一种快速获得siRNA干扰BLM解旋酶稳定细胞株的方法

摘要

本发明公开了一种快速获得siRNA干扰BLM解旋酶稳定细胞株的方法，包括下列步骤:1)设计与合成siRNA；2)构建siRNA表达载体；3)克隆转化干扰载体；4)转染shRNA；5)利用流式细胞仪进行阳性细胞分选：将荧光蛋白GFP阳性细胞按1个细胞分选到1个孔的方式分选到含全血清培养基的微孔板中；6)培养分选得到的阳性细胞，提取细胞总RNA，设计BLM基因引物，实时荧光定量QRT‑PCR检测BLM基因在mRNA水平的表达，选择BLM解旋酶沉默表达的细胞株，扩大培养并冻存即可。本发明具有细胞株获得简单快速，省时省力，假阳性率较低的特点。