一种利用Transwell构建小鼠肠道上皮体外单层培养及表征方法

摘要

本发明公开了一种利用Transwell构建小鼠肠道上皮体外单层培养及表征方法。该方法包括：(1)含肠道干细胞的肠道隐窝结构与肠道上皮层下肌成纤维细胞，分别接种于Transwell嵌套聚碳酸脂膜的上下表面，将Transwell嵌套置于多孔细胞培养板中，上层和下层小室加入优化培养基，通过共培养后体外形成单层肠道上皮；(2)培养过程中每天定时检测单层肠道上皮跨上皮电阻值，免疫荧光及电镜结果表征肠道体外单层培养物与体内肠道上皮具有相同的细胞组成和结构特征，异硫氰酸酯标记葡聚糖作为示踪试剂分析单层肠道上皮渗透性。本发明首次将肠道隐窝与肠道上皮下肌成纤维细胞共培养，形成了与体内肠道上皮具有相似结构特征、细胞组成及渗透性的体外肠道上皮单层培养模型。