一种利用电子标签进行蟹类个体标记的方法

摘要

本发明公开了一种利用电子标签进行蟹类个体标记的方法，该方法包括将电子标签经由蟹类体侧步足之间相对薄弱处，置于头胸部侧面的肌肉匣中。本发明的方法可靠地、快速地鉴别蟹类个体，并显著降低鉴定成本，可应用在蟹类生长发育的多个阶段。

说明书

技术领域

本发明属于水产增养殖技术领域，具体涉及一种利用微型射频标签对蟹类活体进行个体标记及标记前后养殖管理的方法。

背景技术

河蟹、梭子蟹、青蟹等蟹类是我国主要增养殖经济蟹类。这些蟹类在我国内陆及沿海有广泛的增养殖场所、产业产值逐年增高。在蟹类的遗传育种、增殖放流等领域需要对部分蟹进行个体标记。现有的标记技术有物理标记、形态标记和分子标记等，存在一些弊端：(1)常规物理标记有注射荧光凝胶、黏贴标签、挂牌、线码等，注射凝胶只能在个别种类的蟹在生长早期甲壳较透明阶段使用，且标记组合数量有限只能对个体进行标记；黏贴标签和挂牌往往只能对成体不再蜕壳的种类成体进行标记，因蟹类属于甲壳动物，通过蜕壳方式实现体长和体重的增长，且生命周期中经历多次蜕壳，外部标记容易随蜕壳或断肢丢失而导致标记个体失败；线码标记能够批量标记，适用于群体标记不能有效进行活体个体区分。(2)形态标记，如通过剪去部分附肢或者将附肢进行剪裁成特定形状进行标记，该法标记蟹类数量有限，且蜕壳后可以再生而难以辨别难。(3)分子标记，需要昂贵的分子生物学设备和取活体组织检测，区分耗时成本高，不能实时检测且只能对家系或群体进行区分。目前，许多研究机构、生产单位和经销企业尚无便利、有效的标记方式对蟹类活体进行个体标记。例如，在育种选育时仍需分池饲养，存在评估环境效应影响大、水体利用率较低和管理成本高的弊端。电子标签在鱼类、两栖爬行动物和一些陆生动物中有所应用，由于其循环系统均为闭管式循环，标签植入创口愈合较快，不会造成失血过多而严重影响其生存状态。蟹类则为开管式循环系统，其血窦、心脏和胸神经团等重要组织和器官易被不当的标记植入而穿刺破坏而造成生命威胁，另外，其日常运动和蜕壳活动依赖其封闭的“液压”系统，标签植入的创口不易像其他动物一样能快速愈合，加之出血造成“液压”降压而影响其运动甚至蜕壳。因此必须在适宜部位和角度进行探索，才可能最大程度的降低植入标签带来的风险。

发明内容

为了克服现有技术中存在的上述缺陷，本发明的目的是提供一种利用电子标签进行蟹类个体活体标记的方法。本发明的方法在相对可靠且实际应用成本较低的前提下，可使标记的活体蟹类达到个体区分的水平，并且不受蜕壳生长发育影响，在标记后的各个生长发育阶段均可实时识别所标记的各蟹类个体。为实现本发明的目的，本发明的技术方案是：

一种利用电子标签进行蟹类个体标记的方法，该方法包括将将电子标签经由蟹类体侧步足之间相对薄弱处，置于头胸部侧面的肌肉匣中。

本发明中蟹类体侧步足之间相对薄弱处是指蟹类同一体侧的螯足和第一步足之间，第一步足和第二步之间或第三步足和第四步足之间的位置。

在本发明的另一优选实施方案中，该蟹类不是刚蜕壳的“软壳蟹”和即将蜕壳的个体。

在本发明的另一优选实施方案中，该蟹类标记扣蟹的体重大于1.5g，更优选3.0g～5.0g。

在本发明的另一优选实施方案中，该蟹类在植入电子标签前置于循环水或流水中冲洗并停食1天，并其在植入电子标签时先在消毒液的容器中消毒5分钟～10分钟并用75％酒精消毒注射部位。

在本发明的另一更优选实施方案中，所述消毒液是用10％的聚维酮碘消毒剂，按其说明稀释使用。

在本发明的另一优选实施方案中，植入所述电子标签后该蟹类放入消毒水体中暂养24小时以上。

在本发明的另一更优选实施方案中，该蟹类在植入所述电子标签后放入消毒水体中暂养前可干露30分钟至1个小时。

在本发明的另一优选实施方案中，该蟹类在植入所述电子标签后24小时后少量投喂。

在本发明的另一优选实施方案中，植入所述电子标签后的蟹类养殖环境溶氧在5mg/L以上、水质稳定。

在本发明的另一优选实施方案中，该电子标签是电子标记材质管封装的射频标记(RFID)，所述电子标记材质管外涂覆防止滑脱的生物涂层。

在本发明的另一优选实施方案中，一种利用电子标签进行蟹类个体标记的方法包括以下步骤：

1)提供电子标签，选择其规格与拟标记蟹类的规格相适应；

2)提供蜕壳高峰后的所述蟹类，集中于循环水或流水中冲洗并停食1天；

3)将步骤2)的所述蟹类捞取至盛放消毒液的容器中消毒5分钟～10分钟，注射部位用75％酒精棉擦拭消毒，将电子标签从所述蟹类同一体侧的螯足和第一步足之间，第一步足和第二步之间或第三步足和第四步足之间植入，置于头胸部侧面的肌肉匣中。

4)植入电子标签后，对于耐干露的所述蟹类，依据环境温度可干露30分钟至1个小时再放入消毒水体中暂养；对于不耐干露的所述蟹类直接放入消毒水体中暂养，24小时后少量投喂。

本发明的方法利用微型电子标签植入一定规格蟹类体内的适宜部位进行标记后同池混养解决了现有技术中尚无便利、有效的标记方式对蟹类活体进行个体标记的问题，因为电子标记能够进行数亿个以上不重复的数字串编码，可根据定义规则进行编辑、加密，实现大批量的个体标记，由于标记抗逆性好、反应灵敏，即使在活体成蟹体内仍可快速响应识别出特定个体编码。本发明的方法具有以下突出优点：

(1)使蟹类个体鉴定可靠性、鉴别速度大幅提高，鉴定成本显著降低，并能在蟹类生长发育多个阶段应用。

(2)基本不影响标记蟹类养成最终养殖成活率的情况下，可实现选育蟹类与对照蟹类尽早同池饲养，大大减少单养殖所需池塘数量以及养殖管理成本，并且可获得每只蟹的生长发育前后数据，提升蟹类选育评估的可靠性和选育效率。

(3)应用范围广：除蟹类选育应用外，在增殖放流评估时，对回捕蟹类可实现批量扫码识别，可根据标记个体比例快速统计回捕率以及评估放流个体分布、生长发育等情况。

附图说明

图1是植入式电子标签参考样式及规格。

图2是电子标签植入蟹体部位示意图，其中1表示注射部位1，2表示注射部位2，3表示注射部位3，4表示留置位置1，5表示留置位置2，6表示留置位置3。

具体实施方式

针对现有技术中尚无便利、有效的标记方式对蟹类活体进行个体标记，本申请发明人进过深入的研究，将电子标记应用于蟹类活体标记，建立了蟹类电子标签的选择、植入技术及标记前后养殖管理方法。采用本发明的方法可可靠、低成本地区分活体蟹类个体。在此基础上完成了本发明。

本发明提到的“耐干露”是指耐受空气中暴露的能力，即在温度、湿度适宜的情况下，水生动物能够较长时间(1小时以上)离开水体而不至于因干燥、缺氧等原因导致严重的生理胁迫而影响其存活率的。

电子标签选择

(1)此电子标记材质主要为玻璃管但不限于玻璃管封装的射频标记(RFID，样式见图1)，管外可加生物涂层防止滑脱；(2)电子标签规格：12.8mm×0.7mm、14.0mm×0.8mm、21.2mm×1.2mm等不同规格，根据拟标记蟹的规格选择不同大小的标签，植入过大规格电子标签对蟹类存活和蜕壳生长有不利影响，越微小的标记影响越小，但越微小的标签其价格也就越高，应根据需标记蟹类的大小合理选择标记规格；(3)电子标签为可读写芯片，可以被射频识读器读取编码信息，读写码一体机器可读取并改写编码，因此该电子标签能够回收再次利用，大幅度降低标记成本，该芯片还能加密锁定，可在蟹类育种、增殖放流等领域安全应用；(4)电子标签须配备芯片识读器或识读编码信息以区分个体，若要自行编码则需配以读写码一体机，在联机电脑软件中可自动按序号批量改写电子标签信息。

标记蟹类选择

(1)拟植入标签的蟹类应健康、活力强、附肢残缺数量不超过2个；(2)拟标记的蟹类，可短时间离水不会造成严重应激，不宜选择刚蜕壳的“软壳蟹”，生产上进行大规模标签植入时，应避开蟹类蜕壳高峰期；(3)早期标记蟹类幼体的体重需大于1.5g，以3.0g～5.0g较为适宜，10.0g以上蟹类进行标记，可使用规格较大的电子标签以进一步降低标记成本。

电子标签植入方式

(1)植入部位，在蟹类体侧步足之间相对薄弱处用专用注射器植入电子标签，使标签留置于头胸部侧面的肌肉匣中(见图2)；(2)注射位置可依据蟹类规格大小在螯足和第一步足之间(注射位置1)，第一、二步之间(注射位置2)或第三、四步足之间植入标记(注射位置3)，左右对称位置均可注射；(3)标签植入深度与角度：注射植入深度应达到体侧肌肉匣(留置位置1～3以另一侧及对称位置)以防止蜕壳脱出，标签植入角度应注意避免伤及血窦、腹神经团、心脏、胃等实质性器官，否则将导致标记蟹快速死亡。植入标签注射位点及标签体内留置位置部位见图2。散装电子标签注射前应预先75％酒精浸泡消毒10分钟以上，所用注射器如多次使用，在应及时消毒后再使用。。

电子标签植入前、后养殖管理

(1)植入标签前：拟标记蟹停食1天，集中于循环水或流水中冲洗；若静水暂养应冲洗泥污后放入浅水池中保持充气并换水量100％以上，以清理体表及排空肠胃，暂养应避免阳光直射，环境温度控制在10℃～25℃之间为宜。注射标记前，捞取蟹至盛放消毒液(如聚维酮碘消毒液，按说明用量)的容器中消毒5分钟～10分钟，水位高则适当充气，消毒后将蟹转移至无水容器中；不耐干露蟹类则可转入消毒后的清洁水体中待用，捞出后快速保定好，注射部位用75％酒精棉擦拭消毒后注射植入消毒标签。(2)植入标签后：耐干露蟹类，注射后依据环境温度可干露30分钟至1个小时再放入消毒水体中暂养，不耐干露蟹类注射植入标记后放入消毒水体中暂养。植入标签后24小时内应注意观察及时剔除死亡个体，并回收标签严格消毒后可再次注射补充所需；24小时后可少量投喂，注意保持养殖环境溶氧在5mg/L以上、水质稳定。植入标记的蟹类群体观察48小时至96小时后即可根据需求进行增养殖安排。放养前可根据标记目的对标记蟹逐个扫码、测量并记录初始表型数据信息。

下面结合具体的实施例对本发明的技术解决方案作进一步的说明，这些实施例不能理解为是对本发明技术解决方案的限定。

实施例1：

按照以下步骤进行利用电子标签进行河蟹苗种个体标记

1)电子标签选择：(1)此电子标记材质为玻璃管封装的射频标记；(2)拟标记蟹的规格为3克～5克重的蟹种(扣蟹)选择电子标签规格为12.8mm×0.7mm；(3)电子标签为可读写芯片，可以被射频识读器读取编码信息，利用读写码一体机器进行统一编码，可明确区分不同组别和个体，如“617181911110000～617181911110049”和“617181911210000～617181911210049”可分别表示第1组50只雄蟹和第1组50只雌蟹。

2)标记扣蟹选择：(1)拟植入标记的扣蟹均为健康、活力好、附肢残缺数量不超过2个；(2)拟标记的扣蟹，可短时间离水不会造成严重应激，剔除了刚蜕壳的“软壳蟹”以及即将蜕壳的个体；(3)标记扣蟹的体重大于1.5g，多为3.0g～5.0g。

3)电子标签植入方式：(1)注射位置，在扣蟹体侧螯足与第一步足之间相对薄弱处(图2注射位置1和其对称位置)借助专用注射器植入微型电子标签；(2)标签植入深度与角度：注射植入深度达到体侧肌肉匣(留置位置1以另一侧及对称位置)，标签植入角度微向扣蟹头胸甲背部推送，以避免伤及腹神经团、心脏，并避免刺穿损伤蟹胃。(3)采用散装电子标签，注射前预先75％酒精浸泡消毒20分钟，注射前各标签按序号放入装有75％酒精的1.5mL离心管，50个离心管按序排列，便于操作；所用注射器每注射一次后应浸入酒精中消毒，酒精棉擦拭后装入消毒好的标签。

4)电子标签植入前、后养殖管理：(1)植入标签前：拟标记蟹停食1天，冲洗泥污后放入，集中于循环水养殖系统中暂养；无阳光直射，环境温度在18℃左右。扣蟹注射标记前，用10％的聚维酮碘消毒液(0.05mL/L)浸泡10分钟，消毒后将扣蟹转移至无水容器中，注射时快速保定好，注射部位用75％酒精棉擦拭消毒后注射植入消毒标签。(2)植入标签后：注射后干露1个小时再放入消毒水体中暂养。植入标签后24小时内观察及时剔除死亡个体，并回收标签严格消毒后可再次注射补充所需；24小时后少量投喂，注意保持养殖环境溶氧充足、水质稳定。注射蟹类群体观察48小时至96小时后即进行单盒养殖。放养前对标记蟹逐个扫码、测量并记录初始表型数据信息，同时进行了相同规格的单养对照，养殖至完成两次蜕壳。

采用以上实施例利用电子标签进行河蟹苗种(扣蟹)个体标记，单养经2次蜕壳后与对照组养殖相比，养殖情况如下表：

表1电子标签标记蟹与未注射标记蟹养殖情况

统计养殖数据平均蜕壳周期和单次蜕壳增重率可知，标记组和对照组生长数据差异性不显著。

实施例2：

按照以下步骤进行利用电子标签进行扣蟹个体标记和未标记扣蟹同池混养：

1)电子标签选择：(1)此电子标记材质为玻璃管封装的射频标记；(2)拟标记扣蟹的规格为3克～5克重的蟹种选择电子标签规格为12.8mm×0.7mm；(3)电子标签为可读写芯片，选取前述实施例1结束后的回收标记，利用读写码一体机器进行重新编码，可明确区分不同组别和个体，如“617181922110000～617181922110049”和“617181922210000～617181922210049”可分别表示同一组的50只雌蟹和50只雌蟹。

2)标记扣蟹选择：(1)拟植入标记的扣蟹均为健康、活力好、附肢残缺数量不超过2个；(2)拟标记的扣蟹，可短时间离水不会造成严重应激，剔除了刚蜕壳的“软壳蟹”以及即将蜕壳的个体；(3)标记扣蟹的体重大于1.5g，多为3.0g～5.0g。

3)电子标签植入方式：(1)注射位置，在扣蟹体侧螯足与第一步足之间相对薄弱处(图2注射位置1和对称位置)借助专用注射器植入微型电子标签；(2)标签植入深度与角度：注射植入深度达到体侧肌肉匣(留置位置1以另一侧及对称位置)，标签植入角度微向扣蟹头胸甲背部推送，以避免伤及腹神经团、心脏，还应避免刺穿损伤蟹胃。(3)采用散装电子标签，注射前预先75％酒精浸泡消毒20分钟，注射前各标签按序号放入装有75％酒精的1.5mL离心管，50个离心管按序排列，便于操作；所用注射器每注射一次后应浸入酒精中消毒，酒精棉擦拭多余酒精与残余血淋巴后装入消毒好的标签。

4)电子标签植入前、后养殖管理：(1)植入标签前：拟标记蟹停食1天，冲洗泥污后放入，集中于循环水养殖系统中暂养；无阳光直射，环境温度在20℃左右。扣蟹注射标记前，用0.05mL/L浓度的“聚维酮碘(10％)”消毒液浸泡10分钟，消毒后将扣蟹转移至无水容器中，注射时快速保定好，注射部位用75％酒精棉擦拭消毒后注射植入消毒后的标签。(2)植入标签后：注射后干露1个小时再放入消毒水体中暂养。植入标签后24小时内观察及时剔除死亡个体，并回收标签严格消毒后可再次注射补充所需；24小时后少量投喂，注意保持养殖环境溶氧充足、水质稳定。注射蟹类群体观察48小时至96小时后转入混养池塘。放养前对标记蟹逐个扫码、测量并记录初始表型数据信息，同池放养相同数量、规格的混养对照，养殖密度800只/667平方米，全程配合饲料投喂。

采用以上实施例利用电子标签进行河蟹苗种(扣蟹)个体标记，与对照组养殖相比，养殖至成蟹上市时其养殖情况和个体区分或分配个体至不同家系的区分成本如下表：

表2电子标签标记扣蟹与对照扣蟹混养情况

a:对照组分别采用试剂盒法和酚氯法成本；

b:专利标记组每个标签按5次重复利用和单次使用计算成本；

c:荧光毛细管电泳和PAGE法单个体鉴定耗时。

标记扣蟹增重和成活率略低于对照扣蟹，但差异不显著，经解剖观察两者发育状况也基本同步，并做为亲本繁育未受影响。本发明标记方法个体鉴定费用和所耗时间明显低于其他鉴定方法。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内，本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。