HPV16E7蛋白编码基因原核表达与鉴定

摘要

目的研究HPV16E7蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16E7蛋白原核表达质粒进行构建、表达和鉴定。方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16E7基因,经BamH和Hind双酶切后插入相同酶切pET32a(+)载体,转化JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选。经IPTG对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot检测目标蛋白表达情况。结果成功构建了原核表达质粒pET32/E7,HPV16E7-TRX融合蛋白在BL21(DE3)菌株中高效表达,在1mmol/LIPTG、30℃诱导条件下融合蛋白表达量占菌体总蛋白的30%左右。结论pET32/E7原核表达质粒的构建、HPV16E7融合蛋白的表达为进一步深入研究HPV16E7蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用机制奠定了基础。