一种新型快速实时荧光定量PCR方法

摘要

本发明提供一种新型快速实时荧光定量PCR方法，包括优化设计上下游引物和优化设计MGB荧光探针以及修改RT‑PCR反应条件；本发明通过对上下游引物、荧光探针的优化设计，提高引物探针的Tm值，大幅提高了扩增过程中退火/延伸步骤温度，缩小了变性与退火/延伸过程的温度差，从而减少了升温、降温过程中所需的时间，以达到缩短核酸扩增反应时间的目的。本发明既可适用于普通荧光定量PCR仪，也可适用于任何基于RT‑PCR技术的核酸诊断设备，搭配最适反应温度的程序设置，均可实现缩短RT‑PCR反应时间的效果。该方法对基于RT‑PCR技术的疾病快速核酸诊断提供新思路，其成果具有一定的理论意义和较高的应用价值。