基于长链分子倒置探针的核酸靶向捕获测序文库制备方法

摘要

本发明公开了一种基于长链分子倒置探针的核酸靶向捕获测序文库制备方法；a)合成捕获探针A，捕获探针B以及连接子C；b)在连接酶反应体系里加入磷酸化的探针A，B以及连接子C，同时加入DNA连接酶，使A和B在C的桥接作用下连接；c)合并多个针对不同靶区的连接混合物，通过变性电泳或核酸纯化试剂盒分离和纯化连接的产物，得到长链分子倒置探针；d)长链分子倒置探针与待测的样品的DNA或cDNA混合，杂交，在缓冲液中加入DNA聚合酶、DNA连接酶、dNTP和含Mg2+的缓冲液延伸长链分子倒置探针，在DNA连接酶的作用下形成闭合的分子；e)加入核酸外切酶降解没有环化的DNA分子；f)用和长链分子倒置探针的公共序列区域对应的引物进行PCR扩增，得到靶向区域的测序文库。