溶藻弧菌双重TaqMan探针实时荧光定量PCR检测试剂盒及其制备方法

摘要

本发明利用溶藻弧菌两个基因的保守序列分别设计一对引物，优化PCR反应条件和反应体系，建立起检测溶藻弧菌的双重TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法，在此基础上组装出简便、快速、特异性强、灵敏度高的溶藻弧菌检测试剂盒，该试剂盒对质粒的检测下限为5×101拷贝数/μL，对细菌纯培养物的检测下限为1.8×102 cfu/mL。本发明克服了单探针法在检测同属近缘细菌时可能存在的假阳性，可实现复杂样品基质中目标病原菌的特异性检测，因而在溶藻弧菌的流行病学调查、溶藻弧菌所致疾病的快速诊断、以及水产品质量安全监测等方面具有广泛的应用价值。