CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的抗癌组合疗法

摘要

本文提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者单独给予治疗有效量的CD73拮抗性抗体或与PD‑1/PD‑L1轴拮抗剂抗体组合给予治疗有效量的CD73拮抗性抗体。

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求美国临时申请号62/656,892(2018年4月12日提交)和美国临时申请号62/680,255(2018年6月4日提交)的优先权的权益。将前述申请的内容通过引用以其整体特此并入。

背景技术

拮抗检查点蛋白的多种抗体已成功用于癌症疗法中(例如，纳武单抗)。但是，一些癌症患者是使用检查点阻断抗体的单一疗法难以治疗的，并且需要用新的治疗策略进行干预。考虑到对治疗诸如癌症等疾病的改进策略的持续需求，与现有疗法联合或增强现有疗法的新型疗法将会在治疗上有益。

发明内容

本文提供了一种治疗患有癌症(例如，晚期实体瘤)的受试者的方法，所述方法包括给予CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)。

本文还提供了一种治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者给予治疗有效剂量的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)，其中所述方法导致以下中的一种或多种：

(a)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体后3、4、5或6周实现所述CD73拮抗剂抗体的稳态血清浓度；

(b)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的24小时内例如在外周B细胞如CD19 B细胞上实现所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有；

(c)在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂抗体后，所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有持续至少30天；

(d)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的24小时内，无法检测到外周B细胞例如CD19 B细胞上的CD73的细胞表面水平；

(e)在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂抗体后，多达至少30天无法检测到CD73的细胞表面水平；

(f)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的6小时内，无法检测到游离可溶性CD73；

(g)在包括所述CD73拮抗剂抗体的最后一个治疗周期结束时(例如，以及在最后的治疗周期结束后至少15天或至少30天)，无法检测到游离可溶性CD73；以及

(h)与给予所述CD73拮抗剂抗体之前相比，肿瘤细胞和/或肿瘤脉管系统中CD73酶活性降低。

本文还提供了一种治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者给予每周一次或每两周一次约150-1600mg的固定剂量的CD73拮抗剂抗体和每两周一次以240mg或约240mg或每四周一次480mg或约480mg的固定剂量的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的组合，其中所述方法可导致以下中的一种或多种：

(a)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体后3、4、5或6周实现所述CD73拮抗剂抗体的稳态血清浓度；

(b)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的24小时内例如在外周B细胞如CD19 B细胞上实现所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有；

(c)在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂抗体后，所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有持续至少30天；

(d)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的24小时内，无法检测到外周B细胞例如CD19 B细胞上的CD73的细胞表面水平；

(e)在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂抗体后，多达至少30天无法检测到CD73的细胞表面水平；

(f)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的6小时内，无法检测到游离可溶性CD73；

(g)在包括所述CD73拮抗剂抗体的最后一个治疗周期结束时(例如，以及在最后的治疗周期结束后至少15天或至少30天)，无法检测到游离可溶性CD73；以及

(h)与给予所述CD73拮抗剂抗体之前相比，肿瘤细胞和/或肿瘤脉管系统中CD73酶活性降低。

在某些实施方案中，在单一疗法导入阶段后，进行CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的组合疗法，其中在给予第一剂量的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体之前的1-3周(例如，2周)内给予一个或多个(例如1-3或1-2个)剂量的CD73拮抗剂抗体(例如，Q1W或Q2W)，例如其中一个周期是2周，并且所述单一疗法导入是例如一个周期。在某些实施方案中，在第一剂量的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体之前2周给予第一剂量的CD73拮抗剂抗体，并且任选地，在第一剂量的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体之前1周给予第二剂量的CD73拮抗剂抗体。

在某些实施方案中，在同一天至少一次(同时或顺序)给予所述CD73抗体和所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。

在某些实施方案中，CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的组合治疗是28天的周期，并且所述组合治疗由至多例如6个周期或10个周期组成。

在某些实施方案中，以约150mg、300mg、600mg、1200mg或1600mg的固定剂量例如每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次给予所述CD73拮抗剂抗体。在一个实施方案中，每周一次给予所述CD73拮抗剂抗体。在一个实施方案中，每两周一次给予所述CD73拮抗剂抗体。

在某些实施方案中，以例如240mg或约240mg、或480mg或约480mg的固定剂量每两周一次或每四周一次给予所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。在一个实施方案中，以240mg或约240mg的固定剂量每两周一次给予所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。在一个实施方案中，以480mg或约480mg的固定剂量每四周一次给予所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。

在某些实施方案中，将所述CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体配制用于静脉内或皮下给予。在一些实施方案中，将所述CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体在一起配制或分开配制。

在某些实施方案中，在给予第一剂量的CD73拮抗剂抗体后3、4、5或6周实现所述CD73拮抗剂抗体的稳态血清浓度。

在某些实施方案中，当以600mg或更大的固定剂量给予所述CD73拮抗剂抗体时，实现靶标介导的药物处置(TMDD)饱和。

在某些实施方案中，当以150mg或更大的固定剂量给予所述CD73拮抗剂抗体时，在给予第一剂量的所述CD73拮抗剂抗体的24小时内，例如在外周B细胞例如CD19 B细胞上实现所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有。在某些实施方案中，当以150mg或更大的固定剂量给予所述CD73拮抗剂抗体时，在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂抗体后，所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有持续至少30天。

在某些实施方案中，当以150mg或更大的固定剂量给予所述CD73拮抗剂抗体时，在给予第一剂量的所述CD73拮抗剂抗体的24小时内，无法检测到外周B细胞例如CD19 B细胞上的CD73的细胞表面水平。在某些实施方案中，当以150mg或更大的固定剂量给予所述CD73拮抗剂抗体时，在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂后，至少30天无法检测到CD73的细胞表面水平。

在某些实施方案中，当以600mg或更大的固定剂量给予所述CD73拮抗剂抗体时，在给予所述CD73拮抗剂抗体的6小时内，无法检测到游离可溶性CD73。在某些实施方案中，当以600mg或更大的固定剂量给予所述CD73拮抗剂抗体时，在包括CD73拮抗剂抗体的最后治疗周期结束时(或在最后治疗周期结束后至少15天或至少30天时)，无法检测到游离可溶性CD73。

在某些实施方案中，当以150mg或更大的固定剂量给予所述CD73拮抗剂抗体时，与给予所述CD73拮抗剂抗体之前相比，肿瘤细胞和/或肿瘤脉管系统中的CD73酶活性降低。

在某些实施方案中，所述受试者已经接受了1、2、3或4种或更多种先前疗法，例如全身疗法。在某些实施方案中，所述受试者已经接受了一种或多种先前免疫疗法(例如，PD-1/PD-L1轴拮抗剂疗法，例如，纳武单抗)。在某些实施方案中，所述受试者是先前疗法难以治疗的。在某些实施方案中，所述受试者在进行先前癌症疗法中或之后(例如，在先前免疫疗法如检查点抑制剂疗法(例如，PD-1/PD-L1轴拮抗剂疗法)中或之后)进展。在某些实施方案中，所述先前免疫疗法不是PD-1或PD-L1轴拮抗剂疗法。

在某些实施方案中，所述方法不会引起例如如在临床试验中确定的显著的治疗相关不良事件。

在某些实施方案中，所述癌症是晚期实体瘤，如通常对免疫疗法没有反应，例如通常对抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂(例如纳武单抗)没有反应的晚期实体瘤。

在某些实施方案中，所述癌症选自结直肠癌、卵巢癌、肾细胞癌、头颈癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃食管癌、肝细胞癌、黑色素瘤、肛管表皮样癌、子宫内膜癌、胃癌、宫颈癌、胃食管交界部癌、肺泡软组织癌、胆管癌、食管癌、肝内胆管癌、平滑肌肉瘤、梅克尔细胞癌、鳞状细胞肛肠癌、舌鳞状细胞癌、头颈鳞状细胞癌、和尿路上皮癌。

在某些实施方案中，所述癌症是微卫星稳定的。

在某些实施方案中，所述治疗产生至少一种选自以下的治疗效果：肿瘤尺寸减小、转移性病变数量随时间减少、完全反应、部分反应和疾病稳定。

在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含分别含有SEQ ID NO:8、9和10中列出的序列的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别含有SEQ ID NO:11、12和13中列出的序列的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3。在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含与分别在SEQ ID NO:6和7中列出的重链可变区序列和轻链可变区序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％相同的重链可变区序列和轻链可变区序列。在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含与SEQ ID NO:3或4中列出的重链序列和SEQ IDNO:5中列出的轻链序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％相同的重链序列和轻链序列。在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体或杂合体。在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体的Fc区是IgG2/IgG1杂合体Fc区，如包含SEQ ID NO:14中列出的氨基酸序列的Fc区。在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体是人抗体或人源化抗体。

在某些实施方案中，所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体包含分别含有SEQ ID NO:20、21和22中列出的序列的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别含有SEQ ID NO:23、24和25中列出的序列的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3。在某些实施方案中，所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体包含与分别在SEQ ID NO:18和19中列出的重链可变区序列和轻链可变区序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％相同的重链可变区序列和轻链可变区序列。在某些实施方案中，所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体包含与SEQ ID NO:15或16中列出的重链序列和SEQ ID NO:17中列出的轻链序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％相同的重链序列和轻链序列。

本文还提供了一种治疗人类患者的癌症例如胰腺癌的方法，所述方法包括向所述患者给予有效量的以下各项：

(a)CD73拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:3或4中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的轻链，以及

(b)PD-1拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:15或16中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:17中列出的氨基酸序列的轻链(例如，纳武单抗)，

其中，在“CD73抗体单一疗法导入”中，在第一剂量的所述CD73拮抗剂抗体之前的1-3周(例如2周)内给予一个或多个(例如1-3或1-2个)剂量的所述CD73拮抗剂抗体，持续例如一个周期，其中一个周期是两周，

其中，在所述CD73抗体单一疗法导入后，将所述CD73拮抗剂抗体与所述PD-1拮抗剂抗体组合给予，所述CD73拮抗剂抗体是每周一次以约150-1600mg(例如，150mg或约150mg、300mg或约300mg、600mg或约600mg、1200mg或约1200mg、1600mg或约1600mg)的固定剂量给予的，所述PD-1拮抗剂抗体是每两周一次以240mg或约240mg的固定剂量或每四周一次以480mg或约480mg的固定剂量给予的，其中所述组合治疗由例如至多六个28天周期组成。在某些实施方案中，所述患者已经接受过一种或多种先前疗法(例如，一种或多种先前免疫疗法)来治疗所述癌症。在某些实施方案中，所述患者在所述一种或多种先前疗法后有进展。

本文还提供了一种治疗人类患者的癌症例如胰腺癌的方法，所述方法包括向所述患者给予有效量的以下各项：

(a)CD73拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:3或4中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的轻链，以及

(b)PD-1拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:15或16中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:17中列出的氨基酸序列的轻链(例如，纳武单抗)，

其中，将所述CD73拮抗剂抗体与所述PD-1拮抗剂抗体组合给予，所述CD73拮抗剂抗体是每周一次以约150-1600mg(例如，150mg或约150mg、300mg或约300mg、600mg或约600mg、1200mg或约1200mg、1600mg或约1600mg)的固定剂量给予的，所述PD-1拮抗剂抗体是每两周一次以240mg或约240mg的固定剂量或每四周一次以480mg或约480mg的固定剂量给予的，其中所述组合治疗由例如至多六个28天周期组成。在某些实施方案中，所述患者已经接受过一种或多种先前疗法(例如，一种或多种先前免疫疗法)来治疗所述癌症。在某些实施方案中，所述患者在所述一种或多种先前疗法后有进展。

本文还提供了一种治疗人类患者的癌症例如胰腺癌的方法，所述方法包括向所述患者给予有效量的以下各项：

(a)CD73拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:3或4中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的轻链，以及

(b)PD-1拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:15或16中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:17中列出的氨基酸序列的轻链(例如，纳武单抗)，

其中，在“CD73抗体单一疗法导入”中，在第一剂量的所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体之前的1-3周(例如2周)内给予一个或多个(例如1-3或1-2个)剂量的所述CD73拮抗剂抗体，持续例如一个周期，其中一个周期为两周，

其中，在所述CD73抗体单一疗法导入后，将所述CD73拮抗剂抗体与所述PD-1拮抗剂抗体组合给予，所述CD73拮抗剂抗体是每两周一次以600mg或约600mg的固定剂量给予的，所述PD-1拮抗剂抗体是每两周一次以240mg或约240mg或每四周一次以480mg或约480mg的固定剂量给予的，其中所述组合疗法由例如至多六个28天周期组成。在某些实施方案中，所述患者已经接受过一种或多种先前疗法(例如，一种或多种先前免疫疗法)来治疗所述癌症。在某些实施方案中，所述患者在所述一种或多种先前疗法后有进展。

本文还提供了一种治疗人类患者的癌症例如胰腺癌的方法，所述方法包括向所述患者给予有效量的以下各项：

(a)CD73拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:3或4中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的轻链，以及

(b)PD-1拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:15或16中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:17中列出的氨基酸序列的轻链(例如，纳武单抗)，

其中将所述CD73拮抗剂抗体与所述PD-1拮抗剂抗体组合给予，所述CD73拮抗剂抗体是每两周一次以600mg或约600mg的固定剂量给予的，所述PD-1拮抗剂抗体是每两周一次以240mg或约240mg或每四周一次以480mg或约480mg的固定剂量给予的，其中所述组合治疗由例如至多六个28天周期组成。在某些实施方案中，所述患者已经接受过一种或多种先前疗法(例如，一种或多种先前免疫疗法)来治疗所述癌症。在某些实施方案中，所述患者在所述一种或多种先前疗法后有进展。

在某些实施方案中，本文所述的方法包括首先在患有癌症的受试者的肿瘤中测量PD-L1的表达水平的步骤，并且例如，如用例如PD-L1 IHC 28-8pharmDx测定所测量的，如果PD-L1的表达水平≥1％、≥5％、≥10％、≥25％或≥50％，则用治疗有效量的CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的组合治疗所述受试者。

附图说明

图1示出了来自招募到临床试验中的前列腺腺癌患者和胰腺腺癌患者的肿瘤组织中CD73阳性细胞的染色。

图2是示出了剂量递增研究设计的示意图。MTD＝最大耐受剂量；NIVO＝纳武单抗；RP2D＝建议的2期剂量。

图3是示出了当以150mg、300mg、600mg、1200mg和1600mg向患者给予时的平均CD73.A血清浓度随时间变化的图。

图4是示出了在指示的时间点，在用150mg CD73.A Q1W+纳武单抗治疗的患者中CD19 B细胞上的受体占有百分比和CD73细胞表面蛋白水平的图。“C0”对应于CD73.A单一疗法导入阶段。用虚线指示“细胞表面CD73”的数据点，并且用实线指示“％RO”的数据点。在图的左侧，向下延伸到“％RO”数据点的“细胞表面CD73”的第二条虚线指向单个“细胞表面CD73”数据点。相似地，在图的右侧，向下延伸到“细胞表面CD73”数据点的“％RO”的第二条实线指向单个“％RO”数据点。

图5是示出了在指示的CD73.A剂量(150mg、300mg、600mg、1200mg和1500mg)和时间点(C0D1前、C0D1 6小时、C0D2、C0D8和C0D10)处的游离可溶性CD73(sCD73)水平的图。在150mg和300mg剂量的CD73.A的情况下在C0D8处观察到sCD73水平的反弹(“谷”)。

图6A是染色的肿瘤切片的图像，其示出了在基线处和用150mg CD73.A Q1W治疗后，在SCCHN患者(持久反应)的肿瘤细胞和内皮细胞中的CD73酶活性。图6B是示出了在用第二指示剂量的CD73.A Q1W治疗的患者的配对肿瘤活检物中CD73酶活性的图。在对C0D10进行的肿瘤活检中评估了CD73酶活性。

图7示出了在用CD73.A 300mg和纳武单抗240mg治疗的患有前列腺癌的患者中，肿瘤减少的图像。

图8示出了在用CD73.A 600mg和纳武单抗240mg治疗的患有胃食管交界部癌的患者中，肿瘤减少的图像。

图9是在指示剂量下CD73.A的Q2W方案的群体PK建模的图。

图10是示出了在指示剂量下用CD73.A治疗的患者中，sCD73(CD73.A结合和未结合的)水平的图。“C”是指“周期”；“D”表示“天”，并且“EOT”表示“治疗结束”。

具体实施方式

本文描述了使用与CD73特异性结合并且降低CD73活性的分离的抗体(例如，分离的单克隆抗体)(即，“CD73拮抗剂抗体”)例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合治疗癌症(例如，晚期实体瘤)的方法。

定义

为了可以更容易地理解本说明书，首先定义某些术语。另外的定义贯穿具体实施方式而阐述。

如本文所用，术语“分化抗原簇73”或“CD73”是指能够将细胞外核苷酸5′单磷酸转化为核苷酸(即单磷酸腺苷(AMP)转化为腺苷)的酶(核苷酸酶)。通常发现CD73是通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)连接锚定在细胞膜上的二聚体，具有胞外酶活性并且在信号转导中起作用。CD73的主要功能是将细胞外核苷酸(例如5′-AMP)转化为高度免疫抑制分子腺苷。因此，胞外5′-核苷酸酶催化嘌呤和嘧啶核糖核苷酸单磷酸和脱氧核糖核苷酸单磷酸去磷酸化为相应的核苷酸。尽管CD73具有广泛的底物特异性，但它偏好于嘌呤核糖核苷酸。

CD73也称为胞外5'核酸酶(胞外5'NT，EC 3.1.3.5)。术语“CD73”包括细胞天然表达的CD73的任何变体或亚型。

已经鉴定出人CD73的两种亚型，二者均享有相同的N末端和C末端部分。亚型1(登录号NP_002517.1；SEQ ID NO:1)代表最长的蛋白质，由574个氨基酸和9个外显子组成。亚型2(登录号NP_001191742.1；SEQ ID NO:2)编码较短的蛋白质，由524个氨基酸(缺少氨基酸404-453)组成。亚型2缺少替代的框内外显子，导致只有8个外显子但是具有相同的N末端和C末端序列的转录物。

术语“程序性死亡蛋白1”、“程序性细胞死亡蛋白1”、“蛋白质PD-1”、“PD-1”、“PD1”、“PDCD1”、“hPD-1”和“hPD-I”是指属于CD28家族的免疫抑制受体。PD-1主要在体内先前激活的T细胞上表达，并与两种配体即PD-L1和PD-L2结合。如本文所用，术语“PD-1”包括人PD-1(hPD-1)，hPD-1的变体、亚型和物种同源物，以及与hPD-1具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-1序列可以在GenBank登录号U64863下找到。

“程序性死亡配体-1(PD-L1)”是PD-1的两种细胞表面糖蛋白配体之一(另一种是PD-L2)，其在结合PD-1时下调T细胞激活和细胞因子分泌。如本文所用，术语“PD-L1”包括人PD-L1(hPD-Ll)，hPD-Ll的变体、亚型和物种同源物，以及与hPD-L1具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-Ll序列可以在GenBank登录号Q9NZQ7下找到。

如本文所用，“PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体”是指通过与PD-1或PD-L1结合来抑制PD-1/PD-L1信号传导途径的抗体。

如本文所用，术语“抗体”可以包括整个抗体及其任何抗原结合片段(即“抗原结合部分”)或其单链。在一个实施方案中，“抗体”是指包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白，或其抗原结合部分。每条重链由重链可变区(在本文缩写为V

抗体的重链可以含有或可以不含有末端赖氨酸(K)或末端甘氨酸和赖氨酸(GK)。因此，本文提供的任何重链序列和重链恒定区序列可以以GK或G结尾，或者缺少K或GK，而不管所述序列的最后一个氨基酸是什么。这是因为在抗体表达期间末端赖氨酸以及有时甘氨酸和赖氨酸被切割。

抗体通常以高亲和力特异性地结合其同源抗原，由10

免疫球蛋白可以来自任何公知的同种型，包括但不限于IgA、分泌型IgA、IgG和IgM。IgG同种型在某些物种中分为亚类：人中的IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，和小鼠中的IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3。在某些实施方案中，本文所述的CD73拮抗剂抗体属于人IgG1或IgG2亚型。免疫球蛋白(例如人IgG1)以若干种同种异型存在，这些同种异型彼此有最多几个氨基酸的差异。举例来说，“抗体”可以包括天然存在的抗体和非天然存在的抗体；单克隆抗体和多克隆抗体；嵌合抗体和人源化抗体；人抗体和非人抗体；全合成抗体；和单链抗体。

如本文所用，术语抗体的“抗原结合部分”是指保留与抗原(例如，人CD73)特异性地结合的能力的抗体的一个或多个片段。已经显示抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段执行。包含在本文所述的抗体(例如，CD73拮抗剂抗体)的“抗原结合部分”术语内的结合片段的例子包括(i)Fab片段，即由V

如本文所用，术语“单克隆抗体”是指对特定表位展示出单一结合特异性和亲和力的抗体，或抗体组合物，在所述抗体组合物中所有抗体对特定表位展示出单一结合特异性和亲和力。通常，此类单克隆抗体将衍生自编码所述抗体的单个细胞或核酸，并且将在没有故意引入任何序列改变的情况下繁殖。因此，术语“人单克隆抗体”是指衍生自人种系免疫球蛋白序列的具有可变区和任选的恒定区的单克隆抗体。在一个实施方案中，人单克隆抗体是由杂交瘤产生的，所述杂交瘤是例如通过融合获自转基因或转染色体非人动物(例如，具有包含人重链转基因和轻链转基因的基因组的转基因小鼠)的B细胞与永生化细胞而获得的。

如本文所用，术语“重组人抗体”包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，如(a)从对于人免疫球蛋白基因而言是转基因或转染色体的动物(例如，小鼠)或者由其制备的杂交瘤分离的抗体，(b)从转化用于表达所述抗体的宿主细胞(例如从转染瘤)分离的抗体，(c)从重组的组合人抗体文库分离的抗体，和(d)通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列的任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体包含可变区和恒定区，所述可变区和恒定区利用特定人种系免疫球蛋白序列并且由种系基因编码，但包括发生在例如抗体成熟过程中的后续重排和突变。如本领域中已知的(参见例如Lonberg(2005)Nature Biotech.23(9):1117-1125)，可变区含有由如下各种基因编码的抗原结合结构域，所述各种基因重排以形成对外来抗原具有特异性的抗体。除重排外，还可以通过多个单氨基酸变化(称为体细胞突变或超突变)进一步修饰可变区，以增加抗体对外来抗原的亲和力。进一步响应于抗原，恒定区将改变(即，同种型转换)。因此，编码对抗原有应答的轻链和重链免疫球蛋白多肽的重排或体细胞突变的核酸序列可以与原始种系序列不相同，但基本上相同或相似(即，具有至少80％同一性)。

“人”抗体(HuMAb)是指具有可变区的其中框架区和CDR区二者均衍生自人种系免疫球蛋白序列的抗体。此外，如果所述抗体含有恒定区，则所述恒定区也衍生自人种系免疫球蛋白序列。本文所述的抗体可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包括其中衍生自另一种哺乳动物物种(如小鼠)的种系的CDR序列已经被移植到人框架序列上的抗体。术语“人”抗体和“完全人”抗体同义使用。

“人源化”抗体是指其中非人抗体的CDR结构域外的一些、大部分或所有氨基酸被衍生自人免疫球蛋白的相应氨基酸替代的抗体。在人源化形式的抗体的一个实施方案中，CDR结构域外的一些、大部分或所有氨基酸已被来自人免疫球蛋白的氨基酸替代，而一个或多个CDR区内的一些、大部分或所有氨基酸未改变。氨基酸的少量添加、缺失、插入、取代或修饰是被允许的，只要它们不消除抗体结合特定抗原的能力即可。“人源化”抗体保留与原始抗体相似的抗原特异性。

“杂合重链恒定区”是指包含恒定结构域CH1、铰链、CH2和CH3的重链恒定区，其中恒定结构域中的一个或多个来自不同的同种型(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。在某些实施方案中，杂合恒定区包括人IgG2 CH1结构域和人IgG2铰链，所述人IgG2铰链与人IgG1 CH2结构域和人IgG1 CH3结构域融合。在某些实施方案中，相对于野生型氨基酸序列，此类杂合恒定区在所述结构域中的一个或多个内还包括氨基酸修饰。

如本文所用，“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体种类(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE抗体)。

“同种异型”是指特定同种型组内天然存在的变体，所述变体在一些氨基酸上有所不同(参见例如Jefferis等人(2009)mAbs 1:1)。本文所述的抗体可以属于任何同种异型。

除非本文另有说明，否则所有氨基酸号均根据Kabat系统的EU索引(Kabat,E.A.,等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH出版号91-3242)。

短语“识别抗原的抗体”和“对抗原具有特异性的抗体”与术语“与抗原特异性地结合的抗体”在本文中可互换使用。

如本文所用，“分离的抗体”旨在指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，与CD73特异性地结合的分离的抗体基本上不含特异性地结合除CD73以外的抗原的抗体)。然而，与CD73表位特异性地结合的分离的抗体可与来自不同物种的其他CD73蛋白质具有交叉反应性。

如本文所用，“抑制CD73”的抗体是指抑制CD73的生物学和/或酶功能的抗体。这些功能包括，例如，抗体抑制CD73酶活性的能力，例如CD73调节的腺苷产生或cAMP产生减少。

如本文所用，“内化”的抗体是指与细胞表面抗原结合后跨过细胞膜的抗体。内化包括抗体介导的受体(例如CD73)内化。在一些实施方案中，抗体以等于约10min或更短的T

“效应子功能”是指抗体Fc区与Fc受体或配体的相互作用或由此产生的生化事件。示例性的“效应子功能”包括Clq结合、补体依赖性细胞毒性(CDC)、Fc受体结合、FcγR介导的效应子功能(如ADCC和抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP))、和细胞表面受体(例如，B细胞受体；BCR)的下调。此类效应子功能通常需要Fc区与结合结构域(例如抗体可变结构域)组合。

关于两种或更多种抗体，术语“与相同表位结合”意指抗体与相同氨基酸残基区段结合(如通过给定方法所确定的)。用本文所述的抗体确定抗体是否与“CD73上相同的表位”结合的技术包括例如表位作图方法(如对抗原:抗体复合物晶体进行X射线分析，从而提供表位的原子级解析)和氢/氘交换质谱(HDX-MS)。使用监测抗体与抗原片段(例如蛋白水解片段)或抗原突变变异体(其中由于抗原序列中氨基酸残基的修饰而导致的结合丧失通常被认为指示表位组分)的结合的其他方法(例如，丙氨酸扫描诱变-Cunningham&Wells(1985)Science 244:1081)。另外，也可以使用用于表位作图的计算组合方法。这些方法依赖于目的抗体从组合噬菌体展示肽文库中亲和分离特定短肽的能力。

“与另一种抗体竞争结合靶标”的抗体是指抑制(部分或完全)另一种抗体与靶标结合的抗体。两种抗体是否彼此竞争结合靶标，即，一种抗体是否抑制其他抗体与靶标结合或抑制到何种程度，可以使用已知的竞争实验来确定。在某些实施方案中，抗体与另一种抗体竞争与靶标的结合并且抑制另一种抗体与靶标的结合至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。抑制或竞争的水平可能会有所不同，这取决于哪种抗体是“阻断抗体”(即首先与靶标孵育的冷抗体)。竞争测定可以例如如以下中所述的进行：EdHarlow和David Lane,Cold Spring Harb Protoc；2006；doi:10.1101/pdb.prot4277或EdHarlow和David Lane,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,美国纽约1999的“Using Antibodies”的第11章。竞争抗体与相同的表位、重叠的表位或相邻的表位(例如，通过位阻证明)结合。

其他竞争性结合测定包括：固相直接或间接放射免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见Stahli等人,Methods in Enzymology 9:242(1983))；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(参见Kirkland等人,J.Immunol.137:3614(1986))；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见Harlow和Lane,Antibodies:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Press(1988))；使用I-125标记的固相直接标记RIA(参见Morel等人,Mol.Immunol.25(1):7(1988))；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung等人,Virology 176:546(1990))；和直接标记的RIA(Moldenhauer等人,Scand.J.Immunol.32:77(1990))。

如本文所用，术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”是指与预定抗原上的表位结合而不与其他抗原结合的抗体。典型地，所述抗体(i)当通过例如在

如由抗体例如CD73拮抗剂抗体介导的抗体或受体(例如，CD73)的“内化速率”可以例如由内化的T

“多肽”是指包含至少两个连续连接的氨基酸残基的链，所述链的长度没有上限。蛋白质中的一个或多个氨基酸残基可以含有修饰，例如但不限于糖基化、磷酸化或二硫键。“蛋白质”可以包含一种或多种多肽。

如本文所用，术语“核酸分子”旨在包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链的或双链的，并且可以是cDNA。在某些实施方案中，DNA分子不涵盖天然存在的DNA分子。

还提供了本文所述的SEQ ID NO中列出的序列的“保守序列修饰”，即不消除由核苷酸序列编码的或含有氨基酸序列的抗体与抗原的结合的氨基酸序列修饰。此类保守序列修饰包括保守的核苷酸和氨基酸取代，以及核苷酸和氨基酸的添加和缺失。例如，可以通过本领域已知的标准技术(如定点诱变和PCR介导的诱变)将修饰引入本文所述的SEQ ID NO中。保守序列修饰包括保守氨基酸取代，其中将氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基替代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有以下项的氨基酸：碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性的侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)、以及芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，优选地将CD73拮抗剂抗体中的预测的非必需氨基酸残基用来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基替代。鉴定不消除抗原结合的核苷酸和氨基酸保守取代的方法是本领域熟知的(参见例如Brummell等人,Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi等人Protein Eng.12(10):879-884(1999)；和Burks等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:412-417(1997))。

在一个实施方案中，可以沿着CD73拮抗剂抗体编码序列的全部或部分随机引入突变(如通过饱和诱变)，并且可以针对改善的结合活性筛选所得的修饰的CD73拮抗剂抗体。

对于多肽，术语“实质同源性”指示当最佳比对和比较时，两个多肽或其指定的序列在至少约80％的氨基酸、通常至少约90％至95％、以及更优选至少约98％至99.5％的氨基酸中相同，其中具有适当的氨基酸插入或缺失。

两个序列之间的同一性百分比是当序列进行最佳比对时序列共有的相同位置数的函数(即，同源性％＝相同位置数/总位置数x 100)，其中确定的最佳比对考虑了空位的数量以及每个空位的长度，需要引入这些空位以实现两个序列的最佳比对。序列的比较和两个序列之间的同一性百分比的确定可以使用数学算法来完成，如以下非限制性例子中所描述的。

可以使用GCG软件包(可以在http://www.gcg.com上获得)中的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP矩阵和空位权重40、50、60、70或80和长度权重1、2、3、4、5或6来确定两个核苷酸序列之间的同一性百分比。也可以使用已并入ALIGN程序(2.0版)的E.Meyers和W.Miller(CABIOS,4:11-17(1989))的算法，使用PAM120权重残基表、空位长度罚分12和空位罚分4来确定两个核苷酸或氨基酸序列之间的同一性百分比。此外，可以使用已并入GCG软件包(可以在http://www.gcg.com上获得)中的GAP程序中的Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.(48):444-453(1970))的算法，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵以及空位权重16、14、12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6来确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比。

本文所述的蛋白质序列还可以用作“查询序列”，以在公共数据库中进行搜索从而例如鉴定相关序列。可以使用Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215:403-10的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)进行此类搜索。BLAST核苷酸搜索可用NBLAST程序来进行，得分＝100，字长＝12，以获得与本文所述的核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白质搜索可用XBLAST程序来进行，得分＝50，字长＝3，以获得与本文所述的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的空位比对，可以如Altschul等人,(1997)Nucleic Acids Res.25(17):3389-3402中所描述的使用空位BLAST(Gapped BLAST)。当使用BLAST和空位BLAST程序时，可以使用各程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见www.ncbi.nlm.nih.gov.

“免疫应答”是指脊椎动物内针对外来因子的生物应答，所述应答保护生物免受这些因子和由其引起的疾病的侵害。免疫应答是由免疫系统的细胞(例如，T淋巴细胞、B淋巴细胞、天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、树突细胞或嗜中性粒细胞)和通过这些细胞或肝脏中的任何一种产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用介导的，所述作用导致选择性靶向、结合、损伤、破坏和/或消除脊椎动物中侵入的病原体、感染病原体的细胞或组织、癌性或其他异常细胞，或者在自身免疫性或病理性炎症的情况下导致选择性靶向、结合、损伤、破坏和/或消除正常的人细胞或组织。免疫应答或反应包括例如T细胞(例如效应T细胞(如CD4+或CD8+T细胞)或Th细胞)的激活或抑制，或Treg细胞的抑制。

“免疫调节剂”(“immunomodulator”或“immunoregulator”)是指可以参与调制、调节或修饰免疫应答的药剂，例如信号传导途径的组分。“调制”、“调节”或“修饰”免疫应答是指免疫系统的细胞或这种细胞(例如，效应T细胞)的活性的任何改变。这种调制包括对免疫系统的刺激或抑制，这可以通过各种细胞类型数量的增加或减少、这些细胞的活性的增加或降低或免疫系统内可能发生的任何其他变化来表现。已经鉴定了抑制性和刺激性免疫调节剂，其中一些在肿瘤微环境中可能具有增强的功能。所述免疫调节剂可以位于T细胞的表面。“免疫调节靶标”(“immunomodulatory target”或“immunoregulatory target”)是如下一种免疫调节剂，其被靶向用于与物质、药剂、部分、化合物或分子结合，并且所述免疫调节靶标的活性通过物质、药剂、部分、化合物或分子的结合而改变。免疫调节靶标包括例如细胞表面上的受体(“免疫调节受体”)和受体配体(“免疫调节配体”)。

增加的刺激免疫应答或免疫系统的能力可能是由于增强的T细胞共刺激受体的激动剂活性和/或增强的抑制性受体的拮抗剂活性导致的。增加的刺激免疫应答或免疫系统的能力可以在测量免疫应答的测定，例如测量细胞因子或趋化因子释放、细胞溶解活性(在靶细胞上直接测定的或经由检测CD107a或颗粒酶间接测定的)和增殖的变化的测定中通过EC50或最大活性水平的倍数增加来反映。刺激免疫应答或免疫系统活性的能力可以增强至少10％、30％、50％、75％、2倍、3倍、5倍或更多。

“免疫疗法”是指通过包括诱导、增强、抑制或以其他方式修饰免疫应答的方法治疗患有疾病或者有感染疾病或遭受疾病复发风险的受试者。

如本文所用，术语“给予”是指使用本领域技术人员已知的任何不同方法和递送系统将包含治疗剂的组合物物理引入受试者。本文所述的抗体的优选给予途径包括静脉内、腹膜内、肌内、皮下、脊髓或其他肠胃外给予途径，例如通过注射或输注。如本文所用，短语“肠胃外给予”意指除了肠给予和局部给予之外，通常通过注射的给予模式，并且包括而不限于静脉内、腹膜内、肌内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眼眶内、心脏内、皮内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外以及胸骨内注射和输注以及体内电穿孔。可替代地，本文所述的抗体可以经由非肠胃外途径(如局部、表皮或粘膜给予途径)给予，例如鼻内、口服、阴道、直肠、舌下或局部给予。给予还可以例如进行一次、多次和/或经一个或多个延长的时间段。

如本文所用，术语“抑制”或“阻断”(例如，指抑制/阻断CD73结合或活性)可互换使用，并且涵盖部分和完全抑制/阻断。

如本文所用，“癌症”是指广泛的一组疾病，其特征在于体内异常细胞的不受控制的生长。不受调节的细胞分裂可导致恶性肿瘤或细胞的形成，所述恶性肿瘤或细胞侵入邻近组织并且可以通过淋巴系统或血流转移到身体的远端部分。

如本文所用，术语“治疗”(“treat”、“treating”和“treatment”)是指对受试者进行的任何类型的干预或过程，目的是逆转、减轻、缓解、抑制或减缓或防止症状、并发症、病症或与疾病有关的生化指标的进展、发展、严重程度或复发。预防是指向未患疾病的受试者给予以预防疾病的发生或(如果发生疾病)使疾病的影响减至最小。

“血液恶性肿瘤”包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或淋巴恶性肿瘤以及脾和淋巴结的癌症。示例性淋巴瘤包括B细胞淋巴瘤和T细胞淋巴瘤两者。B细胞淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphomas)和大多数非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphomas)两者。B细胞淋巴瘤的非限制性例子包括弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤、小细胞淋巴细胞淋巴瘤(与慢性淋巴细胞性白血病重叠)、套细胞淋巴瘤(MCL)、伯基特淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、纵隔大B细胞淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症(

将术语“有效剂量”(“effective dose”或“effective dosage”)定义为足以达到或至少部分达到所需效果的量。“治疗有效量”或“治疗有效剂量”的药物或治疗剂是当单独地或与另一种治疗剂组合使用时，促进通过疾病症状的严重程度的降低、无疾病症状时期的频率和持续时间的增加或由于疾病困扰引起的损伤或残疾的预防所证实的疾病消退的任何量的药物。关于实体瘤，有效量包括足以引起肿瘤缩小和/或降低肿瘤生长速率(诸如抑制肿瘤生长)或者预防或延迟其他不想要的细胞增殖的量。在某些实施方案中，有效量是足以延迟肿瘤发展的量。在某些实施方案中，有效量是足以预防或延迟肿瘤复发的量。有效量可以在一次或多次给予中给予。药物或组合物的有效量可以：(i)减少癌细胞的数目；(ii)减小肿瘤大小；(iii)抑制、延缓、减缓到一定程度并且可以阻止癌细胞浸润到外周器官中；(iv)抑制即减缓到一定程度并且可以阻止肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)预防或延迟肿瘤的发生和/或复发；和/或(vii)将与癌症相关的一种或多种症状缓解到一定程度。在一个例子中，“有效量”是临床证明显著减少癌症或减缓癌症(如晚期实体瘤)进展的CD73拮抗剂抗体的量和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的量的组合。

如本文所用，术语“固定剂量(fixed dose)”、“平剂量(flat dose)”和“平固定剂量(flat-fixed dose)”可互换使用，并且是指在不考虑患者体重或体表面积(BSA)的情况下向患者给予的剂量。因此，固定或平剂量不以mg/kg剂量提供，而是以药剂(例如，CD73拮抗剂抗体和/或PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体)的绝对量提供。

“预防有效量”或“预防有效剂量”的药物是当单独地或与另一种治疗剂组合给予至处于发展疾病或发生疾病复发的风险的受试者时，抑制疾病的发展或复发的量的药物。可以使用本领域技术人员已知的各种方法评价治疗剂或预防剂促进疾病消退或抑制疾病发展或复发的能力，如在临床试验期间的人类受试者中、在预测人类中的功效的动物模型系统中、或通过测定药剂在体外测定中的活性来评价。

举例来说，抗癌剂是在受试者中减缓癌症进展或促进癌症消退的药物。在优选的实施方案中，治疗有效量的药物促进癌症消退至消除癌症的程度。“促进癌症消退”意指单独地或与抗肿瘤剂组合给予有效量的药物导致肿瘤生长或尺寸的减小、肿瘤坏死、至少一种疾病症状的严重程度降低、无疾病症状时期的频率和持续时间的增加、由于疾病困扰引起的损伤或伤残的预防、或者患者中疾病症状以其他方式的改善。药理学有效性是指药物促进患者中癌症消退的能力。生理安全性是指由药物的给予引起的在细胞、器官和/或生物水平上可接受的低水平毒性或其他不利生理作用(不利作用)。

对于肿瘤的治疗，举例来说，相对于未治疗的受试者，治疗有效量或剂量的药物优选抑制细胞生长或肿瘤生长至少约20％、更优选至少约40％、甚至更优选至少约60％、以及再更优选至少约80％。在最优选的实施方案中，治疗有效量或剂量的药物完全抑制细胞生长或肿瘤生长，即，优选100％抑制细胞生长或肿瘤生长。可以使用下文描述的测定来评价化合物抑制肿瘤生长的能力。可替代地，可以通过检查化合物抑制细胞生长的能力来评价组合物的这种特性，可以通过熟练从业者已知的测定在体外测量这种抑制。在本文所述的其他优选的实施方案中，可以观察到肿瘤消退并且可以持续至少约20天、更优选至少约40天、或甚至更优选至少约60天的时间段。

术语“患者”和“受试者”是指人。例如，本文所述的方法和组合物可用于治疗患有癌症(如晚期实体瘤)的受试者或患者。

替代方案(例如“或”)的使用应理解为意指替代方案中任一者、两者或其任何组合。

如本文所用，不定冠词“一个/种”(“a”或“an”)应被理解为是指任何所列举或枚举的组分中的“一个/种或多个/种”。

如本文所用，在数值或范围的上下文中，术语“约”意指数值或范围的±10％。

除非另外指明，否则本文所述的任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应理解为包括所述范围内的任何整数的值，并且在适当时包括其分数(如整数的十分之一和百分之一)。

在以下小节中将进一步详细描述本文所述的各个方面。

I.治疗方法

本文提供了一种用CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)治疗患有癌症(例如，晚期实体瘤)的受试者的方法。本文所述的治疗例如组合治疗可用于在例如经历过一种或多种先前免疫疗法(例如抗PD-1疗法)的患者中抑制肿瘤细胞增殖。用CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)治疗患者可以减少患者的肿瘤生长和转移。如实施例中所述，用CD73拮抗剂抗体(例如CD73.A)和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(纳武单抗)的组合治疗人癌症患者会产生出人意料的快速且持续的CD73拮抗剂抗体-靶标接合、CD73内化、CD73细胞表面水平的丧失、可溶性CD73的丧失、肿瘤细胞和肿瘤脉管系统上CD73酶活性的丧失以及肿瘤消退。

因此，本文提供了一种治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者给予治疗有效剂量的CD73拮抗剂抗体，其中所述方法导致以下中的一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7或8种)：

(a)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体后3、4、5或6周实现所述CD73拮抗剂抗体的稳态血清浓度；

(b)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的24小时内例如在外周B细胞如CD19 B细胞上实现所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有；

(c)在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂抗体后，所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有持续至少30天；

(d)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的24小时内，无法检测到外周B细胞例如CD19 B细胞上的CD73的细胞表面水平；

(e)在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂抗体后，多达至少30天无法检测到CD73的细胞表面水平；

(f)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的6小时内，无法检测到游离可溶性CD73；

(g)在包括所述CD73拮抗剂抗体的最后一个治疗周期结束时，无法检测到游离可溶性CD73；以及

(h)与给予所述CD73拮抗剂抗体之前相比，肿瘤细胞和/或肿瘤脉管系统中CD73酶活性降低。

本文还提供了一种治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者给予治疗有效剂量的CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的组合，其中所述方法导致以下中的一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7或8种)：

(a)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体后3、4、5或6周实现所述CD73拮抗剂抗体的稳态血清浓度；

(b)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的24小时内例如在外周B细胞如CD19 B细胞上实现所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有；

(c)在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂抗体后，所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有持续至少30天；

(d)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的24小时内，无法检测到外周B细胞例如CD19 B细胞上的CD73的细胞表面水平；

(e)在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂抗体后，多达至少30天无法检测到CD73的细胞表面水平；

(f)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的6小时内，无法检测到游离可溶性CD73；

(g)在包括所述CD73拮抗剂抗体的最后一个治疗周期结束时，无法检测到游离可溶性CD73；以及

(h)与给予所述CD73拮抗剂抗体之前相比，肿瘤细胞和/或肿瘤脉管系统中CD73酶活性降低。

本文进一步提供了一种治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者给予每周一次或每两周一次约100-1800mg(例如，150-1600mg、150-1200mg、150-600mg、150-300mg、300-1600mg、300-1200mg、300-600mg、600to 1200mg、600-1200mg、100mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、约100mg、约150mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量的CD73拮抗剂抗体和每两周一次240mg或约240mg、每三周一次360mg或约360mg或每四周一次480mg或约480mg的固定剂量的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的组合，其中所述方法导致以下中的一种或多种：

(a)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体后3、4、5或6周实现所述CD73拮抗剂抗体的稳态血清浓度；

(b)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的24小时内例如在外周B细胞如CD19 B细胞上实现所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有；

(c)在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂抗体后，所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有持续至少30天；

(d)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的24小时内，无法检测到外周B细胞例如CD19 B细胞上的CD73的细胞表面水平；

(e)在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂抗体后，多达至少30天无法检测到CD73的细胞表面水平；

(f)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的6小时内，无法检测到游离可溶性CD73；

(g)在包括所述CD73拮抗剂抗体的最后一个治疗周期结束时，无法检测到游离可溶性CD73；以及

(h)与给予所述CD73拮抗剂抗体之前相比，肿瘤细胞和/或肿瘤脉管系统中CD73酶活性降低。

在某些实施方案中，给予CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的组合治疗持续1-10个周期或更多(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个周期)，其中一个周期是例如28天或4周。

在某些实施方案中，在第一剂量的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体之前的1-3周(例如2周)内，给予一个或多个(例如1-3、1-2、1、2、3个)剂量的CD73拮抗剂抗体(“CD73抗体单一疗法导入”)。

在某些实施方案中，按以下组合剂量中的一种向患有癌症(例如，晚期实体瘤)的受试者给予所述CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体：约100-1800mg的CD73拮抗剂抗体Q1W和约240-480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q2W、约100-1800mg的CD73拮抗剂抗体Q2W和约240-480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q2W、约100-1800mg的CD73拮抗剂抗体Q1W和约240-480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q4W、约100-1800mg的CD73拮抗剂抗体Q2W和约240-480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q4W、约150mg的CD73拮抗剂抗体Q1W和约240mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q2W；约300mg的CD73拮抗剂抗体Q1W和约240mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q2W；约600mg的CD73拮抗剂抗体Q1W和约240mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q2W；约1200mg的CD73拮抗剂抗体Q1W和约240mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q2W；约1600mg的CD73拮抗剂抗体Q1W和约240mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q2W；约150mg的CD73拮抗剂抗体Q1W和约480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q4W；约300mg的CD73拮抗剂抗体Q1W和约480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q4W；约600mg的CD73拮抗剂抗体Q1W和约480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q4W；约1200mg的CD73拮抗剂抗体Q1W和约480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q4W；约1600mg的CD73拮抗剂抗体Q1W和约480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q4W；约150mg的CD73拮抗剂抗体Q2W和约240mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q2W；约300mg的CD73拮抗剂抗体Q2W和约240mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q2W；约600mg的CD73拮抗剂抗体Q2W和约240mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q2W；约1200mg的CD73拮抗剂抗体Q2W和约240mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q2W；约1600mg的CD73拮抗剂抗体Q2W和约240mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q2W；约150mg的CD73拮抗剂抗体Q2W和约480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q4W；约300mg的CD73拮抗剂抗体Q2W和约480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q4W；约600mg的CD73拮抗剂抗体Q2W和约480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q4W；约1200mg的CD73拮抗剂抗体Q2W和约480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q4W；约1600mg的CD73拮抗剂抗体Q2W和约480mg的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体Q4W。

在某些实施方案中，在同一天，例如每个周期的第1天，给予CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。在某些实施方案中，同时给予(例如，作为单一配制品)CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。可替代地，可以将CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体配制用于分开给予，以及同时或顺序给予(例如，将一种抗体在给予第二抗体之前的约30分钟内给予)。例如，可以首先给予PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体，并且然后(例如，紧随其后)给予CD73拮抗剂抗体，反之亦然。在某些实施方案中，在给予CD73拮抗剂抗体之前给予PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。在一个实施方案中，在给予CD73拮抗剂抗体之后给予PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。在一个实施方案中，同时给予CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。此类同时或顺序给予可以导致两种抗体同时存在于治疗的患者中。

如上所述，可以在用单独的CD73拮抗剂抗体的治疗(“CD73抗体单一疗法导入”)期后，进行组合治疗。例如，在开始以Q1W或Q2W进行组合治疗之前，可以将一个或多个(例如1-3或1-2个)剂量的CD73拮抗剂抗体作为单一疗法给予1-4周(例如1、2、3或4周)或1-3周(例如1、2或3周)。在特定实施方案中，在以Q1W或Q2W开始组合治疗之前，将CD73拮抗剂抗体作为单一疗法给予2周。在一些实施方案中，所述导入阶段是2周周期。在某些实施方案中，所述导入阶段是一个2周周期。

在受试者中治疗癌症(例如，晚期实体瘤)的合适方案包括，例如，向受试者给予治疗有效量的以下各项：

(a)CD73拮抗剂抗体，其包含具有SEQ ID NO:6中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:7中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及

(b)PD-1拮抗剂抗体，其包含具有SEQ ID NO:18中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:19中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，

其中，在“CD73抗体单一疗法导入”中，在第一剂量的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体之前的1-3周(例如，1、2或3周)内任选地给予一个或多个(例如1-3、1-2、1、2、3个)剂量的CD73拮抗剂抗体，持续例如一个2周周期。

在某些实施方案中，以约100-1800mg(例如，150-1600mg、150-1200mg、150-600mg、150-300mg、300-1600mg、300-1200mg、300-600mg、600至1200mg、600-1200mg、100mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、约100mg、约150mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量每周一次给予CD73拮抗剂抗体，所述CD73拮抗剂抗体包含具有SEQID NO:6中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:7中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；并且以240mg或约240mg的固定剂量每两周一次给予PD-1拮抗剂抗体，所述PD-1拮抗剂抗体包含具有SEQ ID NO:18中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:19中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域。

在某些实施方案中，以约100-1800mg(例如，150-1600mg、150-1200mg、150-600mg、150-300mg、300-1600mg、300-1200mg、300-600mg、600至1200mg、600-1200mg、100mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、约100mg、约150mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量每周一次给予CD73拮抗剂抗体，所述CD73拮抗剂抗体包含具有SEQID NO:6中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:7中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；并且以480mg或约480mg的固定剂量每四周一次给予PD-1拮抗剂抗体，所述PD-1拮抗剂抗体具有SEQ ID NO:18中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:19中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域。

在某些实施方案中，以约100-1800mg(例如，150-1600mg、150-1200mg、150-600mg、150-300mg、300-1600mg、300-1200mg、300-600mg、600至1200mg、600-1200mg、100mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、约100mg、约150mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量每两周一次给予CD73拮抗剂抗体，所述CD73拮抗剂抗体包含具有SEQ ID NO:6中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和SEQ ID NO:7中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；并且以240mg或约240mg的固定剂量每两周一次给予PD-1拮抗剂抗体，所述PD-1拮抗剂抗体包含具有SEQ ID NO:18中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和SEQ ID NO:19中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域。

在某些实施方案中，以约100-1800mg(例如，150-1600mg、150-1200mg、150-600mg、150-300mg、300-1600mg、300-1200mg、300-600mg、600至1200mg、600-1200mg、100mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、约100mg、约150mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量每两周一次给予CD73拮抗剂抗体，所述CD73拮抗剂抗体包含具有SEQ ID NO:6中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:7中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；并且以480mg或约480mg的固定剂量每四周一次给予PD-1拮抗剂抗体，所述PD-1拮抗剂抗体包含具有SEQ ID NO:18中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:19中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域。

在一个实施方案中，以600mg或约600mg的固定剂量每两周一次给予CD73拮抗剂抗体，所述CD73拮抗剂抗体包含具有SEQ ID NO:6中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:7中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；并且以240mg或约240mg每两周一次给予PD-1拮抗剂抗体。

在一个实施方案中，以600mg或约600mg的固定剂量每两周一次给予CD73拮抗剂抗体，所述CD73拮抗剂抗体包含具有SEQ ID NO:6中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:7中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；并且以480mg或约480mg每四周一次给予PD-1拮抗剂抗体。

在某些实施方案中，用CD73拮抗剂抗体和PD-1拮抗剂抗体的组合治疗包含至少一个给予周期。在某些实施方案中，所述至少一个给予周期是28天的时间段。在某些实施方案中，所述治疗由至多6个周期(即1个、2个、3个、4个、5个或6个周期)组成。在某些实施方案中，所述治疗由至多10个周期(即1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个周期)组成。

在某些实施方案中，在第一剂量的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如，纳武单抗)之前的1-3周(例如，1、2或3周)内，给予一个或多个(例如，1-3、1-2、1、2、3个)剂量的CD73拮抗剂抗体(例如，CD73单一疗法导入)，所述CD73拮抗剂抗体包含具有SEQ ID NO:6中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，和具有SEQ ID NO:7中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域。在一些实施方案中，所述导入阶段是2周周期。在某些实施方案中，所述导入阶段是一个2周周期或两个2周周期。

在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含含有分别在SEQ ID NO:8、9和10中列出的氨基酸序列的重链CDR1、CDR2和CDR3结构域和含有分别在SEQ ID NO:11、12和13中列出的氨基酸序列的轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域。在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含分别在SEQ ID NO:6和7中列出的重链可变区序列和轻链可变区序列。在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含SEQ ID NO:3或4中列出的重链序列和SEQ ID NO:5中列出的轻链序列。在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含与分别在SEQ ID NO:6和7中列出的重链可变区序列和轻链可变区序列至少85％、90％、95％、98％或99％相同的重链可变区序列和轻链可变区序列。在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含与SEQ ID NO:3或4中列出的重链序列和SEQ ID NO:5中列出的轻链序列至少85％、90％、95％、98％或99％相同的重链序列和轻链序列。

在某些实施方案中，所述PD-1拮抗剂抗体包含含有分别在SEQ ID NO:20、21和22中列出的氨基酸序列的重链CDR1、CDR2和CDR3结构域和含有分别在SEQ ID NO:23、24和25中列出的氨基酸序列的轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域。在某些实施方案中，所述PD-1拮抗剂抗体包含分别在SEQ ID NO:18和19中列出的重链可变区序列。在某些实施方案中，所述PD-1拮抗剂抗体包含SEQ ID NO:15或16中列出的重链序列和SEQ ID NO:17中列出的轻链序列。在某些实施方案中，所述PD-1拮抗剂抗体包含与分别在SEQ ID NO:18和19中列出的重链可变区序列和轻链可变区序列至少85％、90％、95％、98％或99％相同的重链可变区序列和轻链可变区序列。在某些实施方案中，所述PD-1拮抗剂抗体包含与SEQ ID NO:15或16中列出的重链序列和SEQ ID NO:17中列出的轻链序列至少85％、90％、95％、98％或99％相同的重链序列和轻链序列。

在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体是CD73.A，并且所述PD-1拮抗剂抗体是纳武单抗，并且按以下组合剂量之一给予所述两种抗体：约100-1800mg的CD73.A Q1W和约240-480mg的纳武单抗Q2W、约100-1800mg的CD73.A Q2W和约240-480mg的纳武单抗Q2W、约100-1800mg的CD73.A Q1W和约240-480mg的纳武单抗Q4W、约100-1800mg的CD73.A Q2W和约240-480mg的纳武单抗Q4W、约150mg的CD73.A Q1W和约240mg的纳武单抗Q2W；约300mg的CD73.A Q1W和约240mg的纳武单抗Q2W；约600mg的CD73.A Q1W和约240mg的纳武单抗Q2W；约1200mg的CD73.A Q1W和约240mg的纳武单抗Q2W；约1600mg CD73.A Q1W和约240mg的纳武单抗Q2W；约150mg的CD73.A Q1W和约480mg的纳武单抗Q4W；约300mg的CD73.A Q1W和约480mg的纳武单抗Q4W；约600mg的CD73.A Q1W和约480mg的纳武单抗Q4W；约1200mg的CD73.A Q1W和约480mg的纳武单抗Q4W；约1600mg的CD73.A Q1W和约480mg的纳武单抗Q4W；约150mg的CD73.A Q2W和约240mg的纳武单抗Q2W；约300mg的CD73.A Q2W和约240mg的纳武单抗Q2W；约600mg的CD73.A Q2W和约240mg的纳武单抗Q2W；约1200mg的CD73.A Q2W和约240mg的纳武单抗Q2W；约1600mg的CD73.A Q2W和约240mg的纳武单抗Q2W；约150mg的CD73.A Q2W和约480mg的纳武单抗Q4W；约300mg的CD73.A Q2W和约480mg的纳武单抗Q4W；约600mg的CD73.A Q2W和约480mg的纳武单抗Q4W；约1200mg的CD73.A Q2W和约480mg的纳武单抗Q4W；约1600mg的CD73.A Q2W和约480mg的纳武单抗Q4W。

除了包含本文所述的CDR序列的那些以外的CD73拮抗剂抗体也可用于治疗如本文所述的癌症。例如，WO 2016/075099中所述的MEDI9447或Phen0203hIgG1，和WO 2016/055609、WO 2016/081748和WO 2017/152085中所述的CD73抗体可以如本文所述地组合和/或给予和/或使用。

除包含纳武单抗的CDR序列的那些之外的PD-1/PD-L1轴拮抗剂也可以用于治疗如本文所述的癌症。例如，可以使用派姆单抗、阿维鲁单抗、度伐鲁单抗、阿特珠单抗或PDR-001。

在某些实施方案中，将CD73拮抗剂和/或PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体配制用于静脉内给予。

在某些实施方案中，将CD73拮抗剂抗体和/或PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体配制用于皮下给予。

在某些实施方案中，在同一天至少一次给予CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。在某些实施方案中，当在同一天给予时，至少一次同时给予CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。在某些实施方案中，当在同一天给予时，至少一次顺序给予CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。

在某些实施方案中，在第一次给予CD73拮抗剂抗体例如在开始用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合治疗或开始CD73抗体单一疗法导入之后的3-6周(例如3、4、5或6周)内实现CD73拮抗剂抗体的稳态浓度。

在某些实施方案中，例如，当以约600mg或更大(例如，约600-1600mg，例如，600-1400mg、600-1200mg、600-1000mg、600-800mg、800-1600mg、800-1400mg、800-1200mg、800-1000mg、1000-1600mg、1000-1400mg、1000-1200mg、1200-1600mg、1200-1400mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量给予抗体时，实现了CD73拮抗剂抗体的靶标介导的药物处置(TMDD)。在一些实施方案中，在第一次给予CD73拮抗剂抗体例如在开始用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合治疗或开始CD73抗体单一疗法导入之后的3-6周(例如3、4、5或6周)内实现TMDD饱和。

在某些实施方案中，在给予CD73拮抗剂抗体后实现了快速的靶标接合。在第一次给予CD73拮抗剂抗体之后，例如在开始用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合治疗或开始CD73抗体单一疗法导入之后，立即实现CD73拮抗剂抗体的例如至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、80％-95％、80％-90％、80％-85％、85％-95％、85％-90％或完全受体占有。在某些实施方案中，在第一次给予CD73拮抗剂抗体例如在开始用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合治疗或开始CD73抗体单一疗法导入之后的24小时内实现至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、80％-95％、80％-90％、80％-85％、85％-95％、85％-90％或完全受体占有。在某些实施方案中，例如，当以约150mg或更大(例如，150-1600mg，例如，150-1400mg、150-1200mg、150-1000mg、150-800mg、150-600mg、150-400mg、150-300mg、150-200mg、300-1600mg、300-1400mg、300-1200mg、300-1000mg、300-800mg、300-600mg、600-1600mg、600-1400mg、600-1200mg、600-1000mg、600-800mg、800-1600mg、800-1400mg、800-1200mg、800-1000mg、1000-1600mg、1000-1400mg、1000-1200mg、1200-1600mg、1200-1400mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg或1600mg、约150mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量给予CD73拮抗剂抗体时，在第一次给予CD73拮抗剂抗体例如在开始用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合治疗或开始CD73抗体单一疗法导入之后的24小时内实现至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、80％-95％、80％-90％、80％-85％、85％-95％、85％-90％或完全受体占有。在某些实施方案中，在外周B细胞如CD19 B细胞上测量受体占有。

在某些实施方案中，在给予CD73拮抗剂抗体后，CD73拮抗剂抗体的受体占有被维持很长时间段。例如，当以约150mg或更大(例如，150-1600mg，例如，150-1400mg、150-1200mg、150-1000mg、150-800mg、150-600mg、150-400mg、150-300mg、150-200mg、300-1600mg、300-1400mg、300-1200mg、300-1000mg、300-800mg、300-600mg、600-1600mg、600-1400mg、600-1200mg、600-1000mg、600-800mg、800-1600mg、800-1400mg、800-1200mg、800-1000mg、1000-1600mg、1000-1400mg、1000-1200mg、1200-1600mg、1200-1400mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg或1600mg、约150mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量给予CD73拮抗剂抗体时，在给予最后剂量的CD73拮抗剂抗体之后，例如在给予最后剂量的CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的组合治疗或CD73抗体单一疗法导入之后，例如如在外周B细胞(例如，CD19 B细胞)上测量的，CD73拮抗剂抗体的例如至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、80％-95％、80％-90％、80％-85％、85％-95％、85％-90％或完全受体占有持续至少1-30天、15-30天、20-30天、30-60天或更长时间。

在某些实施方案中，在第一次给予CD73拮抗剂抗体之后，例如在开始用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的组合治疗或开始CD73抗体单一疗法导入之后，CD73的细胞表面水平快速降低至不可检测的水平。在第一次给予CD73拮抗剂抗体之后例如在开始用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合治疗或开始CD73抗体单一疗法导入之后的12小时、16小时、20小时、24小时、12-16小时、12-20小时、12-24小时、16-20小时、16-24小时或20-24小时内，例如CD73的细胞表面水平降低至CD73基线细胞表面水平的约15％、约10％、约5％、约5％-15％、约10％-15％、约5％-10％或0％(不可检测)。在某些实施方案中，例如，当以约150mg或更大(例如，150-1600mg，例如，150-1400mg、150-1200mg、150-1000mg、150-800mg、150-600mg、150-400mg、150-300mg、150-200mg、300-1600mg、300-1400mg、300-1200mg、300-1000mg、300-800mg、300-600mg、600-1600mg、600-1400mg、600-1200mg、600-1000mg、600-800mg、800-1600mg、800-1400mg、800-1200mg、800-1000mg、1000-1600mg、1000-1400mg、1000-1200mg、1200-1600mg、1200-1400mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg或1600mg、约150mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量给予CD73拮抗剂抗体时，在第一次给予CD73拮抗剂抗体之后例如在开始用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合治疗或开始CD73抗体单一疗法导入之后的12小时、16小时、20小时、24小时、12-16小时、12-20小时、12-24小时、16-20小时、16-24小时或20-24小时内，CD73的细胞表面水平降低至CD73基线细胞表面水平的约15％、约10％、约5％、约5％-15％、约10％-15％、约5％-10％或0％(不可检测)。在某些实施方案中，在外周B细胞如CD19B细胞上测量CD73的细胞表面水平。

在某些实施方案中，组合治疗在持续的时间段内降低CD73的细胞表面水平。例如，当以150mg或更大(例如，150-1600mg，例如，150-1400mg、150-1200mg、150-1000mg、150-800mg、150-600mg、150-400mg、150-300mg、150-200mg、300-1600mg、300-1400mg、300-1200mg、300-1000mg、300-800mg、300-600mg、600-1600mg、600-1400mg、600-1200mg、600-1000mg、600-800mg、800-1600mg、800-1400mg、800-1200mg、800-1000mg、1000-1600mg、1000-1400mg、1000-1200mg、1200-1600mg、1200-1400mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg或1600mg、约150mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量给予CD73拮抗剂抗体时，在给予最后剂量的CD73拮抗剂抗体之后，例如在给予最后剂量的CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的组合治疗或CD73抗体单一疗法导入之后，例如如在外周B细胞(例如，CD19 B细胞)上测量的，例如CD73的细胞表面水平保持在CD73基线细胞表面水平的约15％、约10％、约5％、约5％-15％、约10％-15％、约5％-10％或0％(不可检测)至少1-30天、15-30天、20-30天、30-60天或更长时间。

在某些实施方案中，在第一次给予CD73拮抗剂抗体之后，例如在开始用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合治疗或开始CD73抗体单一疗法导入之后，游离可溶性CD73(sCD73)的水平立即快速降低至不可检测的水平。在第一次给予CD73拮抗剂抗体之后例如在开始用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合治疗或开始CD73抗体单一疗法导入之后的2小时、4小时、6小时、8小时、2-8小时、2-6小时、2-4小时、4-8小时或4-6小时内，例如sCD73的水平降低至基线sCD73水平的约15％、约10％、约5％、约5％-15％、约10％-15％、约5％-10％或0％(不可检测)。在某些实施方案中，例如，当以约600mg或更大(例如，约600-1600mg，例如，600-1400mg、600-1200mg、600-1000mg、600-800mg、800-1600mg、800-1400mg、800-1200mg、800-1000mg、1000-1600mg、1000-1400mg、1000-1200mg、1200-1600mg、1200-1400mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量给予CD73拮抗剂抗体时，在第一次给予CD73拮抗剂抗体例如在开始用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合治疗或开始CD73抗体单一疗法导入之后的2小时、4小时、6小时、8小时、2-8小时、2-6小时、2-4小时、4-8小时或4-6小时内，sCD73的水平降低至sCD73基线水平的约15％、约10％、约5％、约5％-15％、约10％-15％、约5％-10％或0％(不可检测)。

在某些实施方案中，所述组合治疗导致sCD73水平的持续降低。例如，当以约600mg或更大(例如，约600-1600mg，例如，600-1400mg、600-1200mg、600-1000mg、600-800mg、800-1600mg、800-1400mg、800-1200mg、800-1000mg、1000-1600mg、1000-1400mg、1000-1200mg、1200-1600mg、1200-1400mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量给予CD73拮抗剂抗体时，例如sCD73的水平保持在sCD73基线水平的约15％、约10％、约5％、约5％-15％、约10％-15％、约5％-10％或0％(不可检测)，至少直到包括CD73拮抗剂抗体的最后一个治疗周期结束(例如，包括CD73拮抗剂抗体的最后一个治疗周期结束之后至少1-30天、15-30天、20-30天、30-60天或更长时间)，例如用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的组合治疗的最后一个治疗周期结束或CD73抗体单一疗法导入的最后一个治疗周期结束。

sCD73水平可通过例如以下方式测量：在用CD73拮抗剂抗体(例如CD73.A)治疗之前、期间、或之前和期间二者，从受试者获得样品，并且使样品与可以检测可溶性CD73的药剂(如抗CD73抗体)接触，并且确定血液或血清中可溶性CD73的水平。在某些实施方案中，检测可溶性CD73抗原的药剂不是向受试者给予用于治疗的抗体(或不包含相同的可变区)。

在某些实施方案中，与给予CD73拮抗剂抗体之前相比，在第一次给予CD73拮抗剂抗体之后，例如在开始用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合治疗或开始CD73抗体单一疗法导入之后，肿瘤细胞和/或肿瘤脉管系统中的CD73酶活性降低。在某些实施方案中，例如，当以约150mg或更大(例如，150-1600mg，例如，150-1400mg、150-1200mg、150-1000mg、150-800mg、150-600mg、150-400mg、150-300mg、150-200mg、300-1600mg、300-1400mg、300-1200mg、300-1000mg、300-800mg、300-600mg、600-1600mg、600-1400mg、600-1200mg、600-1000mg、600-800mg、800-1600mg、800-1400mg、800-1200mg、800-1000mg、1000-1600mg、1000-1400mg、1000-1200mg、1200-1600mg、1200-1400mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg或1600mg、约150mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的剂量给予CD73拮抗剂抗体时，与给予CD73拮抗剂抗体之前相比，在第一次给予CD73拮抗剂抗体之后，例如在开始用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合治疗或开始CD73抗体单一疗法导入之后，肿瘤细胞和/或肿瘤脉管系统中的CD73酶活性降低。

在例如WO 2016/081748和WO 2017/152085中描述了用于测量CD73拮抗剂抗体的血清浓度、CD73拮抗剂抗体的受体占有率、CD73的细胞表面水平、CD73内化、游离可溶性CD73水平和CD73酶活性的方法，将所述文献的内容通过引用以其整体特此并入。

在某些实施方案中，所述受试者已经接受了1、2、3或4种或更多种先前疗法，例如全身疗法。在某些实施方案中，所述受试者已经接受了一种或多种先前免疫疗法。在某些实施方案中，所述受试者是1、2、3或4种或更多种全身疗法或一种或多种先前免疫疗法难以治疗的。在一个实施方案中，所述一种或多种先前免疫疗法包括PD-1或PD-L1拮抗剂疗法，例如纳武单抗。

在某些实施方案中，所述受试者已在先前癌症疗法中或之后有进展，例如在先前免疫疗法中或之后有进展。在一些实施方案中，所述先前免疫疗法是检查点抑制剂疗法，例如PD-1或PD-L1拮抗剂疗法(例如，纳武单抗)。在一些实施方案中，所述先前免疫疗法不是PD-1或PD-L1拮抗剂疗法。

在某些实施方案中，所述癌症通常对免疫疗法有反应。在某些实施方案中，所述癌症通常不对免疫疗法有反应，例如通常不对PD-1/PD-L1轴拮抗剂(例如，纳武单抗)有反应。

在某些实施方案中，用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的组合治疗不会引起例如如在临床试验中确定的显著的治疗相关不良事件。

在某些实施方案中，向患有与选自以下的癌症相关的实体瘤的受试者给予CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体：结直肠癌、卵巢癌、肾细胞癌、头颈癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃食管癌、肝细胞癌、黑色素瘤、肛管表皮样癌、子宫内膜癌、胃癌、宫颈癌、胃食管交界部癌、肺泡软组织癌、胆管癌、食管癌、肝内胆管癌、平滑肌肉瘤、梅克尔细胞癌、鳞状细胞肛肠癌、舌鳞状细胞癌、头颈鳞状细胞癌(SCCHN)、和尿路上皮癌。在某些实施方案中，待治疗的患者具有活检可及的病变。在某些实施方案中，所述患者患有表达CD73的肿瘤。在某些实施方案中，所述患者患有表达高水平CD73的肿瘤，例如相对于具有与所述肿瘤的病因相同的病因的健康组织中的CD73水平而言更高水平的CD73。

在某些实施方案中，受试者患有癌症(例如肿瘤)，所述癌症呈PD-L1阳性，例如如用PD-L1 IHC 28-8pharmDx测定测量的具有≥1％、≥5％或≥50％的PD-L1表达水平。受试者可能患有具有高PD-L1表达的肿瘤，例如肿瘤比例得分(TPS)≥50％。在某些实施方案中，受试者患有TPS≥1％的肿瘤。可以通过FDA批准的商业试剂盒确定TPS。

因此，在某些实施方案中，在开始用CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1拮抗剂抗体组合)进行治疗之前，测量PD-L1的表达水平。例如，在某些实施方案中，本文所述的方法包括首先在患有癌症的受试者的肿瘤中测量PD-L1的表达水平的步骤，并且例如，如用例如PD-L1 IHC 28-8pharmDx测定所测量的，如果PD-L1的表达水平≥1％、≥5％、≥10％、≥25％或≥50％，则用治疗有效量的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)治疗所述受试者。

有待用CD73拮抗剂抗体(例如CD73.A)和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)的组合治疗的癌症可以是转移性癌症、难治性癌症(例如先前免疫疗法(例如，用阻断性CTLA-4或PD-1或PD-L1抗体难以治疗的癌症)和复发性癌症。

在某些实施方案中，所述癌症是微卫星稳定的。在某些实施方案中，如例如通过FoundationOne CDx所确定的，所述癌症具有高肿瘤突变负荷(≥10个突变/兆碱基，mut/mb)。在某些实施方案中，所述癌症具有≥1或≥5个突变/兆碱基，mut/mb。

在一实施方案中，待治疗的患者患有胰腺癌。因此，本文提供了一种治疗人类患者的癌症例如胰腺癌的方法，所述方法包括向所述患者给予有效量的以下各项：

(a)CD73拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:3或4中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的轻链，以及

(b)PD-1拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:15或16中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:17中列出的氨基酸序列的轻链(例如，纳武单抗)，

其中，在“CD73抗体单一疗法导入”中，在第一剂量的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体之前的1-3周(例如，1、2或3周)内给予一个或多个(例如1-3、1-2、1、2、3个)剂量的CD73拮抗剂抗体，持续例如一个2周周期，

其中，在CD73抗体单一疗法导入之后，将CD73拮抗剂抗体与PD-1拮抗剂抗体组合给予，所述CD73拮抗剂抗体是每周一次以约150-1600mg(例如，150-1200mg、150-600mg、150-300mg、300-1600mg、300-1200mg、300-600mg、600to 1200mg、600-1200mg、100mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、约100mg、约150mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量给予的，所述PD-1拮抗剂抗体是每两周一次以240mg或约240mg的固定剂量给予的或每四周一次以480mg或约480mg的固定剂量给予的，其中所述组合治疗由例如至多六个28天周期组成。在某些实施方案中，所述患者已经接受过一种或多种先前疗法或一种或多种先前免疫疗法来治疗癌症(例如，并且有进展)。

在一个实施方案中，本文提供了一种治疗人类患者的癌症例如胰腺癌的方法，所述方法包括向所述患者给予有效量的以下各项：

(a)CD73拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:3或4中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的轻链，以及

(b)PD-1拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:15或16中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:17中列出的氨基酸序列的轻链(例如，纳武单抗)，

其中，将CD73拮抗剂抗体与PD-1拮抗剂抗体组合给予，所述CD73拮抗剂抗体是每周一次以约150-1600mg(例如，150-1200mg、150-600mg、150-300mg、300-1600mg、300-1200mg、300-600mg、600to 1200mg、600-1200mg、100mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、约100mg、约150mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg)的固定剂量给予的，所述PD-1拮抗剂抗体是每两周一次以240mg或约240mg的固定剂量给予的或每四周一次以480mg或约480mg的固定剂量给予的，其中所述组合治疗由例如至多六个28天周期组成。在某些实施方案中，所述患者已经接受过一种或多种先前疗法或一种或多种先前免疫疗法来治疗癌症(例如，并且有进展)。

在一个实施方案中，本文提供了一种治疗人类患者的癌症例如胰腺癌的方法，所述方法包括向所述患者给予有效量的以下各项：

(a)CD73拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:3或4中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的轻链，以及

(b)PD-1拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:15或16中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:17中列出的氨基酸序列的轻链(例如，纳武单抗)，

其中，在“CD73抗体单一疗法导入”中，在第一剂量的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体之前的1-3周(例如，1、2或3周)内给予一个或多个(例如1-3、1-2、1、2、3个)剂量的CD73拮抗剂抗体，持续例如一个2周周期，

其中，在所述CD73抗体单一疗法导入后，将所述CD73拮抗剂抗体与所述PD-1拮抗剂抗体组合给予，所述CD73拮抗剂抗体是每两周一次以600mg或约600mg的固定剂量给予的，所述PD-1拮抗剂抗体是每两周一次以240mg或约240mg或每四周一次以480mg或约480mg的固定剂量给予的，其中所述组合疗法由例如至多六个28天周期组成。在某些实施方案中，所述患者已经接受过一种或多种先前疗法或一种或多种先前免疫疗法来治疗癌症(例如，并且有进展)。

在一个实施方案中，本文提供了一种治疗人类患者的癌症例如胰腺癌的方法，所述方法包括向所述患者给予有效量的以下各项：

(a)CD73拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:3或4中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的轻链，以及

(b)PD-1拮抗剂抗体，其包含含有SEQ ID NO:15或16中列出的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:17中列出的氨基酸序列的轻链(例如，纳武单抗)，

其中将所述CD73拮抗剂抗体与所述PD-1拮抗剂抗体组合给予，所述CD73拮抗剂抗体是每两周一次以600mg或约600mg的固定剂量给予的，所述PD-1拮抗剂抗体是每两周一次以240mg或约240mg或每四周一次以480mg或约480mg的固定剂量给予的，其中所述组合治疗由例如至多六个28天周期组成。在某些实施方案中，所述患者已经接受过一种或多种先前疗法或一种或多种先前免疫疗法来治疗癌症(例如，并且有进展)。

在某些实施方案中，上述方法导致以下中的一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7或8种)：

(a)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体后3、4、5或6周实现所述CD73拮抗剂抗体的稳态血清浓度；

(b)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的24小时内例如在外周B细胞如CD19 B细胞上实现所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有；

(c)在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂抗体后，所述CD73拮抗剂抗体的完全受体占有持续至少30天；

(d)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的24小时内，无法检测到外周B细胞例如CD19 B细胞上的CD73的细胞表面水平；

(e)在给予最后剂量的所述CD73拮抗剂抗体后，多达至少30天无法检测到CD73的细胞表面水平；

(f)在第一次给予所述CD73拮抗剂抗体的6小时内，无法检测到游离可溶性CD73；

(g)在包括所述CD73拮抗剂抗体的最后一个治疗周期结束时，无法检测到游离可溶性CD73；以及

(h)与给予所述CD73拮抗剂抗体之前相比，肿瘤细胞和/或肿瘤脉管系统中CD73酶活性降低。

接受本文所述治疗的患者可以是具有实施例1中列出的一个或多个纳入标准的患者，或者不具有实施例1中列出的一个或多个排除标准的患者。

可以使用CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)治疗的另外的癌症包括，例如，鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)、非NSCLC、神经胶质瘤、胃肠道癌、肾癌(例如透明细胞癌)、肝癌、肾癌、甲状腺癌、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤(多形性胶质母细胞瘤)、胃癌、膀胱癌、肝细胞瘤、结肠癌、生殖细胞瘤、小儿肉瘤、鼻窦自然杀伤细胞、黑色素瘤(例如转移性恶性黑色素瘤，如皮肤或眼内恶性黑色素瘤)、骨癌、皮肤癌、子宫癌、肛门区域癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱导的癌症(包括石棉诱导的那些癌症)、病毒相关的癌症(例如人乳头瘤病毒(HPV)相关的肿瘤)以及源自两种主要血细胞谱系(即髓样细胞系(其产生粒细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞和肥大细胞)或淋巴细胞系(其产生B、T、NK和浆细胞))中任一种的恶性血液病(例如所有类型的白血病、淋巴瘤和骨髓瘤，例如急性、慢性、淋巴细胞性和/或骨髓性白血病，如急性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和慢性骨髓性白血病(CML)、未分化AML(M0)、粒细胞白血病(M1)、粒细胞白血病(M2；伴随细胞成熟)、早幼粒细胞白血病(M3或M3变体[M3V])、骨髓单核细胞性白血病(M4或M4变体伴随嗜酸性粒细胞增多症[M4E])、单核细胞性白血病(M5)、红白血病(M6)、巨核母细胞性白血病(M7)、孤立的粒细胞肉瘤和绿色瘤)；淋巴瘤，如霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞样淋巴瘤、单核细胞样B细胞淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、间变性(例如Ki 1+)大细胞淋巴瘤、成人T细胞淋巴瘤/白血病、套细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤、肠T细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、前体T淋巴母细胞性淋巴瘤、T淋巴母细胞；和淋巴瘤/白血病(T-Lbly/T-ALL)、外周T细胞淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤、移植后淋巴细胞增殖性疾病、真性组织细胞性淋巴瘤、原发中枢神经系统淋巴瘤、原发渗出性淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤(LBL)、淋巴谱系造血肿瘤、急性淋巴母细胞白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥散组织细胞淋巴瘤(DHL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞性淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤(CTLC)(也称为蕈样肉芽肿病或塞扎里综合征)、和伴有沃尔丹斯特伦巨球蛋白血症的淋巴浆细胞样淋巴瘤(LPL)；骨髓瘤，如IgG骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、冒烟型骨髓瘤(也称为惰性骨髓瘤)、孤立性浆细胞瘤和多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞淋巴瘤；骨髓谱系造血肿瘤、间充质来源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；精原细胞瘤、畸胎癌、中枢神经肿瘤和外周神经肿瘤，包括星形细胞瘤、神经鞘瘤；间充质来源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；以及其他肿瘤，包括着色性干皮病、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡状癌和畸胎癌、淋巴谱系造血肿瘤，例如T细胞和B细胞肿瘤，包括但不限于T细胞障碍，如T细胞幼淋巴细胞性白血病(T-PLL)，包括小细胞和脑样细胞类型；优选T细胞型的大颗粒淋巴细胞性白血病(LGL)；a/d T-NHL肝脾淋巴瘤；外周/胸腺后T细胞淋巴瘤(多形和免疫母细胞亚型)；血管中心性(鼻)T细胞淋巴瘤；头颈癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌；急性骨髓淋巴瘤以及上述癌症的任何组合。

在某些实施方案中，所述患者患有表达CD73的肿瘤并且具有表达PD-1的在肿瘤中的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。在某些实施方案中，所述患者患有表达高水平CD73的肿瘤并且具有表达高水平PD-1的TIL。

在某些实施方案中，所述患者患有表达CD73和A2A腺苷受体(A2AR)的肿瘤。在某些实施方案中，所述患者患有表达CD73和A2AR的肿瘤并且具有表达PD-1的TIL。在某些实施方案中，所述患者患有表达高水平CD73和A2AR的肿瘤并且具有表达高水平PD-1的TIL。

肿瘤中CD73和A2AR的表达水平以及TIL中PD-1的表达水平可以使用本领域的标准方法(例如免疫组织化学或mRNA水平的定量)来确定。

在某些实施方案中，所述治疗产生至少一种选自以下的治疗效果：肿瘤尺寸减小、转移性病变数量随时间减少、完全反应、部分反应和疾病稳定。

关于靶病灶，对疗法的反应可包括：

关于非靶病灶，对疗法的反应可包括：

根据本文所公开的方法治疗的患者优选地经历至少一种癌症体征的改善。在某些实施方案中，通过减少可测量的肿瘤病灶的数量和/或大小来测量改善。在某些实施方案中，可以在胸部X射线或CT或MRI胶片上测量病灶。在某些实施方案中，细胞学或组织学可用于评价对疗法的反应性。

在某些实施方案中，所治疗的患者展现完全反应(CR)、部分反应(PR)、疾病稳定(SD)、免疫相关完全疾病(irCR)、免疫相关部分反应(irPR)或免疫相关疾病稳定(irSD)。在某些实施方案中，所治疗的患者经历肿瘤缩小和/或生长速率降低，即肿瘤生长受抑制。在某些实施方案中，减少或抑制不需要的细胞增殖。在某些实施方案中，可以发生以下中的一种或多种：可以减少癌细胞的数量；可以减少肿瘤大小；可以抑制、阻碍、减慢或停止癌细胞向周围器官的浸润；可以减慢或抑制肿瘤转移；可以抑制肿瘤生长；可以预防或延迟肿瘤的复发；与癌症相关的一种或多种症状可以缓解到某种程度。

在某些实施方案中，根据本文提供的任何方法给予有效量的CD73拮抗剂抗体(例如CD73.A)和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)产生选自以下的至少一种治疗效果：肿瘤尺寸减小、随时间推移出现的转移性病灶数量减少、完全缓解、部分缓解或疾病稳定。在某些实施方案中，治疗方法产生的可比临床受益率(CBR＝CR+PR+SD≥6个月)比单独通过CD73拮抗剂抗体或PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体所实现的临床受益率更好。在某些实施方案中，与单独的CD73拮抗剂抗体或PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体相比，临床受益率的改善为约20％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多。

在某些实施方案中，通过计算机断层成像和/或磁共振成像来进行治疗之前、期间和/或之后的疾病评估。在某些实施方式中，在基线时和从治疗开始直到治疗终止或完成每7-10周进行疾病评估。

在某些实施方案中，通过ORR、DOR和PFSR测量抗肿瘤功效。ORR在本文中定义为最佳总体反应(BOR)为CR或PR的所有治疗患者的比例。BOR在本文中定义为整个研究中的最佳反应指征，被记录于在首次给药的日期至后续疗法之前的最后一次肿瘤评估之间。DOR在本文中定义为首次反应日期与疾病进展或死亡日期(以先发生者为准)之间的时间。PFSR在本文中定义为保持无进展并且存活的所治疗受试者的比例。例如，在24周时的PFSR是指保持无进展并且在24周时存活的所治疗受试者的比例。

在某些实施方案中，对从患者获得的活检样品进行治疗之前、期间和/或之后的疾病评估。活检样品可以是例如芯针、切除或切口活检。

在某些实施方案中，待治疗的患者具有至少一个具有如RECIST v1.1定义的可测量疾病的病灶。

在某些实施方案中，待治疗的患者具有如RECIST v1.1所定义的疾病进展。

在某些实施方案中，待治疗的患者患有晚期(例如，转移性和/或不可切除的)的如RECIST v1.1定义的可测量疾病的恶性肿瘤。

在某些实施方案中，在晚期或转移性环境中，待治疗的患者已经接受过至少一种标准治疗方案，并且然后有进展或对其不耐受。

在某些实施方案中，待治疗的患者先前已经用特异性靶向检查点途径抑制的药剂(例如，抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗LAG-3和抗CTLA-4抗体)进行了治疗。

在某些实施方案中，待治疗的患者先前已经用特异性靶向T细胞共刺激途径的药剂(例如，抗糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体、抗CD137和抗OX40抗体)进行了治疗。

在某些实施方案中，待治疗的患者已经经历了先前的姑息性放射疗法。

在某些实施方案中，待治疗的患者具有足够的器官功能，总结如下：白细胞计数≥2000/μL、嗜中性粒细胞≥1500/μL、血小板≥100×10

在某些实施方案中，待治疗的患者没有已知或怀疑的CNS转移、未治疗的CNS转移或没有以CNS作为唯一疾病部位。然而，在某些实施方案中，患有受控的脑转移的患者适用于用本文公开的方法治疗，所述患者被定义为在接受放射和/或外科手术治疗后至少4周无放射影像进展(或如果临床上未指示干预，则观察4周)，不再用类固醇治疗持续至少2周以及无新的或进展性神经病学体征和症状。

在某些实施方案中，待治疗的患者未患癌性脑膜炎。

在某些实施方案中，待治疗的患者没有临床相关的腹水(即需要穿刺的腹水)或中度放射影像腹水。

在某些实施方案中，待治疗的患者先前尚未用纳武单抗治疗。

在某些实施方案中，待治疗的患者先前未患恶性肿瘤。

在某些实施方案中，待治疗的患者未患需要同时干预的不同活动性恶性肿瘤。

在某些实施方案中，待治疗的患者先前没有器官同种异体移植。

在某些实施方案中，待治疗的患者先前没有用抗CD73抗体、抗CD39抗体或腺苷2A受体抑制剂治疗。

在某些实施方案中，待治疗的患者先前没有脑血管意外、深静脉血栓形成或其他动脉血栓的病史。

在某些实施方案中，待治疗的患者未患活动性的、已知的或怀疑的自身免疫疾病。然而，在某些实施方案中，患有白癜风、1型糖尿病、仅需要激素替代的由于自身免疫病症所致的残留甲状腺功能减退症的患者，具有格雷夫斯病史的甲状腺功能正常、不需要全身治疗的银屑病或在不存在外部触发因素的情况下预期不会复发的病症的患者，适用于用本文公开的方法治疗。

在某些实施方案中，待治疗的患者未患症状性的或可能干扰可疑药物相关肺毒性的检测或管理的间质性肺病。

在某些实施方案中，待治疗的患者未患需要以大于10mg/天的泼尼松剂量或其当量的剂量的复发性类固醇爆发或慢性类固醇的慢性阻塞性肺病。

在某些实施方案中，除了在没有活动性自身免疫疾病的情况下，肾上腺替代类固醇剂量为>10mg每日泼尼松当量外，待治疗的患者未患需要在研究药物给予的14天内用皮质类固醇(>10mg每日泼尼松当量)或其他免疫抑制药物进行全身治疗的病症。

在某些实施方案中，待治疗的患者在开始治疗后的6个月内未患不受控制或严重的心血管疾病，包括例如心肌梗死或中风/短暂性脑缺血性发作，在开始治疗后的3个月内未患不受控制的心绞痛，无临床上明显的心律失常病史(例如，室性心动过速、室颤或尖端扭转)，没有使用Fridericia公式得出的心率校正QT间期(QTcF)延长>480毫秒，无其他临床上重要的心脏病史(例如，心肌病、充血性心力衰竭(纽约心脏协会(NYHA)功能分类III至IV)、心包炎、明显的心包积液)，没有对于每天补充氧气疗法的需求，

在某些实施方案中，待治疗的患者未患活动性肝炎。

在某些实施方案中，待治疗的患者在治疗开始前≤7天没有活动性的细菌感染、病毒感染或真菌感染。

在某些实施方案中，待治疗的患者没有人类免疫缺陷病毒(HIV)或已知的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)检测呈阳性的历史。

在某些实施方案中，待治疗的患者没有活动性或潜伏性结核感染的证据或病史。

在某些实施方案中，待治疗的患者在治疗的4周内未经历大外科手术。

在某些实施方案中，将归因于先前抗癌疗法的所有毒性(除患者的脱发和疲劳之外)在治疗开始之前消退为1级(美国国家癌症研究所[NCI]不良事件通用术语标准[CTCAE]4.03版)或基线。然而，在某些实施方案中，具有预期不会消退并且导致长期后遗症(如基于铂的疗法后的慢性神经病)的归因于先前抗癌疗法的毒性的那些患者适用于本文公开的方法进行治疗。

在某些实施方案中，待治疗的患者在治疗的12周内未使用过含有活病毒的非肿瘤学疫苗来预防传染性疾病。

在某些实施方案中，待治疗的患者在治疗前2周内未使用过压紧的红细胞或接受过血小板输注。

在某些实施方案中，待治疗的患者没有纳武单抗过敏史。

在某些实施方案中，待治疗的患者对先前抗-癌免疫调节疗法(例如，检查点抑制剂、T细胞共-刺激抗体)没有药物过敏史(如过敏反应)。

组合疗法

针对CD73的抗体(例如本文所述的CD73拮抗剂抗体)(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)可以与免疫原性药剂(如癌细胞、纯化的肿瘤抗原(包括重组蛋白质、肽和碳水化合物分子)、细胞和用编码免疫刺激细胞因子的基因转染的细胞)组合(He等人(2004)J.Immunol.173:4919-28)。可以使用的肿瘤疫苗的非限制性例子包括黑色素瘤抗原的肽(如gp100、MAGE抗原、Trp-2、MART1和/或酪氨酸酶的肽)或经转染以表达细胞因子GM-CSF(下文进一步所讨论)的肿瘤细胞。

在人中，已经显示一些肿瘤(如黑色素瘤)具有免疫原性。通过经由CD73抑制降低T细胞激活的阈值，可以激活宿主中的肿瘤应答，从而允许治疗非免疫原性肿瘤或具有有限免疫原性的那些肿瘤。

本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)可以与疫苗接种方案组合。已经设计了许多用于针对肿瘤的疫苗接种的实验策略(参见Rosenberg,S.,2000,Development of Cancer Vaccines,ASCO Educational Book Spring:60-62；Logothetis,C.,2000,ASCO Educational Book Spring:300-302；Khayat,D.2000,ASCOEducational Book Spring:414-428；Foon,K.2000,ASCO Educational Book Spring:730-738；还参见Restifo,N.和Sznol,M.,Cancer Vaccines,第61章,第3023-3043页，在DeVita等人(编),1997,Cancer:Principles and Practice of Oncology,第五版中)。在这些策略之一中，使用自体或同种异体肿瘤细胞制备疫苗。已经显示，当肿瘤细胞被转导以表达GM-CSF时，这些细胞疫苗是最有效的。已经显示GM-CSF是用于肿瘤疫苗接种的抗原呈递的有效力的激活剂(Dranoff等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci U.S.A.90:3539-43)。

对各种肿瘤中的基因表达和大规模基因表达模式的研究已经产生了所谓的肿瘤特异性抗原的定义(Rosenberg,S A (1999)Immunity 10:281-7)。在许多情况下，这些肿瘤特异性抗原是在肿瘤和产生肿瘤的细胞中表达的分化抗原，例如黑素细胞抗原gp100、MAGE抗原和Trp-2。更重要的是，许多这些抗原可以显示为宿主中发现的肿瘤特异性T细胞的靶标。CD73抑制可以与肿瘤中表达的重组蛋白和/或肽的集合联合使用，以产生针对这些蛋白质的免疫应答。这些蛋白质通常被免疫系统视为自身抗原，并且因此可被免疫系统耐受。肿瘤抗原可以包括蛋白质端粒酶，其是合成染色体端粒所需的并且在超过85％的人类癌症和仅有限数量的体细胞组织中表达(Kim等人(1994)Science 266:2011-2013)。肿瘤抗原也可以是因以下原因在癌细胞中表达的“新抗原”：改变蛋白质序列或在两个不相关序列之间产生融合蛋白(即费城染色体中的bcr-abl)的体细胞突变，或者来自B细胞肿瘤的独特型。

其他肿瘤疫苗可以包括来自牵涉在人类癌症中的病毒的蛋白质，所述病毒是如人乳头瘤病毒(HPV)、肝炎病毒(HBV和HCV)和卡波西疱疹肉瘤病毒(KHSV)。可以与CD73抑制联合使用的另一种形式的肿瘤特异性抗原是从肿瘤组织本身分离的纯化的热休克蛋白(HSP)。这些热休克蛋白含有来自肿瘤细胞的蛋白质片段，并且这些HSP在递送至抗原呈递细胞时高效引发肿瘤免疫(Suot&Srivastava(1995)Science 269:1585-1588；Tamura等人(1997)Science 278:117-120)。

树突细胞(DC)是有效力的抗原呈递细胞，其可以用于引发抗原特异性应答。DC可以离体产生并加载各种蛋白质和肽抗原以及肿瘤细胞提取物(Nestle等人(1998)NatureMedicine 4:328-332)。DC还可以通过遗传手段被转导，从而也表达这些肿瘤抗原。出于免疫目的，DC还已经直接与肿瘤细胞融合(Kugler等人(2000)Nature Medicine 6:332-336)。作为一种疫苗接种方法，DC免疫可以与CD73抑制有效地组合以激活更有效力的抗肿瘤应答。

本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)可以与标准癌症治疗(例如，外科手术、放射和化学疗法)组合。CD73抑制可以与化疗方案有效组合。在这些情况下，可以减少给予的化疗试剂的剂量(Mokyr等人(1998)Cancer Research 58:5301-5304)。这种组合的例子是CD73拮抗剂抗体与达卡巴嗪组合用于治疗黑色素瘤。这种组合的另一个例子是CD73拮抗剂抗体与白细胞介素-2(IL-2)组合用于治疗黑色素瘤。组合使用CD73抑制和化学疗法背后的科学原理是，作为大多数化疗化合物的细胞毒作用的结果的细胞死亡应导致抗原呈递途径中肿瘤抗原水平的升高。可能通过细胞死亡导致与CD73抑制协同作用的其他组合疗法是放射、外科手术和激素剥夺。这些方案中的每一种都在宿主中产生肿瘤抗原的来源。血管生成抑制剂也可以与CD73抑制组合。抑制血管生成导致肿瘤细胞死亡，其可以将肿瘤抗原供给宿主抗原呈递途径。

这种组合的又另一个例子是本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)与抗CD39、抗A2AR或化学抑制剂(例如SCH58261)或抗A2BR抗体或化学抑制剂的组合。组合使用CD73抑制和CD39、A2AR或A2BR抑制的科学原理是，这些蛋白质也与CD73的生物学功能和信号传导相关。具体地说，CD39催化ATP或ADP向AMP的转化，从而为CD73的酶活性(即AMP向腺苷的转化)提供底物(AMP)。此外，腺苷是四种已知受体(包括A1R、A2AR、A2BR和A3)的配体。已经显示A2AR和A2BR通过cAMP信号传导调节在肿瘤环境中肿瘤细胞的增殖、生长、迁移和转移以及T细胞激活。

本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)也可以与将表达Fcα或Fcγ受体的效应细胞靶向肿瘤细胞的双特异性抗体组合使用(参见例如美国专利号5,922,845和5,837,243)。双特异性抗体可以用于靶向两种单独的抗原。例如，已经使用抗Fc受体/抗肿瘤抗原(例如，Her-2/neu)双特异性抗体将巨噬细胞靶向肿瘤部位。这种靶向可以更有效地激活肿瘤特异性应答。可替代地，可以通过使用与肿瘤抗原和树突细胞特异性细胞表面标记结合的双特异性抗体将抗原直接递送至DC。

肿瘤通过各种各样的机制逃避宿主免疫监视。许多这些机制可以通过由肿瘤表达并且具免疫抑制性的蛋白质的失活来克服。这些还包括TGF-β(Kehrl等人(1986)J.Exp.Med.163:1037-1050)、IL-10(Howard&O'Garra(1992)Immunology Today 13:198-200)和Fas ligand(Hahne等人(1996)Science 274:1363-1365)。针对这些实体中的每一个的抗体可以与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)组合使用以抵消免疫抑制剂的作用并且有利于宿主的肿瘤免疫应答。

可以将激活宿主免疫反应性的其他抗体与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)组合使用。这些包括树突细胞表面上的分子，其激活DC功能和抗原呈递。抗CD40抗体能够有效替代T细胞辅助活性(Ridge等人(1998)Nature 393:474-478)并且可以与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)联合使用。针对T细胞共刺激分子如OX-40(Weinberg等人(2000)Immunol 164:2160-2169)、4-1BB(Melero等人(1997)Nature Medicine 3:682-685(1997))和ICOS(Hutloff等人(1999)Nature 397:262-266)的激活性抗体也可以提供增加水平的T细胞激活。CTLA-4的抑制剂(例如，美国专利号5,811,097)也可以与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)联合使用。

使用本文所述的其他方法治疗已经暴露于特定毒素或病原体的患者。因此，本文提供了一种在受试者中治疗感染性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者给予本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)，从而治疗受试者的感染性疾病。另外地或可替代地，所述抗体可以是嵌合抗体或人源化抗体。

在所有上述方法中，本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)可以与其他形式的免疫疗法组合，所述其他形式的免疫疗法是如细胞因子治疗(例如干扰素、GM-CSF、G-CSF、IL-2)，或双特异性抗体疗法，其提供了增强的肿瘤抗原呈递(参见例如Holliger(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448；Poljak(1994)Structure2:1121-1123)。

除上述组合疗法外，本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)还可用于组合疗法，例如，用于治疗癌症，如下所述。

本文还提供了组合疗法的方法，其中将本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)与一种或多种有效刺激免疫应答的其他药剂共给予，从而进一步增强、刺激或上调受试者的免疫应答。

通常，本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)可以进一步与以下组合：(i)共刺激受体的激动剂和/或(ii)T细胞上的抑制性信号的拮抗剂，二者均导致放大抗原特异性T细胞应答(免疫检查点调节剂)。大多数共刺激分子和共抑制分子是免疫球蛋白超家族(IgSF)的成员，并且可以将本文所述的CD73拮抗剂抗体与靶向IgSF家族的成员的药剂一起给予以增加免疫应答。与共刺激受体或共抑制受体结合的膜结合配体的一个重要家族是B7家族，其包括B7-1、B7-2、B7-DC(PD-L2)、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)和B7-H6。与共刺激受体或共抑制受体结合的膜结合配体的另一个家族是与同源TNF受体家族成员结合的分子的TNF家族，其包括CD40和CD40L、OX-40、OX-40L、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137、GITR、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DcR3、HVEM、VEGI/TL1A、TRAMP/DR3、EDAR、EDA1、XEDAR、EDA2、TNFR1、淋巴毒素α/TNFβ、TNFR2、TNFα、LTβR、淋巴毒素α1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY、NGFR(参见例如Tansey(2009)Drug Discovery Today 00:1)。还通过可溶性细胞因子调节T细胞激活。因此，本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)可用于与以下组合使用以刺激免疫应答，例如用于治疗增殖性疾病，如癌症：(i)抑制T细胞激活的IgSF家族或B7家族或TNF家族蛋白质的拮抗剂(或抑制剂或阻断剂)或抑制T细胞激活的细胞因子(例如IL-6、IL-10、TGF-β、VEGF；“免疫抑制性细胞因子”)的拮抗剂和/或(ii)刺激T细胞激活的IgSF家族、B7家族或TNF家族刺激受体的激动剂或刺激T细胞激活的细胞因子的激动剂。

例如，T细胞应答可以被本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如CD73.A)(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)和一种或多种以下药剂刺激：

(1)如上所述抑制T细胞激活的蛋白质(如CTLA-4、PD-L2和LAG-3)的拮抗剂(例如，免疫检查点抑制剂)以及以下蛋白质中任何一种的拮抗剂(抑制剂或阻断剂)：TIM-3、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD69、半乳糖凝集素-1、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、2B4、CD48、GARP、CD73、PD1H、LAIR1、TIM-1、TIM-4、CD39。

(2)刺激T细胞激活的蛋白质如B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、GITR、GITRL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、CD70、CD27、CD40、DR3或CD28H的激动剂。

调节上述蛋白质中的一种并且可以与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)组合用于治疗癌症的示例性药剂，包括：Yervoy

可以与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)组合用于治疗癌症的其他分子包括NK细胞上抑制性受体的拮抗剂或NK细胞上激活性受体的激动剂(例如KIR的拮抗剂(例如利瑞鲁单抗))。

T细胞激活也由可溶性细胞因子调节，并且可以将本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)与抑制T细胞激活的细胞因子的拮抗剂或刺激T细胞激活的细胞因子的激动剂一起向例如患有癌症的受试者给予。

在某些实施方案中，本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)可用于与以下组合使用以刺激免疫应答，例如用于治疗增殖性疾病，如癌症：(i)抑制T细胞激活的IgSF家族或B7家族或TNF家族蛋白质的拮抗剂(或抑制剂或阻断剂)或抑制T细胞激活的细胞因子(例如IL-6、IL-10、TGF-β、VEGF；“免疫抑制性细胞因子”)的拮抗剂和/或(ii)刺激T细胞激活的IgSF家族、B7家族或TNF家族刺激受体的激动剂或刺激T细胞激活的细胞因子的激动剂。

用于组合疗法的又其他药剂包括抑制或耗尽巨噬细胞或单核细胞的药剂，其包括但不限于CSF-1R拮抗剂，如CSF-1R拮抗剂抗体，其包括RG7155(WO 11/70024、WO 11/107553、WO 11/131407、WO 13/87699、WO13/119716、WO 13/132044)或FPA-008(WO 11/140249；WO 13169264；WO 14/036357)。

本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)也可以与抑制TGF-β信号传导的药剂一起给予。

可以与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)组合的另外的药剂包括增强肿瘤抗原呈递的药剂(例如树突细胞疫苗，分泌GM-CSF的细胞疫苗，CpG寡核苷酸和咪喹莫特)或增强肿瘤细胞的免疫原性的疗法(例如蒽环类药物)。

可以与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)组合的又其他疗法包括耗尽或阻断Treg细胞的疗法，例如与CD25特异性结合的药剂。

可以与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)组合的另一种疗法是抑制代谢酶(如吲哚胺二氧合酶(IDO)、二氧合酶、精氨酸酶或一氧化氮合成酶)的疗法。

可以与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)一起使用的另一类药剂包括抑制腺苷形成或抑制腺苷A2A受体的药剂。

可以与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)组合用于治疗癌症的其他疗法包括逆转/预防T细胞无能或衰竭的疗法和在肿瘤部位触发先天性免疫激活和/或炎症的疗法。

本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)可以与多于一种免疫肿瘤学药剂组合，并且可以例如与靶向免疫途径的多种要素的组合方法组合，所述组合方法如以下的一种或多种：增强肿瘤抗原呈递的疗法(例如树突细胞疫苗、分泌GM-CSF的细胞疫苗、CpG寡核苷酸、咪喹莫特)；抑制负免疫调节的疗法，例如通过抑制CTLA-4和/或耗尽或阻断Treg或其他免疫抑制细胞；刺激正免疫调节的疗法，例如使用刺激CD-137、OX-40和/或GITR途径和/或刺激T细胞效应功能的激动剂；全身性地增加抗肿瘤T细胞频率的疗法；耗尽或抑制Treg(如肿瘤中的Treg)的疗法，例如使用CD25的拮抗剂(例如达克珠单抗)或通过离体抗CD25珠粒耗尽；影响肿瘤中抑制性髓样细胞功能的疗法；增强肿瘤细胞的免疫原性的疗法(例如蒽环类药物)；过继T细胞或NK细胞转移，所述细胞包括基因修饰的细胞，例如通过嵌合抗原受体修饰的细胞(CAR-T疗法)；抑制代谢酶(如吲哚胺二氧合酶(IDO)、二氧合酶、精氨酸酶或一氧化氮合成酶)的疗法；逆转/预防T细胞无能或衰竭的疗法；在肿瘤部位触发先天性免疫激活和/或炎症的疗法；给予免疫刺激细胞因子；或阻断免疫抑制细胞因子。

通常，本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)可以与以下一起使用：一种或多种连接阳性共刺激受体的激动剂，通过抑制性受体减弱信号传导的阻断剂，拮抗剂以及一种或多种全身性地增加抗肿瘤T细胞频率的药剂，克服肿瘤微环境中的不同免疫抑制途径、耗尽或抑制Treg(例如，使用抗CD25单克隆抗体(例如达克珠单抗)或通过离体抗CD25珠粒耗尽)、抑制代谢酶(如IDO)或逆转/预防T细胞无能或衰竭的药剂和在肿瘤部位触发先天性免疫激活和/或炎症的药剂。抑制性受体的增加的内化可以转化为较低水平的潜在抑制剂(假定没有接着发生信号传导)。

在某些实施方案中，如果所述受试者为BRAF V600突变阳性，则将本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)与BRAF抑制剂一起向所述受试者给予。

本文提供了用于治疗过度增殖性疾病(例如，癌症)的方法，所述方法包括向受试者给予本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)。在某些实施方案中，以亚治疗剂量给予所述CD73拮抗剂抗体，以亚治疗剂量给予所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体，或以亚治疗剂量给予二者。本文还提供了用于改变与用免疫刺激剂治疗过度增殖性疾病相关的不良事件的方法，所述方法包括向受试者给予CD73拮抗剂抗体和亚治疗剂量的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。在某些实施方案中，所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂是人序列单克隆抗体，并且所述CD73拮抗剂抗体是人序列单克隆抗体，如包含11F11、4C3、4D4、10D2、11A6、24H2、5F8、6E11、7A11、CD73.3、CD73.4、CD73.5、CD73.6、CD73.7、CD73.8、CD73.9、CD73.10或CD73.11的CDR或可变区的抗体(如WO 2016/081748和WO 2017/152085中所述)或本文所述的另一种CD73拮抗剂抗体。

针对一种或多种第二靶抗原(如LAG-3和/或CTLA-4)给予本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)和拮抗剂(例如拮抗剂抗体)，可以增强患者对癌细胞的免疫应答。使用本公开文本的抗体可以抑制其生长的癌症包括通常对免疫疗法有反应的癌症。

在某些实施方案中，可以将本文所讨论的治疗性抗体的组合作为在药学上可接受的载体中的单一组合物同时给予，或者作为在药学上可接受的载体中具有每种抗体的单独组合物同时给予。在一实施方案中，可以顺序给予治疗性抗体的组合。此外，如果顺序给予多于一个剂量的组合疗法，则在每个给予时间点，顺序给予的顺序可以颠倒或保持相同的顺序，顺序给予可以与同时给予组合，或其任何组合。

在一个实施方案中，通过向受试者给予本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)和免疫肿瘤学药剂来治疗患有可受益于免疫系统刺激的疾病(例如癌症或感染性疾病)的受试者，其中所述免疫肿瘤学药剂是CD137(4-1BB)激动剂，如激动性CD137抗体。合适的CD137抗体包括例如乌瑞鲁单抗或PF-05082566(WO 12/32433)。

在一个实施方案中，通过向受试者给予本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)和免疫肿瘤学药剂来治疗患有可受益于免疫系统刺激的疾病(例如癌症或感染性疾病)的受试者，其中所述免疫肿瘤学药剂是OX40激动剂，如激动性OX40抗体。合适的OX40抗体包括例如MEDI-6383、MEDI-6469或MOXR0916(RG7888；WO06/029879)。

在一个实施方案中，通过向受试者给予本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)和免疫肿瘤学药剂来治疗患有可受益于免疫系统刺激的疾病(例如癌症或感染性疾病)的受试者，其中所述免疫肿瘤学药剂是CD40激动剂，如激动性CD40抗体。在某些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是CD40拮抗剂(如拮抗性CD40抗体)。合适的CD40抗体包括例如鲁卡妥木单抗(HCD122)、达塞妥珠单抗(SGN-40)、CP-870,893或Chi Lob 7/4。

在一个实施方案中，通过向受试者给予本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)和免疫肿瘤学药剂来治疗患有可受益于免疫系统刺激的疾病(例如癌症或感染性疾病)的受试者，其中所述免疫肿瘤学药剂是CD27激动剂，如激动性CD27抗体。合适的CD27抗体包括例如伐立鲁单抗(CDX-1127)。

在一个实施方案中，通过向受试者给予本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)和免疫肿瘤学药剂来治疗患有可受益于免疫系统刺激的疾病(例如癌症或感染性疾病)的受试者，其中所述免疫肿瘤学药剂是MGA271(针对B7H3)(WO 11/109400)。

在一个实施方案中，通过向受试者给予本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)和免疫肿瘤学药剂来治疗患有可受益于免疫系统刺激的疾病(例如癌症或感染性疾病)的受试者，其中所述免疫肿瘤学药剂是KIR激动剂，如利瑞鲁单抗。

在一个实施方案中，通过向受试者给予本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)和免疫肿瘤学药剂来治疗患有可受益于免疫系统刺激的疾病(例如癌症或感染性疾病)的受试者，其中所述免疫肿瘤学药剂是IDO拮抗剂。合适的IDO拮抗剂包括例如INCB-024360(WO 2006/122150、WO 07/75598、WO 08/36653、WO08/36642)、吲哚莫德(indoximod)、NLG-919(WO 09/73620、WO 09/1156652、WO 11/56652、WO 12/142237)或F001287。

在一个实施方案中，通过向受试者给予本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)和免疫肿瘤学药剂来治疗患有可受益于免疫系统刺激的疾病(例如癌症或感染性疾病)的受试者，其中所述免疫肿瘤学药剂是Toll样受体激动剂，例如TLR2/4激动剂(例如，卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin))；TLR7激动剂(例如，Hiltonol或咪喹莫特)；TLR7/8激动剂(例如，瑞喹莫德)；或TLR9激动剂(例如，CpG7909)。

在一个实施方案中，通过向受试者给予本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)和免疫肿瘤学药剂来治疗患有可受益于免疫系统刺激的疾病(例如癌症或感染性疾病)的受试者，其中所述免疫肿瘤学药剂是TGF-β抑制剂，例如，GC1008、LY2157299、TEW7197或IMC-TR1。

在某些实施方案中，在给予第二药剂，例如上述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体和/或免疫肿瘤学药剂之前，顺序给予CD73拮抗剂抗体。在某些实施方案中，将CD73拮抗剂抗体与第二药剂，例如上述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体和/或免疫肿瘤学药剂同时给予。在某些实施方案中，在给予第二药剂，例如上述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体和/或免疫肿瘤学药剂之后，顺序给予CD73拮抗剂抗体。两种或更多种药剂的给予可以在相隔例如30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、3小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、3天、5天、7天或一周或多周的时间开始，或者第二药剂和/或另外的药剂的给予可以在已经给予第一药剂后例如30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、3小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、3天、5天、7天或一周或多周时开始。在某些实施方案中，例如经30或60分钟的时间段向患者同时输注CD73拮抗剂抗体和第二和/或另外的药剂。CD73拮抗剂抗体可以与第二和/或另外的药剂共配制。

任选地，本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)任选地与一种或多种另外的免疫治疗性抗体(例如，抗CTLA-4和/或抗LAG-3阻断)组合，可以与免疫原性药剂(如癌细胞、纯化的肿瘤抗原(包括重组蛋白质、肽和碳水化合物分子)、细胞和用编码免疫刺激细胞因子的基因转染的细胞)进一步组合(He等人(2004)J.Immunol.173:4919-28)。可以使用的肿瘤疫苗的非限制性例子包括黑色素瘤抗原的肽(如gp100、MAGE抗原、Trp-2、MART1和/或酪氨酸酶的肽)或经转染以表达细胞因子GM-CSF(下文进一步所讨论)的肿瘤细胞。本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂的抗体(例如纳武单抗)组合)也可以进一步与标准癌症治疗组合。例如，本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)和一种或多种另外的抗体(例如，CTLA-4和/或LAG-3阻断)可以与化疗方案有效地组合。在这些情况下，可能减少与本公开文本的组合一起给予的其他化疗剂的剂量(Mokyr等人(1998)CancerResearch 58:5301-5304)。示例性的化疗方案包括用于治疗黑色素瘤的达卡巴嗪和用于治疗黑色素瘤的白细胞介素-2(IL-2)。

可通过细胞死亡导致与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)(具有或不具有CTLA-4和/或LAG-3阻断的情况下)协同作用的其他组合疗法包括放射、外科手术或激素剥夺。这些方案中的每一种都在宿主中产生肿瘤抗原的来源。血管生成抑制剂也可以与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)和CTLA-4和/或LAG-3阻断组合。抑制血管生成导致肿瘤细胞死亡，这可能是供给宿主抗原呈递途径的肿瘤抗原的来源。

本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)也可以与将表达Fcα或Fcγ受体的效应细胞靶向肿瘤细胞的双特异性抗体组合使用(参见例如美国专利号5,922,845和5,837,243)。双特异性抗体可以用于靶向两种单独的抗原。通过组合使用CD73抑制和PD-1和/或PD-L1阻断，可增强这些应答的T细胞臂。

在另一个例子中，本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)可以与抗肿瘤抗体联合使用，所述抗肿瘤抗体如

肿瘤通过各种各样的机制逃避宿主免疫监视。许多这些机制可以通过由肿瘤表达并且具免疫抑制性的蛋白质的失活来克服。这些还包括，TGF-β(Kehrl等人(1986)J.Exp.Med.163:1037-1050)、IL-10(Howard&O'Garra(1992)Immunology Today 13:198-200)和Fas配体(Hahne等人(1996)Science274:1363-1365)。针对这些实体中的每一个的抗体可以进一步与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)组合，以抵消免疫抑制剂的作用并且有利于宿主的抗肿瘤免疫应答。

可用于激活宿主免疫反应性的其他药剂(例如，抗体)可以进一步与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)组合使用。这些包括树突细胞表面上的分子，其激活DC功能和抗原呈递。抗CD40抗体(Ridge等人，同上)可以与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)联合使用。针对T细胞共刺激分子的其他激活性抗体(Weinberg等人，同上；Melero等人同上；Hutloff等人，同上)也可以提供增加水平的T细胞激活。

如上所讨论，骨髓移植目前用于治疗多种造血来源的肿瘤。本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)可用于增加供体移植的肿瘤特异性T细胞的有效性。

几种实验性治疗方案涉及抗原特异性T细胞的离体激活和扩增、以及将这些细胞过继转移到受体中，以使抗原特异性T细胞对抗肿瘤(Greenberg&Riddell，同上)。这些方法也可以用于激活T细胞对感染因子(如CMV)的应答。可以预期在本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)的存在下的离体激活可增加过继性转移T细胞的频率和活性。

本文提供了用于改变与用免疫刺激剂治疗过度增殖性疾病(例如，癌症)相关的不良事件的方法，所述方法包括向受试者给予本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与亚治疗剂量的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)。例如，本文所述的方法提供了通过向患者给予不可吸收的类固醇来降低免疫刺激性治疗抗体诱导的结肠炎或腹泻的发生率的方法。如本文所用，“不可吸收的类固醇”是一种糖皮质激素，其展现出广泛的首过代谢，使得在肝脏中代谢后，所述类固醇的生物利用度低，即小于约20％。在本文所述的一个实施方案中，不可吸收的类固醇是布地奈德。布地奈德是一种局部作用的糖皮质激素，其在口服给予后主要由肝脏广泛代谢。ENTOCORT

在再进一步的实施方案中，本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)，与不可吸收的类固醇联合，可以进一步与水杨酸盐组合。水杨酸盐包括5-ASA药剂，例如像：柳氮磺胺吡啶(

根据本文所述的方法，与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)和不可吸收的类固醇组合给予的水杨酸盐可以包括任何重叠或顺序给予的水杨酸盐和不可吸收的类固醇，以减少由免疫刺激抗体诱导的结肠炎的发生。因此，例如，用于减少由本文所述的免疫刺激抗体诱导的结肠炎的发生的方法涵盖同时或顺序给予水杨酸盐和不可吸收的类固醇(例如，不可吸收的类固醇后6小时给予水杨酸盐)，或其任何组合。此外，可以将水杨酸盐和不可吸收的类固醇通过相同的途径(例如，二者均口服给予)或通过不同的途径(例如，水杨酸盐通过口服给予，而不可吸收的类固醇经直肠给予)给予，这可以与一种或多种用于给予CD73拮抗剂抗体或PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的途径不同。

本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)和本文所述的其他组合抗体疗法也可以与其他熟知的疗法联合使用，所述其他熟知的疗法因其对抗所治疗适应症(例如，癌症)的特殊用途而被选择。

例如，本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)可以与另外的治疗组合(例如，同时或分开)使用，所述另外的治疗如辐照、化学疗法(例如，使用喜树碱(CPT-11)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂、多柔比星、伊立替康、紫杉醇、吉西他滨、顺铂、紫杉醇、卡铂-紫杉醇(Taxol)、多柔比星、5-fu或喜树碱+apo2l/TRAIL(6X组合))、一种或多种蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米或MG132)；一种或多种Bcl-2抑制剂(例如BH3I-2’(bcl-xl抑制剂)、吲哚胺双加氧酶-1(IDO1)抑制剂(例如INCB24360)、AT-101(R-(-)-棉子酚衍生物)、ABT-263(小分子)、GX-15-070(obatoclax)或MCL-1(骨髓性白血病细胞分化蛋白-1)拮抗剂)、iAP(细胞凋亡蛋白的抑制剂)拮抗剂(例如smac7、smac4、小分子smac模拟物、合成smac肽(参见Fulda等人,Nat Med 2002；8:808-15)、ISIS23722(LY2181308)或AEG-35156(GEM-640))、HDAC(组蛋白脱乙酰酶)抑制剂、抗CD20抗体(例如利妥昔单抗)、血管生成抑制剂(例如贝伐单抗)、靶向VEGF和VEGFR的抗血管生成剂(例如阿瓦斯丁)、合成三萜类(参见Hyer等人,Cancer Research 2005；65:4799-808)、c-FLIP(细胞FLICE抑制性蛋白)调节剂(例如PPARγ(过氧化物酶体增殖剂激活的受体γ)的天然和合成配体、5809354或5569100)、激酶抑制剂(例如索拉非尼)、曲妥珠单抗、西妥昔单抗、坦罗莫司、mTOR抑制剂(如雷帕霉素和坦罗莫司)、硼替佐米、JAK2抑制剂、HSP90抑制剂、PI3K-AKT抑制剂、来那度胺、GSK3β抑制剂、IAP抑制剂和/或遗传毒性药物。

本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)可以进一步与一种或多种抗增殖细胞毒性剂组合使用。可用作抗增殖细胞毒性剂的化合物的种类包括但不限于以下：

烷基化剂(包括而不限于氮芥、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯)：尿嘧啶芥、氯氮芥、环磷酰胺(CYTOXAN

抗代谢物(包括而不限于叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂)：甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他汀和吉西他滨。

用于与本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如纳武单抗)组合)组合的合适抗增殖剂包括而不限于紫杉烷、紫杉醇(紫杉醇可作为TAXOL

在需要联合用本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)治疗或在用本文所述的CD73拮抗剂抗体(例如与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合)治疗之前使增殖性细胞异常静止的情况下，还可以向患者给予激素和类固醇(包括合成类似物)，如17a-乙炔雌二醇、己烯雌酚、睾酮、泼尼松、氟甲睾酮、丙酸甲雄烷酮、睾内酯、甲地孕酮、甲基泼尼松龙、甲基-睾酮、泼尼松龙、去炎松、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、甲孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、ZOLADEX

用于安全且有效给予化疗剂的方法是本领域技术人员已知的那些。另外，它们的给予在标准文献中进行了描述。例如，许多化疗剂的给予描述于Physicians'DeskReference(PDR)，例如1996版(Medical Economics Company,Montvale,N.J.07645-1742,美国)中；其披露内容通过引用并入本文。

可以根据本领域熟知的治疗方案来给予一种或多种化疗剂和/或放射疗法。对于本领域技术人员清楚的是，一种或多种化疗剂和/或放射疗法的给予可以根据所治疗的疾病以及一种或多种化疗剂和/或放射疗法对所述疾病的已知作用而变化。而且，根据熟练临床医生的知识，鉴于观察到的所给予的治疗剂对患者的效果并且鉴于观察到的疾病对所给予的治疗剂的反应，治疗方案(例如，剂量和给予时间)可以变化。

II.CD73拮抗剂抗体

适用于本文所述方法的CD73拮抗剂抗体包括新开发的CD73拮抗剂抗体，以及本领域已知的CD73拮抗剂抗体(包括与所述抗体竞争相同表位或结合相同表位的抗体)。

用于本文所述方法的示例性CD73拮抗剂抗体是MEDI9447和CPX-006，以及描述于WO 2016/081748和WO 2017/152085中的抗体，将其内容通过引用以其整体并入本文。

在某些实施方案中，CD73拮抗性抗体展现以下特性中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11种：

(1)例如，以例如通过

(2)例如，以1nM或更小(例如，0.01nM至1nM)的EC

(3)例如，以10nM或更小(例如，0.01nM至10nM)的EC

(4)例如，以10nM或更小的EC50抑制人CD73酶活性；

(5)例如，以10nM或更小的EC50抑制食蟹猴CD73酶活性；

(6)以10nM或更小的EC50在Calu6细胞中抑制内源性(细胞)人CD73酶活性；

(7)在体内抑制人CD73酶活性；

(8)例如以小于1小时、30分钟或10分钟的T

(9)结合人CD73上的构象表位，例如，氨基酸序列(SEQ ID NO:1)内的不连续表位，所述不连续表位包括全部或部分氨基酸残基FTKVQQIRRAEPNVLLLDA(SEQ ID NO:26)和/或LYLPYKVLPVGDEVVG(SEQ ID NO:27)；

(10)与CD73.4-1、CD73.4-2、CD73.3、11F11-1、11F11-2、4C3-1、4C3-2、4C3-3、4D4、10D2-1、10D2-2、11A6、24H2、5F8-1、5F8-2、6E11和/或7A11在一个方向或两个方向上竞争结合人CD73，其描述于WO2016/081748和WO2017/152085中；以及

(11)如通过X射线晶体学测定的，以与CD73.4相似的模式与人CD73相互作用。

在特定实施方案中，在本文所述的方法中使用的CD73拮抗性抗体是CD73.4-IgG2C219S.IgG1.1f，其公开于WO 2016/081748和WO 2017/152085(本文也称为“CD73.A”)。表1和表6提供了CD73.A的重链和轻链序列、可变区序列和CDR序列。

表1.CD73.A序列汇总

因此，在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含分别在SEQ ID NO:6和7的可变重链和可变轻链中的三个可变重链CDR和三个可变轻链CDR。

在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含分别含有SEQ ID NO:8、9和10的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别含有SEQ ID NO:11、12和13的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。

在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含分别在SEQ ID NO:6和7中列出的重链可变区序列和轻链可变区序列。

在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含SEQ ID NO:3或4中列出的重链序列和SEQ ID NO:5中列出的轻链序列。

优选地，所述CD73拮抗剂抗体以高亲和力，例如以10

在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体或杂合体。

在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含改变抗体特性的经修饰的重链恒定区。例如，激动性抗体可以包含经修饰的重链恒定区，所述经修饰的重链恒定区相对于具有未修饰的重链恒定区的抗体改变了抗体的活性。因此，在一些实施方案中，所述激动性抗体在重链恒定区具有增强效应子功能的修饰。在其他实施方案中，所述激动性抗体在重链恒定区具有降低效应子功能的修饰。可以在Fc区中进行修饰以相对于亲本Fc，例如，(a)增加或降低抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，(b)增加或降低补体介导的细胞毒性(CDC)，(c)增加或降低对于C1q的亲和力和/或(d)增加或降低对于Fc受体的亲和力。可以使得产生具有这些特征的变体Fc区的特定修饰(例如，一个或多个氨基酸取代)在本领域中是熟知的，并总结于例如WO2016/081748和WO 2017/152085中。

在某些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体包含杂合体重链恒定区。在某些实施方案中，所述杂合体重链恒定区从N末端到C末端依次包含人CH1结构域、人铰链结构域、人CH2结构域和人CH3结构域，其中所述结构域中的至少2个来自不同的同种型(即选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。在某些实施方案中，所述杂合体重链恒定区是IgG2/IgG1重链恒定区。在某些实施方案中，所述IgG2/IgG1重链恒定区包含来自IgG2的CH1和铰链以及IgG1的CH2和CH3。在某些实施方案中，所述IgG2/IgG1重链恒定区包含来自IgG2(具有C219S)的CH1和铰链以及IgG1(具有A330S/P331S)的CH2和CH3。在一些实施方案中，所述IgG2/IgG1重链恒定区包含SEQ ID NO:14中列出的氨基酸序列或由其组成。

在一些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体是人抗体或人源化抗体。

在一些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体是双特异性抗体。

在一些实施方案中，所述CD73拮抗剂抗体是与部分缀合的免疫缀合物，所述部分如可检测标记(例如，放射性同位素、荧光标记、酶和其他合适的抗体标签)或抗癌剂(例如抗代谢药、烷化剂，DNA小沟结合剂、DNA嵌入剂、DNA交联剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、核输出抑制剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶I或II抑制剂、热休克蛋白抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗生素和抗有丝分裂剂)。在一些实施方案中，所述免疫缀合物是抗体-药物缀合物(ADC)。

还考虑了包含重链可变区序列和轻链可变区序列的CD73拮抗剂抗体，所述重链可变区序列和轻链可变区序列与本文所述的抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列是至少85％，例如至少90％、95％或98％相同的。III.PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体

在本文所述的方法中，可以将CD73拮抗剂抗体与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体一起给予。PD-1是由激活的T细胞和B细胞表达的关键免疫检查点受体，并介导免疫抑制。PD-1是CD28受体家族(包括CD28、CTLA-4、ICOS、PD-1和BTLA)的成员。已经鉴定了针对PD-1的两种细胞表面糖蛋白配体：程序性死亡配体-1(PD-L1)和程序性死亡配体-2(PD-L2)，其在抗原呈递细胞以及许多人类癌症上表达并且已显示在与PD-1结合后下调T细胞激活和细胞因子分泌。在临床前模型中，PD-1/PD-L1相互作用的抑制介导了有效的抗肿瘤活性。

在美国专利号8,008,449和8,779,105中公开了以高亲和力特异性结合PD-1的HuMAb。其他PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体已经描述于例如美国专利号6,808,710、7,488,802、8,168,757和8,354,509和PCT公开号WO 2012/145493中。已经证明美国专利号8,008,449中公开的每种PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体均展现以下特征中的一种或多种：(a)以1x 10

在一个实施方案中，所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体是纳武单抗。纳武单抗(也称为

在一个实施方案中，所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体是派姆单抗。派姆单抗(也称为

在一个实施方案中，所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体是作为单克隆抗体的MEDI0608(以前称为AMP-514)。MEDI0608描述于例如美国专利号8,609,089B2或http://www.cancer.gov/drugdictionary？cdrid＝756047(最后访问：2014年12月14日)。

在一个实施方案中，所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体是作为人源化单克隆抗体的匹地利珠单抗(CT-011)。匹地利珠单抗描述于美国专利号8,686,119B2或WO 2013/014668A1。有人质疑CT-011对PD-1结合的特异性。

可用于本文所述方法的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体还包括特异性地结合人PD-1，并且与纳武单抗或其他PD-1拮抗剂抗体竞争或交叉竞争结合人PD-1，或结合与纳武单抗或其他PD-1拮抗剂抗体所结合表位相同的人PD-1上的表位的分离的抗体(参见例如美国专利号8,008,449和8,779,105；WO2013/173223)。

适用于所公开的组合物中的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体是以高特异性和亲和力与PD-1结合、阻断PD-L1和或PD-L2的结合、和抑制PD-1信号传导通路的免疫抑制作用的抗体。在本文公开的任何组合物或方法中，PD-1拮抗剂抗体包括与PD-1受体结合并展现与完整抗体在抑制配体结合和上调免疫系统方面的功能特性相似的功能特性的抗原结合部分或片段。在某些实施方案中，所述PD-1拮抗剂抗体或其抗原结合部分与纳武单抗交叉竞争结合人PD-1。

在某些实施方案中，所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体或其抗原结合部分是嵌合、人源化或人单克隆抗体或其部分。在某些实施方案中，所述抗体是人源化抗体。在其他实施方案中，所述抗体是人抗体。可以使用IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的抗体。

在某些实施方案中，所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体或其抗原结合部分包含人IgG1或IgG4同种型的重链恒定区。在某些其他实施方案中，所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体或其抗原结合部分的IgG4重链恒定区的序列含有S228P突变，所述突变用通常在IgG1同种型抗体中的相应位置发现的脯氨酸残基替代铰链区中的丝氨酸残基。存在于纳武单抗中的这个突变阻止Fab臂与内源IgG4抗体的交换，同时保留对与野生型IgG4抗体相关的激活性Fc受体的低亲和力(Wang等人,2014)。在其他实施方案中，抗体包含轻链恒定区，其为人κ或λ恒定区。在其他实施方案中，所述PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体或其抗原结合部分是单克隆抗体或其抗原结合部分。在本文所述的包括给予PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的任何治疗方法的某些实施方案中，所述抗体是纳武单抗。在其他实施方案中，所述抗体是派姆单抗。在其他实施方案中，所述PD-1拮抗剂抗体选自美国专利号8,008,449中所述的人抗体17D8、2D3、4H1、4A11、7D3和5F4。在其他实施方案中，所述PD-1拮抗剂抗体是MEDI0608(以前称为AMP-514)、AMP-224或匹地利珠单抗(CT-011)。

在某些实施方案中，与所述CD73拮抗剂抗体一起给予的抗体是抗PD-L1抗体。由于抗PD-1和抗PD-L1抗体靶向相同的信号传导通路，并且在临床试验中已显示在多种癌症中展现相似的功效水平，因此在本文公开的任何治疗方法或组合物中，抗PD-L1抗体可以替代PD-1拮抗剂抗体。在一个实施方案中，所述抗PD-L1抗体是BMS-936559(以前称为12A4或MDX-1105)(参见例如美国专利号7,943,743；WO 2013/173223)或包含3G10、12A4、10A5、5F8、10H10、1B12、7H1、11E6、12B7和13G4的CDR或可变区的抗体(描述于PCT公开案WO 07/005874和美国专利号7,943,743中)。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体是MEDI4736(也称为抗B7-H1)、MPDL3280A(也称为RG7446、阿特珠单抗和TECENTRIQ)、MSB0010718C(WO 2013/79174)或rHigM12B7。也可以使用WO 2013/173223、WO 2011/066389、WO2012/145493、美国专利号7,635,757和8,217,149和美国公开号2009/145493中公开的任何抗PD-L1抗体。与这些抗体中的任何一种竞争和/或结合与这些抗体中的任何一种所结合表位相同的表位的抗PD-L1抗体也可以用于本文所述的治疗。

因此，通常，可用于本文所述方法中的PD-1/PD-L1轴拮抗剂药剂包括纳武单抗、派姆单抗、atelozilumab、度伐鲁单抗、REGN2810、PDR001、AMP-514(MEDI0608)、AMP-224、BGB-A317或在以下公开案的任何一个中描述的PD-1或PD-L1拮抗剂：WO 2009/014708、WO 03/099196、WO 2009/114335和WO 2011/161699。

IV.药物组合物

进一步提供了含有单独配制的或与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体一起配制的CD73拮抗剂抗体以及药学上可接受的载体的组合物，例如药物组合物。

在某些实施方案中，组合物包含浓度为至少1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml、200mg/ml、1-300mg/ml或100-300mg/ml的CD73拮抗剂抗体。

也可以将本文所述的药物组合物在组合疗法(即与其他药剂组合)中给予。例如，组合疗法可以包括与PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体组合的本文所述的CD73拮抗剂抗体。

在一些实施方案中，本文公开的治疗性组合物可以包含用于治疗癌症的其他化合物、药物和/或药剂。此类化合物、药物和/或药剂可以包括例如刺激对给定癌症的免疫应答的化疗药物、小分子药物或抗体。在一些情况下，治疗性组合物可以包括例如在组合疗法部分中列出的一种或多种药剂。

如本文所用，“药学上可接受的载体”包括生理上可相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。优选地，载体适用于静脉内、肌内、皮下、肠胃外、脊髓或表皮给予(例如，通过注射或输注)。根据给予的途径，可以将活性化合物(即抗体、免疫缀合物或双特异性分子)包被在材料中以保护化合物免受酸和可能使化合物失活的其他自然条件的作用。

本文所述的药物化合物可以包含一种或多种药学上可接受的盐。“药学上可接受的盐”是指保留所需的母体化合物的生物活性并且不赋予任何不希望的毒理作用的盐(参见例如Berge,S.M.等人(1977)J.Pharm.Sci.66:1-19)。此类盐的例子包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括衍生自无毒无机酸(如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等)以及衍生自无毒有机酸(如脂肪族单羧酸和脂肪族二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳香酸、脂肪族和芳香族磺酸等)的那些。碱加成盐包括衍生自碱土金属(如钠、钾、镁、钙等)以及衍生自无毒有机胺(如N,N'-二苄基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因等)的那些。

本文所述的药物组合物也可以包含药学上可接受的抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的例子包括：(1)水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基茴香醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。

可用于本文所述的药物组合物中的合适的水性和非水性载体的例子包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物，植物油(如橄榄油)和可注射的有机酯(如油酸乙酯)。可以例如通过使用包衣材料(如卵磷脂)、在分散液的情况下通过维持所需粒度、以及通过使用表面活性剂来维持适当流动性。

这些组合物还可以含有佐剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以通过上述灭菌程序以及通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯，氯丁醇，苯酚山梨酸等)两种方法来确保防止微生物的存在。还可能令人希望的是在组合物中包括等渗剂，如糖、氯化钠等。另外，可通过包含延迟吸收的药剂如单硬脂酸铝和明胶来实现可注射药物形式的延迟吸收。

药学上可接受的载体包括无菌水性溶液或分散液以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。此类介质和药剂用于药物活性物质的用途是本领域已知的。除非任何常规介质或药剂与活性化合物不相容，否则考虑其在本文所述的药物组合物中的用途。补充性活性化合物也可掺入到组合物中。

在制造和储存条件下，治疗性组合物通常必须是无菌且稳定的。可以将组合物配制成溶液、微乳液、脂质体或适合高药物浓度的其他有序结构。载体可以是溶剂或分散介质，所述溶剂或分散介质含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)和其适合的混合物。例如，通过使用包衣(如卵磷脂)、在分散液的情况下通过维持所需粒度、以及通过使用表面活性剂，可以维持适当的流动性。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(如甘露糖醇、山梨糖醇)、或氯化钠。通过在所述组合物中包含延迟吸收的药剂例如单硬脂酸盐和明胶，可以实现可注射组合物的延长吸收。

无菌可注射溶液可以通过以下方式制备：将活性化合物以所需量掺入视需要具有上文所列举成分中的一种或组合的适当溶剂中，之后微过滤灭菌。通常，通过将所述活性化合物掺入无菌媒介物中来制备分散液，所述无菌媒介物含有碱性分散介质和来自以上列举的那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选制备方法为真空干燥和冷冻干燥(冻干)，这些方法由先前无菌过滤的溶液产生活性成分和任何其他所需成分的粉末。

可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据正在被治疗的受试者和特定的给予模式而变化。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常是产生治疗效果的组合物的量。通常，从百分比来说，此量范围为约0.01％至约99％的活性成分，优选约0.1％至约70％、最优选约1％至约30％的活性成分，所述活性成分与药学上可接受的载体相组合。

可以调整剂量方案以提供最佳的所需反应(例如，治疗反应)。例如，可以给予单次推注，可以随时间给予几个分开的剂量，或者可以如根据治疗情况的紧急程度指示的按比例减少或增加剂量。以剂量单位形式配制肠胃外组合物是尤其有利的，以便于给予和剂量的均匀。如本文所用，剂量单位形式是指适合作为单位剂量用于待治疗的受试者的物理上离散的单位；每个单位含有经计算与所需的药物载体联合可产生所需治疗效果的预定量的活性化合物。本文所述的剂量单位形式的规格取决于或直接依赖于(a)活性化合物的独特特征和所要实现的特定治疗效果，和(b)在合成用于治疗个体中的敏感性的这种活性化合物的领域中固有的限制。

抗体可以作为持续释放配制品给予，在这种情况下需要不太频繁的给予。剂量和频率根据患者中抗体的半衰期而变化。通常，人抗体显示出最长的半衰期，其次是人源化抗体、嵌合抗体和非人抗体。给予的剂量和频率可以根据治疗是预防性的还是治疗性的而变化。在预防性应用中，以相对不频繁的间隔长时间给予相对低的剂量。一些患者在其余生持续接受治疗。在治疗性应用中，有时需要以相对短的间隔相对高的剂量，直到疾病的进展减少或终止，并且优选直到患者显示疾病症状的部分或完全改善。此后，可以向患者给予预防性方案。

可以改变本文所述的药物组合物中活性成分的实际剂量水平，以便获得有效于实现针对特定患者、组合物和给予模式的所希望治疗反应的量的活性成分，而不会对患者造成毒性。所选的剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括所采用的本文所述的特定组合物或其酯、盐或酰胺的活性，给予途径，给予时间，所采用的特定化合物的排泄速率，治疗持续时间，与所采用的特定化合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料，所治疗患者的年龄、性别、体重、病症、一般健康状况和既往病历，以及医学领域中熟知的类似因素。

本文所述的CD73拮抗剂抗体的“治疗有效剂量”优选导致疾病症状的严重程度的降低、无疾病症状时期的频率和持续时间的增加、或由于疾病困扰引起的损伤或残疾的预防。在癌症的情况下，治疗有效剂量优选预防与癌症有关的身体症状的进一步恶化。癌症的症状是本领域中是熟知的，并且包括例如异常的痣特征、痣外观(包括不对称性、边界、颜色和/或直径)的变化、新色素化的皮肤区域、异常痣、指甲下变黑的区域、乳房肿块、乳头变化、乳房囊肿、乳房疼痛、死亡、体重减轻、无力、过度疲劳、进食困难、食欲不振、慢性咳嗽、恶化的呼吸困难、咳血、尿中带血、大便带血、恶心、呕吐、肝转移瘤、肺转移瘤、骨转移瘤、腹部饱胀感、腹胀、腹腔积液、阴道出血、便秘、腹胀、结肠穿孔、急性腹膜炎(感染、发烧、疼痛)、疼痛、吐血、大量出汗、发烧、高血压、贫血、腹泻、黄疸、头晕、发冷、肌肉痉挛、结肠转移瘤、肺转移瘤、膀胱转移瘤、肝转移瘤、骨转移瘤、肾转移瘤和胰腺转移瘤、吞咽困难等。

治疗有效剂量可以预防或延迟癌症的发作，如当出现疾病的早期或初步体征时可能需要所述治疗有效剂量。用于诊断癌症的实验室测试包括化学(包括CD73水平的测量)、血液学、血清学和放射学。因此，监测前述任何一项的任何临床或生化测定可用于确定特定治疗是否是用于治疗癌症的治疗有效剂量。本领域普通技术人员将能够基于此类因素(如受试者的体型、受试者症状的严重程度以及所选择的给予的特定组合物或途径)来确定此类量。

可以使用本领域已知的多种方法中的一种或多种经由一种或多种给予途径给予本文所述的组合物。如技术人员所理解的，给予途径和/或模式将根据所希望的结果而变化。本文所述的抗体的优选给予途径包括静脉内、肌内、皮内、腹膜内、皮下、脊髓或其他肠胃外给予途径，例如通过注射或输注。如本文所用，短语“肠胃外给予”意指除了肠给予和局部给予之外，通常通过注射的给予模式，并且包括而不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眼眶内、心脏内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外以及胸骨内注射和输注。

可替代地，本文所述的抗体可以经由非肠胃外途径(如局部、表皮或粘膜给予途径)给予，例如鼻内、口服、阴道、直肠、舌下或局部给予。

可以将活性化合物与保护化合物免于快速释放的载体一起制备，如控释配制品，包括植入物、透皮贴剂和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。许多用于制备此类配制品的方法是获得专利权的或是本领域的技术人员通常已知的。参见例如Sustained andControlled Release Drug Delivery Systems,J.R.Robinson,编辑,Marcel Dekker,Inc.,纽约,1978。

可以将治疗性组合物用本领域已知的医疗装置给予。例如，在优选的实施方案中，可以将本文所述的治疗性组合物用无针皮下注射装置，如在美国专利号5,399,163、5,383,851、5,312,335、5,064,413、4,941,880、4,790,824或4,596,556中披露的装置给予。用于与本文所述的CD73拮抗剂抗体一起使用的熟知的植入物和模块的例子包括：美国专利号4,487,603，其披露了一种用于以受控制的速率分配药物的可植入的微输注泵；美国专利号4,486,194，其披露了用于通过皮肤给予药物的治疗装置；美国专利号4,447,233，其披露了用于以精确的输注速率递送药物的药物输注泵；美国专利号4,447,224，其披露了用于连续药物递送的可变流量可植入输注设备；美国专利号4,439,196，其披露了具有多室区室的渗透性药物递送系统；和美国专利号4,475,196，其披露了渗透性药物递送系统。将这些专利通过引用并入本文。许多其他此类植入物、递送系统和模块是本领域技术人员已知的。

在某些实施方案中，可以将本文所述的CD73拮抗剂抗体配制以确保体内适当分布。例如，血脑屏障(BBB)排斥许多高度亲水性化合物。为了确保本文所述的治疗性化合物穿过BBB(如果需要的话)，可以将它们配制在例如脂质体中。有关制造脂质体的方法，参见例如美国专利4,522,811、5,374,548和5,399,331。脂质体可以包含选择性地转移到特定细胞或器官中从而增强靶向药物递送的一个或多个部分(参见例如V.V.Ranade(1989)J.Clin.Pharmacol.29:685)。示例性的靶向部分包括叶酸或生物素(参见例如Low等人的美国专利5,416,016)；甘露糖苷(Umezawa等人,(1988)Biochem.Biophys.Res.Commun.153:1038)；抗体(P.G.Bloeman等人(1995)FEBS Lett.357:140；M.Owais等人(1995)Antimicrob.Agents Chemother.39:180)；表面活性剂蛋白A受体(Briscoe等人(1995)Am.J.Physiol.1233:134)；p120(Schreier等人(1994)J.Biol.Chem.269:9090)；还参见K.Keinanen；M.L.Laukkanen(1994)FEBS Lett.346:123；J.J.Killion；I.J.Fidler(1994)Immunomethods 4:273。

V.试剂盒和单位剂型

本文还提供了试剂盒，其包括适用于上述方法的治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物含有CD73拮抗剂抗体(例如，CD73.A)和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体(例如，纳武单抗)和药学上可接受的载体。所述试剂盒任选地还可以包括说明书，例如包括给予时间表，以允许从业者(例如医师、护士或患者)给予其中所含的组合物，以向患有癌症(例如，实体瘤)的患者给予所述组合物。所述试剂盒还可以包括注射器。

任选地，所述试剂盒包括单剂量药物组合物的多个包装，每个包装含有有效量的CD73拮抗剂抗体或PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体，用于根据以上提供的方法进行单次给予。试剂盒中还可以包括给予一种或多种药物组合物所必需的仪器或设备。例如，试剂盒可以提供一个或多个预填充的注射器，所述注射器含有一定量的CD73拮抗剂抗体或PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体。

因此，在一个实施方案中，本文提供了一种用于在人患者中治疗实体瘤的试剂盒，所述试剂盒包含：

(a)一定剂量的CD73拮抗剂抗体，其包含具有SEQ ID NO:6中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:7中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；

(b)一定剂量的PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体，其包含具有SEQ ID NO:18中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:19中列出的序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；以及

(c)在本文所述的方法中使用CD73拮抗剂抗体和PD-1/PD-L1轴拮抗剂抗体的说明书。

通过以下实施例进一步说明本公开文本，不应将所述实施例视为进一步限制。遍及本申请中引用的所有附图和所有参考文献、基因库(Genbank)序列、专利和公开的专利申请的内容通过引用明确地并入本文。具体而言，将PCT公开案WO 09/045957、WO 09/073533、WO 09/073546、WO 09/054863、WO 2014/089113、WO 2016/075099、WO 2016/055609、WO2016/081748、WO 2017/152085和美国专利公开号2011/0150892和2016/129108的披露内容通过引用明确地并入本文。

实施例

实施例1：用CD73拮抗剂抗体的I期临床试验

此实施例描述了CD73抗体CD73.A的临床试验。CD73.A是包含两条重链和两条轻链的抗体，每条重链由SEQ ID NO:3或4组成，每条轻链由SEQ ID NO:5组成，所述抗体先前描述于WO 16/081748和WO 17/152085中，将这些文献的全部内容通过引用特别地并入本文。简言之，CD73.A有效结合人CD73，并且具有双重作用机制：抑制其酶活性并且促进内化(Barnhart BC,等人Cancer Res.2016；76(增刊14)(摘要1476))。表2提供了CD73.A的特征的汇总：

表2：CD73.A的特征

所述临床试验旨在评估在患有实体癌症(晚期或已扩散)的患者中，实验药物CD73.A单独以及当与纳武单抗(PD-1拮抗剂抗体)组合时的安全性和缩小肿瘤的能力。干预措施包括在“单一疗法导入”中静脉内给予CD73.A，然后给予CD73.A和纳武单抗的组合。剂量扩展研究正在进行中。

主要结果量度为不良事件(AE)、严重不良事件(SAE)、导致停药的AE、和死亡的数量。次要结果量度包括以下：

·治疗前和治疗中活检的CD73.A酶测定

·治疗前和治疗中活检的CD73.A免疫组织化学(IHC)

·客观反应率(ORR)、反应持续时间(DOR)、无进展存活率(PFSR)

·最大观察血清浓度(Cmax)、最大观察血清浓度(Tmax)的时间、从零时间到最后可量化浓度的时间的血清浓度-时间曲线下面积[AUC(0-T)]、1个给药间隔的血清浓度-时间曲线下面积[AUC(TAU)]、表观终末半衰期(T-HALF)、从零时间外推至无限时间的血清浓度-时间曲线下面积[AUC(INF)]、有效消除半衰期(T-HALFeff)

·给药间隔结束时的浓度(Ctau)、给药间隔结束时观察到的谷血清浓度(Ctrough)、总身体清除率(CLT)、稳态分布体积(Vss)、累积指数(AI)、末期表观分布体积(Vz)、波动程度或波动指数(DF)

·CD73.A和纳武单抗的阳性抗药抗体(ADA)的频率

纳入标准是：至少18岁、晚期实体瘤、东部肿瘤协作组(ECOG)0-1、可接受的实验室测试结果，并且允许进行活检。

排除标准是：患有中枢神经系统(CNS)肿瘤、不受控制或严重的心血管疾病、活动性或已知的自身免疫疾病或有器官移植的患者。

详细的纳入标准：

·在知情同意时至少年满18岁。

·东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态≤1。

·具有如RECIST v1.1所定义的可测量疾病的至少一个病灶

·从最后一次治疗起超过4周的任何时间的洗脱期后，先前暴露于采用任何特异性靶向检查点途径抑制的药剂(如抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗LAG-3和抗CTLA-4抗体)的疗法，(注意：(i)必须已经确认经历过先前1级至2级检查点疗法相关的免疫介导的AE的受试者从这些事件中恢复(除了用补充方式治疗的内分泌病外)，如由所有相关临床症状、体格检查异常发现和/或相关实验室异常的消退所记录的。在适用的情况下，这些受试者还必须在开始用研究药物治疗之前至少14天完成类固醇逐渐减少以治疗这些AE。(ii)先前具有≥3级检查点疗法相关的免疫AE的受试者的资格可能是合格的(例如，允许无症状的孤立的3级脂肪酶升高，而无胰腺炎的临床或放射学特征)。

·从最后一次治疗起超过4周的任何时间的洗脱期后，用任何特异性靶向T细胞共刺激途径的药剂(如抗糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体、抗CD137或抗OX40抗体)的先前疗法(以下所列除外)。

·第一剂量的研究药物之前至少2周，必须已完成先前的姑息性放射疗法。可能需要在第一剂量的研究药物的4周内进行姑息性放射疗法的、在基线时有症状性肿瘤病灶的受试者应在治疗前接受姑息性放射疗法。

·同意治疗前的肿瘤活检并且有可及的病灶。

·足够的器官功能，定义如下：

(i)白细胞计数≥2000/μL(第一次研究药物给予的2周内在脱离任何生长因子的情况下稳定)；(ii)嗜中性粒细胞≥1500/μL(第一次研究药物给予的2周内在脱离任何生长因子的情况下稳定)；(iii)血小板≥100×10

·能够依从治疗、PK、免疫原性、生物标记和PD样品收集、和所需的研究随访。

·有生育能力的女性(WOCBP)在开始研究药物之前24小时内必须具有阴性血清或尿液妊娠测试(尿液妊娠测试最低敏感度25IU/L或等效单位的人绒毛膜促性腺激素[HCG])。

·无母乳喂养。

·在晚期或转移性环境中，接受过至少一种标准治疗方案，并且然后有进展或对其不耐受。

·除了原发性CNS肿瘤或以CNS转移瘤作为活动性疾病的唯一部位，允许所有实体瘤组织结构。

·对于卵巢癌，(a)接受过至少一种先前的含铂治疗方案并且有进展/对其不耐受，以及(b)对铂敏感并且接受过至少2种先前的含铂治疗线。

·对于CRC，(a)接受过至少一种针对转移性和/或不可切除疾病的标准全身疗法，并且有进展/对其不耐受(或在辅助疗法的6个月内有进展)，以及(b)已知的KRAS突变状态。

·对于胃癌(包括胃食管交界部肿瘤)，接受过至少一种针对转移性和/或不可切除疾病的标准全身疗法，并且有进展/对其不耐受(或在辅助疗法的6个月内有进展)。

·对于胰腺癌，接受过至少一种先前标准疗法，并且有进展/对其不耐受(或不是用于所述至少一种先前标准疗法的候选)。

排除标准如下：

目标疾病除外：

·已知或怀疑的CNS转移，未经治疗的CNS转移，或以CNS为唯一疾病部位。但是，允许受控的脑转移。受控的脑转移定义为在接受放射和/或外科手术治疗后至少4周无放射影像进展(或如果临床上未指示干预，则观察4周)，不再用类固醇治疗持续至少2周以及无新的或进展性神经病学体征和症状。

·癌性脑膜炎。

·参加过用纳武单抗进行的任何先前临床研究，其中OS被列为主要或共主要终点，且尚未完成基于主要终点的分析。

·对于胰腺癌：基线时临床相关腹水(定义为需要穿刺术)，或具有中度腹水放射影像。仅允许极少量的腹水放射影像。

病史和并发疾病

·先前恶性肿瘤，不同于用于招募的恶性肿瘤，少于2年前诊断出(非黑色素瘤皮肤癌和原位癌除外，如以下：膀胱癌、结肠癌、宫颈癌/发育异常、黑色素瘤或乳腺癌)。超过2年前诊断出患有第二次恶性肿瘤，在间隔期间已接受过具有治疗意图的疗法并且无疾病迹象且复发风险较低的受试者是合格的。

·需要同时干预的其他活动性恶性肿瘤。

·先前的器官同种异体移植。

·允许已接受过先前抗癌治疗(即化学疗法、放射疗法、激素或免疫疗法)的受试者：对于细胞毒性剂，必须从最后剂量的先前抗癌疗法和开始研究疗法起已经过至少4周；对于非细胞毒性剂，必须从最后剂量的先前抗癌疗法和开始研究疗法起已经过至少4周或5个半衰期(以较短者为准)。

·接受过采用抗CD73抗体、抗CD39抗体或腺苷2A受体抑制剂的先前疗法。

·最近6个月内有脑血管意外、深静脉血栓形成或其他动脉血栓的既往史。

·活动性、已知或疑似自身免疫疾病，以下情况除外。患有白癜风、1型糖尿病、仅需要激素替代的由于自身免疫病症所致的残留甲状腺功能减退症的受试者，具有格雷夫斯病史的甲状腺功能正常的(疑似自身免疫性甲状腺障碍的受试者在第一剂量的研究药物之前必须对甲状腺球蛋白和甲状腺过氧化物酶抗体和刺激甲状腺的免疫球蛋白是阴性的)、不需要全身治疗的银屑病或预期在不存在外部触发因素的情况下不会复发的病症的受试者。

·症状性或可能干扰疑似药物相关肺毒性的检测或管理的间质性肺疾病。

·需要以大于10mg/天的泼尼松剂量或其当量的剂量的复发性类固醇爆发或慢性类固醇的慢性阻塞性肺病。

·除了在没有活动性自身免疫疾病的情况下，肾上腺替代类固醇剂量为>10mg每日泼尼松当量外，需要在研究药物给予的14天内用皮质类固醇(>10mg每日泼尼松当量)或其他免疫抑制药物进行全身治疗的病症。

·不受控制或严重的心血管疾病，包括但不限于以下中的任何一种：

(i)在过去的6个月内心肌梗死或中风/短暂性脑缺血性发作；(ii)在过去的3个月内不受控制的心绞痛；(iii)任何临床上明显的心律失常病史(如室性心动过速、室颤或尖端扭转)；(iv)使用Fridericia公式得出的心率校正QT间期(QTcF)延长>480毫秒；(v)其他临床上重要的心脏病史(例如，心肌病、充血性心力衰竭(纽约心脏协会(NYHA)功能分类III至IV)、心包炎、明显的心包积液)；(vi)需要每天补充氧气疗法

·活动性肝炎的证据如下：

(i)乙型肝炎表面抗原的测试呈阳性；(ii)丙型肝炎抗体和/或定性病毒载量的测试呈阳性(通过聚合酶链式反应[PCR])(注意：具有阳性丙型肝炎抗体和阴性定量丙型肝炎(通过PCR)的受试者是合格的。消退的甲型肝炎病毒感染病史不是排除标准。)

·开始研究药物疗法前≤7天的活动性细菌、病毒或真菌感染的证据。

·已知人类免疫缺陷病毒(HIV)测试阳性史或已知获得性免疫缺陷综合征(AIDS)测试阳性史。

·活动性或潜伏性结核感染的证据或病史，包括最近转变为阳性的纯化的蛋白衍生物、证明感染性浸润的胸部X射线、或最近不明原因的发烧/寒战模式变化。

·研究药物给予的4周内的大外科手术。在第一剂量的研究药物之前至少14天，受试者必须已经从大外科手术或重大创伤性损伤中恢复。

·归因于先前抗癌疗法的所有毒性(除脱发和疲劳之外)必须在给予研究药物之前消退为1级(美国国家癌症研究所[NCI]不良事件通用术语标准[CTCAE]4.03版)或基线。允许预期不会消退并且导致长期后遗症(如基于铂的疗法后的慢性神经病)的归因于先前抗癌疗法的毒性的受试者。

·在研究药物之前的12周内，使用含有活病毒的非肿瘤学疫苗预防传染性疾病。无限制地允许使用灭活的季节性流感疫苗，例如

·在第一剂量的研究药物之前的2周内，使用过压紧的红细胞或接受过血小板输注。

·可能会使研究药物的给予变得危险，或可能会对依从或耐受研究的能力产生不利影响的已知或潜在医学病症。

过敏和药物不良反应

·排除纳武单抗过敏史。

·排除对先前抗癌免疫调节疗法(例如，检查点抑制剂、T细胞共刺激抗体)的任何重大药物过敏(如过敏反应)史。

在以下实施例中描述了来自临床试验的结果。

实施例2：在患有晚期实体瘤的患者中，CD73拮抗剂抗体CD73.A与纳武单抗的组合的初步1期概况

CD73是将单磷酸腺苷转化为腺苷的胞外核酸酶，所述腺苷是抑制CD8

这项开放标签、剂量递增和扩展研究中，对具有≥1种先前疗法的患者进行了治疗。从两周单一疗法导入开始递增，其中患者接受CD73.A150-1600mg(150mg、300mg、600mg、1200mg和1600mg)IV Q1W，然后接受CD73.A(相同剂量)Q1W+NIVO 240mg Q2W(IV)。评价了药代动力学(PK)、药效学(PD)、安全性和初步抗肿瘤活性。PD分析包括免疫组织化学、肿瘤活检中的酶活性测定、和外周血中受体占有率和可溶性CD73的评价。

截至2017年12月19日数据截止，在剂量递增期间，用CD73.A±纳武单抗治疗59名患者。由于靶标介导的药物处置(TMDD)，较低剂量下的CD73.A的PK是非线性的，并且从1200-1600mg暴露成比例增加。在所有剂量下，CD73.A均能在外周和肿瘤中展现完全和持久的CD73靶标接合。单一疗法导入和组合治疗均是良好耐受的，其中无G4治疗相关的AE(TRAE)，并且无治疗相关的死亡。接受组合治疗的52名患者中有30名(58％)观察到TRAE，无明确的剂量关系。只有8名患者(15％)经历了G3 TRAE，并且1名由于TRAE(G3升高的ALT)而停止治疗。在所有剂量下，CD73.A均有效抑制了肿瘤脉管系统和肿瘤细胞中的CD73酶活性，而无剂量依赖性。总体而言，患有头颈癌、胰腺癌、前列腺癌、肛门癌和肾癌的7名患者实现了确定的部分反应，并且10名患者疾病稳定。19周后发生了四个反应，晚于纳武单抗的典型反应，这表明初步的临床活性。在通常对纳武单抗不敏感的肿瘤类型中也观察到了反应。

CD73.A+纳武单抗是良好耐受的，其中在外周和肿瘤中具有CD73靶标接合，并且安全性与NIVO单一疗法的相似。所述组合展示了初步的抗肿瘤活性，包括接受先前IO的患者和患有通常对抗PD-1疗法不敏感的肿瘤的患者中的临床益处。

实施例3：CD73在肿瘤中表达

将来自两名招募到所述临床试验中的癌症患者的肿瘤组织用CD73拮抗剂抗体染色。图1所示的结果表明前列腺腺癌含有CD73阳性内皮细胞，并且胰腺腺癌含有CD73阳性肿瘤细胞。

实施例4：所招募患者的临床试验和安全性的详细资料

临床试验是CD73.A的1/2a期开放标签研究，将所述CD73.A在患有晚期实体瘤的患者中以单一药剂和与纳武单抗组合给予，并且所述临床试验分为3部分进行：第1A部分(组合疗法剂量递增与单一疗法导入)、第1B部分(PD子研究)和第2部分(群组扩展)。试验中包括先前用免疫检查点抑制剂治疗的患者。

如上所讨论，临床试验的主要目的是评估单独给予CD73.A和组合给予CD73.A与纳武单抗时的安全性和耐受性。为此，评估了不良事件(AE)、严重不良事件(SAE)、导致停药的AE、和死亡的数量。

所述试验的次要目的是表征单独给予和与纳武单抗组合给予的CD73.A的药效学(PD)活性；如通过测量客观反应率(ORR)、反应持续时间(DOR)和无进展存活率(PFSR)评估CD73.A与纳武单抗的组合的初步抗肿瘤活性；表征单独给予和与纳武单抗组合给予的CD73.A的药代动力学(PK)和免疫原性；以及表征与CD73.A组合给予时，纳武单抗的免疫原性。

所述试验的探索性目的是探索PD活性与功效和安全性结果之间的关系；探索PD活性的暴露-反应关系；评估用CD73.A与纳武单抗组合治疗的受试者的总体存活期(OS)；表征与CD73.A组合给予时，纳武单抗的PK；表征单独给予或与纳武单抗组合给予的CD73.A的剂量限制性毒性(DLT)特性；以及捕获毒性的贝叶斯分析。

在具有先前治疗过的晚期恶性肿瘤的患者中进行了剂量递增研究。剂量递增和群组扩展的设计示于图2中。简言之，在Q1W时间表中，患者在第0周期的第1天(单一疗法导入的14天周期)接受了指定剂量的CD73.A(150mg-1600mg；150mg、300mg、600mg、1200mg和1600mg)。从周期1的第1天开始(28天周期组合疗法，共6个周期)，除每周一个剂量的CD73.A外，还以240mg Q2W的平剂量向患者给予纳武单抗，并且在每个CD73.A剂量水平下，纳武单抗给药方案均相同。

表3示出了试验中招募的患者的基线人口统计学、肿瘤类型和先前疗法。人口统计学在多种剂量水平上是相似的。

表3：所招募患者的人口统计学、肿瘤类型和先前疗法

CRC＝结直肠；ECOG PS＝东部肿瘤协作组体能状态；RCC＝肾细胞癌；SCCHN＝头颈部鳞状细胞癌

招募的患者的安全性汇总示于表4。与TRAE没有明确的剂量关系，并且未达到最大耐受剂量。

表4.

实施例5.人患者中CD73.A的药代动力学

此实施例描述了向招募到临床试验中的患者给予的CD73.A的药代动力学(PK)。

如图3所示，由于靶标介导的药物处置(TMDD)，CD73.A的PK在较低剂量下显现是非线性的。在较高剂量下，抗体的暴露成比例增加，在约4至5周内达到稳态浓度。

实施例6.在给予CD73.A的患者中CD73的受体占有率和细胞表面水平

此实施例描述了在临床试验的患者的外周细胞中，CD73.A的外周靶标接合。如WO2017/152085的实施例22中所述，确定受体占有率，将所述文献通过引用以其整体并出于所有目的并入本文。此受体占有率测定甚至在纳武单抗存在的情况下也允许检测CD73.A抗体。

如图4所示，在给予CD73.A的24小时内，CD73.A在150mg Q1W下导致快速且完全的受体占有和在CD19 B细胞表面上的CD73的内化。所述作用在所有剂量水平上均一致，并且持续至给予CD73抗体后至少30天。

实施例7：给予CD73.A的患者中游离可溶性CD73的水平

此实施例描述了CD73.A对临床试验的患者的外周血中游离(即，未与CD73.A结合的)可溶性CD73(sCD73)水平的影响。

游离sCD73测定利用生物素化抗CD73抗体6E11(SEQ ID NO:28和29)(因为它和CD73.A竞争结合hCD73)以从测试样品中捕获未结合药物的sCD73。将MSD链霉亲和素金测定板在2℃至8℃下用50μL/孔的生物素化6E11包被过夜，其中所述生物素化6E11在1X DPBS缓冲液中稀释至0.5μg/mL的终浓度。第二天，将孔用含0.05％Tween 20的PBS洗涤，并且将在水中制备的0.5X StabilCoat以100μL/孔添加到孔中，并且在室温下孵育一小时。然后将孔抽出，并且将板干燥并其放入干燥剂袋中。将从研究动物抽取的测试样品在-70℃下保持冷冻。在测定当天，将测试样品解冻、充分混合并且在起始块(Starting Block)(PBS)中稀释至最小所需稀释度(MRD)1:2。将每次运行当天在起始块(PBS)中制备的标准曲线校正剂用于定义使用参考标准hCD73-his的生物分析方法的动态范围。将较早制备并且储存在-70℃下的质量控制样品在样品分析当天解冻，并且以与测试样品相同的方式进行处理。将制备的样品、质量控制样品(QC)和校准剂在25℃下在被包被的板上以约500rpm摇动孵育一小时，以允许游离sCD73与板上的捕获试剂结合。从孔中洗涤掉样品中未结合的物质。随后以50μL/孔在起始块(PBS)中以0.125μg/ml的终浓度使用钌化抗CD73抗体4C3(SEQ ID NO:38和39)(先前用0.1％Proclin 300以工作浓度制备)检测结合的sCD73。将板在25℃下以约500rpm摇动孵育一小时，并且然后再次洗涤，之后添加在水中制备的1X MSD读取缓冲液，并且然后通过电化学发光(ECL)技术在MSD Sector Imager 600上读数。标准曲线的技术范围是160-0.039ng/mL。将测试样品使用4-参数逻辑拟合回归模型定量。

如图5所示，在所有测试剂量下，早在给予CD73.A后6小时就无法检测到游离可溶性CD73，并且在≥600mg剂量下评估的所有时间点保持无法检测(在<600mg剂量下第8天作用反弹)。

实施例8：在给予CD73.A的患者中的CD73酶活性

此实施例描述了在临床试验患者中CD73.A对CD73酶活性的影响。使用以下方案测量CD73酶活性，所述方案改编自：Aliagas等人,2014.High Expression of Ecto-Nucleotidases CD39 and CD73 in Human Endometrial Tumors.Mediators ofInflammation.http://www.hindawi.com/journals/mi/2014/509027/。

1.将OCT包埋的组织以5μm切片，并且干燥至少10min

2.将切片在丙酮中固定10min(勿冲洗)，并且干燥至少10min

3.将载玻片用干燥剂在-80℃下储存

4.准备使用时，在升至室温(约25℃)之前，将载玻片在-20℃下适应20min

5.将切片在10％NBF(中性缓冲的福尔马林)中后固定2min，并且将载玻片用PBS洗涤3次

6.将切片在溶液1中在室温下孵育15min

7.在溶液1(50mM Tris-马来酸盐、2mM CaCl2、250mM蔗糖，pH 7.4)中放置15min后，轻拍掉溶液1(勿冲洗)

8.将切片在溶液2(含有5mM MnCl2、2mM Pb(NO3)2、2.5％w/v葡聚糖T200、2.5mM左旋四咪唑、1mM AMP的溶液1)中在37℃下孵育60min

阴性对照：无AMP的溶液2

9.在溶液2中放置60min(一小时)后，将切片在PBS中洗涤1次

10.将载玻片在室温1％v/v(NH4)2S中孵育恰好2min

11.将载玻片用dH2O冲洗几次

12.复染(例如，Mayer氏苏木精30sec，自来水冲洗，上蓝剂3min，自来水冲洗)

13.在分级的醇和二甲苯中脱水，用基于二甲苯的封固剂盖上盖玻片。

如图6A和6B所示，在肿瘤脉管系统(内皮细胞)和肿瘤细胞中，CD73.A有效地抑制了CD73酶活性。在CD73.A单一疗法导入(图6B)的第10天测试的所有剂量下，抑制都是明显的，并且在给予CD73抗体后维持至少30天。

实施例9：前列腺癌患者的病例报告

此实施例描述了用CD73.A和纳武单抗的组合治疗的患有前列腺癌的66岁男性患者。所述癌是微卫星稳定的，Gleason得分为7。所述患者已经历过用恩扎鲁胺、曲普瑞林、睾酮、多西紫杉醇和卡巴紫杉醇的先前治疗。

通过用CD73.A300mg Q1W和纳武单抗240mg Q2W治疗，实现部分反应(前列腺特异性抗原：基线692；最低点<0.1；当前0.1)(图7)。在组合治疗的第10周时实现反应，并且持续至第35周。所述患者患有孤立性脊柱转移瘤，通过切除和外部放射疗法治疗。靶病灶肿瘤负荷的最佳减少为75％。进展后恢复组合治疗，并且在第68周+正在进行中。

实施例10：胃食管交界部癌患者的病例报告

此实施例描述了用CD73.A和纳武单抗的组合治疗的患有胃食管交界部癌(胃食管交界部的腺癌)的61岁男性患者。所述癌是微卫星稳定的，且呈HER2阴性。所述患者已经历过用FOLFOX和紫杉醇+雷姆赛卢单抗的先前治疗。

通过用CD73.A600mg和纳武单抗240mg治疗实现部分反应(图8)。在第59周时实现了反应。靶病灶肿瘤负荷的最佳减少为36％。肿瘤的减少正在进行中，并且在第67周+时，患者在持续接受治疗。

实施例11：推荐的2期剂量的选择

表5总结了前述实施例中描述的结果，包括安全性、TMDD饱和、外周靶标覆盖和肿瘤中的酶抑制。

表5

总之，在所有剂量水平下均观察到耐受性、肿瘤CD73抑制和临床益处。在≥600mgCD73.A Q1W下观察到sCD73的持久饱和。在600mg Q1W下观察到CD73.A的稳态谷浓度，并且预测的在Q2W下的浓度超过TMDD阈值(图9)。基于这些结果和CD73.A Q2W方案的群体PK建模，选择CD73.A 600mg Q2W+纳武单抗240mg Q2W(或纳武单抗480mg Q4W)作为推荐的2期剂量。

实施例12：在人血清中作为药效学(PD)生物标记的总sCD73的定量分析

如下通过免疫捕获-LC-MS/MS定量测量患者的人血清中的总sCD73。简言之，开发了一种灵敏的免疫捕获LC-MS/MS测定来定量作为PD生物标记的总sCD73。使用替代基质方法定量内源性蛋白质。利用非竞争性抗体(4C3)捕获游离的CD73和结合药物的CD73二者。在测定验证期间建立平行性。必须克服内源性化合物的几个生物分析挑战：分析物的内源性质，例如基质中内源性蛋白质的存在以及与重组蛋白质在形式和结构上的潜在差异；高灵敏度要求；特异性和选择性要求；需要证明平行性，即测试样品的稀释不会导致内源性蛋白质和重组蛋白与替代基质和样品基质之间分析物浓度的测量偏差。

化学品、试剂、材料和仪器：甲酸(SupraPur级)购自EMD Chemicals(美国新泽西州吉布斯敦)。HPLC级甲醇购自J.T.Baker(美国新泽西州菲利普斯堡)。LC级乙腈、碳酸氢铵和含0.05％吐温的磷酸盐缓冲盐水(PBST)购自Sigma-Aldrich(美国密苏里州圣路易斯)。

设备和仪器：使用的LC-MS系统是与Nexera UHPLC系统(Shimadzu，美国马里兰州哥伦比亚)耦合的三重四极杆5500质谱仪(AB Sciex，加利福尼亚州福斯特城)，所述UHPLC系统由两个LC-30AD泵、两个DGU-20A5除气器、一个SIL-30ACMP自动进样器和一个CTO-30AS柱加热器组成。数据采集由

制备校准标准品和质量控制样品：在含有PBS pH7.4/50μM ZnCl

生物素化：根据制造商的说明，用20:1的挑战摩尔比，使用

免疫捕获和胰蛋白酶消化：磁珠制备：首先将

样品制备：将等分试样100μL标准品、QC品和未知样品转移到96孔蛋白LoBind板(Eppendorf，纽约哈帕克)中，并且用100μL的PBST缓冲液稀释。然后添加25μL体积的如上所述制备的磁珠悬浮液。将混合物在室温下在热混合器上孵育1小时，并且用PBST洗涤2次。然后使用100μL的12mM HCl洗脱捕获的分析物。将洗脱液收集在干净的LoBind板中，并且用10μL的100mM碳酸氢铵中和。

消化：首先通过将洗脱的样品在90℃下孵育30min来进行热变性。然后将板冷却至室温，随后添加10μl的Promega胰蛋白酶(在100mM碳酸氢铵中100μg/mL，总计1μg/个样品)，并且在37℃下孵育过夜。孵育后，通过添加10μl的内标工作溶液(在50:50(v:v)水:乙腈中，在4％甲酸中制备的10ng/mL SIL-VIYPAVEGR)来终止消化。将样品涡旋混合并且在分析前以3000rpm离心5min。

HPLC-MS/MS条件：流动相A含有在水中的0.005％甲酸，并且流动相B含有在甲醇中的0.005％甲酸。HPLC分离是在Acquity UPLC BEH C18柱(1.7μm，2.1×50mm，来自Waters)上进行的，设置柱温维持在60℃。在以下梯度下进行梯度洗脱：从0至0.5min维持15％的流动相B；并且从0.5至3min增加到70％。然后在0.1min内B％线性增加到95％并保持0.5min；并且然后在0.1min内降低到15％。流速设置为0.6mL/min，并且总运行时间为4min。

使用正离子电喷雾电离(ESI)，用以下优化的MS条件，用选择性反应监测(SRM)监测消化的肽：气帘气和碰撞气设置为30和8；涡轮喷射电压设置为3500V，以及离子源气体1和气体2均设置为50psi。探针温度设置为600℃，且入口电压(EP)维持在10V。对于SRM检测，在Q1处选择肽VIYPAVEGR(hCD73的C末端肽)的双电荷分子离子，并且在去簇电压(DP)设置为60V、以及碰撞能量(CE)设置为25eV的情况下，对于VIYPAVEGR和SIL-VIYPAVEGR监测到的SRM跃迁为502.6/628.3和506.0/628.3。

结果显示在图10中，表明在用CD73.A治疗期间，总sCD73水平增加，但是在用较低剂量治疗结束时下降。

可溶性血清CD73水平的定量测量将尤其有助于剂量选择并且为临床药物开发提供有价值的药效学信息，以及可用作预后或预测性生物标记，并且可以在治疗前(基线生物标记)或例如第一剂量的治疗之后确定。

等同物

本领域的技术人员仅使用常规实验就将认识到或能够确定本文所述的具体实施方案的许多等同物。此类等同物旨在被以下权利要求涵盖。

表6：序列汇总

序列表提供了成熟可变区和重链和轻链的序列(即所述序列不包括信号肽)。具有C端赖氨酸的重链序列也可以在没有该赖氨酸(K)或没有GK的情况下使用。