转基因的位点特异性整合

摘要

本发明提供了一种用于将目的基因敲入细胞的方法。所述细胞的基因组含有负选择标记，例如，侧翼为一对重组酶识别位点(RRS)(如attP)的胸苷激酶基因。所述方法涉及向所述细胞中引入靶向性构建体，所述靶向性构建体含有目的基因，所述目的基因的侧翼为第二对RRS，如attB。所述靶向性构建体还在所述载体骨架中含有负选择标记，例如胸苷激酶基因。当识别所述RRS的重组酶被表达时，所述两对RRS之间的重组事件会导致所述目的基因位点特异性地整合在所述细胞的基因组中。在基于所述负选择标记进行选择时，去除亲代细胞、具有非期望整合(如随机整合)的细胞、或具有所述载体骨架的整合的细胞。