一种基于Taqman探针法的UIMC1基因突变位点检测试剂盒及其用途

摘要

本发明涉及一种基于Taqman探针法的UIMC1基因突变位点检测试剂盒，所述的检测试剂盒包含扩增引物、T型Taqman探针、C型Taqman探针；所述的扩增引物的正向引物的序列如SEQ ID NO.3所示，所述的扩增引物的反向引物的序列如SEQ ID NO.4所示；所述的C型Taqman探针如SEQ ID NO.5所示，所述的T型Taqman探针如SEQ ID NO.6所示；所述的UIMC1基因的序列如SEQ ID NO.1所示，突变后的UIMC1基因的序列如SEQ ID NO.2所示。本发明所提供的基于Taqman探针法的UIMC1基因突变位点检测试剂盒能够广泛、高效的进行辐射损伤的检测。

说明书

技术领域

本发明生物检测技术领域，具体涉及一种基于Taqman探针法的UIMC1基因突变位点检测试剂盒及其用途。

背景技术

目前在我国大约有20万左右的放射工作人员。放射工作人员在日常工作时要长期接受职业照射，累积照射的伤害对易感人群的损伤显而易见，因此需要一种有效的方法以判断该人员是否符合岗位需求，以降低职业伤害。

此外，放射治疗是恶性肿瘤的主要治疗手段之一，超过50％的癌症患者需要放射治疗。但即使相同的放射治疗方案，不同患者的放射损伤程度不同，究其原因，主要与辐射损伤易感性的个体差异有关：在相同的治疗条件下，辐射损伤易感人群可能会引起较严重的不良反应，而辐射损伤不易感人群可能存在治疗效果不佳的风险。

因此，能够准确的区分人员的辐射损伤易感程度，有利于放射工作人员岗位适任性判断，也有助于临床个性化治疗方案的定制或优化治疗方案。

此外，Taqman探针法将样品与反应组分至于封闭体系中进行反应，从而避免污染。Taqman探针法依赖PCR方法，检测速度快，敏感性高，特异性强。该方法检测设备为荧光定量PCR仪，荧光定量PCR仪普及性好，广泛应用于临床诊断和分子生物学实验，Taqman探针法无需任何PCR之后的操作，操作步骤简单，易实现广泛应用。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的是提供一种基于Taqman探针法的UIMC1基因突变位点检测试剂盒，以能够广泛、高效的进行辐射损伤的检测。

为达到以上目的，本发明采用的技术方案是：

一种基于Taqman探针法的UIMC1基因突变位点检测试剂盒，所述的检测试剂盒包含扩增引物、T型Taqman探针、C型Taqman探针；

所述的扩增引物的正向引物的序列如SEQ ID NO.3所示，所述的扩增引物的反向引物的序列如SEQ ID NO.4所示；

所述的C型Taqman探针如SEQ ID NO.5所示，所述的T型Taqman探针如SEQ ID NO.6所示；

所述的UIMC1基因的序列如SEQ ID NO.1所示，突变后的UIMC1基因的序列如SEQID NO.2所示。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种基于Taqman探针法的UIMC1基因突变位点检测试剂盒，其中，所述的UIMC1基因突变位点为UIMC1基因的rs1700490位点(正向序列A到G突变；反向序列C到T的突变)。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种基于Taqman探针法的UIMC1基因突变位点检测试剂盒，所述扩增引物的正向引物的浓度为0.25μM。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种基于Taqman探针法的UIMC1基因突变位点检测试剂盒，所述扩增引物的反向引物的浓度为0.25μM。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种基于Taqman探针法的UIMC1基因突变位点检测试剂盒，所述的C型Taqman探针的浓度为0.2μM。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种基于Taqman探针法的UIMC1基因突变位点检测试剂盒，所述的T型Taqman探针的浓度为0.2μM。

本发明的第二个目的是提供上述检测试剂盒用于制备检测辐射损伤易感程度的试剂盒的用途，以能够广泛、高效的进行辐射损伤的检测。

为达到以上目的，本发明提供上述检测试剂盒用于制备检测辐射损伤易感程度的试剂盒的用途。

在一种优选的实施方案中，本发明提供上述检测试剂盒用于制备检测辐射损伤易感程度的试剂盒的用途，其中所述的辐射损伤为局部或全身的组织器官不良反应，如恶心、呕吐、食欲减退、白细胞下降，皮肤发红变痒，甚至致癌等。

本发明有益效果在于：本发明的基于Taqman探针法的UIMC1基因突变位点检测试剂盒能够广泛、高效的进行辐射损伤的检测。

附图说明

图1是本发明实施例2中SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4的扩增引物对，T型SEQ IDNO.5、C型SEQ ID NO.6的Taqman探针检测结果；

图2是本发明实施例2中SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8的扩增引物对，T型SEQ IDNO.9、C型SEQ ID NO.10的Taqman探针检测结果。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步描述。

实施例1：

本1)样本的采集照射及染色体畸变分析

采集20-30岁健康成年男性外周血，给予0、2Gy 60Coγ射线照射。对2Gyγ射线照射样本进行染色体畸变分析，将人群分为易感组、一般组、不易感组。照射后血样培养52h后收获染色体，制片。每个样本分析200个中期分裂相。

2)外周血基因组DNA提取

提取易感组与不易感组0Gy照射样本的基因组DNA。采用北京天跟生化科技有限公司血液基因组DNA提取试剂盒，按照产品说明书进行全血基因组DNA提取，具体步骤见说明书。取样核酸定量检测A260/280在1.70～1.90之间，质量满足实验要求，可进行后续实验。

3)全外显子捕获测序

测序数据首先进行数据过滤，去掉低质量数据，获得Clean Reads。测序需达到清洁Reads率>90％，清洁碱基>20G，清洁碱基率>90％，Q20>98％，实验样本符合要求。

4)生物信息分析

Clean Reads与参考基因组比对，筛选差异SNP位点。参考基因组版本：GRCh37(hg19)ftp://ftp.1000genomes.ebi.ac.uk/vol1/ftp/technical/reference/human_g1k_v37.fasta.gz。利用生物信息分析，筛选出易感组与不易感组差异位点UIMC1 rs1700490位点，见表1。

表1筛选出的辐射损伤易感位点

实施例2：

1)针对UIMC1基因rs1700490位点设计探针及引物2组，见表2。

表2 UIMC1基因rs1700490位点Taqman探针序列

2)利用北京天跟生化科技有限公司血液基因组DNA提取试剂盒(非离心柱型；目录号：DP319)，按照产品说明书进行10人全血基因组(血液来源于志愿者，20-30岁健康男性)DNA提取。

3)利用MALDI-TOF质谱法检测10个样本UIMC1基因rs1700490位点的基因型。

4)采用表2，第一组：SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4的扩增引物对，T型SEQ ID NO.5和C型SEQ ID NO.6的Taqman探针。以及第二组：SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8的扩增引物对，T型SEQ ID NO.9和C型SEQ ID NO.10的Taqman探针。分别进行荧光定量PCR反应。特异性反应体系：10μl反应体系包括3.1μl H2O、5μl TaqMan Fast qPCR Master Mix(2×)、0.25μlForward Primer(10μM)、0.25μl Reverse Primer(10μM)、0.2μlC型Taqman探针(10μM)、0.2μl T型Taqman探针(10μM)、1.0μl模板DNA，反应程序为：94℃，3min；[94℃，5sec，60℃，30sec]40个循环。

5)比较MALDI-TOF质谱法检测结果与两组Taqman探针法检测结果，发现第一组：SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4的扩增引物对，T型SEQ ID NO.5和C型SEQ ID NO.6的Taqman探针能够准确对UIMC1基因rs1700490位点C/T突变进行检测，结果见表3，图1，2。

表3质谱检测结果与2组探针检测结果比较

本发明所述结构并不限于具体实施方式中所述的实施例，本领域技术人员根据本发明的技术方案得出其他的实施方式，同样属于本发明的技术创新范围。

序列表

<110> 中国辐射防护研究院

<120> 一种基于Taqman探针法的UIMC1基因突变位点检测试剂盒及其用途

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<141> 2020-12-11

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<212> DNA

<213> 人（Homo sapiens）

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gatttttcat ttaccctctt tttcctttcc tttactatcc attgtccaaa agagtgattt 60

aaaataaatg aatacacgct gagtttaaac attattattg ttttttcata tcttcaatca 120

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tggttctaga tcttatgttt tcccttttgt actgaaaagg atcttctaat gttttatgtg 300

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<210> 2

<211> 1001

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<213> 人（Homo sapiens）

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aaaataaatg aatacacgct gagtttaaac attattattg ttttttcata tcttcaatca 120

agctactctg atctttggtg atgcttactg gtattttaga gatagactag tttttgtctg 180

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