氧化前胡素在制备治疗术后疼痛药物中的应用

摘要

本发明涉及氧化前胡素在制备治疗术后疼痛药物中的应用，属于医药技术领域。本发明人采用氧化前胡素作为唯一活性成分制备治疗术后疼痛药物，在小鼠后足切口术后疼痛模型中，单次给药时氧化前胡素显示出优良的镇痛作用，反复多次给药时，能促进术后痛的恢复，具有治愈作用，且无明显镇静副作用以及耐受性产生。本发明的药物制剂通常以皮下注射方式使用，当然也可以采用其它给药方式。采用切口术后疼痛模型，造模后急性单次给药用量为5～40mg/kg；造模后慢性反复多次给药，每次给药10～40mg/kg，每天给药一次。

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及氧化前胡素在制备治疗术后疼痛药物中的应用。

背景技术

术后疼痛(postoperativepain)是机体对疾病本身及手术造成的组织损伤的一种复杂的生理反应(张传汉.临床疼痛治疗指南[M].北京：中国医药科技出版社，2008：502)。目前，术后疼痛的治疗仍是临床上棘手的问题，虽然随着对术后疼痛的病理机制以及治疗的不断深入研究，新的镇痛药物和技术相继应用于临床，但是术后疼痛仍然处于治疗不足状态。据报道，大约10％-50％的患者术后疼痛没有得到有效控制，从而发展成为慢性术后疼痛(Clarke H,et al.Strategies Aimed at Preventing Chronic Post-surgicalPain:Comprehensive Perioperative Pain Management after Total JointReplacement Surgery[J].PhysiotherCan,2011,63(3):289-304)。

目前用于治疗术后疼痛的常用药物主要有阿片类、非甾体抗炎药(NSAIDs)、抗焦虑及抗惊厥等佐剂，以及局部麻醉药等，但是这些药物常常因有效性有限或者安全性不佳，使其临床应用价值有所折扣。如阿片类药物目前是临床上最有效的镇痛药物，但是其呼吸抑制、恶心呕吐、便秘等副作用以及耐受性和成瘾性使其临床应用受到限制。NSAIDs仅有中等程度镇痛效果，而且会产生消化性溃疡、心功能及肾功能损害等副作用(ArgoffCE.Recent management advances in acute postoperative pain[J].Pain Pract,2014,14(5):477-87.)。因此还需要进一步寻找新的疗效好、副作用小且无耐受性与成瘾性的治疗术后疼痛的药物。

氧化前胡素(oxypeucedanin，分子式：C₁₆H₁₄O₅，CAS号：737-52-0，化学名为5-((3,3-dimethyloxiran-2-yl)methoxy)-7H-furo[3,2-g]chromen-7-one)，为线型吠喃香豆素类化合物，是从伞形花科植物法落海(Angelicaapaensis)中提取的主要有效成分，同时也是传统中药白芷(Angelicadahurica)的主要有效成分之一，相对分子质量286.28，分子结构如式(I)：

现有技术中，关于氧化前胡素的药理活性研究非常少。有研究表明氧化前胡素具有镇咳、镇痛及平滑肌解痉等药理作用(邓士贤，莫云强.氧化前胡素的药理学研究[J].中药通报,1985,10(12):36-38.)，作者采用热板刺激小鼠足部引起舔足反应、酒石酸锑钾腹腔注射引起小鼠扭体反应两种模型来表明氧化前胡素具有减轻健康小鼠经受热伤害、以及化学伤害刺激时的生理反应的镇痛效应。这两种动物模型都是模拟急性伤害性刺激时的正常生理痛状态，具有明确的疼痛传导机制，这与手术后疼痛显著不同。手术后疼痛模拟持续性疼痛状态，可能涉及到炎症反应、外周伤害感受器致敏以及中枢敏感化等机制。疼痛机制不同，适用的药物并不相同。例如，多巴胺受体拮抗剂氟哌啶醇或者κ阿片受体激动剂U69593对以上模型(急性伤害性刺激时的正常生理疼痛)具有抗疼痛伤害效应，但是在临床中却被证实对手术后疼痛无效。所以已有报道并不能证实在手术条件下，氧化前胡素可以减轻术后的病理性痛觉过敏。另外也没有找到关于氧化前胡素制备镇痛药物应用的相关专利。因此，现有资料都不能明确证实氧化前胡素作为唯一活性成分能应用于术后疼痛的治疗。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中术后疼痛药物存在的不足(即治疗药物的有效性低、不良反应大或有耐受性及成瘾性等问题)，提供了一种氧化前胡素在制备治疗术后疼痛药物中的应用。

本发明人采用氧化前胡素作为唯一活性成分制备治疗术后疼痛药物，在小鼠后足切口术后疼痛模型中，单次给药时氧化前胡素显示出优良的镇痛作用，反复多次给药时，能促进术后痛的恢复，具有治愈作用，且无明显镇静副作用以及耐受性产生。本发明采用的小鼠后足切口术后疼痛动物模型已被国际上普遍接受为代表性的术后疼痛的模型(PogatzkiEM,Raja SN.A mouse model ofincisional pain[J].Anesthesiology,2003,99(4):1023-27.)。

本发明的技术方案如下：

氧化前胡素在制备治疗术后疼痛药物中的应用，所述药物中，氧化前胡素是唯一活性成分。氧化前胡素能够缓解或减轻术后疼痛。本发明也采用与氧化前胡素结构相近的化合物，例如水合氧化前胡素之类，进行同样的实验，实验结果发现其不具有术后镇痛效果。

本发明所述的氧化前胡素可通过市售方式获得。

本发明所述的术后疼痛，包括手术后切口疼痛、原发疾病部位疼痛等。

本发明所述的药物包括氧化前胡素和药学上可接受的载体。

所述的药物中，氧化前胡素的含量为0.1-99wt％。

本发明所述的药物剂型为汤剂、颗粒剂、片剂、丸剂或者液体制剂等，优选为液体制剂(例如：针剂、混悬剂)。

采用液体制剂时，通常以皮下注射方式使用：造模后急性(单次)给药用量为5～40mg/kg(优选5,10，20，40mg/kg)，慢性给药(反复多次)，药用量为每次给药10～40mg/kg(优选10，20，40mg/kg)，每天给药一次。

本发明的有益效果：本发明公开了氧化前胡素在制备治疗术后疼痛药物中的应用，采用本发明的药物急性以及慢性给药能够有效减轻术后疼痛，而且慢性给药能明显促进术后痛的恢复，显示其具有治愈作用，所用剂量均无镇静副作用，且没有耐受性。

附图说明

图1是氧化前胡素(10～80mg/kg)对正常小鼠的镇静效应；

图2是氧化前胡素(5～40mg/kg)急性(单次)给药后切口疼痛模型小鼠机械性痛阈值的变化；

图3是氧化前胡素(10～40mg/kg)慢性(反复多次)给药期间切口疼痛模型小鼠在每天给药后的机械性痛阈值的变化；

图4是氧化前胡素(10～40mg/kg)慢性(反复多次)给药期间切口疼痛模型小鼠在每天给药前的机械性痛阈值的变化。

具体实施方式

下面结合附图和实施例和对本发明的方案作详细说明，以下实施例是在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

以下实施例所用的氧化前胡素，经HPLC检测，纯度>98％，购自上海莫奇生物科技有限公司。

实施例1：氧化前胡素的镇静效应实验

动物分组：雄性ICR小鼠50只；分成5组，即正常对照组和氧化前胡素10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg四个剂量组，每组10只。正常对照组给予0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，其余组分别腹腔注射氧化前胡素10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg(用0.5％CMC-Na配成混悬注射液，给药容积为10ml/kg)后，观察其0.5h内自主活动。

自主活动测试方法参照(Zhu Q,Mao LN,Liu CP,et al.Antinociceptiveeffects ofvitexin in a mouse model ofpostoperative pain,Scientific Reports,2016,6:19266)，具体为：使用大小鼠自主活动的测试仪(YLS-1A,济南延益科技有限公司,中国)，仪器包含一个控制部件和5个独立的方形黑色塑料暗箱(12×15×15cm)，将小鼠放进黑色塑料暗内，光传感器位于塑料暗箱内，用于记录小鼠自主活动次数。记录30min内小鼠自主活动次数。

统计方法采用单因素方差分析，组间比较采用SNK统计分析，测试结果见图1。由图1可以看出，氧化前胡素所有剂量组与正常对照组相比均没有明显差异，说明10-80mg/kg剂量下均没有镇静作用。

实施例2：氧化前胡素5～40mg/kg急性给药对切口疼痛模型小鼠机械性痛阈值的影响

动物分组：ICR小鼠50只，分成5组；即赋形剂组(给予0.5％的CMC-Na)；氧化前胡素5，10，20，40mg/kg四个剂量组，每组10只(注：采用皮下注射给药，氧化前胡素由0.5％的CMC-Na配置)。

首先小鼠适应实验室环境3天，12小时明暗交替照明，温度24±1℃，湿度50-70％，自由饮食水。每只小鼠单独放在置于金属筛网上的有机玻璃格子内，适应环境至安静，使用von Frey单纤维丝测定各组小鼠手术前的基础机械痛缩爪阈值(PWT)，连续测定3天，让其适应机械刺激的强度。在术前1天测定其PWT值，连续测定3次，取平均值为术前基础值(以BL表示)。

von Frey单纤维丝测定方法：使用7种强度的Von-Frey细丝，按照大约对数型增加弯曲力度(等效于0.07，0.16，0.4，0.6，1.0，1.4，2.0g)，从0.07g开始，垂直刺激小鼠右后肢的爪底(以细丝稍弯曲作为完全受力的标准)，持续时间≤4s，观察小鼠的反应，若出现缩爪、甩爪、舔爪等现象视为阳性反应，否则为阴性。每个强度的纤维细丝均连续测定3次，3次中若有2次或2次以上的反应则视为PWT。若无至少2次的阳性反应出现则用相邻的大一级力度刺激。最大力度为2g，大于此值时仍记为2g。最小的力度记为0.07g，PWT越低说明机械痛敏越严重。

然后，各组小鼠全部进行切口手术，建立小鼠切口疼痛模型，其方法参照(Pogatzki EM,et al.Amouse model ofincisional pain[J].Anesthesiology,2003,99(4):1023-27.)，即使用麻醉机，首先3％异氟烷诱导麻醉后，戴上麻醉面罩，以1.5％异氟烷维持麻醉，仰卧固定，小鼠右后足使用75％酒精进行无菌处理后，从接近脚后跟0.2cm处向脚趾方向，用11号手术刀片划开皮肤，作0.5cm长的纵向切口，将筋膜挑出，并在筋膜中央纵向划开。轻压止血后，用单根6号尼龙线在切口中点部位缝合一针，然后将动物放回笼中，待其苏醒。术后24h先测试各组PWT的术后基线值(此时尚未给药，时间点记为0)，待术后基础阈值测试结束，如出现痛阈值明显降低，则立即皮下注射给药，并于给药后每间隔30min测试一次PWT，直到痛阈值恢复术后的基线值。测定疼痛阈值方法同前述。手术后24h，在给药之前测定机械性痛阈基线值(以0h表示)，然后分别于给药后0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4h测定其机械性痛阈值(PWT)。

结果如图2所示，图2是氧化前胡素(5～40mg/kg)急性(单次)给药后切口疼痛模型小鼠机械性痛阈值的变化，可以看出，5-40mg/kg剂量的氧化前胡素能剂量依赖性地增加手术后小鼠的疼痛阈值，手术前(即图2中的BL所示)，各组间后爪的机械痛阈值(PWT)均在1.3～1.5g之间，没有显著性差异(P>0.05)。赋形剂组(手术后皮下注射0.5％的CMC-Na)在测试期间的4h内，重复测量的疼痛阈值都保持在较低水平。而氧化前胡素给药组小鼠PWT在给药后随着时间逐渐升高，在90min时达到最大值，随后逐渐降低，在给药3h后痛阈值恢复到手术前的水平。用双因素重复测量方差分析，组间比较采用Bonferroni分析，得知10mg/kg和20mg/kg剂量的氧化前胡素在给药1.5h或2h时能明显增加术后小鼠的疼痛阈值，而40mg/kg的氧化前胡素在给药后1-2h内都有明显的作用(P<0.05)。5mg/kg氧化前胡素对模型小鼠没有缓解疼痛作用。图2中，凡以黑色填充的数据点均表示，与赋形剂组相比较具有统计学意义(P<0.05)。这表明急性给药氧化前胡素治疗可以剂量依赖性地改善本模型中的机械性痛觉过敏。

实施例3：氧化前胡素10～40mg/kg慢性给药对切口疼痛模型小鼠机械性痛阈值的影响

动物分组：ICR小鼠40只，分成4组；即赋形剂组(给予0.5％的CMC-Na)；氧化前胡素10，20，40mg/kg三个剂量组，每组10只(注：采用皮下注射给药，氧化前胡素由0.5％的CMC-Na配置)。各组小鼠全部进行切口手术，手术方法同前述。于术后2h测定疼痛阈值，然后于术后24h给药，每天给药一次，连续给药6天。于每天给药前以及给药后1.5h测定疼痛阈值，测定疼痛阈值方法同前。结果见图3和图4，图3是氧化前胡素(10～40mg/kg)慢性(反复多次)给药期间切口疼痛模型小鼠在每天给药后的机械性痛阈值的变化，图4是氧化前胡素(10～40mg/kg)慢性(反复多次)给药期间切口疼痛模型小鼠在每天给药前的机械性痛阈值的变化。

由图3可以看出，每天给予氧化前胡素能剂量依赖性地改善切口手术导致的机械痛觉过敏，促进术后痛的恢复。用双因素重复测量方差分析，组间比较采用Bonferroni分析，20mg/kg的氧化前胡素在术后第4天和第6天能明显提高小鼠的疼痛阈值，而40mg/kg剂量的氧化前胡素在术后2-6天都能明显地减少小鼠的机械痛觉过敏(P<0.05)。这表明每天给药氧化前胡素治疗可以剂量依赖性地缓解本模型中的机械性痛觉过敏，而未产生耐受性。而且在40mg/kg组中，第5天小鼠PWT即基本恢复至术前基础值(BL)，而对应的赋形剂组却在第6天时还未恢复，说明氧化前胡素能促进术后痛的恢复。图3中，凡以黑色填充的数据点均表示，与赋形剂组相比较具有统计学意义(P<0.05)。由图4可以看出，在慢性给药期间，各剂量组每天给药前的疼痛阈值变化。结果表明，在给药第4天时，给药前的PWT就明显高于赋形剂组，第5-6天，给药前的小鼠PWT恢复至正常基础值水平，说明氧化前胡素长期给药具有治愈作用，能防止术后疼痛的发生发展。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式不受上述实施例的限制。其他任何不脱离本发明之精神和原理下所作的变形，均应认为是本发明的保护范围。