治疗纤维化疾病的方法

摘要

本文公开了通过施用对CAPN1、CAPN2和/或CAPN9具有选择性的化合物来治疗纤维化疾病，以使副作用、通路外相互作用和/或毒性最小化的方法。这样的方法可以例如通过提供剂量和剂型来最小化治疗化合物的非计划作用，该剂量和剂型能够最小化正在接受治疗的患者的相关组织内的未结合药物水平。

说明书

背景

技术领域

本公开涉及药物递送领域。本公开涵盖以将毒性最小化、减少副作用和改善患者依从性的方式向患者施用药学上感兴趣的特定化合物例如钙蛋白酶抑制剂的方法。

背景技术

在发达国家，纤维化疾病估计占死亡人数的45％，但这些疾病的治疗方法的开发仍处于初期阶段。目前针对纤维化疾病，例如特发性肺纤维化、肾纤维化、系统性硬化和肝硬化的治疗物数量很少，并且仅缓解纤维化的一些症状，但却不能治疗根本原因。

尽管目前对引起这些病况的不同病因学理解有限，但在纤维化疾病中受影响的器官的表型具有相似性，这强烈支持存在共同的致病途径。目前，人们认识到纤维化疾病的主要驱动因素是高转化生长因子-β(TGFβ)信号传导途径，其可以促进正常功能细胞向纤维化促进细胞的转化，纤维化促进细胞可以分泌大量的细胞外基质蛋白和基质降解酶，导致瘢痕组织的形成和最终的器官衰竭。该细胞过程是转化性的并且被称为“肌成纤维细胞分化”(其包括上皮-间质转化(EpMT)及其变形，如内皮-间质转化(EnMT)和成纤维细胞-肌成纤维细胞转化(FMT))。该过程是治疗纤维化疾病的主要靶标。还显示肌成纤维细胞分化发生在长期暴露于高TGFβ的癌细胞内，导致静止的上皮细胞变得有活动性、侵袭性和转移性。因此，在癌症的背景下，已经证明该信号传导与耐药性的获得、免疫系统逃避和干细胞特性的发展相关联。

不幸的是，TGFβ是具有许多生理功能的多效细胞因子，使得TGFβ信号传导的整体抑制也与严重的副作用相关。另外，目前的数据表明，这种近端抑制可能易受病理解决方案策略的影响(即，由于冗余或补偿)，这将限制这些药物的效用。进一步复杂化的问题是，在癌症中，TGFβ信号传导在早期作为抗肿瘤生长抑制剂起作用，但随后变成肿瘤促进剂，并且是如此强烈需要选择性抑制信号传导的致病因子的另一个原因。鉴于这些固有的局限性，目前的治疗策略已经重新关注TGFβ信号传导中关键远端事件的识别和抑制，这理论上优先靶向TGFβ信号传导的病理功能，而非生理功能。

因此有必要以高度精确的方式靶向TGFβ信号传导的病理学方面，从而在纤维化疾病中实现治疗功效，而不会引起危险的副作用或毒性。众所周知，药物化合物的功效通常取决于其与靶标(例如受体、信号分子或酶)结合的亲和力和特异性。低亲和力结合可导致与靶标解离，从而导致未结合化合物从其作用位点过快地去除。因此，通常优选高亲和力结合。然而，即使在高亲和力结合的情况下，化合物与靶标的解离或过量化合物的存在(为在平衡时提供最佳受体结合所必需)也可在周围介质中提供大量任意给定化合物，提供游离的(未结合的)药物，该药物随后可能会参与偏离通路的作用，例如，当化合物与预期靶标以外的受体或位点结合时；或者参与毒性作用，其中游离的(未结合的)药物与非目标组织中的受体有害地相互作用；或被患者自身的酶修饰成有毒的副产物。当然，副作用或毒性的存在会使治疗复杂化，并降低患者继续服用药物的意愿，从而损害患者对给药处方的依从性。因此，期望提供用于给药或施用治疗性化合物的机制，从而增加与它们的靶标的结合，同时使游离的未结合的化合物的量最小化。

化合物对其靶标受体的结合亲和力通常表示为其平衡解离常数K

因此，需要施用相对于其治疗靶标具有低解离速率的治疗化合物的方法，以使得可以降低剂量水平，同时降低副作用和毒性，并可能对患者依从性和结果产生有益影响。在纤维化疾病的背景下，需要以高度特异性的方式施用靶向TGFβ信号传导的药物的方法，从而限制瘤形成、癌促进、免疫作用或整体调节TGFβ信号传导的任何其他副作用。

发明内容

本公开提供了一种治疗疾病或病况的方法，所述方法包括：首先，向有此需要的受试者施用第一每日量的一种或多种具有下式结构的化合物，持续第一天数：

或其药学上可接受的盐，其中：

A

A

A

当A

A

A

A

A

当A

A

R独立地选自–H、任选取代的C

R

R

每个n独立地选择为0至3的整数。

或其任何组合；或其药学上可接受的盐；以及

然后，停止施用所述化合物，或施用第二每日量的所述化合物，持续第二天数，其中所述化合物的第二每日量小于、大于或等于所述第一每日量；然后，向受试者施用第三每日量的所述化合物，持续第三天数。

本公开还提供了一种治疗疾病或病况的方法，所述方法包括以下步骤：首先，向有此需要的受试者施用第一每日量的一种或多种具有下式结构的化合物，持续第一天数：

或其药学上可接受的盐，其中：

A

A

A

当A

A

A

R独立地选自–H、任选取代的C

R

R

或其任何组合；或其药学上可接受的盐；以及然后，停止施用所述化合物，或施用第二每日量的所述化合物，持续第二天数，其中所述化合物的第二每日量小于、大于或等于所述第一每日量；以及然后，向受试者施用第三每日量的所述化合物，持续第三天数。

本公开还提供了一种治疗疾病或病况的方法，所述方法包括以下步骤：首先，向有此需要的受试者施用第一每日量的化合物，持续第一天数，所述化合物具有选自以下的结构：

及其任何组合；或其药学上可接受的盐；以及

然后，停止施用所述化合物，或施用第二每日量的所述化合物，持续第二天数，其中所述化合物的第二每日量小于、大于或等于所述第一每日量；然后，

向受试者施用第三每日量的所述化合物，持续第三天数。

在根据本发明的方法和组合物的一些实施方案中，第一每日量和第三每日量是相同的。在一些实施方案中，第三每日量小于第一每日量。

在一些实施方案中，每周一次、每周两次、每周三次或每周四次施用该化合物。在一些实施方案中，每隔一天、每三天、每四天、每五天或每六天施用该化合物。

在根据本文描述的方法和组合物的一些实施方案中，待施用的化合物的第二每日量和第三每日量是相同的。在一些实施方案中，第三每日量大于第二每日量。

在本文所述的一些实施方案中，向受试者施用一种或多种化合物的第一天数和第三天数是相同的。在一些实施方案中，第一天数、第二天数和第三天数是相同的。在一些实施方案中，第三天数小于第一天数。在一些实施例中，第一天数、第二天数和第三天数独立地选自1至90、1至30、1至20、1至10或1至5。在一些实施方案中，第一天数和第三天数是1，并且第二天数是1。在一些实施方案中，第一天数和第三天数是1，并且第二天数是2。在一些实施方案中，第一天数和第三天数是3，并且第二天数是4。在一些实施方案中，第一天数和第三天数是4，并且第二天数是3。在一些实施方案中，第一天数和第三天数是4，并且第二天数是4。在一些实施方案中，第一天数和第三天数是5，并且第二天数是4。在一些实施方案中，第一天数和第三天数是4，并且第二天数是5。在一些实施方案中，第一天数和第三天数是10，并且第二天数是10。在一些实施方案中，第一天数和第三天数是30，并且第二天数是30。在一些实施方案中，第一天数和第三天数是2，并且第二天数是1。在一些实施方案中，第一天数和第三天数是30，并且第二天数是30。

在根据本文所述的方法和组合物的一些实施方案中，在第一天数和第三天数期间，向受试者施用一种或多种化合物的频率为每天一次。在一些实施方案中，将化合物的施用停止第二天数。在一些实施方案中，施用第二每日量的化合物，持续第二天数。

在根据本公开的一些实施方案中，本文所述的方法还包括监测受试者的任何所述化合物的水平，以及当所述化合物的水平高于第一阈值时，停止施用所述化合物或施用第二每日量的所述化合物，以及当所述化合物的水平低于第二阈值时，以第一每日量恢复施用所述化合物。在一些实施方案中，第一阈值和第二阈值相同。

在根据本文所述的方法和组合物的一些实施方案中，在第一天数期间，化合物的每周总剂量为40至150mg。在一些实施方案中，在第一天数期间，化合物的每周总剂量为50至90mg。在一些实施方案中，在第一天数期间，化合物的每周总剂量为60至80mg。在一些实施方案中，在第一天数期间，化合物的每周剂量为5至250mg。

在本文所述的一些实施方案中，在第三天数期间，根据本发明的化合物的最大血清浓度为100ng/mL或更低。在一些实施方案中，在整个治疗期间，化合物的最大血清浓度是100ng/mL或更低。

在一些实施方案中，本发明的方法包括：停止施用化合物或施用第二每日量的化合物持续第四天数，然后施用第三每日量的化合物持续第五天数；然后重复所述停止施用或施用第二每日量持续第四天数，然后施用第三每日量的化合物持续第五天数。

在一些实施方案中，待治疗的疾病或病况包括纤维化病况，其可以是以下中的一种或多种：肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化、过敏性肺炎、间质纤维化、系统性硬皮病、黄斑变性、胰腺纤维化、脾纤维化、心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、手术纤维化并发症、慢性移植物血管病变和/或移植器官慢性排斥反应、缺血再灌注损伤相关纤维化、注射纤维化、肝硬化、弥漫性实质性肺病、输精管切除术后疼痛综合征和类风湿性关节炎疾病或病症或其任何症状或后遗症，或其任何组合。

附图说明

具体实施方式

本公开提供了向受试者提供治疗有效量的本文公开的组合物的方法，提供了给药方案，所述给药方案允许所述化合物(包括钙蛋白酶抑制剂，包括钙蛋白酶1(CAPN1)、钙蛋白酶2(CAPN2)或钙蛋白酶9(CAPN9)的抑制剂)与其靶标相互作用，同时还最大限度地减少可能与受试者的循环、组织、器官、细胞、体液或其他身体物质中过量未结合药物的存在有关的通路外效应、毒性和/或副作用。特别地，本公开提供了一种或多种化合物的施用方法：

在一些实施方案中，本公开提供了用于施用一种或多种具有下式结构的化合物的方法：

或其药学上可接受的盐，其中：

A

A

A

当A

A

A

A

A

当A

A

R独立地选自–H、任选取代的C

R

R

在一些实施方案中，本公开提供了用于施用一种或多种具有下式结构的化合物的方法：

或其药学上可接受的盐，其中：

A

A

A

当A

A

A

R独立地选自–H、任选取代的C

R

R

在式II的一些实施方案中，A

相对于确定提供所述化合物的初始功效的水平，这种施用方式的剂量水平可以降低、延迟或改变。这种施用方式可以进一步使得即使在循环或周围介质中存在的所述化合物的水平明显降低的条件下，所述化合物仍然与其靶标结合。这种施用方式可以使循环或周围介质中存在的所述化合物的水平低于靶标结合平衡模型所预测的水平。这样的施用方式可以进一步使在循环、体液或周围介质中不存在或基本上不存在所述化合物，但仍然保持与靶标受体结合的化合物水平足以提供临床效果和/或临床功效。

术语“哺乳动物”以其通常的生物学意义使用。因此，它特别包括人类和非人类哺乳动物，例如狗、猫、马、驴、骡子、牛、家养水牛、骆驼、美洲驼、羊驼、野牛、牦牛、山羊、绵羊、猪、麋鹿、鹿、家养羚羊和非人类灵长类动物以及许多其他物种。

如本文所用，“受试者”是指人类或非人类哺乳动物，包括但不限于选择用于治疗或疗法的狗、猫、马、驴、骡子、牛、家养水牛、骆驼、美洲驼、羊驼、野牛、牦牛、山羊、绵羊、猪、麋鹿、鹿、家养羚羊和非人类灵长类动物。

“疑似患有……的受试者”是指表现出一种或多种疾病或病况的临床指标的受试者。在某些实施方案中，所述疾病或病况是纤维化疾病或涉及纤维化状态。在一些实施方案中，该疾病或病况包括以下中的一种或多种：肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化、过敏性肺炎、间质纤维化、系统性硬皮病、黄斑变性、胰腺纤维化、脾纤维化、心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、手术纤维化并发症、慢性移植物血管病变和/或移植器官慢性排斥反应、缺血再灌注损伤相关纤维化、注射纤维化、肝硬化、弥漫性实质性肺病、输精管切除术后疼痛综合征和类风湿性关节炎疾病或病症或其任何症状或后遗症，或其任何组合。在某些实施方案中，所述疾病或病况与CAPN1、CAPN2或CAPN9相关。

“有此需要的受试者”是指被确定为需要治疗或疗法的受试者。

治疗效果在某种程度上减轻了疾病或病症的一种或多种症状，并且包括治愈该疾病或病症。“治愈”是指消除活动性疾病的症状。但是，即使获得治愈，该疾病也可能存在某些长期或永久的影响(例如广泛的组织损伤)。

如本文所用，“治疗”是指为了预防和/或治疗目的而施用药物组合物。术语“预防性治疗”是指治疗尚未患有相关疾病或病症，但易感于特定疾病或病症或以其他方式处于该特定疾病或病症的风险的患者，从而该治疗降低了该患者将发展该疾病或病症的可能性。术语“治疗性治疗”是指对已经患有疾病或病症的患者进行治疗。

“预防”是指将病况或疾病的发作、发展或进展延迟或阻止一段时间，包括数周、数月或数年。

“改善”是指减轻病况或疾病的至少一种指标的严重程度。在某些实施方案中，改善包括病况或疾病的一种或多种指标的进展的延迟或减慢。指标的严重程度可以通过本领域技术人员已知的主观或客观措施来确定。

“调节”是指对功能或活动的干扰。在某些实施方案中，调节是指基因表达的增加。在某些实施方案中，调节是指基因表达的减少。在某些实施方案中，调节是指特定蛋白质的总血清水平增加或减少。在某些实施方案中，调节是指特定蛋白质的游离血清水平增加或减少。在某些实施方案中，调节是指特定非蛋白质因子的总血清水平增加或减少。在某些实施方案中，调节是指特定非蛋白质因子的游离血清水平增加或减少。在某些实施方案中，调节是指特定蛋白质的总生物利用度增加或减少。在某些实施方案中，调节是指特定非蛋白质因子的总生物利用度增加或减少。

“施用”是指向受试者提供药剂或组合物，包括但不限于由医学专业人员进行施用和自我施用。

本文公开的化合物或其药学上可接受的盐的施用可以通过用于具有类似用途的药剂的任意可接受的施用方式，包括但不限于口服、皮下、静脉内、鼻内、局部、透皮、腹膜内、肌肉内、肺内、阴道、直肠或眼内。口服和肠胃外施用通常用于治疗优选实施方案的受试者的适应症。

“肠胃外施用”是指通过注射或输注施用。肠胃外施用包括但不限于皮下施用、静脉内施用、肌肉内施用、动脉内施用和颅内施用。

“皮下施用”是指在皮肤正下方的施用。

“静脉内施用”是指向静脉内施用。

“动脉内施用”是指向动脉内施用。

术语“剂”包括任何物质、分子、元素、化合物、实体或其组合。它包括但不限于蛋白质、多肽、肽或模拟物、有机小分子、多糖、多核苷酸等。它可以是天然产物、合成化合物或化学化合物或两种以上的物质的组合。

“药剂”是指当施用于受试者时提供治疗作用的物质。

“药物组合物”是指包含药剂的适合于向个体施用的物质的混合物。例如，药物组合物可包含修饰的寡核苷酸和无菌水溶液。

“药物活性成分”是指药物组合物中提供所需作用的物质。

术语“药学上可接受的盐”是指保留与其相关的化合物的生物有效性和特性的盐，在生物学或其他方面都不是不希望的。在许多情况下，由于酚和/或膦酸酯基团或与其类似的基团的存在，本文的化合物能够形成酸和/或碱式盐。本领域普通技术人员将意识到，任何或所有这些化合物的质子化状态可随周围溶液的pH和离子特性而变化，因此，本公开考虑了每种化合物的多个电荷状态。可以用无机酸和有机酸形成药学上可接受的酸加成盐。可以衍生盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可以衍生盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。可以用无机碱和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。可以衍生盐的无机碱包括例如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝等；特别优选的是铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。可以衍生盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代的胺、环胺、碱性离子交换树脂等，特别是例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。许多这种盐是本领域已知的，如1987年9月11日公开的Johnston等人的WO87/05297(通过引用整体并入本文)中所述。

“溶剂化物”是指由溶剂与EPI、其代谢产物或其盐相互作用形成的化合物。合适的溶剂化物是药学上可接受的溶剂化物，包括水合物。

可以将如上所述有用的化合物配制成用于治疗这些病况的药物组合物。使用标准药物制剂技术，例如Remington的The Science and Practice of Pharmacy,21st Ed.,Lippincott Williams&Wilkins(2005)(通过引用整体并入本文)中公开的那些技术。因此，一些实施方案包括药物组合物，其包括：(a)安全且治疗有效量的本文所述化合物，或其药学上可接受的盐；和(b)药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。

术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”包括任何和所有溶剂、稀释剂、乳化剂、粘合剂、缓冲剂、分散介质、包衣、抗菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等，或本领域技术人员已知的可用于制备药物制剂的任何其他此类化合物。这些介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域熟知的。除非任何常规介质或试剂与活性成分均不相容，否则考虑其在治疗组合物中的用途。也可以在组合物中掺入补充活性成分。另外，可以包括例如本领域常用的各种佐剂。这些和其他这样的化合物描述在文献中，例如在Merck Index,Merck&Company,Rahway,NJ中。例如，在Gilman等人(编辑)(1990)；Goodman和Gilman的：ThePharmacological Basis of Therapeutics，第8版，Pergamon Press中描述了在药物组合物中包含各种组分的考虑因素。

可用作药学上可接受的载体或其组分的物质的一些实例是糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；粉末黄蓍草；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，如TWEENS；润湿剂，如十二烷基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐水；和磷酸盐缓冲溶液。

与主题化合物联合使用的药学上可接受的载体的选择由化合物的施用方式决定。

本文所述的组合物优选以单位剂型提供。如本文所用，“单位剂型”是含有一定量的化合物的组合物，其适于根据良好的医学实践以单一剂量施用给受试者。然而，单一剂型或单位剂型的制备并不意味着每天或每疗程施用一次该剂型。单位剂型可以包含单个的每日剂量或分次的亚剂量，其中在一天的过程中要施用多个单位剂型以完成一个每日剂量。根据本公开，在治疗过程中，单位剂型可以差不多每日一次给予，并且可以多次施用。此类剂型可以按照与其制剂一致的任何方式进行施用，包括口服、肠胃外，也可以以输注形式在一段时间内(例如，约30分钟至约2-6小时)施用。虽然特别考虑了单次施用，但是根据本文所述方法施用的组合物也可以连续输注或通过可植入输注泵施用。

本文所述的方法可以使用多种合适形式中的任意一种，用于多种施用途径，例如口服、鼻腔、直肠、局部(包括透皮)、眼、脑内、颅内、鞘内、动脉内、静脉内、肌肉内或其他肠道外施用途径。技术人员将理解，口服和鼻腔组合物包含通过吸入施用的组合物，并使用可用的方法制备。根据所需的特定施用途径，可以使用本领域熟知的多种药学上可接受的载体。药学上可接受的载体包括，例如，固体或液体填充剂、稀释剂、助溶剂、表面活性剂和包封物质。可以包括基本上不干扰化合物的活性的任选的药学活性物质。与该化合物结合使用的载体的量足以为每单位剂量的化合物的施用提供实际量的材料。用于制备可用于本文所述方法的剂型的技术和组合物描述于以下参考文献中，所有文献均通过引用并入本文：Modern Pharmaceutics,第4版.,第9章和第10章(Banker&Rhodes,编辑,2002)；Lieberman等人,Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets(1989)；和Ansel,Introduction toPharmaceutical Dosage Forms第8版(2004)。

可以使用多种口服剂型，包括片剂、胶囊、颗粒和散装粉末等固体形式。片剂可以是压片、片剂研磨剂、肠溶衣、糖衣、薄膜包衣或多重压片，其含有合适的粘合剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂、着色剂、调味剂、流动诱导剂和熔化剂。液体口服剂型包括水溶液或非水溶液、乳液、悬浮液、由非泡腾颗粒重构的溶液和/或悬浮液、以及由泡腾颗粒重构的泡腾制剂，其含有合适的溶剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、稀释剂、甜味剂、熔化剂、着色剂和调味剂。

如本文所用，活性药物成分的固体剂型或“固体形式”可包含一种或多种结晶态、无定形态、玻璃态或不由溶解在液体中的所述活性药物成分组成的任何形式，或其任何组合。优选的固体剂型包括适合掺入片剂、胶囊剂、囊剂(sachet)和/或栓剂中的那些。

适于制备用于口服施用的单位剂型的药学上可接受的载体是本领域熟知的。片剂通常包含常规的药学上相容的佐剂作为惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、甘露醇、乳糖和纤维素；粘合剂，如淀粉、明胶和蔗糖；崩解剂，如淀粉、海藻酸和交联羧甲基纤维素；润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸、微晶纤维素、羧甲基纤维素和滑石粉。片剂也可包含增溶剂或乳化剂，例如泊洛沙姆、cremophor/

口服(PO)组合物还包括液体溶液、乳液、悬浮液等。适用于制备此类组合物的药学上可接受的载体是本领域熟知的。用于糖浆、酏剂、乳液和悬浮液的载体的典型组分包括乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、液体蔗糖、山梨糖醇和水。对于悬浮液，典型的悬浮剂包括甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、AVICEL RC-591、黄蓍胶和海藻酸钠；典型的润湿剂包括卵磷脂和聚山梨醇酯80；和典型的防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯和苯甲酸钠。口服液体组合物还可含有一种或多种组分，例如上面公开的甜味剂、调味剂和着色剂。

此类组合物还可以通过常规方法包衣，通常使用pH或时间依赖性包衣，使得主题化合物在胃肠道中在期望的局部施用附近释放，或在不同时间释放以使所期望的作用延长。此类剂型通常包括但不限于醋酸邻苯二甲酸纤维素、邻苯二甲酸聚乙酸乙烯酯、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、Eudragit包衣、蜡和虫胶中的一种或多种。

本文所述的组合物可任选地包含其他药物活性物质。

用于实现主题化合物的全身递送的其他组合物包括舌下、口腔和鼻腔剂型。此类组合物通常包含一种或多种可溶性填充物质，例如蔗糖、山梨糖醇和甘露醇；和粘合剂，如阿拉伯胶、微晶纤维素、羧甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素。还可包括上文公开的助流剂、润滑剂、甜味剂、着色剂、抗氧化剂和调味剂。

配制用于局部眼科使用的液体组合物，使其可以向眼睛局部施用。可以尽可能地使舒适度最大化，但是有时制剂考虑因素(例如药物稳定性)可能迫使低于最佳舒适度。在不能使舒适度最大化的情况下，可以配制液体使得液体对于患者的局部眼科使用是可耐受的。另外，眼科上可接受的液体可以包装成一次性使用或者含有防腐剂以防止多次使用间的污染。

对于眼科应用，通常使用生理盐水溶液作为主要溶媒来制备溶液或药物。眼科溶液可以优选用适当的缓冲系统保持在舒适的pH值。制剂还可含有常规的药学上可接受的防腐剂、稳定剂和表面活性剂。

可用于本文公开的药物组合物的防腐剂包括但不限于苯扎氯铵、PHMB、氯丁醇、硫柳汞、苯基汞、乙酸盐和硝酸苯汞。有用的表面活性剂是例如吐温80。类似地，多种有用的溶媒可用于本文公开的眼用制剂中。这些溶媒包括但不限于聚乙烯醇、聚维酮、羟丙基甲基纤维素、泊洛沙姆、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素和纯净水。

可以根据需要或方便添加张力调节剂。它们包括但不限于盐特别是氯化钠、氯化钾、甘露醇和甘油，或任意其它合适的眼科上可接受的张力调节剂。

可以使用多种缓冲剂和手段来调节pH，只要所得制剂是眼科上可接受的即可。对于许多组合物，pH将在4和9之间。因此，缓冲剂包括乙酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂和硼酸盐缓冲剂。根据需要，可以使用酸或碱来调节这些制剂的pH。

眼科上可接受的抗氧化剂包括但不限于偏亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、乙酰半胱氨酸、丁基化羟基苯甲醚和丁基化羟基甲苯。

可以包括在眼科制剂中的其他赋形剂组分是螯合剂。有用的螯合剂是依地酸二钠，但也可以使用其它螯合剂替代依地酸二钠或与其结合使用。

对于局部使用(包括对于透皮施用)，使用含有本文公开的化合物的乳膏、软膏、凝胶、溶液或悬浮液等。局部制剂通常可以包含药物载体、共溶剂、乳化剂、渗透增强剂、防腐剂体系和润肤剂。

对于静脉内施用，可以将本文所述的化合物和组合物溶解或分散在药学上可接受的稀释剂中，例如盐水或右旋糖溶液。可包含合适的赋形剂以达到所需的pH，包括但不限于NaOH、碳酸钠、乙酸钠、HCl和柠檬酸。在各种实施方案中，最终组合物的pH范围为2至8，或优选4至7。抗氧化剂赋形剂可包括亚硫酸氢钠、丙酮亚硫酸氢钠、甲醛钠、次硫酸盐(sulfoxylate)、硫脲和EDTA。在最终静脉内组合物中可见的合适赋形剂的其他非限制性实例可包括磷酸钠或磷酸钾、柠檬酸、酒石酸、明胶和碳水化合物如右旋糖、甘露糖醇和葡聚糖。其他可接受的赋形剂描述于Powell等人，Compendium of Excipients for ParenteralFormulations,PDA J Pharm Sci and Tech 1998,52 238-311 and Nema et al.,Excipients and Their Role in Approved Injectable Products:Current Usage andFuture Directions,PDA J Pharm Sci and Tech 2011,65 287-332(均通过引用整体并入本文)。还可以包括抗微生物剂以获得抑制细菌或抑制真菌的溶液，包括但不限于硝酸苯汞、硫柳汞、苄索氯铵、苯扎氯铵、苯酚、甲酚和氯丁醇。

用于静脉内施用的组合物可以以一种或多种固体的形式提供给护理人员，在施用前不久用合适的稀释剂如无菌水、盐水或右旋糖使该固体在水中重构。在其他实施方案中，组合物以溶液形式提供，准备肠胃外施用。在其他实施方案中，组合物以溶液提供，该溶液在施用前进一步被稀释。在包括施用本文所述化合物和另一种药剂的组合的实施方案中，该组合可以作为混合物提供给护理人员，或者护理人员可以在施用前将这两种药剂混合，或者这两种药剂可以分开施用。

本文所述活性化合物的实际单位剂量取决于具体化合物以及要治疗的病况。在一些实施方案中，剂量可以是约0.01mg/kg至约120mg或更高/kg体重，约0.05mg或更低/kg至约70mg/kg，约0.1mg/kg至约50mg/kg体重，约1.0mg/kg至约10mg/kg体重，约5.0mg/kg至约10mg/kg体重，或约10.0mg/kg至约20.0mg/kg体重。在一些实施方案中，剂量可以是小于100mg/kg、90mg/kg、80mg/kg、70mg/kg、60mg/kg、50mg/kg、40mg/kg、30mg/kg、25mg/kg、20mg/kg、10mg/kg、8mg/kg、7.5mg/kg、6mg/kg、5mg/kg、4mg/kg、3mg/kg、2.5mg/kg、1mg/kg、0.5mg/kg、0.1mg/kg、0.05mg/kg或0.005mg/kg体重，或这些值中任意两个之间的范围。在一些实施方案中，实际单位剂量是0.05、0.07、0.1、0.3、1.0、3.0、5.0、7.0、10.0或25.0mg/kg体重，或这些值中任意两个之间的范围。因此，对于向70kg的人施用，剂量范围为约0.1mg至70mg，约1mg至约50mg，约0.5mg至约10mg，约1mg至约10mg，约2.5mg至约30mg，约35mg或更低至约700mg或更高，约7mg至约600mg，约10mg至约500mg，约20mg至约300mg，约600mg至约1200mg或约200mg至约2000mg。在一些实施方案中，实际单位剂量是5mg。在一些实施方案中，实际单位剂量是10mg。在一些实施方案中，实际单位剂量是25mg。在一些实施方案中，实际单位剂量是1500mg或更小。在一些实施方案中，实际单位剂量是1250mg或更小。在一些实施方案中，实际单位剂量是1000mg或更小。在一些实施方案中，实际单位剂量是750mg或更小。在一些实施方案中，实际单位剂量是500mg或更小。在一些实施方案中，实际单位剂量是250mg或更小。

如本文所用，“速效剂量(loading dose)”是指化合物的初始剂量，其高于后续剂量。

如本文所用，“维持剂量”是指速效剂量之后的后续剂量，其在时间上晚于速效剂量。本领域普通技术人员将意识到，维持剂量的剂型或施用方式可以不同于速效剂量。在本文公开的任何实施方案中，维持剂量可以包括按本文考虑的任何给药方案施用单位剂型，包括但不限于每月一次或多次、每两周两次或多次、每周一次或多次、每天或每天多次。在本公开内容中考虑到可以在维持剂量的给药期间中并入停药期(dosing holiday)。这种停药期可以在施用速效剂量后立即发生或在维持剂量的施用期间中的任何时间发生。如本文所使用的，维持剂量的施用期可以被称为治疗期的“维持期”。

如本文所用，“施用方式”是指将化合物施用于受试者的方式。如本文所用，“施用方式”包括剂型(例如，片剂、散剂、溶解的液体、悬浮液、乳剂、气雾剂等)和将剂型应用于受试者的机理(例如，通过注射，例如皮下、肌肉内、腹膜内、静脉内或动脉内；局部使用，例如通过乳膏、洗剂或贴剂；口服，例如通过药丸、溶解的溶液、口服悬浮液、颊膜或漱口水；经鼻，例如通过鼻气雾剂、散剂或喷雾剂；或通过眼部，例如通过眼药水)。如本文所用，“施用方式”还包括将化合物施用于受试者的剂量(dose)、剂量(dose amount)和给药方案。

在一些实施方案中，施用方式包括施用速效剂量，然后施用维持剂量。在一些实施方案中，速效剂量是2500mg或更少，2250mg或更少，2000mg或更少，1750mg或更少，1500mg或更少，1250mg或更少，1000mg或更少；750mg或更少，500mg或更少，250mg或更少，200mg或更少，150mg或更少，或100mg或更少，或者这些值的任意两个之间的范围。

在一些实施方案中，维持剂量是300mg或更少；200mg或更少，100mg或更少，50mg或更少，25mg或更少，10mg或更少，5mg或更少，或1mg或更少，或者这些值的任意两个之间的范围。在一些实施方案中，在1天的时间内施用速效剂量。在一些实施方案中，在2天的时间内施用速效剂量。在一些实施方案中，在3天的时间内施用速效剂量。在一些实施方案中，在4天的时间内施用速效剂量。在一些实施方案中，在5、6或7天的时间内施用速效剂量。在一些实施方案中，在8-14天或更短的时间内施用速效剂量。在一些实施方案中，在14天的时间内施用速效剂量。

如本文所用，“治疗持续时间”是指从施用第一剂开始到施用最终剂结束的时间，该时间长度由治疗纤维化疾病或病况及其症状和后遗症和/或涉及CAPN1、CAPN2或CAPN9的疾病或病况的本领域普通技术人员，参照所治疗的受试者的症状和健康状况来确定。

如本文所用，“停药期”是指24小时或更长时间，在此期间不对受试者施用剂量或对受试者施用降低的剂量。如本文所用，“降低的剂量”是指小于要给受试者施用的总每日剂量的剂量。

如本文中所预期的，本文所述的组合物的增强的药代动力学或增强的递送包括一种治疗方法的效果，在该治疗方法中，与靶受体结合的药物的水平与每位受试者约100至约400、约300至600、约500至1000mg/天或约750至1500mg/天的每日剂量所观察到的基本相同。在一些实施方案中，本文所述的组合物的增强的药代动力学或增强的递送包括一种治疗方法的效果，在该治疗方法中，与靶受体结合的药物的水平与个体受试者1500mg/天、1000mg/天、800mg/天、700mg/天、600mg/天、500mg/天、250mg/天或100mg/天的每日剂量所观察到的基本相同。在一些实施方案中，本文所述的组合物的增强的药代动力学或增强的递送包括一种治疗方法的效果，在该治疗方法中，与靶受体结合的药物的水平与个体受试者100-250mg/天、200-500mg/天、400-700mg/天、500mg/天、1000mg/天或约600至1200mg/天的每日剂量所观察到的基本相同。

本文公开的其他实施方案包括药物组合物，其包含治疗有效量的本文公开的化合物和药学上可接受的赋形剂。

在一些实施方案中，本公开的组合物和方法提供了治疗至少部分由CAPN1、CAPN2或CAPN9或其组合的生理作用介导的疾病和病况的方法，包括向有此需要的受试者施用本文公开的化合物。

在一些实施方案中，本文公开的化合物是CAPN1、CAPN2或CAPN9中的一种或多种或其任何组合的特异性和/或选择性抑制剂。

在一些实施方案中，本文公开的化合物是以下之一的选择性抑制剂：CAPN1和CAPN2，或CAPN1和CAPN9，或CAPN2和CAPN9。

在一些实施方案中，本文公开的化合物是CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的有效抑制剂。

在一些实施方案中，本文公开的化合物在治疗由纤维化或炎症引起的一系列病况，并且特别包括与肌成纤维细胞分化相关的那些病况中广泛有效。因此，本文公开的化合物是用于多种疾病或病况的活性治疗剂，所述疾病或病况包括或产生包括但不限于以下的症状：肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化、过敏性肺炎、间质纤维化、系统性硬皮病、黄斑变性、胰腺纤维化、脾纤维化、心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、手术纤维化并发症、慢性移植物血管病变和/或移植器官慢性排斥反应、缺血再灌注损伤相关纤维化、注射纤维化、肝硬化、弥漫性实质性肺病、输精管切除术后疼痛综合征和类风湿性关节炎疾病或病症。在其他实施方案中，本文公开的化合物可用于代谢和反应动力学研究、检测和成像技术以及放射性治疗。

在一些实施方案中，本文公开的化合物用于治疗疾病或病况或在受试者中产生包括但不限于以下症状的疾病或病况：肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化、过敏性肺炎、间质纤维化、系统性硬皮病、黄斑变性、胰腺纤维化、脾纤维化、心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、手术纤维化并发症、慢性移植物血管病变和/或移植器官慢性排斥反应、缺血再灌注损伤相关纤维化、注射纤维化、肝硬化、弥漫性实质性肺病、输精管切除术后疼痛综合征和类风湿性关节炎疾病。

在某些实施方案中，提供了用于减轻或改善至少部分地受钙蛋白酶1(CAPN1)、钙蛋白酶2(CAPN2)和/或钙蛋白酶9(CAPN9)的酶活性影响，或至少部分地受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的酶活性介导的病况或病症的方法，其中所述病况包括或产生的症状包括：肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化、过敏性肺炎、间质纤维化、系统性硬皮病、黄斑变性、胰腺纤维化、脾纤维化、心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、手术纤维化并发症、慢性移植物血管病变和/或移植器官慢性排斥反应、缺血再灌注损伤相关纤维化、注射纤维化、肝硬化、弥漫性实质性肺病、输精管切除术后疼痛综合征和/或类风湿性关节炎。

在一些实施方案中，本发明的方法、化合物和/或组合物用于预防性治疗。

在一些实施方案中，抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的化合物在人类疾病的动物模型中显示功效。具体地，用本文公开的化合物对小鼠、兔和其它哺乳动物受试者进行体内治疗确定了这些化合物作为治疗剂来调节人体中的CAPN1、CAPN2和/或CAPN9活性，从而改善相应的医学病况的用途。

一些实施方案提供了用来抑制肌成纤维细胞分化的化合物、药物组合物和方法。一些实施方案提供了用于抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9或这些酶活性的组合(例如CAPN1和CAPN2，或CAPN1和CAPN9，或CAPN2和CAPN9)的化合物、药物组合物和方法。一些实施方案提供了通过抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9或这些酶活性的组合来治疗疾病和病症的方法。

在先前的试验中，已证明在动物模型中施用这些化合物可有效抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9。参见例如国际申请号PCT/US2017/053629，其通过引用整体并入本文。因此，本公开的目的是描述施用如本文所述的组合物的方法，以保留其作为CAPN1、CAPN2和/或CAPN9活性调节剂的主要作用，以及由此实现的临床症状的缓解，利用减少的剂量，可提供增强的患者对剂量指示的依从性，以及减少与循环中或以其他方式分配到受试者的组织、器官或身体物质中的游离的(未结合的)药物的存在有关的通路外作用、毒性和副作用的发生率。

不希望受任何特定理论约束，本公开的化合物已被发现能够以较低的解离速率与它们的靶标受体特异性结合，使得在剂量之间具有更长的持续时间和/或使得有机会进行如下给药方案：在这种给药方案中，患者的循环、细胞、组织或其它身体物质中的游离化合物的量下降，甚至达到了一个点，在该点，所述游离化合物能够有效地“洗离”患者。在这种情况下，即使游离化合物的量降低至低于可能引发通路外效应、副作用或毒性的水平，本文所公开的化合物仍然与它们的靶标受体结合，因此也能保持临床疗效。在一些实施方案中，靶受体包含CAPN1、CAPN2和/或CAPN9中的一种或多种。在一些实施方案中，所保留的临床或治疗功效导致一种或多种纤维化病况的治疗、改善、预防或治愈。在一些实施方案中，所述纤维化病况可以包括包括以下中的一种或多种：肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化、过敏性肺炎、间质纤维化、系统性硬皮病、黄斑变性、胰腺纤维化、脾纤维化、心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、手术纤维化并发症、慢性移植物血管病变和/或移植器官慢性排斥反应、缺血再灌注损伤相关纤维化、注射纤维化、肝硬化、弥漫性实质性肺病、输精管切除术后疼痛综合征和类风湿性关节炎疾病或病症或其任何症状或后遗症，或其任何组合。

在一些实施方案中，本公开的化合物与它们的靶标不可逆地结合，这可能提供基于长效和高度特异性相互作用的意想不到的高疗效。在一些实施方案中，本公开的化合物与它们的生理靶标形成复合物，在体外具有5-600分钟的半衰期。在一些实施方案中，本公开的化合物与它们的生理靶标形成复合物，范围为5-20分钟、10-50分钟、20-100分钟、50-250分钟、100-300分钟、150-400分钟、200-500分钟、300-60分钟，或上述范围内的任何值，或包含本文所述任何值的任何范围。在一些实施方案中，本公开的化合物与它们的生理靶标形成复合物，该复合物在生理条件下是不可逆的和/或不解离的。本公开的化合物的半衰期已根据图1和图2以及实施例1中说明的方法确定。

根据本文公开的方法，与施用上述化合物有关的副作用的减少可以通过调节给药方案来实现，从而使受试者在固定的时间内经历周期性的部分或全部减量给药。在一些实施方案中，所述周期性的部分或全部减量给药之后是部分或全部恢复给药。在一些实施方案中，每日给药，持续1至30天，然后是持续1至30天的停药期。在一些实施方案中，在停药期期间，不施用剂量。在一些其他实施方案中，在施用下一个剂量之前，允许化合物及其代谢产物从受试者体内完全清除。在一些其他实施方案中，在停药期期间，施用小于通常每日剂量的剂量。在一些其他实施方案中，在停药期期间，允许在受试者体内保留小于治疗有效量的所施用化合物的量。在一些其他实施方案中，允许在受试者体内保留足以在受影响的组织中维持治疗水平的所施用化合物的量。

在一些实施方案中，在给药方案期间化合物的最大血清浓度(C

在一些实施方案中，在给药方案期间，化合物的最大血清浓度在施用的初始阶段较高，而在随后的阶段较低。在一些实施方案中，在施用的初始(速效)阶段期间化合物的最大血清浓度小于20ug/ml、小于15ug/ml、小于13ug/ml、小于10ug/ml、小于5ug/ml、小于3ug/ml、小于1ug/ml、小于800ng/ml、小于500ng/ml、小于400ng/ml、小于300ng/ml、小于200ng/ml、小于150ng/ml、小于120ng/ml、小于100ng/ml、小于90ng/ml、小于80ng/ml、小于70ng/ml、小于60ng/ml或小于50ng/ml，或这些值中任意两个之间的范围。在一些这样的实施方案中，在施用的初始阶段期间，最大血清浓度是5ng/ml至250ng/ml。在一些这样的实施方案中，在施用的初始阶段期间，最大血清浓度是200ng/ml至2ug/ml。在一些这样的实施方案中，在施用的初始阶段期间，最大血清浓度是1ug/ml至20ug/ml。在一些实施方案中，在施用的随后(维持)阶段期间化合物的最大血清浓度小于20ug/ml、小于15ug/ml、小于13ug/ml、小于10ug/ml、小于5ug/ml、小于3ug/ml、小于1ug/ml、小于800ng/ml、小于500ng/ml、小于350ng/ml、小于200ng/ml、小于120ng/ml、小于100ng/ml、小于90ng/ml、小于80ng/ml、小于70ng/ml、小于60ng/ml或小于50ng/ml、小于40ng/ml、小于35ng/ml或小于10ng/ml，或介于这两个值之间的范围。本领域普通技术人员将容易意识到，本领域存在的用于监测药剂的血清浓度的方法，以及调节本文公开的化合物的剂量以达到所需血清浓度的手段。

在一些实施方案中，在施用的初始(速效)阶段期间本公开的化合物的最大血清浓度是20ug/ml或更低、15ug/ml或更低、13ug/ml或更低、10ug/ml或更低、5ug/ml或更低、3ug/ml或更低、1ug/ml或更低、800ng/ml或更低、500ng/ml或更低、450ng/ml或更低、400ng/ml或更低、350ng/ml或更低、300ng/ml或更低或250ng/ml或更低，或这些值中的任何两个值之间的范围。在一些实施方案中，在施用的随后(维持)阶段期间本公开的化合物的最大血清浓度是20ug/ml或更低、15ug/ml或更低、13ug/ml或更低、10ug/ml或更低、5ug/ml或更低、3ug/ml或更低、1ug/ml或更低、800ng/ml或更低、500ng/ml或更低、450ng/ml或更低、400ng/ml或更低、350ng/ml或更低、300ng/ml或更低、250ng/ml或更低、200ng/ml或更低、150ng/ml或更低或120ng/ml或更低，或这些值中的任何两个值之间的范围。

根据本公开，可以改变给药方案以达到期望的治疗效果，同时消除副作用、毒性或通路外效应。在以下每个实施方案中，如所描述的给药方案的变化可以在整个治疗过程中重复进行。在以下每个实施方案中，第一剂量可以更高、更低或与第一剂量之后的剂量相同。在以下每个实施方案中，可以在公开的剂量之前给予速效剂量，在施用速效剂量之后可以或可以不跟随停药期。

在一些实施方式中，每天、每隔一天、每三天、每四天、每五天或每六天施用剂量。在一些实施方式中，每周施用剂量。在一些实施方式中，以高于每周的频率施用剂量，例如每周两次、每周三次、每周四次、每周五次或每周六次。在一些实施例中，每月一次施用剂量或更频繁地施用，例如每月2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30次。

在一些实施方案中，在治疗持续期间，每隔一天进行给药。在其他实施方案中，在治疗持续期间，每三天中有两天进行给药。在其他实施方案中，在治疗持续期间，每四天中有两天进行给药。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续一天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药一天。在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续两天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药一天。在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续三天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药一天。在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续四天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药一天。在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续五天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药一天。在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续六天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药一天。在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续七天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药一天。在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续八天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药一天。在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续九天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药一天。在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续十天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药一天。在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续十一天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药一天。在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续十二天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药一天。在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续十三天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药一天。在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药两天。在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药三天。在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药四天。在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药五天。在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药六天。在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药七天。在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药八天。在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药九天。在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药十天。在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药十一天。在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药十二天。在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药十三天。在一些实施方案中，每日给药持续十四天，然后停药十四天。

在一些实施方案中，每日给药持续三十天，然后停药三十天。在一些实施方案中，每日给药持续三十天，然后停药25-30天。在一些实施方案中，每日给药持续三十天，然后停药20-25天。在一些实施方案中，每日给药持续三十天，然后停药15-20天。在一些实施方案中，每日给药持续三十天，然后停药10-15天。在一些实施方案中，每日给药持续三十天，然后停药5-10天。在一些实施方案中，每日给药持续三十天，然后停药1-5天。

在一些实施方案中，每日给药持续25-30天，然后停药三十天。在一些实施方案中，每日给药持续25-30天，然后停药25-30天。在一些实施方案中，每日给药持续25-30天，然后停药20-25天。在一些实施方案中，每日给药持续25-30天，然后停药15-20天。在一些实施方案中，每日给药持续25-30天，然后停药10-15天。在一些实施方案中，每日给药持续25-30天，然后停药5-10天。在一些实施方案中，每日给药持续25-30天，然后停药1-5天。

在一些实施方案中，每日给药持续20-25天，然后停药三十天。在一些实施方案中，每日给药持续20-25天，然后停药25-30天。在一些实施方案中，每日给药持续20-25天，然后停药20-25天。在一些实施方案中，每日给药持续20-25天，然后停药15-20天。在一些实施方案中，每日给药持续20-25天，然后停药10-15天。在一些实施方案中，每日给药持续20-25天，然后停药5-10天。在一些实施方案中，每日给药持续20-25天，然后停药1-5天。

在一些实施方案中，每日给药持续15-20天，然后停药三十天。在一些实施方案中，每日给药持续15-20天，然后停药25-30天。在一些实施方案中，每日给药持续15-20天，然后停药20-25天。在一些实施方案中，每日给药持续15-20天，然后停药15-20天。在一些实施方案中，每日给药持续15-20天，然后停药10-15天。在一些实施方案中，每日给药持续15-20天，然后停药5-10天。在一些实施方案中，每日给药持续15-20天，然后停药1-5天。

在任何上述实施方案中，每日剂量可以每天一次施用一个剂量，或每天多次施用两个或更多个分开的剂量。例如，本文描述的化合物可以每天一次、每天两次、每天三次或每天四次施用。

通过以下实施例说明本公开内容的方法和组合物的一些实施方案。

使用荧光标记的基于不可逆活性的探针(ABP)来测量CAPN2抑制剂的解离速率，方法如下。ABP分子包含一个氟甲基酮弹头，它与CAPN酶的活性位点半胱氨酸亲核体不可逆地反应。ABP还标记有Alexa 647荧光团，可对CAPN2.ABP加合物进行灵敏定量。

通常通过将2uM CAPN2与10uM测试抑制剂在测定缓冲液(50mM Tris-HCl，100mMNaCl，2mM CaCl

对于给定的测试抑制剂，将所有时间点与以下两个对照样品在同一凝胶上运行。通过以下方法来制备测定最小对照：将2uM CAPN2在测定缓冲液中预孵育1小时。将该孵育混合物稀释十倍至含有10uM ABP的相同测定缓冲液中，反应30分钟，然后淬灭。最初的1小时孵育后，CAPN2酶会自动降解，因此几乎不会产生信号。通过以下方法来制备测定最大对照：向测定缓冲液中的0.2uM CAPN2中加入10uM ABP并孵育30分钟并淬灭。

SDS-PAGE之后，使用LAS4000 ImageQuant平台扫描凝胶以定量～75kDa(全长活化CAPN2的分子量)的Alexa 647强度。使用每个凝胶上的最小和最大对照来计算在每个时间点结合的测试化合物的百分比。该数据拟合为一阶衰减，并且获得解离速率常数(解离速率)。使用等式t

表1给出了由本公开的化合物形成的靶标复合物的代表性半衰期。

表1：化合物-靶标复合物的半衰期

关于本文中基本上任何复数和/或单数术语的使用，本领域技术人员可以根据情况和/或应用将复数转换为单数和/或将单数转换为复数。为了清楚起见，本文可以明确地阐述各种单数/复数置换。

本领域技术人员将理解，通常，本文中，尤其是在所附权利要求书(例如，所附权利要求书的主体)中使用的术语通常旨在作为“开放式”术语(例如，术语“包括”应解释为“包括但不限于”，术语“具有”应解释为“至少具有”，术语“包括”应解释为“包括但不限于”，等等)。本领域技术人员将进一步理解，如果意图引入特定数量的权利要求陈述对象，则将在权利要求中明确地陈述这种意图，并且在没有这种陈述的情况下，不存在这种意图。例如，为了帮助理解，以下所附权利要求可以包含使用引导性短语“至少一个”和“一个或多个”来引入权利要求陈述对象。然而，使用这样的短语不应被解释为意指由不定冠词“一”或“一个”引入的权利要求陈述对象将包含这样的引入的权利要求陈述对象的任意特定权利要求限制为只包含一个这样的陈述对象的实施方案，即使当相同的权利要求包括引导性用语“一个或多个”或者“至少一个”以及不定冠词例如“一”或“一个”时(例如，“一”和/或“一个”应当被解读为意指“至少一个”或“一个或多个”)；对于用于引入权利要求陈述对象的定冠词的使用也是如此。另外，即使明确陈述了特定数量的引入的权利要求陈述对象，本领域技术人员也应认识到，这样的陈述对象应当被解释为意指至少是所陈述的数值(例如，仅陈述“两个陈述对象”而没有其它变化，是指至少两个陈述对象，或者两个或更多个陈述对象)。此外，在使用类似于“A、B和C等中的至少一个”的常规用语的情况下，通常这种结构将被本领域技术人员理解为常规含义(例如，“具有A、B和C中的至少一个的系统”将包括但不限于只有A、只有B、只有C、A和B都有、A和C都有、B和C都有和/或A、B和C都有等的系统)。在使用类似于“A、B和C等中的至少一个”的常规用语的情况下，通常这种结构将被本领域技术人员理解为常规含义(例如，“具有A、B或C中的至少一个的系统”将包括但不限于只有A、只有B、只有C、A和B都有、A和C都有、B和C都有和/或A、B和C都有等的系统)。本领域技术人员还应当理解，实际上任何转折性词语和/或给出两个或更多个可选项的用语(不管在说明书、权利要求还是在附图中)应被理解为包括其中一项、任意一项或者两项兼有的可能性。例如，用语“A或B”应当理解为包括“A”或“B”或者“A和B”的可能性。

另外，在根据马库什组描述本公开的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，由此也根据马库什组的任何单个成员或成员的子组描述本公开。

如本领域技术人员将理解的，出于任何和所有目的，例如就提供书面说明而言，本文公开的所有范围还涵盖任何和所有可能的子范围及其子范围的组合。任何列出的范围都可以容易地识别为充分描述并且能够将相同范围分解为至少相等的一半、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作为非限制性示例，本文讨论的每个范围都可以容易地分解为下三分之一、中三分之一和上三分之一。如本领域的技术人员还将理解的，诸如“最多”、“至少”、“大于”、“小于”等所有语言都包括所列举的数字，并且是指可以随后分解为上述子范围的范围。最后，如本领域技术人员将理解的，范围包括每个单独的成员。因此，例如，具有1-3个项的组是指具有1、2或3个项的组。类似地，具有1-5个项的组是指具有1、2、3、4或5个项的组，依此类推。

尽管本文已经公开了各个方面和实施方案，但是对于本领域技术人员而言，其他方面和实施方案将是显而易见的。本文所公开的各个方面和实施方案是出于说明的目的，而不是旨在进行限制，真正范围和精神由所附权利要求指示。