番茄miR172a初级体编码小肽miPEP172a的预测、鉴定与原核表达方法

摘要

本发明提供一种由番茄miR172a初级体编码小肽miPEP172a的预测、鉴定方法，包括以下步骤：S1、前体序列设计引物1；S2、以野生型番茄早粉2号的DNA以及cDNA为模板提取总RNA，并作为模板反转录合成cDNA，再以番茄为模板用引物2进行PCR扩增；S3、筛选鉴定；其原核表达方法包括以下步骤：S1.构建原核表达载体；S2.用重组表达质粒转化大肠杆菌感受态细胞；S3.转化大肠杆菌；S4.接种于卡纳霉素培养基，然后诱导。本发明提出的鉴定预测方法解决了当前对miRNA初级体所编码小肽筛选方法的成本问题，使小肽的快速、低价鉴定成为可能；本发明提出的原核表达方法，显著降低了小肽的合成成本，操作简单，对小肽的大量生产应用具有重要价值。