各组10只BALB/c小鼠皮下注射5×10

图49A至D.描绘了AB-407(BOJ-5G4-F4)的可变重链的氨基酸序列和核酸序列(分别是A和B)以及可变轻链的氨基酸序列和核酸序列(分别是C和D)。

图50.描绘了人IgG1(具有一些有用的氨基酸取代)、IgG2、IgG3、IgG4、具有可用于本发明中的特定用途的铰链变体的IgG4的恒定结构域以及κ和λ轻链的恒定结构域的氨基酸序列。

图51.描绘了人和食蟹猕猴(称为食蟹猴)TIGIT ECD以及人PVR ECD 蛋白的序列。

图52.显示抗TIGIT Fab的流式细胞术结合汇总。通过流式细胞术分析所有独特的ELISA阳性Fab。测量过表达人或食蟹猴TIGIT的Expi293细胞以及亲本Expi293细胞的平均荧光强度(MFI)。计算靶特异性结合对比脱靶结合的 MFI比。显示所选克隆的数据。

图53A至C.描绘了抗TIGIT抗体的序列。除非另外指出，否则CDR利用 IMGT编号(包括序列表的抗体。

图54.显示如实施例12中所述的与Expi293人TIGIT过表达细胞结合的抗 TIGITmAb的FACS KD结果。

图55.显示与Expi293食蟹猴TIGIT过表达细胞结合的mAb的FACS KD 结果。

图56.显示实施例14的结果，其显示所得动力学速率常数和平衡解离常数，其中数据足够可靠以便估计结合常数。

图57A至B.显示实施例4中与Expi293人TIGIT过表达细胞结合的人 PVR-Fc变体的结果。图A(左)：用Expi293人TIGT过表达细胞滴定的人 PVR-m2aFc构建体产生的结合曲线。显示了KD和95％置信区间。图B(右)：用Expi293人TIGT过表达细胞滴定的人PVR-h1Fc构建体产生的结合曲线。显示了KD和95％置信区间。

图58.显示抑制人PVR-m2aFc与Expi293细胞上过表达的人TIGIT结合的噬菌体抗体的表。针对已知阻断(BM26)基准抗体和人IgG4同种型对照 (Synagis)抗体测试mAb。“是”表示mAb抑制类似于BM26的hPVR。

图59.显示抗TIGIT杂交瘤抗体抑制人PVR-h1Fc与Expi293细胞上过表达的人TIGIT结合的IC50值的表。值代表两个独立实验之一。两个独立进行的实验的IC50结果显示仅1.2-2倍的差异范围。

图60.显示实施例6的结果，即噬菌体源性和BM抗人TIGIT抗体 CPA.9.027、CPA.9.049、CPA.9.059、BM26和BM29增加IL-2信号传导。BM26 和BM29均为人IgG4(具有S241P变体的hIgG4)同种型。代表性数据(n≥2) 显示来自Jurkat IL-2-RE荧光素酶人TIGIT细胞和aAPC CHO-K1人PVR细胞的6小时共培养物的荧光素酶信号的RLU(平均值+/-标准差)。每种抗体的浓度为10μg/ml。

图61.显示实施例6的其它结果，即噬菌体源性和BM hIgG4抗人TIGIT 抗体CPA.9.027、CPA.9.049、CPA.9.059、BM26和BM29以剂量依赖性方式增加IL-2信号传导。BM26和BM29都是hIgG4同种型。代表性数据(n≥2)显示来自Jurkat IL-2-RE荧光素酶人TIGIT细胞和aAPC CHO-K1人PVR细胞的6小时共培养物的荧光素酶信号的RLU(平均值+/-标准差)。每种抗体使用以 20μg/ml开始的10个点的2倍稀释系列。

图62.显示实施例6的结果，即杂交瘤源性和BM抗人TIGIT抗体 CHA.9.536、CHA.9.541、CHA.9.546、CHA.9.547、CHA.9.560、BM26和BM29 增加IL-2信号传导。BM26和BM29都是mIgG1同种型。非阻断性抗人TIGIT 抗体CHA.9.543不增强IL-2信号传导。代表性数据(n≥2)显示来自Jurkat IL-2-RE荧光素酶人TIGIT细胞和aAPC CHO-K1人PVR细胞的6小时共培养物的荧光素酶信号的RLU(平均值+/-标准差)。每种抗体的浓度为10μg/ml。

图63.显示实施例6的结果，即杂交瘤源性和基准mIgG1抗人TIGIT抗体CHA.9.536、CHA.9.541、CHA.9.546、CHA.9.547、CHA.9.560和BM26以剂量依赖性方式增加IL-2信号传导。BM26是mIgG1同种型。代表性数据(n≥2) 显示来自Jurkat IL-2-RE荧光素酶人TIGIT细胞和aAPC CHO-K1人PVR细胞的6小时共培养物的荧光素酶信号的RLU(平均值+/-标准差)。每种抗体使用以20μg/ml开始的10个点的2倍稀释系列。

图64.显示噬菌体、杂交瘤和BM抗人TIGIT抗体CPA.9.027、CPA.9.049、CPA.9.059、CHA.9.536、CHA.9.541、CHA.9.546、CHA.9.547、CHA.9.560、BM26 和BM29增加抗原特异性IFNγ信号传导。BM26作为hIgG4和mIgG1同种型进行测试，而BM29仅作为hIgG4同种型进行测试。代表性数据(n＝2)显示 CMV特异性CD8

图65.显示噬菌体、杂交瘤和BM抗人TIGIT抗体CPA.9.027、CPA.9.049、CPA.9.059、CHA.9.536、CHA.9.541、CHA.9.546、CHA.9.547和CHA.9.560以及BM26单独(空心条)或与抗PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)(阴影条) 组合增加抗原特异性IFNγ信号传导。BM26是mIgG1同种型。对于同种型抗体对照处理，空心条是指单独的同种型抗体，阴影条是指与 CHA.7.518.1.H4(S241P)组合的同种型抗体。代表性数据(n＝2)显示CMV特异性CD8+ T细胞与过表达人PVR和人PVRL2的Mel624细胞共培养24小时后培养物上清液中IFNγ的量(平均值+/-标准差)。每种抗体的浓度为10μg/ml。分析中所用的Mel624人PVR/人PVRL2细胞用0.0033μg/ml或0.001μg/ml肽脉冲。

图66.显示用抗人TIGIT抗体、CHA.7.518.1.H4(S241P)和抗人TIGIT抗体与CHA.7.518.1.H4(S241P)的组合增加IFNγ分泌超过相应同种型对照抗体的百分比。

图67.是实施例7的表位分箱实验的树状图。

图68.是来自实施例7的表位分箱实验的抗体的分组。

图69.显示在人TIGIT过表达Expi293细胞上亲和力成熟的噬菌体抗体(CPA.9.083,CPA.9.086)、人源化杂交瘤抗体(CHA.9.547.7、CHA.9.547.13)、基准抗体(BM26、BM29)和hIgG4同种型对照(抗Synagis)的剂量滴定中与人TIGIT过表达细胞的高亲和力结合，如实施例3的实验中所述。使用以10 μg/ml(133.33nM[结合位点])开始的11个点的连续2倍稀释液滴定所有抗体。将AF647标记的山羊抗人F(ab')(JacksonImmunoresearch)添加至细胞中以侦测抗TIGIT抗体的结合。显示与人TIGIT过表达Expi293细胞(黑线)和亲本 Expi293细胞(灰线)结合的抗TIGIT抗体的gMFI。在每个图下方指示K

图70.显示在食蟹猴TIGIT过表达Expi293细胞上亲和力成熟的噬菌体抗体(CPA.9.083,CPA.9.086)、人源化杂交瘤抗体(CHA.9.547.7、CHA.9.547.13)、基准抗体(BM26、BM29)和hIgG4同种型对照(抗Synagis)的剂量滴定中，抗TIGIT抗体与食蟹猴TIGIT交叉反应，如实施例3的实验中所述。使用以10 μg/ml(133.33nM[结合位点])开始的11个点的连续2倍稀释液滴定所有抗体。将AF647标记的山羊抗人F(ab')(JacksonImmunoresearch)添加至细胞中以侦测抗TIGIT抗体的结合。显示与食蟹猴TIGIT过表达Expi293细胞(黑线)和亲本Expi293细胞(灰线)结合的抗TIGIT抗体的gMFI。在每个图下方指示 K

图71.显示在重新格式化为小鼠IgG1(mIgG1)之亲和力成熟的噬菌体抗体(CPA.9.083、CPA.9.086)、基准抗小鼠TIGIT抗体(BM27 mIgG1、BM30 mIgG1)和mIgG1同种型对照(抗Synagis)的剂量滴定中，亲和力成熟的噬菌体抗体与小鼠TIGIT交叉反应，如实施例3的实验中所述。A)与小鼠TIGIT 过表达HEK细胞(黑线)和亲本HEK细胞(灰线)结合的抗TIGIT抗体的gMFI。 B)与从Balb/c小鼠皮下植入的Renca肿瘤分离的调节性CD4+CD25+Foxp3+ T 细胞结合的抗TIGIT抗体(黑线)或Synagis mIgG1(灰线)的gMFI。使用分别以15μg/ml(200nM[结合位点])或10μg/ml(132nM[结合位点])开始的连续2或3倍稀释液系列滴定抗TIGIT抗体。将AF647标记的山羊抗小鼠IgG-Fc (Southern Biotech)添加至细胞中以检测小鼠TIGIT过表达细胞上抗TIGIT抗体的结合。将抗TIGIT抗体直接缀合至AF647以进行小鼠Treg结合。指出了每种抗TIGIT抗体的K

图72.显示来自3个健康供体PBMC(供体321、322和334)的人效应记忆CD95+CD28-CD8+CD3+ T细胞上亲和力成熟的噬菌体抗体(CPA.9.083、 CPA.9.086)、人源化杂交瘤抗体(CHA.9.547.7、CHA.9.547.13)和基准抗体 (BM26、BM29)的剂量滴定，如实施例3的实验中所述。用针对以下谱系标志物CD3、CD4、CD8、CD14、CD16、CD28、CD56和CD95的抗体(BDBiosciences,BioLegend)以及活/死可固定的水性染料(Life Technologies)对 PBMC进行表面染色。然后使用以30μg/ml(396nM[结合位点])开始的12 个点的连续3倍稀释液滴定AF647标记的抗TIGIT抗体和hIgG4同种型对照抗体(抗Synagis)。显示与效应记忆T细胞结合的抗TIGIT抗体的gMFI。表中报告了3种不同供体中每种抗体的KD值。亲和力成熟噬菌体抗体(CPA.9.083 和CPA.9.086)对人效应记忆T细胞具有最高的结合亲和力。

图73.显示从2只幼稚食蟹猴分离的PBMC的食蟹猴效应记忆 CD95

图74.显示与人、食蟹猴和小鼠TIGIT结合的抗TIGIT抗体的SPR动力学，如实施例5的实验中所述。亲和力成熟的噬菌体抗体(CPA.9.083、 CPA.9.086、CPA.9.103)、人源化杂交瘤抗体(CHA.9.547.1和CHA.9.547.7)和基准抗体(BM26、BM29)的动力学速率和平衡解离常数在ProteOn仪器上通过SPR来测定。

图75.显示抗TIGIT抗体阻断PVR/TIGIT相互作用，如实施例4的实验中所述。人TIGIT过表达Expi293细胞与亲和力成熟的噬菌体抗体(CPA.9.083、 CPA.9.086)、人源化杂交瘤抗体(CHA.9.547.7、CHA.9.547.13)、基准抗体 (BM26、BM29)或hIgG4同种型对照(抗Synagis)一起预孵育。使用以10μg/ml (133.33nM[结合位点])开始的11个点的连续2.5倍稀释液滴定所有抗体。在抗体预孵育后，将人PVR-m2aFc以158nM[结合位点]或EC

图76.显示实施例6的结果，即亲和力成熟的噬菌体抗体(CPA.9.083、CPA.9.086)、人源化杂交瘤抗体(CHA.9.547.7、CHA.9.547.13)和基准抗体 (BM26)以剂量依赖性方式增加IL-2信号传导。Synagis hIgG4是同种型对照抗体。代表性数据(n≥2)显示来自Jurkat IL-2-RE荧光素酶人TIGIT细胞和CHO-K1 人PVR细胞的6小时共培养物的荧光素酶信号的RLU(平均值+/-标准差)。每种抗体使用以20μg/ml开始的19个点的1.5倍稀释系列。

图77.显示抗TIGIT抗体在CMV特异性CD8+ T细胞中诱导IFNγ。利用人CMV特异性CD8+ T细胞的体外共培养分析来评定亲和力成熟的噬菌体抗体 (CPA.9.083、CPA.9.086)、人源化杂交瘤抗体(CHA.9.547.7、CHA.9.547.13) 和基准抗体(BM26、BM29)对抗原特异性细胞因子分泌的影响，如实施例6 的实验中所述。分析中所用的靶细胞系是内源性表达人PVR和PVRL2的 HLA-A2+胰腺癌细胞Panc.05.04。将Panc.05.04细胞用CMV pp65肽以0.03 μg/ml或0.01μg/ml在37℃下脉冲1小时。然后洗涤细胞且以50,000个细胞/ 孔涂覆在96孔圆底组织培养物处理的平板中。以0.1μg/ml的浓度添加抗人 TIGIT抗体或同种型对照hIgG4抗体(抗Synagis)。根据上述方案扩增来自单个供体的人CMV特异性CD8+ T细胞。每孔加入50,000个人CD8+ T细胞。将共培养物在37℃，5％CO2下孵育24小时。使用细胞计数珠分析(BD Biosciences)通过流式细胞术测量共培养物上清液中人干扰素γ(IFNγ)的量。相对于hIgG4同种型，每种抗体的IFNγ分泌增加百分比汇总在表中(n＝2次实验)。

图78.显示当与PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)组合时，抗TIGIT抗体增强IFNγ。利用人CMV特异性CD8+ T细胞的体外共培养分析来评定亲和力成熟的噬菌体抗体(CPA.9.083、CPA.9.086)、人源化杂交瘤抗体 (CHA.9.547.7、CHA.9.547.13)和基准抗体(BM26、BM29)与抗PVRIG抗体 CHA.7.518.1组合对抗原特异性细胞因子分泌的影响。分析中所用的靶细胞系是内源性表达人PVR和PVRL2的HLA-A2+胰腺癌细胞Panc.05.04。将Panc.05.04细胞用CMV pp65肽以0.03μg/ml或0.01μg/ml在37℃下脉冲1小时。然后洗涤细胞且以50,000个细胞/孔涂覆在96孔圆底组织培养物处理的平板中。抗人TIGIT抗体或同种型对照hIgG4抗体(抗Synagis)以0.1μg/ml的浓度与10μg/ml的CHA.7.518.1(阴影条)或对照hIgG4同种型抗体(实心条) 组合添加。根据上述方案扩增来自单个供体的人CMV特异性CD8+ T细胞。每孔加入50,000个人CD8+ T细胞。将共培养物在37℃，5％CO2下孵育24小时。使用细胞计数珠分析(BD Biosciences)通过流式细胞术测量共培养物上清液中人IFNγ的量。相对于hIgG4同种型，每种抗体的IFNγ分泌增加百分比汇总在表中(n＝2次实验)。

图79.显示来自解离的肿瘤的CD4+和CD8+ T细胞上PVRIG和TIGIT表达的相关性分析。对于每个肿瘤样品，计算平均荧光强度比(MFIr)，进行斯皮尔曼相关性分析(Spearman's correlation analysis)，并报告r2和p值。

图80.显示用抗小鼠PVRIG抗体处理的TIGIT KO小鼠的肿瘤生长抑制和存活率结果。向各组7-10只TIGIT KO和C57BL/6 WT小鼠皮下注射1×10

图81.描绘了与Mel-624、Colo205和Panc.05.04细胞中的对照相比使用指定抗体的组合处理。将gp100或CMVpp65特异性T细胞与10mg/ml Mel-624、 Colo205和Panc.05.04细胞、gp100或CMVpp65肽以及指定抗体共培养。在24 小时测定条件培养基中的IFN-γ浓度。显示一式三份的平均值+标准差。显示了相对于hIgG4的每种条件的IFN-γ的％变化。

图82A至C.描绘了CD8 T细胞上PD-1/TIGIT/PVRIG的表达和Colo205、 Panc.05.04细胞上PD-L1、PVR、PVRL2的表达。A)在用pp65肽与IL-2和IL-7 扩增10天的CMVpp65反应性T细胞上PVRIG、TIGIT和PD-1的表达。显示了CMVpp65反应性T细胞上PVRIG、TIGIT和PD-1的表达。B)显示了在 Colo205和Panc.05.04细胞上PD-L1、PVR和PVRL2的表达。C)将CMVpp65 特异性T细胞与10mg/ml Colo205和Panc.05.04细胞、CMVpp65肽和指定抗体共培养。在24小时测定条件培养基中的IFN-γ浓度。显示一式三份的平均值 +标准差。显示了相对于hIgG4的每种条件的IFN-γ的％变化。

图83.PVRIG在人癌症的细胞毒性淋巴细胞亚群中表达最高。A)显示了 PVRIG在5-8个健康供体PBMC的白细胞细胞亚群上的表达。PVRIG表达定义为PVRIG MFI相对于同种型对照MFI的比率。B)显示了与来自5个健康供体PBMC的CD8 T细胞亚群相比，外周血Treg上PVRIG、TIGIT、CD96和 PD-1的表达。C)来自3个健康供体的CMV pp65特异性T细胞在体外用pp65 (495-503)肽、IL-2和IL-7扩增长达7天。显示了TIGIT(蓝色)和PVRIG(黑色)在HLA-A2/pp65(495-503)四聚体阳性细胞上的表达。D)用同种异体 DC培养人T细胞，并在活化后第0天、第1天、第2天和第7天显示CD4

图84.PVRL2表达在肿瘤微环境中增强。A)通过IHC评定肺、卵巢/子宫内膜、乳腺、结肠、肾和黑素瘤肿瘤的PVRL2表达。条形图描绘了平均值± SEM。对于每个肿瘤，由病理学家评定2个核心，并基于补充方法中描述的肿瘤细胞上膜染色的盛行率和强度进行评分。对于每个肿瘤，显示2个核心的平均得分。B)显示代表性黑素瘤肿瘤，其在肿瘤细胞(箭头)和基质中的免疫细胞(*)中显示PVRL2表达。C)显示CD45

图85.PVRL2和PD-L1对肿瘤细胞的不同调节。A)通过IHC在连续切片上评定PD-L1和PVRL2的表达。基于组织类型对来自图84A的肿瘤样品进行分组，并且显示PD-L1阴性和PD-L1阳性的PVRL2的表达。PD-L1阴性肿瘤定义为对于给定肿瘤，来自任一一式两份核心的肿瘤或免疫细胞上没有膜染色。PD-L1阳性染色定义为肿瘤的至少1个核心上的膜染色。条形图描绘了每组的平均值±SEM。B，C)PVRL2

图86.CHA.7.518.1.H4(S241P)是一种增强T细胞活化的高亲和力抗体。A) 通过FACS显示CHA.7.518.1.H4(S241P)或IgG同种型对照与HEK293 PVRIG 或HEK293亲本细胞的结合。显示CHA.7.518.1.H4(S241P)与HEK293 hPVRIG、 HEK293 cPVRIG和Jurkat细胞结合的FACS KD值。B)CHA.7.518.1.H4(S241P) 破坏PVRL2 Fc与异位表达PVRIG的HEK293细胞的结合。显示一式三份值的平均值±标准差。C)CHA.7.518.1.H4(S241P)阻断PVRIG Fc与内源性表达PVRL2 的HEK293细胞的结合。D)人类CD4 T细胞与表达细胞表面结合的抗CD3抗体和hPVRL2的aAPC CHO细胞在10μg/ml抗PVRIG抗体和人类IgG同种型对照抗体存在下共培养。显示了抗PVRIG Ab对从11个不同供体分离的CD4 T 细胞增殖的影响。条形图描绘了平均值±SEM。E)gp100特异性T细胞系 (TIL-209、TIL-463)与经过工程改造以表达HLA-A2和PVRL2的CHO细胞连同10μg/ml抗PVRIG或IgG同种型对照抗体共培养。在共培养后24小时测试IFN-γ和TNF-α的产生。显示一式三份值的平均值±标准差。相对于同种型对照的每种条件下IFN-γ和TNF-α的百分比变化由每个条上方的数字表示。F)显示MEL624、Colo205和Panc.05.04细胞上PVR、PVRL2和PD-L1(红色)相对于IgG(蓝色)的表达。对于T细胞，显示TIL-209和TIL-463gp100特异性 T细胞上以及CMVpp65特异性T细胞上PVRIG、TIGIT和PD-1(红色)相对于IgG(蓝色)的表达。为了扩增CMVpp65反应性T细胞，将PBMC与pp65 (495-503)肽、IL-2和IL-7一起培养10天。PVRIG、TIGIT、PD-1的表达显示在HLA-A2/pp65四聚体阳性细胞上。G)由来源于黑素瘤肿瘤的TILS扩增的gp100特异性T细胞(TIL-209、TIL-463)与MEL624细胞在10g/ml指定抗体存在下共培养。在24小时测定条件培养基中的IFN-γ浓度。H，I)将扩增的CMVpp65特异性T细胞与10g/ml Colo205和Panc.05.04细胞、CMVpp65 肽和指定抗体共培养。在24小时测定条件培养基中的IFN-γ浓度。对于E、G、 H、I，显示一式三份的平均值±标准差。相对于同种型对照的每种条件下IFN-γ的百分比变化由每个条上方的数字表示。

图87.PVRIG缺陷小鼠具有增加的T细胞功能。A)评定通过qRT-PCR从纯化的小鼠免疫细胞亚群测量的PVRIG的RNA表达。管家的相对表达由Ct 法确定。B)用gp100(25-33)活化pmel CD8

图88.PVRIG缺乏导致肿瘤生长减少和CD8+效应T细胞机制增加。A)向 C57BL/6 WT或PVRIG

图89.拮抗性抗PVRIG抗体协同抑制PD-1抑制剂或TIGIT遗传缺陷组合中生长的肿瘤。A)显示mPVRL2 Fc融合蛋白与mPVRIG HEK293工程细胞的结合，所述mPVRIG HEK293工程细胞与连续稀释的抗mPVRIG mAb或IgG 同种型对照Ab预孵育。B)向BALB/c小鼠皮下注射5×10

图90.PVRIG在人癌症中TILS的T细胞和NK细胞上表达。A)显示 PVRIG、TIGIT、CD96和PD-1在来自健康供体PBMC的CD4 T细胞亚群上的表达。显示平均值±SEM。B)将人T细胞与同种异体PBMC共培养，并显示 PVRIG蛋白在CD4和CD8 T细胞上的表达(上图)。C)解离肿瘤并用抗CD3 和抗CD28活化单细胞。在第0天(直接离体)和活化后第5天评定PVRIG(蓝色)相对于IgG同种型对照(红色)的表达。D)显示PVRIG在来自解离的人肿瘤的NK细胞上的表达。每个点代表来自个别患者的不同肿瘤。显示平均值± 95％置信区间。D)解离的肿瘤细胞用抗CD3和抗CD28珠活化5天。对于2 个解离的肿瘤样品，显示在第0天直接离体和在活化后第5天PVRIG(蓝色) 相对于IgG对照(红色)在CD4和CD8 T细胞上的表达。E)评定PVRIG在来自解离的肿瘤和来自解离的供体匹配的正常邻近组织的CD4和CD8 T细胞上的表达。每条线代表从个别患者获得的匹配组织。进行了配对的学生t检验。F)显示在来自肿瘤的CD4和CD8 T细胞上PVRIG、TIGIT和PD-1相对于IgG 同种型对照的倍数表达量级的相关性分析。每个点代表单个肿瘤样品。显示了斯皮尔曼相关系数和p值。

图91.PVRL2的表达在结肠癌、皮肤癌和乳腺癌中得到增强。A)显示Sigma 抗人PVRL2抗体与阳性细胞CHO-S人PVRL2(右)的FFPE切片的结合与在 pH9下抗原修复后的阴性细胞CHO-S(左)相比的显微照片。B)在一组PVRL2

图92.与正常邻近组织相比，肿瘤中TAM和CD45

图93.PVRIG和PVRL2在相同的肿瘤样品中共表达。对于单个肿瘤，将 CD4 T细胞(A)和NK细胞(B)上的PVRIG表达针对TAMS上的PVRL2 表达作图。

图94.CHA.7.518.1.H4(S241P)对人T细胞的活性。A)PVRIG在用表达细胞表面结合的抗CD3和PVRL2的CHO细胞活化的CD4 T细胞上的表达。B) 显示HLA-A2、B-2m和PVRL2在CHO-S亲本细胞系和经过工程改造的CHO-S 细胞系上的表达。相对于同种型的表达倍数由数字表示。C)异位表达细胞表面结合的抗CD3和PVRL2的CHO细胞与纯化的CD8 T细胞在不同浓度的抗 PVRIG Ab或相关IgG对照存在下共培养。显示％增殖。每个点代表一式三份值的平均值。D)异位表达HLA-A2/B2m和PVRL2的CHO细胞与2个gp100特异性T细胞系(TIL F4、TIL209)在1μg/ml gp100和不同浓度的抗PVRIG抗体或相关IgG对照存在下共培养。TNF-α浓度在共培养的第3天下降。每个值代表一式三份的平均值。

图95.mPVRIG结合相互作用和替代抗mPVRIG抗体的表征。A，B)通过表面等离子共振评定mPVRIG与mPVRL2的结合。C)可溶性受体Fc或对照蛋白在剂量反应中与固定化的mPVRL2 HIS以ELISA形式孵育。显示了结合的受体Fc。D)可溶性PVRL2 HIS蛋白在剂量反应中用PVRIG Fc或Fc涂布板孵育。E)显示mPVRIG Fc或对照Fc融合蛋白与用mPVRL2 siRNA、mPVRsRNA 或乱序siRNA转染转染的B16-F10细胞系的结合。F)通过检查抗mPVRIG与过表达mPVRIG的HEK293细胞的结合来进行大鼠抗小鼠PVRIG mAb的亲和力表征。G)显示通过检查抗mPVRIG与内源性表达mPVRIG的D10.G4.1细胞系相对于同种型对照大鼠IgG来进行大鼠抗小鼠PVRIG mAb的亲和力表征。H)抗mPVRIG与用小鼠PVRIG-siRNA(绿色直方图)相对于scrsiRNA (橙色直方图)转染的D10.G4.1细胞的结合。I)用抗mPVRIG Ab预孵育的 mPVRIG Fc与内源性表达PVRL2的B16-F10细胞的结合。

图96.转基因PVRIG和TIGIT敲除小鼠的产生。PVRIG条件性敲除和Tigit 敲除小鼠品系由Ozgene Pty Ltd(Bentley WA，Australia)生成。A)将PVRIG 外显子1至4条件性敲除的靶向构建体电穿孔至C57BL/6ES细胞系Bruce4中 (Koentgen等人,《国际免疫学(IntImmunol)》5:957-964,1993)。B)将Tigit 外显子1(包括ATG)以及外显子2和3的编码区用FRT侧翼的neo盒替换的靶向构建体电穿孔至C57BL/6ES细胞系Bruce4中。通过Southern杂交鉴定同源重组ES细胞克隆并将其注射至goGermline胚泡中(Koentgen等人,《起源(genesis)》54:326-333,2016)。获得雄性嵌合小鼠并与C57BL/6J雌性杂交以在C57BL/6背景上建立杂合种系后代。将种系小鼠与普遍存在的FLP C57BL/6 小鼠品系杂交以除去FRT侧翼选择标记盒并产生条件性或敲除等位基因(分别用于PVRIG和Tigit)。对于PVRIG敲除，将小鼠进一步与普遍存在的Cre C57BL/6小鼠品系杂交以除去loxP侧翼外显子并产生敲除等位基因。

图97.PVRIG敲除小鼠与野生型小鼠的免疫表型相似。在静脉血收集在抗凝血剂涂布的试管中并收获器官之前，对小鼠(每个野生型和PVRIG敲除群组 n＝5)实施安乐死。从新收获的骨髓、胸腺、脾脏、皮肤和肠系膜淋巴结中回收单细胞。细胞用荧光染料缀合的表面标志物抗体染色并在BD LSR Fortessa 流式细胞仪上获得。各图示出了各种淋巴组织类型中骨髓细胞(A)、树突状细胞(B)、B细胞(C)、T细胞(D)、CD4 T细胞(E)、CD8 T细胞(F)和NK细胞(G)的可比频率。(H-I)在Hemavet 950兽医血液学系统上运行全静脉血，以比较来自野生型和PVRIG缺陷小鼠的血细胞亚群的差异计数和频率。

图98.与用抗PD-L1处理的WT相比，用抗PDL1处理的PVRIG

图99.抗TIGIT和抗PVRIG抗体诱导肿瘤细胞杀伤。利用扩增的人CMV 特异性CD8+T细胞的体外共培养分析来评定基准抗TIGIT抗体和 CHA.7.518.1.H4(S241P)对抗原特异性肿瘤细胞杀伤的影响。用于分析的 HLA-A2+靶细胞系是Mel624(A)和Panc05.04(B)。Synagis hIgG4是同种型对照抗体。用Bio-Glo荧光素酶底物测量靶细胞中的荧光素酶活性。代表性数据(n≥2)显示与来自三个不同供体的人CMV特异性CD8+ T细胞共培养16 小时后Mel624或Panc05.04细胞的特异性杀伤百分比(平均值+/-标准差)。

图100.抗TIGIT抗体与CHA.7.518.1.H4(S241P)的剂量依赖性肿瘤细胞杀伤。用人CMV特异性CD8+ T细胞进行体外共培养分析，用于评定两种不同抗 TIGIT抗体BM26和CPA.9.086与CHA.7.518.1.H4(S241P)组合时对抗原特异性 Mel624细胞杀伤的影响。用Bio-Glo荧光素酶底物测量靶细胞中的荧光素酶活性。代表性数据(n≥2)显示与来自一个供体的人CMV特异性CD8+ T细胞共培养16小时后Mel624细胞的特异性杀伤百分比(平均值+/-标准差)。

图101.CPA.9.086CDR序列，IMGT和Kabat编号。

图102.抗TIGIT hIgG4+CHA.7.518.1.H4(S241P)组合诱导肿瘤细胞杀伤。 CMV反应性CD8+ T细胞与Mel624 PVR、PVRL2和荧光素酶OE单剂量10 μg/ml aTIGIT Ab和10μg/mlCHA.7.518.1.H4(S241P)与CMV反应性供体4共培养，而剂量滴定开始于0.5μg/ml aTIGITAb和10μg/ml CHA.7.518.1.H4(S241P) 与CMV反应性供体156。

具体实施方式

A.概观

本发明提供了许多单独或组合使用的有用抗体，用于治疗癌症。癌症可以被认为是患者无法识别和消除癌细胞。在许多情况下，这些转化的(例如癌性) 细胞抵消免疫监视。存在限制体内T细胞活化的自然控制机制以防止无限制的 T细胞活性，其可被癌细胞利用以逃避或抑制免疫反应。恢复免疫效应细胞(尤其是T细胞)识别和消除癌症的能力是免疫疗法的目标。免疫肿瘤学领域，有时被称为“免疫疗法”，正在迅速发展，最近批准了T细胞检查点抑制性抗体，如Yervoy、Keytruda和Opdivo。这些抗体通常被称为“检查点抑制剂”，因为它们阻断T细胞免疫的正常负调节因子。通常理解的是，共刺激和共抑制的各种免疫调节信号可用于协调最佳抗原特异性免疫反应。通常，这些抗体结合检查点抑制蛋白，例如CTLA-4或PD-1，其在正常情况下预防或抑制细胞毒性T 细胞(CTL)的活化。通过抑制检查点蛋白质，例如通过使用结合这些蛋白质的抗体，可以实现针对肿瘤的T细胞反应增加。也就是说，这些癌症检查点蛋白质抑制免疫反应；当例如使用针对检查点蛋白质的抗体阻断蛋白质时，免疫系统被活化，产生免疫刺激，从而治疗如癌症和传染病的病况。

本发明涉及针对其它检查点蛋白质PVRIG和TIGIT的抗体的用途。PVRIG 在NK细胞和T细胞的细胞表面上表达，并且与其它已知的免疫检查点具有若干相似之处。用于显示PVRIG是检查点受体的鉴定和方法在WO2016/134333 中进行了讨论，所述文献通过引用明确地并入本文。本文提供了阻断PVLR2 的相互作用和/或结合的人PVRIG抗体。当PVRIG与其配体(PVRL2)结合时，引发抑制信号，其起到减弱NK细胞和T细胞针对靶细胞的免疫反应(即类似于PD-1/PDL1)的作用。阻断PVRL2与PVRIG的结合会切断PVRIG的这种抑制信号，并因此调节NK细胞和T细胞的免疫反应。利用阻断与PVRL2结合的PVRIG抗体是一种增强NK细胞和T细胞杀伤癌细胞的治疗方法。已经产生阻断抗体，其结合PVRIG并阻断其配体PVRL2的结合。提供了抗PVRIG抗体与其它检查点抑制剂抗体如PD-1的组合。

类似地，已经显示TIGIT也具有检查点受体的属性，并且本发明提供了阻断TIGIT与PVR的相互作用和/或结合的抗TIGIT抗体。当TIGIT与其配体 (PVR)结合时，引发抑制信号，其起到减弱NK细胞和T细胞针对靶细胞的免疫反应(即类似于PD-1/PDL1)的作用。阻断PVR与TIGIT的结合会切断TIGIT 的这种抑制信号，并因此调节NK细胞和T细胞的免疫反应。利用抗TIGIT的抗体阻断与PVR的结合是一种增强NK细胞和T细胞杀伤癌细胞的治疗方法。已经产生阻断抗体，其结合TIGIT并阻断其配体PVR的结合。提供了抗TIGIT 抗体与其它检查点抑制剂抗体如PD-1的组合。

另外，本发明提供了用于治疗癌症的抗PVRIG和抗TIGIT抗体的组合。

B.定义

为了能更全面地了解本申请，下文阐述若干定义。这些定义意味着包含语法等同物。

本文的“消融”是指活性的降低或除去。在一些实施方案中，从抗体的恒定结构域中除去活性是有用的。因此，例如，“消融FcγR结合”意指与不含特定变体的Fc区相比，Fc区氨基酸变体具有小于50％的起始结合，其中小于70-80-90-95-98％的活性损失是优选的，并且通常，活性低于Biacore分析中可检测的结合水平。如图50所示，IgG1恒定区中的一个消融变体是N297A变体，其除去天然糖基化位点并显著降低FcγRIIIa结合，从而降低抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。

“抗原结合结构域”或“ABD”在本文中是指一组六个互补决定区 (ComplementaryDetermining Region，CDR)，当作为多肽序列的一部分存在时，特异性结合如本文所论述的靶抗原。因此，“TIGIT抗原结合结构域”结合如本文所概述的TIGIT抗原(其序列如图51所示)。类似地，“PVRIG抗体结合结构域”结合如本文所概述的PVRIG抗原(其序列如图1所示)。如本领域中已知，这些CDR通常作为第一组可变重链CDR(vhCDR或V

本文的“修饰”是指多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失或与蛋白质化学连接的部分的改变。例如，修饰可以是连接于蛋白质的改变的碳水化合物或PEG结构。本文的“氨基酸修饰”是指多肽序列中的氨基酸取代、插入和/ 或缺失。为清楚起见，除非另有说明，否则氨基酸修饰始终是由DNA编码的氨基酸，例如在DNA和RNA中具有密码子的20个氨基酸。

本文的“氨基酸取代”或“取代”是指用不同的氨基酸替换亲本多肽序列中特定位置的氨基酸。特别地，在一些实施方案中，取代是针对并非天然存在于特定位置、并非天然存在于生物体内或任何生物体内的氨基酸。例如，取代N297A是指在位置297处的天冬酰胺被丙氨酸替换的变体多肽，在这种情况下是Fc变体。为了清楚起见，已经过工程改造以改变核酸编码序列但不改变起始氨基酸(例如将CGG(编码精氨酸)换成CGA(仍然编码精氨酸)来提高宿主生物体表达水平)的蛋白质不是“氨基酸取代”；也就是说，尽管创建了编码相同蛋白质的新基因，但是如果蛋白质在其起始的特定位置具有相同的氨基酸，那么它就不是氨基酸取代。

本文所用的“氨基酸插入”或“插入”是指在亲本多肽序列的特定位置添加氨基酸序列。例如，-233E或233E表示在位置233之后和位置234之前插入谷氨酸。另外，-233ADE或A233ADE表示在位置233之后和位置234之前插入AlaAspGlu。

本文所用的“氨基酸缺失”或“缺失”是指除去亲本多肽序列中特定位置的氨基酸序列。例如，E233-或E233#，E233()或E233del表示在位置233 处的谷氨酸的缺失。另外，EDA233-或EDA233#表示从位置233开始的序列 GluAspAla的缺失。

本文所用的“变体蛋白质”或“蛋白质变体”或“变体”是指通过至少一个氨基酸修饰而不同于亲本蛋白质的蛋白质。蛋白质变体可以指蛋白质本身、包含蛋白质的组合物或编码它的氨基酸序列。优选地，蛋白质变体与亲本蛋白质相比具有至少一个氨基酸修饰，例如与亲本相比，约1个至约70个氨基酸修饰，优选约1个至约5个氨基酸修饰。如下所述，在一些实施方案中，亲本多肽，例如Fc亲本多肽，是人野生型序列，例如来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 的Fc区，尽管具有变体的人序列也可以充当“亲本多肽”。本文的蛋白质变体序列优选与亲本蛋白质序列具有至少约80％的同一性，最优选至少约90％的同一性，更优选至少约95-98-99％的同一性。变体蛋白质可以指变体蛋白质本身、包含蛋白质变体的组合物或编码它的DNA序列。因此，本文所用的“抗体变体”或“变体抗体”是指通过至少一个氨基酸修饰与亲本抗体不同的抗体，本文所用的“IgG变体”或“变体IgG”是指通过至少一个氨基酸修饰与亲本IgG (同样，在许多情况下，来自人IgG序列)不同的抗体，并且本文所用的“免疫球蛋白变体”或“变体免疫球蛋白”是指通过至少一个氨基酸修饰与亲本免疫球蛋白序列不同的免疫球蛋白序列。本文所用的“Fc变体”或“变体Fc”是指包含Fc结构域中的氨基酸修饰的蛋白质。本发明的Fc变体是根据构成它们的氨基酸修饰来定义。因此，例如，S241P或S228P是相对于亲本IgG4铰链多肽在位置228处具有取代脯氨酸的铰链变体，其中编号S228P是根据EU索引而 S241P是Kabat编号。EU索引或如Kabat或EU编号方案中的EU索引是指EU 抗体的编号(Edelman等人,1969,《美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci USA)》63:78-85，在此通过引用整体并入)。修饰可以是添加、缺失或取代。取代可包括天然存在的氨基酸，在某些情况下，可包括合成氨基酸。实例包括美国专利第6,586,207号；WO 98/48032；WO 03/073238；US2004-0214988A1； WO 05/35727A2；WO 05/74524A2；J.W.Chin等人,(2002),《美国化学会志 (Journal of the American Chemical Society)》124:9026-9027；J.W.Chin和P. G.Schultz,(2002),《生物化学(ChemBioChem)》11:1135-1137；J.W.Chin等人,(2002),《美国PICAS》99:11020-11024；以及L.Wang和P.G.Schultz,(2002),《化学(Chem.)》1-10，全部通过引用并入。

如本文所用，“蛋白质”在本文中是指至少两个共价连接的氨基酸，其包括蛋白质、多肽、寡肽和肽。肽基可包含天然存在的氨基酸和肽键，或合成的拟肽结构，即“类似物”，例如拟肽(参见Simon等人,《美国科学院院报》 89(20):9367(1992)，通过引用整体并入)。氨基酸可以是天然存在的或合成的(例如不是由DNA编码的氨基酸)；如本领域技术人员所理解的。例如，出于本发明的目的，同型苯丙氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸和正亮氨酸被认为是合成氨基酸，并且可以使用D-和L-(R或S)构型的氨基酸。本发明的变体可包含修饰，其包括使用例如Schultz和同事开发的技术掺入的合成氨基酸，所述技术包括但不限于Cropp和Shultz,2004,《遗传学趋势(Trends Genet.)》20(12):625-30， Anderson等人,2004,《美国国家科学院院刊》101(2):7566-71，Zhang等人, 2003,303(5656):371-3和Chin等人,2003,《科学(Science)》301(5635):964-7 所描述的方法，均通过引用整体并入。另外，多肽可包括一个或多个侧链或末端的合成衍生、糖基化、聚乙二醇化、环状排列、环化、与其它分子的接头、与蛋白质或蛋白质结构域的融合以及肽标签或标记的添加。

本文所用的“残基”是指蛋白质中的位置及其相关的氨基酸身份标识。例如，天冬酰胺297(也称为Asn297或N297)是人抗体IgG1中位置297处的残基。

本文所用的“Fab”或“Fab区”是指包含VH、CH1、VL和CL免疫球蛋白结构域的多肽。Fab可以单独指代该区域，或者在全长抗体或抗体片段的背景下指代该区域。

本文所用的“Fv”或“Fv片段”或“Fv区”是指包含单一抗体的VL和 VH结构域的多肽。如本领域技术人员所理解，这些通常由两条链构成。

本文中的“单链Fv”或“scFv”是指通常使用如本文所讨论的scFv接头将重链可变结构域共价连接至轻链可变结构域，以形成scFv或scFv结构域。scFv 结构域从N端至C端可呈任一定向(vh-接头-vl或vl-接头-vh)。通常，接头是本领域公知的scFv接头，接头肽主要包括以下氨基酸残基：Gly、Ser、Ala或 Thr。接头肽应具有足以连接两个分子的长度，使得它们相对于彼此呈现正确的构象，从而使得它们保留所需的活性。在一个实施方案中，接头为约1至50 个氨基酸长，优选约1至30个氨基酸长。在一个实施方案中，可以使用1至 20个氨基酸长的接头，在一些实施方案中发现使用约5至约10个氨基酸。有用的接头包括甘氨酸-丝氨酸聚合物，包括例如(GS)n、(GSGGS)n、(GGGGS)n 和(GGGS)n，其中n是至少一(通常为3至4)的整数；甘氨酸-丙氨酸聚合物；丙氨酸-丝氨酸聚合物和其它柔性接头。或者，各种非蛋白质聚合物，包括但不限于可用作接头的聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧化烯或聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物，可用作接头。

本文所用的“IgG亚类修饰”或“同种型修饰”是指将一种IgG同种型的一个氨基酸转化为不同的比对IgG同种型中的相应氨基酸的氨基酸修饰。例如，因为在EU位置296处IgG1包含酪氨酸并且IgG2包含苯丙氨酸，所以IgG2 中的F296Y取代被认为是IgG亚类修饰。类似地，因为IgG1在位置241处具有脯氨酸而IgG4在那里具有丝氨酸，所以具有S241P的IgG4分子被认为是IgG 亚类修饰。注意，亚类修饰在本文中被认为是氨基酸取代。

本文所用的“非天然存在的修饰”是指不是同种型的氨基酸修饰。例如，因为没有IgG在位置297处包含天冬酰胺，所以IgG1、IgG2、IgG3或IgG4(或其杂合体)中的取代N297A被认为是非天然存在的修饰。

本文所用的“氨基酸”和“氨基酸身份标识”是指由DNA和RNA编码的 20种天然存在的氨基酸之一。

本文所用的“效应功能”是指由抗体Fc区与Fc受体或配体相互作用产生的生物化学事件。效应功能包括但不限于ADCC、ADCP和CDC。

本文所用的“IgG Fc配体”是指与IgG抗体Fc区结合以形成Fc/Fc配体复合物的任何生物体的分子，优选多肽。Fc配体包括但不限于FcγRI、FcγRII、 FcγRIII、FcRn、C1q、C3、甘露聚糖结合凝集素、甘露糖受体、葡萄球菌蛋白 A、链球菌蛋白G和病毒FcγR。Fc配体还包括Fc受体同源物(FcRH)，其是与FcγR同源的Fc受体家族(Davis等人,2002,《免疫评论(Immunological Reviews)》190:123-136，通过引用整体并入)。Fc配体可包括结合Fc的未发现分子。特定的IgG Fc配体是FcRn和Fcγ受体。本文所用的“Fc配体”是指与抗体Fc区结合以形成Fc/Fc配体复合物的任何生物体的分子，优选多肽。

本文所用的“亲本多肽”是指随后经过修饰以产生变体的起始多肽。亲本多肽可以是天然存在的多肽，或天然存在的多肽的变体或工程改造版本。亲本多肽可以指多肽本身、包含亲本多肽的组合物或编码它的氨基酸序列。因此，本文所用的“亲本免疫球蛋白”是指未修饰的免疫球蛋白多肽，其被修饰以产生变体，并且本文所用的“亲本抗体”是指未修饰的抗体，其被修饰以产生变体抗体。应注意，“亲本抗体”包括如下概述的已知的商业重组产生的抗体。

本文使用的“Fc”或“Fc区”或“Fc结构域”是指包含抗体恒定区(不包括第一恒定区免疫球蛋白结构域)的多肽，并且在一些情况下是铰链的一部分。因此，Fc是指IgA、IgD和IgG的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域，IgE和 IgM的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域，以及这些结构域N端的柔性铰链。对于IgA和IgM，Fc可包括J链。对于IgG，Fc结构域包含免疫球蛋白结构域 Cγ2和Cγ3(Cγ2和Cγ3)以及Cγ1(Cγ1)和Cγ2(Cγ2)之间的下铰链区。尽管Fc区的边界可以变化，但是人IgG重链Fc区通常被定义为包括其羧基端的残基C226或P230，其中编号是根据如Kabat中的EU索引。在一些实施方案中，如下文更全面地描述，对Fc区进行氨基酸修饰，例如改变与一种或多种 FcγR受体或FcRn受体的结合。

“重链恒定区”在本文中是指抗体的CH1-铰链-CH2-CH3部分。

本文所用的“位置”是指蛋白质序列中的位置。位置可以顺序编号，或根据确定的形式(例如用于抗体编号的EU索引)编号。

本文所用的“靶抗原”是指由给定抗体的可变区特异性结合的分子。在本发明的情况下，本文中所关注的一种靶抗原是TIGIT，通常是人TIGIT和任选的食蟹猴TIGIT，如下文所定义。另一种所关注的靶抗原是PVRIG，通常是人 PVRIG和任选的食蟹猴PVRIG，如下文所定义。

本文使用的“靶细胞”是指表达靶抗原的细胞。

本文所用的“可变区”是指免疫球蛋白的区域，其包含一个或多个基本上由分别构成κ、λ和重链免疫球蛋白基因座的Vκ(V.κ)、Vλ(V.λ)和/或VH基因编码的Ig结构域。

“野生型或WT”在本文中是指在自然界中发现的氨基酸序列或核苷酸序列，包括等位基因变异。WT蛋白质具有未经有意修饰的氨基酸序列或核苷酸序列。

本发明的抗体通常是分离的或重组的。当用于描述本文公开的各种多肽时，“分离的”是指多肽已经从表达其的细胞或细胞培养物中鉴定和分离和/或回收。通常，通过至少一个纯化步骤制备分离的多肽。“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其它抗体的抗体。“重组”是指使用重组核酸技术在外源宿主细胞中产生抗体。

“特异性结合”或“特异性结合于”特定抗原或表位，或“对”特定抗原或表位“具有特异性”意指与非特异性相互作用可测量地不同的结合。特异性结合可以例如通过相较于对照分子的结合测定分子的结合来测量，对照分子通常是不具有结合活性的类似结构的分子。例如，可以通过与类似于靶标的对照分子竞争来确定特异性结合。

针对特定抗原或表位的特异性结合可以例如通过抗体对抗原或表位的KD 为至少约10

另外，可以例如通过抗体对抗原或表位的KA或Ka对于表位相对于对照大至少20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍或更多倍来展现对特定抗原或表位的特异性结合，其中KA或Ka是指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率。通常使用表面等离子共振(例如Biacore分析)和使用表达抗原的细胞的流式细胞术测量结合亲和力。

C.序列

序列表提供了许多基于图53格式的序列；参考USSN 62/513,916的图4(在此明确通过引用并入)作为序列标记的指导。重链可变结构域用标识符标记(例如“CPA.0.86”)，接下来的序列遵循本说明书的图53的格式(与上面提及的图 4的格式相同)，其中下一个序列标识符是vhCDR1，紧接着是vhCDR2与 vhCDR3、全长重链、轻链可变结构域vlCDR1、vlCDR2、vlCDR3和全长轻链。因此，单个抗体具有10个相关的序列标识符。)。序列表中包括BM26小鼠IgG1 (BM26-M1)(WO2016/028656A1，克隆31C6)和BM29小鼠IgG1(BM29- M1)(US2016/0176963A1，克隆22G2)的序列。除非另有说明，否则TIGIT 抗体的全长HC序列是H4(S241P)形式。

D.PVRIG蛋白

本发明提供了特异性结合PVRIG蛋白并防止被其配体蛋白PVRL2(人质膜糖蛋白)活化的抗体。PVRIG，也称为含有脊髓灰质炎病毒受体相关免疫球蛋白结构域的蛋白质、Q6DKI7或C7orf15，涉及RefSeq登录标识符NP_076975 中所示的氨基酸和核酸序列，如图1所示。人脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白2 (PVLR2，也称为nectin-2、CD112或疱疹病毒侵入介体B(HVEB))，即PVRIG 的结合配偶体(如美国公开2016/0244521的实施例5中所示)的序列如图2所示。本发明的抗体对PVRIG细胞外结构域具有特异性，从而阻断PVRIG和 PVLR2的结合。

PVRIG是一种长度为326个氨基酸的跨膜结构域蛋白，具有信号肽(跨越氨基酸1至40)、细胞外结构域(跨越氨基酸41至171)、跨膜结构域(跨越氨基酸172至190)和细胞质结构域(跨越氨基酸191至326)。有两个可以是起始密码子的甲硫氨酸，但成熟蛋白质是相同的。

因此，如本文所用，术语“PVRIG”或“PVRIG蛋白”或“PVRIG多肽”可任选地包括任何此类蛋白质，或其变体、缀合物或片段，包括但不限于如本文所述的已知或野生型PVRIG以及任何天然存在的剪接变体、氨基酸变体或同种型，特别是PVRIG的ECD片段。

如本文所指出并在下文中更全面地描述，抗PVRIG抗体(包括抗原结合片段)既与PVRIG结合又防止被PVRL2活化(例如最常见地通过阻断PVRIG和 PVLR2的相互作用)，用于增强T细胞和/或NK细胞活化并用于治疗如癌症和病原体感染的疾病。

E.TIGIT蛋白

本发明提供了特异性结合TIGIT蛋白并防止被其配体蛋白PVR，即脊髓灰质炎病毒受体(也称为CD155)，一种人质膜糖蛋白活化的抗体。TIGIT或具有 Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体是共抑制性受体蛋白，也称为WUCAM、 Vstm3或Vsig9。TIGIT具有免疫球蛋白可变结构域、跨膜结构域和基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)，并含有PVR蛋白家族的特征序列元件。TIGIT 和PVR的细胞外结构域(ECD)序列显示在图51中。本发明的抗体对TIGITECD 具有特异性，从而阻断TIGIT和PVR的结合

因此，如本文所用，术语“TIGIT”或“TIGIT蛋白”或“TIGIT多肽”可任选地包括任何此类蛋白质，或其变体、缀合物或片段，包括但不限于如本文所述的已知或野生型TIGIT，以及任何天然存在的剪接变体、氨基酸变体或同种型，特别是TIGIT的ECD片段。

如本文所指出并在下文中更全面地描述，抗TIGIT抗体(包括抗原结合片段)既结合TIGIT又防止被PVR活化(例如最常见地通过阻断TIGIT和PVR 的相互作用)，用于增强T细胞和/或NK细胞活化并用于治疗如癌症和病原体感染的疾病。

VI.抗体

如下所述，通常使用术语“抗体”。传统的抗体结构单元通常包含四聚体。每个四聚体通常由两对相同的多肽链构成，每对具有一个“轻链”(通常具有约 25kDa的分子量)和一个“重链”(通常具有约50-70kDa的分子量)。人轻链被分类为κ和λ轻链。本发明涉及通常基于IgG类的单克隆抗体，其具有几个亚类，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。通常，IgG1、IgG2和IgG4 比IgG3更频繁地使用。应注意，IgG1具有不同的同种异型，其在356(D或E) 和358(L或M)处具有多态性。本文描述的序列使用356D/358M同种异型，然而本文包括其它同种异型。也就是说，本文包括的包括IgG1 Fc结构域的任何序列可以具有356E/358L替代356D/358M同种异型。

每条链的氨基端部分包括主要负责抗原识别的约100至110个或更多个氨基酸的可变区，在本领域和本文中通常称为“Fv结构域”或“Fv区”。在可变区中，重链和轻链的每个V结构域聚集三个环以形成抗原结合位点。每个环被称为互补决定区(下文中称为“CDR”)，其中氨基酸序列的变化是最显著的。“可变”是指可变区的某些区段在抗体之间序列差异很大的事实。可变区内的可变性不是均匀分布的。相反，V区由通过称为“高变区”的极端可变的较短区分隔开的称为框架区(FR)的15-30个氨基酸的相对不变的区段组成，所述高变区各自9-15个氨基酸长或更长。

每个VH和VL由三个高变区(“互补决定区”，“CDR”)和四个FR构成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。

高变区通常包含来自轻链可变区中约氨基酸残基24-34(LCDR1；“L”表示轻链)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)以及重链可变区中约31-35B (HCDR1；“H”表示重链)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)的氨基酸残基；Kabat等人,《免疫学相关蛋白质的序列(SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST)》,第5版.马里兰州贝塞斯达美国国家卫生研究院公共卫生服务部(Public Health Service,National Institutes ofHealth, Bethesda,Md.)(1991)和/或那些形成高变环的残基(例如轻链可变区中的残基26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)以及重链可变区中的26-32 (HCDR1)、53-55(HCDR2)和96-101(HCDR3)；Chothia和Lesk(1987)《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》196:901-917。下面描述本发明的特定CDR。

如本领域技术人员所理解，CDR的确切编号和放置在不同编号系统之间可以是不同的。然而，应理解，可变重链和/或可变轻链序列的公开内容包括相关 (固有)CDR的公开内容。因此，每个重链可变区的公开内容是vhCDR(例如 vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3)的公开内容，并且每个轻链可变区的公开内容是vlCDR(例如vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)的公开内容。CDR编号的有用比较如下，参见Lafranc等人,《发育与比较免疫学(Dev.Comp.Immunol.)》27(1):55-77(2003)：

在整个本说明书中，当提及可变结构域(大致是轻链可变区的残基1-107 和重链可变区的残基1-113)和铰链中的残基以及用于Fc区的EU编号系统时，通常使用Kabat编号系统(例如Kabat等人,见上文(1991))。

本发明提供了大量不同的CDR组。在这种情况下，“完整CDR组”包含三个可变轻链和三个可变重链CDR，例如vlCDR1、vlCDR2、vlCDR3、vhCDR1、 vhCDR2和vhCDR3。这些可以分别是较大轻链可变结构域或重链可变结构域的一部分。另外，如本文中更全面概述，当使用重链和轻链时，重链可变结构域和轻链可变结构域可以在分开的多肽链上，或者在scFv序列的情况下，可以在单个多肽链上。

CDR有助于形成抗体的抗原结合位点，或更具体地，表位结合位点。“表位”是指与称为互补位的抗体分子可变区中的特定抗原结合位点相互作用的决定簇。表位是分子的分组，例如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的结构特征以及特定的电荷特征。单个抗原可具有多于一个表位。

表位可以包含直接参与结合的氨基酸残基(也称为表位的免疫显性组分) 和其它不直接参与结合的氨基酸残基，例如被特异性抗原结合肽有效阻断的氨基酸残基；换句话说，氨基酸残基在特异性抗原结合肽的覆盖面积内。

表位可以是构象的也可以是线性的。通过来自线性多肽链的不同区段的空间并置的氨基酸产生构象表位。线性表位是由多肽链中的相邻氨基酸残基产生的表位。构象和非构象表位的区别在于，在变性溶剂存在下，与前者而非后者的结合丧失。

表位通常包含独特空间构象中的至少3个，更通常至少5个或8-10个氨基酸。识别相同表位的抗体可以在简单的免疫分析中验证，所述免疫分析显示一种抗体阻断另一种抗体与靶抗原结合的能力，例如“分箱”。如下所述，本发明不仅包括本文列举的抗原结合结构域和抗体，还包括竞争与所列举的抗原结合结构域结合的表位结合的抗原结合结构域和抗体。

每条链的羧基端部分限定了主要负责效应功能的恒定区。Kabat等人收集了重链和轻链可变区的许多一级序列。基于序列的保守程度，他们将单个一级序列分类为CDR和框架并列出其列表(参见《免疫学相关序列(SEQUENCES OF IMMUNOLOGICAL INTEREST)》,第5版,NIH公开第91-3242号, E.A.Kabat等人，通过引用完全并入本文)。

在免疫球蛋白的IgG亚类中，重链中存在数个免疫球蛋白结构域。“免疫球蛋白(Ig)结构域”在本文中是指具有不同三级结构的免疫球蛋白区域。本发明所关注的是重链结构域，包括重链恒定(CH)结构域和铰链结构域。在IgG 抗体的情况下，IgG同种型各自具有三个CH区。因此，IgG背景下的“CH”结构域如下：“CH1”根据如Kabat中的EU索引是指位置118-220。“CH2”根据如Kabat中的EU索引是指位置237-340，“CH3”根据如Kabat中的EU 索引是指位置341-447。

重链的另一种类型的Ig结构域是铰链区。“铰链”或“铰链区”或“抗体铰链区”或“免疫球蛋白铰链区”在本文中是指包含抗体的第一和第二恒定结构域之间的氨基酸的柔性多肽。在结构上，IgG CH1结构域在EU位置220处终止，并且IgG CH2结构域在残基EU位置237处开始。因此，对于IgG，抗体铰链在本文中定义为包括位置221(IgG1中的D221)至236(IgG1中的 G236)，其中编号是根据如Kabat中的EU索引。

轻链通常包含两个结构域，即轻链可变结构域(含有轻链CDR并与重链可变结构域一起形成Fv区)和轻链恒定区(通常称为CL或Cκ)。通常，可以使用恒定λ或恒定κ结构域，其中λ通常可用于本发明。

下文概述的用于其它取代的另一所关注区是Fc区。

A.嵌合和人源化抗体

在一些实施方案中，本文的抗体可衍生自来自不同物种的混合物，例如嵌合抗体和/或人源化抗体。通常，“嵌合抗体”和“人源化抗体”均指组合来自不止一种物种的区域的抗体。例如，“嵌合抗体”传统上包含来自小鼠(或在某些情况下为大鼠)的可变区和来自人的恒定区。“人源化抗体”通常是指非人抗体，其具有与人抗体中发现的序列交换的可变结构域框架区。通常，在人源化抗体中，除CDR之外的整个抗体由人源多核苷酸编码或除了其CDR之外与这种抗体相同。CDR(部分或全部由源自非人生物体的核酸编码)被移植到人抗体可变区的β-折叠框架中以产生抗体，其特异性由移植的CDR决定。此类抗体的产生描述于例如WO 92/11018，Jones,1986,《自然(Nature)》321:522-525， Verhoeyen等人,1988,《科学》239:1534-1536，所有这些都通过引用整体并入。所选择的受体框架残基“回复突变”到相应的供体残基通常需要重新获得在初始移植构建体中丧失的亲和力(US 5530101；US5585089；US 5693761；US 5693762；US 6180370；US 5859205；US 5821337；US 6054297；US6407213，均通过引用整体并入)。人源化抗体最佳地还将包含免疫球蛋白恒定区(通常是人免疫球蛋白的恒定区)的至少一部分，通常是全部，因此通常包含人Fc区。使用具有基因工程改造的免疫系统的小鼠也可以产生人源化抗体。Roque等人, 2004,《生物技术进展(Biotechnol.Prog.)》20:639-654，通过引用整体并入。用于人源化和重塑非人抗体的多种技术和方法是本领域熟知的(参见Tsurushita 和Vasquez,2004,《单克隆抗体的人源化(Humanization of Monoclonal Antibodies)》,《B细胞分子生物学(Molecular Biologyof B Cells)》,533-545, Elsevier Science(USA)和其中引用的参考文献，全部通过引用整体并入)。人源化方法包括但不限于Jones等人,1986,《自然》321:522-525；Riechmann等人,1988；《自然》332:323-329；Verhoeyen等人,1988,《科学》,239:1534-1536； Queen等人,1989,《美国国家科学院院刊》86:10029-33；He等人,1998,《免疫学杂志(J.Immunol.)》160:1029-1035；Carter等人,1992,《美国国家科学院院刊》89:4285-9；Presta等人,1997,《癌症研究》57(20):4593-9；Gorman等人,1991,《美国国家科学院院刊》88:4181-4185；O'Connor等人,1998,《蛋白质工程(Protein Eng)》11:321-8中所描述的方法，均通过引用整体并入。人源化或降低非人抗体可变区的免疫原性的其它方法可包括表面重修方法，如例如Roguska等人,1994,《美国国家科学院院刊》91:969-973中所述，通过引用整体并入。

因此，来自本文所列举的任何抗体的vhCDR和vlCDR可以是人源化的(或者对于那些已经人源化的抗体来说是“再人源化的”)。

在某些实施方案中，本发明的抗体包含来自特定种系重链免疫球蛋白基因的重链可变区和/或来自特定种系轻链免疫球蛋白基因的轻链可变区。例如，此类抗体可包含人抗体或由人抗体组成，所述人抗体包含作为特定种系序列“的产物”或“衍生自”特定种系序列的重链或轻链可变区。通过比较人抗体的氨基酸序列与人种系免疫球蛋白的氨基酸序列并选择序列与人抗体序列最接近 (即，最大％同一性)的人种系免疫球蛋白，可以鉴定人抗体是人种系免疫球蛋白序列“的产物”或“衍生自”人种系免疫球蛋白序列。由于例如天然存在的体细胞突变或有意引入定点突变，作为特定人种系免疫球蛋白序列“的产物”或“衍生自”特定人种系免疫球蛋白序列的人抗体与种系序列相比可含有氨基酸差异。然而，人源化抗体的氨基酸序列与人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列通常至少90％相同，并且与其它物种的种系免疫球蛋白氨基酸序列(例如鼠种系序列)相比时，含有将抗体鉴定为衍生自人类序列的氨基酸残基。在某些情况下，人源化抗体的氨基酸序列与不包括CDR的种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列可以至少95、96、97、98或99％，或甚至至少96％、97％、98％或99％相同。也就是说，CDR可以是鼠类，但(重链或轻链)可变区的框架区的氨基酸序列与人种系免疫球蛋白基因编码的框架氨基酸可以至少96％、 97％、98％或99％相同。

通常，衍生自特定人种系序列的人源化抗体将显示与人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过10-20个氨基酸差异。在某些情况下，人源化抗体可显示与种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过5个，或甚至不超过4 个、3个、2个或1个氨基酸差异(同样，在引入本文的任何变体之前；即，变体的数量通常较低)。

在一个实施方案中，亲本抗体已经亲和力成熟，如本领域已知的。基于结构的方法可用于人源化和亲和力成熟，例如USSN 11/004,590中所述。基于选择的方法可用于使抗体可变区人源化和/或亲和成熟，包括但不限于Wu等人, 1999,《分子生物学杂志》294:151-162；Baca等人,1997,《生物化学杂志 (J.Biol.Chem.)》272(16):10678-10684；Rosok等人,1996,《生物化学杂志》 271(37):22611-22618；Rader等人,1998,《美国国家科学院院刊》95: 8910-8915；Krauss等人,2003,《蛋白质工程》16(10):753-759中所描述的方法，均通过引用整体并入。其它人源化方法可涉及仅移植部分CDR，包括但不限于USSN 09/810,510；Tan等人,2002,《免疫学杂志》169:1119-1125；De Pascalis 等人,2002,《免疫学杂志》169:3076-3084中所描述的方法，均通过引用整体并入。

B.可选抗体工程

本发明抗体可以通过氨基酸取代进行修饰或工程改造以改变氨基酸序列。如本文所讨论，可以进行氨基酸取代以改变CDR对蛋白质(例如TIGIT或 PVRIG，包括增加和降低的结合)的亲和力，以及改变抗体的其它功能特性。例如，抗体可以经过工程改造以在Fc区内包括修饰，通常用于改变抗体的一种或多种功能特性，例如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。此外，根据本发明的至少一些实施方案的抗体可以经过化学修饰(例如，一个或多个化学部分可以连接到抗体上)或被修饰以改变其糖基化，同样用于改变抗体的一种或多种功能特性。下面进一步描述这些实施方案。Fc区中残基的编号是Kabat的EU索引的编号。

在一个实施方案中，修饰C

在另一个实施方案中，可以修饰抗体以消除体内Fab臂交换，特别是当使用IgG4恒定结构域时。具体而言，该过程涉及在其它IgG4抗体之间交换IgG4 半分子(一条重链加一条轻链)，这有效地产生功能上单价的双特异性抗体。铰链区和重链恒定结构域的突变可以消除这种交换(参见Aalberse,RC,Schuurman J.,2002,《免疫学(Immunology)》105:9-19)。如本文所概述，在本发明中特别有用的突变是在IgG4恒定结构域情形中的S241P。IgG4可用于本发明，因为它没有显著的效应功能，因此用于阻断受体与其配体(例如PVRIG与PVRL2或TIGIT与PVR)的结合而没有细胞耗竭。

在一些实施方案中，氨基酸取代可以在Fc区中进行，通常用于改变与FcγR 受体的结合。本文所用的“Fcγ受体”、“FcγR”或“FcγR(FcgammaR)”是指结合IgG抗体Fc区并由FcγR基因编码的蛋白质家族的任何成员。在人类中，该家族包括但不限于FcγRI(CD64)，包括同种型FcγRIa、FcγRIb和FcγRIc； FcγRII(CD32)，包括同种型FcγRIIa(包括同种异型H131和R131)、FcγRIIb (包括FcγRIIb-1和FcγRIIb-2)和FcγRIIc；和FcγRIII(CD16)，包括同种型 FcγRIIIa(包括同种异型V158和F158)和FcγRIIIb(包括同种异型FcγRIIIb-NA1 和FcγRIIIb-NA2)(Jefferis等人,2002,《免疫学快报(Immunol Lett)》82:57-65，通过引用整体并入)，以及任何未发现的人FcγR或FcγR同种型或同种异型。 FcγR可以来自任何生物体，包括但不限于人、小鼠、大鼠、兔和猴。小鼠FcγR 包括但不限于FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)、FcγRIII-1(CD16)和FcγRIII-2 (CD16-2)，以及任何未发现的小鼠FcγR或FcγR同种型或同种异型。

可以进行许多有用的Fc取代以改变与一种或多种FcγR受体的结合。导致结合增加以及结合降低的取代可能是有用的。例如，已知增加与FcγRIIIa的结合通常导致ADCC增加(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性；细胞介导的反应，其中表达FcγR的非特异性细胞毒性细胞识别靶细胞上的结合抗体并随后引起靶细胞的裂解。类似地，在一些情况下，与FcγRIIb(抑制性受体)的结合降低也是有益的。可用于本发明的氨基酸取代包括美国序列号11/124,620(特别是图41)和美国专利第6,737,056号中所列出的那些，两者都通过引用整体明确地并入本文，并且特别是其中公开的变体。

在又一个实施方案中，通过修饰在以下位置的一个或多个氨基酸来修饰Fc 区，以增加抗体介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或增加抗体对Fcγ受体的亲和力和/或增加FcRn结合：238、239、248、249、252、254、255、256、 258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、 290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、 320、322、324、326、327、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、 437、438或439。Presta在PCT公开WO00/42072中进一步描述了该方法。此外，已经绘制了人IgG1上FcγRI、FcγRII、FcγRIII和FcRn的结合位点，并且已经描述了具有改善的结合的变体(参见Shields,R.L.等人(2001)《生物化学杂志》276:6591-6604)。显示位置256、290、298、333、334和339处的特异性突变改善了与FcγRIII的结合。另外，显示以下组合突变体改善FcγRIII结合： T256A/S298A、S298A/E333A、S298A/K224A和S298A/E333A/K334A。此外，如M252Y/S254T/T256E或M428L/N434S的突变改善了与FcRn的结合并增加了抗体循环半衰期(参见Chan CA和Carter PJ(2010)《自然综述免疫学(Nature Rev Immunol)》10:301-316)。

此外，修饰本发明的抗体以增加其生物半衰期。各种方法都是可能的。例如，可以引入一个或多个以下突变：T252L、T254S、T256F，如Ward在美国专利第6,277,375号中所述。或者，为了增加生物半衰期，可以在C

在另一个实施方案中，修饰抗体的糖基化。例如，可以制备无糖基化抗体 (即，抗体缺乏糖基化)。可以改变糖基化，以例如增加抗体对抗原的亲和力或降低效应子功能，例如ADCC。此类碳水化合物修饰可以通过例如改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点，例如N297来完成。例如，可以进行一个或多个氨基酸取代，其导致消除一个或多个可变区框架糖基化位点，从而消除该位点的糖基化，在一些实施方案中发现使用丙氨酸取代。

另外或可替代地，可以制备具有改变的糖基化类型的抗体，例如具有减少量的岩藻糖基残基的低岩藻糖基化抗体或具有增加的二等分GlcNac结构的抗体。已经证明这种改变的糖基化模式增加了抗体的ADCC能力。这种碳水化合物修饰可以通过例如在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体来实现。具有改变的糖基化机制的细胞已在本领域中描述，并且可用作宿主细胞，其中根据本发明的至少一些实施方案表达重组抗体，从而产生具有改变的糖基化的抗体。参见例如美国专利公开号20040110704和WO 2003/035835。

本发明考虑的本文抗体的另一种修饰是聚乙二醇化或添加其它水溶性部分，通常是聚合物，例如以增强半衰期。如本领域已知的，可以使抗体聚乙二醇化以例如增加抗体的生物(例如血清)半衰期。

除了进行取代以改变对FcγR和/或FcRn的结合亲和力和/或增加体内血清半衰期之外，可以进行另外的抗体修饰，如下文进一步详细描述。

在某些情况下，完成亲和力成熟。CDR中的氨基酸修饰有时被称为“亲和力成熟”。“亲和力成熟的”抗体是在一个或多个CDR中具有一个或多个改变的抗体，与不具有那些改变的亲本抗体相比，其导致抗体对抗原的亲和力的改善。在某些情况下，可能需要降低抗体对其抗原的亲和力。

在一些实施方案中，在本发明抗体(PVRIG或TIGIT抗体)的一个或多个 CDR中进行一个或多个氨基酸修饰。通常，在任何单个CDR中仅取代1个或 2个或3个氨基酸，并且通常不超过1个、2个、3个。在一组6个CDR(例如 vhCDR1-3和vlCDR1-3)内进行4、5、6、7、8、9或10次变化。然而，应理解，在任何CDR中没有取代、1个、2个或3个取代的任何组合可以独立地和任选地与任何其它取代组合。

与“亲本”抗体相比，可以进行亲和力成熟以使抗体对抗原的结合亲和力增加至少约10％至50-100-150％或更多，或1至5倍。优选的亲和力成熟抗体对抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。亲和力成熟的抗体通过已知方法产生。亲和力和功效的相关性在下面讨论。

或者，可以在本发明抗体的一个或多个CDR中进行“沉默的”氨基酸修饰，例如不显著改变抗体对抗原的亲和力。这么做的原因有很多，包括优化表达(如可以对编码本发明抗体的核酸进行)。

因此，包括在本发明的CDR和抗体的定义内的是变体CDR和抗体；也就是说，本发明的抗体可以包括本发明所列举的抗体的一个或多个CDR中的氨基酸修饰。另外，如下所述，氨基酸修饰也可以独立地和任选地在CDR之外的任何区域中进行，包括框架区和恒定区。

a.产生额外的抗体

如本领域众所周知的，可以使用众所周知的方法，例如实施例中概述的方法，产生针对人PVRIG的额外抗体。因此，可以通过传统方法产生额外的抗 PVRIG抗体，例如使小鼠免疫(有时使用DNA免疫接种，例如Aldevron所使用的)，然后针对人PVRIG蛋白质和杂交瘤产生进行筛选，进行抗体纯化和回收。

VII.本发明的TIGIT抗体

本发明提供抗TIGIT抗体。(为方便起见，“抗TIGIT抗体”和“TIGIT抗体”可互换使用)。本发明的抗TIGIT抗体特异性结合人TIGIT，优选人TIGIT 的ECD。本发明进一步提供了抗原结合结构域，包括全长抗体，其含有许多与 TIGIT结合的特定的、列举的6个CDR的集合。

可以例如通过抗体具有至少约10

然而，为了最佳地结合在NK细胞和T细胞表面上表达的TIGIT，抗体优选具有小于50nM且最优选小于1nM的KD，其中小于0.1nM和小于1pM适用于本发明方法中。

此外，可以例如通过抗体对TIGIT抗原或表位的ka(指代缔合速率常数) 对于表位相对于对照大至少20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、 10,000倍或更多倍来展现对特定抗原或表位的特异性结合，其中ka是指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率常数。

在一些实施方案中，本发明的抗TIGIT抗体以100nM或更小、50nM或更小、10nM或更小、或1nM或更小(即，更高的结合亲和力)或1pM或更小的K

本文描述的TIGIT抗体标记如下。抗体具有参考编号，例如“CPA.9.086”。这代表可变重链和可变轻链的组合，如图53所示，例如，理解这些抗体包括两条重链和两条轻链。“CPA.9.086.VH”是指CPA.9.086的可变重链部分，而“CPA.9.086.VL”是可变轻链。“CPA.9.086.vhCDR1”、“CPA.9.086.vhCDR2”、“CPA.9.086.vhCDR3”、“CPA.9.086.vlCDR1”、“CPA.9.086.vlCDR2”和“CPA.9.086.vlCDR3”是指所指示的CDR。“CPA.9.086.HC”是指该分子的整个重链(例如可变结构域和恒定结构域)，“CPA.9.086.LC”是指同一分子的整个轻链(例如可变结构域和恒定结构域)。通常，人κ轻链用于本文中每种噬菌体(或人源化杂交瘤)抗体的恒定结构域，尽管在一些实施方案中使用λ轻链恒定结构域。“CPA.9.086.H1”是指包含可变重链和轻链结构域的全长抗体，包括人IgG1的恒定结构域(因此，H1；IgG1、 IgG2、IgG3和IgG4的序列显示在图50中)。因此，“CPA.9.086.H2”将是与人 IgG2连接的CPA.9.086可变结构域。“CPA.9.086.H3”将是与人IgG3连接的 CPA.9.086可变结构域，“CPA.9.086.H4”将是与人IgG4连接的CPA.9.086可变结构域。注意，在一些情况下，人IgG可能具有额外的突变，如下所述，并且可以注释。例如，在许多实施方案中，人IgG4中可能存在S241P突变，并且这可以例如注释为“CPA.9.086.H4(S241P)”。具有该S241P铰链变体的人IgG4 序列示于图50中。其它可能的变体是IgG1(N297A)，(或在该位点消除糖基化的其它变体，因此许多效应功能与FcγRIIIa结合相关)和IgG1(D265A)，其降低与FcγR受体的结合。

本发明还提供重域可变结构域和轻域可变结构域以及全长重链和轻链。

在一些实施方案中，本发明提供结合TIGIT的scFv，其包含如上所述通过 scFv接头连接的重链可变结构域和轻链可变结构域。VL和VH结构域可以呈任一定向，例如从N端到C端“VH-接头-VL”或“VL-接头”VH”。这些是由它们的组成部分命名的；例如“scFv-CPA.9.086.VH-接头-VL”或“scFv-CPA.9.086.VL-接头-VH”。因此，“scFv-CPA.9.086”可以呈任一定向。

在许多实施方案中，本发明的抗体是人(衍生自噬菌体)并阻断TIGIT和 PVR的结合。如图58和75所示，结合和阻断受体-配体相互作用的CPA抗体如下，其组分也被概述(如“序列”部分中所讨论的，除了scFv构建体之外的所有序列都在序列表中)：

CPA.9.018、CPA.9.018.VH、CPA.9.018.VL、CPA.9.018.HC、CPA.9.018.LC、CPA.9.018.H1、CPA.9.018.H2、CPA.9.018.H3、CPA.9.018.H4； CPA.9.018.H4(S241P)；CPA.9.018.vhCDR1、CPA.9.018.vhCDR2、 CPA.9.018.vhCDR3、CPA.9.018.vlCDR1、CPA.9.018.vlCDR2、CPA.9.018.vlCDR3 和scFv-CPA.9.018；

CPA.9.027、CPA.9.027.VH、CPA.9.027.VL、CPA.9.027.HC、CPA.9.027.LC、CPA.9.027.H1、CPA.9.027.H2、CPA.9.027.H3、CPA.9.027.H4； CPA.9.018.H4(S241P)；CPA.9.027.vhCDR1、CPA.9.027.vhCDR2、 CPA.9.027.vhCDR3、CPA.9.027.vlCDR1、CPA.9.027.vlCDR2、CPA.9.027.vlCDR3 和scFv-CPA.9.027；

CPA.9.049、CPA.9.049.VH、CPA.9.049.VL、CPA.9.049.HC、CPA.9.049.LC、CPA.9.049.H1、CPA.9.049.H2、CPA.9.049.H3；CPA.9.049.H4； CPA.9.049.H4(S241P)；CPA.9.049.vhCDR1、CPA.9.049.vhCDR2、 CPA.9.049.vhCDR3、CPA.9.049.vlCDR1、CPA.9.049.vlCDR2、CPA.9.049.vlCDR3 和scFv-CPA.9.049；

CPA.9.057、CPA.9.057.VH、CPA.9.057.VL、CPA.9.057.HC、CPA.9.057.LC、CPA.9.057.H1、CPA.9.057.H2、CPA.9.057.H3；CPA.9.057.H4； CPA.9.057.H4(S241P)；CPA.9.057.vhCDR1、CPA.9.057.vhCDR2、 CPA.9.057.vhCDR3、CPA.9.057.vlCDR1、CPA.9.057.vlCDR2、CPA.9.057.vlCDR3 和scFv-CPA.9.057；

CPA.9.059、CPA.9.059.VH、CPA.9.059.VL、CPA.9.059.HC、CPA.9.059.LC、CPA.9.059.H1、CPA.9.059.H2、CPA.9.059.H3；CPA.9.059.H4； CPA.9.059.H4(S241P)；CPA.9.059.vhCDR1、CPA.9.059.vhCDR2、 CPA.9.059.vhCDR3、CPA.9.059.vlCDR1、CPA.9.059.vlCDR2、CPA.9.059.vlCDR3 和scFv-CPA.9.059；

CPA.9.083、CPA.9.083.VH、CPA.9.083.VL、CPA.9.083.HC、CPA.9.083.LC、CPA.9.083.H1、CPA.9.083.H2、CPA.9.083.H3；CPA.9.083.H4； CPA.9.083.H4(S241P)；CPA.9.083.vhCDR1、CPA.9.083.vhCDR2、 CPA.9.083.vhCDR3、CPA.9.083.vlCDR1、CPA.9.083.vlCDR2、CPA.9.083.vlCDR3 和scFv-CPA.9.083；

CPA.9.086、CPA.9.086.VH、CPA.9.086.VL、CPA.9.086.HC、CPA.9.086.LC、CPA.9.086.H1、CPA.9.086.H2、CPA.9.086.H3；CPA.9.086.H4； CPA.9.086.H4(S241P)；CPA.9.086.vhCDR1、CPA.9.086.vhCDR2、 CPA.9.086.vhCDR3、CPA.9.086.vlCDR1、CPA.9.086.vlCDR2、CPA.9.086.vlCDR3 和scFv-CPA.9.086；

CPA.9.089、CPA.9.089.VH、CPA.9.089.VL、CPA.9.089.HC、CPA.9.089.LC、CPA.9.089.H1、CPA.9.089.H2、CPA.9.089.H3；CPA.9.089.H4； CPA.9.089.H4(S241P)；CPA.9.089.vhCDR1、CPA.9.089.vhCDR2、 CPA.9.089.vhCDR3、CPA.9.089.vlCDR1、CPA.9.089.vlCDR2、CPA.9.089.vlCDR3 和scFv-CPA.9.089；

CPA.9.093、CPA.9.093.VH、CPA.9.093.VL、CPA.9.093.HC、CPA.9.093.LC、CPA.9.093.H1、CPA.9.093.H2、CPA.9.093.H3；CPA.9.093.H4； CPA.9.093.H4(S241P)；CPA.9.093.vhCDR1、CPA.9.093.vhCDR2、 CPA.9.093.vhCDR3、CPA.9.093.vlCDR1、CPA.9.093.vlCDR2、CPA.9.093.vlCDR3 和scFv-CPA.9.093；

CPA.9.101、CPA.9.101.VH、CPA.9.101.VL、CPA.9.101.HC、CPA.9.101.LC、CPA.9.101.H1、CPA.9.101.H2、CPA.9.101.H3；CPA.9.101.H4； CPA.9.101.H4(S241P)；CPA.9.101.vhCDR1、CPA.9.101.vhCDR2、 CPA.9.101.vhCDR3、CPA.9.101.vlCDR1、CPA.9.101.vlCDR2、CPA.9.101.vlCDR3 和scFv-CPA.9.101；和

CPA.9.103、CPA.9.103.VH、CPA.9.103.VL、CPA.9.103.HC、CPA.9.103.LC、CPA.9.103.H1、CPA.9.103.H2、CPA.9.103.H3；CPA.9.103.H4； CPA.9.103.H4(S241P)；CPA.9.103.vhCDR1、CPA.9.103.vhCDR2、 CPA.9.103.vhCDR3、CPA.9.103.vlCDR1、CPA.9.103.vlCDR2、CPA.9.103.vlCDR3 和scFv-CPA.9.103。

此外，本发明提供了许多CHA抗体，它们是由杂交瘤产生的鼠抗体。如本领域众所周知的，当置于人框架可变重链和可变轻链区中或当重链可变结构域和轻链可变结构域人源化时，六个CDR是有用的。

因此，本发明提供了抗体，通常是全长或scFv结构域，其包含以下CDR 集合，其序列显示在图53和/或序列表中：

CHA.9.536.1、CHA.9.536.1.VH、CHA.9.536.1.VL、CHA.9.536.1.HC、CHA.9.536.1.LC、CHA.9.536.1.H1、CHA.9.536.1.H2、CHA.9.536.1.H3； CHA.9.536.1.H4、CHA.9.536.1.H4(S241P)、CHA.9.536.1.vhCDR1、 CHA.9.536.1.vhCDR2、CHA.9.536.1.vhCDR3、CHA.9.536.1.vlCDR1、 CHA.9.536.1.vlCDR2和CHA.9.536.1.vhCDR3；

CHA.9.536.3、CHA.9.536.3.VH、CHA.9.536.3.VL、CHA.9.536.3.HC、CHA.9.536.3.LC、CHA.9.536.3.H1、CHA.9.536.3.H2、CHA.9.536.3.H3； CHA.9.536.3.H4、CHA.9.536.3.H4(S241P)；CHA.9.536.3.vhCDR1、CHA.9.536.3.vhCDR2、CHA.9.536.3.vhCDR3、CHA.9.536.3.vlCDR1、 CHA.9.536.3.vlCDR2和CHA.9.536.3.vhCDR3；

CHA.9.536.4、CHA.9.536.4.VH、CHA.9.536.4.VL、CHA.9.536.4.HC、CHA.9.536.4.LC、CHA.9.536.4.H1、CHA.9.536.4.H2、CHA.9.536.4.H3； CHA.9.536.4.H4、CHA.9.536.4.H4(S241P)、CHA.9.536.4.vhCDR1、 CHA.9.536.4.vhCDR2、CHA.9.536.4.vhCDR3、CHA.9.536.4.vlCDR1、 CHA.9.536.4.vlCDR2和CHA.9.536.4.vhCDR3；

CHA.9.536.5、CHA.9.536.5.VH、CHA.9.536.5.VL、CHA.9.536.5.HC、CHA.9.536.5.LC、CHA.9.536.5.H1、CHA.9.536.5.H2、CHA.9.536.5.H3； CHA.9.536.5.H4、CHA.9.536.5.H4(S241P)、CHA.9.536.5.vhCDR1、 CHA.9.536.5.vhCDR2、CHA.9.536.5.vhCDR3、CHA.9.536.5.vlCDR1、 CHA.9.536.5.vlCDR2和CHA.9.536.5.vhCDR3；

CHA.9.536.6、CHA.9.536.6.VH、CHA.9.536.6.VL、CHA.9.536.6.HC、CHA.9.536.6.LC、CHA.9.536.6.H1、CHA.9.536.6.H2、CHA.9.536.6.H3； CHA.9.536.6.H4、CHA.9.536.6.vhCDR1、CHA.9.536.6.vhCDR2、 CHA.9.536.6.vhCDR3、CHA.9.536.6.vlCDR1、CHA.9.536.6.vlCDR2和 CHA.9.536.6.vhCDR3；

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CHA.9.536.8、CHA.9.536.8.VH、CHA.9.536.8.VL、CHA.9.536.8.HC、CHA.9.536.8.LC、CHA.9.536.8.H1、CHA.9.536.8.H2、CHA.9.536.8.H3； CHA.9.536.8.H4、CHA.9.536.8.H4(S241P)、CHA.9.536.8.vhCDR1、 CHA.9.536.8.vhCDR2、CHA.9.536.8.vhCDR3、CHA.9.536.8.vlCDR1、 CHA.9.536.8.vlCDR2和CHA.9.536.8.vhCDR3；

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CHA.9.560.3、CHA.9.560.3VH、CHA.9.560.3.VL、CHA.9.560.3.HC、CHA.9.560.3.LC、CHA.9.560.3.H1、CHA.9.560.3.H2、CHA.9.560.3.H3； CHA.9.560.3.H4、CHA.9.560.3.H4(S241P)；CHA.9.560.3.vhCDR1、 CHA.9.560.3.vhCDR2、CHA.9.560.3.vhCDR3、CHA.9.560.3.vlCDR1、 CHA.9.560.3.vlCDR2和CHA.9.560.3.vhCDR3；

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CHA.9.560.5、CHA.9.560.5VH、CHA.9.560.5.VL、CHA.9.560.5.HC、CHA.9.560.5.LC、CHA.9.560.5.H1、CHA.9.560.5.H2、CHA.9.560.5.H3； CHA.9.560.5.H4、CHA.9.560.5.vhCDR1、CHA.9.560.5.vhCDR2、 CHA.9.560.5.vhCDR3、CHA.9.560.5.vlCDR1、CHA.9.560.5.vlCDR2和 CHA.9.560.5.vhCDR3；

CHA.9.560.6、CHA.9.560.6VH、CHA.9.560.6.VL、CHA.9.560.6.HC、CHA.9.560.6.LC、CHA.9.560.6.H1、CHA.9.560.6.H2、CHA.9.560.6.H3； CHA.9.560.6.H4、CHA.9.560.6.H4(S241P)、CHA.9.560.6.vhCDR1、 CHA.9.560.6.vhCDR2、CHA.9.560.6.vhCDR3、CHA.9.560.6.vlCDR1、 CHA.9.560.6.vlCDR2和CHA.9.560.6.vhCDR3；

CHA.9.560.7、CHA.9.560.7VH、CHA.9.560.7.VL、CHA.9.560.7.HC、CHA.9.560.7.LC、CHA.9.560.7.H1、CHA.9.560.7.H2、CHA.9.560.7.H3； CHA.9.560.7.H4；CHA.9.560.7.H4(S241P)；CHA.9.560.7.vhCDR1、 CHA.9.560.7.vhCDR2、CHA.9.560.7.vhCDR3、CHA.9.560.7.vlCDR1、 CHA.9.560.7.vlCDR2和CHA.9.560.7.vhCDR3；

CHA.9.560.8、CHA.9.560.8VH、CHA.9.560.8.VL、CHA.9.560.8.HC、CHA.9.560.8.LC、CHA.9.560.8.H1、CHA.9.560.8.H2、CHA.9.560.8.H3； CHA.9.560.8.H4、CHA.9.560.8.H4(S241P)；CHA.9.560.8.vhCDR1、 CHA.9.560.8.vhCDR2、CHA.9.560.8.vhCDR3、CHA.9.560.8.vlCDR1、 CHA.9.560.8.vlCDR2和CHA.9.560.8.vhCDR3；

CHA.9.546.1、CHA.9.546.1VH、CHA.9.546.1.VL、CHA.9.546.1.HC、CHA.9.546.1.LC、CHA.9.546.1.H1、CHA.9.546.1.H2、CHA.9.546.1.H3； CHA.9.546.1.H4、CHA.9.546.1.H4(S241P)、CHA.9.546.1.vhCDR1、 CHA.9.546.1.vhCDR2、CHA.9.546.1.vhCDR3、CHA.9.546.1.vlCDR1、 CHA.9.546.1.vlCDR2和CHA.9.546.1.vhCDR3；

CHA.9.547.1、CHA.9.547.1VH、CHA.9.547.1.VL、CHA.9.547.1.HC、CHA.9.547.1.LC、CHA.9.547.1.H1、CHA.9.547.1.H2、CHA.9.547.1.H3； CHA.9.547.1.H4、CHA.9.547.1.H4(S241P)、CHA.9.547.1.vhCDR1、 CHA.9.547.1.vhCDR2、CHA.9.547.1.vhCDR3、CHA.9.547.1.vlCDR1、 CHA.9.547.1.vlCDR2和CHA.9.547.1.vhCDR3；

CHA.9.547.2、CHA.9.547.2VH、CHA.9.547.2.VL、CHA.9.547.2.HC、CHA.9.547.2.LC、CHA.9.547.2.H1、CHA.9.547.2.H2、CHA.9.547.2.H3； CHA.9.547.2.H4、CHA.9.547.2.H4(S241P)、CHA.9.547.2.vhCDR1、 CHA.9.547.2.vhCDR2、CHA.9.547.2.vhCDR3、CHA.9.547.2.vlCDR1、 CHA.9.547.2.vlCDR2和CHA.9.547.2.vhCDR3；

CHA.9.547.3、CHA.9.547.3VH、CHA.9.547.3.VL、CHA.9.547.3.HC、CHA.9.547.3.LC、CHA.9.547.3.H1、CHA.9.547.3.H2、CHA.9.547.3.H3； CHA.9.547.3.H4、CHA.9.547.3.H4(S241P)、CHA.9.547.3.vhCDR1、 CHA.9.547.3.vhCDR2、CHA.9.547.3.vhCDR3、CHA.9.547.3.vlCDR1、 CHA.9.547.3.vlCDR2和CHA.9.547.3.vhCDR3；

CHA.9.547.4、CHA.9.547.4VH、CHA.9.547.4.VL、CHA.9.547.4.HC、CHA.9.547.4.LC、CHA.9.547.4.H1、CHA.9.547.4.H2、CHA.9.547.4.H3； CHA.9.547.4.H4、CHA.9.547.4.H4(S241P)、CHA.9.547.4.vhCDR1、 CHA.9.547.4.vhCDR2、CHA.9.547.4.vhCDR3、CHA.9.547.4.vlCDR1、 CHA.9.547.4.vlCDR2和CHA.9.547.4.vhCDR3；

CHA.9.547.6、CHA.9.547.6VH、CHA.9.547.6.VL、CHA.9.547.6.HC、CHA.9.547.6.LC、CHA.9.547.6.H1、CHA.9.547.6.H2、CHA.9.547.6.H3； CHA.9.547.6.H4、CHA.9.547.6.H4(S241P)、CHA.9.547.6.vhCDR1、 CHA.9.547.6.vhCDR2、CHA.9.547.6.vhCDR3、CHA.9.547.6.vlCDR1、 CHA.9.547.6.vlCDR2和CHA.9.547.6.vhCDR3；

CHA.9.547.7、CHA.9.547.7VH、CHA.9.547.7.VL、CHA.9.547.7.HC、CHA.9.547.7.LC、CHA.9.547.7.H1、CHA.9.547.7.H2、CHA.9.547.7.H3； CHA.9.547.7.H4、CHA.9.547.7.H4(S241P)、CHA.9.547.7.vhCDR1、 CHA.9.547.7.vhCDR2、CHA.9.547.7.vhCDR3、CHA.9.547.7.vlCDR1、 CHA.9.547.7.vlCDR2和CHA.9.547.7.vhCDR3；

CHA.9.547.8、CHA.9.547.8VH、CHA.9.547.8.VL、CHA.9.547.8.HC、CHA.9.547.8.LC、CHA.9.547.8.H1、CHA.9.547.8.H2、CHA.9.547.8.H3； CHA.9.547.8.H4、CHA.9.547.8.H4(S241P)、CHA.9.547.8.vhCDR1、 CHA.9.547.8.vhCDR2、CHA.9.547.8.vhCDR3、CHA.9.547.8.vlCDR1、 CHA.9.547.8.vlCDR2和CHA.9.547.8.vhCDR3；

CHA.9.547.9、CHA.9.547.9、CHA.9.547.9VH、CHA.9.547.9.VL、 CHA.9.547.9.HC、CHA.9.547.9.LC、CHA.9.547.9.H1、CHA.9.547.9.H2、 CHA.9.547.9.H3；CHA.9.547.9.H4、CHA.9.547.9.H4、CHA.9.547.9.H4(S241P)、 CHA.9.547.9.H4(S241P)、CHA.9.547.9.vhCDR1、CHA.9.547.9.vhCDR2、 CHA.9.547.9.vhCDR3、CHA.9.547.9.vlCDR1、CHA.9.547.9.vlCDR2和 CHA.9.547.9.vhCDR3；

CHA.9.547.13、CHA.9.547.13、CHA.9.547.13VH、CHA.9.547.13.VL、CHA.9.547.13.HC、CHA.9.547.13.LC、CHA.9.547.13.H1、CHA.9.547.13.H2、CHA.9.547.13.H3；CHA.9.547.13.H4、CHA.9.547.13.H4、 CHA.9.547.13.H4(S241P)、CHA.9.547.13.H4(S241P)、CHA.9.547.13.vhCDR1、 CHA.9.547.13.vhCDR2、CHA.9.547.13.vhCDR3、CHA.9.547.13.vlCDR1、 CHA.9.547.13.vlCDR2和CHA.9.547.13.vhCDR3；

CHA.9.541.1、CHA.9.541.1.VH、CHA.9.541.1.VL、CHA.9.541.1.HC、CHA.9.541.1.LC、CHA.9.541.1.H1、CHA.9.541.1.H2、CHA.9.541.1.H3； CHA.9.541.1.H4、CHA.9.541.1.H4(S241P)、CHA.9.541.1.vhCDR1、CHA.9.541.1.vhCDR2、CHA.9.541.1.vhCDR3、CHA.9.541.1.vlCDR1、 CHA.9.541.1.vlCDR2和CHA.9.541.1.vhCDR3；

CHA.9.541.3、CHA.9.541.3.VH、CHA.9.541.3.VL、CHA.9.541.3.HC、CHA.9.541.3.LC、CHA.9.541.3.H1、CHA.9.541.3.H2、CHA.9.541.3.H3； CHA.9.541.3.H4、CHA.9.541.3.H4(S241P)、CHA.9.541.3.vhCDR1、 CHA.9.541.3.vhCDR2、CHA.9.541.3.vhCDR3、CHA.9.541.3.vlCDR1、 CHA.9.541.3.vlCDR2和CHA.9.541.3.vhCDR3；

CHA.9.541.4、CHA.9.541.4.VH、CHA.9.541.4.VL、CHA.9.541.4.HC、CHA.9.541.4.LC、CHA.9.541.4.H1、CHA.9.541.4.H2、CHA.9.541.4.H3； CHA.9.541.4.H4、CHA.9.541.4.H4(S241P)、CHA.9.541.4.vhCDR1、 CHA.9.541.4.vhCDR2、CHA.9.541.4.vhCDR3、CHA.9.541.4.vlCDR1、 CHA.9.541.4.vlCDR2和CHA.9.541.4.vhCDR3；

CHA.9.541.5、CHA.9.541.5.VH、CHA.9.541.5.VL、CHA.9.541.5.HC、CHA.9.541.5.LC、CHA.9.541.5.H1、CHA.9.541.5.H2、CHA.9.541.5.H3； CHA.9.541.5.H4、CHA.9.541.5.H4(S241P)、CHA.9.541.5.vhCDR1、 CHA.9.541.5.vhCDR2、CHA.9.541.5.vhCDR3、CHA.9.541.5.vlCDR1、 CHA.9.541.5.vlCDR2和CHA.9.541.5.vhCDR3；

CHA.9.541.6、CHA.9.541.6.VH、CHA.9.541.6.VL、CHA.9.541.6.HC、CHA.9.541.6.LC、CHA.9.541.6.H1、CHA.9.541.6.H2、CHA.9.541.6.H3； CHA.9.541.6.H4、CHA.9.541.6.H4(S241P)、CHA.9.541.6.vhCDR1、 CHA.9.541.6.vhCDR2、CHA.9.541.6.vhCDR3、CHA.9.541.6.vlCDR1、 CHA.9.541.6.vlCDR2和CHA.9.541.6.vhCDR3；

CHA.9.541.7、CHA.9.541.7.VH、CHA.9.541.7.VL、CHA.9.541.7.HC、CHA.9.541.7.LC、CHA.9.541.7.H1、CHA.9.541.7.H2、CHA.9.541.7.H3； CHA.9.541.7.H4、CHA.9.541.7.H4(S241P)、CHA.9.541.7.vhCDR1、CHA.9.541.7.vhCDR2、CHA.9.541.7.vhCDR3、CHA.9.541.7.vlCDR1、 CHA.9.541.7.vlCDR2和CHA.9.541.7.vhCDR3；和

CHA.9.541.8、CHA.9.541.8.VH、CHA.9.541.8.VL、CHA.9.541.8.HC、CHA.9.541.8.LC、CHA.9.541.8.H1、CHA.9.541.8.H2、CHA.9.541.8.H3； CHA.9.541.8.H4、CHA.9.541.8.H4(S241P)；CHA.9.541.8vhCDR1、 CHA.9.541.8.vhCDR2、CHA.9.541.8.vhCDR3、CHA.9.541.8.vlCDR1、 CHA.9.541.8.vlCDR2和CHA.9.541.8.vhCDR3。

在包含上述抗体的CDR的scFv的情况下，将这些标记为scFv，其包括包含具有vhCDR的重链可变结构域、接头和具有vlCDR的轻链可变结构域的 scFv，同样如上所述呈任一定向。因此，本发明包括scFv-CHA.9.536.3.1、scFv-CHA.9.536.3、scFv-CHA.9.536.4、scFv-CHA.9.536.5、scFv-CHA.9.536.7、 scFv-CHA.9.536.8、scFv-CHA.9.560.1、scFv-CHA.9.560.3、scFv-CHA.9.560.4、 scFv-CHA.9.560.5、scFv-CHA.9.560.6、scFv-CHA.9.560.7、scFv-CHA.9.560.8、 scFv-CHA.9.546.1、scFv-CHA.9.547.1、scFv-CHA.9.547.2、scFv-CHA.9.547.3、 scFv-CHA.9.547.4、scFv-CHA.9.547.6、scFv-CHA.9.547.7、scFv-CHA.9.547.8、 scFv-CHA.9.547.9、scFv-CHA.9.547.13、scFv-CHA.9.541.1、scFv-CHA.9.541.3、 scFv-CHA.9.541.4、scFv-CHA.9.541.5、scFv-CHA.9.541.6、scFv-CHA.9.541.7 和scFv-CHA.9.541.8。

此外，CHA.9.543与TIGIT结合但不阻断TIGIT-PVR相互作用。

如本文所讨论的，本发明还提供了上述组分(CPA和CHA)的变体，包括 CDR中的变体，如上所述。因此，本发明提供了包含本文概述的一组6个CDR 的抗体，其可以在CDR组中含有一个、两个或三个氨基酸差异，只要所述抗体仍然与TIGIT结合即可。用于测试抗TIGIT抗体与本文概述的CDR序列相比是否含有突变的合适分析是本领域已知的，例如Biacore分析。

此外，本发明还提供了上述可变重链和轻链的变体。在这种情况下，可变重链可以与本文的“VH”序列80％、90％、95％、98％或99％相同，和/或当使用Fc变体时，含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个氨基酸变化或更多。提供可变轻链，其可与本文的“VL”序列(特别是CPA.9.086)80％、90％、95％、 98％或99％相同，和/或当使用Fc变体时，含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10个氨基酸变化或更多。在这些实施方案中，只要抗体仍与TIGIT结合，本发明就包括这些变体。用于测试抗TIGIT抗体与本文概述的CDR序列相比是否含有突变的合适分析是本领域已知的，例如Biacore分析。

类似地，提供重链和轻链，其与本文的全长“HC”和“LC”序列(特别是CPA.9.086)80％、90％、95％、98％或99％相同，及/或当使用Fc变体时，含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个氨基酸变化或更多。在这些实施方案中，只要抗体仍与TIGIT结合，本发明就包括这些变体。用于测试抗TIGIT抗体与本文概述的CDR序列相比是否含有突变的合适分析是本领域已知的，例如Biacore分析。

此外，本文中CPA或CHA抗体的可变重链和可变轻链的框架区可以如本领域已知的(根据需要偶尔在CDR中产生变体)人源化(或者，在CHA抗体的情况下，“再人源化”，达到可以进行替代人源化方法的程度)，因此可以产生图53的VH和VL链的人源化变体(特别是CPA.9.086)。此外，人源化可变重链和轻链结构域然后可以与人恒定区融合，例如来自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4 的恒定区(包括IgG4(S241P))。

特别地，如本领域已知的，鼠VH和VL链可以如本领域已知的人源化，例如，使用NCBI网站的IgBLAST程序，如Ye等人《核酸研究(Nucleic Acids Res.)》41:W34-W40(2013)所述，其全部内容通过引用并入本文用于人源化方法。IgBLAST采用鼠VH和/或VL序列并将其与已知人种系序列的文库进行比较。如本文所示，对于本文产生的人源化序列，使用的数据库是IMGT人VH 基因(F+ORF，273个种系序列)和IMGT人VLκ基因(F+ORF，74个种系序列)。选择示例性的五种CHA序列：CHA.9.536、CHA9.560、CHA.9.546、 CHA.9.547和CHA.9.541(参见图53)。对于人源化的这个实施方案，5个全都选择人种系IGHV1-46(等位基因1)作为受体序列并且选择人重链IGHJ4(等位基因1)连接区(J基因)。对于四个(CHA.7.518、CHA.7.530、CHA.7.538_1 和CHA.7.538_2)中的三个，选择人种系IGKV1-39(等位基因1)作为受体序列并且选择人轻链IGKJ2(等位基因1)(J基因)。J基因选自

在一些实施方案中，本发明的抗TIGIT抗体包括这样的抗TIGIT抗体，其中不同抗TIGIT抗体的V

因此，本发明的TIGIT抗体包含选自下组的CDR氨基酸序列：(a)本文所列的序列；(b)由于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个氨基酸取代而与(a)中指定的那些CDR氨基酸序列不同的序列；(c)与(a)或(b)中指定的序列具有90％或更高、95％或更高、98％或更高、或99％或更高序列同一性的氨基酸序列；(d)具有由多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽，所述多核苷酸具有编码本文所列氨基酸的核酸序列。特别地，CPA.9.086抗体可以具有选自(a)、(b)、(c)或(d)的序列。

在TIGIT抗体的定义中另外包括与本文列举的TIGIT抗体共有同一性的抗体。即，在某些实施方案中，根据本发明的抗TIGIT抗体包含重链和轻链可变区，其包含与优选的抗TIGIT抗体的全部或部分抗TIGIT氨基酸序列相同的氨基酸序列，其中抗体保留亲本抗TIGIT抗体的所需功能特性。两个序列之间的同一性百分比是序列共有的相同位置的数量的函数(即，％同源性＝相同位置的数量/位置总数X 100)，考虑到空位的数量和每个空位的长度，这些需要引入以使两个序列最佳对齐。序列的比较和两个序列之间的同一性百分比的确定可以使用数学算法完成，如下面的非限制性实施方案中所述。

两个氨基酸序列之间的同一性百分比可以使用E.Meyers和W.Miller(《生物科学计算机应用(Comput.Appl.Biosci.)》,4:11-17(1988))的算法来确定，其已被纳入ALIGN程序(2.0版)，使用PAM120权重残基表，空位长度罚分为 12，空位罚分为4。另外，两个氨基酸序列之间的同一性百分比可以使用 Needleman和Wunsch(《分子生物学杂志》48:444-453(1970))算法来确定，其已被纳入GCG软件包(商业上可获得)中的GAP程序中，使用Blossum62矩阵或PAM250矩阵，空位权重为16、14、12、10、8、6或4，长度权重为1、2、 3、4、5或6。

另外或可替代地，本发明的蛋白质序列可进一步用作“查询序列”以对公共数据库进行搜索，以例如鉴定相关序列。可以使用Altschul等人(1990)《分子生物学杂志》215:403-10的XBLAST程序(2.0版)来执行这样的搜索。可以用XBLAST程序进行BLAST蛋白质搜索，得分＝50，字长＝3，以获得与根据本发明的至少一些实施方案的抗体分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的空位比对，可以如Altschul等人,(1997)《核酸研究》25(17):3389-3402 中所述使用空位BLAST。当使用BLAST和空位BLAST程序时，可以使用相应程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。

通常，TIGIT抗体之间比较的同一性百分比为至少75％、至少80％、至少 90％，优选同一性百分比至少约95、96、97、98或99％。同一性百分比可以沿着整个氨基酸序列，例如整个重链或轻链或沿着链的一部分。例如，包括在本发明的抗TIGIT抗体的定义内的是那些沿着整个可变区，或沿着整个恒定区，或仅沿着Fc结构域共享同一性的抗体(例如，其中同一性是沿着可变区95或 98％相同)。特别地，本发明提供了与CPA.9.086抗体具有至少75％、至少80％、至少90％，优选具有至少约95、96、97、98或99％同一性的TIGIT抗体。

另外，还包括可以具有相同CDR但在可变结构域(或整个重链或轻链)的框架部分中发生变化的序列。例如，TIGIT抗体包括具有与图53中所示相同的 CDR的那些，但其沿着可变区的同一性可以更低，例如95或98％相同。特别地，本发明提供了TIGIT抗体，其具有与CPA.9.086相同的CDR但具有与 CPA.9.086 95％或98％相同的框架区。

A.竞争结合的TIGIT抗体

本发明不仅提供所列举的抗体，而且提供与所列举的抗体(本文列举的特异性结合TIGIT的CPA编号)竞争特异性结合TIGIT分子的其它抗体。如实施例16中所示，本发明的TIGIT抗体“分箱”成不同的表位箱。在表位分箱研究中的44种TIGIT抗体中，存在四个群落，每个群落具有相关的成对阻断模式，其分成本文概述的12个总离散箱并显示在图67和68中。这里概述了12 个离散箱；1)BM9-H4、CHA.9.525、CPA.9.081-H4、CHA.9.538、CHA.9.553、CPA.9.069-H4、CHA.9.543、CHA.9.556、CPA.9.077-H4和CHA.9.561；2) CHA.9.560和CHA.9.528；3)CHA.9.552、CHA.9.521、CHA.9.541、CHA.9.529、 CHA.9.519、CHA.9.527和CHA.9.549；4)CPA.9.057-H4和CHA.9.554；5) CHA.9.546、CPA.9.012-H4、CHA.9.547、CPA.9.013-H4、CPA.9.018-H4、 MBSA43-M1、Sino PVR-Fc(配体)、CHA.9.555、PVR-Fc M2A(配体)、BM29-H4、 CPA.9.027-H4、CPA.9.049-H4和CPA.9.053-H4；6)CPA.9.064-H4；7)BM26-H4； 8)CPA.9.059-H4；9)CHA.9.535和CPA.9.009-H4；10)CHA.9.536、CHA.9.522 和CPA.9.015-H4；11)CPA.9.011-H4和BM8-H4和12)CPA.9.071-H4。

因此，本发明提供了抗TIGIT抗体，其与离散的表位箱1至12中的抗体竞争结合。在一个具体实施方案中，本发明提供抗TIGIT抗体，其与CPA.9.086 竞争结合并且与CPA.9.086至少95、96、97、98或99％相同。

产生与所列举的抗体竞争的其它抗体，如本领域已知的并且一般概述如下。竞争性结合研究可以如本领域已知的那样进行，通常使用SPR/

VIII.PVRIG抗体

本发明提供抗PVRIG抗体。(为方便起见，“抗PVRIG抗体”和“PVRIG 抗体”可互换使用)。本发明的抗PVRIG抗体特异性结合人PVRIG，优选人 PVRIG的ECD。

可以例如通过抗体具有至少约10

然而，如WO2016/134333的实施例中所示，为了最佳地结合在NK细胞和 T细胞表面上表达的PVRIG，抗体优选具有小于50nM并且最优选小于1nM 的KD，其中小于0.1nM和小于1pM和0.1pM适用于本发明方法中。

此外，可以例如通过抗体对PVRIG抗原或表位的KA或Ka对于表位相对于对照大至少20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍或更多倍来展现对特定抗原或表位的特异性结合，其中KA或Ka是指特定的抗体-抗原相互作用的缔合速率。

在一些实施方案中，本发明的抗PVRIG抗体以100nM或更小、50nM或更小、10nM或更小、或1nM或更小(即，更高的结合亲和力)或1pM或更小的K

重要的是要注意，抗PVRIG抗体的结合亲和力令人惊讶地与活性相关。筛选数据的累积分析显示本发明的抗PVRIG抗体的亲和力与它们结合原代人T 细胞的能力高度相关。更具体地，在T细胞上产生最高最大信号的抗体是具有皮摩尔范围内亲和力的抗体。在低纳摩尔范围及以上具有亲和力的抗体在T细胞上产生相对弱的最大信号。因此，数据表明抗PVRIG抗体对基于T细胞的免疫疗法的有用性可能部分地基于它们的亲和力来定义。参考WO2016/134333 的抗体序列，其通过引用并入本文，特别是图38中概述的抗PVRIG抗原结合结构域(描绘结合PVRIG并阻断PVRIG和PVRL2相互作用的序列)，图39(描绘结合PVRIG并且不阻断PVRIG和PVRL2的相互作用的序列)，图40(描绘 CDR和来自这些抗体的数据)，和图41(描绘来自结合和阻断的杂交瘤的 CDR)。也就是说，来自WO2016/134333的所有CPA.7和CHA.7抗体(包括 CDR、VH和VL和全长序列)的图和图例以及特定序列和SEQ ID NO:明确地并入本文。

图45示出不同亲和力的两种抗PVRIG抗体结合原代CD8 T细胞的能力。如图45中所示，通过与经过工程改造以过表达PVRIG的HEK细胞(HEK hPVRIG)结合测量，CHA.7.518具有比CPA.7.021(WO2016/13433中的序列) 高约8倍的亲和力。与此一致，通过与Jurkat细胞结合测量，CHA.7.518具有比CPA.7.021高约13倍的亲和力。CHA.7.518的较高亲和力确实对应于来自 HEK hPVRIG细胞的更大的最大结合信号，但不对应于Jurkat细胞。

相反，与CPA.7.021相比，CHA.7.518始终从原代CD8 T细胞获得更高的最大结合信号。这在结合滴定实验中说明，其中将不同浓度的同种型或抗 PVRIG抗体加入原代CD8 T细胞中，并测量所得的最大结合信号。在所示两个供体中(图45)，CHA.7.518始终以滴定依赖性方式给出比CPA.7.021更高的最大信号(几何平均荧光强度，GMFI)。gMFIr＝所关注抗体的几何荧光强度/对照抗体的几何荧光强度。gMFIr测量所关注抗体相对于同种型抗体在两者的固定浓度下给出的信号。

因此，本发明的抗PVRIG抗体具有皮摩尔范围内的结合亲和力(如使用本文概述的技术测量的)，例如0.1至9pM，优选约0.2至约2，并且约0.2至约 0.5特别有用。

对于TIGIT抗体，PVRIG抗体类似地标记如下。抗体具有参考编号，例如“CHA.7.518.1”。这代表可变重链和可变轻链的组合，如图3所描绘，例如，理解这些抗体包括两条重链和两条轻链。“CPA.7.518.1.VH”是指CPA.7.518.1的可变重链部分，而“CPA.7.518.1.VL”是可变轻链。“CPA.7.518.1.vhCDR1”、“CPA.7.518.1.vhCDR2”、“CPA.7.518.1.vhCDR3”、“CPA.7.518.1.vlCDR1”、“CPA.7.518.1.vlCDR2”和“CPA.7.518.1.vlCDR3”是指所指示的CDR。“CPA.7.518.1.HC”是指该分子的整个重链(例如可变结构域和恒定结构域)，“CPA.7.518.1.LC”是指同一分子的整个轻链(例如可变结构域和恒定结构域)。通常，人κ轻链用于本文中每种噬菌体(或人源化杂交瘤) 抗体的恒定结构域，尽管在一些实施方案中使用λ轻链恒定结构域。“CPA.7.518.1.H1”是指包含可变重链和轻链结构域的全长抗体，包括人IgG1 的恒定结构域(因此H1；IgG1、IgG2、IgG3和IgG4序列显示在图50中)。因此，“CPA.7.518.1.H2”将是与人IgG2连接的CPA.7.518.1可变结构域。“CPA.7.518.1.H3”将是与人IgG3连接的CPA.7.518.1可变结构域，“CPA.7.518.1.H4”将是与人IgG4连接的CPA.7.518.1可变结构域。注意，在一些情况下，人IgG可能具有额外的突变，如下所述，并且可以注释。例如，在许多实施方案中，人IgG4中可能存在S241P突变，并且这可以注释为例如“CPA.7.518.1.H4(S241P)”。具有该S241P铰链变体的人IgG4序列示于图50中。其它可能的变体是IgG1(N297A)，(或在该位点消除糖基化的其它变体，因此许多效应功能与FcγRIIIa结合相关)和IgG1(D265A)，其降低与FcγR受体的结合。

本发明还提供重域可变结构域和轻域可变结构域以及全长重链和轻链。

在一些实施方案中，本发明提供结合PVRIG的scFv，其包含如上所述通过scFv接头连接的重链可变结构域和轻链可变结构域。VL和VH结构域可以呈任一定向，例如从N端到C端“VH-接头-VL”或“VL-接头”VH”。这些是由它们的组成部分命名的；例如“scFv-CHA.7.518.1VH-接头-VL”或“scFv-CPA.7.518.1.VL-接头-VH”。因此，“scFv-CPA.7.518.1”可以呈任一定向。

IX.编码抗体的核酸

还提供了编码本发明抗体的核酸组合物，以及含有核酸的表达载体和用核酸和/或表达载体组合物转化的宿主细胞。如本领域技术人员所理解的，由于遗传密码的简并性，本文描述的蛋白质序列可由任何数量的可能核酸序列编码。

编码抗体的核酸组合物将取决于抗体的形式。对于传统的，含有两条重链和两条轻链的四聚体抗体由两种不同的核酸编码，一种编码重链，一种编码轻链。这些可以放入单个表达载体或两个表达载体中，如本领域中已知，转化到宿主细胞中，在宿主细胞中表达它们以形成本发明的抗体。在一些实施方案中，例如当使用scFv构建体时，通常使用编码可变重链-接头-可变轻链的单个核酸，其可以插入表达载体中以转化到宿主细胞中。可将核酸置于含有适当转录和翻译控制序列的表达载体中，转录和翻译控制序列包括但不限于信号和分泌序列、调控序列、启动子、复制起点、选择基因等。

用于表达根据本发明的至少一些实施方案的重组抗体的优选哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)、PER.C6、HEK293和本领域已知的其它细胞。

核酸可以存在于完整细胞中、细胞裂解物中、或部分纯化或基本上纯的形式中。当通过标准技术(包括碱/SDS处理、CsCl条带、柱层析、琼脂糖凝胶电泳和本领域熟知的其它技术)从其它细胞组分或其它污染物(例如其它细胞核酸或蛋白质)中纯化时，核酸被“分离”或“基本上纯化”。

为了产生scFv基因，编码V

X.配制品

用于实施前述方法的治疗组合物(特别是CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CPA.9.086)可以配制成包含适合于所需递送方法的载剂的药物组合物。合适的载剂包括当与治疗组合物组合时保留治疗组合物的抗肿瘤功能并且通常不与患者的免疫系统反应的任何材料。实例包括但不限于许多标准药物载剂中的任何一种，例如无菌磷酸盐缓冲盐水溶液、抑菌水等(一般参见《雷明顿氏药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)》第16版,A.Osal.编,1980)。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者无毒，并且可包括缓冲剂。

在一个优选的实施方案中，包含本发明抗体的药物组合物可以是水溶形式，例如作为药学上可接受的盐存在，其意在包括酸加成盐和碱加成盐。“药学上可接受的酸加成盐”是指那些保留游离碱的生物有效性并且不在生物学上或其它方面不合意的用无机酸等形成的盐。“药学上可接受的碱加成盐”包括衍生自无机碱等的盐。

优选呈无菌水溶液形式、包含本发明抗体的药物组合物的施用可以通过多种方式进行，包括但不限于皮下和静脉内。

在优选的实施方案中，给药量和施用频率选择为治疗或预防有效的。如本领域中已知，可能需要针对蛋白质降解、全身性对比局部递送和新蛋白酶合成速率以及年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、药物相互作用和病况的严重程度做出调整，并且这些调整将由本领域技术人员通过常规实验来确定。

为了治疗患者，可以施用治疗有效剂量的本发明的Fc变体。本文的“治疗有效剂量”是指产生其施用效果的剂量。确切的剂量将取决于治疗的目的，并且本领域技术人员可以使用已知技术确定。

XI.使用抗体的方法

本发明的抗体，包括PVRIG和TIGIT抗体，可用于许多诊断和治疗应用。在一些情况下，使用对样品肿瘤活组织检查物的表达水平(基因表达水平或蛋白质表达水平，后者优选)的评估来确定向患者施用哪种抗体，以确定样品是否过表达TIGIT或PVRIG或两者，以确定要施用什么治疗性抗体。

A.诊断用途

因此，本发明的抗体还可用于分别过表达PVRIG或TIGIT的肿瘤的体外或体内诊断，包括成像。然而，应该注意的是，如本文所讨论的，TIGIT和 PVRIG，作为免疫肿瘤学靶蛋白，不一定在癌细胞上过表达，而是在癌症中的免疫浸润中过表达。因此，它是作用机制，例如免疫细胞如T细胞和NK细胞的活化，其导致癌症诊断。因此，这些抗体可用于诊断癌症。使用PVRIG抗体的诊断也在WO 2016/134333[0434至0459]中概述，其通过引用并入本文。

通常，诊断可以通过几种方式完成。在一个实施方案中，使来自患者的组织(例如活组织检查样品)与通常标记的TIGIT抗体接触，使得抗体结合内源性TIGIT。将信号水平与来自相同患者或参考样品的正常非癌组织的信号水平进行比较，以确定癌症的存在或不存在。活组织检查样品可来自实体瘤、血液样品(对于淋巴瘤和白血病，如ALL、T细胞淋巴瘤等)。

一般来说，在这个实施方案中，例如用可使用荧光计或本领域中众所周知的其它光学检测系统检测的荧光团或其它光标记来标记抗TIGIT。在另一个实施方案中，使二级标记的抗体与样品接触，例如使用来自不同哺乳动物(小鼠、大鼠、兔、山羊等)的抗人IgG抗体，以形成如本领域已知的夹心分析。或者，可以直接标记抗TIGIT mAb(即生物素)，并且可以通过针对本领域中的标记试剂的二级Ab进行检测。

一旦发现TIGIT的过表达，就可以施用本文所述的根据本发明的抗TIGIT 抗体进行治疗。

在其它实施方案中，进行体内诊断。通常，在该实施方案中，将抗TIGIT 抗体(包括抗体片段)注射到患者体内并进行成像。在这个实施方案中，举例来说，一般用光标记或MRI标记来标记抗体，如mAb(包括片段)的放射性标记钆螯合物。

在一些实施方案中，本文描述的抗体用于诊断和治疗，或仅用于诊断。当抗TIGIT抗体用于诊断和治疗时，一些实施方案依赖于针对两种不同表位的两种不同的抗TIGIT抗体，使得诊断抗体不与治疗抗体竞争结合，尽管在一些情况下可以将相同的抗体用于诊断和治疗。例如，这可以使用位于不同分箱中，例如结合TIGIT上的不同表位的抗体来完成，例如本文概述的。因此包括在本发明中的是包含诊断抗体和治疗抗体的组合物，并且在一些实施方案中，如本文所述标记诊断抗体。此外，治疗和诊断抗体的组合物也可以与本文所述的其它药物共同施用。

特别适用于诊断的抗体包括但不限于这些列举的抗体，或利用CDR与变体序列的抗体，或与图53中的任何抗体竞争结合的抗体。

在许多实施方案中，标记诊断抗体。本文中“标记”是指本文公开的抗体附接有一种或多种元素、同位素或化合物，其能够在筛选或诊断程序中进行检测。一般来说，标记分成几类：a)免疫标记，其可以是作为由抗体识别的融合伴侣并入的表位；b)同位素标记，其可以是放射性同位素或重同位素；c)小分子标记，其可以包括荧光染料和比色染料，或能够实现其它标记方法的分子，如生物素；以及d)允许身体成像的标记，如颗粒(包括用于超声标记的气泡) 或顺磁标记。标记可以在任何位置并入抗体中，并且可以在蛋白质表达期间体外或体内并入，如本领域已知的。

可以在体内，通过施用允许如下所述的全身成像的诊断抗体，或在体外，对从患者取出的样品进行诊断。在此上下文中的“样品”包括任何数量的物质，包括但不限于体液(包括但不限于血液、尿液、血清、淋巴液、唾液、肛门和阴道分泌物、汗液和精液)，以及组织样本，例如由相关组织的活组织检查产生的样品。

此外，如下文以及实施例和图中所述，关于PVRIG或TIGIT或两者，或 PVRIG和PD-1，或TIGIT和PD-1的蛋白质表达水平的信息可用于确定哪些抗体应该施用于患者。

B.癌症治疗

本发明的抗体特别适用于治疗癌症。通常，本发明的抗体是免疫调节的，因为本发明的抗体通常通过抑制检查点受体(例如PVRIG或TIGIT)的作用来刺激免疫系统而不是直接攻击癌细胞。因此，与旨在抑制对肿瘤生长和发育至关重要的分子途径和/或消耗肿瘤细胞的肿瘤靶向疗法不同，癌症免疫疗法旨在刺激患者自身的免疫系统以消除癌细胞，破坏长期的肿瘤。各种方法可用于癌症免疫疗法，其中包括用于诱导肿瘤特异性T细胞反应的治疗性癌症疫苗，以及用于去除免疫抑制途径的免疫刺激性抗体(即抑制性受体的拮抗剂＝免疫检查点)。

靶向疗法或常规抗癌疗法的临床反应往往是短暂的，因为癌细胞产生抗性，并且发生肿瘤复发。然而，过去几年中癌症免疫疗法的临床应用表明，这种类型的疗法可以具有持久的临床反应，显示出对长期存活的显著影响。然而，尽管反应是长期的，但只有少数患者有反应(与常规或靶向疗法相反，大量患者有反应，但反应是短暂的)。

当临床上检测到肿瘤时，它已经通过获得免疫耐受和免疫抑制性质以及通过各种机制和多种免疫细胞产生免疫抑制性肿瘤微环境来逃避免疫防御系统。

因此，本发明的抗体可用于治疗癌症。由于免疫肿瘤学作用机制的性质，检查点受体(TIGIT或PVRIG)不一定需要在特定癌症类型上过表达或与特定癌症类型相关；也就是说，目标是使抗体去除对T细胞和NK细胞活化的抑制，以使得免疫系统将对癌症起作用。

如本文所用，“癌症”泛指任何肿瘤性疾病(无论是侵袭性的还是转移性的)，其特征在于引起恶性生长或肿瘤的异常和不受控制的细胞分裂(例如，不受调节的细胞生长)。本文所用的术语“癌症”或“癌性”应理解为包括任何肿瘤性疾病(无论是侵袭性的，非侵袭性的还是转移性的)，其特征在于引起恶性生长或肿瘤的异常和不受控制的细胞分裂，其非限制性实施方案在本文中有描述。这包括哺乳动物中通常以不受调节的细胞生长为特征的任何生理病况。癌症实施方案举例说明于实施例中并且在说明书内也有描述。

可使用本发明的抗体治疗的癌症的非限制性实施方案包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。这类癌症的更具体的实施方案包括鳞状细胞癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、肝癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌和各种类型的头颈癌，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞NHL；高级淋巴母细胞性NHL；高级小型非裂解细胞NHL；肿块性病变NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症)；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；急性淋巴母细胞性白血病 (ALL)；毛细胞白血病；慢性骨髓母细胞白血病；多发性骨髓瘤和移植后淋巴增生性疾病(PTLD)。

如WO2016/134333的实施例中所示，PVRIG在许多不同来源的不同肿瘤中过表达和/或与肿瘤淋巴细胞浸润相关(如通过与CD3、CD4、CD8和PD-1 表达的相关性所证明)，并且因此可用于治疗任何癌症，包括但不限于前列腺癌、肝癌(HCC)、结肠直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、泌尿道上皮癌、肺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤(NHL)和霍奇金淋巴瘤(HD))、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤和食道癌。

特别是，CHA.7.518.1H4(S241P)可用于治疗前列腺癌、肝癌(HCC)、结肠直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、泌尿道上皮癌、肺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、膀胱癌和食道癌。

特别是，CHA.7.538.1.2.H4(S241P)可用于治疗前列腺癌、肝癌(HCC)、结肠直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、泌尿道上皮癌、肺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、膀胱癌和食道癌。

特别是，CPA.9.086H4(S241P)可用于治疗前列腺癌、肝癌(HCC)、结肠直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、泌尿道上皮癌、肺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、膀胱癌和食道癌。

特别是，CPA.9.083H4(S241P)可用于治疗前列腺癌、肝癌(HCC)、结肠直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、泌尿道上皮癌、肺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、膀胱癌和食道癌。

特别是，CHA.9.547.7.H4(S241P)可用于治疗前列腺癌、肝癌(HCC)、结肠直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、泌尿道上皮癌、肺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、膀胱癌和食道癌。

特别是，CHA.9.547.13.H4(S241P)可用于治疗前列腺癌、肝癌(HCC)、结肠直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、泌尿道上皮癌、肺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、膀胱癌和食道癌。

C.TIGIT抗体单一治疗

本发明的TIGIT抗体特别作为单一疗法用于治疗癌症。由于免疫肿瘤学作用机制的性质，TIGIT不一定需要在特定癌症类型上过表达或与特定癌症类型相关；也就是说，目标是使抗TIGIT抗体去除对T细胞和NK细胞活化的抑制，以使得免疫系统将对癌症起作用。

虽然图53的任何抗TIGIT抗体用于治疗癌症(包括如下文所述的T细胞活化)，但CPA.9.086.H4(S241P)、CPA.9.083.H4(S241P)、 CHA.9.547.7.H4(S241P)、和CHA.9.547.13.H4(S241P)在一些实施方案中发现特定用途。

D.PVRIG抗体单一治疗

本发明的PVRIG抗体特别作为单一疗法用于治疗癌症。由于免疫肿瘤学作用机制的性质，TIGIT不一定需要在特定癌症类型上过表达或与特定癌症类型相关；也就是说，目标是使抗TIGIT抗体去除对T细胞和NK细胞活化的抑制，以使得免疫系统将对癌症起作用。

特别地，CHA.7.518.1H4(S241P)可用作单一疗法。

类似地，特别是，CHA.7.538.1.2.H4(S241P)可作为单一疗法用于治疗前列腺癌、肝癌(HCC)、结肠直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、泌尿道上皮癌、肺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL 或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、膀胱癌和食道癌。

E.组合疗法

如本领域中已知，包含靶向免疫疗法靶标的治疗抗体和特异性针对疾病病况的额外治疗剂的组合疗法正展现出巨大的前景。例如，在免疫疗法领域，存在许多使用化学治疗剂(小分子药物或抗肿瘤抗体)或免疫肿瘤学抗体的有前景的组合疗法。

术语“与……组合”和“共同施用”不限于在完全相同的时间施用所述预防或治疗剂。相反，这意味着抗体和其它一种或多种药剂以一定的顺序和时间间隔施用，使得它们可以共同起作用以提供与仅用本发明的抗体或仅用其它一种或多种药剂治疗相比增加的益处。优选抗体和其它一种或多种药剂相加起作用，特别优选它们协同起作用。这些分子合适地以对预期目的有效的量组合存在。有经验的开业医生能够凭经验或通过考虑药剂的药物动力学和作用模式来确定每种治疗剂的合适剂量以及合适的施用时序和方法。

因此，本发明的抗体可以与一种或多种其它治疗方案或药剂同时施用。另外的治疗方案或药剂可用于改善抗体的功效或安全性。而且，额外的治疗方案或药剂可用于治疗相同的疾病或合并症，而不是改变抗体的作用。例如，可以将本发明的抗体与化学疗法、放射疗法或化学疗法和放射疗法一起施用于患者。

1.TIGIT抗体与化学治疗小分子

本发明的TIGIT抗体可以与一种或多种其它预防剂或治疗剂组合施用，包括但不限于细胞毒性剂、化学治疗剂、细胞因子、生长抑制剂、抗激素剂、激酶抑制剂、抗血管生成剂、心脏保护剂、免疫刺激剂、免疫抑制剂、促进血液细胞增殖的药剂、血管生成抑制剂、蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制剂或其它治疗剂。

在此上下文中，“化学治疗剂”是可用于治疗癌症的化合物。化学治疗剂的实例包括烷化剂，如噻替派(thiotepa)和环磷酰胺；烷基磺酸盐，如白消安 (busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，如苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)和尤利多巴(uredopa)；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三亚乙基三聚氰胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基三聚氰胺；乙酰精宁(acetogenins)(尤其布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚(dronabinol)，MARINOL')；β- 拉帕酮(beta-lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙碱(colchicine)；桦木酸 (betulinicacid)；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物拓朴替康(topotecan)

根据至少一些实施方案，抗TIGIT免疫分子可以与本领域已知的任何护理癌症治疗标准(例如，可以在http://www.cancer.gov/cancertopics中找到)组合使用。

因此，在一些情况下，本文描述的抗PVRIG抗体(尤其包括 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P))可与化学治疗剂组合。类似地，本文描述的抗TIGIT抗体(尤其包括CPA.9.086H4(S241P)、 CPA.9.083H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P))可与化学治疗剂组合。

此外，本发明的抗PVRIG和抗TIGIT抗体也可以与其它检查点抑制剂或活化剂一起施用。

2.TIGIT和检查点抗体组合疗法

如本文所示，本发明的TIGIT抗体可与许多检查点受体抗体中的一种组合。在一些实施方案中，可评估患者肿瘤的受体表达，然后将结果用于告知临床医生应施用哪种抗体：PVRIG和PD-1，TIGIT和PD-1或TIGIT和PVRIG。这些分析如下所述。

a.抗TIGIT抗体与抗PD-1抗体组合

在一个实施方案中，本发明提供了本发明的抗TIGIT抗体和抗PD-1抗体的组合。

在一个实施方案中，活组织检查物取自癌症患者的肿瘤，并且如本领域已知的解离用于FACS分析。用针对(1)TIGIT(例如使用本文所述的任何抗体或本领域中的其它抗体，如MBSA43)；(2)PD-1(例如使用本领域已知的那些，包括EH12.2H7、

因此，本发明提供了本发明的抗TIGIT抗体和抗PD-1抗体的组合。有两种已批准的抗PD-1抗体派立珠单抗(pembrolizumab)

因此，本发明提供了以下特定组合：CPA.9.083.H4(S241P)(如图53B中所示)与派立珠单抗；如图53B中所示的CPA.9.083.H4(S241P)与纳武单抗；如图 53A中所示的CPA.9.086.H4(S241P)与派立珠单抗；如图53A中所示的 CPA.9.086.H4(S241P)与纳武单抗；CHA.9.547.7H4(S241P)与派立珠单抗； CHA.9.547.7H4(S241P与纳武单抗；CHA.9.547.13.H4(S241P)与派立珠单抗以及 CHA.9.547.13.H4(S241P)与纳武单抗。(参考序列表)。

b.抗TIGIT抗体与抗CTLA-4抗体组合

在另一个实施方案中，本发明提供了本发明的抗TIGIT抗体和抗CTLA-4 抗体的组合。有两种已批准的抗CTLA-4抗体伊匹单抗(ipilimumab)

因此，本发明提供了以下特定组合：CPA.9.083.H4(S241P)与伊匹单抗；CPA.9.083.H4(S241P)与曲美单抗；CPA.9.086.H4(S241P)与伊匹单抗； CPA.9.086.H4(S241P)与曲美单抗；CHA.9.547.7H4(S241P)与伊匹单抗； CHA.9.547.7H4(S241P)与曲美单抗；CHA.9.547.13.H4(S241P)与伊匹单抗以及 CHA.9.547.13.H4(S241P)与曲美单抗。

c.抗TIGIT抗体与抗PD-L1抗体组合

在另一个实施方案中，本发明提供了本发明的抗TIGIT抗体和抗PD-L1抗体的组合。有三种已批准的抗PD-L1抗体阿特珠单抗(atezolizumab)

因此，本发明提供了以下特定组合：CPA.9.083.H4(S241P)与阿特珠单抗；CPA.9.083.H4(S241P)与阿维鲁单抗；CPA.9.083.H4(S241P)与度伐单抗； CPA.9.086.H4(S241P)与阿特珠单抗；CPA.9.086.H4(S241P)与阿维鲁单抗； CPA.9.086.H4(S241P)与度伐单抗；CHA.9.547.7H4(S241P)与阿特珠单抗； CHA.9.547.7H4(S241P)与阿维鲁单抗；CHA.9.547.7H4(S241P)与度伐单抗； CHA.9.547.13.H4(S241P)与阿特珠单抗；CHA.9.547.13.H4(S241P)与阿维鲁单抗；以及CHA.9.547.13.H4(S241P)与度伐单抗。

d.抗TIGIT抗体与抗LAG-3抗体组合

在另一个实施方案中，本发明提供了本发明的抗TIGIT抗体和抗LAG-3 抗体的组合。有几种开发中的抗LAG-3抗体，包括BMS-986016(参见国际专利申请第WO2010/019570A2号，通过引用整体并入本文)、GSK2831781(参见美国专利申请第2016/0017037A号，通过引用整体并入本文)和Merck克隆 22D2、11C9、4A10和/或19E8(参见WO2016/028672A1，通过引用整体并入本文)和GSK2831781以及开发中的其它抗体，其可与本发明的抗TIGIT抗体组合使用。

因此，本发明提供了以下特定组合：CPA.9.083.H4(S241P)与BMS-986016；CPA.9.083.H4(S241P)与GSK2831781；CPA.9.086.H4(S241P)与BMS-986016； CPA.9.086.H4(S241P)与GSK2831781；CHA.9.547.7H4(S241P)与BMS-986016； CHA.9.547.7H4(S241P)与GSK2831781；CHA.9.547.13.H4(S241P)与 BMS-986016以及CHA.9.547.13.H4(S241P)与GSK2831781。

因此，本发明还提供了以下特定组合：CPA.9.083.H4(S241P)与Merck克隆 22D2、11C9和/或4A10；CPA.9.086.H4(S241P)与Merck克隆22D2、11C9和/ 或4A10；CHA.9.547.7H4(S241P)与Merck克隆22D2、11C9和/或4A10； CHA.9.547.13.H4(S241P)与Merck克隆22D2、11C9和/或4A10。

e.抗TIGIT抗体与抗TIM-3抗体组合

在另一个实施方案中，本发明提供了本发明的抗TIGIT抗体和抗TIM-3抗体的组合。存在至少一种开发中的抗TIM-3抗体TSR-022以及其它开发中的抗体，其可与本发明的抗TIGIT抗体组合使用。

因此，本发明提供了以下特定组合：CPA.9.083.H4(S241P)与TSR-022；CPA.9.086.H4(S241P与TSR-0226；CHA.9.547.7H4(S241P)与TSR-022；以及CHA.9.547.13.H4(S241P)与TSR-022。

f.抗TIGIT抗体与抗BTLA抗体组合

在另一个实施方案中，本发明提供本发明的抗TIGIT抗体和抗BTLA抗体的组合，参见WO2011/014438，其全部内容通过引用并入本文，特别是关于其中公开的抗BTLA抗体的CDR和全长序列。因此，本发明提供了以下特定组合：CPA.9.083.H4(S241P)与抗BTLA抗体；CPA.9.086.H4(S241P)与抗BTLA抗体；CHA.9.547.7H4(S241P)与抗BTLA抗体；以及CHA.9.547.13.H4(S241P与抗BTLA抗体。

g.TIGIT抗体与抗肿瘤抗体

在一些实施方案中，本发明的抗TIGIT抗体与如下抗体共同施用，所述抗体与通常作用于免疫系统以增加患者的天然免疫反应的免疫肿瘤学/检查点抑制剂不同，而是针对特定肿瘤靶抗原(TTA)。存在大量已批准或开发中的抗 TTA抗体可与本发明TIGIT抗体组合。目前批准的抗体包括但不限于西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)(全部针对EGFR)、利妥昔单抗(rituximab)(CD20)、曲妥珠单抗(trastuzumab) 和帕妥珠单抗(pertuzumab)(HER2)、阿仑单抗(alemtuzumab)(CD52)、贝伐单抗(bevacizumab)(VEGF)、奥法木单抗(ofatumumab)(CD20)、地诺单抗(denosumab)(RANK配体)、贝伦妥单抗(brentuximab)(CD30)、达土木单抗(daratumumab)(CD38)、替伊莫单抗(ibritumomab)(CD20)和伊匹单抗(ipilimumab)(CTLA-4)。可以与本文的抗TIGIT抗体组合的临床试验中的特异性靶肿瘤抗体包括但不限于抗CTLA4 mAb，如伊匹单抗、曲美单抗；抗PD-1，如纳武单抗BMS-936558/MDX-1106/ONO-4538、AMP224、CT-011、 MK-3475，抗PDL-1拮抗剂，如BMS-936559/MDX-1105、MEDI4736、 RG-7446/MPDL3280A；抗LAG-3，如IMP-321)、抗TIM-3、抗BTLA、抗B7-H4、抗B7-H3、抗VISTA；靶向免疫刺激性蛋白质的激动性抗体，包括抗CD40 mAb，如CP-870,893、鲁卡木单抗(lucatumumab)、达西珠单抗(dacetuzumab)；抗CD137mAb，如BMS-663513乌瑞鲁单抗(urelumab)(抗4-1BB；参见例如美国专利第7,288,638号和第8,962,804号，其全部内容通过引用并入本文)； PF-05082566优图鲁单抗(utomilumab)(参见例如美国专利第8,821,867号；第 8,337,850号；及第9,468,678号，以及国际专利申请公开号WO 2012/032433，其全部内容通过引用并入本文)；抗OX40 mAb，如抗OX40(参见例如 WO2006/029879或WO2010096418，其全部内容通过引用并入本文)；抗GITR mAb，如TRX518(参见例如美国专利第7,812,135号，其全部内容通过引用并入本文)；抗CD27 mAb，如瓦力鲁单抗(varlilumab)CDX-1127(参见例如 WO 2016/145085和美国专利公开号US2011/0274685和US 2012/0213771，其全部内容通过引用并入本文)；抗ICOS mAb(例如MEDI-570、JTX-2011和抗 TIM3抗体(参见例如WO 2013/006490或美国专利公开号US 2016/0257758，其全部内容通过引用并入本文)以及针对前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌、多发性骨髓瘤、黑素瘤、淋巴瘤、肺癌包括小细胞肺癌、肾癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、脑癌的单克隆抗体(一般参见www.clinicaltrials.gov)。

3.PVRIG和PD-1组合疗法

如本文所示，本发明的PVRIG抗体可与许多检查点受体抗体中的一种组合。

a.抗PVRIG抗体与抗PD-1抗体组合

在另一个实施方案中，本发明提供了本发明的抗PVRIG抗体和抗PD-1抗体的组合。

在一个实施方案中，活组织检查物取自癌症患者的肿瘤，并且如本领域已知的解离用于FACS分析。用针对(1)PVRIG(通常使用例如CHA.7.518.1H4(S241P)，尽管可使用WO2016/134333(具体包括结合，即使它们不阻断的任何抗体)或WO2017/041004中概述的任何抗体)；(2)PD-1(例如使用本领域已知的那些，包括EH12.2H7、

有两种已批准的抗PD-1抗体派立珠单抗

因此，本发明提供了以下特定组合：CHA.7.518.1.H4(S241P)(如图3中所示)与派立珠单抗；如图3中所示的CHA.7.518.1.H4(S241P)与纳武单抗；如图 3中所示的CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与派立珠单抗以及如中所示的 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与纳武单抗。

b.抗PVRIG抗体与抗CTLA-4抗体组合

在另一个实施方案中，本发明提供了本发明的抗PVRIG抗体和抗CTLA-4 抗体的组合。有两种已批准的抗CTLA-4抗体伊匹单抗

因此，本发明提供了以下特定组合：CHA.7.518.1.H4(S241P)与伊匹单抗；CHA.7.518.1.H4(S241P)与曲美单抗；CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与伊匹单抗以及CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与曲美单抗。

c.抗PVRIG抗体与抗PD-L1抗体组合

在另一个实施方案中，本发明提供了本发明的抗PVRIG抗体和抗PD-L1 抗体的组合。有三种已批准的抗PD-L1抗体阿特珠单抗

因此，本发明提供了以下特定组合：CHA.7.518.1.H4(S241P)与阿特珠单抗；CPA.7518.1.H4(S241P)与阿维鲁单抗；CHA.7.518.1.H4(S241P)与度伐单抗；CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与阿特珠单抗；CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与阿维鲁单抗以及CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与度伐单抗。

d.抗PVRIG抗体与抗LAG-3抗体组合

在另一个实施方案中，本发明提供了本发明的抗PVRIG抗体和抗LAG-3 抗体的组合。有几种开发中的抗LAG-3抗体，包括BMS-986016(参见国际专利申请第WO2010/019570A2号，通过引用整体并入本文)、GSK2831781(参见美国专利申请第2016/0017037A号，通过引用整体并入本文)和Merck克隆 22D2、11C9、4A10和/或19E8(参见WO2016/028672A1，通过引用整体并入本文)和GSK2831781以及开发中的其它抗体，其可与本发明的抗PVRIG抗体组合使用。

因此，本发明提供了以下特定组合：CHA.7.518.1.H4(S241P)与 BMS-986016；CHA.7.518.1.H4(S241P)与GSK2831781；CHA.7.538.1.2.H4(S241P) 与BMS-986016以及CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与GSK2831781。

因此，本发明还提供了以下特定组合：CHA.7.518.1.H4(S241P)与Merck克隆22D2、11C9和/或4A10以及CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与Merck克隆22D2、 11C9和/或4A10。

e.抗PVRIG抗体与抗TIM-3抗体组合

在另一个实施方案中，本发明提供了本发明的抗PVRIG抗体和抗TIM-3 抗体的组合。存在至少一种开发中的抗TIM-3抗体TSR-022以及其它开发中的抗体，其可与本发明的抗PVRIG抗体组合使用。

因此，本发明提供了以下特定组合：CHA.7.518.1.H4(S241P)与TSR-022以及CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与TSR-0226。

f.抗PVRIG抗体与抗BTLA抗体组合

在另一个实施方案中，本发明提供本发明的抗PVRIG抗体和抗BTLA抗体的组合，参见WO2011/014438，其全部内容通过引用并入本文，特别是关于其中公开的抗BTLA抗体的CDR和全长序列。因此，本发明提供了以下特定组合：CHA.7.518.1.H4(S241P)与抗BTLA抗体以及CHA.7.538.1.2.H4(S241P) 与抗BTLA抗体。

g.PVRIG抗体与抗肿瘤抗体

在一些实施方案中，本发明的抗PVRIG抗体与如下抗体共同施用，所述抗体与通常作用于免疫系统以增加患者的天然免疫反应的免疫肿瘤学/检查点抑制剂不同，而是针对特定肿瘤靶抗原(TTA)。存在大量已批准或开发中的抗 TTA抗体可与本发明PVRIG抗体组合，包括CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。目前批准的抗体包括但不限于西妥昔单抗、帕尼单抗、尼妥珠单抗(全部针对EGFR)、利妥昔单抗(CD20)、曲妥珠单抗和帕妥珠单抗(HER2)、阿仑单抗(CD52)、贝伐单抗(VEGF)、奥法木单抗(CD20)、地诺单抗(RANK配体)、贝伦妥单抗(CD30)、达土木单抗(CD38)、替伊莫单抗(CD20)和伊匹单抗(CTLA-4)。可以与本文的抗PVRIG抗体组合的临床试验中的特异性靶肿瘤抗体包括但不限于抗CTLA4 mAb，如伊匹单抗、曲美单抗；抗PD-1，如纳武单抗BMS-936558/MDX-1106/ONO-4538、AMP224、 CT-011、MK-3475，抗PDL-1拮抗剂，如BMS-936559/MDX-1105、MEDI4736、RG-7446/MPDL3280A；抗LAG-3，如IMP-321)、抗TIM-3、抗BTLA、抗B7-H4、抗B7-H3、抗VISTA；靶向免疫刺激性蛋白质的激动性抗体，包括抗CD40 mAb，如CP-870,893、鲁卡木单抗、达西珠单抗；抗CD137 mAb，如BMS-663513 乌瑞鲁单抗(抗4-1BB；参见例如美国专利第7,288,638号和第8,962,804号，其全部内容通过引用并入本文)；PF-05082566优图鲁单抗(参见例如美国专利第8,821,867号；第8,337,850号；和第9,468,678号，以及国际专利申请公开号 WO 2012/032433，其全部内容通过引用并入本文)；抗OX40 mAb，如抗OX40 (参见例如WO2006/029879或WO2010096418，其全部内容通过引用并入本文)；抗GITR mAb，如TRX518(参见例如美国专利第7,812,135号，其全部内容通过引用并入本文)；抗CD27 mAb，如瓦力鲁单抗CDX-1127(参见例如 WO 2016/145085和美国专利公开号US 2011/0274685和US 2012/0213771，其全部内容通过引用并入本文)；抗ICOS mAb(例如MEDI-570、JTX-2011和抗 TIM3抗体(参见例如WO 2013/006490或美国专利公开号US 2016/0257758，其全部内容通过引用并入本文)以及针对前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌、多发性骨髓瘤、黑素瘤、淋巴瘤、肺癌包括小细胞肺癌、肾癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、脑癌的单克隆抗体(一般参见www.clinicaltrials.gov)。

4.PVRIG和TIGIT组合疗法

存在可用于特定实施方案的抗TIGIT和抗PVRIG抗体的特定组合。

在一个实施方案中，活组织检查物取自癌症患者的肿瘤，并且如本领域已知的解离用于FACS分析。用针对(1)PVRIG(通常使用例如 CHA.7.518.1H4(S241P)，尽管可使用WO2016/134333(具体包括结合，即使它们不阻断的任何抗体)或WO2017/041004中概述的任何抗体)；(2)TIGIT(例如使用本文所述的任何抗体或本领域的其它抗体，如MBSA43)；(3)PVR(例如使用本领域已知的那些，如SKII.4)和(4)PVRL2(例如使用本领域已知的那些，如TX11)；和(5)同种型对照抗体的标记抗体对细胞进行染色。进行FACS，并且对于每种受体，计算表达受体的细胞相对于对照抗体的百分比。如果对于所有4种受体，PVRIG、TIGIT、PVR和PVRL2的阳性细胞百分比≥1％，则用针对PVRIG和TIGIT的抗体治疗患者。在这方面，优选的组合是 CHA.7.518.1.H4(S241P)和CPA.9.086。

在一个实施方案中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体组合。在一个具体实施方案中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的VH和VL序列的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的VL和VL的抗体组合。在一个实施方案中，将如图53中所示的CPA.9.086.H4(S241P)与如图3中所示的 CHA.7.518.1H4(S241P)组合。

在一个实施方案中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体组合。在一个具体实施方案中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的VH和VL序列的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的VL和VL的抗体组合。在一个实施方案中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.518.1H4(S241P)组合。

在一个实施方案中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2.H4(S241P)的CDR组的抗体组合。在一个具体实施方案中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的VH和VL序列的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2.H4(S241P)的VL和VL的抗体组合。在一个实施方案中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P) 组合。

在一个实施方案中，将CHA.518.1.H4(S241P)与序列表中所述的抗TIGIT 抗体(参考USSN 62/513,916的图4中列出的所有抗体)组合，特别是 CPA.9.018、CPA.9.027、CPA.9.049、CPA.9.057、CPA.9.059、CPA.9.083、 CPA.9.086、CPA.9.089、CPA.9.093、CPA.9.101、CPA.9.103、CHA.9.536.1、CHA.9.536.3、CHA.9.536.4、CHA.9.536.5、CHA.9.536.6、CHA.9.536.7、 CHA.9.536.8、CHA.9.560.1、CHA.9.560.3、CHA.9.560.4、CHA.9.560.5、 CHA.9.560.6、CHA.9.560.7、CHA.9.560.8、CHA.9.546.1、CHA.9.546.1、CHA.9.547.2、CHA.9.547.3、CHA.9.547.4、CHA.9.547.6、CHA.9.547.7、 CHA.9.547.8、CHA.9.547.9、CHA.9.547.13、CHA.9.541.1、 CHA.9.541.3.CHA.9.541.4.CHA.9.541.5、CHA.9.541.6.CHA.9.541.7和 CHA.9.541.8

在一个实施方案中，将CPA.9.086与如WO2017/041004所述的抗PVRIG 抗体组合，包括但不限于具有a)HC序列SEQ ID NO:5和LC序列SEQ ID NO: 3(或其中含有的CDR组)；b)HC序列SEQ ID NO:32和LC序列SEQ ID NO: 33(或其中含有的CDR组)；和c)HC序列SEQ IDNO:32和LC序列SEQ ID NO:40(或其中含有的CDR组)的那些抗体。

在一些实施方案中，所述组合包含选自CPA.9.086、CPA.9.083、CHA.9.547.7 和CHA.9.547.13的抗TIGIT抗体，并且PVRIG抗体选自CHA7.518.1和CHA.7.538.1.2。在一些实施方案中，所述组合包含选自CPA.9.086、CPA.9.083、 CHA.9.547.7和CHA.9.547.13的抗TIGIT抗体，并且PVRIG抗体是 CHA7.518.1。在一些实施方案中，所述组合包含选自CPA.9.086、CPA.9.083、 CHA.9.547.7和CHA.9.547.13的抗TIGIT抗体，并且PVRIG抗体是CHA7.538.1.2。在一些实施方案中，所述组合包含抗TIGIT抗体CPA.9.086和 PVRIG抗体CHA7.518.1。在一些实施方案中，所述组合包含抗TIGIT抗体 CPA.9.083和PVRIG抗体CHA7.518.1。在一些实施方案中，所述组合包含抗 TIGIT抗体CHA.9.547.7和PVRIG抗体CHA7.518。在一些实施方案中，所述组合包含抗TIGIT抗体CHA.9.547.13和PVRIG抗体CHA7.518.1。在一些实施方案中，所述组合包含抗TIGIT抗体CPA.9.086和PVRIG抗体CHA7.538.1.2。在一些实施方案中，所述组合包含抗TIGIT抗体CPA.9.083和PVRIG抗体CHA7.538.1.2。在一些实施方案中，所述组合包含抗TIGIT抗体CHA.9.547.7 和PVRIG抗体CHA7.538.1.2。在一些实施方案中，所述组合包含抗TIGIT抗体CHA.9.547.13和PVRIG抗体CHA7.538.1.2。

图20-24提供了PVRIG抗体，如2016年9月27日提交的美国专利申请第 15/277,978号中所公开的。本发明的TIGIT抗体可以与这些图中公开的PVRIG 抗体，以及本申请全文公开的那些组合使用。

5.治疗评定

通常，将本发明的抗体单独或组合(PVRIG与PD-1，TIGIT与PD-1或TIGIT 与PVRIG)施用于癌症患者，并且以本文所述的多种方式评定功效。因此，虽然可以进行标准的功效分析，如癌症负荷、肿瘤大小、转移的存在或程度的评估等，但也可以基于免疫状态评估来评定免疫肿瘤学治疗。这可以通过多种方式完成，包括体外和体内分析。例如，可以进行免疫状态变化(例如，ipi治疗后ICOS+CD4+ T细胞的存在)的评估以及“老式”测量，例如肿瘤负荷、大小、侵袭性、LN受累、转移等。因此，可以评估以下中的任一个或全部：PVRIG 或TIGIT对CD4

在一些实施方案中，通过使用例如CFSE稀释法、免疫效应细胞的Ki67细胞内染色以及3H-胸苷掺入法评估免疫细胞增殖来评定治疗。

在一些实施方案中，通过评估基因表达的增加或活化相关标志物的蛋白质水平的增加来评定治疗，所述标志物包括以下中的一个或多个：CD25、CD69、 CD137、ICOS、PD1、GITR、OX40以及通过CD107A的表面表达测量的细胞脱粒。

在一些实施方案中，通过在不存在治疗的情况下，例如在施用本发明的抗体之前评定T细胞增殖的量来进行治疗评定。如果在施用后患者的T细胞增殖增加，例如患者T细胞的亚群增殖，则表明T细胞被活化。

类似地，用本发明的抗体治疗的评定可以通过在施用前和施用后测量患者的IFNγ水平来进行，以评定治疗效果。这可以在几小时或几天内完成。

通常，如本领域已知的那样进行基因表达分析。参见例如Goodkind等人, 《计算机与化学工程(Computers and Chem.Eng.)》29(3):589(2005)，Han等人, 《生物信息学与生物学洞察力(Bioinform.Biol.Insights)》11/15/15 9(增刊 1):29-46，Campo等人,《现代病理学(Nod.Pathol.)》2013年1月；26增刊 1:S97-S110，其基因表达测量技术通过引用明确并入本文。

通常，蛋白质表达测量也类似地如本领域已知的那样进行，参见例如Wang 等人,《基于毛细管电泳的生物标志物发现蛋白质组学技术研究进展(Recent Advances inCapillary Electrophoresis-Based Proteomic Techniques for BiomarkerDiscovery)》,《分子生物学方法(Methods.Mol.Biol.)》2013:984:1-12；Taylor 等人,《生物医学研究(BioMed Res.)》2014年卷,文章ID 361590,8页，Becerk 等人,《突变研究(Mutat.Res)》2011年6月17日:722(2):171-182，其测量技术通过引用明确地并入本文。

在一些实施方案中，通过估计许多细胞参数，例如酶活性(包括蛋白酶活性)、细胞膜渗透性、细胞粘附、ATP产生、辅酶产生和核苷酸摄取活性来评定由靶细胞活力检测测量的细胞毒活性，从而评定治疗。这些分析的具体实施方案包括但不限于台盼蓝(TrypanBlue)或PI染色、

在一些实施方案中，通过评定由细胞因子产生测量的T细胞活性，使用细胞因子，使用众所周知的技术，细胞内测量培养物上清液来评定治疗，所述细胞因子包括但不限于：IFNγ、TNFα、GM-CSF、IL2、IL6、IL4、IL5、IL10、 IL13。

因此，可以使用评估以下中的一个或多个的分析来评定治疗：(i)免疫反应的增加；(ii)αβ和/或γδT细胞活化的增加；(iii)细胞毒性T细胞活性的增加；(iv)NK和/或NKT细胞活性的增加；(v)αβ和/或γδT细胞抑制的缓解； (vi)促炎性细胞因子分泌的增加；(vii)IL-2分泌的增加；(viii)干扰素γ产生的增加；(ix)Th1反应的增加；(x)Th2反应的减少；(xi)减少或消除调节性T细胞(Treg)中的至少一种的细胞数量和/或活性。。

在一些实施方案中，使用如实施例中所述的混合淋巴细胞反应(MLR)分析来评定T细胞活化。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量免疫反应的增加或减少，如例如通过不同因子的磷酸化或去磷酸化或通过测量其它翻译后修饰所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量αβ和/或γδT细胞活化的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD137、CD107a、 PD1等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量细胞毒性T细胞活性的增加或减少，如例如通过直接杀伤靶细胞(例如癌细胞)或通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD137、CD107a、PD1等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量NK和/或NKT细胞活性的增加或减少，如通过直接杀伤靶细胞(例如癌细胞)或通过细胞因子分泌或通过如例如CD107a等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量αβ和/或γδT细胞抑制的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD137、CD107a、 PD1等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量促炎性细胞因子分泌的增加或减少，如例如通过ELISA或通过Luminex或通过基于珠粒的多重方法或通过细胞内染色和FACS分析或通过Alispot等所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量IL-2分泌的增加或减少，如例如通过ELISA或通过Luminex或通过基于珠粒的多重方法或通过细胞内染色和 FACS分析或通过Alispot等所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量干扰素γ产生的增加或减少，如例如通过ELISA或通过Luminex或通过基于珠粒的多重方法或通过细胞内染色和FACS分析或通过Alispot等所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量Th1反应的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量Th2反应的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量调节性T细胞(Treg)中的至少一种的细胞数量和/或活性的增加或减少，如例如通过流式细胞术或通过IHC 所测量。反应减少指示免疫刺活化性。适当的减少与增加相同，如下所述。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量M2巨噬细胞细胞数量的增加或减少，如例如通过流式细胞术或通过IHC所测量。反应减少指示免疫刺活化性。适当的减少与增加相同，如下所述。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量M2巨噬细胞促肿瘤发生活性的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过活化标志物的表达变化所测量。反应减少指示免疫刺活化性。适当的减少与增加相同，如下所述。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量N2嗜中性粒细胞增量的增加或减少，如例如通过流式细胞术或通过IHC所测量。反应减少指示免疫刺活化性。适当的减少与增加相同，如下所述。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量N2嗜中性粒细胞促肿瘤发生活性的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过活化标志物的表达变化所测量。反应减少指示免疫刺活化性。适当的减少与增加相同，如下所述。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量T细胞活化抑制的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD137、CD107a、PD1 等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量CTL活化抑制的增加或减少，如例如通过直接杀伤靶细胞(例如癌细胞)或通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD137、CD107a、PD1等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量αβ和/或γδT细胞耗竭的增加或减少，如例如通过活化标志物的表达变化所测量。反应减少指示免疫刺活化性。适当的减少与增加相同，如下所述。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量αβ和/或γδT细胞反应的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD137、CD107a、 PD1等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量抗原特异性记忆反应的刺激的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD45RA、 CCR7等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量癌细胞的细胞凋亡或裂解的增加或减少，如例如通过细胞毒性分析(如例如MTT、Cr释放、Calcine AM)或通过基于流式细胞仪的分析(如例如CFSE稀释或碘化丙啶染色等)所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量对癌细胞的细胞毒性或细胞抑制作用的刺激的增加或减少，如例如通过细胞毒性分析(如例如MTT、Cr释放、Calcine AM)或通过基于流式细胞仪的分析(如例如CFSE稀释或碘化丙啶染色等)所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量癌细胞的直接杀伤的增加或减少，如例如通过细胞毒性分析(如例如MTT、Cr释放、Calcine AM)或通过基于流式细胞仪的分析(如例如CFSE稀释或碘化丙啶染色等)所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量Th17活性的增加或减小，如例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，信号传导途径分析测量补体依赖性细胞毒性和/或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的诱导的增加或减少，如例如通过细胞毒性分析(如例如MTT、Cr释放、Calcine AM)或通过基于流式细胞仪的分析(如例如CFSE 稀释或碘化丙啶染色等)所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。

在一个实施方案中，例如通过直接杀伤靶细胞(例如癌细胞)或通过细胞因子分泌或通过增殖或活化标志物(例如CD137，CD107a，PD1等)的表达变化来测量T细胞活化。对于T细胞，增殖、细胞表面活化标志物(例如CD25、 CD69、CD137、PD1)、细胞毒性(杀伤靶细胞的能力)和细胞因子产生(例如 IL-2、IL-4、IL-6、IFNγ、TNF-a、IL-10、IL-17A)的增加将指示免疫调节，这将符合癌细胞的杀伤增强。

在一个实施方案中，例如通过直接杀死靶细胞(例如癌细胞)或通过细胞因子分泌或通过活化标志物(例如CD107a等)的表达变化来测量NK细胞活化。对于NK细胞，增殖、细胞毒性(杀死靶细胞并增加CD107a、颗粒酶和穿孔素表达的能力)、细胞因子产生(例如IFNγ和TNF)和细胞表面受体表达(例如CD25)的增加将指示免疫调节，这将符合癌细胞的杀伤增强。

在一个实施方案中，例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过活化标志物的表达变化来测量γδT细胞活化。

在一个实施方案中，例如通过细胞因子分泌或通过活化标志物的表达变化来测量Th1细胞活化。

相比参考样品或对照样本，例如不含本发明的抗PVRIG抗体的测试样品中的信号，活性或反应的适当增加(或如上所述适当减少)是至少约5％、10％、 20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或98％至99％的增加。活性的具体增加描绘在图27至34中。例如，关于T细胞增殖的增加， CHA.7.518.1.H4(S241P)显示增加约60％并且CHA.7.538.1.2.H4(S241P)显示增加 47％；相关的增加显示在T细胞增殖或IFN-γ中约10-70％，其中约20-60％也有用。

类似地，与参考或对照样品相比，增加至少一倍、两倍、三倍、四倍或五倍显示功效。

XII.实施方案列表

1.一种包含与人TIGIT(SEQ ID NO:97)结合的抗原结合结构域的组合物，其包含：

a)包含SEQ ID NO:160的重链可变结构域；和

b)包含SEQ ID NO:165的轻链可变结构域。

2.根据实施方案1所述的组合物，其中所述组合物是抗体，所述抗体包含：

a)包含VH-CH1-铰链-CH2-CH3的重链，其中所述VH包含SEQ ID NO: 160；和

b)包含VL-VC的轻链，其中所述VL包含SEQ ID NO:165并且VC是κ或λ。

3.根据实施方案2所述的组合物，其中所述CH1-铰链-CH2-CH3的序列选自人IgG1、IgG2和IgG4及其变体。

4.根据实施方案2或3所述的组合物，其中所述重链具有SEQ ID NO:164 并且所述轻链具有SEQ ID NO:169。

5.根据实施方案2至4中任一项所述的组合物，其还包含与人检查点受体蛋白结合的第二抗体。

6.根据实施方案5所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PD-1。

7.根据实施方案5所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PVRIG(SEQ ID NO:2)。

8.根据实施方案7所述的组合物，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:5的重链可变结构域和包含 SEQ ID NO:10的轻链可变结构域。

9.根据实施方案7所述的组合物，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:9并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:14。

10.一种核酸组合物，其包含：

a)编码包含SEQ ID NO:160的重链可变结构域的第一核酸；和

b)编码包含SEQ ID NO:165的轻链可变结构域的第二核酸。

11.根据实施方案10所述的核酸组合物，其中所述第一核酸编码包含 VH-CH1-铰链-CH2-CH3的重链，其中所述VH包含SEQ ID NO:160；并且所述第二核酸编码包含VL-VC的轻链，其中所述VL包含SEQ ID NO:165并且 VC是λ结构域。

12.一种表达载体组合物，其包含有分别包含根据实施方案10或11所述的第一核酸的第一表达载体和包含根据实施方案10或11所述的第二核酸的第二表达载体。

13.一种表达载体组合物，其包含表达载体，所述表达载体包含分别根据实施方案10或11所述的第一核酸和根据实施方案10或11所述的第二核酸。

14.一种宿主细胞，其包含根据实施方案12或13所述的表达载体组合物。

15.一种制造抗TIGIT抗体的方法，其包含：

a)在表达所述抗体的条件下培养根据实施方案14所述的宿主细胞；和

b)回收所述抗体。

16.一种通过活化T细胞治疗癌症的方法，其包含施用根据实施方案1至 9中任一项所述的组合物。

17.一种包含与人TIGIT(SEQ ID NO:97)结合的抗原结合结构域的组合物，其包含：

a)包含SEQ ID NO:150的重链可变结构域；和

b)包含SEQ ID NO:155的轻链可变结构域。

18.根据实施方案17所述的组合物，其中所述组合物是抗体，所述抗体包含：

a)包含VH-CH1-铰链-CH2-CH3的重链，其中所述VH包含SEQ ID NO: 150；和

b)包含VL-VC的轻链，其中所述VL包含SEQ ID NO:159并且VC是κ或λ。

19.根据实施方案18所述的组合物，其中所述CH1-铰链-CH2-CH3的序列选自人IgG1、IgG2和IgG4及其变体。

20.根据实施方案17或18所述的组合物，其中所述重链具有SEQ ID NO: 154并且所述轻链具有SEQ ID NO:159。

21.根据实施方案17至20中任一项所述的组合物，其还包含与人检查点受体蛋白结合的第二抗体。

22.根据实施方案21所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PD-1。

23.根据实施方案21所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PVRIG(SEQ ID NO:2)。

24.根据实施方案23所述的组合物，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:5的重链可变结构域和包含 SEQ ID NO:10的轻链可变结构域。

25.根据实施方案23所述的组合物，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:9并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:14。

26.一种核酸组合物，其包含：

a)编码包含SEQ ID NO:150的重链可变结构域的第一核酸；和

b)编码包含SEQ ID NO:155的轻链可变结构域的第二核酸。

27.根据实施方案26所述的核酸组合物，其中所述第一核酸编码包含 VH-CH1-铰链-CH2-CH3的重链，其中所述VH包含SEQ ID NO:150；并且所述第二核酸编码包含VL-VC的轻链，其中所述VL包含SEQ ID NO:155并且VC是λ结构域。

28.一种表达载体组合物，其包含有分别包含根据实施方案26或27所述的第一核酸的第一表达载体和包含根据实施方案26或27所述的第二核酸的第二表达载体。

29.一种表达载体组合物，其包含表达载体，所述表达载体包含分别根据实施方案26或27所述的第一核酸和根据实施方案26或27所述的第二核酸。

30.一种宿主细胞，其包含根据实施方案27或28所述的表达载体组合物。

31.一种制造抗TIGIT抗体的方法，其包含：

a)在表达所述抗体的条件下培养根据实施方案30所述的宿主细胞；和

b)回收所述抗体。

32.一种通过活化T细胞治疗癌症的方法，其包含施用根据实施方案17至 25中任一项所述的组合物。

33.一种抗体，其包含：

a)具有SEQ ID NO:9的重链；和

b)具有SEQ ID NO:14的轻链。

34.根据实施方案33所述的抗体，其还包含与人检查点受体蛋白结合的第二抗体。

35.根据实施方案34所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PD-1。

36.根据实施方案34所述的组合物，其中所述第二抗体结合人TIGIT(SEQ ID NO:97)。

37.根据实施方案36所述的组合物，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:160的重链可变结构域和包含 SEQ ID NO:165的轻链可变结构域。

38.根据实施方案36所述的组合物，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:164并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:169。

39.一种核酸组合物，其包含：

a)编码SEQ ID NO:9的第一核酸；和

b)编码SEQ ID NO:14的第二核酸。

40.一种表达载体组合物，其包含有包含根据实施方案39所述的第一核酸的第一表达载体和包含根据实施方案39所述的第二核酸的第二表达载体。

41.一种表达载体组合物，其包含表达载体，所述表达载体包含根据实施方案39所述的第一核酸和根据实施方案39所述的第二核酸。

42.一种宿主细胞，其包含根据实施方案41所述的表达载体组合物。

43.一种制造抗PVRIG抗体的方法，其包含：

a)在表达所述抗体的条件下培养根据实施方案42所述的宿主细胞；和

b)回收所述抗体。

44.一种通过活化T细胞治疗癌症的方法，其包含施用根据实施方案33所述的抗体。

45.一种抗体，其包含：

a)具有SEQ ID NO:19的重链；和

b)具有SEQ ID NO:24的轻链。

46.根据实施方案45所述的抗体，其还包含与人检查点受体蛋白结合的第二抗体。

47.根据实施方案46所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PD-1。

48.根据实施方案46所述的组合物，其中所述第二抗体结合人TIGIT(SEQ ID NO:97)。

49.根据实施方案48所述的组合物，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:160的重链可变结构域和包含 SEQ ID NO:165的轻链可变结构域。

50.根据实施方案49所述的组合物，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:164并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:169。

51.一种核酸组合物，其包含：

a)编码SEQ ID NO:19的第一核酸；和

b)编码SEQ ID NO:24的第二核酸。

52.一种表达载体组合物，其包含有包含根据实施方案51所述的第一核酸的第一表达载体和包含根据实施方案51所述的第二核酸的第二表达载体。

53.一种表达载体组合物，其包含表达载体，所述表达载体包含根据实施方案51所述的第一核酸和根据实施方案51所述的第二核酸。

54.一种宿主细胞，其包含根据实施方案53所述的表达载体组合物。

55.一种制造抗TIGIT抗体的方法，其包含：

a)在表达所述抗体的条件下培养根据实施方案54所述的宿主细胞；和

b)回收所述抗体。

56.一种通过活化T细胞治疗癌症的方法，其包含施用根据实施方案45所述的抗体。

57.一种方法，其包含：

a)从患者的肿瘤样本中提供细胞群体；

b)用标记的抗体对所述群体进行染色，所述抗体结合：

i)TIGIT蛋白；

ii)PVR蛋白；

iii)PD-1蛋白；

iv)PD-L1蛋白；和

v)i)-iv)中所述抗体的相关同种型对照；

c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；

d)对于TIGIT、PVR、PD-1和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同种型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；

其中如果所有4种受体的阳性细胞百分比>1％，

e)向所述患者施用针对TIGIT和PD-1的抗体。

58.根据实施方案57所述的方法，其中所述TIGIT抗体是CPA.9.086。

59.根据实施方案57或58所述的方法，其中所述PD-1抗体选自派立珠单抗和纳武单抗。

60.一种方法，其包含：

a)从患者的肿瘤样本中提供细胞群体；

b)用标记的抗体对所述群体进行染色，所述抗体结合：

i)PVRIG蛋白；

ii)PVRL2蛋白；

iii)PD-1蛋白；

iv)PD-L1蛋白；和

v)i)-iv)中所述抗体的相关同种型对照；

c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；

d)对于PVRIG、PVRL2、PD-1和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同种型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；

其中如果所有4种受体的阳性细胞百分比>1％，

e)向所述患者施用针对PVRIG和PD-1的抗体。

61.根据实施方案60所述的方法，其中所述PVRIG抗体是 CHA.7.518.1.H4(S241P)。

62.根据实施方案60或61所述的方法，其中所述PD-1抗体选自派立珠单抗和纳武单抗。

63.一种方法，其包含：

a)从患者的肿瘤样本中提供细胞群体；

b)用标记的抗体对所述群体进行染色，所述抗体结合：

i)PVRIG蛋白；

ii)PVRL2蛋白；

iii)TIGIT蛋白；

iv)PVR蛋白；和

v)同种型对照；

c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；

d)对于PVRIG、PVRL2、TIGIT和PVR中的每一种，确定所述群体中相对于所述同种型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；

其中如果所有4种受体的阳性细胞百分比>1％，

e)向所述患者施用针对PVRIG和TIGIT的抗体。

64.根据实施方案63所述的方法，其中所述PVRIG抗体是 CHA.7.518.1.H4(S241P)。

65.根据实施方案63或64所述的方法，其中所述TIGIT抗体是CPA9.086。

66.一种包含与人TIGIT(SEQ ID NO:97)结合的抗原结合结构域的组合物，其包含：

a)包含SEQ ID NO:560的重链可变结构域；和

b)包含SEQ ID NO:565的轻链可变结构域。

67.根据实施方案66所述的组合物，其中所述组合物是抗体，所述抗体包含：

a)包含VH-CH1-铰链-CH2-CH3的重链，其中所述VH包含SEQ ID NO: 560；和

b)包含VL-VC的轻链，其中所述VL包含SEQ ID NO:565并且VC是κ或λ。

68.根据实施方案67所述的组合物，其中所述CH1-铰链-CH2-CH3的序列选自人IgG1、IgG2和IgG4及其变体。

69.根据实施方案67或68所述的组合物，其中所述重链具有SEQ ID NO: 564并且所述轻链具有SEQ ID NO:569。

70.根据实施方案67至69中任一项所述的组合物，其还包含与人检查点受体蛋白结合的第二抗体。

71.根据实施方案70所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PD-1。

72.根据实施方案70所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PVRIG(SEQ ID NO:2)。

73.根据实施方案72所述的组合物，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:5的重链可变结构域和包含 SEQ ID NO:10的轻链可变结构域。

74.根据实施方案72所述的组合物，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:9并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:14。

75.一种核酸组合物，其包含：

a)编码包含SEQ ID NO:560的重链可变结构域的第一核酸；和

b)编码包含SEQ ID NO:565的轻链可变结构域的第二核酸。

76.根据实施方案75所述的核酸组合物，其中所述第一核酸编码包含 VH-CH1-铰链-CH2-CH3的重链，其中所述VH包含SEQ ID NO:560；并且所述第二核酸编码包含VL-VC的轻链，其中所述VL包含SEQ ID NO:565并且 VC是λ结构域。

77.一种表达载体组合物，其包含有分别包含根据实施方案75或76所述的第一核酸的第一表达载体和包含根据实施方案75或76所述的第二核酸的第二表达载体。

78.一种表达载体组合物，其包含表达载体，所述表达载体包含分别根据实施方案75或76所述的第一核酸和根据实施方案75或76所述的第二核酸。

79.一种宿主细胞，其包含根据实施方案77或78所述的表达载体组合物。

80.一种制造抗TIGIT抗体的方法，其包含：

a)在表达所述抗体的条件下培养根据实施方案79所述的宿主细胞；和

b)回收所述抗体。

81.一种通过活化T细胞治疗癌症的方法，其包含施用根据实施方案66至 74中任一项所述的组合物。

XIII.实施例

参考2016年2月19日提交的名称为“PVRIG抗体和治疗方法(PVRIG ANTIBODIESAND METHODS OF TREATMENT)”的PCT/US2016/18809，其全部内容通过引用明确并入本文，并且特别是并入实施例1-5、7-8、11-13、16-20 和26-28以及附图。

A.实施例1：结合PVRIG、DNAM和TIGIT的PVR、PVRL2和PVRL3 的表面等离子共振研究

使用Proteon XPR 36仪器在22℃进行所有实验。

步骤1：使用ProteOn XPR 36生物传感器在GLC芯片的所有六个泳道上制备高密度山羊抗人fc多克隆抗体表面(Invitrogen H10500)。抗人fc表面的活化步骤发生在水平流动方向上，而高密度pAb的固定步骤发生在垂直流动方向上。阻断步骤发生在垂直和水平位置，因此水平“间隙”可以用作参考表面。平均每个泳道固定约4400RU的山羊抗人pAb。

步骤2：对于每个循环，三个不同批次的人PVRIG融合蛋白(人fc，GenScript 批次451、448、125)、人DNAM-1融合蛋白(人fc，R&D Systems)，人TIGIT 融合蛋白(人fc，R&DSystems)和对照人IgG(Synagis)各自在不同的垂直泳道上以2μg/ml的浓度捕获2分钟。PVR、两批PVRL2和PVRL3各自在六个不同浓度下以不同的配体捕获循环在所有六个捕获的配体上以水平流动方向注入。注射2分钟，然后以50μL/min的流速解离10分钟。PVR浓度范围为 1.4nM-332nM，3倍稀释系列，两批PVRL2均以1.3nM-322nM浓度范围的3 倍稀释系列注入，并且PVRL3以1.4nM-334nM浓度范围的3倍稀释系列注入。在运行缓冲液中制备所有蛋白质试剂，所述缓冲液是脱气的PBS缓冲液，其中加入0.05％Tween 20和0.01％BSA。在每个循环后，用两次30秒的146mM 磷酸脉冲再生抗人fc捕获表面。

步骤3：使用ProteOn Manager 3.1.0.6版本处理与每个捕获的配体结合的分析物的传感器数据，并使用间隔参考和与分析物注射相同的预空白注射进行双重参照。

a)PVR：与捕获的DNAM-1和TIGIT弱结合，并且显示不与所有三批次 PVRIG和对照IgG结合。没有产生足够的信息来估计PVR与DNAM-1和TIGIT 的相互作用的KD(数据未显示)。

b)PVRL2：两批次PVRL2均显示与所有三批次PVRIG和DNAM-1结合，但与TIGIT结合最小或没有结合并且不与对照IgG结合。传感图显示复杂的动力学，因此无法估计结合常数(数据未显示)。

c)PVRL3：显示出与TIGIT的最小结合，并且不与其它蛋白质结合(数据未显示)。

B.实施例2：PVRIG敲低(KD)和抗PVRIG抗体对人类黑素瘤特异性 TIL功能的影响

这些分析的目的是在与黑素瘤靶细胞共培养时评估PVRIG在人源TIL中的功能能力，如通过活化标志物和细胞因子分泌所测量。

1.实施例2(1)：

评估抗PVRIG抗体(CPA.7.021)的作用，其已经显示单独或与其它抗体 (例如抗TIGIT、抗DNAM1)组合阻断PVRIG和PVRL2的相互作用。PD1用作敲低(siRNA)研究的基准免疫检查点。

材料和方法：TIL：使用来自三名黑素瘤患者的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL) (1)TIL-412-HLA-A2-Mart1特异性，(2)TIL-F4-HLA-A2-gp100特异性，和(3) TIL-209-HLA-A2-gp100特异性。TIL在IMDM(BI，01-058-1A)全培养基中解冻，所述培养基补充有10％人血清(Sigma，H3667)+1％Glutamax(Life technologies，35050-038)+1％丙酮酸钠(BiologicalIndustries，03-042-1B)+1％非必需氨基酸(Biological Industries，01-340-1B)+1％Pen-Strep(Biological Industries，03-031-1B)+300U/ml rhIL2(Biolegend，509129)。

肿瘤细胞系：人黑素瘤细胞Mel-624在MHC-I单倍型HLA-A2的背景下表达MART-1和gp-100抗原。将细胞在补充有10％，25mM HEPES缓冲液，1％和1％Pen-Strep的完全DMEM培养基中培养。

敲低TIL：使用100pmol Dharmacon ON-TARGETplus人PVRIG siRNA-SMARTpool(L-032703-02)或人PD1 siRNA-SMARTpool(L-004435) 或非靶向siRNA(D-001810-01-05)进行TIL中人PVRIG和人PD1的敲低 (KD)。将siRNA电穿孔至TIL(AMAXA，程序X-005)。在解冻后24小时在补充有IL-2的完全IMDM中培养的静息TIL上进行电穿孔。电穿孔后，将TIL 接种在96孔TC板中以恢复24小时。24小时后，收获细胞并用活力染料(BD Horizon；目录号562247，BDbiosciences)染色，用PBS洗涤并用抗人 PVRIG-CPA.7.021(CPA.7.021 IgG2 A647，7.5ug/ml)或用抗人PD-1(Biolegend， #329910AF647，5ug/ml)在室温下染色30分钟。使用的同种型对照分别是 synagis(IgG2 A647，7.5ug/ml)和小鼠IgG1(Biolegend#400130A647，5ug/ml)。所有样品在MACSQuant分析仪(Miltenyi)上运行，并使用FlowJo软件(v10.0.8) 分析数据。

TIL与624黑素瘤细胞共培养：收获siRNA电穿孔的TIL并接种于96 TC 板5×104个/孔中。还收获Mel-624细胞，并在共培养中以1:1/1:3 E:T比例接种。将板在37℃，5％CO2中孵育过夜(18小时)。

为了评估抗PVRIG抗体(CPA.7.021)、抗TIGIT(克隆10A7；来自Genentech 美国专利申请号US 2009/0258013)和抗DNAM1(克隆DX11，在Shibuya等人《免疫(Immunity)》第4卷，第6期，1996年6月1日，第573-581页中首先描述；BD Biosciences；小鼠抗人DNAM-1克隆DX11，目录号559787)对黑素瘤特异性TIL活性的影响，在以1:1效应物：靶标比例加入624黑素瘤靶细胞之前，将TIL(1×105个细胞/孔)与测试的抗体或相关同种型对照在单一处理(10μg/mL)或组合处理(每个最终10μg/ml)中预孵育。将板在37℃， 5％CO2中孵育过夜(18小时)。

TIL活化的评定：共培养后16小时，用活力染料(BD Horizon；目录号 562247，BDbiosciences)染色细胞，用PBS洗涤并暴露于Fc阻断溶液(目录号309804，Biolegend)，然后表面用抗CD8a(目录号301048，Biolegend)和抗CD137(目录号309804，Biolegend)在4℃下染色30分钟。所有样品在 MACSQuant分析仪(Miltenyi)上运行，并使用FlowJo软件(v10.0.8)分析数据。收集培养物上清液并通过CBA试剂盒(目录号560484，BD)分析细胞因子分泌。

使用敲低的TIL的功能分析：用IL2培养24小时的人TIL用编码人PVRIG 或PD-1的siRNA或作为对照的杂乱序列进行电穿孔。在电穿孔后24小时测试 TIL的PVRIG和PD-1表达。如在USSN 15/048,967(其通过引用并入本文)的图82中所示，与扰乱电穿孔的TIL相比，观察到PVRIG的约80％敲低和PD-1 的约50％敲低。

将KD TIL以1:1或1:3 E:T与Mel-624细胞一起培养18小时，并染色CD137 的表达。与对照乱序siRNA相比，用PVRIG siRNA电穿孔的TIL MART-1中显示活化标志物CD137的水平升高，类似于用PD-1siRNA电穿孔的TIL(如 USSN 15/048,967的图83A所示，通过引用并入本文)。收集共培养物上清液并测试分泌的细胞因子的存在。与对照SCR siRNA相比，用PVRIG siRNA电穿孔的TIL显示IFNγ和TNF水平显著增加。在用PD-1siRNA电穿孔的TIL中显示了类似的效果(如USSN 15/048,967的图83B-C所示，通过引用并入本文)。

在TIL F4中观察到相同的活化水平增加趋势。PVRIG siRNA电穿孔TIL F4 与Mel-624以1:3 E:T共培养导致共培养物上清液中CD137表面表达水平增加以及IFNγ分泌增加，如USSN 15/048,967的图84A和84B所示，通过引用并入本文。在用PD-1 siRNA电穿孔的TIL中观察到类似的趋势。

使用阻断Ab的功能分析：

抗PVRIG和抗TIGIT的体外单一疗法和组合疗法：将209TIL与Mel-624 细胞以1:1E:T培养18小时。收集共培养物上清液并测试分泌的细胞因子的存在。用抗TIGIT处理不影响IFNγ或TNF分泌水平。然而，当将抗TIGIT和抗 PVRIG加入到组合的共培养物中时，观察到IFNγ和TNF水平的增加(图8A-B)。

抗PVRIG和抗TIGIT的体外单一疗法和组合疗法：将209TIL与Mel-624 细胞以1:1E:T培养18小时。对TIL进行染色以获得活化标记CD137的表面表达，并且在用抗DNAM-1处理后表现出降低的表达水平。收集共培养物上清液并测试分泌的细胞因子的存在。抗DNAM-1的处理介导了增加分泌细胞因子 IFNγ和TNF的趋势。用抗DNAM-1和抗PVRIG组合处理部分逆转了对CD137 表达的作用(图9C)并增强了对细胞因子分泌IFNγ和TNF的作用(图9A-B)。将MART-1 TIL与Mel-624细胞以1:1 E:T培养18小时。收集共培养物上清液并测试分泌的细胞因子的存在。用抗DNAM-1处理降低了TIL上的CD137表面表达以及分泌的细胞因子IFNγ和TNF。用抗DNAM-1和抗PVRIG组合处理部分地逆转了这些作用(图9D-F)。

总结和结论：PD1 KD改善TIL活性，如通过IFNγ和F4和MART-1 TIL 中的分泌所测量。与对照siRNA相比，在MART-1 TIL中PVRIG KD观察到IFNγ和TNF分泌增加(约20％)。在与F4 TIL上的624黑素瘤细胞共培养时，在 CD137表达中观察到相同的趋势。

抗TIGIT的处理不影响与624 Mel共培养的TIL中IFNγ或TNF分泌水平，然而，当将抗TIGIT和抗PVRIG(CPA.7.021)组合加入的共培养物时，观察到IFNγ和TNF水平的增加。

抗DNAM-1处理减少TIL-MART-1活化，表现为CD137和细胞因子分泌减少，抗PVRIG(CPA.7.021)可在与DNAM-1Ab的组合处理中部分逆转这种作用。在TIL 209中，用抗DNAM-1使IFNγ和TNF分泌水平略微升高(约10％)，并且当将抗DNAM1和抗PVRIG(CPA.7.021)组合加入共培养物中时，观察到IFNγ和TNF水平的增加(分别为约40％和30％)。总之，我们的结果显示 PVRIG是PVRL2的新的共抑制受体。

2.实施例2(2)：

评估了另外的抗PVRIG抗体(CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.7.524； CHA.7.530；CHA.7.538)的作用，其已经显示可阻断PVRIG和PVRL2的相互作用，单独或与其它抗体(例如抗TIGIT、PD1)组合在与624黑素瘤细胞系共培养时对TIL-209、TIL-412和TIL-463-F4活性的影响。

在该分析中使用的功能性抗体是抗hPVRIG杂交瘤Ab(mIgG1骨架) -CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.7.524；CHA.7.530；CHA.7.538(M1批号30816)；抗hTIGIT(mIgG1骨架)-克隆10A7(Genescript)，抗TIGIT克隆MBSA43 (e-biosciences)和mIgG1(目录号400166，MOPC-21克隆，Biolegend)

TIL和624mel的共培养：在共培养之前24小时，如2.1中所述解冻并培养TIL。将测试的抗体以单一处理(10ug/mL)或与抗TIGIT组合(20ug/mL) 加入接种的TIL并在37℃，5％CO2中孵育(总共100μL)1小时。收获Mel-624 细胞并以1:3效应物：靶标比例接种在与TIL的共培养物中。将板在37℃，5％ CO2中孵育过夜(18小时)。

TIL功能能力的评定：基于共培养物上清液中IFNγ的检测来评定T细胞活性。收集培养物上清液并通过CBA试剂盒(目录号560484，BD)或通过MAGPIX 人IFNγ/TNFα试剂盒测试细胞因子。计算了双尾未配对T检验。P<0.05被称为统计学上显著的。

发现Ab CHA.7.518.1.H4(S241P)的作用在TIL 463-F4-gp100的实验中在作为单一和与抗TIGIT组合的5个实验中具有统计学显著性(图9E，G)。抗PVRIG AbCHA.7.518.1.H4(S241P)的组合处理作用在TIL 209中也具有统计学显著性 (图9C)。发现抗PVRIG Ab CHA.7.538的组合处理作用在TIL 463-F4-gp100中具有统计学显著性(图9F)。

3.实施例2(3)：

目的是在与稳定共表达HLA-A2、b2微球蛋白(B2M)和PVRL2的肽脉冲的CHO-S细胞共培养时评估抗人PVRIG抗体(CHA.7.518.1.H4(S241P)； CHA.7.544；或CHA.7.538)对人TIL活性的功能活性。

使用来自三名黑素瘤患者的切除转移的TIL：TIL-412-HLA-A2-Mart1 (26-35)特异性、TIL-463-F4-HLA-A2-gp100(209-217)特异性、TIL-463-F5- HLA-A2-gp100(209-217)特异性和TIL-209-HLA-A2-gp100(209-217)特异性。

将TIL在补充有10％人血清+1％Glutamax+1％丙酮酸钠+1％非必需氨基酸+1％Pen-Strep+300U/ml rhIL2(Biolegend，589106)的IMDM全培养基中解冻。

用表达HLA-A2/B2M的慢病毒(慢病毒载体目录号CD515B-1-SBI，systembiosciences)稳定转导CHO-S细胞(靶细胞)，并在补充有8mM GlutaMax 1％和1％Pen/Strep的CD CHO培养基(目录号10743-011)中，在600ug/ml潮霉素B选择下生长。然后通过有限稀释克隆表达HLA-A2/B2M的细胞。然后用表达人PVRL2的慢病毒(慢病毒载体目录号CD510B-1-SBI，system biosciences) 转导具有高HLA-A2和B2M表达的3E8克隆，并在6ug/ml嘌呤霉素选择下生长。

在本文所述的实验系统中(如图35所示)，内源性表达TIGIT、DNAM-1 和PVRIG的gp100或MART-1反应性TIL图37)与肽脉冲的CHO-S HLA-A2/B2M/PVRL2细胞共培养。

在该分析中使用的功能性抗体是抗人PVRIG；Ab 461(Aldeveron)-在该实施例中称为544，抗人PVRIG嵌合Ab(hIgG4骨骼)-CHA.7.538；CHA.7.518 (在该实施例中称为c538和c518，意指来自7.538和7.518的可变重链和轻链区与人IgG4恒定区融合，抗人TIGIT(mIgG1骨架)克隆MBSA43 (e-biosciences)，mIgG1(biolegend)和hIgG4(biolegend)。

在与靶细胞共培养之前，如本文所述将TIL解冻并培养24小时。将测试的抗体以单一处理(10ug/mL)或与抗TIGIT组合(总共20ug/mL)添加至接种的TIL并在37℃，5％CO2中孵育(总共100μL)30分钟。收获CHO-S细胞并用0.1或0.5ug/ml的gp-100(gp100209-217)或20ug/ml的MART-126-35 肽，在37℃下在Opti-MEM

TIL功能能力的评定：使用组合珠阵列(CBA)试剂盒(目录号560484， BD)测量来自过夜共培养物上清液的细胞因子分泌，评估抗PVRIG抗体(10 ug/ml)作为单一处理或作为与抗TIGIT的组合处理对TIL活性的影响。所有样品均在MACSQuant分析仪(Miltenyi)中获得，并使用FlowJo软件(v10.0.8) 分析数据。

抗PVRIG抗体的剂量反应：抗体PVRIG抗体c518、c538(或hIgG4同种型对照)剂量反应的效果在所述分析中测试，抗体浓度为30、10、3、1、0.3、 0.1和0.03ug/ml。计算了双尾未配对T检验。P<0.05被称为统计学上显著的。

抗PVRIG抗体对表达PVRL2的CHO-S HLA-A2/B2M细胞共培养后TIL 活性的影响：来自两个不同实验的三种抗PVRIG抗体(544、c538和c518)对四种不同TIL活性的影响(412、463、462和209)的影响总结在图37中。Ab 用作非阻断Ab对照。实验的详细结果如图39所示。与用同种型抗体处理相比，用544、c538和c518抗体处理增加了TIL的IFN分泌水平(平均分别为6％、 28％和23％)。与非阻断剂对照544相比，在用c538或c518处理的TIL中检测到增加的IFN分泌。在用c538与c518 Ab处理之间未发现显著差异。与同种型相比，用抗TIGIT处理增加了TIL的IFN分泌(平均为49％)。c518和c538 与抗TIGIT的组合处理诱导了来自TIL的IFN分泌的累加效应，但与用TIGIT 单一处理的处理相比，组合效应不是统计学显著的。

抗PVRIG抗体剂量反应对TIL功能能力的影响：评估在剂量反应中添加抗 PVRIG抗体(c538和c518)对TIL F4和209活性的影响(图80)。与同种型对照相比，c518和c538抗体的EC50为个位数nM，如通过TIL的TNFα分泌的影响所测量。

总结和结论：在本文所述的实验系统中，我们观察到抗PVRIG抗体对TIL 活性的影响，其响应于与肽脉冲的过表达PVRL2的CHO-S HLA-A2/B2M靶细胞的共培养。与相关的同种型对照相比，测试的抗PVRIG抗体介导了来自TIL 的IFN和TNF的分泌增加。与PVRIG的非阻断抗体544相比(基于在PVRIG 表达细胞上进行的竞争实验)，抗体c518和c538对TIL活性具有统计学显著优势(分别为p-0.0063和p-0.0034)，如IFN分泌所显现。c518和c538抗体均具有抗TIGIT抗体的累加效应(无统计学显著性)。

4.实施例2(4)

该实施例的目的是评估PVRIG在人源TIL中的功能能力，如通过与黑素瘤靶细胞共培养时的细胞因子分泌所测量。评估抗PVRIG抗体 (CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.7.524；CHA.7.530；CHA.7.538)的作用，其已显示单独或与其它抗体(例如抗TIGIT、PD1)组合阻断PVRIG和PVRL2的相互作用。

使用Rossetesep人T细胞富集混合液试剂盒(Stem cell technologies)在血沉棕黄层血液样品上获得纯化的CD3+ T细胞。将细胞解冻并用CFSE (Moleculare probes)标记以能够跟踪共培养中的增殖。

CHO-S-OKT3细胞：用CD710B-1中的CD5L-OKT3-scFv-CD14(SBI，目录号CS965A-1，批号151014-005，1.40x108ifus/ml)转导CHO-S细胞。在CD CHO(Gibco，life technologies目录号10743-011)存在下培养细胞，加入8mM GlutaMax和6μg/ml嘌呤霉素。使用1:200稀释的PE-山羊抗小鼠IgG F(ab)'2 (Jackson Immunoresearch，目录号115-116-146)，通过流式细胞术评估表面OKT3 水平。然后根据制造商的说明书，使用Amaxa电穿孔系统(Lonza,Walkersville, MD,USA)，用人PVRL2(δ同种型)或空载体瞬时转染CHO-S-OKT3细胞。使用Ingenio

在该分析中使用的功能性抗体是抗hPVRIG杂交瘤Ab(mIgG1骨架) -CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.7.524；CHA.7.530；CHA.7.538，抗TIGIT克隆 MBSA43(e-biosciences)和mIgG1(目录号400166，MOPC-21克隆，Biolegend)。

CD3 T细胞和CHO-OKT3细胞的共培养：解冻CD3+ T细胞并立即用CFSE 标记。同时收获CHO-S-OKT3-PVRL2细胞并用丝裂霉素C在37℃下处理1小时，洗涤并以1:5E:T(1×105个T细胞和2×104个CHO-OKT3-PVRL2或模拟物)加入与T细胞的共培养物中。在单一处理(10ug/mL)中或与抗TIGIT(10 ug/mL)组合加入Ab，并将共培养板在37℃，5％CO2下孵育5天。5天后，收获细胞并通过FACS门控CD4和CD8亚群分析T细胞增殖。

抗PVRIG抗体在CHOS-OKT3共培养分析中的作用：用刺激细胞(表达膜结合的抗CD3mAb片段的CHO细胞)刺激CFSE标记的T细胞。表达人PVRL2 的CHOS刺激细胞和对照刺激细胞(空载体)用丝裂霉素C(50μg/ml处理1 小时)处理，然后以1:5的比例与CFSE标记的人T细胞共培养。在37℃和5.0％ CO2下5天后，评定抗PVRIG抗体(10ug/ml)对培养物上清液中T细胞增殖 (CFSE稀释)和细胞因子分泌(ELISA或TH1/2/17 CBA试剂盒)的影响。所有样品均在MACSQuant分析仪(Miltenyi)中获得，并使用FlowJo软件(v10.0.8) 分析数据。收集培养物上清液并通过CBA试剂盒(目录号560484，BD)分析细胞因子分泌。

抗PVRIG抗体对CHOS-OKT3分析中PVRL2过表达的影响：过表达PVRL2 的CHOS-OKT3或模拟物(空载体)细胞与CD3+细胞共培养并且测试抗PVRIG 抗体作为单一处理或与抗TIGIT组合对T细胞增殖和细胞因子分泌的影响(图 40)。5天后，收获细胞并分析CFSE稀释度。收集平行共培养物上清液并测试细胞因子分泌。图41显示了抗PVRIG抗体在反应者与非反应者供体中的作用。评估了各种抗PVRIG Ab作为单一治疗与抗TIGIT组合对T细胞增殖的影响。虽然一些抗PVRIG Ab增强T细胞增殖，但在该系统中未观察到与抗TIGIT抗体的累加效应(图42)。当在CD3+细胞与模拟(空载体转染的)CHO-S细胞的共培养物中测试Ab时，未观察到这些效应(数据未显示)。

共测试了10名供体，10名供体中有5名对抗PVRIG Ab有反应。Ab CHA.7.518.1.H4(S241P)的处理始终导致在所测试的5名反应者供体中增强的 IFNγ分泌在20-50％之间，而用其它Ab处理未显示出明显的趋势(图43)。在 CD8+细胞增殖中观察到类似的效果。Ab处理的效果总结在图44中。

C.实施例3：抗PVRIG抗体对与抗TIGIT和抗PD1抗体组合对人黑素瘤特异性TIL功能的影响

1.实施例3(1)：

TIL：使用来自三名黑素瘤患者的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)：(1) TIL-412-HLA-A2-Mart1特异性，(2)TIL-F4-HLA-A2-gp100特异性和(3) TIL-209-HLA-A2-gp100特异性。

TIL在IMDM(BI，01-058-1A)全培养基中解冻，所述培养基补充有10％人血清(Sigma，H3667)+1％Glutamax(Life technologies，35050-038)+1％丙酮酸钠(BiologicalIndustries，03-042-1B)+1％非必需氨基酸(Biological Industries，01-340-1B)+1％Pen-Strep(Biological Industries，03-031-1B)+300 U/ml rhIL2(Biolegend，509129)。

肿瘤细胞系：人黑素瘤细胞Mel-624在MHC-I单倍型HLA-A2的背景下表达MART-1和gp-100抗原。细胞在完全DMEM培养基(Biological Industries， 01-055-1A)中培养，所述培养基补充有10％FBS(BI，04-127-1A)、25mM HEPES 缓冲液(BI，03-025-1B)、1％Glutamax(Life technologies，35050-038)和1％ Pen-Strep(Biological Industries，03-031-1B)。

TIL与624黑素瘤细胞在抗PVRIG、抗TIGIT和PD1阻断抗体的存在下的共培养：为了评定抗PVRIG抗体(CPA.7.021)、抗TIGIT(克隆10A7)和抗 PD1(mAb 1B8，Merck)对黑素瘤特异性TIL活性的影响，将TIL(3×104个细胞/孔)与单独处理(10μg/mL)或组合处理(最终各10μg/mL)的测试抗体或相关同种型对照预孵育，随后以1:3效应物：靶标比例加入624黑素瘤靶细胞。将板在37℃，5％CO2中孵育过夜(18小时)。

TIL活化的评定：收集培养物上清液并通过CBA试剂盒(目录号560484， BD)分析细胞因子分泌。

体外单一疗法抗PVRIG和与抗TIGIT和PD1阻断抗体的组合疗法：将F4 TIL(gp100特异性)与Mel-624细胞以1:3 E:T培养18小时。收集共培养物上清液并测试分泌的细胞因子的存在。抗TIGIT或抗PD1的处理不影响IFNγ或 TNF分泌水平。然而，当将抗TIGIT或抗PD1与抗PVRIG组合加入到组合的共培养物中时，观察到IFNγ和TNF水平的升高(图10A-B)。

单独使用抗PVRIG、抗TIGIT和PD1处理不影响TIL与624 Mel共培养的 IFNγ或TNF分泌水平，然而，当抗TIGIT或抗PD1抗体与抗PVRIG(CPA.7.021) 组合加入时，观察到IFNγ和TNF水平的升高。所提供的数据表明，与抗TIGIT 或抗PD1抗体的组合疗法存在协同效应。

2.实施例3(2)：

再次，评定了抗PVRIG抗体在初级体外基于细胞的分析中与抗TIGIT抗体组合增强CD4+和CD8+ T细胞功能的能力。

CHO-S OKT3分析：CHO-S OKT3分析用于确定人源化PVRIG抗体 CHA.7.518.1.H4(S241P)和市售抗TIGIT抗体的组合是否可以增加T细胞增殖，以及使细胞因子分泌大于单一的抗PVRIG或抗TIGIT抗体处理。在共培养分析中使用的靶细胞是稳定过表达抗人CD3抗体克隆OKT3(缩写为OKT3)的单链可变片段和人PVRL2(缩写为hPVRL2)的中国仓鼠卵巢细胞系CHO-S (ATCC)。CHO-S OKT3亲本细胞在补充有40mM glutamax、青霉素/链霉素和 6μg/ml嘌呤霉素的无血清CD-CHO培养基中生长。CHO-S OKT3 hPVRL2细胞在补充有40mMglutamax、青霉素/链霉素、6μg/ml嘌呤霉素和600μg/ml潮霉素B的无血清CD-CHO培养基中生长。

分别使用RosetteSep

在3或5天孵育期后，用细胞计数珠阵列(CBA)人Th1/Th2/Th17细胞因子试剂盒(BDBiosciences)，或用LEGENDplex

结果：与单抗体处理相比，CHA.7.518.1.H4(S241P)和抗TIGIT抗体的组合增强了CD4+ T细胞增殖：CHA.7.518.1.H4(S241P)人源化杂交瘤衍生的PVRIG 抗体当与抗TIGIT抗体组合时体外增强初级CD4+ T细胞增殖的能力用CHO-S OKT3分析评定。

图33A和B显示响应于与CHO-S OKT3 hPVRL2靶细胞共培养，并且用抗 PVRIG和抗TIGIT抗体单独或组合处理而来自两个不同供体的增殖CD4+ T细胞的百分比。在这两个代表性的人CD3+ T细胞供体中，CHA.7.518.1.H4(S241P) 和抗TIGIT抗体的组合与单独的CHA.7.518.1.H4(S241P)或IgG4同种型和抗 TIGIT抗体的组合相比增加了CD4+ T细胞增殖。与两种供体中的IgG1同种型对照相比，抗DNAM-1抗体降低CD4+ T细胞增殖。

CHA.7.518.1.H4(S241P)和抗TIGIT抗体增强CD8+ T细胞增殖和IFN-g分泌图34A说明人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)在CHO-S OKT3分析中与抗TIGIT抗体组合增加CD8+ T细胞增殖的能力。在代表性人CD8+ T细胞供体中，当T细胞与CHO-S OKT3 hPVRL2细胞共培养时，CHA.7.518.1.H4(S241P)和抗TIGIT抗体的组合增加CD8+ T细胞增殖。抗PVRIG和抗TIGIT抗体的组合比单独的CHA.7.518.1.H4(S241P)或hIgG4同种型加抗TIGIT抗体处理增加增殖。图34B显示在如上所述的相同代表性人CD8+ T细胞供体中，人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)与抗TIGIT抗体组合也增强CHO-S OKT3分析中的IFNγ分泌。抗PVRIG和抗TIGIT抗体的组合增加IFNγ分泌大于单独的CHA.7.518.1.H4(S241P)，或hIgG4同种型加抗TIGIT 抗体处理。与IgG1同种型对照抗体相比，抗DNAM-1抗体降低CD8+ T细胞增殖和IFNγ产生。

总之，人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和抗TIGIT抗体在基于原代细胞的CHO-S OKT3分析中具有体外功能活性。与用 CHA.7.518.1.H4(S241P)或抗TIGIT抗体单独处理相比，CHA.7.518.1.H4(S241P) 和抗TIGIT抗体的组合导致CD4+和CD8+ T细胞增殖以及CD8+ T细胞的IFNγ分泌增加。总之，这些数据表明，与单受体阻断相比，两种检查点受体PVRIG 和TIGIT的共同阻断增加了T细胞功能。

应注意，TIGIT不与CD112(PVRL2；参见Zhu等人，《实验医学杂志》 (2016):1-10的图4E和4F)相互作用；相反，它与PVR(一种不同的配体)相互作用。PVR在Zhu等人的CHO/CD112系统中表达。因此，我们对aCD112R (抗PVRIG抗体)和抗TIGIT的组合作用的解释是aCD112R/aPVRIG阻断人 CD112R与人CD112的相互作用，但抗TIGIT抗体阻断人TIGIT与人或仓鼠 PVR(在T细胞或CHO细胞上)的相互作用，Zhu等人并未真正给出关于为什么在CDOCD112分析中发生抗CD112R/抗TIGIT组合作用的假设。也就是说，组合作用不仅仅是通过PVRL2/CD112配体。

D.实施例4：基于食蟹猴交叉反应性的抗人PVRIG抗体的表位作图

该研究的目的是鉴定PVRIG蛋白上的表位，其确定抗人PVRIG抗体与食蟹猴(食蟹猴)直向同源物的交叉反应性。尽管许多这些抗体属于相同的表位分箱，但许多针对人PVRIG靶标的抗体显示出不同程度的食蟹猴交叉反应性。为了阐明人/食蟹猴交叉反应(或缺乏其)的分子基础，设计、表达和纯化了 PVRIG重组蛋白的几种食蟹猴-人突变，并在ELISA中测试了与一组抗人 PVRIG抗体的结合。

食蟹猴、人和杂合PVRIG变体的表达和纯化：所有PVRIG变体在哺乳动物细胞中表达为具有C端6XHis标签的ECD融合体。通过亲和纯化、离子交换色谱和尺寸排阻色谱纯化蛋白质。将纯化的蛋白质缓冲液交换到PBS缓冲液 (pH 7.4)中并在4℃下储存。

用于确定PVRIG-抗体相互作用的ELISA：功能性ELISA如下进行：将食蟹猴、人和食蟹猴/人杂交PVRIG(带His-标签的)重组蛋白在4℃下吸附在IA 板上过夜。用PBS冲洗涂覆的板孔两次，并在室温(RT)下用300μL阻断缓冲液(5％脱脂奶粉在PBS pH 7.4中)孵育1小时。除去阻断缓冲液，用PBS 冲洗平板两次。将平板结合的PVRIG变体与抗人PVRIG mAb(人IgG1同种型) 在溶液中(线性范围为0.1μg/ml至8μg/ml，50μL/孔体积)在室温下孵育1小时。将板用PBS-T(PBS 7.4 0.05％Tween20)洗涤三次，然后用PBS洗涤三次，并加入50μL/孔的HRP缀合的二抗(人IgG Fc结构域特异性，Jackson ImmunoResearch)。将其在室温下孵育1小时，再次洗涤平板。通过添加50μL Sureblue TMB底物(KPL Inc)并孵育5-20分钟在所有孔中生成ELISA信号。通过添加50μL 2N H2SO4(VWR)终止HRP反应，并在SpectraMax(Molecular Devices)或EnVision(PerkinElmer)分光光度计上读取450nm处的吸光度信号。将数据导出至Excel(Microsoft)并绘制在GraphPad Prism(GraphPad Software，Inc.)中。

与食蟹猴-人变体的相对结合表明三个表位组：抗体与食蟹猴、人和杂合 PVRIG变体的相对结合表明3个不同的表位组：第1组与R95/I97残基结合 (CPA.7.021和CPA.7.028)。第2组与S67和R95/I97残基结合(CPA.7.002和 CPA.7.041)。第3组不与S67或R95/I97残基结合(CPA.7.024和CPA.7.050)。表位组与这些抗体的食蟹猴交叉反应性程度显示出强烈的相关性(图19)。

E.实施例5：人源化抗体：人源化抗PVRIG杂交瘤衍生抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)的结合和受体-配体阻断分析

进行该实验以表征CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与细胞系和原代白细胞上的人和食蟹猴PVRIG蛋白的结合，以表征 CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)阻断PVRIG和PVRL2之间的相互作用的能力并通过评定与Jurkat细胞上表达的PVRIG抗原结合的竞争表征CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)相对于彼此的表位空间。

hPVRIG过表达细胞的FACS分析：以下细胞系用于评定 CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)的特异性：HEK亲本和HEK hPVRIG过表达细胞。将这些细胞在DMEM(Gibco)+10％胎牛血清(Gibco) +glutamax(Gibco)中培养。对于HEK hPVRIG过表达细胞，还将0.5ug/ml 嘌呤霉素(Gibco)加入培养基中用于阳性选择。对于FACS分析，以对数期生长收获所有细胞系，并将每孔50,000-100,000个细胞接种在96孔板中。未缀合的CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)(hIgG4)及其各自的对照的结合在冰上以10ug/ml开始的8点滴定系列中评定30分钟-1小时。滴定系列以3倍连续稀释进行。用抗人Fc Alexa 647缀合的抗体(Jackson Laboratories)检测未缀合的一抗。使用FACS CantoII(BD Biosciences)，FACS LSR Fortessa X-20(BD Biosciences)或IntelliCyt(IntelliCyt Corporation)获取数据，并使用FlowJo(Treestar)和Prism(Graphpad)软件分析。

hPVRIG的人细胞系的FACS分析：以下细胞系用于评定CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)的表达和特异性：Jurkat和 HepG2。Jurkat细胞在RPMI培养基+10％胎牛血清、glutamax、非必需氨基酸 (Gibco)、丙酮酸钠(Gibco)和青霉素/链霉素(Gibco)中培养。HepG2细胞在DMEM+10％胎牛血清+glutamax中培养。对于FACS分析，以对数期生长收获所有细胞系，并将每孔50,000-100,000个细胞接种在96孔板中。未缀合的CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)(hIgG4)及其各自的对照的结合在冰上以10ug/ml开始的8点滴定系列中评定30分钟-1小时。用抗人 Fc Alexa 647缀合的抗体检测未缀合的一抗。滴定系列以3倍连续稀释进行。使用FACS Canto II或IntelliCyte获取数据，并使用FlowJo和Prism软件分析。

CMV扩增的CD8 T细胞上PVRIG的FACS分析：CMV反应性供体购自 CellularTechnology Limited(CTL)。用10uM CMV肽494-503(NLVPMVATV， Anaspec)脉冲供应的PBMC2小时。随后将PBMC洗涤三次，之后将它们接种在24孔板中的RPMI+10％人AB血清(Sigma)、glutamax、青霉素/链霉素和由2ng/ml IL-2(R&D systems)和10ng/ml IL-7(R&D systems)组成的细胞因子生长混合液中9天。9天后，收获非贴壁细胞，表型为CD8 T细胞富集，并在液氮中存放。

为了评定CMV扩增的CD8 T细胞的表达，在冰上以666nM开始的8点滴定系列中评定未缀合的CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P) (hIgG4)及其各自对照的结合30分钟-1小时。滴定系列以4倍连续稀释系列进行。用抗人Fc Alexa 647缀合的抗体检测未缀合的一抗。使用FlowJo和Prism 软件分析数据并在BD LSR Fortessa X-20上收集。

食蟹猴PVRIG工程过表达细胞的FACS分析：以下细胞系用于评定 CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与食蟹猴PVRIG(cPVRIG) 的交叉反应性：expi亲本和expi cPVRIG过表达细胞。将这些细胞在DMEM+ 10％胎牛血清+glutamax中培养。通过使用Neon转染系统将cPVRIG DNA电穿孔到亲本expi细胞中来产生expi cPVRIG瞬时过表达细胞。对于FACS分析，在转染后1-3天之间使用expi cPVRIG细胞。从对数生长期收获亲本expi细胞。将每种类型的50,000-100,000个细胞接种在96孔板中。未缀合的 CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)(hIgG4)及其各自的对照的结合在冰上以10ug/ml开始的8点滴定系列中评定30分钟-1小时。滴定系列以3倍稀释系列进行。用抗人Fc Alexa647缀合的抗体检测未缀合的一抗。使用FACS Canto II或IntelliCyte获取数据，并使用FlowJo和Prism软件分析。

基于细胞的受体-配体阻断分析：在以两个方向进行的细胞竞争分析中评定CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)抑制PVRIG与其配体 PVRL2相互作用的能力。

在第一个方向，PVRL2在未操纵的HEK细胞上内源表达，并且测量 CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)阻断可溶性生物素化 PVRIG Fc与HEK细胞结合的能力。更具体地，将生物素化的PVRIG Fc蛋白 (33nM)和CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)(1.03-198nM， hIgG4)同时添加到100,000个HEK细胞中并在冰上孵育1小时。随后通过在冰上加入链霉抗生物素蛋白Alexa 647(Jackson Laboratories)20-30分钟来检测生物素化的PVRIG Fc结合的程度。将细胞在PBS中洗涤两次以使用FACSCanto II获得。使用FlowJo、Excel(Microsoft)和Prism分析数据。

在第二个方向，HEK细胞被设计为表达人PVRIG(HEK hPVRIG)并且评定CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)(hIgG4)抑制可溶性人 PVRL2 Fc的能力。更具体地，将HEK hPVRIG细胞与CHA.7.518.1.H4(S241P) 和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)(0.66-66nM)在冰上预孵育30分钟，之后加入 PVRL2 mFc(人PVRL2与小鼠Fc)(在冰上1小时)并测量其结合HEK hPVRIG 的能力。通过随后在冰上加入山羊抗小鼠Fc A647(Jackson Laboratories)20-30 分钟来检测PVRL2mFc结合的程度。将细胞在PBS中洗涤两次以使用FACS Canto II获得。使用FlowJo、Excel和Prism分析数据。

基于细胞的表位空间分析：评定CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)的表位空间与另一个竞争结合Jurkat细胞的能力。简言之，在对数生长期收获Jurkat细胞，在冰上用g/ml未标记的 CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)染色30分钟。随后将Jurkat 细胞离心，洗涤，并用g/ml Alexa 647标记的CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)在冰上复染30分钟。通过流式细胞术通过Alexa 647 信号的大小来评定标记抗体与Jurkat细胞上的未标记抗体的PVRIG结合的竞争。使用FACS Canto II获取数据并使用FlowJo、Excel和Prism进行分析。

CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)识别过表达细胞、Jurkat细胞和人T细胞上的PVRIG：使用过表达人PVRIG的HEK细胞、Jurkat细胞和原代T细胞评定CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)人源化杂交瘤衍生的PVRIG抗体结合人PVRIG的能力。图20说明了 CHA.7.518.1.H4(S241P)(A)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)(B)的特异性。两种抗体均与HEK hPVRIG细胞高度特异性结合，并且不与HEK亲代细胞结合。

结合亲和力：CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)也显示出以高亲和力与HEK hPVRIG细胞结合，及其与HEK hPVRIG细胞结合的相关 Kd值：CHA.7.518.1.H4(S241P)为0.29nM，CHA7.538.1.2为0.86nM。

图21说明了CHA.7.518.1.H4(S241P)(A)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)(B) 结合内源性表达PVRIG的Jurkat细胞的能力。两者都能够以与HEK hPVRIG 细胞相当的亲和力结合Jurkat细胞。

这些抗体对Jurkat细胞的亲和力为CHA.7.518.1.H4(S241P)的0.15nM，CHA.7.538.1.2.H4(S241P)的0.59nM。

图22说明了CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)结合CD8 T细胞的能力，这些细胞通过暴露于CMV肽(494-503，NLVPMVATV)而扩增并内源性表达PVRIG。

CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)检测在expi细胞上表达的食蟹猴PVRIG(cPVRIG)：使用过表达cPVRIG的expi细胞评定 CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)与cPVRIG结合的能力。图23说明了CHA.7.518.1.H4(S241P)(A)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)(B)的特异性。两种抗体均与expi cPVRIG细胞高度特异性结合，并且不与expi亲本细胞结合。CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)也显示以高亲和力与expi cPVRIG细胞结合，其相关的Kd值为CHA.7.518.1.H4(S241P)的0.24nM 和CHA7.538.1.2的0.58nM。

基于细胞的受体-配体阻断分析：以两个方向评定CHA.7.518.1.H4(S241P) 和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)抑制PVRIG与PVRL2相互作用的能力，如方案部分所述。在第一种排列中，CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P) 都能够完全抑制PVRIG Fc与HEK细胞的结合(图24A)。与该阻断能力相关的IC50值对于CHA.7.518.1.H4(S241P)为15nM，对于CHA.7.538.1.2.H4(S241P) 为16.1nM。重要的是，并非所有来自确认与PVRIG结合的杂交瘤活动的抗体都能够阻断PVRIG Fc与HEK细胞的结合。如图24B所示，命名为CHA.7.544 的抗体克隆不能阻断PVRIG Fc与HEK细胞的结合。

在第二种排列中，CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)也能够完全抑制PVRL2 Fc与HEK hPVRIG细胞的结合(图25A)。与该抑制相关的 IC50值对于CHA.7.518.1.H4(S241P)为1.8nM，对于CHA.7.538.1.2.H4(S241P) 为2.53nM。尽管CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)的能力能够完全抑制PVRL2 Fc在该排列中的结合，与它们在第一种排列中抑制PVRIG Fc结合的能力一致，但其它抗体没有表现出同样的趋势。更具体地，能够完全抑制PVRIG Fc与HEK细胞的结合的另一种人源化杂交瘤衍生抗体 CHA.7.530.3(第一种排列，数据未显示)不能完全抑制PVRL2 Fc结合HEKhPVRIG细胞的结合(图25A)。总的来说，该数据表明，与第一种排列相比，基于细胞的受体配体阻断分析的第二种排列能够以更高的灵敏度区分受体-配体阻断抗体的效力。重要的是，CHA.7.544显示不能阻断PVRL2 Fc与HEK hPVRIG细胞的结合(图25B)，这与其不能阻断PVRIG Fc与HEK细胞的结合一致。

基于细胞的表位空间分析：如方案部分所述，通过评定竞争结合PVRIG的能力，对CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)的表位空间进行了分析。图26显示了未缀合形式的抗体抑制相同抗体的Alexa 647(A647)缀合形式结合的能力。图26中的数据描述了A647缀合的抗体相对于它们在没有竞争时产生的最大信号的结合百分比。CHA.7.518.1.H4(S241P)A647和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)A647产生的信号不受Jurkat细胞用同种型对照预孵育的影响(数据未显示)。如所预期的，当与其自身未缀合形式竞争时，CHA.7.518.1.H4(S241P)A647和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)A647产生的信号显著降低(数据未显示)。有趣的是，在与未缀合形式的相反抗体预孵育的背景下分析来自CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)的A647信号时，也存在显著减少。这表明CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)可以在内源表达的PVRIG上共享相似的表位空间。

总结和结论：命名为CHA.7.518和CHA.7.538的小鼠版本的抗PVRIG抗体成功人源化为人IgG4同种型(CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P))，其保留了对人PVRIG抗原的结合特性。使用工程化的过表达细胞Jurkat和CMV扩增的原代CD8 T细胞，CHA.7.518.1.H4(S241P) 和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)显示出对内源性人PVRIG高度特异并且以高亲和力结合。此外，CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)也显示出对食蟹猴PVRIG抗原的反应性并且以高亲和力结合过表达细胞。功能上，CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)能够在基于FACS的分析中抑制PVRIG与PVRL2的相互作用。最后，CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)显示可能共享内源性人PVRIG上的表位空间，因为它们能够相互竞争结合Jurkat细胞。

F.实施例6：人源化抗体：人源化抗体的功能分析

验证了本发明的几种人源化抗体的功能活性。

CHO-S OKT3分析：CHO-S OKT3分析用于确定人源化PVRIG抗体 CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)是否可以增强CD4+和 CD8+ T细胞增殖和细胞因子分泌。在共培养分析中使用的靶细胞是中国仓鼠卵巢细胞系CHO-S(ATCC)，其稳定过表达抗人CD3抗体克隆OKT3(缩写为 OKT3)的单链可变片段，或稳定地过表达OKT3和人PVRL2(缩写为hPVRL2)。CHO-S OKT3亲本细胞在补充有40mM glutamax(Gibco)、青霉素 /链霉素(Gibco)和6μg/ml嘌呤霉素(Gibco)的无血清CD-CHO培养基(Gibco) 中生长。CHO-S OKT3 hPVRL2细胞在与亲代细胞相同的CD-CHO培养基中生长，但也补充有600μg/ml潮霉素B(Gibco)。

分别使用RosetteSep

在3或5天孵育期后，用细胞计数珠阵列(CBA)人Th1/Th2/Th17细胞因子试剂盒(BDBiosciences)，或用LEGENDplex

CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)增强CD8+ T细胞增殖和IFN-g分泌：图28A-B说明人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)增加CHO-S OKT3分析中的CD8+ T细胞增殖的能力。在两种不同的人CD8+ T细胞供体中，在T细胞与CHO-S OKT3 hPVRL2 细胞共培养时，与人IgG4同种型对照相比，CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)抗体增加CD8+ T细胞增殖。然而，小鼠CHA.7.544 IgG1几乎没有效果。如用CD4+ T细胞观察到的，抗DNAM-1抗体降低CD8+ T细胞增殖。图28C显示人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)也在CHO-S OKT3分析中增强IFNγ分泌。在三种不同的人CD8+ T细胞供体中，与人IgG4同种型对照(虚线)相比， CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)抗体增加IFNγ产生。在 CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)抗体处理后也观察到 IL-10、IL22和TNFα的增加(数据未显示)。

CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)持续增强多个人供体的CD4+ T细胞增殖：接下来，为了证明CHA.7.518.1.H4(S241P)和 CHA.7.538.1.2.H4(S241P)抗体可以可重复地增强T细胞功能，在CHO-S OKT3 分析中检测了11种不同供体的人源化PVRIG抗体对CD4+ T细胞增殖的影响。图29表明，当T细胞与CHO-S OKT3 hPVRL2细胞共培养时，与人IgG4同种型对照抗体相比，CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)在大多数受试供体中均一致地增加CD4+ T细胞增殖。此外，部分受体/配体阻断抗体CHA.7.530.3和非受体/配体阻断抗体CHA.7.544不能始终如一地增强相同供体的CD4+ T细胞增殖。

CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)对CD4+和CD8+ T细胞增殖具有剂量依赖性作用：最后，在CHO-S OKT3分析中测量人源化PVRIG 抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)的剂量依赖性作用。当 T细胞与CHO-S OKT3 hPVRL2细胞共培养时，降低CHA.7.518.1.H4(S241P) 和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)抗体的剂量可降低CD4+ T细胞(图30A)和CD8+ T细胞(图30B)增殖的百分比。用CHA.7.544抗体和IgG4同种型对照未观察到对T细胞增殖的这种剂量依赖性作用。此外，未观察到剂量滴定的双相效应，表明人源化PVRIG抗体缺乏激动剂活性。

人源化PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)在基于原代细胞的CHO-S OKT3分析中具有体外功能活性。 CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)均以剂量依赖性方式增加 CD4+和CD8+ T细胞增殖。CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P) 也能够增强CHO-S OKT3分析中的IFNγ分泌。结果表明， CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)抗体的活性依赖于hPVRL2 在靶细胞上的过表达。CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)在多个人供体中持续增强T细胞活性，而非阻断CHA.7.544抗体几乎没有效果。

G.实施例7：用于小鼠PVRIG的大鼠单克隆抗体的开发

在Aldevron Freiburg(德国)进行大鼠单克隆抗体(mAb)的开发。通过使用DNA免疫技术培养针对小鼠PVRIG蛋白的抗体。表达小鼠PVRIG的免疫载体导入宿主生物(大鼠)。表达小鼠PVRIG，并产生免疫反应。在瞬时表达小鼠PVRIG的细胞上分析阳性抗血清鉴定和杂交瘤筛选。

开发针对小鼠PVRIG蛋白的大鼠多克隆抗体包括将小鼠PVRIG细胞外结构域克隆到Aldevron专有免疫载体中，并将全长和细胞外结构域克隆到 Aldevron专有筛选载体中。用于免疫和筛选的各种表达载体通过FACS证实在细胞上瞬时表达小鼠PVRIG。然后用免疫载体免疫3只大鼠。采集免疫血清，并使用用筛选载体瞬时转染的细胞通过FACS测试稀释的血清。收集每只大鼠的取血，并使用蛋白-A进行纯化。

进行大鼠淋巴细胞的融合和使用Aldevron测试系统的选择。这包括：融合 20×96孔板，然后通过基于细胞的ELISA(cELISA)对用小鼠PVRIG ECD(细胞外结构域)或FL(全长)瞬时转染细胞进行初步筛选。将108个阳性克隆(与表达小鼠PVRIG ECD\FL的细胞结合)进一步繁殖并重新测试。将30个阳性克隆繁殖到T-25烧瓶中，并在基于细胞的ELISA中测试上清液。选择23个杂交瘤克隆用于进一步亚克隆。通过cELISA和FACS测试无血清上清液。产生总共21个克隆并在过表达小鼠PVRIG蛋白的细胞上确认结合。

使用过表达小鼠PVRIG的稳定HEK293细胞，通过流式细胞术分析大鼠抗小鼠PVRIG测试血液、纯化的pAb、克隆前和克隆上清液以及纯化的mAb的结合。还测试了抗体与内源表达小鼠PVRIG的D10.G4.1细胞的结合。确认了小鼠PVRIG的特异性细胞表面表达。细胞(1-2×10

通过siRNA测试mAb特异性，用于PVRIG转染内源性表达小鼠PVRIG 的D10.G4.1细胞系。在小鼠PVRIG敲低后观察到细胞表面中的减少。

纯化的mAb的亲和力(Kd)通过在过表达小鼠PVRIG的稳定细胞与空载体转导细胞上和在D10.G4.1细胞系上的FACS滴定来确定。细胞(1×10

表7(第1-10列)总结了为表征抗小鼠PVRIG抗体而产生的数据。

●第1列代表Ab代码ID

●第2列代表Aldevron提供的Ab名称

●第3列代表在10μl/ml mAb浓度下呈稳定过表达细胞相对于空载体转导细胞的MFI比率形式的FACS数据

●第4列代表过表达HEK细胞的亲和力(nM)

●第5列代表在10ug/ml mAb浓度下与NK细胞的结合

●第6列代表D10.G4.1细胞系相对于同种型对照的结合的MFI比率

●第7列代表对D10.G4.1细胞系的亲和力(nM)

●第8列代表表位分箱分析中的各种分箱

●第9列代表％受体-配体阻断分析(小鼠PVRIG-Fc融合蛋白与小鼠 PVRL2过表达细胞的结合)和IC50(nM)

●第10列代表％受体-配体阻断分析(小鼠PVRL2-Fc融合蛋白与小鼠 PVRIG过表达细胞的结合)和IC50(nM)

在两种受体-配体结合分析中证明阻断活性的AB-406和AB-407具有相对高的亲和力，与NK和D10.G4.1细胞结合。

选择这些Ab用于TME表达和体内研究。

表7.抗小鼠PVRIG单克隆Ab表征。

H.实施例8：与另外的免疫检查点抑制剂的组合测试

尽管CTLA4和PD1途径的抗体阻断已成为癌症的有效治疗方式，但大多数患者并未获得长期益处，这表明需要针对其它免疫检查点。利用我们独特的计算算法来定义B7/CD28家族的新成员，我们确定了PVRIG，它由T细胞和 NK细胞的多个亚群表达。我们在此报告其靶向该分子的阻断抗体的表达模式、功能表征和抗肿瘤活性。

利用Predictive Discovery平台，PVRIG被鉴定为潜在的新型免疫检查点，之后使用逆转录病毒细胞筛选文库来鉴定其同源结合对应物。使用原代和肿瘤衍生的T细胞分析，利用靶标过表达、敲低和拮抗剂抗体方法评定靶标对T细胞调节的影响。筛选针对人蛋白质的抗体在体外增强T细胞活化的能力，同时在体内评定靶向小鼠直向同源物的抗体对同基因模型中肿瘤生长抑制的影响。

发现PVRIG-Fc融合蛋白结合PVRL2，通过ELISA和流式细胞术分析证实结合特异性。PVRIG在T细胞活化后表现出独特的表达动力学，检测记忆T细胞以及NK细胞和γδT细胞上的靶标。产生一组具有阻断PVRIG与PVRL2相互作用的高亲和力人抗体，其在体外测试时显示通过PVRL2依赖性机制增强原代CD4+和肿瘤衍生的CD8+ T细胞的活化。

由于CHA.7.518.1.H4(S241P)不是小鼠交叉反应性，因此用替代阻断抗小鼠PVRIG抗体进行体内研究。当与抗PDL-1阻断组合时，抗小鼠PVRIG抑制CT26 和MC38结肠直肠癌模型中已建立的肿瘤的生长。正在进行与其它免疫检查点抑制剂以及在PVRIG敲除小鼠中的组合测试

高亲和力拮抗性抗体能够增强人T细胞活化，并且具有相似特征的替代抗体在多个同基因模型中显示出与PD-L1在体内的协同作用。总体而言，我们的数据证明了靶向除了其它B7家族检查点之外的PVRIG用于治疗癌症的效用

I.实施例9：体内POC研究：抗MPVRIG MAB在CT26肿瘤模型中的功效

该实施例描述了抗mPVRIg mAb处理作为单一疗法或与抗PDL-1处理组合在CT26小鼠结肠癌模型中的功效。

CT26结肠癌购自ATCC(CRL-2638)。细胞在含有10％FBS(Biological Industries，04-127-1A)和100μg/ml青霉素/链霉素(Biological Industries， 03-031-1B)的RPMI1640(Biological Industries，01-100-1A)中培养。对于肿瘤植入，收获细胞并洗涤，计数并在冷RPMI 1640中悬浮至10

本研究中使用的嵌合抗小鼠PVRIg抗体(mAb 406和mAb 407)被工程改造为大鼠IgG2b同种型单克隆抗体(mAb)，其显示与表达mPVRIg的293HEK 转染子结合并阻断mPVRL2与这些细胞的结合。在该研究中使用的mIgG1抗小鼠PDL-1抑制剂是mAb YW243.55.S70。YW243.55.S70抗体是 WO2010/077634中描述的抗PD-L1(重链和轻链可变区序列分别显示在WO 2010/077634的SEQ ID No.20和21中)，并且具有其中公开的序列。

所有mAb均配制在无菌PBS中，内毒素含量低(<0.05EU/mg)。

表8.测试的mAb。

从Envigo购买8周龄BALB/c雌性小鼠，并在开始实验之前在SPF动物设施中维持1周。将小鼠麻醉，剃毛并皮下接种50μl 5×10

表9.处理组。

关于抗mPVRIg和抗mPDL-1 mAb处理的组合。如单一处理中所述处理小鼠。在肿瘤接种后第7天，将小鼠随机分配到n＝10的处理组中，如下所述。在肿瘤接种后第7、11、14、18、21和25天注射mAb(如下详述)处理小鼠。

表10.处理剂量。

具有重复测量的双向ANOVA，随后是使用JUMP(Statistical Discoveries TM)软件对所选择的组对的重复测量的双向ANOVA。通过比较在所有研究动物存活的最后一天测量的肿瘤体积来进行肿瘤生长测量的分析。通过Log Rank Mantel-Cox检验确定无肿瘤小鼠百分比的统计学差异。P<0.05的值被认为是显著的。

*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001。对于每个实验，在相应的图例中描述了所进行的重复次数和每组动物的数量(图47-48)。

我们开始在小鼠同基因CT26肿瘤模型中进行抗mPVRIg和抗mPDL-1单一疗法的临床前评定。我们用mIgG1同种型抗PDL-1抗体(YW243.55.S70) 或用rIgG2b同种型抗mPVRIg(mAb 406和407)处理小鼠。

在CT26结肠癌的半治疗性处理模型中，抗PDL-1单一疗法显著有效 (P<0.0001)，与对照mIgG1同种型相比，引起70％的TGI，肿瘤排斥率更高并且在大多数小鼠中观察到快速肿瘤排斥和持久的抗肿瘤免疫(图63A+B)。

用抗mPVRIg mAb 406和抗mPVRIg mAb 407处理组表现出相似的肿瘤生长速率，无TGI超过rIgG2b同种型(图63A+B)。因此，抗PDL-1 mIgG1处理延长小鼠的存活时间(P<0.01，图63C)，10只个体中有5只展示完整的肿瘤清除(图63B)。没有观察到抗mPVRIg mAb对存活率的影响。

接下来，我们评定了抗PVRIg和抗PDL-1组合处理在小鼠同基因肿瘤模型中的活性。

在CT26结肠癌的治疗性处理模型中，在接种后第7天开始施用抗PDL-1 与对照rIgG2b同种型处理是无效的，而抗PFRIg mAb 407与抗PDL-1的组合引起显著的TGI(56％，P＝0.0005)，肿瘤排斥率较高，10只个体中有4只表现出完全肿瘤清除(图64A+B)并且促进了更好的抗肿瘤活性，检测到持久的抗肿瘤免疫力(P<0.01，图64C)。抗PVRIg mAb 406与抗PDL-1的组合是部分有效的，产生33％的TGI，然而，记录的抗肿瘤反应是短暂的，并且未观察到对存活率的影响。

预测mPVRIg作为新型B7样分子发挥作用，因此作为基于抗体的癌症免疫疗法的潜在靶标。几种人体外实验系统已证明对mPVRIg具有免疫调节作用。在本报告中提供的研究中，我们评估了针对mPVRIg的mAb的体内抗癌作用。在我们的研究中，用10mg/kg(200ug/小鼠)的抗mPVRIg作为单一疗法在最小的疾病设置中进行处理，即在第4天开始处理(肿瘤平均值为40mm

还测试了抗mPVRIg mAb与抗PDL-1处理的组合。在第7天开始用10 mg/kg(200ug/小鼠)处理，此时肿瘤的平均大小为75mm

计划进行额外的体内研究以评定其它同基因模型中的剂量依赖性和功效，或与其它治疗化合物或方案组合。

J.实施例10：通过噬菌体展示发现TIGIT治疗性抗体

1.简介

使用重组人TIGIT细胞外结构域作为靶抗原，进行噬菌体展示抗体发现活动以从幼稚人fab文库中分离人TIGIT结合物。分离出45种新型人TIGIT特异性抗体并作为人IgG4产生，包括如本文所述的铰链区中的任选S241P。筛选所得抗体阻断TIGIT-PVR相互作用的能力以及通过流式细胞术筛选与细胞表达的食蟹猴TIGIT的交叉反应性。针对更高的人和食蟹猴TIGIT结合亲和力进一步优化这些抗体中的两种。

2.方案

3.结果

通过在流式细胞术分析中与PVR结合而在功能上验证hTIGIT-hFc蛋白。在该分析中，针对内源性表达人PVR的Expi293细胞滴定hTIGIT-hFc蛋白。使用与AF647荧光标记缀合的抗hFc二抗检测相互作用。使用不相关的Fc蛋白作为对照(数据未显示)。

如下文实施例中所述，对许多候选物进行功能分析。

筛选两个96孔板的fab克隆(作为PPE)用于优化/亲和力成熟活动(3和 4)。在流式细胞术中筛选ELISA阳性独特变体与人和/或食蟹猴TIGIT过表达 Expi293细胞的结合。还通过表面等离子共振(SPR)评估顶部克隆与hTIGIT-HIS 蛋白的结合亲和力。CPA.9.002抗体的第一个亲和力成熟循环产生5种新抗体， CPA.9.021、CPA.9.027、CPA.9.044、CPA.9.048和CPA.9.049，在L-CDR3中具有突变并且至少3倍改善对重组人TIGIT的结合亲和力。CPA.9.027抗体的第二个优化循环产生4种新抗体，其与重组人TIGIT的结合提高至少25倍。新变体显示H-CDR2和L-CDR3中的突变(CPA.9.083和CPA.9.086)，另外在L-FR4 中显示CPA.9.089和CPA.9.093的突变。CPA.9.059的优化产生两种新抗体 CPA.9.101和CPA.9.103，其与食蟹猴TIGIT的结合显著改善，并且CPA.9.103 与人TIGIT的结合显著改善。对于两种新变体，在H-CDR3和L-CDR1中观察到突变。此外，对于CPA.9.101，观察到L-FR1的微小变化。

K.实施例11：通过杂交瘤的TIGIT治疗抗体发现

1.理由和目标

使用本领域已知和标准方法的杂交瘤技术用于产生以高亲和力结合人 TIGIT，与非人灵长类动物(食蟹猴(cynomolgus macaque，Macaca fascicularis)，称为食蟹猴)TIGIT交叉反应，并阻断TIGIT与其配体PVR(CD155)的相互作用的鼠抗体。

2.概要

用重组形式的人和食蟹猴TIGIT细胞外结构域蛋白免疫接种Balb/c小鼠。将从免疫小鼠的脾和淋巴结分离的细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞系融合，以产生分泌鼠抗体的杂交瘤。使用标准SPR方法针对与过表达人和食蟹猴TIGIT的 Expi293细胞的结合以及对人和食蟹猴TIGIT重组蛋白的结合亲和力筛选来自多克隆和亚克隆的单克隆杂交瘤的上清液。来自所选杂交瘤的鼠抗体被纯化并在结合和功能分析中被广泛表征。将五种功能性和食蟹猴交叉反应性鼠抗体人源化以含有hIgG4框架(包括本文所述的任选铰链变体)和同种型。序列显示在图53中。

L.实施例12：噬菌体和杂交瘤衍生的抗体与过表达人和食蟹猴TIGIT的细胞结合的FACS KD测量

1.方案

制备以下细胞系以估计人噬菌体和小鼠抗TIGIT抗体的结合亲和力： Expi293亲本、Expi293人TIGIT过表达和Expi293食蟹猴TIGIT过表达。以下杂交瘤和噬菌体抗体各自以11点2倍连续稀释系列制备，结合位点浓度范围为 195pM-200nM：

噬菌体产生的抗体：CPA.9.027、CPA.9.049、CPA.9.059。

杂交瘤产生的抗体(人源化前)：CHA.9.536、CHA.9.541、CHA.9.543、 CHA.9.546、CHA.9.547和CHA.9.560。包括两种不同的基准抗体BM26 (WO2016/028656A1，克隆31C6作为小鼠IgG1)和BM29(US2016/0176963A1，克隆22G2作为小鼠IgG1)。

每次滴定的第12个孔仅包含缓冲液作为背景。将每种细胞类型与抗人 TIGIT mAb在4℃孵育60分钟。洗涤后，将带AF647标签的山羊抗人F(ab') (Jackson Immunoresearch)和带AF647标签的山羊抗小鼠IgG-Fc(Southern Biotech#1030-30)加入分别用人和小鼠mAb孵育的细胞中。然后，FACS Canto II HTS仪器记录每个孔的5000-10,000个事件的几何平均荧光强度(gMFI)。使用Graphpad Prism的“一个位点特异性结合”模型拟合gMFI作为人PVR分子浓度的函数的图，以估计每个非线性拟合的KD和95％置信区间。

2.结果

针对每种mAb测量的两个独立的FACS KD平均差异不超过2倍。图54 和图55中分别列出了人和食蟹猴过表达细胞的每种mAb的KD的单一代表性测量值以及结合等温线拟合的95％置信区间。CPA.9.059未显示与食蟹猴过表达细胞的结合。应注意的是，所有mAb的结合位点浓度(分子浓度的2倍)用于非线性曲线拟合，这意味着假设这种FACS KD方法测量结合位点常数(kD) 而不是分子或化学计量结合常数。

M.实施例13：抑制PVR-FC与TIGIT结合的噬菌体和杂交瘤衍生的抗人 TIGIT MAB的FACS阻断分析

1.简介

该分析的目的是表征噬菌体和杂交瘤衍生的抗人TIGIT抗体抑制人PVR与细胞表面上过表达的人TIGIT结合的能力。首先，通过FACS确定人TIGIT-人 PVR结合亲和力。结合等温线显示用于阻断分析的人PVR的饱和浓度。接下来，用噬菌体和杂交瘤产生的抗TIGITmAb滴定过表达人TIGIT细胞的细胞，然后加入饱和浓度的人PVR。然后使用FACS测量过表达细胞上的抗人TIGIT 抗体结合。

2.方案

每次滴定的第4个孔仅包含缓冲液作为背景。将细胞与mAb在4℃孵育15 分钟。然后将人PVR-m2aFc(Compugen)在4℃孵育1小时。洗涤后，加入带 AF647标签的山羊抗小鼠IgG(SouthernBiotech#1033-31)。然后，FACS Canto II HTS仪器记录每个孔的5000-10,000个事件的几何平均荧光强度(gMFI)。将用mAb预孵育的细胞的结合人PVR的gMFI值与用阻断基准mAb和非阻断对照mAb预孵育的细胞的gMFI值进行比较。如果噬菌体抗体与来自用已知的非阻断性mAb滴定的信号相比降低了人PVR-m2aFc结合信号，则所述抗体被表征为在该噬菌体mAb浓度下阻断PVR结合。噬菌体mAb的阻断趋势与BM26 基准的PVR阻断相似(图58)。

每次滴定的第12个孔仅包含缓冲液作为背景。将细胞与mAb在4℃孵育15分钟。然后加入人PVR-h1Fc(Sino Biological#10109-H20H)，然后将细胞在4℃孵育1小时。洗涤后，加入带AF647标签的F(ab')2片段山羊抗人Fc (Jackson Immunoresearch)。然后，FACSCanto II HTS仪器记录每个孔的 5000-10,000个事件的几何平均荧光强度(gMFI)。使用Graphpad Prism的“log (抑制剂)对反应-可变斜率(四个参数)”模型非线性拟合gMFI作为mAb结合位点浓度的函数的图，以估计每个非线性拟合的IC50。该实验在两天内重复两次。

3.结果

N.实施例14：与人、食蟹猴和小鼠TIGIT结合的九种噬菌体和杂交瘤衍生的MAB的表面等离子共振(SPR)动力学研究

1.方案

所有实验均使用ProteOn XPR 36仪器在22℃下进行。首先，分别用山羊抗人Fc多克隆抗体(Thermo#H10500)和兔抗小鼠抗体(GE Healthcare# BR100838)制备高密度捕获表面，使用标准胺偶联将其固定在各个GLC芯片上的所有垂直捕获泳道和水平间隔上。每种GLC芯片的抗人捕获pAb和抗小鼠捕获抗体的典型固定水平为约5000RU。人TIGIT获自SinoBiologicals，而小鼠TIGIT单体和食蟹猴TIGIT单体均在内部制备。研究用于结合人、小鼠和食蟹猴TIGIT的纯化mAb如下：

噬菌体抗体：CPA.9.027、CPA.9.049和CPA.9.059

杂交瘤抗体：CHA.9.536、CHA.9.541、CHA.9.543、CHA.9.546、CHA.9.547 和CHA.9.560

基准比较：BM26(WO2016/028656A1，克隆31C6作为hIgG4)和BM29 (US2016/0176963A1，克隆22G2作为hIgG4)。

将每种mAb在运行缓冲液中稀释至约0.5μg/mL，所述运行缓冲液为1×PBST，加入过滤的BSA至最终浓度为100μg/mL。对于ProteOn仪器上的每个“单次动力学”循环，在六个独特的垂直捕获泳道之一上捕获不同的mAb 约1.5-2.5分钟。在将ProteOn的缓冲液流切换成水平方向后，捕获表面稳定约 15-20分钟。注射6个浓度的3倍稀释系列的人TIGIT(346pM-84.1nM)、食蟹猴TIGIT(371pM-90.2nM)或小鼠TIGIT(382pM-92.9nM)2分钟，然后解离20分钟，流速为50μL/min。在每个注射抗原系列之前进行相同的缓冲液注射以进行双重参照。用两个30秒脉冲的146mM磷酸再生抗人抗体表面，并用两个30秒脉冲的10mM甘氨酸(pH 1.7)再生抗小鼠抗体捕获表面。使用 ProteOn版本的Scrubber处理在捕获的mAb上注射的TIGIT抗原的传感图，并将其拟合于包括质量转运项的1:1动力学结合模型。

图56显示了所得的动力学速率常数和平衡解离常数，其中数据足够可靠以估计结合常数(传感图数据未显示)。星号表示必须保持恒定在1.00×10-5/秒的 kd值。在如克隆CHA.9.560与人TIGIT结合的情况下，动力学模型能够估计 Kd，但是考虑到仪器的灵敏度，在20分钟的解离数据后，实际上不可能准确地以1×10

O.实施例15：抗TIGIT抗体的功能分析

1.理由和目标

为在功能上表征抗人TIGIT抗体抑制TIGIT和其配体的PVR的相互作用的能力，并因此作为单一疗法或与抗人PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)组合增强人T细胞活化。

2.方案

3.结果

图65显示了抗人TIGIT抗体和CHA.7.518.1.H4(S241P)对IFNγ分泌的组合作用。三种噬菌体衍生抗体CPA.9.027、CPA.9.049和CPA.9.059，以及五种杂交瘤衍生抗体CHA.9.536、CHA.9.541、CHA.9.546、CHA.9.547和CHA.9.560，包括BM26，当单独或与CHA.7.518.1.H4(S241P)组合处理时，与其相应同种型对照抗体相比均增强IFNγ分泌。与其它抗人TIGIT抗体相比，抗人TIGIT非阻断抗体CHA.9.543导致较少的IFNγ分泌。相对于各自的同种型对照抗体，每种抗体中IFNγ分泌的增加百分比总结在图66中。在抗人TIGIT抗体和 CHA.7.518.1.H4(S241P)的组合治疗中观察到了协同效应。

4.总结和结论

向人TIGIT/人PVR Jurkat报告基因分析中添加抗人TIGIT抗体诱导了IL-2 信号传导的强烈的剂量依赖性增加。另外，当与Mel624人PVR细胞共培养时，抗人TIGIT抗体增加人CMV特异性CD8+ T细胞的IFNγ分泌。抗人TIGIT抗体与抗人PVRIG抗体组合进一步增加IFNγ的分泌。总之，这些数据表明抗人 TIGIT抗体可以阻断TIGIT介导的对人T细胞活化的抑制，并且通过TIGIT和 PVRIG的共同阻断增强T细胞活化。

P.实施例16：抗TIGIT抗体的分箱分析

1.方案

实验由Wasatch Microfluidics Inc.(美国盐湖城)使用连续流微型测位仪(CFM)和IBIS MX96 SPR成像仪(MX96 SPRi)进行。将以下抗人TIGIT mAb 和人PVR-Fc变体各自在10mM乙酸钠(pH 5.0)中稀释至约10μg/mL，并使用标准胺偶联在Xantec 200M生物传感器棱镜芯片的独立点上共价固定，以便使用CFM进行7分钟循环：

BM8-H4和BM9-H4分别指(US2015/0216970A1，克隆10A7和重新格式化为hIgG4的1F4)。MBSA43-M1是来自eBioscience的小鼠抗人TIGIT IgG1。然后用1×PBST冲洗棱镜芯片3分钟，然后直接加载到MX96 SPRi成像仪中，其中用5分钟注射1M乙醇胺淬灭过量的NHS酯。初步实验包括在所有固定的mAb上注射100nM单体人TIGIT(Sino Biologicals，目录号10917-H08H) 4分钟，然后再生的几个循环，以测试抗体的结合活性并通过评定TIGIT结合的可重复性最佳地确定再生条件。这些初步实验表明，可重复再生大多数固定化mAb的最佳试剂是1/500磷酸的30秒脉冲。然而，固定的PVR不保持活性，因此它们的阻断模式仅在溶液中产生和“分箱”为分析物。在这些初步实验和下面描述的分箱实验中，所有蛋白质样品都在运行缓冲液中制备，所述缓冲液是脱气的HBST。进行“夹心”表位分箱方案，其中每个mAb和PVR注射到预先复合到每个固定的mAb的TIGIT上，以确定固定的mAb是否阻断溶液中的mAb与TIGIT的结合。对于每个循环，首先将100nM TIGIT注射到所有固定的mAb上4分钟，然后立即注射274nM(结合位点浓度)的竞争剂mAb或配体4分钟。用每种mAb和PVR作为竞争分析物重复这一过程。在每12个循环后进行用运行缓冲液代替竞争蛋白的对照循环以进行双重参照。每次循环后，用1/500磷酸的30秒脉冲再生所有表面。使用Wasatch的专有软件处理和参考Sensorgram数据。如果在预先复合到固定化mAb的TIGIT上注射竞争剂没有观察到结合，则将抗体对分类为具有共有的TIGIT结合表位。如果竞争剂 mAb的注射显示与预复合的TIGIT结合，则抗体对被分类为与TIGIT上的不同表位结合或“夹心”。竞争剂的低或最小结合被归类为“中间”阻断剂。使用 Wasatch的专有软件对每种mAb和配体的成对TIGIT阻断模式进行分层聚类。

2.结果

PVR-Fc蛋白和13种mAb都失去活性或不能作为配体再生，因此它们的阻断模式仅被确定为溶液中的分析物。MAb CPA.9.014-H4未被分箱，因为它没有显示与TIGIT的结合。图67显示了基于每种mAb和两种PVR蛋白的成对阻断模式的树状图聚类。纵轴表示阻断模式中的统计相似性因子。Wasatch Microfluidics应用截止因子5来聚集mAb，如图67中的线所示。对于表位“分箱”的最严格定义，其中仅显示相同阻断模式的那些mAb(和PVR)分箱在一起，总共有12个离散分箱。如果将仅显示最小差异的阻断模式聚集在一起，则存在四个密切相关的mAb和PVR“群落”。这些“群落”在图67的底部用不同的阴影块表示。图68将mAb和PVR组合在一起，这些mAb和PVR填充每个离散的独特箱，每个箱由黑框表示。灰框围绕着构成相关阻断模式的每个“群落”的所有独特箱。图68中的mAb和PVR与数字键一起列出，代表图67中树状图中的每种蛋白质。

Q.实施例17：向TIGIT敲除小鼠施用抗PVRIG抗体

理由和目标

检查TIGIT缺失与小鼠PVRIG阻断组合是否可以增强同基因小鼠肿瘤模型中的肿瘤生长抑制和存活。

方案

动物

在Ozgene Pty LTD(澳大利亚)产生TIGIT敲除(KO)小鼠。C57BL/6 野生型(WT)小鼠(Ozgene)充当对照。使用8至11周龄的雌性TIGIT KO 和C57BL/6小鼠。所有研究均由特拉维夫大学(以色列特拉维夫)的机构动物护理和使用委员会批准。

体内肿瘤模型

将1×105个B16/Db-hmgp100黑素瘤细胞皮下(s.c.)接种到C57BL/6 WT 或TIGITKO小鼠的右胁腹中。在肿瘤接种(第0天)的同一天开始抗体处理，每个处理组7-10只小鼠。使用的抗体是小鼠IgG1同种型对照(克隆MOPC-21 BioXcell)和小鼠IgG1抗小鼠PVRIG(克隆407，Compugen LTD)。通过腹膜内注射以10mg/kg施用抗体，每周两次，持续3周。每2-3天用电子卡尺测量肿瘤生长，并以0.5×W2×L mm3的形式报告(L是肿瘤的长度，W是宽度)。将达到2250mm3肿瘤大小的动物麻醉。

统计分析

使用JUMP软件(Statistical Discoveries TM)进行重复测量的双向ANOVA，随后进行针对所选择的组对的重复测量的双向ANOVA。通过比较在所有研究动物存活的最后一天测量的肿瘤体积来进行肿瘤生长测量的分析。通过Log Rank Mantel-Cox检验确定无肿瘤小鼠百分比的统计学差异。P<0.05的值被认为是显著的。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001。

结果

在TIGIT KO小鼠中用抗小鼠PVRIG阻断抗体处理后的体内肿瘤生长抑制

我们在同基因小鼠B16/Db-hmgp100皮下黑素瘤肿瘤模型中测试了TIGIT 缺失与小鼠PVRIG阻断组合的体内功效。与同种型处理相比，用抗小鼠PVRIG 阻断抗体治疗荷瘤的C57BL/6 WT小鼠对肿瘤生长抑制(TGI)具有较小影响 (第11天为17％TGI，端点第18天为8％TGI)。与C57BL/6 WT对照组相比， TIGIT缺失对肿瘤生长的影响较小(第11天为17％TGI，端点为13％TGI)。然而，当TIGIT缺失与抗小鼠PVRIG抗体(克隆407)处理组合时，显著的 TGI是明显的(第11天为63％，端点为49％TGI)(图80A和80B)。根据TGI，与C57BL/6 WT对照组相比，用抗小鼠PVRIG抗体(克隆407)处理的TIGIT KO小鼠表现出增加的存活率，然而，未达到统计学显著性(图80C)。

总结和结论

TIGIT缺失和PVRIG阻断的组合显著减少了体内肿瘤生长，表明TIGIT和 PVRIG在该黑素瘤肿瘤模型中起抑制作用。这些数据表明共同靶向TIGIT和 PVRIG可能是另一种显著增强抗肿瘤反应的组合疗法。

R.实施例18：PVRIG拮抗作用增强T细胞效应功能并减少肿瘤生长

摘要

尽管最近取得了进展，但大多数患者并未从检查点抑制剂中获得长期益处。PVRIG是DNAM/TIGIT家族的新型免疫抑制受体，我们在此证明了PVRIG 在调节抗肿瘤反应中的作用。与来自正常组织的淋巴细胞相比，PVRIG与 PVRL2结合并且在肿瘤浸润性淋巴细胞上显示出显著增强的表达。PVRIG拮抗作用增强人T细胞活化，PVRIG与PD-1或TIGIT抑制剂的组合进一步协同增加淋巴细胞功能。我们接下来讨论了PVRIG在临床前肿瘤模型中的作用。PVRIG

意义状态

这些数据表明，PVRIG是治疗癌症的有前景的靶标，并提供了测试PVRIG 抑制剂CHA.7.518.1.H4(S241P)作为一种新型癌症免疫治疗剂作为单一疗法或与TIGIT或PD1阻断组合的理论基础。

简介

越来越多的证据表明，内源性免疫反应在塑造癌症的发生、发展和抑制方面至关重要(1)(2)。患者的免疫状态以及肿瘤浸润性白细胞(TIL)在肿瘤微环境(TME)内的含量不仅是癌症存活率的关键预后指标，也是患者对疗法的反应的关键预后指标(3)(4)。T细胞是TIL的关键组分，可以引发抗肿瘤反应，并且大多数抗肿瘤免疫反应最终依赖于效应淋巴细胞的功能。患者肿瘤 TME中CD8 T细胞的富集，以及使免疫反应偏向有效CD8 T细胞反应的其它因素，如突变负荷和Th1极化TME，都是有利的抗肿瘤免疫反应的关键预后指标(5)(6)。

在许多实体肿瘤中的一个关键的发现是，效应T细胞在TME内具有活化或‘耗竭’表型(7)。这表明虽然TME内的T细胞最初已经发现同源抗原，被活化并被运输至肿瘤，但它们随后不能引发有效的抗肿瘤反应。预活化或耗竭的T细胞定义为共抑制受体如PD-1和CTLA-4的表面表达增加(8)。用抑制与其同源配体相互作用的抗体治疗靶向这些共抑制受体已经在患有多种晚期癌症的患者中显示出显著的临床疗效(9)。从机制上讲，已经证明靶向这些共抑制受体导致预先存在于TME中的已具肿瘤反应性的T细胞的扩增和具有加宽的T细胞受体多样性的T细胞池的产生(10)(11)(12)。虽然目前临床上的检查点抑制剂已经彻底改变了癌症治疗并证明了免疫系统对抗癌症的能力，但许多患者仍然复发和/或对治疗没有反应。因此，增加对癌症中免疫反应的理解并针对其它基于免疫的途径将产生额外的治疗性治疗。

在这些新途径中，目前正在研究nectin和nectin样家族中的一组受体和配体作为潜在的新型癌症免疫疗法。此家族内的受体包括DNAM-1(CD226)、 CD96(TACTILE)、TIGIT以及最近的PVRIG(CD112R)(13)(14)(15)。在这些分子中，DNAM是该亚家族内的活化受体，与2个配体PVR(CD155) 和PVRL2(CD112)结合，向淋巴细胞递送活化信号(16)。该家族中的两个受体已经被证明能够抑制人体淋巴细胞功能，即TIGIT以及最近的PVRIG(17) (18)。据报道，TIGIT与PVR具有高亲和力相互作用，对PVRL2的亲和力弱得多，并且已经显示通过其ITSM基序向淋巴细胞递送抑制信号来抑制T细胞和NK细胞反应(19)(20)。最近，PVRIG显示出以高亲和力结合PVRL2并通过其ITIM基序递送抑制信号(15)。在这两种情况下，TIGIT对PVR和PVRIG 对PVRL2的亲和力高于DNAM对PVR或PVRL2的亲和力，表明TIGIT和 PVRIG可以从DNAM中胜过PVR和PVRL2，提供了TIGIT和PVRIG可以减少T细胞功能的间接机制。在该家族中，PVR也是CD96的配体。据报道，CD96 的功能对小鼠淋巴细胞具有抑制作用(21)但对人淋巴细胞有活化作用(22)。基于这些数据，我们假设在人淋巴细胞上，2种受体TIGIT和PVRIG分别以高亲和力结合PVR和PVRL2，以提供抑制信号以减弱T细胞功能。

尽管人PVRIG在最近的一份报告中已被证明可抑制T细胞反应，但PVRIG 和PVRL2在癌症免疫监视中的作用尚不清楚。特别地，尚未报道该途径在癌症中的表达谱和PVRIG在调节CD8 T细胞抗肿瘤反应中的作用。此外，尚未报道小鼠PVRIG基因的功能表征和破坏体内PVRIG-PVRL2相互作用在临床前肿瘤模型中的作用。在此，我们通过报告癌症中的PVRIG和PVRL2表达谱以及 PVRIG拮抗作用在肿瘤细胞共培养分析和临床前肿瘤模型中的作用阐明了 PVRIG在癌症环境中的作用。我们证明，与TIGIT或CD96相比，PVRIG在T 细胞亚群上具有分化的表达谱，并且与正常邻近组织相比，PVRIG和PVRL2 表达在癌症中被诱导。在多种人体外分析系统中，高亲和力PVRIG拮抗性单克隆抗体(CHA.7.518.1.H4(S241P))增强T细胞功能，特别是当与抗TIGIT或抗PD1抗体组合时。此外，我们使用拮抗性抗体或PVRIG缺陷小鼠报告了小鼠 PVRIG的新表征，并证明PVRIG-PVRL2相互作用的抑制减少了肿瘤生长，与PD-1抑制或TIGIT遗传缺陷组合时效果最显著。总之，该数据显示PVRIG是调节T细胞抗肿瘤反应的关键抑制性受体，并支持CHA.7.518.1.H4(S241P)的开发，用于癌症患者的临床测试。

材料和方法

人体外周血和肿瘤表达研究

根据赫尔辛基宣言(the Declaration of Helsinki)，从斯坦福大学获得健康的供体人PBMC。人体组织由国家癌症研究所支持的资源合作人体组织网络提供。根据制造商的方案(Miltenyi Biotec)将人癌组织和匹配的正常邻近组织解离成单细胞。通过流式细胞术分析解离的细胞，以在不同细胞亚群上表达各种靶标。对于个别细胞亚群上的每个靶表达，通过将靶的MFI值除以同种型对照的MFI值来计算倍数表达值。其他研究者可能已收到这些相同组织标本的样本。基于回顾每个样品的病理学报告确定肿瘤类型。对于IHC研究，使用抗 PVRL2抗体(HPA-012759，Sigma)和PD-L1(Sp142，SpringBio)使用补充方法中描述的条件对肿瘤微阵列(Biochain institute)进行染色。由2个独立评价者对来自相同肿瘤的一式两份核心进行评分。

PVRIG抗体生成和表征

如补充方法中详述的，生成抗人PVRIG和抗小鼠PVRIG抗体。简而言之，通过选择性结合PVRIG工程细胞来评定抗体结合特异性和亲和力，而对不表达该基因的细胞没有可检测的结合。使用基于ELISA和FACS的分析测定这些抗 PVRIG抗体的拮抗活性，其中PVRIG与PVRL2的相互作用被破坏。为了在基于细胞的分析中表征，在几种T细胞-靶细胞共培养分析系统中测试抗体，所述系统由在培养物中表达PVRL2的靶细胞与PBMC或肿瘤衍生的T细胞组成。如前所述，gp100特异性T细胞系从黑素瘤肿瘤扩增(23)。用CMVpp65 (495-503)、IL-2和IL-7从健康供体PBMC(CTL免疫斑点)扩增CMVpp65 反应性T细胞10天。对于组合研究，使用10μg/ml针对PD-1、TIGIT和PVRIG 的抗体。使用细胞计数珠阵列(CBA)测定条件培养基中的细胞因子浓度，并如补充方法中所述进行FACS染色。

小鼠PVRIG表达和功能的表征

使用重组PVRIG、PVRL2和PVR蛋白通过SPR和ELISA，并使用异位工程改造的PVRIG和PVRL2过表达细胞系或PVR或PVRL2 siRNA转染的细胞系通过FACS评定小鼠PVRIG与mPVRL2和mPVR的结合相互作用。如在补充方法中所述产生PVRIG和TIGIT缺陷小鼠。进行表达分析以检查各种细胞亚群中脾、淋巴结和肿瘤中PVRIG的表达。使用WT和PVRIG

结果

PVRIG表达在外周血和肿瘤的效应T细胞上最高

Ig超家族(IgSF)由数百种蛋白质组成，但其中只有少数是T细胞抑制性受体。IgSF的蛋白质倾向于快速进化(24)，因此这些蛋白质之间的序列相似性通常较低，并且不是鉴定新型免疫受体的最佳选择。为了鉴定新型免疫检查点，我们基于已知免疫检查点之间共享的基因组和蛋白质组学特征，如基因结构、蛋白质结构域、预测的细胞定位和表达模式开发了生物信息学算法。使用这些算法，PVRIG被鉴定为新型免疫受体。最近的一份报告还证明，人PVRIG (CD112R)与PVRL2结合并抑制T细胞功能(15)。然而，尚未报道该途径在调节肿瘤免疫监视中的相关性。在这里，我们已经阐明了PVRIG和PVRL2在人类癌症和临床前肿瘤模型中的表达和功能。在来自健康供体的外周血中，PVRIG仅在淋巴细胞上表达，在CD8 T细胞和NK细胞上表达最高(图83A)。 T细胞的进一步亚群分析显示与Treg亚群相比，CD8或CD4记忆/效应T细胞亚群上的PVRIG表达最高(图83B，图90A)。主要记忆T细胞表达模式将PVRIG与家族中的其它受体(TIGIT、CD96)区分开来，所述其它受体倾向于在Treg 上具有与记忆/效应T细胞相比相同或更高的表达。我们进一步比较了2种分析系统中PVRIG和TIGIT T细胞活化后的表达动力学(CMV回忆反应图83C， DC-MLR图83D，图90B)，并显示PVRIG与TIGIT相比延迟诱导的动力学并在后期时间点更持久的表达。与TIGIT相比，PVRIG在记忆/效应细胞上的优先表达表明PVRIG在调节T细胞反应中的独特作用。

活化后T细胞上PVRIG表达的延迟和持续诱导表明它可以在肿瘤微环境中表达。接下来，我们通过FACS直接离体分析了PVRIG在来自解离的人肿瘤的白细胞上的表达。在来自多种肿瘤类型的CD8 T细胞、CD4 T细胞和NK细胞上检测到PVRIG的表达(图83E-G，图90C)。PVRIG与PD-1和TIGIT在 CD4和CD8 T细胞上共表达(图83F)。平均而言，与膀胱、结肠直肠和前列腺相比，在来自乳腺、子宫内膜、头颈部、肺、肾和卵巢肿瘤的CD4

与正常邻近组织相比，PVRL2在肿瘤组织中的表达增强

由于PD-L1表达已被证明有助于预测对PD-1抑制剂的反应，我们检测了 PVRL2的表达是否与人类癌症组织中其同源受体PVRIG的表达相伴。使用我们验证的用于染色FFPE样品的抗PVRL2抗体(图91A)，我们染色由肺癌、结肠癌、皮肤癌、乳腺癌、卵巢癌/子宫内膜癌和肾癌组织构成的肿瘤微阵列 (TMA)，并基于PVRL2表达的盛行率和强度对每个核心进行评分。PVRL2表达在来自这些器官的大多数正常组织样品中不存在或最低程度地表达。在肿瘤组织中，在约50-70％的肺癌、结肠癌、乳腺癌和卵巢癌/子宫内膜癌中检测到 PVRL2在肿瘤细胞上的表达(图84A，84F)。肾癌样本中的表达范围为20-40％，而黑素瘤中的表达最低(约10％)(图84A，84F)。在侵袭前沿的肿瘤细胞和免疫细胞上检测到PVRL2表达(图84B)。为了确定表达PVRL2的特异性免疫细胞亚群，我们对新解离的肿瘤进行了流式细胞术。从多种肿瘤类型的CD45

与PD-L1相比，PVRL2表达受到差异调节并存在于PD-L1

由于PVRIG和PD-1可在肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)上共表达，我们还通过染色相同的TMA的连续切片检查在相同的肿瘤上PVRL2和PD-L1的共表达。在PD-L1

CHA.7.518.1.H4(S241P)是一种针对PVRIG的高亲和力人源化单克隆抗体，可破坏PVRIG与PVRL2的相互作用

为了检查拮抗人PVRIG-PVRL2相互作用的功能性结果，我们生成了高亲和力、拮抗性抗PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)，其阻断PVRIG和PVRL2 的相互作用。该抗体选择性结合异位表达人PVRIG或食蟹猕猴PVRIG的 HEK293细胞，并且还以亚纳摩尔亲和力结合内源性表达PVRIG的Jurkat细胞 (图86A)。在生物化学分析中，CHA.7.518.1.H4(S241P)阻断PVRIG Fc与PVRL2

CHA.7.518.1.H4(S241P)与TIGIT或PD-1抑制剂组合导致T细胞功能的协同增强。

PVRIG和TIGIT阻断的组合协同增加T细胞-树突状细胞共培养分析中的 CD4 T细胞功能(15)，表明该途径在调节T细胞-APC相互作用中的作用。尚未报道PVRIG和TIGIT阻断对肿瘤细胞共培养环境中的CD8 T细胞的影响。由于我们的肿瘤表达谱证明PVRL2在CD45

PVRIG缺乏导致T细胞增殖增加和肿瘤生长减少

尽管已报道了小鼠PVRIG的序列及其与小鼠PVRL2的相互作用，但小鼠PVRIG的表达谱和免疫调节活性尚不清楚。我们首先分析了NK、NKT和T细胞中的mPVRIG RNA表达和转录物(图87A)。活化的小鼠CD8 T细胞具有升高的PVRIG转录物，其与TIGIT相比具有延迟的诱导动力学(图87B)。我们通过表面等离子共振(SPR)和在几种分析方向中进行的ELISA证实重组 mPVRIG结合mPVRL2蛋白(图95A-D)。我们还观察到mPVRIG和mPVR之间的相互作用，尽管亲和力比与mPVRL2的相互作用小约10倍(图95E)。为确定PVR或PVRL2是否是mPVRIG的主要配体，我们测试了小鼠PVRIG Fc 与表达PVR和PVRL2的B16F10细胞的结合(数据未显示)。PVRIG Fc显示出与B16F10细胞的剂量依赖性结合，其在B16F10细胞中PVRL2 siRNA敲低后完全消除(图95F)。相比之下，PVR敲低后PVRIG Fc融合蛋白的结合略微但一致地降低(图95F)，表明在mPVRIG和mPVR之间发生非常弱的相互作用。总之，这些结果证明，在小鼠中，PVRL2是PVRIG的主要配体，如在人的情况下。

为了描述PVRIG在免疫反应中的作用，我们生成了PVRIG缺陷型(

我们接下来研究了PVRIG缺陷对MC38同基因模型中肿瘤生长的影响。与 WT小鼠相比，PVRIG

抗mPVRIG抗体与PD-1抗体或TIGIT缺乏组合抑制肿瘤生长

在证明PVRIG的遗传缺陷导致肿瘤生长减少后，我们接下来的目的是证明抗体介导的PVRIG-PVRL2相互作用的抑制，特别是与PD1或TIGIT抑制剂组合，可以提高抗肿瘤免疫力，如我们的人体外数据已经证明的。为了评定这一点，我们生成了一种高亲和力、拮抗性抗mPVRIG抗体。通过FACS测定的抗 mPVRIG mAb的亲和力评定显示亚纳摩尔Kd(在HEK293mPVRIG上0.33 nM，在D10.G4.1细胞上0.39nM)，类似于CHA.7.518.1.H4(S241P)(图95G-H)。进一步证实了该抗体的特异性，因为在mPVRIG敲低后大部分与D10.G4.1细胞的结合被消除(图95I)。通过抑制mPVRIG Fc与B16F10的结合以及mPVRL2 Fc与过表达mPVRIG的HEK293细胞的结合，测试抗mPVRIG破坏 mPVRIG-mPVRL2相互作用(图89A)。在两种分析形式中均观察到抗mPVRIG 抗体完全阻断PVRIG-PVRL2相互作用(图89A，图95J)，证明了拮抗性抗 mPVRIG抗体。接下来，我们在同基因CT26皮下结肠肿瘤模型中测试mPVRIG 阻断的体内功效。与相应的脾脏或引流淋巴结亚群相比，PVRIG表达在肿瘤微环境中的NK和T细胞上升高(图89B)。用抗mPVRIG阻断mAb作为单一疗法治疗荷瘤小鼠未能减少肿瘤生长(数据未显示)。然而，抗PVRIG和抗PD-L1 mAb的组合有效地延迟了CT26肿瘤生长(图89C)并且显著增加了处理小鼠的存活率，具有40％的完全应答者率(图89D)。与我们的人T细胞分析数据一致，这些数据表明PD-1和PVRIG抑制剂的组合可以减少肿瘤生长。

我们还测试了消除PVRIG和TIGIT信号传导在调节抗肿瘤反应中的作用。对于这些研究，我们测试了抗mPVRIG抗体在接种B16F10/Db-hmgp100 黑素瘤细胞的WT或TIGIT

讨论

尽管靶向免疫T细胞检查点(如CTLA4和PD-1)的抗体已经增加了癌症患者的存活率，但是大多数癌症患者仍然没有显示出临床益处。对此的一个可能原因是存在抑制T细胞抗肿瘤免疫力的额外T细胞调节剂。在这里，我们阐明了PVRIG在调节效应T细胞功能中的作用，并证明PVRIG拮抗作用增加T 细胞抗肿瘤反应并减少肿瘤生长。

PVRIG是nectin和nectin样家族的新成员，属于家族中几种已知的免疫调节受体。理解该家族内受体的相互作用对于理解PVRIG的相关性和作用机制至关重要。在这些受体中，DNAM、TIGIT和CD96在共享相同配体PVR和PVRL2 方面与PVRIG最密切相关。DNAM与PVR和PVRL2结合，向淋巴细胞递送共刺激信号。据报道，TIGIT与PVR结合，与PVRL2结合较弱。我们无法使用ELISA或SPR检测TIGIT和PVRL2之间的相互作用(数据未显示)，表明 PVR是TIGIT的主要配体。使用类似的方法，我们和最近的报告检测到PVRL2 和PVRIG之间的高亲和力相互作用，表明PVRIG是PVRL2的主要抑制性受体。这些数据表明TIGIT和PVRIG在该轴上包含双信号传导节点，并且需要阻断两者以最大限度地增加该家族内的T细胞活化。除了与不同配体相互作用外，我们观察到PVRIG在效应或记忆T细胞上具有最高表达，类似于PD-1，而TIGIT在调节性T细胞上具有最高表达。此外，我们观察到与TIGIT相比， PVRIG在T细胞活化后显示晚期诱导。这些数据表明PVRIG在该家族中具有独特的作用，以高亲和力与PVRL2相互作用，并且在记忆细胞上具有分化表达，并且具有对TIGIT的晚期诱导特征。

这里报道的是PVRIG在使用PVRIG缺陷小鼠和拮抗性抗PVRIG抗体调节抗肿瘤T细胞反应中的新作用。这里证明小鼠PVRIG在T细胞和NK细胞上表达，在淋巴细胞活化时诱导，并且与外周相比在TME中最高。此外，我们显示PVRIG缺乏导致体外T细胞功能增加和体内肿瘤生长减少。当与抗PD-L1 或TIGIT的遗传缺陷组合时，PVRIG的拮抗性抗体减少肿瘤生长，证明PVRIG 在调节T细胞反应中的必要作用。这些新颖的数据使用临床前肿瘤模型提供体内概念证据，靶向PVRIG与PD1或TIGIT拮抗作用组合是用于治疗癌症的潜在新疗法。

这里报道了一种高亲和力的抗人PVRIG抗体，它破坏了我们在临床试验中进行测试的PVRIG和PVRL2的相互作用。为了确定可能为临床试验中的患者选择提供信息的潜在癌症适应症，我们通过FACS和IHC检查了该轴在人类癌症中的表达谱。对于PVRIG，我们通过FACS观察到PVRIG在CD4和CD8 T 细胞上的平均表达在子宫内膜癌、肺癌、肾癌和卵巢癌中最高，尽管这种差异没有达到与其它癌症类型的统计学差异，如通过ANOVA与当前样本数量的图基多重比较检验所测定。由于PVRIG在T细胞活化时被诱导并且假设大多数肿瘤浸润性T细胞是抗原经历的，因此中值PVRIG表达在肿瘤样品和癌症类型中相似可能并不令人惊讶。我们观察到PVRIG表达与PD-1和TIGIT表达相关，表明这3种抑制性受体的相互作用在调节抗肿瘤反应中是重要的。在本报告中，我们观察到当CD8 T细胞肿瘤细胞共培养物中PVRIG抗体与TIGIT抗体组合时T细胞功能的协同增加，优于PD-1与PVRIG或TIGIT抑制剂的组合。这些数据以及先前的研究证明了PVRIG和TIGIT在调节DC-T细胞相互作用中的作用，表明该途径可能参与调节T细胞-APC和T细胞-肿瘤细胞相互作用，并提供靶向PVRIG可以增加抗肿瘤免疫反应的多种机制。

由于PD-L1的表达与PD-1抑制剂的临床反应相关，我们还通过FACS和IHC分析了肿瘤中PVRL2的表达，以评定某些癌症类型是否具有更高的表达。评定解离的肿瘤细胞，我们观察到当与其它肿瘤类型相比时，来自子宫内膜、头颈部、肾、肺和卵巢样本的巨噬细胞上的平均PVRL2表达更高。与其它癌症相比，CD45

在此观察到PVRL2表达可以通过炎症介质在体外在抗原产生细胞上调节，而癌细胞上的PVRL2表达没有改变。这些数据表明PVRL2在抗原呈递细胞上的表达可以通过炎症调节并且可以是发炎的肿瘤的指示物。实际上，我们确实观察到所有PD-L1+肿瘤也在肿瘤细胞和免疫区室中表达PVRL2。PVRL2 在骨髓细胞上的表达可以帮助预测在与PD-1或TIGIT的组合设置中对PVRIG 抑制剂的反应，以进一步增强抗肿瘤效果。有趣的是，一部分PD-L1阴性肿瘤也表达PVRL2，主要是在肿瘤细胞上，而不是在免疫细胞上。据报道，PVR和 PVRL2在上皮细胞上的表达在肿瘤发生中以及对应激和DNA损伤的反应中被诱导。这些数据与体外发现一致，即PVRL2在肿瘤细胞上的表达调节不依赖于 IFN-g。由于PD-L1在响应IFN-g的适应性抗性设置中被诱导并且与炎症反应相关，PVRL2在不存在PD-L1的情况下的表达表明PVRL2表达比PD-L1更普遍，并且PVRL2在非发炎的肿瘤中表达。基于以上所述，PVR和PVRL2的存在可能有助于抑制独立于PD-L1的免疫反应，并且PVRIG和TIGIT的抑制剂对于作为PD-L1阴性或无反应者/PD-1抑制剂的进展者的患者尤其重要。

总之，本报告提供了PVRIG生物学的几个新见解，包括表征该轴在人类癌症中的表达，证明PVRIG/TIGIT在调节CD8-肿瘤细胞相互作用中的突出作用，并显示PVRIG拮抗作用与PD-1抑制或TIGIT缺乏组合导致肿瘤生长的协同减少。这些数据扩展了我们目前对PVRIG生物学的理解，并为 CHA.7.518.1.H4(S241P)(一种高亲和力抗PVRIG抗体)在癌症患者中的临床测试提供了理论基础。

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S.实施例19：肿瘤细胞杀伤分析

通过与人CMV特异性CD8

结果

图99A和B分别显示抗TIGIT抗体和CHA.7.518.1.H4(S241P)处理对 Mel624和Panc05.04细胞杀伤的效果。当单独添加到共培养物中时，与同种型对照抗体相比，抗TIGIT抗体和CHA.7.518.1.H4(S241P)均诱导肿瘤细胞系的显著T细胞杀伤。对于抗TIGIT抗体，在测试的3个不同CMV反应性供体中， Mel624细胞的特异性杀伤百分比范围为19-41％，Panc05.04细胞的特异性杀伤百分比范围为3-44％。对于CHA.7.518.1.H4(S241P)，Mel624细胞的特异性杀伤百分比范围为16-20％，Panc05.04细胞的特异性杀伤百分比范围为0.21-29％。在一些情况下，在抗TIGIT抗体和CHA.7.518.1.H4(S241P)的组合治疗中观察到对肿瘤细胞杀伤的累加作用。

为了确定抗TIGIT抗体和CHA.7.518.1.H4(S241P)对肿瘤细胞杀伤的作用是否是剂量依赖性的，每种抗体用10点、2倍稀释系列进行分析，抗TIGIT抗体以0.5μg/ml开始，而CHA.7.518.1.H4(S241P)以10μg/ml开始(图100)。当抗 TIGIT抗体BM26或CPA.9.086与CHA.7.518.1.H4(S241P)组合时，Mel624杀伤以剂量依赖性方式降低。相比BM26和CHA.7.518.1.H4(S241P)组合的EC

T.实施例20：K

使用KinExA 3200仪器(Sapidyne Instruments,Boise,ID,USA)在22℃下进行KinExA平衡实验。重组的带His标签的人TIGIT获自Sino Biologicals(中国北京)并重构于1×PBS中。在脱气的PBST缓冲液(含0.05％tween 20的PBS) 和100μg/mL过滤的BSA和0.02％叠氮化钠中制备用于KinExA分析的所有抗原和抗体样品。使用的二级检测抗体是Alexa Flour 647标记的山羊抗人IgG(H +L)(Jackson ImmunoResearch Laboratories)，其在上述PBST缓冲液(含有BSA 和叠氮化物)中由1×PBS中的0.5mg/mL储备液(pH 7.4)稀释400至700倍。对于每个KinExA实验，将约20μg人TIGIT稀释到1mL 50mM碳酸钠(pH 9.2)中，将其直接加入50mg二氢唑酮珠(Ultralink Support,Thermo Scientific, Rockford,IL,USA)中并在4℃下摇动过夜。摇动后，用含有10mg/mL BSA的 1M Tris缓冲液(pH8.5)冲洗珠粒一次，并在室温下在相同缓冲液中摇动一小时。将偶联的珠粒加入KinExA仪器中的珠粒储库中，并用含有0.02％叠氮化钠的1×HBS-N(0.01M Hepes，0.15M NaCl，GEHealthcare)稀释至约30mL，含有0.02％叠氮化钠的1×HBS-N也是KinExA仪器的运行缓冲液。制备后立即使用所有抗原偶联的珠粒。

对于CPA.9.086的K

结果

CPA.9.083和CPA.9.086都以飞摩尔结合亲和力与人TIGIT结合，而 CHA.9.547.13和BM26以皮摩尔亲和力结合。因此，CPA.9.083和CPA.9.086 以所测试的四种不同抗体的最高亲和力与人TIGIT结合。

表1：由KinExA测定的抗人TIGIT hIgG4抗体的K

U.实施例21：靶向免疫检查点的新型治疗抗体CPA.9.086的开发和功能表征

背景：TIGIT是一种在淋巴细胞上高表达的共抑制受体，包括效应和调节 CD4+ T细胞(Treg)、效应CD8+ T细胞和NK细胞，可渗入不同类型的肿瘤。 TIGIT与其报道的配体脊髓灰质炎病毒受体(PVR)和PVR样蛋白(PVRL2 和PVRL3)的结合直接抑制淋巴细胞活化。PVR也在肿瘤中广泛表达，表明 TIGIT-PVR信号轴可能是癌症的主要免疫逃逸机制。我们在此报告靶向TIGIT 的治疗抗体CPA.9.086的生物物理和功能表征。我们还证明了TIGIT的共同阻断和新的检查点抑制剂PVRIG增强T细胞反应。

材料和方法：进行人噬菌体展示和小鼠杂交瘤抗体发现活动以产生治疗性抗TIGIT抗体。评估所得抗体以高亲和力结合重组和细胞表面表达的人TIGIT 的能力。还检查了抗体与食蟹猕猴和小鼠TIGIT的交叉反应性。以高亲和力与人TIGIT结合并与食蟹猴TIGIT交叉反应的抗体子集进一步表征其阻断TIGIT 和PVR之间相互作用的能力。筛选阻断抗体在体外单独或与抗PVRIG抗体 CHA.7.518.1.H4(S241P)组合增强抗原特异性T细胞活化的能力。

结果：鉴定出以高飞摩尔亲和力与人TIGIT结合的先导抗体CPA.9.086。该抗体以比测试的基准抗体更高的亲和力与人CD8+ T细胞内源性表达的 TIGIT结合，并且还与食蟹猴和小鼠TIGIT交叉反应。当测试体外活性时， CPA.9.086通过CMV特异性CD8+ T细胞增强细胞因子分泌和肿瘤细胞杀伤，其具有相较于测试的基准抗体优异或相当的效力。CPA.9.086与抗PD1抗体或 CHA.7.518.1.H4(S241P)的组合导致增强的CMV特异性CD8+ T细胞活性。此外，我们证明与外周血相比，TIGIT主要在来自实体瘤的Treg和效应CD8+ T 细胞上表达，表明这些群体可能优先被CPA.9.086靶向。

结论：描述了目前处于临床前开发的极高亲和力的拮抗性TIGIT抗体 CPA.9.086的开发。我们假设CPA.9.086的飞摩尔亲和力可使得患者的给药降低和频率降低。CPA.9.086可单独或与其它检查点抗体组合增强人T细胞活化。因此，该数据证明了靶向TIGIT、PD1和PVRIG用于治疗癌症的效用。

本发明包括如下实施方案：

1.一种组合物，其包含结合人TIGIT的第一抗体和结合人PVRIG的第二抗体，所述第一抗体包含有包含SEQ ID NO:160的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:165的轻链可变结构域。

2.根据实施方案1所述的组合物，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:15的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:20的轻链可变结构域。

3.根据实施方案1所述的组合物，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:19并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:24。

4.根据实施方案1所述的组合物，其中所述第二抗体包含：

i)来自SEQ ID NO:5的vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3，和

ii)来自SEQ ID NO:10的vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。

5.根据实施方案1所述的组合物，其中所述第二抗体包含：

i)来自SEQ ID NO:15的vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3，和

ii)来自SEQ ID NO:20的vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。

6.一种组合物，其包含结合人TIGIT的抗体，其中所述抗体包含：

i)来自SEQ ID NO:160的vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3，和

ii)来自SEQ ID NO:165的vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。

7.根据实施方案6所述的组合物，其中所述抗体包含来自人IgG1、IgG2 或IgG4或其变体的VH-CH1-铰链-CH2-CH3区。

8.根据实施方案6所述的组合物，其中所述抗体包含VC区，其中所述 VC是κ或λ。

9.根据实施方案6所述的组合物，其还包含结合人检查点受体蛋白的第二抗体。

10.根据实施方案9所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PD-1。

11.根据实施方案9所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PVRIG。

12.根据实施方案11所述的组合物，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:5的重链可变结构域和包含 SEQ ID NO:10的轻链可变结构域。

13.根据实施方案11所述的组合物，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:15的重链可变结构域和包含 SEQ ID NO:20的轻链可变结构域。

14.根据实施方案11所述的组合物，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:9并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:14。

15.根据实施方案11所述的组合物，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:19并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:24。

16.一种组合物，其包含结合人TIGIT的抗体，所述抗体包含：

·具有SEQ ID NO:150的重链可变结构域和具有SEQ ID NO:155的轻链可变结构域，或

·具有SEQ ID NO:560的重链可变结构域和具有SEQ ID NO:565的轻链可变结构域。

17.根据实施方案16所述的组合物，其中所述抗体包含：

·具有SEQ ID NO:154的重链和具有SEQ ID NO:159的轻链，或

·具有SEQ ID NO:564的重链和具有SEQ ID NO:569的轻链。

18.根据实施方案16所述的组合物，其还包含结合人检查点受体蛋白的第二抗体。

19.根据实施方案18所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PD-1。

20.根据实施方案18所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PVRIG。

21.根据实施方案20所述的组合物，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:5的重链可变结构域和包含 SEQ ID NO:10的轻链可变结构域。

22.根据实施方案21所述的组合物，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:9并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:14。

23.根据实施方案20所述的组合物，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:15的重链可变结构域和包含 SEQ ID NO:20的轻链可变结构域。

24.根据实施方案23所述的组合物，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:19并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:24。

25.一种抗TIGIT抗体，其包含：

·SEQ ID NO:161的vhCDR1，

·SEQ ID NO:162的vhCDR2，

·SEQ ID NO:163的vhCDR3，

·SEQ ID NO:166的vlCDR1，

·SEQ ID NO:167的vlCDR2，和

·SEQ ID NO:168的vlCDR3。

26.一种抗TIGIT抗体，其包含：

·SEQ ID NO:151的vhCDR1，

·SEQ ID NO:152的vhCDR2，

·SEQ ID NO:153的vhCDR3，

·SEQ ID NO:156的vlCDR1，

·SEQ ID NO:157的vlCDR2，和

·SEQ ID NO:158的vlCDR3。

27.一种抗TIGIT抗体，其包含：

·SEQ ID NO:561的vhCDR1，

·SEQ ID NO:562的vhCDR2，

·SEQ ID NO:563的vhCDR3，

·SEQ ID NO:566的vlCDR1，

·SEQ ID NO:567的vlCDR2，和

·SEQ ID NO:568的vlCDR3。

28.根据实施方案25、26或27所述的抗TIGIT抗体，其用于治疗癌症。

29.根据实施方案28的用于治疗癌症的抗TIGIT抗体，其中所述治疗包括抗TIGIT抗体和另一种检查点受体抗体的组合。

30.根据实施方案29的用于治疗癌症的抗TIGIT抗体，其中所述另一种检查点受体抗体选自抗PVRIG抗体、抗PD-1抗体、抗CTLA-4抗体、抗PD-L1 抗体、抗LAG-3抗体、抗TIM-3抗体、抗BTLA抗体、抗DNAM1抗体、抗 ICOS抗体、抗4-1bb抗体、抗GITR抗体、抗OX40抗体、抗CD96抗体、抗 B7-H4抗体、抗B7-H3抗体、抗VISTA抗体、抗CD27抗体、抗CD40抗体和抗CD137抗体。

31.根据实施方案29和30中至少一项的用于治疗癌症的抗TIGIT抗体，其中所述另一种检查点受体抗体是抗PVRIG抗体。

32.根据实施方案30和31中至少一项的用于治疗癌症的抗TIGIT抗体，其中所述抗PVRIG抗体包含：

·具有SEQ ID NO:5的VH结构域和具有SEQ ID NO:10的VL结构域，或

·具有SEQ ID NO:15的VH结构域和具有SEQ ID NO:20的VL结构域。

33.根据实施方案30至32中至少一项的用于治疗癌症的抗TIGIT抗体，其中所述抗PVRIG抗体包含：

·具有SEQ ID NO:9的重链和具有SEQ ID NO:14的轻链，或

·具有SEQ ID NO:19的重链和具有SEQ ID NO:24的轻链。

34.根据实施方案30的用于治疗癌症的抗TIGIT抗体，其中所述抗PD-1 抗体是派立珠单抗或纳武单抗。

35.根据实施方案30的用于治疗癌症的抗TIGIT抗体，其中所述抗CTLA-4 抗体是伊匹单抗或曲美单抗。

36.根据实施方案30的用于治疗癌症的抗TIGIT抗体，其中所述抗PD-L1 抗体是阿特珠单抗、阿维鲁单抗或度伐单抗。

37.根据实施方案30的用于治疗癌症的抗TIGIT抗体，其中所述抗LAG-3 抗体是BMS-986016、GSK2831781、Merck克隆2202、Merck克隆11C9或Merck 克隆4A10。

38.根据实施方案30的用于治疗癌症的抗TIGIT抗体，其中所述抗TIM-3 抗体是TSR-022。

39.根据实施方案28至38中至少一项的用于治疗癌症的抗TIGIT抗体，其中所述抗TIGIT抗体和所述另一种检查点受体抗体相加起作用。

40.根据实施方案28至39中至少一项的用于治疗癌症的抗TIGIT抗体，其中所述抗TIGIT抗体和所述另一种检查点受体抗体协同起作用。

41.一种抗TIGIT抗体，其与一种抗体竞争与TIGIT分子的特异性结合，所述抗体包含：

SEQ ID NO:160的重链可变结构域和SEQ ID NO:165的轻链可变结构域，

SEQ ID NO:150的重链可变结构域和SEQ ID NO:155的轻链可变结构域，或

SEQ ID NO:560的重链可变结构域和SEQ ID NO:565的轻链可变结构域，

其中所述抗TIGIT抗体以1pM或更小的K

42.抗原结合结构域在制备试剂中的用途，所述试剂用于活化癌症患者的T 细胞和/或NK细胞的方法，所述方法包括将结合人TIGIT的抗原结合结构域施用于所述患者，其中所述抗原结合结构域包含：

a)包含SEQ ID NO:160的重链可变结构域；和

b)包含SEQ ID NO:165的轻链可变结构域。

43.根据实施方案42所述的用途，其中所述抗原结合结构域是抗体，并且其中所述抗体包含：

a)包含VH-CH1-铰链-CH2-CH3的重链，其中所述VH包含SEQ ID NO: 160；和

b)包含VL-VC的轻链，其中所述VL包含SEQ ID NO:165并且VC是κ或λ。

44.根据实施方案43所述的用途，其中所述VH-CH1-铰链-CH2-CH3的序列选自人IgG1、IgG2和IgG4及其变体。

45.根据实施方案43所述的用途，其中所述重链具有SEQ ID NO:164和所述轻链具有SEQ ID NO:169。

46.根据实施方案43所述的用途，所述方法还包括施用结合人检查点受体蛋白的第二抗体。

47.根据实施方案46所述的用途，其中所述第二抗体结合人PD-1。

48.根据实施方案46所述的用途，其中所述第二抗体结合人PVRIG细胞外结构域(ECD)(SEQ ID NO:80)。

49.根据实施方案48所述的用途，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:5的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:10的轻链可变结构域。

50.根据实施方案49所述的用途，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:9并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:14。

51.根据实施方案48所述的用途，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:15的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:20的轻链可变结构域。

52.根据实施方案49所述的用途，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:19并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:24。

53.根据实施方案42所述的用途，其中所述T细胞是细胞毒性T细胞 (CTL)。

54.根据实施方案42所述的用途，其中所述T细胞选自CD4

55.根据实施方案42所述的用途，其中所述活化被测量为干扰素γ产生的增加和/或细胞因子分泌的增加。

56.抗原结合结构域在制备试剂中的用途，所述试剂用于活化癌症患者的T 细胞和/或NK细胞的方法，所述方法包括将结合人TIGIT的抗原结合结构域施用于所述患者，其中所述抗原结合结构域包含：

a)包含SEQ ID NO:150的重链可变结构域；和

b)包含SEQ ID NO:155的轻链可变结构域。

57.根据实施方案56所述的用途，其中所述抗原结合结构域是抗体，并且其中所述抗体包含：

a)包含VH-CH1-铰链-CH2-CH3的重链，其中所述VH包含SEQ ID NO: 150；和

b)包含VL-VC的轻链，其中所述VL包含SEQ ID NO:155并且VC是κ或λ。

58.根据实施方案57所述的用途，其中所述VH-CH1-铰链-CH2-CH3的序列选自人IgG1、IgG2和IgG4及其变体。

59.根据实施方案57所述的用途，其中所述重链具有SEQ ID NO:154和所述轻链具有SEQ ID NO:159。

60.根据实施方案56所述的用途，所述方法还包括施用结合人检查点受体蛋白的第二抗体。

61.根据实施方案60所述的用途，其中所述第二抗体结合人PD-1。

62.根据实施方案60所述的用途，其中所述第二抗体结合人PVRIG细胞外结构域(ECD)(SEQ ID NO:80)。

63.根据实施方案62所述的用途，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:5的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:10的轻链可变结构域。

64.根据实施方案63所述的用途，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:9并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:14。

65.根据实施方案62所述的用途，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:15的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:20的轻链可变结构域。

66.根据实施方案63所述的用途，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:19并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:24。

67.抗原结合结构域在制备试剂中的用途，所述试剂用于活化癌症患者的T 细胞和/或NK细胞的方法，所述方法包括将结合人TIGIT的抗原结合结构域施用于所述患者，其中所述抗原结合结构域包含：

a)包含SEQ ID NO:560的重链可变结构域；和

b)包含SEQ ID NO:565的轻链可变结构域。

68.根据实施方案67所述的用途，其中所述抗原结合结构域是抗体，并且其中所述抗体包含：

a)包含VH-CH1-铰链-CH2-CH3的重链，其中所述VH包含SEQ ID NO: 560；和

b)包含VL-VC的轻链，其中所述VL包含SEQ ID NO:565并且VC是κ或λ。

69.根据实施方案68所述的用途，其中所述VH-CH1-铰链-CH2-CH3的序列选自人IgG1、IgG2和IgG4及其变体。

70.根据实施方案68所述的用途，其中所述重链具有SEQ ID NO:564和所述轻链具有SEQ ID NO:569。

71.根据实施方案67所述的用途，所述方法还包括施用结合人检查点受体蛋白的第二抗体。

72.根据实施方案71所述的用途，其中所述第二抗体结合人PD-1。

73.根据实施方案71所述的用途，其中所述第二抗体结合人PVRIG细胞外结构域(ECD)(SEQ ID NO:80)。

74.根据实施方案73所述的用途，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:5的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:10的轻链可变结构域。

75.根据实施方案74所述的用途，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:9并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:14。

76.根据实施方案73所述的用途，其中所述第二抗体包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含有包含SEQ ID NO:15的重链可变结构域和包含SEQ ID NO:20的轻链可变结构域。

77.根据实施方案76所述的用途，其中所述第二抗体的重链具有SEQ ID NO:19并且所述第二抗体的轻链具有SEQ ID NO:24。

78.一种组合物，其包含抗PVRIG抗体，其中所述抗体包含：

i)包含SEQ ID NO:9的重链，和

ii)包含SEQ ID NO:14的轻链。

79.一种组合物，其中包含抗PVRIG抗体，其中所述抗体包含：

i)包含SEQ ID NO:19的重链，和

ii)包含SEQ ID NO:24的轻链。

80.一种组合物，其包含结合人TIGIT的抗体，其中所述抗体包含：

i)来自SEQ ID NO:161的vhCDR1，其包含0-2个氨基酸取代；

ii)来自SEQ ID NO:162的vhCDR2，其包含0-2个氨基酸取代；

iii)来自SEQ ID NO:163的vhCDR3，其包含0-2个氨基酸取代；

iv)来自SEQ ID NO:166的vlCDR1，其包含0-2个氨基酸取代；

v)来自SEQ ID NO:167的vlCDR2，其包含0-2个氨基酸取代；和

vi)来自SEQ ID NO:168的vlCDR3，其包含0-2个氨基酸取代。

81.一种组合物，其包含结合人TIGIT的抗体，其中所述抗体包含：

i)包含展现对SEQ ID NO:160至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，和

ii)包含展现对SEQ ID NO:165至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域。

82.根据实施方案80或实施方案81所述的组合物，所述组合物还包含结合人检查点受体蛋白的第二抗体。

83.根据实施方案82所述的组合物，其中所述人检查点受体蛋白选自人 PD-1、人PVRIG、人PD-L1、人LAG-3、人TIM-3、人CTLA-4、人DNAM1、人BTLA、人ICOS、人4-1bb、人GITR、人OX40、人CD96、人B7-H4、人 B7-H3、人VISTA、人CD27、人CD40和人CD137。

84.根据实施方案82所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PVRIG。

85.根据实施方案84所述的组合物，其中所述第二抗体包含：

i)来自SEQ ID NO:6的vhCDR1，其包含0-2个氨基酸取代；

ii)来自SEQ ID NO:7的vhCDR2，其包含0-2个氨基酸取代；

iii)来自SEQ ID NO:8的vhCDR3，其包含0-2个氨基酸取代；

iv)来自SEQ ID NO:11的vlCDR1，其包含0-2个氨基酸取代；

v)来自SEQ ID NO:12的vlCDR2，其包含0-2个氨基酸取代；和

vi)来自SEQ ID NO:13的vlCDR3，其包含0-2个氨基酸取代。

86.根据实施方案84所述的组合物，其中所述第二抗体包含：

i)包含展现对SEQ ID NO:5至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，和

ii)包含展现对SEQ ID NO:10至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域。

87.根据实施方案84所述的组合物，其中所述第二抗体包含：

i)来自SEQ ID NO:16的vhCDR1，其包含0-2个氨基酸取代；

ii)来自SEQ ID NO:17的vhCDR2，其包含0-2个氨基酸取代；

iii)来自SEQ ID NO:18的vhCDR3，其包含0-2个氨基酸取代；

iv)来自SEQ ID NO:21的vlCDR1，其包含0-2个氨基酸取代；

v)来自SEQ ID NO:22的vlCDR2，其包含0-2个氨基酸取代；和

vi)来自SEQ ID NO:23的vlCDR3，其包含0-2个氨基酸取代。

88.根据实施方案84所述的组合物，其中所述第二抗体包含：

i)包含展现对SEQ ID NO:15至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，和

ii)包含展现对SEQ ID NO:20至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域。

89.一种组合物，其包含结合人TIGIT的抗体，其中所述抗体包含：

i)来自SEQ ID NO:151的vhCDR1，其包含0-2个氨基酸取代；

ii)来自SEQ ID NO:152的vhCDR2，其包含0-2个氨基酸取代；

iii)来自SEQ ID NO:153的vhCDR3，其包含0-2个氨基酸取代；

iv)来自SEQ ID NO:156的vlCDR1，其包含0-2个氨基酸取代；

v)来自SEQ ID NO:157的vlCDR2，其包含0-2个氨基酸取代；和

vi)来自SEQ ID NO:158的vlCDR3，其包含0-2个氨基酸取代。

90.一种组合物，其包含结合人TIGIT的抗体，其中所述抗体包含：

i)包含展现对SEQ ID NO:150至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，和

ii)包含展现对SEQ ID NO:155至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域。

91.根据实施方案89或实施方案90所述的组合物，所述组合物还包含结合人检查点受体蛋白的第二抗体。

92.根据实施方案91所述的组合物，其中所述人检查点受体蛋白选自人 PD-1、人PVRIG、人PD-L1、人LAG-3、人TIM-3、人CTLA-4、人DNAM1、人BTLA、人ICOS、人4-1bb、人GITR、人OX40、人CD96、人B7-H4、人B7-H3、人VISTA、人CD27、人CD40和人CD137。

93.根据实施方案92所述的组合物，其中所述第二抗体结合人PVRIG。

94.根据实施方案93所述的组合物，其中所述第二抗体包含：

i)来自SEQ ID NO:6的vhCDR1，其包含0-2个氨基酸取代；

ii)来自SEQ ID NO:7的vhCDR2，其包含0-2个氨基酸取代；

iii)来自SEQ ID NO:8的vhCDR3，其包含0-2个氨基酸取代；

iv)来自SEQ ID NO:11的vlCDR1，其包含0-2个氨基酸取代；

v)来自SEQ ID NO:12的vlCDR2，其包含0-2个氨基酸取代；和

vi)来自SEQ ID NO:13的vlCDR3，其包含0-2个氨基酸取代。

95.根据实施方案93所述的组合物，其中所述第二抗体包含：

i)包含展现对SEQ ID NO:5至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，和

ii)包含展现对SEQ ID NO:10至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域。

96.根据实施方案93所述的组合物，其中所述第二抗体包含：

i)包含来自SEQ ID NO:16的0-2个氨基酸取代的vhCDR1；

ii)包含来自SEQ ID NO:17的0-2个氨基酸取代的vhCDR2；

iii)包含来自SEQ ID NO:18的0-2个氨基酸取代的vhCDR3；

iv)包含来自SEQ ID NO:21的0-2个氨基酸取代的vlCDR1；

v)包含来自SEQ ID NO:22的0-2个氨基酸取代的vlCDR2；和

vi)包含来自SEQ ID NO:23的0-2个氨基酸取代的vlCDR3。

97.根据实施方案93所述的组合物，其中所述第二抗体包含：

i)包含展现对SEQ ID NO:15至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，和

ii)包含展现对SEQ ID NO:20至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域。

98.抗体在制备试剂中的用途，所述试剂用于活化癌症患者的T细胞和/或 NK细胞的方法，所述方法包括将根据实施方案80或实施方案81所述的抗体施用于所述患者。

99.根据实施方案98所述的用途，所述方法还包括将根据实施方案94或实施方案95所述的第二抗体施用于所述患者。

100.根据实施方案98所述的用途，所述方法还包括将根据实施方案96或实施方案97所述的第二抗体施用于所述患者。

101.抗体在制备试剂中的用途，所述试剂用于化癌症患者的T细胞和/或 NK细胞的方法，所述方法包括将根据实施方案89或实施方案90所述的抗体施用于所述患者。

102.根据实施方案101所述的用途，所述方法还包括将根据实施方案94 或实施方案95所述的第二抗体施用于所述患者。

103.根据实施方案101所述的用途，所述方法还包括将根据实施方案96 或实施方案97所述的第二抗体施用于所述患者。

104.根据实施方案30所述的抗体或根据实施方案83或92所述的组合物，其中所述抗PD-1抗体选自派立珠单抗和纳武单抗。

105.根据实施方案30所述的抗体或根据实施方案83或92所述的组合物，其中所述抗CTLA-4抗体选自伊匹单抗和曲美单抗。

106.根据实施方案30所述的抗体或根据实施方案83或92所述的组合物，其中所述抗PD-L1抗体选自阿特珠单抗、阿维鲁单抗或度伐单抗。

107.一种双特异性抗体，其结合第一靶标和第二靶标，其中所述第一靶标是人TIGIT，并且所述抗体包含：

i)包含SEQ ID NO:161的vhCDR1；

ii)包含SEQ ID NO:162的vhCDR2；

iii)包含SEQ ID NO:163的vhCDR3；

iv)包含SEQ ID NO:166的vlCDR1；

v)包含SEQ ID NO:167的vlCDR2；和

vi)包含SEQ ID NO:168的vlCDR3。

108.一种双特异性抗体，其结合第一靶标和第二靶标，其中所述第一靶标是人TIGIT，并且所述抗体包含：

i)包含SEQ ID NO:151的vhCDR1；

ii)包含SEQ ID NO:152的vhCDR2；

iii)包含SEQ ID NO:153的vhCDR3；

iv)包含SEQ ID NO:156的vlCDR1；

v)包含SEQ ID NO:157的vlCDR2；和

vi)包含SEQ ID NO:158的vlCDR3。

109.抗PD-L1抗体和抗PVRIG抗体在制备试剂中的用途，所述试剂用于活化癌症患者的T细胞和/或NK细胞的方法，所述方法包括将抗PD-L1抗体和抗PVRIG抗体施用于所述患者，其中所述抗PVRIG抗体包含：

i)包含SEQ ID NO:9的重链，和

ii)包含SEQ ID NO:14的轻链。

110.根据实施方案109所述的用途，其中所述T细胞是细胞毒性T细胞 (CTL)。

111.根据实施方案109所述的用途，其中所述T细胞选自CD4

112.根据实施方案109所述的用途，其中所述活化被测量为干扰素γ产生的增加和/或细胞因子分泌的增加。

113.根据实施方案109所述的用途，其中所述抗PD-L1抗体选自阿特珠单抗、阿维鲁单抗和度伐单抗。

114.抗PD-L1抗体和抗PVRIG抗体在制备试剂中的用途，所述试剂用于活化癌症患者的T细胞和/或NK细胞的方法，所述方法包括将抗PD-L1抗体和抗PVRIG抗体施用于所述患者，其中所述抗PVRIG抗体包含：

i)包含SEQ ID NO:19的重链，和

ii)包含SEQ ID NO:24的轻链。

115.根据实施方案114所述的用途，其中所述T细胞是细胞毒性T细胞 (CTL)。

116.根据实施方案114所述的用途，其中所述T细胞选自CD4

117.根据实施方案114所述的用途，其中所述活化被测量为干扰素γ产生的增加和/或细胞因子分泌的增加。

118.根据实施方案114所述的用途，其中所述抗PD-L1抗体选自阿特珠单抗、阿维鲁单抗和度伐单抗。

119.抗PD-1抗体和抗PVRIG抗体在制备试剂中的用途，所述试剂用于活化癌症患者的T细胞和/或NK细胞的方法，所述方法包括将抗PD-1抗体和抗 PVRIG抗体施用于所述患者，其中所述抗PVRIG抗体包含：

i)包含SEQ ID NO:9的重链，和

ii)包含SEQ ID NO:14的轻链。

120.根据实施方案119所述的用途，其中所述T细胞是细胞毒性T细胞 (CTL)。

121.根据实施方案119所述的用途，其中所述T细胞选自CD4

122.根据实施方案119所述的用途，其中所述活化被测量为干扰素γ产生的增加和/或细胞因子分泌的增加。

123.根据实施方案119所述的用途，其中所述抗PD-1抗体选自派立珠单抗和纳武单抗。

124.抗PD-1抗体和抗PVRIG抗体在制备试剂中的用途，所述试剂用于活化癌症患者的T细胞和/或NK细胞的方法，所述方法包括将抗PD-1抗体和抗 PVRIG抗体施用于所述患者，其中所述抗PVRIG抗体包含：

i)包含SEQ ID NO:19的重链，和

ii)包含SEQ ID NO:24的轻链。

125.根据实施方案124所述的用途，其中所述T细胞是细胞毒性T细胞 (CTL)。

126.根据实施方案124所述的用途，其中所述T细胞选自CD4

127.根据实施方案124所述的用途，其中所述活化被测量为干扰素γ产生的增加和/或细胞因子分泌的增加。

128.根据实施方案124所述的用途，其中所述抗PD-1抗体选自派立珠单抗和纳武单抗。

序列表

<110> 康姆普根有限公司

<120> 抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体及其组合

<130> 114386-5008-WO

<140> 随附

<141> 2017-08-17

<150> US 62/477,974

<151> 2017-03-28

<150> US 62/513,775

<151> 2017-06-01

<150> US 62/417,217

<151> 2016-11-03

<150> US 62/376,335

<151> 2016-08-17

<150> US 62/513,771

<151> 2017-06-01

<150> US 62/376,334

<151> 2016-08-17

<150> US 62/376,334

<151> 2016-08-17

<150> US 62/376,334

<151> 2016-08-17

<150> US 62/513,916

<151> 2017-06-01

<150> US 62/538,561

<151> 2017-07-28

<160> 611

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 204

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人PVRIG序列从位置21开始

<400> 1

Met Gly His Arg Thr Leu Val Leu Pro Trp Val Leu Leu Thr Leu Cys

1 5 10 15

Val Thr Ala Gly Thr Pro Glu Val Trp Val Gln Val Arg Met Glu Ala

20 25 30

Thr Glu Leu Ser Ser Phe Thr Ile Arg Cys Gly Phe Leu Gly Ser Gly

35 40 45

Ser Ile Ser Leu Val Thr Val Ser Trp Gly Gly Pro Asn Gly Ala Gly

50 55 60

Gly Thr Thr Leu Ala Val Leu His Pro Glu Arg Gly Ile Arg Gln Trp

65 70 75 80

Ala Pro Ala Arg Gln Ala Arg Trp Glu Thr Gln Ser Ser Ile Ser Leu

85 90 95

Ile Leu Glu Gly Ser Gly Ala Ser Ser Pro Cys Ala Asn Thr Thr Phe

100 105 110

Cys Cys Lys Phe Ala Ser Phe Pro Glu Gly Ser Trp Glu Ala Cys Gly

115 120 125

Ser Leu Pro Pro Ser Ser Asp Pro Gly Leu Ser Ala Pro Pro Thr Pro

130 135 140

Ala Pro Ile Leu Arg Ala Asp Leu Ala Gly Ile Leu Gly Val Ser Gly

145 150 155 160

Val Leu Leu Phe Gly Cys Val Tyr Leu Leu His Leu Leu Arg Arg His

165 170 175

Lys His Arg Pro Ala Pro Arg Leu Gln Pro Ser Arg Thr Ser Pro Gln

180 185 190

Ala Pro Arg Ala Arg Ala Trp Ala Pro Ser Gln Ala

195 200

<210> 2

<211> 224

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人PVRIG序列从位置1开始

<400> 2

Met Arg Thr Glu Ala Gln Val Pro Ala Leu Gln Pro Pro Glu Pro Gly

1 5 10 15

Leu Glu Gly Ala Met Gly His Arg Thr Leu Val Leu Pro Trp Val Leu

20 25 30

Leu Thr Leu Cys Val Thr Ala Gly Thr Pro Glu Val Trp Val Gln Val

35 40 45

Arg Met Glu Ala Thr Glu Leu Ser Ser Phe Thr Ile Arg Cys Gly Phe

50 55 60

Leu Gly Ser Gly Ser Ile Ser Leu Val Thr Val Ser Trp Gly Gly Pro

65 70 75 80

Asn Gly Ala Gly Gly Thr Thr Leu Ala Val Leu His Pro Glu Arg Gly

85 90 95

Ile Arg Gln Trp Ala Pro Ala Arg Gln Ala Arg Trp Glu Thr Gln Ser

100 105 110

Ser Ile Ser Leu Ile Leu Glu Gly Ser Gly Ala Ser Ser Pro Cys Ala

115 120 125

Asn Thr Thr Phe Cys Cys Lys Phe Ala Ser Phe Pro Glu Gly Ser Trp

130 135 140

Glu Ala Cys Gly Ser Leu Pro Pro Ser Ser Asp Pro Gly Leu Ser Ala

145 150 155 160

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Ile Leu Arg Ala Asp Leu Ala Gly Ile Leu

165 170 175

Gly Val Ser Gly Val Leu Leu Phe Gly Cys Val Tyr Leu Leu His Leu

180 185 190

Leu Arg Arg His Lys His Arg Pro Ala Pro Arg Leu Gln Pro Ser Arg

195 200 205

Thr Ser Pro Gln Ala Pro Arg Ala Arg Ala Trp Ala Pro Ser Gln Ala

210 215 220

<210> 3

<211> 479

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人PVLR2α同种型

<400> 3

Met Ala Arg Ala Ala Ala Leu Leu Pro Ser Arg Ser Pro Pro Thr Pro

1 5 10 15

Leu Leu Trp Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Glu Thr Gly Ala Gln

20 25 30

Asp Val Arg Val Gln Val Leu Pro Glu Val Arg Gly Gln Leu Gly Gly

35 40 45

Thr Val Glu Leu Pro Cys His Leu Leu Pro Pro Val Pro Gly Leu Tyr

50 55 60

Ile Ser Leu Val Thr Trp Gln Arg Pro Asp Ala Pro Ala Asn His Gln

65 70 75 80

Asn Val Ala Ala Phe His Pro Lys Met Gly Pro Ser Phe Pro Ser Pro

85 90 95

Lys Pro Gly Ser Glu Arg Leu Ser Phe Val Ser Ala Lys Gln Ser Thr

100 105 110

Gly Gln Asp Thr Glu Ala Glu Leu Gln Asp Ala Thr Leu Ala Leu His

115 120 125

Gly Leu Thr Val Glu Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Glu Phe Ala Thr

130 135 140

Phe Pro Lys Gly Ser Val Arg Gly Met Thr Trp Leu Arg Val Ile Ala

145 150 155 160

Lys Pro Lys Asn Gln Ala Glu Ala Gln Lys Val Thr Phe Ser Gln Asp

165 170 175

Pro Thr Thr Val Ala Leu Cys Ile Ser Lys Glu Gly Arg Pro Pro Ala

180 185 190

Arg Ile Ser Trp Leu Ser Ser Leu Asp Trp Glu Ala Lys Glu Thr Gln

195 200 205

Val Ser Gly Thr Leu Ala Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Arg Phe Thr

210 215 220

Leu Val Pro Ser Gly Arg Ala Asp Gly Val Thr Val Thr Cys Lys Val

225 230 235 240

Glu His Glu Ser Phe Glu Glu Pro Ala Leu Ile Pro Val Thr Leu Ser

245 250 255

Val Arg Tyr Pro Pro Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asp Asn Trp

260 265 270

Tyr Leu Gly Arg Thr Asp Ala Thr Leu Ser Cys Asp Val Arg Ser Asn

275 280 285

Pro Glu Pro Thr Gly Tyr Asp Trp Ser Thr Thr Ser Gly Thr Phe Pro

290 295 300

Thr Ser Ala Val Ala Gln Gly Ser Gln Leu Val Ile His Ala Val Asp

305 310 315 320

Ser Leu Phe Asn Thr Thr Phe Val Cys Thr Val Thr Asn Ala Val Gly

325 330 335

Met Gly Arg Ala Glu Gln Val Ile Phe Val Arg Glu Thr Pro Arg Ala

340 345 350

Ser Pro Arg Asp Val Gly Pro Leu Val Trp Gly Ala Val Gly Gly Thr

355 360 365

Leu Leu Val Leu Leu Leu Leu Ala Gly Gly Ser Leu Ala Phe Ile Leu

370 375 380

Leu Arg Val Arg Arg Arg Arg Lys Ser Pro Gly Gly Ala Gly Gly Gly

385 390 395 400

Ala Ser Gly Asp Gly Gly Phe Tyr Asp Pro Lys Ala Gln Val Leu Gly

405 410 415

Asn Gly Asp Pro Val Phe Trp Thr Pro Val Val Pro Gly Pro Met Glu

420 425 430

Pro Asp Gly Lys Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Lys Ala Glu

435 440 445

Lys Gly Leu Met Leu Pro Pro Pro Pro Ala Leu Glu Asp Asp Met Glu

450 455 460

Ser Gln Leu Asp Gly Ser Leu Ile Ser Arg Arg Ala Val Tyr Val

465 470 475

<210> 4

<211> 518

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人PVLR2δ同种型

<400> 4

Met Ala Arg Ala Ala Ala Leu Leu Pro Ser Arg Ser Pro Pro Thr Pro

1 5 10 15

Leu Leu Trp Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Glu Thr Gly Ala Gln

20 25 30

Asp Val Arg Val Gln Val Leu Pro Glu Val Arg Gly Gln Leu Gly Gly

35 40 45

Thr Val Glu Leu Pro Cys His Leu Leu Pro Pro Val Pro Gly Leu Tyr

50 55 60

Ile Ser Leu Val Thr Trp Gln Arg Pro Asp Ala Pro Ala Asn His Gln

65 70 75 80

Asn Val Ala Ala Phe His Pro Lys Met Gly Pro Ser Phe Pro Ser Pro

85 90 95

Lys Pro Gly Ser Glu Arg Leu Ser Phe Val Ser Ala Lys Gln Ser Thr

100 105 110

Gly Gln Asp Thr Glu Ala Glu Leu Gln Asp Ala Thr Leu Ala Leu His

115 120 125

Gly Leu Thr Val Glu Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys Glu Phe Ala Thr

130 135 140

Phe Pro Lys Gly Ser Val Arg Gly Met Thr Trp Leu Arg Val Ile Ala

145 150 155 160

Lys Pro Lys Asn Gln Ala Glu Ala Gln Lys Val Thr Phe Ser Gln Asp

165 170 175

Pro Thr Thr Val Ala Leu Cys Ile Ser Lys Glu Gly Arg Pro Pro Ala

180 185 190

Arg Ile Ser Trp Leu Ser Ser Leu Asp Trp Glu Ala Lys Glu Thr Gln

195 200 205

Val Ser Gly Thr Leu Ala Gly Thr Val Thr Val Thr Ser Arg Phe Thr

210 215 220

Leu Val Pro Ser Gly Arg Ala Asp Gly Val Thr Val Thr Cys Lys Val

225 230 235 240

Glu His Glu Ser Phe Glu Glu Pro Ala Leu Ile Pro Val Thr Leu Ser

245 250 255

Val Arg Tyr Pro Pro Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr Asp Asp Asn Trp

260 265 270

Tyr Leu Gly Arg Thr Asp Ala Thr Leu Ser Cys Asp Val Arg Ser Asn

275 280 285

Pro Glu Pro Thr Gly Tyr Asp Trp Ser Thr Thr Ser Gly Thr Phe Pro

290 295 300

Thr Ser Ala Val Ala Gln Gly Ser Gln Leu Val Ile His Ala Val Asp

305 310 315 320

Ser Leu Phe Asn Thr Thr Phe Val Cys Thr Val Thr Asn Ala Val Gly

325 330 335

Met Gly Arg Ala Glu Gln Val Ile Phe Val Arg Glu Thr Pro Asn Thr

340 345 350

Ala Gly Ala Gly Ala Thr Gly Gly Ile Ile Gly Gly Ile Ile Ala Ala

355 360 365

Ile Ile Ala Thr Ala Val Ala Ala Thr Gly Ile Leu Ile Cys Arg Gln

370 375 380

Gln Arg Lys Glu Gln Thr Leu Gln Gly Ala Glu Glu Asp Glu Asp Leu

385 390 395 400

Glu Gly Pro Pro Ser Tyr Lys Pro Pro Thr Pro Lys Ala Lys Leu Glu

405 410 415

Ala Gln Glu Met Pro Ser Gln Leu Phe Thr Leu Gly Ala Ser Glu His

420 425 430

Ser Pro Leu Lys Thr Pro Tyr Phe Asp Ala Gly Ala Ser Cys Thr Glu

435 440 445

Gln Glu Met Pro Arg Tyr His Glu Leu Pro Thr Leu Glu Glu Arg Ser

450 455 460

Gly Pro Leu His Pro Gly Ala Thr Ser Leu Gly Ser Pro Ile Pro Val

465 470 475 480

Pro Pro Gly Pro Pro Ala Val Glu Asp Val Ser Leu Asp Leu Glu Asp

485 490 495

Glu Glu Gly Glu Glu Glu Glu Glu Tyr Leu Asp Lys Ile Asn Pro Ile

500 505 510

Tyr Asp Ala Leu Ser Tyr

515

<210> 5

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变重链(vh)结构域

<400> 5

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Lys Thr Ala Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 6

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 6

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn

1 5

<210> 7

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 7

Ile Tyr Pro Tyr Ile Gly Gly Ser

1 5

<210> 8

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 8

Ala Arg Glu Asp Lys Thr Ala Arg Asn Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 9

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC

<400> 9

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Lys Thr Ala Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 10

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Thr Asn Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 11

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 11

Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

1 5

<210> 12

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 12

Glu Ala Thr

1

<210> 13

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 13

Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 14

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 14

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Thr Asn Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 15

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变重链(vh)结构域

<400> 15

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Leu Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Ile Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Thr His Asp Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 16

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 16

Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr Leu

1 5

<210> 17

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 17

Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Ile

1 5

<210> 18

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 18

Ala Arg Ser Glu Thr His Asp Thr Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 19

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC

<400> 19

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Leu Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Ile Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Thr His Asp Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 20

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 20

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Arg Ile Ala

20 25 30

Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ala Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 21

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 21

Gln Ser Val Arg Ile Ala

1 5

<210> 22

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 22

Leu Ala Ser

1

<210> 23

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 23

Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 24

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 24

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Arg Ile Ala

20 25 30

Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ala Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 25

<211> 96

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VH的人源化序列

<400> 25

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

<210> 26

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VH的人源化序列

<400> 26

Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10 15

<210> 27

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (33)..(33)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (105)..(105)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<400> 27

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Xaa Ile Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Ser Lys Ala Thr Leu Ser Ala Asp Asn Pro Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Lys Thr Ala Arg Xaa Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 28

<211> 98

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (33)..(33)

<223> Tyr、Gln、Ser或Ala

<400> 28

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Xaa Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 29

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (33)..(33)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (105)..(105)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<400> 29

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Xaa Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Lys Thr Ala Arg Xaa Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 30

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (33)..(33)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (105)..(105)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<400> 30

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Xaa Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Lys Thr Ala Arg Xaa Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 31

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (33)..(33)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (105)..(105)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<400> 31

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Xaa Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Lys Thr Ala Arg Xaa Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 32

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (33)..(33)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (105)..(105)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<400> 32

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Xaa Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Asn Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Lys Thr Ala Arg Xaa Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 33

<211> 96

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VL的人源化序列

<400> 33

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro

85 90 95

<210> 34

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VL的人源化序列

<400> 34

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 35

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VL的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (28)..(28)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (32)..(32)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (53)..(53)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (92)..(92)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<400> 35

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Ile Cys Arg Val Ser Glu Xaa Ile Tyr Ser Xaa

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Glu Ala Thr Xaa Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Xaa Gly Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 36

<211> 96

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VL的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (28)..(28)

<223> Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (32)..(32)

<223> Tyr、Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (53)..(53)

<223> Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (92)..(92)

<223> Tyr、Phe或His

<400> 36

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Xaa Ile Ser Ser Xaa

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Xaa Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Xaa Ser Thr Pro Pro

85 90 95

<210> 37

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VL的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (28)..(28)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (32)..(32)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (53)..(53)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (92)..(92)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<400> 37

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Glu Xaa Ile Tyr Ser Xaa

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Thr Xaa Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Xaa Gly Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 38

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VL的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (28)..(28)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (32)..(32)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (53)..(53)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (92)..(92)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<400> 38

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Glu Xaa Ile Tyr Ser Xaa

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Thr Xaa Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Xaa Gly Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 39

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.518抗体VL的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (28)..(28)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (32)..(32)

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<220>

<221> MOD_RES

<222> (53)..(53)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<220>

<221> MOD_RES

<222> (92)..(92)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<400> 39

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Glu Xaa Ile Tyr Ser Xaa

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Glu Ala Thr Xaa Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Xaa Gly Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 40

<211> 98

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VH的人源化序列

<400> 40

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 41

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VH的人源化序列

<400> 41

Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10 15

<210> 42

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (31)..(31)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (52)..(52)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (105)..(105)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<400> 42

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Xaa Tyr

20 25 30

Leu Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Xaa Pro Gly Ser Gly Gly Ile Tyr Tyr Asn Asp Lys Phe

50 55 60

Lys Val Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Thr His Asp Thr Xaa Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115

<210> 43

<211> 98

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (31)..(31)

<223> Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (52)..(52)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<400> 43

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Xaa Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Xaa Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 44

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (31)..(31)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (52)..(52)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (105)..(105)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<400> 44

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Xaa Tyr

20 25 30

Leu Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Xaa Pro Gly Ser Gly Gly Ile Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Thr His Asp Thr Xaa Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 45

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (31)..(31)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

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<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (105)..(105)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Xaa Tyr

20 25 30

Leu Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Xaa Pro Gly Ser Gly Gly Ile Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

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Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

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100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 46

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (31)..(31)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (52)..(52)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (105)..(105)

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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Xaa Tyr

20 25 30

Leu Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

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Gly Val Ile Xaa Pro Gly Ser Gly Gly Ile Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

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65 70 75 80

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85 90 95

Ala Arg Ser Glu Thr His Asp Thr Xaa Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 47

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (31)..(31)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (52)..(52)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (105)..(105)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<400> 47

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Xaa Tyr

20 25 30

Leu Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Xaa Pro Gly Ser Gly Gly Ile Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Thr His Asp Thr Xaa Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 48

<211> 96

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VL的人源化序列

<400> 48

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro

85 90 95

<210> 49

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VL的人源化序列

<400> 49

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 50

<211> 96

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VL的人源化序列

<400> 50

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp

20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro

85 90 95

<210> 51

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VL的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (92)..(92)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<220>

<221> MOD_RES

<222> (93)..(93)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<400> 51

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Ile Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Arg Ile Ala

20 25 30

Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln His Xaa Xaa Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 52

<211> 96

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VL的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (92)..(92)

<223> Tyr、Phe或His

<220>

<221> MOD_RES

<222> (93)..(93)

<223> Gln、Ser、Ala或Asp

<400> 52

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Xaa Xaa Thr Pro Pro

85 90 95

<210> 53

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VL的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (92)..(92)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<220>

<221> MOD_RES

<222> (93)..(93)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<400> 53

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Arg Ile Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Xaa Xaa Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 54

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_1抗体VL的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (92)..(92)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<220>

<221> MOD_RES

<222> (93)..(93)

<223> Asn、Gln、Ser、Ala或Asp

<400> 54

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Arg Ile Ala

20 25 30

Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ala Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Xaa Xaa Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 55

<211> 98

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_2抗体VH的人源化序列

<400> 55

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 56

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_2抗体VH的人源化序列

<400> 56

Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10 15

<210> 57

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_2抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (31)..(31)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (33)..(33)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<220>

<221> MOD_RES

<222> (59)..(59)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<400> 57

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Thr Xaa Tyr

20 25 30

Xaa Ile Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Xaa Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Pro Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Phe Ala Phe Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 58

<211> 98

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_2抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (31)..(31)

<223> Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (33)..(33)

<223> Tyr、Phe或His

<220>

<221> MOD_RES

<222> (59)..(59)

<223> Gln、Ser或Ala

<400> 58

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Xaa Tyr

20 25 30

Xaa Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Xaa Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 59

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_2抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (31)..(31)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (33)..(33)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<220>

<221> MOD_RES

<222> (59)..(59)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<400> 59

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Xaa Tyr

20 25 30

Xaa Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Xaa Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Pro Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Phe Ala Phe Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 60

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_2抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (31)..(31)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (33)..(33)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<220>

<221> MOD_RES

<222> (59)..(59)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<400> 60

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Xaa Tyr

20 25 30

Xaa Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Xaa Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Pro Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Phe Ala Phe Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 61

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.7.538_2抗体VH的人源化序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (31)..(31)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (33)..(33)

<223> Trp、Tyr、Phe或His

<220>

<221> MOD_RES

<222> (59)..(59)

<223> Asn、Gln、Ser或Ala

<400> 61

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Xaa Tyr

20 25 30

Xaa Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Xaa Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Pro Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Phe Ala Phe Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 62

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.518 VH h518HH1

<400> 62

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Lys Thr Ala Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 63

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.518 VH h518HH2

<400> 63

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Lys Thr Ala Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 64

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.518 VH h518HH3

<400> 64

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Lys Thr Ala Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 65

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.518 VH h518HH4

<400> 65

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Asn Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Lys Thr Ala Arg Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 66

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.518 VL h518HL1

<400> 66

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Thr Asn Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 67

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.518 VL h518HL2

<400> 67

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Thr Asn Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 68

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.518 VL h518HL3

<400> 68

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Glu Ala Thr Asn Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 69

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.538_1 VH h5381HH1

<400> 69

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Leu Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Ile Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Thr His Asp Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 70

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.538_1 VH h5381HH2

<400> 70

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Leu Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Ile Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Thr His Asp Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 71

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.538_1 VH h5381HH3

<400> 71

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Leu Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Ile Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Thr His Asp Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 72

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.538_1 VH h5381HH4

<400> 72

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Leu Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Ile Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Glu Thr His Asp Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 73

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.538_1/538_2 VL h538HL1

<400> 73

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Arg Ile Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 74

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.538_1/538_2 VL h538HL2

<400> 74

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Arg Ile Ala

20 25 30

Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ala Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 75

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.538_2 VH h5382HH1

<400> 75

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Pro Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Phe Ala Phe Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 76

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.538_2 VH h5382HH2

<400> 76

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Pro Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Phe Ala Phe Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 77

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.538_2 VH h5382HH3

<400> 77

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Pro Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Phe Ala Phe Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 78

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.538_1/538_2 VL h538HL1

<400> 78

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Arg Ile Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 79

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化CHA.7.538_1/538_2 VL h538HL2

<400> 79

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Arg Ile Ala

20 25 30

Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ala Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 80

<211> 131

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PVRIG直系同源物的序列比对

<400> 80

Thr Pro Glu Val Trp Val Gln Val Arg Met Glu Ala Thr Glu Leu Ser

1 5 10 15

Ser Phe Thr Ile Arg Cys Gly Phe Leu Gly Ser Gly Ser Ile Ser Leu

20 25 30

Val Thr Val Ser Trp Gly Gly Pro Asn Gly Ala Gly Gly Thr Thr Leu

35 40 45

Ala Val Leu His Pro Glu Arg Gly Ile Arg Gln Trp Ala Pro Ala Arg

50 55 60

Gln Ala Arg Trp Glu Thr Gln Ser Ser Ile Ser Leu Ile Leu Glu Gly

65 70 75 80

Ser Gly Ala Ser Ser Pro Cys Ala Asn Thr Thr Phe Cys Cys Lys Phe

85 90 95

Ala Ser Phe Pro Glu Gly Ser Trp Glu Ala Cys Gly Ser Leu Pro Pro

100 105 110

Ser Ser Asp Pro Gly Leu Ser Ala Pro Pro Thr Pro Ala Pro Ile Leu

115 120 125

Arg Ala Asp

130

<210> 81

<211> 131

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PVRIG直系同源物的序列比对

<400> 81

Thr Pro Glu Val Trp Val Gln Val Gln Met Glu Ala Thr Glu Leu Ser

1 5 10 15

Ser Phe Thr Val His Cys Gly Phe Leu Gly Pro Gly Ser Ile Ser Leu

20 25 30

Val Thr Val Ser Trp Gly Gly Pro Asp Gly Ala Gly Gly Thr Lys Leu

35 40 45

Ala Val Leu His Pro Glu Leu Gly Thr Arg Gln Trp Ala Pro Ala Arg

50 55 60

Gln Ala Arg Trp Glu Thr Gln Ser Ser Ile Ser Leu Ala Leu Glu Asp

65 70 75 80

Ser Gly Ala Ser Ser Pro Phe Ala Asn Thr Thr Phe Cys Cys Lys Phe

85 90 95

Ala Ser Phe Pro Glu Gly Ser Trp Glu Ser Cys Gly Ser Leu Pro Pro

100 105 110

Ser Ser Asp Pro Gly Leu Ser Ala Pro Pro Thr Pro Val Pro Ile Leu

115 120 125

Arg Ala Asp

130

<210> 82

<211> 126

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PVRIG直系同源物的序列比对

<400> 82

Thr Pro Glu Val Trp Val Gln Val Gln Met Lys Ala Thr Glu Leu Ser

1 5 10 15

Ser Phe Ile Val His Cys Gly Phe Leu Gly Ser Gly Ser Ile Ser Leu

20 25 30

Val Thr Val Ser Trp Gly Gly Pro Asp Gly Ala Gly Gly Thr Arg Leu

35 40 45

Ala Val Leu His Pro Glu Leu Gly Thr Arg Gln Trp Ala Pro Ala His

50 55 60

Gln Ala Arg Trp Glu Thr Gln Ser Ser Ile Ser Leu Val Leu Glu Glu

65 70 75 80

Pro Gly Ala Ser Ser Pro Ser Ala Asn Thr Thr Phe Cys Cys Lys Phe

85 90 95

Ala Ser Phe Pro Glu Gly Ser Trp Glu Ala Cys Gly Ser Leu Pro Pro

100 105 110

Ser Ser Asp Pro Gly Leu Ser Ala Pro Ile Leu Arg Ala Asp

115 120 125

<210> 83

<211> 131

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PVRIG直系同源物的序列比对

<400> 83

Thr Pro Glu Val Trp Val Gln Val Gln Met Glu Ala Thr Glu Leu Ser

1 5 10 15

Ser Phe Thr Val His Cys Gly Phe Leu Gly Pro Gly Ser Ile Ser Leu

20 25 30

Val Thr Val Ser Trp Gly Gly Pro Asp Gly Ala Gly Gly Thr Lys Leu

35 40 45

Ala Val Leu His Pro Glu Leu Gly Thr Arg Gln Trp Ala Pro Ala Arg

50 55 60

Gln Ala Arg Trp Glu Thr Gln Ser Ser Ile Ser Leu Ala Leu Glu Asp

65 70 75 80

Ser Gly Ala Ser Ser Pro Phe Ala Asn Thr Thr Phe Cys Cys Lys Phe

85 90 95

Ala Ser Phe Pro Glu Gly Ser Trp Glu Ser Cys Gly Ser Leu Pro Pro

100 105 110

Ser Ser Asp Pro Gly Leu Ser Ala Pro Pro Thr Pro Val Pro Ile Leu

115 120 125

Arg Ala Asp

130

<210> 84

<211> 166

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重链：氨基酸序列

<400> 84

Met Glu Trp Asn Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys

20 25 30

Pro Gly Ser Ser Val Met Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asn Tyr Ala Val His Trp Ile Lys Gln Thr Thr Gly Gln Ala Leu

50 55 60

Glu Trp Thr Gly Tyr Ile Ala Pro Gly Ser Gly Val Thr Lys Tyr Asn

65 70 75 80

Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Pro Val Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Ser Gly Thr Thr Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

115 120 125

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Gln Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr

130 135 140

Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr Thr Ser Ser Thr Val Thr Leu

145 150 155 160

Gly Cys Leu Val Lys Gly

165

<210> 85

<211> 498

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 重链：DNA序列

<400> 85

atggaatgga actgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggagt ccactcccag 60

gtccagctgc agcagtctgg agctgagctg gcaaagcctg gctcttcagt gatgatttcc 120

tgcaaggctt ctggttacac ctttaccaac tatgctgtgc actggataaa gcagacgact 180

ggacaggccc ttgagtggac tggatatatt gctcctggaa gtggagttac taaatacaat 240

gagaagttca agggcaaggc cacattgact gtagacaaat cctcaaccac agcctacatg 300

caactcagca gcctgacacc tgtggacact gcggtctatt actgtgcaag cggaactacg 360

aggtttgctt attggggcca aggcactctg gtcactgtct cttcagccca aacaacagcc 420

ccatctgtct atccactggc tcctggatgt ggtgatacaa ccagctccac ggtgactctg 480

ggatgcctgg tcaagggc 498

<210> 86

<211> 130

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 轻链：氨基酸序列

<400> 86

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Ala Val

20 25 30

Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val

35 40 45

Ser Leu Ser Ser Tyr Asn Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Glu Pro Lys Ile Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Pro Ser Gly

65 70 75 80

Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu

85 90 95

Thr Ile Asp Pro Val Gln Ala Asp Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

Gln Ser Lys Asp Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu

115 120 125

Ile Lys

130

<210> 87

<211> 390

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 轻链：DNA序列

<400> 87

atggagacag acacactcct gctatgggtg ctgctgctct gggttccagg ctccactggt 60

gacattgtgc tgacccagtc tcctgctttg gctgtgtctc tagggcagag ggccacaatc 120

tcctgtagag ccagccaaag tgtcagttta tccagctata atctcatgca gtggtaccaa 180

cagaaaccag gacaggaacc caaaatcctc atctatgatg catccaacct accatctggg 240

atccctgcca ggttcagtgg cagtgggtct gggacagact tcaccctcac cattgatcct 300

gtgcaggctg atgatattgc aacctattac tgtcagcaga gtaaggatga cccgctcacg 360

ttcggttctg ggaccaagct ggagatcaaa 390

<210> 88

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人IgG1恒定区

<400> 88

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 89

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人IgG1 D265A恒定区

<400> 89

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 90

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人IgG1 N297A恒定区

<400> 90

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 91

<211> 326

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人IgG2恒定区

<400> 91

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

115 120 125

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

130 135 140

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

145 150 155 160

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn

165 170 175

Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp

180 185 190

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro

195 200 205

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu

210 215 220

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

225 230 235 240

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

245 250 255

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

260 265 270

Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

275 280 285

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

290 295 300

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

305 310 315 320

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 92

<211> 377

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人IgG3恒定区

<400> 92

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro

100 105 110

Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg

115 120 125

Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys

130 135 140

Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro

145 150 155 160

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

165 170 175

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

180 185 190

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr

195 200 205

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

210 215 220

Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

225 230 235 240

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

245 250 255

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln

260 265 270

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

275 280 285

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

290 295 300

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn

305 310 315 320

Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

325 330 335

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile

340 345 350

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln

355 360 365

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

370 375

<210> 93

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人IgG4恒定区(野生型)

<400> 93

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 94

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人IgG4恒定区(S241P铰链突变体)

<400> 94

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 95

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人类κ轻链

<400> 95

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 96

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人类λ轻链

<400> 96

Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser

1 5 10 15

Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp

20 25 30

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro

35 40 45

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn

50 55 60

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys

65 70 75 80

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val

85 90 95

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

100 105

<210> 97

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人TIGIT ECD

<400> 97

Met Met Thr Gly Thr Ile Glu Thr Thr Gly Asn Ile Ser Ala Glu Lys

1 5 10 15

Gly Gly Ser Ile Ile Leu Gln Cys His Leu Ser Ser Thr Thr Ala Gln

20 25 30

Val Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln Gln Asp Gln Leu Leu Ala Ile Cys

35 40 45

Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser Phe Lys Asp Arg Val

50 55 60

Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln Ser Leu Thr Val Asn

65 70 75 80

Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys Ile Tyr His Thr Tyr Pro Asp Gly Thr

85 90 95

Tyr Thr Gly Arg Ile Phe Leu Glu Val Leu Glu Ser Ser Val Ala Glu

100 105 110

His Gly Ala Arg Phe Gln Ile Pro

115 120

<210> 98

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 食蟹猕猴TIGIT ECD

<400> 98

Met Met Thr Gly Thr Ile Glu Thr Thr Gly Asn Ile Ser Ala Lys Lys

1 5 10 15

Gly Gly Ser Val Ile Leu Gln Cys His Leu Ser Ser Thr Met Ala Gln

20 25 30

Val Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln His Asp His Ser Leu Leu Ala Ile

35 40 45

Arg Asn Ala Glu Leu Gly Trp His Ile Tyr Pro Ala Phe Lys Asp Arg

50 55 60

Val Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln Ser Leu Thr Met

65 70 75 80

Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys Thr Tyr His Thr Tyr Pro Asp Gly

85 90 95

Thr Tyr Arg Gly Arg Ile Phe Leu Glu Val Leu Glu Ser Ser Val Ala

100 105 110

Glu His Ser Ala Arg Phe Gln Ile Pro

115 120

<210> 99

<211> 316

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人PVR ECD

<400> 99

Asp Val Val Val Gln Ala Pro Thr Gln Val Pro Gly Phe Leu Gly Asp

1 5 10 15

Ser Val Thr Leu Pro Cys Tyr Leu Gln Val Pro Asn Met Glu Val Thr

20 25 30

His Val Ser Gln Leu Thr Trp Ala Arg His Gly Glu Ser Gly Ser Met

35 40 45

Ala Val Phe His Gln Thr Gln Gly Pro Ser Tyr Ser Glu Ser Lys Arg

50 55 60

Leu Glu Phe Val Ala Ala Arg Leu Gly Ala Glu Leu Arg Asn Ala Ser

65 70 75 80

Leu Arg Met Phe Gly Leu Arg Val Glu Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Cys

85 90 95

Leu Phe Val Thr Phe Pro Gln Gly Ser Arg Ser Val Asp Ile Trp Leu

100 105 110

Arg Val Leu Ala Lys Pro Gln Asn Thr Ala Glu Val Gln Lys Val Gln

115 120 125

Leu Thr Gly Glu Pro Val Pro Met Ala Arg Cys Val Ser Thr Gly Gly

130 135 140

Arg Pro Pro Ala Gln Ile Thr Trp His Ser Asp Leu Gly Gly Met Pro

145 150 155 160

Asn Thr Ser Gln Val Pro Gly Phe Leu Ser Gly Thr Val Thr Val Thr

165 170 175

Ser Leu Trp Ile Leu Val Pro Ser Ser Gln Val Asp Gly Lys Asn Val

180 185 190

Thr Cys Lys Val Glu His Glu Ser Phe Glu Lys Pro Gln Leu Leu Thr

195 200 205

Val Asn Leu Thr Val Tyr Tyr Pro Pro Glu Val Ser Ile Ser Gly Tyr

210 215 220

Asp Asn Asn Trp Tyr Leu Gly Gln Asn Glu Ala Thr Leu Thr Cys Asp

225 230 235 240

Ala Arg Ser Asn Pro Glu Pro Thr Gly Tyr Asn Trp Ser Thr Thr Met

245 250 255

Gly Pro Leu Pro Pro Phe Ala Val Ala Gln Gly Ala Gln Leu Leu Ile

260 265 270

Arg Pro Val Asp Lys Pro Ile Asn Thr Thr Leu Ile Cys Asn Val Thr

275 280 285

Asn Ala Leu Gly Ala Arg Gln Ala Glu Leu Thr Val Gln Val Lys Glu

290 295 300

Gly Pro Pro Ser Glu His Ser Gly Met Ser Arg Asn

305 310 315

<210> 100

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA.9.018可变重链(vh)结构域

<400> 100

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Glu Met Leu Val Gln Asp Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 101

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 101

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly

1 5

<210> 102

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 102

Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys

1 5

<210> 103

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 103

Ala Lys Glu Met Leu Val Gln Asp Tyr Tyr Tyr Met Asp Val

1 5 10

<210> 104

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 104

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Glu Met Leu Val Gln Asp Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 105

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 105

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Leu Leu His Arg

20 25 30

Asn Gly Ile Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly

85 90 95

Leu Gln Ile Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 106

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 106

Gln Asn Leu Leu His Arg Asn Gly Ile Asn Tyr

1 5 10

<210> 107

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 107

Trp Gly Ser

1

<210> 108

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 108

Met Gln Gly Leu Gln Ile Pro Pro Thr

1 5

<210> 109

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 109

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Leu Leu His Arg

20 25 30

Asn Gly Ile Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly

85 90 95

Leu Gln Ile Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 110

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA.9.027可变重链(vh)结构域

<400> 110

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Pro Leu Pro Leu His Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 111

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 111

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

1 5

<210> 112

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 112

Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys

1 5

<210> 113

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 113

Ala Arg Asp Pro Leu Pro Leu His Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 114

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 114

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Pro Leu Pro Leu His Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 115

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 115

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Ala Ser Gly Asn Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg

20 25 30

Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Gln Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gln Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Phe Cys Ala Val Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Ser Leu Gln Leu Gly Gly Gly Thr Gln Leu Ala Val Leu Gly

100 105 110

<210> 116

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 116

Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg Pro

1 5

<210> 117

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 117

Ser Gln Asn

1

<210> 118

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 118

Ala Val Trp Asp Asp Ser Leu Ser Ser Leu Gln

1 5 10

<210> 119

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 119

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Ala Ser Gly Asn Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg

20 25 30

Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Gln Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gln Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Phe Cys Ala Val Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Ser Leu Gln Leu Gly Gly Gly Thr Gln Leu Ala Val Leu Gly Gln

100 105 110

Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys

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Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

<210> 120

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA.9.049可变重链(vh)结构域

<400> 120

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 121

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 121

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

1 5

<210> 122

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 122

Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys

1 5

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<210> 124

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 124

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Arg

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

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Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

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Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

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325 330 335

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<210> 125

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 125

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Ala Ser Gly Asn Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg

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Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

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Ile Tyr Ser Gln Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

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Gly Ser Gln Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

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Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg Pro

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<212> PRT

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<220>

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<400> 127

Ser Gln Asn

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 129

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Ala Ser Gly Asn Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg

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Gly Ser Gln Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln

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<210> 130

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA.9.057可变重链(vh)结构域

<400> 130

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

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Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 131

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 132

Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 133

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 134

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

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Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

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100 105 110

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115 120 125

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Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

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Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

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<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 135

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

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<212> PRT

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<220>

<223> vlCDR2

<400> 137

Arg Asn Thr

1

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 138

Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Ser Ala Trp Val

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<210> 139

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 139

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

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Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Gly Gly Leu Arg

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Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

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Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

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<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA.9.059可变重链(vh)结构域

<400> 140

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 141

Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn Tyr

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 142

Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr

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<210> 143

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 143

Ala Arg Gly Ala Arg Tyr Ser Tyr Gly Gln Tyr Pro Tyr

1 5 10

<210> 144

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 144

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn

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Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

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Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

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Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

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Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

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Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 146

His Asp Ile Ser Ser Leu

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<210> 147

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 147

Ala Ala Ser

1

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 148

Leu Gln Leu Asp Ser Phe Pro Thr Trp Thr

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<210> 149

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 149

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Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 150

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA.9.083可变重链(vh)结构域

<400> 150

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Pro Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Pro Leu Pro Leu His Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 151

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 151

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

1 5

<210> 152

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 152

Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Pro Val

1 5

<210> 153

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 153

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1 5 10

<210> 154

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

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1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

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50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

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100 105 110

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115 120 125

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Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

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Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

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Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

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<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 155

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Ala Ser Gly Asn Pro Gly Gln

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<213> 人工序列

<220>

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Ser Gln Asn

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

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Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Ala Ser Gly Asn Pro Gly Gln

1 5 10 15

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210 215

<210> 160

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Arg

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 161

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

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<210> 162

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 162

Ile Ser Tyr Ala Gly Glu Val Lys

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

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<210> 164

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 164

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<210> 165

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 165

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Ala Ser Gly Asn Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg

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Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

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Gly Ser Gln Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln

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<210> 166

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 166

Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg Pro

1 5

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 167

Ser Gln Asn

1

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<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 168

Ala Val Trp Asp Asp Ile Gly Arg Val Leu Gln

1 5 10

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<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 169

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Ala Ser Gly Asn Pro Gly Gln

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Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg

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Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

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Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

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<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA.9.089可变重链(vh)结构域

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Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Arg

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<213> 人工序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

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Ile Ser Tyr Asp Arg Thr Pro Val

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 173

Ala Arg Asp Pro Leu Pro Leu His Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 174

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 174

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

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Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr

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Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

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<210> 175

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 175

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Ala Ser Gly Asn Pro Gly Gln

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> vlCDR1

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Ser Gln Asn

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 178

Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Pro Arg Leu Asn

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 179

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Ala Ser Gly Asn Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg

20 25 30

Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

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Gly Ser Gln Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

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Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys

145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175

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Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

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<210> 180

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA.9.093可变重链(vh)结构域

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115 120

<210> 181

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 181

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

1 5

<210> 182

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 182

Ile Ser Tyr Glu Gly Asp Arg Lys

1 5

<210> 183

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 183

Ala Arg Asp Pro Leu Pro Leu His Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 184

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 184

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Asp Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Pro Leu Pro Leu His Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 185

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 185

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Ala Ser Gly Asn Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg

20 25 30

Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Gln Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gln Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Phe Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Thr

85 90 95

Pro His Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Ala Val Leu Gly

100 105 110

<210> 186

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 186

Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg Pro

1 5

<210> 187

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 187

Ser Gln Asn

1

<210> 188

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 188

Ala Thr Trp Asp Asp Ser Thr Pro His Gly Val

1 5 10

<210> 189

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 189

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Ala Ser Gly Asn Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg

20 25 30

Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Gln Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gln Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Phe Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Thr

85 90 95

Pro His Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Ala Val Leu Gly Gln

100 105 110

Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys

145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

<210> 190

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA.9.101可变重链(vh)结构域

<400> 190

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Ala Pro Leu Phe Gly Gln Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 191

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 191

Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn Tyr

1 5

<210> 192

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 192

Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 193

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 193

Ala Arg Gly Ala Pro Leu Phe Gly Gln Tyr Pro Tyr

1 5 10

<210> 194

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 194

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Ala Pro Leu Phe Gly Gln Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 195

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 195

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser His Ala Ile Ala Ser Leu

20 25 30

Phe Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Ala Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asp Ser Phe Pro Thr

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 196

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 196

His Ala Ile Ala Ser Leu

1 5

<210> 197

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 197

Ala Ala Ser

1

<210> 198

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 198

Leu Gln Leu Asp Ser Phe Pro Thr Trp Thr

1 5 10

<210> 199

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 199

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser His Ala Ile Ala Ser Leu

20 25 30

Phe Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Ala Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asp Ser Phe Pro Thr

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 200

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA.9.103可变重链(vh)结构域

<400> 200

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Ala Arg Pro Asn Gly Gln Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 201

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 201

Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn Tyr

1 5

<210> 202

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 202

Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 203

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 203

Ala Arg Gly Ala Arg Pro Asn Gly Gln Tyr Pro Tyr

1 5 10

<210> 204

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 204

Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Ala Arg Pro Asn Gly Gln Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 205

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 205

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser His Gly Ile Lys Ser Leu

20 25 30

Phe Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Ala Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asp Ser Phe Pro Thr

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 206

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 206

His Gly Ile Lys Ser Leu

1 5

<210> 207

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 207

Ala Ala Ser

1

<210> 208

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 208

Leu Gln Leu Asp Ser Phe Pro Thr Trp Thr

1 5 10

<210> 209

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 209

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser His Gly Ile Lys Ser Leu

20 25 30

Phe Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Ala Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asp Ser Phe Pro Thr

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 210

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 克隆31C6可变重链(vh)结构域

<400> 210

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 211

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 211

Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Val

1 5

<210> 212

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 212

Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala

1 5

<210> 213

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 213

Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 214

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 214

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 215

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 215

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 216

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 216

Glu His Ile Tyr Ser Tyr

1 5

<210> 217

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 217

Asn Ala Lys

1

<210> 218

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 218

Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu Thr

1 5

<210> 219

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 219

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 220

<211> 130

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 克隆22G2可变重链(vh)结构域

<400> 220

Gln Val His Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly

20 25 30

Ile Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Val Ser Gly Asn Tyr Tyr Asn Val Asp Tyr

100 105 110

Tyr Phe Phe Gly Val Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val

115 120 125

Ser Ser

130

<210> 221

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 221

Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly Ile Tyr Tyr

1 5 10

<210> 222

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 222

Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 223

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 223

Ala Arg Asp Tyr Tyr Val Ser Gly Asn Tyr Tyr Asn Val Asp Tyr Tyr

1 5 10 15

Phe Phe Gly Val Asp Val

20

<210> 224

<211> 457

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 224

Gln Val His Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly

20 25 30

Ile Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

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Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Val Ser Gly Asn Tyr Tyr Asn Val Asp Tyr

100 105 110

Tyr Phe Phe Gly Val Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val

115 120 125

Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys

130 135 140

Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys

145 150 155 160

Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu

165 170 175

Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu

180 185 190

Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr

195 200 205

Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val

210 215 220

Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

225 230 235 240

Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

245 250 255

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

260 265 270

Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr

275 280 285

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

290 295 300

Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

305 310 315 320

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

325 330 335

Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

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Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met

355 360 365

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

370 375 380

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

385 390 395 400

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

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Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val

420 425 430

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

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Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

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<210> 225

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 225

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro

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Leu Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

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<210> 226

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 226

Gln Ser Val Ser Ser Tyr

1 5

<210> 227

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 227

Asp Ala Ser

1

<210> 228

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 228

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Leu Phe Thr

1 5 10

<210> 229

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 229

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

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Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro

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Leu Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val

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Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys

115 120 125

Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg

130 135 140

Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn

145 150 155 160

Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser

165 170 175

Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys

180 185 190

Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr

195 200 205

Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

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<210> 230

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.9.536.1可变重链(vh)结构域

<400> 230

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

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Thr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

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Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

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<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 231

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<210> 232

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 232

Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser

1 5 10

<210> 233

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 233

Ser Gly Tyr Tyr Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 234

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 234

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

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Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

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Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

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100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

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Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

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Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

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Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

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Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

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370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 235

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 235

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Lys Asn Ala

20 25 30

Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Pro Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Phe

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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 236

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 237

Ser Pro Ser Tyr Arg Tyr Thr

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<210> 238

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 238

Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Phe Thr

1 5

<210> 239

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 239

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Lys Asn Ala

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Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Phe

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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

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115 120 125

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130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 240

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.9.536.3可变重链(vh)结构域

<400> 240

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

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Thr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

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Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

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<210> 241

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 241

Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Leu His

1 5 10

<210> 242

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 242

Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser

1 5 10

<210> 243

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 243

Ser Gly Tyr Tyr Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 244

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 244

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr

20 25 30

Thr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Ser Gly Tyr Tyr Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

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165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

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Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

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Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

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275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

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Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

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<220>

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<210> 273

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 273

Ser Gly Tyr Tyr Asp Tyr Ser Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 274

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 274

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

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<210> 275

<211> 107

<212> PRT

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<220>

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<400> 275

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<210> 276

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<220>

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<400> 279

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<223> CHA.9.536.8可变重链(vh)结构域

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<223> 全长HC (IgG4(S241P))

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

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<213> 人工序列

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<212> PRT

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<213> 人工序列

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<223> vlCDR3

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Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Phe Thr

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 全长轻链

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Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

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Phe Asn Arg Gly Glu Cys

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<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.9.560.1可变重链(vh)结构域

<400> 300

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 303

Gly Asn Gly Tyr Tyr Val Gly Met Asp Tyr

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<210> 304

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 304

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

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Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

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Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

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Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 308

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<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 309

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Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

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Asn His Ala Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr

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<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

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Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

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<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 375

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65 70 75 80

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<213> 人工序列

<220>

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

<220>

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

<220>

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 384

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<213> 人工序列

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<223> 可变轻链(vl)结构域

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.9.547.2可变重链(vh)结构域

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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

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<213> 人工序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 394

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<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 可变轻链(vl)结构域

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<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 398

Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Tyr Thr

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<210> 399

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 399

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

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180 185 190

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210

<210> 400

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.9.547.3可变重链(vh)结构域

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<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 403

Trp Leu Leu Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 404

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 404

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

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<223> CHA.9.547.6可变重链(vh)结构域

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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

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130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

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Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

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<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.9.547.7可变重链(vh)结构域

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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 433

Trp Leu Leu Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr

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<210> 434

<211> 446

<212> PRT

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<223> 全长HC (IgG4(S241P))

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<210> 435

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<213> 人工序列

<220>

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Gly Asn Gly Asn Pro Leu Gly Met Asp Tyr

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<212> PRT

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<223> 全长HC (IgG4(S241P))

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

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<212> PRT

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<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.9.541.5可变重链(vh)结构域

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<212> PRT

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 493

Gly Asn Gly Asn Pro Leu Gly Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 494

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 494

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

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<223> 可变轻链(vl)结构域

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<212> PRT

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<212> PRT

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 498

Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Leu Thr

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<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 499

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

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Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile Tyr

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<212> PRT

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<220>

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<212> PRT

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<212> PRT

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<223> vhCDR3

<400> 523

Gly Asn Gly Asn Pro Leu Gly Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 524

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC (IgG4(S241P))

<400> 524

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

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<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 532

Thr Ile Ser Gly Gly Gly Thr Asn Thr Tyr

1 5 10

<210> 533

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 533

Trp Leu Leu Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 534

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC

<400> 534

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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

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Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu

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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

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Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

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Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

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Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

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Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

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<210> 535

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 535

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Tyr Lys Ala Ser Lys Ser His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<212> PRT

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<212> PRT

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

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Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Tyr Thr

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.9.547.12可变重链(vh)结构域

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 可变轻链(vl)结构域

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 557

Lys Ala Ser Lys Ser His Thr

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

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Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Tyr Thr

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 559

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> CHA.9.547.13可变重链(vh)结构域

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130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 565

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 565

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Ile Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Lys Ser His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 566

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 566

Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp Leu Ser

1 5 10

<210> 567

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 567

Lys Ala Ser Lys Ser His Thr

1 5

<210> 568

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 568

Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 569

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 569

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Ile Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Lys Ser His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 570

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CHA.9.543可变重链(vh)结构域

<400> 570

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Leu Ile Phe Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Val Arg Phe Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

100 105 110

Val Ser Val Ser Ser

115

<210> 571

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 571

Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn

1 5 10

<210> 572

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 572

Leu Ile Phe Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser

1 5 10

<210> 573

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 573

Gly Val Arg Phe Ala Leu Asp Tyr

1 5

<210> 574

<211> 388

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC

<400> 574

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Leu Ile Phe Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Val Arg Phe Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

100 105 110

Val Ser Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp

180 185 190

Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys

210 215 220

Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys

225 230 235 240

Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val

245 250 255

Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe

260 265 270

Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu

275 280 285

Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His

290 295 300

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala

305 310 315 320

Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg

325 330 335

Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met

340 345 350

Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro

355 360 365

Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn

370 375 380

Tyr Lys Asn Thr

385

<210> 575

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 575

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Phe Gly

1 5 10 15

Asp Gln Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser

20 25 30

Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile

65 70 75 80

Ser Thr Ile Lys Pro Glu Asp Leu Gly Met Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly

85 90 95

Thr His Gln Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 576

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 576

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Ser

1 5 10 15

<210> 577

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 577

Glu Ile Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 578

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 578

Leu Gln Gly Thr His Gln Pro Trp Thr

1 5

<210> 579

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 579

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Phe Gly

1 5 10 15

Asp Gln Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser

20 25 30

Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile

65 70 75 80

Ser Thr Ile Lys Pro Glu Asp Leu Gly Met Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly

85 90 95

Thr His Gln Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu

115 120 125

Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg

145 150 155 160

Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu

180 185 190

Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser

195 200 205

Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys

210 215

<210> 580

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 克隆31C6可变重链(vh)结构域

<400> 580

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 581

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 581

Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Val

1 5

<210> 582

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 582

Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala

1 5

<210> 583

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 583

Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 584

<211> 443

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC

<400> 584

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser

195 200 205

Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys

210 215 220

Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro

225 230 235 240

Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr

245 250 255

Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser

260 265 270

Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg

275 280 285

Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile

290 295 300

Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn

305 310 315 320

Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys

325 330 335

Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu

340 345 350

Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe

355 360 365

Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala

370 375 380

Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr

385 390 395 400

Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly

405 410 415

Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His

420 425 430

Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

435 440

<210> 585

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 585

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 586

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 586

Glu His Ile Tyr Ser Tyr

1 5

<210> 587

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 587

Asn Ala Lys

1

<210> 588

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 588

Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu Thr

1 5

<210> 589

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 589

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala

100 105 110

Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly

115 120 125

Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile

130 135 140

Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu

145 150 155 160

Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr

180 185 190

Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Asn Glu Cys

210

<210> 590

<211> 130

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 克隆22G2可变重链(vh)结构域

<400> 590

Gln Val His Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly

20 25 30

Ile Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Val Ser Gly Asn Tyr Tyr Asn Val Asp Tyr

100 105 110

Tyr Phe Phe Gly Val Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val

115 120 125

Ser Ser

130

<210> 591

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR1

<400> 591

Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly Ile Tyr Tyr

1 5 10

<210> 592

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR2

<400> 592

Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 593

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vhCDR3

<400> 593

Ala Arg Asp Tyr Tyr Val Ser Gly Asn Tyr Tyr Asn Val Asp Tyr Tyr

1 5 10 15

Phe Phe Gly Val Asp Val

20

<210> 594

<211> 454

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长HC

<400> 594

Gln Val His Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly

20 25 30

Ile Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Val Ser Gly Asn Tyr Tyr Asn Val Asp Tyr

100 105 110

Tyr Phe Phe Gly Val Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val

115 120 125

Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly

130 135 140

Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys

145 150 155 160

Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr

180 185 190

Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu

195 200 205

Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp

210 215 220

Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr

225 230 235 240

Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp

275 280 285

Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn

290 295 300

Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp

355 360 365

Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile

370 375 380

Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn

385 390 395 400

Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys

420 425 430

Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu

435 440 445

Ser His Ser Pro Gly Lys

450

<210> 595

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 可变轻链(vl)结构域

<400> 595

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro

85 90 95

Leu Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 596

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR1

<400> 596

Gln Ser Val Ser Ser Tyr

1 5

<210> 597

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR2

<400> 597

Asp Ala Ser

1

<210> 598

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> vlCDR3

<400> 598

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Leu Phe Thr

1 5 10

<210> 599

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链

<400> 599

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro

85 90 95

Leu Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Ala Asp

100 105 110

Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr

115 120 125

Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys

130 135 140

Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly

145 150 155 160

Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser

165 170 175

Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn

180 185 190

Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val

195 200 205

Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys

210 215

<210> 600

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA9.086 CDR序列

<400> 600

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

1 5

<210> 601

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA9.086 CDR序列

<400> 601

Ile Ser Tyr Ala Gly Glu Val Lys

1 5

<210> 602

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA9.086 CDR序列

<400> 602

Ala Arg Asp Pro Leu Pro Leu His Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 603

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA9.086 CDR序列

<400> 603

Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg Pro

1 5

<210> 604

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA9.086 CDR序列

<400> 604

Ser Gln Asn

1

<210> 605

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA9.086 CDR序列

<400> 605

Ala Val Trp Asp Asp Ile Gly Arg Val Leu Gln

1 5 10

<210> 606

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA9.086 CDR序列

<400> 606

Ser Tyr Ala Met His

1 5

<210> 607

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA9.086 CDR序列

<400> 607

Val Ile Ser Tyr Ala Gly Glu Val Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 608

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA9.086 CDR序列

<400> 608

Asp Pro Leu Pro Leu His Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 609

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA9.086 CDR序列

<400> 609

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Met Gly Arg Arg Pro Val Asn

1 5 10

<210> 610

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA9.086 CDR序列

<400> 610

Ser Gln Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 611

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CPA9.086 CDR序列

<400> 611

Ala Val Trp Asp Asp Ile Gly Arg Val Leu Gln

1 5 10